專利名稱：以左手香萃取物治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)疾病之組合物及方法
以左手香萃取物治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)疾病之組合物及方法相關(guān)申請案本揭示內(nèi)容納入?yún)⒖济绹鴷簳r申請案第60/973，164號(2007年9月17日申請) 并主張其巴黎公約優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
左手香(Plectranthus amboinicus (PA))是一種用于咳嗽、喉嚨痛、及鼻塞之傳統(tǒng) 中藥，但其亦可用于諸多其它病癥，諸如，感染、風(fēng)濕、及胃脹氣。盡管PA之化學(xué)組成已有廣 泛之研究，其用于抑制AP-1結(jié)合之活性成分卻尚未獲得報告。轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-l(AP-l)借著結(jié)合位于目標基因啟動子區(qū)域中之共有的DNA 辨識序列TGA(C/G)TCA(亦稱為TPA反應(yīng)組件(TRE))而調(diào)控各種不同基因之表現(xiàn)。在哺乳 動物細胞中，AP-1復(fù)合物主要是由Fos及Jim相關(guān)蛋白之成員而形成。AP-1蛋白含有稱為 bZIP域之特征性胺基酸序列。此蛋白域有兩個部份；其含有螺旋構(gòu)形并可作為二聚化之界 面。與兩個bZIP域之N-端基礎(chǔ)區(qū)域并列之兩個白胺酸重復(fù)序列間的作用可形成能夠結(jié)合 DNA之二聚體。試管內(nèi)之試驗指出，F(xiàn)os家族之一成員與Jim類別之一成員可形成穩(wěn)定之異 源二聚體。Jun同源二聚體可在試管中形成；但其在生理條件下并不穩(wěn)定。Fos同源二聚體 尚未見于正常之實驗條件下。試管內(nèi)之結(jié)合及轉(zhuǎn)錄實驗指出，F(xiàn)os-Jim異源二聚體是AP-1 蛋白之主要活性種類。AP-1之活化后會有某些基因之表現(xiàn)增加，這是諸多細胞反應(yīng)后段步驟的調(diào)控機 制，諸如，發(fā)炎、應(yīng)激反應(yīng)、細胞分化、以及腫瘤新生。因此，抑制AP-1-DNA復(fù)合物之形成為 降低發(fā)炎及癌癥進程的方法之一。AP-1之活性已被認為涉及數(shù)種自體免疫疾病，諸如，大腸 炎、紅斑性狼瘡、以及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。一般而言，發(fā)炎信號傳導(dǎo)途徑會造成數(shù)種轉(zhuǎn)錄因子之活化，包括AP-1，其接著會活 化免疫細胞并誘發(fā)特定細胞之分化。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之滑膜中發(fā)現(xiàn)AP-1之顯著增加表 現(xiàn)及高DNA結(jié)合活性。此外，c-fos之過表現(xiàn)會造成滑膜細胞之過度生長以及關(guān)節(jié)炎性關(guān) 節(jié)破壞。此等觀察結(jié)果引出調(diào)控AP-1之DNA結(jié)合活性可能可降低疾病中之發(fā)炎進展的假 設(shè)。事實上，投與誘捕性AP-1寡核苷酸已證實可降低膠原誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎，并可減少小鼠實 驗性大腸炎中之腸發(fā)炎情形?；诖说扔^察結(jié)果，此領(lǐng)域已針對炎性疾病以及癌癥致力研發(fā)AP-1抑制劑。AP-1 結(jié)合活性之強力抑制劑姜黃素已被證實具有抗癌活性，且可抑制蝕骨細胞新生作用并激發(fā) 蝕骨細胞之凋亡。Jun/Fos 二聚體形成及AP-1-DNA結(jié)合之強抑制劑地膚子皂苷I (Momordin I)可借著誘發(fā)細胞凋亡而抑制癌細胞之增殖。發(fā)炎作用廣泛涉及諸多人類之急性及慢性疾病，包括過敏、關(guān)節(jié)炎、牙齦炎、及大 部分名稱以「-itis (炎)」結(jié)尾之疾病。發(fā)炎通常由組織之損傷起始，并接著將免疫細胞吸 引至損傷區(qū)域以促進復(fù)原。發(fā)炎可保護身體，但是，如該發(fā)炎反應(yīng)不平衡并超出其所處理之 威脅，其亦會損傷身體?？寡姿幬锟蓾撛谟糜谧泽w免疫疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、過敏、 癌癥、心臟病、及關(guān)節(jié)硬化。RA是一種由增高之T細胞活性中介的炎性疾病，且其特征為滑膜炎以及因為過量之軟骨下蝕骨細胞性骨吸收而造成之關(guān)節(jié)周圍骨的侵蝕及關(guān)節(jié)破壞。RA 之治療性管理已將焦點放在研發(fā)出可阻斷細胞因子信號傳導(dǎo)之抗炎藥物。目前之治療為 NSAIDs (非類固醇抗炎藥物)、皮質(zhì)類固醇、及DMARDs (疾病修飾抗風(fēng)濕病藥物)(諸如，胺 甲蝶呤)、TNF抑制劑、以及Actemraaocilizumab)( 一種人源化抗人間白素_6 (IL-6)受體 單株抗體)。發(fā)炎是一種組織對于損傷之反應(yīng)。其可經(jīng)由諸多不同細胞因子的調(diào)控而吸引免疫 細胞進行修復(fù)，該等細胞因子主要是由NF- k B、AP-1、及NFAT、以及STAT家族的轉(zhuǎn)錄因子活 化?；罨鞍?l(AP-l)是一種轉(zhuǎn)錄因子，其在細胞循環(huán)中受到活化以促進細胞之存活、分 化、及適應(yīng)性反應(yīng)。近來證實，AP-1之活性涉及發(fā)炎之信號傳導(dǎo)，因此建議AP-1可作為干 擾發(fā)炎相關(guān)性疾病之新穎標的。

發(fā)明內(nèi)容
左手香(Plectranthus amboinicus (PA))之粗萃取物具有抗發(fā)炎之效應(yīng)，且可在 試管內(nèi)抑制AP-1之結(jié)合。與PA粗萃取物之共置可在HUVEC細胞中顯著抑制IL-6、IL-12、 MCP-1、及RANTES之LPS-誘發(fā)性表現(xiàn)。在使用制備性HPLC對該粗萃取物進一步進行分級分 離后，辨識出級份8、9、10、及11可抑制AP-1結(jié)合活性。級份8之活性組成份為Mena 987； 級份9為Mena 998 ；級份10為Mena 9102 ；而級份11為迷迭香酸及合成之迷迭香酸類似 物。其它化合物亦顯示具有抑制活性。此等化合物對于AP-1活性具有抑制效應(yīng)，且可作為 預(yù)防劑或療劑而用于其中涉及AP-1之過量表現(xiàn)或活性的疾病。根據(jù)本發(fā)明之特點，其揭示一種組合物，該組合物包含左手香萃取物以及醫(yī)藥可 接受之載體。根據(jù)本發(fā)明之特點，其揭示一種方法，該方法包含提供至少含有左手香萃取物以 及醫(yī)藥可接受之載體的組合物，以治療有效量投與至有需要的病患。根據(jù)本發(fā)明之特點，其揭示一種方法，該方法包含制備重組Fos-Jim復(fù)合物，其中 該Fos-Jim復(fù)合物是由具有Fos基因及Jim基因以及與該Fos基因相關(guān)之第一標記基因及 與該His基因相關(guān)之第二標記基因的載體制備，其中該第一標記基因與該第二標記基因不 同；以一標記對該載體之基因產(chǎn)物進行第一篩選而篩選Fos-Jim復(fù)合物，以產(chǎn)生經(jīng)部份篩 選之基因產(chǎn)物組；再以另一標記篩選該經(jīng)部份篩選之基因產(chǎn)物組，以分離該Fos-Jim復(fù)合 物。本發(fā)明揭示一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該方法包含下列步驟 提供至少含有左手香萃取物的組合物，并將治療有效量之該組合物投與至有需要的病患。在本發(fā)明之另一態(tài)樣中，其揭示一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該 方法包含下列步驟提供包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物的組合物 并將治療有效量之該組合物投與至有需要的病患。
