專利名稱：牙周病菌增殖抑制劑、口腔衛(wèi)生品及飲食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牙周病菌增殖抑制劑、以及含有其的口腔衛(wèi)生品和飲食品。
背景技術(shù)：
牙周病菌的感染導(dǎo)致發(fā)病的牙周病大致分為牙齦炎、牙周炎和咬合性創(chuàng)傷。最近， 已知由于牙周病的慢性化而因牙周病菌引起呼吸系統(tǒng)疾病、心臟病、糖尿病、早產(chǎn)等感染疾 病。作為針對牙周病菌的抗菌劑，已知可可泥中所含的以可可成分作為有效成分的抗 菌劑(參照專利文獻1)。然而，以可可成分作為有效成分的抗菌劑的制造中，需要繁雜的原 料前處理，即，為了得到原料可可泥而對可可豆進行烘焙煎制。另一方面，如專利文獻2中所述，已知屬于大戟科血桐屬(才才KY屬)的血桐 (大葉木)的提取物具有抗菌作用。然而，血桐提取物對于牙周病菌的作用至今尚未弄清， 在專利文獻2中也無任何記載。專利文獻1 國際公開第2003/99304號專利文獻2 日本特開2007-45754號公報

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是基于發(fā)明人等深入研究的結(jié)果，即血桐提取物具有抑制牙周病菌增殖的 作用而發(fā)現(xiàn)的，其目的在于，提供能夠不需要繁雜的原料前處理而制造的牙周病菌增殖抑 制劑、以及含有其的口腔衛(wèi)生品和飲食品。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第1方案中，提供下述牙周病菌增殖抑制劑，其含有 使用至少含有機溶劑的提取溶劑而從血桐提取的血桐提取物作為有效成分。本發(fā)明的第2方案中，提供下述牙周病菌增殖抑制劑，其含有選自寧芬 酚-A(nymphaeol-A)、寧芬酚-B(nymphaeol-B)和寧芬酚-C (nymphaeol-C)中的至少一種作 為有效成分。本發(fā)明的第3方案中，提供下述口腔衛(wèi)生品，其含有上述第1和第2方案的牙周病 菌增殖抑制劑中的任一者。本發(fā)明的第4方案中，提供下述飲食品，其含有上述第1和第2方案的牙周病菌增 殖抑制劑中的任一者。


[圖1]顯示對實施例1所述的血桐提取物以高效液相色譜進行分析得到的結(jié)果的 色譜圖。[圖2]顯示對實施例2所述的血桐提取物以高效液相色譜進行分析得到的結(jié)果的 色譜圖。
具體實施例方式以下，對本發(fā)明的一實施方案詳細地進行說明。本實施方案的牙周病菌增殖抑制劑含有使用至少含有機溶劑的提取溶劑而從血 桐提取的血桐提取物作為有效成分。血桐也被稱作流血樹(Macaranga tanarius)，是屬于 大戟科血桐屬的雌雄異株的常綠闊葉樹。血桐生長在沖繩(日本南部)、臺灣、中國南部、馬 來半島、菲律賓、馬來西亞、印度尼西亞、泰國等東南亞、澳大利亞北部等地。血桐在樹木中 成長極快，即使是在荒地廢地也能夠生長。作為供于使用提取溶劑的提取中的提取原料，可以使用血桐的所有器官或各器官 的構(gòu)成要素。提取原料可以使用血桐的單獨的器官或其構(gòu)成要素，也可以將血桐的兩種以 上的器官或其構(gòu)成要素混合使用。為了提高所得血桐提取物的牙周病菌增殖抑制作用，優(yōu) 選使用含有血桐的果實、種子、花、根、干、莖的前端部、葉身或分泌物(蠟等)的提取原料。 莖的前端部含有莖的生長點和葉芽，較葉身柔軟，故容易有效地進行提取操作。此外，相對 于血桐整體對各器官所占的比例進行比較時，干、根和葉所占的比例高。因此，使用操作容 易的血桐葉身作為提取原料，在原料確保容易的方面有利于工業(yè)。