本發(fā)明揭示一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。該組合物包含左手香 萃取物。在本發(fā)明之另一態(tài)樣中，其揭示一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。 該組合物包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物 本發(fā)明系關(guān)于左手香(PA)萃取物，其活性成分(迷迭香酸、Mena 987,Mena 998、 Mena 9102)，諸等合成之迷迭香酸類似物，以及其于AP_1之抑制及治療發(fā)炎相關(guān)性疾病之 用途。在一態(tài)樣中，該左手香(PA)萃取物顯示具有AP-1復(fù)合物之抑制活性。此等AP-1 復(fù)合物可由0幾11、幾1^、幾110、(；寸08、？08-8、？儀-1、或？儀-2形成，但不限于此。在一態(tài)樣中，本發(fā)明提供左手香萃取物。該萃取物含有(或基本上由其構(gòu)成)以 重量計0.5-1. 2%之迷迭香酸、以重量計0.05-0. 之Mena 987、以重量計0. 05-0. 之 Mena 998、以及以重量計0. 05_0. 之Mena 9102。特定言之，該萃取物可包括(或基本上 由其構(gòu)成)以重量計0.89%之迷迭香酸、以重量計0.06%之Mena 987、以重量計0. 09%之 Mena 998、以及以重量計0. 08%之Mena 9102。該萃取物可含有(或基本上由其構(gòu)成)以 重量計至少30%之多酚。本發(fā)明之左手香萃取物可由，如，干燥之左手香葉汁粉的RPC18-HPLC純化，并使 用G13658UV/VIS偵測器在214nm監(jiān)測所有樣本而制備。該制備PA萃取物之方法系在本發(fā) 明之范圍中。本發(fā)明亦提供一種用于進行AP-1抑制檢定之方法，以評估左手香萃取物成分之 活性。


上述本發(fā)明之特點以及標的將可在參照下列之敘述并結(jié)合附呈之圖式時更為明 了，在該等圖式中，類似之參照編號代表類似之組件，且其中圖1是顯示左手香(PA)萃取物抑制效應(yīng)的具體實施例之實驗數(shù)據(jù)的柱狀圖；圖2是左手香萃取物分級分離的具體實施例之HPLC圖；圖3是CHM9102之NMR光譜圖；圖4顯示CHM9102及迷迭香酸之化學(xué)結(jié)構(gòu)以及顯示抑制效應(yīng)之柱狀圖；圖5是顯示左手香萃取物AP-1抑制活性的具體實施例之實驗數(shù)據(jù)圖；圖6是顯示左手香萃取物可抑制由各種不同組成份蛋白所形成之AP-1復(fù)合物的 具體實施例之實驗數(shù)據(jù)圖；圖7是顯示基因X及Y在雙順反子表現(xiàn)系統(tǒng)中之共表現(xiàn)的具體實施例之實驗數(shù)據(jù) 的示意圖；圖8是顯示重組Fos-Jim復(fù)合物由細菌細 進行單一步驟純化的具體實施例之實驗數(shù)據(jù)的實驗結(jié)果；圖9是顯示針對AP-1DNA結(jié)合活性之分析發(fā)展的具體實施例的實驗數(shù)據(jù)圖；圖10是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖11是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖12是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖13是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖14是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖15是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖；圖16是本發(fā)明化合物合成的具體實施的流程圖。
具體實施例方式在下列本發(fā)明具體實例之詳述中，其參照附呈之圖式，其中類似之參照數(shù)目代表 類似之組件，且其中系以說明方式顯示可實施本發(fā)明之特定具體實例。此等具體實例系以 足夠之細節(jié)進行敘述，以使一般技藝人士可據(jù)以實施本發(fā)明，且需明了者，可使用其它具體 實例，且可在不偏離本發(fā)明范圍之情形下進行邏輯、機械、生物、電學(xué)、功能、及其它之改變。 下文之詳述因此不應(yīng)被視為任何限制，而本發(fā)明之范圍僅由附呈之權(quán)利要求定義。在本文 中，「或」乙辭應(yīng)被視為一種論理上之選言，且不應(yīng)被視為一種排他性選言，除非其明示為 此，或被標示為「或不」(xor)乙辭。本發(fā)明系關(guān)于抗炎組合物。該等方法及組合物是用于治療發(fā)炎以及治療及預(yù)防發(fā) 炎相關(guān)性疾病、病癥、及癥狀。發(fā)炎相關(guān)性病癥包括，但不限于，自體免疫疾病、關(guān)節(jié)炎、過敏、癌癥、心臟病、中 風(fēng)、關(guān)節(jié)硬化、及阿茲海默癥。自體免疫疾病包括急性急性播散性腦脊髓炎(ADEM)、僵直性 脊椎炎(AS)、乳糜瀉、克隆氏癥、吉蘭-巴雷氏癥候群(Guillain-Barre syndrome (GBS))、 橋本氏癥、視神經(jīng)炎、Ord氏甲狀腺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、及顳動脈炎。根據(jù)本發(fā)明，其提供一種用于治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該方法包含下 列步驟提供至少含有左手香萃取物的組合物，并將治療有效量之該組合物投與至需要病 患。根據(jù)具體實施，本發(fā)明之一種特定左手香品種為臺灣島嶼之特有種。在本發(fā)明之另一態(tài)樣中，其提供一種用于治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。 該組合物包含左手香萃取物。名辭「左手香」或「PA」系指左手香植物，其亦包括來自其之任何組織、部分、或級 份，或是其任何制備物，包括勻質(zhì)物、懸浮液、濾液、過濾殘余物、及溶液。左手香之其它名稱 包括古巴奧勒網(wǎng)、西班牙百里香、印度琉璃苣、墨西哥百里香、及墨西哥薄荷。名辭「萃取物」系指借著由指定物質(zhì)萃取而取得任何固體、黏稠體、及液體物質(zhì)。在 本發(fā)明中，左手香萃取物包括由左手香之植物組織萃取之任何固體、黏稠體、及液體物質(zhì)。熟習(xí)技藝者已知并使用各種不同的萃取方法及流程。此等方法及流程包括物理及 化學(xué)流程兩者，包括使用溶劑、蒸餾、滲濾、及超臨界流體萃取。萃取物可如所需進一步進行 過濾或濃縮。在一實例中，左手香萃取物系藉由研磨勻質(zhì)化之左手香植物組織并以離心澄 清該粗萃取物而取得。在例示性的具體實施中，該左手香萃取物可抑制下列至少一者IL_6、IL-12、MCP-1、及RANTES的表現(xiàn)。對于IL-6、IL-12、MCP-1、及RANTES之抑制至少扮演著抗發(fā)炎的 角色。在部分例示性的具體實施中，該左手香萃取物可抑制AP-1結(jié)合活性。AP-1結(jié)合活性之抑制涉及預(yù)防及治療與AP-1之過量表現(xiàn)或活性相關(guān)的疾病，例如，炎性疾病及免疫疾病。在本發(fā)明一態(tài)樣中，其提供一種用于治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該方法 包含下列步驟將左手香萃取物過濾成為至少一個級份，提供具有至少一個該等左手香萃 取物級份之組合物，并將治療有效量之該組合物投與至有需要的病患。在本發(fā)明一態(tài)樣中，其提供一種用于治療發(fā)炎及發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。該組 合物包含至少一個左手香萃取物之級份。在例示性的具體實施中，該左手香萃取物級份可抑制下列至少一者IL-6、IL-12、 MCP-1、及RANTES的表現(xiàn)。在部分例示性的具體實施中，該左手香萃取物級份可抑制AP-1 結(jié)合活性。名辭「級份」系指一物質(zhì)的可分離性組成份之一。級份是根據(jù)個別組成份之特定 特性的差異而收集。在例示性的具體實施中，級份是由其在特定波長下之光學(xué)吸收值而辨 識。名辭「過濾」是指用于將物質(zhì)的某一組成份與該物質(zhì)之其它組成份分離的任何流 程。熟習(xí)技藝者已知并使用各種不同的過濾方法及流程。此等方法及流程包括透析、凝膠 過濾層析、及高效液相層析(HPLC)。在一實例中，左手香萃取物系使用C-18管柱過濾。過濾之流程可重復(fù)進行多次，其中所收集到之一或多個級份可進一步進行過濾以 產(chǎn)生額外之級份。在例示性的具體實施中，其將左手香萃取物之一個經(jīng)過濾之級份再次過 濾成為更多個級份，以進一步分離該左手香萃取物之組成份。在一實例中，該經(jīng)過濾之級份 系以C-18管柱，使用具有0. 三氟乙酸之由2%乙腈至90%乙腈的溶劑梯度進行過濾。在本發(fā)明之例示性具體實施中，一個左手香萃取物級份，其在本文中稱為「F10」或 「級份10」，含有一種C18H17N08化合物，其在本文中稱為「CHM9102」，具有下列通式結(jié)構(gòu) 根據(jù)具體實例，其提供一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該方法包含 下列步驟提供包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物的組合物 并將治療有效量之該組合物投與至有需要的病患。根據(jù)具體實例，其提供一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。該組合物 包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物 在例示性的具體實施中，該CHM9102化合物可抑制下列至少一者IL_6、IL-12、 MCP-1、及RANTES的表現(xiàn)。在部分例示性的具體實施中，CHM9102可抑制AP-1結(jié)合活性。根據(jù)例示性的具體實施，組合物可為各種不同的形式，包括粉末、乳霜、凝膠、油 膏、軟膏、溶液、錠劑、膠囊、噴霧、及貼布?？墒褂幂d劑及載體而將該組合物投與至病患。此 等載體包括助溶劑、稀釋劑、及分散基質(zhì)。此等載體為生物可兼容、醫(yī)藥可接受者，且其不會 改變該左手香萃取物或CHM9102化合物之治療特征。亦可在該組合物中包括賦形劑、佐劑、 及其它成分。該組合物應(yīng)在制造及貯存過程中為安定。該左手香萃取物或CHM9102化合物可以 諸如單硬脂酸鋁、明膠、以及生物可降解性及生物可兼容性之聚合物的試劑進行包囊，以防 止在體內(nèi)或是由該組合物之其它成分產(chǎn)生不想要的降解。亦可在該組合物中包括抗菌及抗 真菌劑，諸如，苯甲醇、對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、及硫柳汞。該組合物之投與可經(jīng)由各種不同的方法達成而到達體內(nèi)之不同部分，包括靜脈、 皮內(nèi)、皮下、口服(如，吸入)、穿皮(亦即，局部)、穿黏膜、以及直腸投與。在例示性的具體實施中，該組合物系一種經(jīng)由腸外、皮內(nèi)、或皮下注射之溶液或懸 浮液。載體包括水、鹽水溶液、及其它合成溶劑?？墒褂弥T如醋酸鹽、檸檬酸鹽、及磷酸鹽之 緩沖劑，以及用以調(diào)整滲透度之試劑，諸如，氯化鈉及葡萄糖，以及用以調(diào)整PH之試劑，諸 如，鹽酸及氫氧化鈉。在其它例示性的具體實施中，該組合物系一種營養(yǎng)補充品。營養(yǎng)補充品可制備為 各種不同的形式，包括固體、液體、及粉末形式。該組合物可以丸劑、錠劑、或包囊之凝膠形 式獨立服用，或者可以食品添加物、飲料、或可混合性粉末的形式使用。名辭「治療有效量」系指可以能夠應(yīng)用于任何醫(yī)藥治療之合理效益/風(fēng)險比而產(chǎn) 生某些所欲效應(yīng)的量。該有效量可根據(jù)諸等因子而各異，諸如，待治療之疾病或病況、待投 與之特定靶向建構(gòu)物、該對象之尺寸、或該疾病或病況之嚴重性。熟習(xí)技藝者可在不須過度 實驗之情形下以經(jīng)驗判定特定化合物之有效量。根據(jù)本發(fā)明之另一態(tài)樣，可使用CHM9102類似物取代CHM9102而用于治療發(fā)炎及 發(fā)炎相關(guān)性病癥。在例示性的具體實施中，可使用CHM9102類似物(其在本文中稱為「迷迭 香酸」)取代CHM9102。該迷迭香酸具有下述之通式結(jié)構(gòu) 根據(jù)具體實施，其提供一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之方法。該方法包含 下列步驟提供包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物的組合物
并將治療有效量之該組合物投與至有需要的病患。根據(jù)具體實施，其提供一種用于治療發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之組合物。該組合物 包含具有下列通式結(jié)構(gòu)之化合物 在例示性的具體實施中，該迷迭香酸化合物可抑制下列至少一者IL_6、IL-12、 MCP-1、及RANTES的表現(xiàn)。在部分例示性的具體實施中，該迷迭香酸可抑制AP-1結(jié)合活性。如上所論，左手香具有AP-1抑制活性，如圖5所示。因此，該左手香萃取物及其活 性成分(單獨或組合)可用于治療發(fā)炎相關(guān)性疾病，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其它。根據(jù)圖5所示實驗數(shù)據(jù)的具體實施，其將含有AP-1結(jié)合位點之寡核苷酸與取自經(jīng) TPA刺激之K562 (K562)或HeLaOfeLa)細胞的核萃取物進行共置。加入AP-1復(fù)合物之抗 體，接著加入經(jīng)辣根過氧化物酶標記之二級抗體，以進行基于ELISA分析。將該取自經(jīng)TPA 刺激之細胞的核萃取物之AP-1結(jié)合活性定義為100%并將僅為緩沖液之AP-1結(jié)合活性定 義為0%。數(shù)據(jù)顯示PA萃取物可抑制AP-1結(jié)合活性。根據(jù)一具體實施，AP-1復(fù)合物可由 C-Jun、JunB、JunD、c_Fos、Fos_B、Fra_l、或 Fra-2形成，但不限于此。如圖6所示，該等所形成之AP_1復(fù)合物的結(jié)合活性指出，蛋白在 左手香萃取物的存在下會減少。根據(jù)圖6所示實驗數(shù)據(jù)的具體實施，AP-1復(fù)合物可由不同蛋白形成，諸如，C-Jim、 JunB、JunD、c_Fos、Fos_B、Fra_l、或Fra_2。在基于ELISA之分析中使用各種不同抗體，顯 示PA萃取物之目標蛋白。