提取原料在采集后原樣的狀態(tài)下、或采集后粉碎、破碎或研碎狀態(tài)下、或在采集和 干燥后粉碎、破碎或研碎狀態(tài)下、或在采集后粉碎、破碎或研碎并進行干燥的狀態(tài)下，供于 提取操作。為了有效地進行提取，優(yōu)選將提取原料破碎。提取原料的破碎，可以使用例如切 割機、剪斷機或破碎機進行。經(jīng)破碎后的提取原料的形狀沒有特別限定，可以是例如三角形 狀、四角形狀等多角形狀。經(jīng)破碎后的提取原料為多角形狀時，優(yōu)選其一邊的長度為Icm左 右。提取原料的粉碎可以用例如磨機、破碎機或研磨機進行。提取原料的研碎可以使用例 如捏合機或研缽進行。從提取原料提取血桐提取物之際使用的提取溶劑可以是水與有機溶劑的混合溶 劑，也可以是例如，低級醇、二甲基亞砜、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、己烷、甘油、丙二醇之類的有 機溶劑。作為能夠使用的低級醇，可舉出例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇。有機溶劑可 以一種溶劑單獨使用，也可以多種溶劑混合使用。甘油和丙二醇有時作為例如溶媒或濕潤 劑而配合于磨牙劑或漱口劑等口腔衛(wèi)生品中。所以，將甘油或丙二醇用作提取溶劑所得的 血桐提取液配合于口腔衛(wèi)生品中時，可以省略例如作為溶媒或濕潤劑而將甘油或丙二醇進 一步配合于口腔衛(wèi)生品中。故，將血桐提取液配合于口腔衛(wèi)生品中使用時，優(yōu)選提取溶劑含 有甘油或丙二醇。作為提取溶劑使用水與有機溶劑的混合溶劑時，混合溶劑中的有機溶劑 的含量優(yōu)選50體積％以上，更優(yōu)選80體積％以上?；旌先軇┲械挠袡C溶劑的含量為50體 積％以上時，可以特別有效地提取血桐中所含的有效成分。有機溶劑優(yōu)選低級醇，更優(yōu)選乙 醇。提取溶劑也可溶解有有機鹽、無機鹽、緩沖劑、乳化劑、糊精等。提取通過使提取原料在提取溶劑中浸漬規(guī)定時間而進行。提取之際，為了使提取 效率提高，也可根據(jù)需要進行例如攪拌、加溫或其兩者。此外，至少為了防止從提取溶劑中 提取不需要的雜質(zhì)，也可以在使用提取溶劑的提取之前，預(yù)先將提取原料供于水提取或熱 水提取而準備除去提取水的提取原料。被推測具有抑制牙周病菌增殖作用的血桐中所含的 成分是寧芬酚類。寧芬酚類是水不溶性。通過將血桐在例如開水中煮沸，可將寧芬酚類以 外的雜質(zhì)有效地轉(zhuǎn)移至提取水中而除去。
為了分離提取原料的殘渣，從提取原料中提取的血桐提取物被供于固液分離。固 液分離可通過例如，過濾、離心分離之類的公知方法進行。固液分離后的液體狀血桐提取物 也可根據(jù)需要進行濃縮。將液體狀血桐提取物中所含的提取溶劑根據(jù)需要除去，由此可以得到固體狀血桐 提取物。從液體狀血桐提取物中除去提取溶劑可以通過例如，減壓下的加熱來進行，也可以 通過冷凍干燥來進行。使用至少含有機溶劑的提取溶劑而從血桐中提取的血桐提取物中，含有選自寧芬 酚-A (別名 5，7，3，，4，-四羥基-6-香葉基黃烷酮(5，7, 3‘, 4‘-tetrahydroxy-6-gerany 1 f lavanone))、寧芬酚-B (別名 5，7，3’，4’ -四羥基-2’ -香葉基黃烷酮(5，7，3’，4’ -tetrah ydroxy-2' -geranylf lavanone))、和寧芬酚-C (別名 5，7，3，，4，-四羥基 _6-(3”，，3”，- 二 甲基烯丙基)-2，-香葉基黃烷酮(5，7，3，，4，-tetrahydroxy-6-(3”，，3”，-dimethylallyl )-2' -geranylflavanone))中的至少一種。