結(jié)果顯示，PA萃取物可抑制該等由C-Jun、JunB、JunD、c_Fos、 Fos-B、Fra-1、或Fra_2所形成之復(fù)合物的DNA結(jié)合活性。因此，迷迭香酸、Mena 987、Mena 998、Mena 9102存在于左手香萃取物中，其具有 AP-1抑制活性。根據(jù)具體實施，該左手香萃取物在用于醫(yī)藥或營養(yǎng)醫(yī)學(xué)(nutraceutical) 組合物中時可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或其它發(fā)炎相關(guān)性疾病。根據(jù)實施。左手香萃取物含有以重量計0.5-1. 2% (如，0.89% )之迷迭香酸、以 重量計 0. 05-0. 1% (如，0. 06% )之 Mena 987、以重量計 0. 05-0. 1% (如，0. 09% )之 Mena 998、以及以重量計0.05-0. (如，0. 08% )之Mena9102。多酚在該萃取物中之百分比可 為以重量計至少30% (亦即，在30%及100% (含)間之任何整數(shù)百分比)，如使用皮粉 法(hide powder method)所測定，該方法已為多酚分析之官方方法(美國皮革化學(xué)家協(xié)會(AmericanLeather Chemist Association))。多酚之含量系借著制備多酚溶液、使該多酚 吸收至鉻皮粉上、再接著以重量分析測定殘余物質(zhì)而進行測定。根據(jù)具體實施，該萃取物是根據(jù)下文實例所述之方法或是相當方法而制備。舉例 而言，其以lOOOOx g離心該粗制葉汁30分鐘，再過濾該上清液。凍干該濾液以產(chǎn)生干燥 粉末。接著以RPC18_HPLC純化該粉末。根據(jù)溶析特征及具體實施，由型號CHF 122SB之 Advantec級份收集器收集到四個級份。Frac#8(含有Mena 987)系自19. 5至21. 5min收集， Frac#9 (含有 Mena 998)系自 21. 5 至 23. 5min 收集，F(xiàn)rac#10 (含有迷迭香酸及 Mena9102) 系自23. 5至25. 5min收集。根據(jù)具體實施，lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生4. 8mg Frac#8, 14mg Frac#9、及 12. 7mg Frac#10o根據(jù)具體實施，其揭示一種醫(yī)藥組合物Mena 987，包含治療有效量之 根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物Mena 998，包含治療有效量的下列至少之一 根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物Mena 9102，包含治療有效量之 根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物迷迭香酸，包含治療有效量之 因迷迭香酸、Mena 987、Mena 998、及Mena 9102之生物功能各異，各組成份在該 PA萃取物中之比例可如所需調(diào)整。為取得改良之生物活性，可以人工合成部分類似物。
根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物，包含以有效量之式I化合物抑制AP-1
(i)其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基，例如，(H0)n、(H3C0)n(其 中 n = 1-3)、亞甲二氧基(0CH20)、CH3、F、CI、Br、I、NHR(R = H、0C0CH3)、N02、及 C00R(其 中R是H或烷基)、以及RCO (其中R是H或烷基)；A是獨立選自H、C00R、C0NRR'、S03H、 S02NRR'、或P0(0R)(0R')，其中R及R'是獨立選自H、C1-C6烷基、或芳基；且其中X是 012、0、或朋。根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物，包含治療有效量的表1化合物之一 表1根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物，包含治療有效量之式II化合物 其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基，例如，(H0)n、(H3C0)n(其 中 n = 1-3)、亞甲二氧基(0CH20)、CH3、F、Cl、Br、I、NHR(R = H、0C0CH3)、N02、C00R(其中 R 是H或烷基)、以及RCO(其中R是H或烷基)，X是CH2、0、NH，R1是獨立選自H、C1_C6烷基、 芳基，R2是獨立選自C00H、C00Et、芳基、羥基-芳基。根據(jù)具體實施，其揭示一種組合物，包含治療有效量的表2化合物之一 表2為試驗本發(fā)明化合物對于AP-1與AP-1辨識序列之結(jié)合活性的效應(yīng)，進行ELISA 實驗。該等AP-1抑制分析之結(jié)果示于表3。
表3根據(jù)具體實施，其發(fā)展出結(jié)合分析以辨識可阻斷AP-1DNA結(jié)合活性之抑制劑。傳 統(tǒng)的方法需要由經(jīng)TPA刺激之細胞中制備核萃取物，或者需要分別純化Fos及Jim再接續(xù) 進行試管內(nèi)之二聚化作用以形成功能性之AP-1復(fù)合物。因此如圖7所示設(shè)計可在一個質(zhì) 體中驅(qū)動兩種基因表現(xiàn)之雙順反子表現(xiàn)載體。在此系統(tǒng)中，啟動子可直接驅(qū)動該第一基因 之表現(xiàn)，該第一基因經(jīng)由核糖體結(jié)合位點而連結(jié)該第二基因，以造成該第二基因之表現(xiàn)。在 該等細胞中就其生理功能而形成異源二聚體之任何基因?qū)撛诮钥墒褂么讼到y(tǒng)而在該等 細胞中以復(fù)合物的形式表現(xiàn)。根據(jù)具體實施，其使用圖7之表現(xiàn)系統(tǒng)以共表現(xiàn)AP-1復(fù)合物。因此，其以(組胺 酸)6標記Fos (為基因1)，并以Str印-標記標記Jim (為基因2)，如圖8A所述。該等結(jié)果 說明，其以Ni2+層析，使用單一步驟，純化出含有經(jīng)his標記之蛋白及經(jīng)str印標記之蛋白 兩者的復(fù)合物(圖8B)。交叉連結(jié)實驗進一步確認該等Fos-Jim復(fù)合物為二聚體(圖8C)。根據(jù)圖8所示具體實施的實驗數(shù)據(jù)，其如圖8A所示創(chuàng)造可在單一載體(諸如質(zhì) 體)中進行Fos及Jim之雙順反子表現(xiàn)的建構(gòu)物。在圖8B中，其完成重組Fos-Jim復(fù)合物 之純化。其誘發(fā)具有pFos-Jim之細菌細胞以進行重組蛋白表現(xiàn)。在進行細胞裂解后，使該 細胞粗萃取物通過Ni2+管柱，接著再進行咪唑溶析，以釋出含有(組胺酸)6之復(fù)合物。如 圖8B所示，M道為蛋白標記物；第1道為細胞粗萃取物；第2道為Ni2+管柱之流出液；第3 道為使用10mM咪唑之洗液；而第4道為使用500mM咪唑之溶析液。使用含有蛋白之粗萃取物或經(jīng)純化之蛋白進行基于ELISA及基于熒光各向異性 之結(jié)合分析。將含有一或多個拷貝之AP-1共有結(jié)合位點的經(jīng)標記寡核苷酸用于該等結(jié)合 分析中。在ELISA結(jié)合分析中，使用經(jīng)生物素標記之寡核苷酸涂覆鏈霉親和素盤。經(jīng)羅丹 明(Rhodamine)或熒光黃或是其它熒光團標記之寡核苷酸則用于熒光各向異性分析。如圖9所示，該等結(jié)果確認該等重組AP-1復(fù)合物之DNA結(jié)合活性具有如強競爭物 般之特異性，因在使用基于ELISA及基于熒光各向異性之結(jié)合分析兩者時，含有AP-1共有 結(jié)合位點之自由未經(jīng)標記的寡核苷酸皆可阻斷經(jīng)標記DNA及該等AP-1復(fù)合物間之結(jié)合。 根據(jù)圖9所示之具體實例，其針對AP-1之DNA結(jié)合活性發(fā)展出基于ELISA (圖9A及9B)及 基于熒光各向異性(圖9C及9D)之分析。圖9A及9C顯示AP-1結(jié)合活性之濃度相關(guān)性增 加。圖9B及9D顯示自由之含AP-1結(jié)合位點之寡核苷酸的劑量相關(guān)性抑制作用。根據(jù)具體實施，本發(fā)明之化合物可結(jié)合熟習(xí)技藝者在閱讀本發(fā)明時可辨識之其它 活性劑、載體、載劑、賦形劑、或輔助劑而包括在醫(yī)藥或營養(yǎng)醫(yī)學(xué)(nutraceutical)組合物 中，并至少對一動物(諸如人類)之眼進行投與。該等醫(yī)藥或營養(yǎng)醫(yī)學(xué)組合物較佳至少包含一種醫(yī)藥可接受之載體。在此等醫(yī)藥組 合物中，本發(fā)明之試劑為其「活性化合物」，亦稱為「活性劑」。在本文中，詞語「醫(yī)藥可接受 之載體」包括語該醫(yī)藥投與相容之溶劑、分散基質(zhì)、涂層、抗菌劑及抗真菌劑、等滲透及吸收延遲劑、及其類似者。亦可在該等組合物中納入補充性之活性化合物。醫(yī)藥組合物系調(diào)配 為與其所欲投與途徑兼容。投與途徑之例包括腸外(如，靜脈)、皮內(nèi)、皮下、口服(如，吸 入)、穿皮(局部)、穿黏膜、及直腸之投與。用于腸外、皮內(nèi)、或皮下施用之溶液或懸浮液可 包括下列組成份無菌稀釋劑，諸如，注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇、 或其它合成溶劑；抗菌劑，諸如，苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如，抗壞血酸或 亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如，乙二胺四乙酸；緩沖劑，諸如，醋酸鹽、檸檬酸鹽、或磷酸鹽；以 及用以調(diào)整滲透度之試劑，諸如，氯化鈉及葡萄糖。PH可以酸或堿調(diào)整，諸如，鹽酸或氫氧化 鈉?？蓪⒛c外制備物包裝于玻璃或塑料制之安瓿、拋棄式針筒、或多次劑量小瓶中。本文所用之對象系指人類，以及非人類靈長類(如，猩猩、獼猴、狨)、家畜(如，羊、 牛、馬、驢、及豬)、寵物(如，狗、貓)、實驗室試驗動物(如，小鼠、兔、大鼠、天竺鼠、倉鼠)、 圈養(yǎng)之野生動物(如，狐貍、鹿)、以及任何可由本發(fā)明之試劑獲益之生物?？捎杀景l(fā)明所 揭示之試劑獲益的動物類型并無限制。不論其為人類或非人類生物，對象可被稱為病患、個 體、動物、宿主、或接受者。適合用于注射使用之醫(yī)藥組合物包括無菌之水性溶液(在其為水可溶性之情形 下)或分散液，以及用于實時制備無菌注射容抑或分散液之無菌粉末。就靜脈投與而言，適 當之載體包括生理鹽水、制菌水、CremophorEL. TM. (BASF, Parsippany, N. J.)、或磷酸緩沖 鹽水(PBS)。在所有情形下，該組合物皆應(yīng)為無菌，且應(yīng)為具有可輕易注射性程度之液體。 其應(yīng)在制造及貯存條件下為安定，且應(yīng)對抗諸如細菌及真菌之微生物的污染作用進行防 腐。該載體可為溶劑或分散基質(zhì)，含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、及液態(tài) 聚乙二醇、及其類似者)、及其適當之混合物。適當之流動性可，例如，借著使用涂覆物(諸 如，卵磷脂)、借著保持所需之顆粒大小(就分散液之情形而言)、以及借著使用界面活性劑 而維持。微生物作用之預(yù)防可以各種不同的抗菌劑及抗真菌劑而達成，例如，對羥基苯甲酸 酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞、及其類似者。在諸多情形下，其將較佳在該組合物中包 括等滲透劑，例如，糖類、多元醇(諸如，甘露糖醇、山梨糖醇)、或氯化鈉。該等可注射組合 物之延長吸收可借著在該組合物中包括可延遲吸收之試劑而達成，例如，單硬脂酸鋁及明 膠。無菌可注射性溶液可借著將所需量之該活性化合物與如所需的上述成分之一或 組合納入適當之溶劑中，接著再進行過濾滅菌而制備。一般而言，分散液系借著將該活性化 合物納入含有基礎(chǔ)分散基質(zhì)及取自上述者之所需其它組成份的無菌載劑中。就用以制備無 菌可注射性溶液之無菌粉末而言，其制備方法包括真空干燥及冷凍干燥，由其先前經(jīng)無菌 過濾之溶液產(chǎn)生該活性成分加上任何其它所需成分之粉末?？诜M合物一般而言包括鈍性之稀釋劑或食用性之載體。就口服治療性投與之目 的而言，可將該活性化合物與賦形劑共同納入，并以錠劑、片劑、或膠囊(如，明膠膠囊)的 形式使用?？诜M合物亦可使用液態(tài)載體制備而作為漱口水。亦可包括醫(yī)藥可兼容性結(jié)合 劑或佐劑材料為該組合物之部分。該錠劑、丸劑、膠囊、片劑、及其類似者可含有下列成分中 之任一者，或是具有類似性質(zhì)之化合物結(jié)合劑，諸如，微晶纖維素、黃蓍膠、或明膠；賦形 劑，諸如，淀粉或乳糖；崩解劑，諸如，藻酸、Primogel、或玉米淀粉；潤滑劑，諸如，硬脂酸鎂 或Sterotes ；助流劑，諸如，膠態(tài)二氧化硅；甜味劑，諸如，蔗糖或糖精；或是調(diào)味劑，諸如， 薄荷、水楊酸甲酯、或柳橙調(diào)味劑。
就以吸入進行之投與而言，該等化合物系以氣溶膠噴霧的形式，由含有適當推進 劑(如，氣體，諸如，二氧化碳)之加壓容器或分配器，或是由噴霧器傳遞。全身性之投與亦可為穿黏膜或是穿皮者。就穿黏膜或穿皮投與而言，可在該調(diào)配 物中使用適用于該待穿透屏障之穿透劑。此等穿透劑系技藝中一般已知者，且其包括，例 如，就穿黏膜之投與而言，清潔劑、膽鹽、及夫西地酸(fusidic acid)衍生物。穿黏膜之投與 可經(jīng)由使用鼻噴霧或栓劑達成。就穿皮投與而言，其系將該等活性化合物調(diào)配成為油膏、軟 膏、凝膠、或乳霜，如技藝中一般所知。該等化合物亦可以栓劑(如，使用習(xí)知之栓劑基質(zhì)， 諸如，可可脂及其它甘油酯)或保留灌腸的形式制備以進行直腸投與。根據(jù)具體實施，該等活性化合物系與可保護該化合物對抗體內(nèi)之快速排除的載 體共同制備，諸如，控釋調(diào)配物，包括植入物及微囊化傳遞系統(tǒng)。可使用生物可降解性、 生物可兼容性之聚合物，諸如，乙烯醋酸乙烯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯、及聚乳 酸。此等調(diào)配物之制備方法將為熟習(xí)技藝者明顯可知者。該等材料亦可以商業(yè)而由Alza Corporation及Nova Pharmaceuticals, Inc.取得。亦可使用脂質(zhì)體懸浮液(包括以針對 細胞專一性抗原之單株抗體靶向經(jīng)感染細胞之脂質(zhì)體)作為醫(yī)藥可接受之載體。此等懸浮 液可根據(jù)技藝中已知之方法制備，例如，如美國專利第4，522，811號中所述者，其納入本文 作為參考。較佳系將口服或腸外組合物調(diào)配為劑量單元形式，以便利投與及統(tǒng)一劑量。本文 所用之劑量單元形式系指適于作為該待治療對象之單位劑量的物理不連續(xù)性單元；各個單 元含有經(jīng)計算可產(chǎn)生所欲治療效應(yīng)之預(yù)定量活性化合物，結(jié)合所需之醫(yī)藥載體。此等化合物之毒性及治療功效可由標準之醫(yī)藥流程而在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游?體內(nèi)測定，如，以測定LD50 (使50%之族群致命的劑量)及ED50 (對于50%之族群具治療 有效性的劑量)。