血桐提取物的主要成分是選自寧芬酚_A、寧芬 酚-B和寧芬酚-C中的至少一種，即寧芬酚類，其被推測為具有抑制牙周病菌增殖作用的物 質(zhì)。血桐提取物中進一步含有蜂膠素A(pr0p0lin Α、別名5，7，3，，4，-四羥 基-2，- (7，，-羥基-3 ”，7 ”- 二甲基-2，，-辛烯基)-黃烷酮(5，7，3，，4，-tetrahydroxy-2，-(7 ”-hydroxy-3 ”，7 ”-dimethy 1-2 ”-octeny 1) -f lavanone)。另外，血桐提取物中，作為微量 成分，還含有例如5，7，3，，4，-四羥基-5，-香葉基黃烷酮(5，7，3，，4，-tetrahydroxy-5，-geranylflavanone、別名異寧芬酚 B (isonymphaeol-B) )、5，7，3，，4，_ 四羥基-5，- (7” -羥 基-3 ”，7 ”- 二甲基-2 ”-辛烯基)-黃烷酮(5，7，3，，4，-tetrahydroxy-5，- (7 ”-hydroxy-3 ，，，7 ” -dimethy 1-2 ” -octeny 1) -flavanone)、5，7，3，，4，-四羥基 _6_ (7 ” -羥基-3 ”，7 ” - 二 甲基-2 ” -辛烯基)-黃烷酮(5，7，3，，4，-tetrahydroxy-6- (7，，-hydroxy-3 ”，7，，-dimethy 1-2，，-octenyl) -flavanone) ,5,7,4'-三羥基-3，- (7” -羥基-3”，7” - 二甲基-2，，-辛烯 基)_ 黃烷酮(5，7，4，-trihydroxy-3，- (7 "-hydroxy-3 ”，7 ”-dimety 1-2 ”-octeny 1) -flavan one) >5,7,4' _三|5基_3，—香卩十基黃燒 (5,7,4' -trihydroxy-3‘ -geranylflavanone) 從血桐各部位提取的提取液之中，從含有蠟的果實提取的提取液特別以高濃度含 有寧芬酚A、B、C和異寧芬酚B。牙周病菌增殖抑制劑在不損害抑制牙周病菌增殖作用的范圍內(nèi)，也可以含有血桐 提取物以外的成分。作為可含有在牙周病菌增殖抑制劑中的血桐提取物以外的成分，可舉 出例如賦形劑、基質(zhì)、乳化劑、穩(wěn)定劑、香料、甜味劑。牙周病菌增殖抑制劑可以為液狀，也可以為固體狀。牙周病菌增殖抑制劑的劑型 沒有特別限定，可以為例如散劑、粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、液體劑、注射劑。牙周病菌的感染導(dǎo)致發(fā)病的牙周病大致分為牙齦炎、牙周炎和咬合性創(chuàng)傷。本實 施方案的牙周病菌增殖抑制劑由于抑制牙周病菌的增殖，而在牙周病的治療和預(yù)防中使用。作為牙周病菌，已知屬于放線桿菌(Actinobacillus)屬、卟啉單胞菌 (Prophyromonas)屬、普氏菌(Prevotella)屬或梭桿菌(Fusobacterium)屬的 細菌。作為屬于放線桿菌屬的牙周病菌的例子，可舉出例如伴放線菌放線桿菌 (Actinobacillus actinomycetemcomitans) 。 # 力 M 口卜 Hfi M 白勺 M _ 白勺例子，可舉出例如牙齦卟啉單胞菌(Prophyromonas gingivalis)、不解糖卟啉單胞菌 (Prophyromonasasaccharolytica)、3^·口卜H|木Hfelif (Prophyromonas endodontalis)。 {乍 為屬于普氏菌屬的牙周病菌的例子，可舉出例如中間普氏菌(Prevotellaintermedia)、 變黑普氏菌(Prevotella nigrescens)、產(chǎn)黑普氏菌(Prevotellamelaninogenica)。作為 屬于梭桿菌屬的牙周病菌的例子，可舉出例如具核梭桿菌(Fusobaeterium nucleatum)、 壞死梭桿菌(Fusobacteriumnecrophorum)、舟型梭桿菌 AA (Fusobaeterium naviforme)。這些牙周病菌之中，屬于放線桿菌屬的牙周病菌和屬于卟啉單胞菌屬的牙周病菌 被定為牙周病的主要原因菌。本實施方案的牙周病菌增殖抑制劑通過對屬于放線桿菌屬的 牙周病菌和屬于卟啉單胞菌屬的牙周病菌中的至少一者的增殖進行抑制，而在牙周病的預(yù) 防和治療中發(fā)揮優(yōu)異的效果。牙周病菌增殖抑制劑被利用作為口腔衛(wèi)生品、飲食品、醫(yī)藥品、準標準藥物等。牙 周病菌增殖抑制劑在易于使有效成分接觸牙周組織、易于充分發(fā)揮有效成分的作用方面， 優(yōu)選被利用作為口腔衛(wèi)生品或飲食品。本實施方案的口腔衛(wèi)生品含有上述牙周病菌增殖抑制劑。作為口腔衛(wèi)生品的例 子，可舉出例如粉磨牙劑、煉磨牙劑、液狀磨牙劑、漱口劑、牙齦按摩膏、局部涂布劑、含片 劑、口香糖、牙線。含有牙周病菌增殖抑制劑的口腔衛(wèi)生品可以抑制口腔內(nèi)的牙周病菌增 殖，因此在牙周病的預(yù)防和治療中有效?？谇恍l(wèi)生品中，按固體成分換算，以優(yōu)選0.001 10質(zhì)量％、更優(yōu)選0. 01 1質(zhì)量％的范圍含有血桐提取物。按固體成分換算，口腔衛(wèi)生品 中的血桐提取物的含量為0.001質(zhì)量％以上時，通過口腔衛(wèi)生品，牙周病菌的增殖特別有 效地受到抑制。但是，按固體成分換算，口腔衛(wèi)生品中的血桐提取物的含量超過10質(zhì)量％ 時，得不到與其含量成比例的高牙周病菌增殖抑制效果?？谇恍l(wèi)生品中，除了對應(yīng)于其形態(tài) 的基材之外，也可根據(jù)需要含有例如乳化劑、溶媒、穩(wěn)定劑。本實施方案的飲食品(飲料品和食品)含有上述牙周病菌增殖抑制劑。作為飲料 品的例子，可舉出例如碳酸飲料、茶飲料、清涼飲料、酒類、牛奶、咖啡、水果汁、膠體飲料、 營養(yǎng)飲料劑。碳酸飲料可以是例如汽水、鮮檸檬蘇打水、可樂。茶飲料可以是例如綠茶、 烏龍茶、紅茶。清涼飲料可以是例如加果汁飲料、礦泉水。酒類可以是例如啤酒、發(fā)泡酒、 日本酒、威士忌、燒酒、雞尾酒。作為食品的例子，可舉出例如酸乳酪、湯、咖喱、潤喉糖、糖 果、小甜餅、糕餅、日本點心、小吃點心、果汁。飲食品可以是例如健康食品、特定保健用食品、健康飲料、營養(yǎng)輔助食品。按固 體成分換算，飲食品中以優(yōu)選0. 001 10質(zhì)量％、更優(yōu)選0.01 1質(zhì)量％的范圍含有血桐 提取物。按固體成分換算，飲食品中的血桐提取物的含量為0.001質(zhì)量％以上時，通過飲食 品，牙周病菌的增殖特別有效地受到抑制。但是，按固體成分換算，飲食品中的血桐提取物 的含量超過10質(zhì)量％時，得不到與其含量成比例的高牙周病菌增殖抑制效果。飲食品中， 除了對應(yīng)于其形態(tài)的基材之外，還可根據(jù)需要含有例如乳化劑、溶媒、穩(wěn)定劑。根據(jù)本實施方案，可獲得以下的效果。