毒性與治療效應(yīng)之劑量比例為治療指數(shù)，且此可以比例LD50/ED50表示。 具有高治療指數(shù)之化合物為較佳者。盡管可使用具有毒性副作用之化合物，應(yīng)小心設(shè)計可 使此等化合物靶向受影響位置之位點的傳遞系統(tǒng)，以使對于未經(jīng)感染細胞之潛在傷害減至 最小并因此降低副作用?？墒褂萌∽栽摰燃毎囵B(yǎng)分析及動物實驗之數(shù)據(jù)，調(diào)配用于人類之劑量范圍。此 等化合物之劑量較佳系在可以極少或無之毒性誘發(fā)ED50的循環(huán)濃度范圍中。劑量可根據(jù) 所用之劑形及所用之投與途徑而在此范圍內(nèi)變化。就用于本發(fā)明方法中之任何化合物而 言，最初可在細胞培養(yǎng)分析中估計該治療有效劑量?？稍趧游锬Ｊ街姓{(diào)配一劑量，以達成可 誘發(fā)如在細胞培養(yǎng)中所判定之IC50 (亦即，可達成癥狀之半最大抑制的試驗化合物濃度) 的循環(huán)血漿濃度范圍?？墒褂么说刃畔⒍_測定可用于人體之劑量?？梢裕?，高效 液相層析測量血漿中之含量。如本文所定義，該活性化合物之治療有效量(亦即，有效劑量)可介于自約0.001 至100g/kg體重，或是可由熟習(xí)技藝者在無過度實驗之情形下明顯可知并明了之其它范 圍。熟習(xí)技藝者將可明了，部分因子可影響有效治療對象之所需劑量及時機，其包括，但不 限于，該疾病或病癥之嚴重性、先前之治療、該對象之一般健康情形或年齡、以及存在之其 它疾病。根據(jù)另一態(tài)樣，熟習(xí)技藝者可預(yù)期一或多種部件套組，該等部件套組可實施至少 一種本文所揭示之方法，該部件套組包含二或多種組合物，該等組合物包含單獨或組合之有效量的根據(jù)至少一種上述方法之本發(fā)明試劑。該等套組可能亦包括包含非本發(fā)明化合物之活性劑、生物事件辨識劑、或是可由 熟習(xí)技藝者在閱讀本發(fā)明時可辨識之其它化合物的組合物。名辭「辨識劑」系指一分子、 代謝物、或其它化合物，諸如，抗體、DNA、或RNA寡核苷酸，其可在熟習(xí)技藝者可辨知之流程 下，發(fā)現(xiàn)或判定一生物事件之存在、或事實、或是以其它方式偵測；例示性之辨識劑為抗體， 例示性之流程為西方點漬、亞硝酸鹽分析、及RT-PCR，或是如實施例中所述之其它流程。例 示性之生物事件為細胞因子表現(xiàn)或是其它免疫調(diào)控事件。該套組亦可包含至少一種包含有效量之本發(fā)明化合物的組合物或是一種細胞系。 該等部件套組之該等組合物或該細胞系可根據(jù)熟習(xí)技藝者可辨識之流程而用于進行至少 一種本文所揭示之方法。實施例對于本發(fā)明之更完整理解可借著參照下列之特定實施例及圖式而取得。該等實施 例及圖式僅系為說明目的而敘述，且并不欲限制本發(fā)明之范圍。形式之變化以及相當物之 取代如情況所可建議或是認為合宜而可為預(yù)期。盡管在本文中使用特定之名辭，此等名辭 系欲用以進行敘述而非限制。可在不偏離其精神及范圍之情形下，對前文所述之揭示內(nèi)容 進行修飾及變化，而因此其僅應(yīng)具有附呈之權(quán)利要求所指出之限制。實施例1 :PA萃取物之抗炎活性PA對于17種細胞因子以及5種趨化因子之LPS (脂多醣)-誘發(fā)性表現(xiàn)的效應(yīng)示 于表1。在有或無lmg/ml PA粗萃取物之情形下，使人類臍靜脈內(nèi)皮(HUVEC)細胞與LPS共 同培育。使用Luminex測定細胞因子表現(xiàn)特征。結(jié)果顯示，PA粗萃取物顯著降低細胞因子 IL-6、IL-8、IL-12、MCP-1、及 RANTES 之表現(xiàn)。表1. PA萃取物對于LPS-誘發(fā)性表現(xiàn)之效應(yīng)
控制組LPS茚甲新 (Indomethacin) LPSPA LPSIL-la13. 213. 831. 813. 6IL-lb11. 611. 711. 711. 7IL-21010. 110. 110. 1IL-38. 858. 868. 828. 8IL-411. 711. 911. 811. 6IL-51. 191. 231. 241. 19IL-6280698006230036600
19 實施例2 以PA萃取物抑制AP-1結(jié)合活性由于AP-1活性涉及發(fā)炎信號傳導(dǎo)，茲檢驗PA粗萃取物對于AP-1/DNA結(jié)合活性之 效應(yīng)。如圖1所示，其使用基于ELISA之分析測定PA粗萃取物對于AP-1轉(zhuǎn)錄因子之DNA 結(jié)合活性的效應(yīng)。使用由經(jīng)TPA活化之HeLa或K562細胞所制備的核萃取物作為AP-1蛋 白來源。在與含有AP-1結(jié)合位點之寡核苷酸進行共置后，以復(fù)合HRP之抗-c-Fos抗體偵 測AP-1/DNA復(fù)合物。茲發(fā)現(xiàn)，AP-1在試管內(nèi)之DNA結(jié)合活性會由PA粗萃取物抑制，且該 等效應(yīng)具有劑量相關(guān)性。實施例3 以級份10、CHM9102、及迷迭香酸抑制AP_1結(jié)合活性使用C18管柱，以制備性HPLC，對該PA粗萃取物進行進一步之分級分離。如圖2所示，其將左手香之粗萃取物分離成為16個級份。級份10顯示具有對抗AP-1結(jié)合之抑制 效應(yīng)。以另一 C18管柱，使用含有0. 三氟乙酸之由2%乙腈至90%乙腈的溶劑梯度，進 一步純化此一級份。收集主峰，接著再以MASS及NMR分析對其進行結(jié)構(gòu)測定，如圖3所示。 此等研究產(chǎn)生對于該活性組成份CHM9102之結(jié)構(gòu)推論。亦對迷迭香酸(CHM9102之類似物) 進行AP-1抑制活性之試驗。盡管方法以及試劑已以目前視為最為實際且較佳的具體實施進行敘述，但應(yīng)明了 的是，該揭示內(nèi)容并不須限于所揭示的具體實施。其系欲涵括權(quán)利要求之精神及范圍內(nèi)所 包括之各種不同修飾及類似安排，該權(quán)利要求之范圍應(yīng)符合其最廣釋義，以使其涵括所有 此等修飾及類似結(jié)構(gòu)。本揭示內(nèi)容包括上述權(quán)利要求之任何及所有具體實施。實施例4 :Mena 987之純化根據(jù)具體實施，以含有0. 三氟乙酸之50%乙腈重構(gòu)Frac#8之干燥粉末。該既 已建立之HPLC系統(tǒng)如上所述。在RPC18-HPLC實驗中，在214nm監(jiān)測Frac#8。使用60min 內(nèi)之由90%溶劑A(98%水，2%乙腈，及0. 三氟乙酸)至30%溶劑B(90%乙腈，10%水， 及0.1%三氟乙酸)的線性梯度純化Mena 987。在各次注入之前，以90%溶劑A對該管柱 進行再次平衡20分鐘。在我們的實驗中，峰系以型號CHF122SB之Advantec級份收集器收 集。在具有TR= 13min之峰中發(fā)現(xiàn)Mena 987，其以質(zhì)譜分析辨識為單一化合物。以MASS、 NMR辨識Mena 987之結(jié)構(gòu)。lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生0. 6mg之Mena 987。
NMR (600MHz, D20) 8 7. 69 (d, J = 1. 6Hz，1H)，6. 95-6. 97 (m，2H)，6. 89 (d，J = 2. 0Hz，1H)，6. 82-6. 86(m，2H)，6. 77(dd，J = 8. 2，2. 1Hz，1H)，4. 91 (d，J = 2. 5Hz, 1H)； 4. 66 (dd, J = 2. 5,2. 5Hz, 1H) ； 13C 匪R(150MHz，D20) S 175. 1，175. 1，147. 0，1444，143. 8， 143. 4，140. 1，132. 2，125. 8，125. 3，122. 3，119. 5，118. 2，116. 5，115. 9，115. 0,83. 7,48. 1。實施例5 :Mena 998之純化根據(jù)具體實施，以含有0. 三氟乙酸之50%乙腈重構(gòu)Frac#9之干燥粉末。該既 已建立之HPLC系統(tǒng)如上所述。在RPC18-HPLC實驗中，在214nm監(jiān)測Frac#9。使用60min 內(nèi)之由90%溶劑A(98%水，2%乙腈，及0. 三氟乙酸)至25%溶劑B(90%乙腈，10%水， 及0.1%三氟乙酸)的線性梯度純化Mena 998。在各次注入之前，以90%溶劑A對該管柱 進行再次平衡20分鐘。以型號CHF 122SB之Advantec級份收集器進一步收集峰。在具有 TR = 34. 5min之峰中發(fā)現(xiàn)Mena 998，其以質(zhì)譜分析辨識為單一化合物。以NMR及高分辨質(zhì) 譜(HRMS)辨識Mena 998之結(jié)構(gòu)。lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生0. 9mg之Mena 998。 NMR (600MHz, D20) 8 6. 70-6. 88 (m, 9H), 6. 56 (m, 2H), 6. 12 (d, J = 8.2Hz，lH)， 4. 55(m，2H)，4. 23 (m，2H)，3. 88 (dd, J = 8. 6,8. 6Hz, 1H)，3. 78 (dd, J = 10. 5,6. 4Hz, 1H)， 3. 01 (dd, J = 14. 2,3. 5Hz, 1H)，2. 85 (dd, J = 14. 0,9. 8Hz, 1H)，2. 78 (dd, J = 14. 3,7. 5Hz, 1H),2. 71 (dd, J = 14. 4,4. 6Hz, 1H) ； 13C 匪R(150MHz，D20) S 175. 3，173. 7，173. 1，144. 0， 143. 8，143. 7，143. 6，143. 0，142. 8，142. 7，131. 1, 130. 8，129. 6，129. 1, 122. 0，121. 8， 120. 1,118. 4，117. 1,116. 9,116. 2，116. 0,115. 7,115. 0,76. 2,75. 6,47. 5,46. 1,41. 0， 40. 4,36. 5,36. 0。C36H32016[M+H] + 之 HRMS 計算值721. 1769，實驗值721. 1841。實施例6 :Mena 9102之純化根據(jù)具體實施，以含有0. 三氟乙酸之50%乙腈重構(gòu)FraC#10之干燥粉末。該既 已建立之HPLC系統(tǒng)如上所述。在RPC18-HPLC實驗中，在214nm監(jiān)測Frac#10。使用60min 內(nèi)之由80%溶劑A(98%水，2%乙腈，及0. 三氟乙酸)至25%溶劑B(90%乙腈，10%水， 及0. 三氟乙酸)的線性梯度純化Mena 9102。在各次注入之前，以80%溶劑A對該管柱 進行再次平衡20分鐘。以型號CHF122SB之Advantec級份收集器進一步收集峰。在具有 TR = 24. 5min之峰中發(fā)現(xiàn)Mena 9102，其以質(zhì)譜分析辨識為單一化合物。以NMR及高分辨 質(zhì)譜(HRMS)辨識Mena 9102之結(jié)構(gòu)。lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生0. 8mg之Mena 9102。 NMR(600MHz5D20) 8 7. 50 (s, 1H), 6. 83-6. 90 (m, 4H), 6. 71 (dd, J = 8. 1,1. 9Hz, 1H), 6. 63-6. 68 (m, 3H), 6. 46 (d, J = 1. 9Hz，1H)，6. 29 (ddd，J = 9. 1，9. 1，2. 1Hz，2H)， 5. 06 (dd, J = 9. 5,3. 7Hz, 1H)，4. 99 (dd, J = 10. 3,3. 4Hz, 1H)，4. 39 (d, J = 1. 0Hz, 1H)， 4. 29 (d, J = 1. 0Hz, 1H)，3. 14 (dd, J = 14. 3,3. 8Hz, 1H)，2. 95-3. 00 (m, 2H)，2. 69 (dd, J = 14. 7，10. 6Hz, 1H) ；13C NMR (150MHz, D20) 8 176. 3，173. 2，167. 8，162. 9，H7-9，143-9，143-7， 1434，142. 8，142. 5，142. 5，142. 2，139. 1，132. 2，129. 9，129. 3，125. 1，124. 6，122. 8，121. 7， 120. 6，119. 2，119. 1，117. 3，117. 0，116. 1，116. 0，116. 0，115. 4，115. 0，114,6,76. 1,75. 7， 45. 8,39. 2,36. 7,36. 1。C36H34N016[M+NHj + 之 HRMS 計算值736. 1878，實驗值736. 1933。實施例7 誅迭香酸之純化根據(jù)具體實施，以含有0. 三氟乙酸之50%乙腈重構(gòu)FraC#10之干燥粉末。該既 已建立之HPLC系統(tǒng)如上所述。在RPC18-HPLC實驗中，在214nm監(jiān)測Frac#10。使用60min 內(nèi)之由90%溶劑A(98%水，2%乙腈，及0. 三氟乙酸)至20%溶劑B(90%乙腈，10%水，及0.1%三氟乙酸)的線性梯度純化迷迭香酸。在各次注入之前，以90%溶劑A對該管柱 進行再次平衡20分鐘。以型號CHF122SB之Advantec級份收集器進一步收集峰。在具有 TR = 17. 5min之峰中發(fā)現(xiàn)迷迭香酸，其以質(zhì)譜分析辨識為單一化合物。以MASS、NMR辨識
迷迭香酸之結(jié)構(gòu)lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生8. 9mg之迷迭香酸。 實施例8 化合物7之合成根據(jù)具體實施且如圖10中之流程所示，制備化合物7。在咖啡酸(0.25g， 1. 39mmole)及左旋多巴(levodopa) _C00CH3. HC1 (0. 55g，2. 22mmole)溶于 8. 0ml 無水 DMF 中之溶液中，加入HBTU(0. 63g, 1. 67mmole)及二異丙基乙胺(2. 4ml, 13. 9mmole)，接著再在 室溫下隔夜攪拌該所得之反應(yīng)混合物。在真空下除去DMF，以IN HC1酸化該殘余物，接著以 乙酸乙酯萃取4次。收集有機層，以MgS04(s)去水，再進行濃縮，以產(chǎn)生粗產(chǎn)物。使用乙酸乙 酯及己烷之梯度溶析，以管柱層析取得化合物5(0. 43g，82%產(chǎn)率)。
'H-NMR (600MHz, MeOD) 8 2. 82-2. 87 (m, 1H) , 2. 95-2. 98 (m, 1H) ,3. 65(s，3H)， 4. 64 (dd, J = 6. 12，7. 98Hz, 1H)，6. 36 (d, J = 15. 7Hz, 1H)，6. 47 (dd, J = 1. 92，8. 1Hz, 1H)， 6. 59 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，6. 62 (d, J = 8. 1Hz, 1H)，6. 71 (d, J = 8. 04Hz, 1H)，6. 85 (dd, J = 1. 92，8. 16Hz, 1H)，6. 95 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，7. 32 (d, J = 15. 7Hz, 1H)。