本實施方案的牙周病菌增殖抑制劑含有血桐提取物作為有效成分。血桐提取物可 通過使用至少含有機溶劑的提取溶劑對血桐進行提取，而容易且有效地得到?？傊?，本實施 方案的牙周病菌增殖抑制劑能夠不需要繁雜的原料前處理地制造。此外，由于血桐在樹木中生長極快，在荒地廢地中也能夠生長，故在栽培上不費功夫。并且，血桐提取物由于是植物來源，故安全性高。所以，本實施方案的牙周病菌增殖抑 制劑在原料的供給穩(wěn)定性、生產(chǎn)率、安全性方面均優(yōu)異。本實施方案的口腔衛(wèi)生品和飲食品由于含有上述牙周病菌增殖抑制劑，故具有與 牙周病菌增殖抑制劑相同的效果。前述實施方案可以如下地進行改變。牙周病菌增殖抑制劑可以代替血桐提取物或者除了血桐提取物之外，還含有例如 選自來源于沖繩產(chǎn)蜂膠之類的、血桐提取物以外的寧芬酚-A、寧芬酚-B和寧芬酚-C中的至 少一種作為有效成分。以下，舉出實施例對本發(fā)明進一步具體地進行說明。實施例1〈血桐提取物的制備1>將在沖繩縣采集并冷凍的血桐的鮮葉解凍，用剪子剪細。將剪斷的鮮葉30g在90 體積份的乙醇與10體積份的水構(gòu)成的混合溶劑IOOml中在靜置于室溫的狀態(tài)下浸漬2周。 之后，對其進行過濾并將濾液作為血桐提取液回收。通過對血桐提取液進行冷凍干燥，從而 制備血桐提取液中所含固體成分的粉末，即血桐提取物。粉末狀血桐提取物中的寧芬酚-A、 寧芬酚-B和寧芬酚-C的總濃度、即寧芬酚類濃度由圖1所示的色譜圖算出的結(jié)果為50質(zhì) 量％，所述圖1所示的色譜圖通過在下述HPLC條件下分析血桐提取物而得。HPLC 條件系統(tǒng)PDA-HPLC系統(tǒng)(島津制作所)、LC IOADvp 系列、UV ；SPD-IOAvp, PDA ； SPD-MlOAvp柱LunaC18 (2. 0 X 250mm)(島津 GLC)溶劑=A 水(5 %乙酸)、B 乙腈(5 %乙酸)洗脫條件0-20min(梯度洗脫；A B = 80 20 — A B = 30 70)20-50min(梯度洗脫；A B = 30 70 — A B = 0 100)50-60min (A B = O 100)60-75min (A B = 80 20)流速0· 2ml/minPDA 檢測UV190-370nmUV 檢測UV287nm注入量20μ 1溫度40°C<血桐提取物針對牙周病菌的抗菌活性試驗>使用接種環(huán)將牙周病菌株1(伴放線菌放線桿菌(JCM8577))和牙周病菌株2(牙 齦卟啉單胞菌(JCM12257))分別接種于GAM瓊脂培養(yǎng)基后，在35°C培養(yǎng)7天。使用接種環(huán)從GAM瓊脂培養(yǎng)基采集由培養(yǎng)而增殖的牙周病菌株1的菌落，并將其 溶解在生理鹽水中，由此制備104CfU/ml的接種菌液1。使用接種環(huán)從GAM瓊脂培養(yǎng)基采集 由培養(yǎng)而增殖的牙周病菌株2的菌落，并將其溶解在生理鹽水中，由此制備104CfU/ml的接種菌液2。將上述“血桐提取物的制備1 ”中得到的血桐提取物混合于GAM瓊脂培養(yǎng)基中，制 備平板培養(yǎng)基。將以血桐提取物的終濃度為IOOppm的方式制備的平板培養(yǎng)基作為樣品平 板培養(yǎng)基1、以血桐提取物的終濃度為250ppm的方式制備的平板培養(yǎng)基作為樣品平板培養(yǎng) 基2、以血桐提取物的終濃度為500ppm的方式制備的平板培養(yǎng)基作為樣品平板培養(yǎng)基3。此 外，將乙醇混合于GAM瓊脂培養(yǎng)基，將以乙醇的終濃度為0.7%的方式制備的平板培養(yǎng)基作 為空白平板培養(yǎng)基。將樣品平板培養(yǎng)基1 3和空白平板培養(yǎng)基分別在115°C、15分鐘的條件下滅菌 后，用接種環(huán)將上述接種菌液1和接種菌液2涂布于各平板培養(yǎng)基上。之后，使用三菱氣體 化學(xué)社制造的厭氧系統(tǒng)，將各平板培養(yǎng)基上的牙周病菌株1和牙周病菌株2供于35°C下7 天的培養(yǎng)。培養(yǎng)后，確認平板培養(yǎng)基上的菌落的有無，結(jié)果對于牙周病菌株1，在空白平板培 養(yǎng)基和樣品平板培養(yǎng)基1上觀測到菌落，在樣品平板培養(yǎng)基2、3上未觀察到菌落。此外，對 于牙周病菌株2，在空白平板培養(yǎng)基上觀察到菌落，但在樣品平板培養(yǎng)基1 3上未觀察到 菌落?？傊?，確認了牙周病菌株1的生長，在血桐提取物的濃度為250ppm以上(換算為寧 芬酚濃度則為125ppm以上)的條件下受到阻礙，牙周病菌株2的生長，在血桐提取物的濃 度為IOOppm以上(換算為寧芬酚濃度則為50ppm以上)的條件下受到阻礙。由該結(jié)果可 知，本實施例的血桐提取物U、與抑制牙周病菌株1增殖的效果相比，抑制牙周病菌株2增 殖的作用效果更高。實施例2〈血桐提取物的制備2>首先，將血桐的剪斷鮮葉30g在95°C的水中浸漬30分鐘。通過過濾除去水，并將 殘留的葉在100%乙醇中浸漬3天。之后，對其進行過濾并將濾液作為血桐提取液回收。通 過對血桐提取液進行冷凍干燥，從而制備血桐提取液中所含固體成分的粉末，即血桐提取 物。粉末狀血桐提取物中的寧芬酚-A、寧芬酚-B和寧芬酚-C的總濃度，即寧芬酚類濃度 (S、由圖2所示的色譜圖算出的結(jié)果為40質(zhì)量％，所述圖2所示的色譜圖通過在上述HPLC 條件下分析血桐提取液而得。<血桐提取物針對牙周病菌的抗菌活性試驗>與實施例1相同地實施抗菌活性試驗，結(jié)果對于實施例2中制備的血桐提取物，也 得到與實施例1中制備的血桐提取物相同的結(jié)果，確認了實施例1中制備的血桐提取物與 實施例2中制備的血桐提取物的抗菌活性相同。
權(quán)利要求
牙周病菌增殖抑制劑，其特征在于，含有使用至少含有機溶劑的提取溶劑而從血桐提取的血桐提取物作為有效成分。
2.牙周病菌增殖抑制劑，其特征在于，含有選自寧芬酚-A、寧芬酚-B和寧芬酚-C中的 至少一種作為有效成分。
3.權(quán)利要求2所述的牙周病菌增殖抑制劑，其中，前述選自寧芬酚-A、寧芬酚-B和寧 芬酚-C的至少一種來源于血桐提取物。
4.權(quán)利要求1 3中任一項所述的牙周病菌增殖抑制劑，其中，所述抑制劑具有抑制屬 于放線桿菌屬的牙周病菌和屬于卟啉單胞菌屬的牙周病菌的至少一者的增殖的作用。
5.口腔衛(wèi)生品，其特征在于，其含有權(quán)利要求1 4中任一項所述的牙周病菌增殖抑制劑。
6.飲食品，其特征在于，其含有權(quán)利要求1 4中任一項所述的牙周病菌增殖抑制劑。全文摘要
牙周病菌增殖抑制劑含有使用至少含有機溶劑的提取溶劑而從血桐提取的血桐提取物作為有效成分?；蛘?，牙周病菌增殖抑制劑含有選自寧芬酚-A、寧芬酚-B和寧芬酚-C中的至少一種作為有效成分。牙周病菌增殖抑制劑可配合于例如口腔衛(wèi)生品和飲食品中使用。
文檔編號A61P31/04GK101883574SQ20088011898
公開日2010年11月10日 申請日期2008年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月5日
發(fā)明者后藤崇輝, 福本修一 申請人:百佳株式會社