'H-NMR (600MHz, MeOD) 8 1. 45 (t, J = 6. 5Hz, 3H) , 2. 78-2. 82 (m, 1H), 2. 89-2. 92 (m, 1H)，4. 15 (q, J = 6. 5Hz,2H)，4. 68 (dd, J = 6. 12,7. 98Hz, 1H)，6. 25 (d, J = 15. 7Hz, 1H)，6. 41 (dd, J = 1. 92，8. 1Hz, 1H)，6. 55 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，6. 59 (d, J = 8. 1Hz, 1H)，6. 73 (d, J = 8. 04Hz, 1H)，6. 82 (dd, J = 1. 92，8. 16Hz, 1H)，6. 97 (d, J = 1. 92Hz, 1H)， 7. 34(d, J = 15. 7Hz，lH)。化合物 6 以 84%產(chǎn)率制備。
再次參見圖10，在化合物5(0. 993g，2. 66mmole)在30ml 1，4_ 二惡烷之溶液中，加 入15ml之IN NaOH(aq)。在室溫下攪拌該所得之溶液，并以TLC盤監(jiān)測。加入6N HCl(aq)以 酸化該溶液(PH 2)，并在室溫下攪拌lhr。在減壓條件下除去1，4- 二惡烷，再以乙酸乙 酯萃取水層4次。以MgS04(s)對該結(jié)合之有基層進行去水，再進行濃縮以產(chǎn)生粗產(chǎn)物。在使 用乙酸乙酯/己烷接續(xù)乙酸乙酯/甲醇之梯度溶析以管柱層析純化后取得化合物7(20% 產(chǎn)率)；1H-NMR (600MHz，MeOD) 8 2. 82-2. 85 (m, 1H)，3. 00-3. 04 (m, 1H), 4. 63(dd, J = 5. 28， 8. 16Hz, 1H)，6. 35(d, J = 15. 6Hz, 1H)，6. 50 (dd, J = 1. 98，8. 1Hz, 1H)，6. 60 (s, 1H)，6. 62 (t, J = 2. 04Hz, 1H) ,6. 69 (d, J = 8. 16Hz, 1H) ,6. 84 (dd, J = 1. 98，8. 22Hz, 1H) ,6. 93 (d, J = 1. 98Hz, 1H)，7. 30 (d, J = 15. 7Hz, 1H)。實施例9 化合物8及9之合成根據(jù)具體實施，化合物8及9之合成系與化合物5相同，除其系使用鹽酸多巴胺 (針對化合物8)及1-胺基-2-(3，4-二羥基苯基)乙基膦酸二乙酯(針對化合物9)進行 酰胺鍵形成反應(yīng)。C17H18N05[M+H] +之 HRMS 計算值316. 3285，實驗值316. 3288?；衔?8 系以 86%
產(chǎn)率合成。 C21H27N08P[M+H] +之 HRMS 計算值452. 4147，實驗值452. 4143。化合物 9 系以 65%
產(chǎn)率合成。實施例10 化合物11及12之合成根據(jù)圖11中所示流程的具體實施，由迷迭香酸合成化合物11及12。在亞硝酸鈉 (544mg, 7. 9mmole)于50ml醋酸緩沖液(0. 2M Ac0H/0. 2MAc0Na)中之溶液中，加入迷迭香酸
(360mg, 1. Ommole)。在5min(12)或lOmin(ll)后，加入飽和之氯化鈉對該溶液進行淬滅， 再以乙酸乙酯萃取5次。以NaS04(s)對該結(jié)合之有基層進行去水，再在真空下濃縮。使用乙酸乙酯/己烷接續(xù)乙酸乙酯/甲醇之梯度溶析，以管柱層析純化該 粗產(chǎn)物，產(chǎn)生化合物12(325mg，80 %產(chǎn)率)及化合物11 ； (12)屮-匪R(500MHz，MeOD) 8 3. 15-3. 22 (m, 1H), 3. 47-3. 53 (m, 1H), 5. 17 (dd, J = 5. 75，11. 05Hz，1H)，6. 04 (d，J = 19. 89Hz，1H)，6. 60-6. 65(m，2H)，6. 79(dd，J = 2. 36，10. 25Hz，1H)，6. 88—6. 90 (m，1H)， 7. 35 (d, J = 10. 80Hz, 1H), 7. 08 (s, 1H) ； (11) iH-WRGOOMHz，MeOD) 8 3. 31-3. 36 (m, 1H), 3. 64-3. 69 (m, 1H)，5. 37 (dd, J = 5. 94，10. 9Hz, 1H)，6. 26 (d, J = 19. 7Hz, 1H)，6. 81 (s, 1H)， 7. 05 (s, 1H)，7. 54(s，2H)，8. 12 (d, J = 19. 7Hz, 1H)。實施例11 化合物13之合成 根據(jù)圖12中所示流程的具體實施，制備化合物13。在迷迭香酸(0. 5g，l. 39mmole) 及左旋多巴_C00CH3. HC1 (0. 55g，2. 22mmole)溶于8. 0ml無水DMF中之溶液中，加入 HBTU(0. 63g, 1. 67mmole)及二異丙基乙胺(2. 4ml，13. 9mmole)，接著再在室溫下隔夜攪拌 該所得之反應(yīng)混合物。在真空下除去DMF，以IN HC1酸化該殘余物，接著以乙酸乙酯萃取4 次。收集有機層，以MgS04(s)去水，再進行濃縮，以產(chǎn)生粗產(chǎn)物。使用乙酸乙酯及己烷之梯度溶析，以管柱層析取得化合物13(0.26g，34%產(chǎn)率)； 'H-NMR (600MHz, MeOD) 8 2. 74-2. 90 (m, 4H), 3. 64 (s, 3H), 4. 54 (dd, J = 6. 0，7. 8Hz，1H)，
5.16 (dd, J = 4. 98，7. 8Hz，lH)，6. 21(d，J = 15. 8Hz，1H)，6. 35 (dd，J = 1.92，8.04Hz， 1H)，6. 47 (dd, J = 1. 92，8. 1Hz, 1H)，6. 52 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，6. 56 (d, J = 7. 98Hz, 1H)，
6.61-6. 63(m，2H)，6. 73 (d, J = 8. 16Hz, 1H)，6. 91 (dd, J = 1. 92，8. 22Hz, 1H)，7. 00 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，7. 49 (d, J = 15. 8Hz, 1H)。實施例11 化合物14之合成 根據(jù)圖12中所示流程的具體實施，制備化合物13。該流程揭示于實施例11。化 合物14以38%產(chǎn)率制備。'H-NMR (600MHz, MeOD) 8 1. 56(t, J = 6. 6Hz，3H)，2. 76—2. 88 (m，4H)，4. 23 (q，
(13)
(14)J = 6. 6Hz，2H)，4. 46 (dd, J = 6. 0,7. 8Hz, 1H)，5. 02 (dd, J = 4. 98，7. 8Hz, 1H)，6. 33 (d, J =15. 8Hz, 1H)，6. 38 (dd, J = 1. 92，8. 04Hz, 1H)，6. 50 (dd, J = 1. 92，8. 1Hz, 1H)，6. 56 (d, J = 1.92Hz，lH)，6. 61(d，J = 7. 98Hz，1H)，6. 67-6. 69 (m，2H)，6. 74 (d，J = 8. 16Hz，lH)， 6. 87 (dd, J = 1. 92，8. 22Hz, 1H)，7. 02 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，7. 54 (d, J = 15. 8Hz, 1H)。實施例12 化合物15及15'之合成根據(jù)圖13中所示流程的具體實施合成化合物15，以和針對化合物13所述之相 同流程處理迷迭香酸，除其使用L-天冬胺酸二乙酯.HC1，以產(chǎn)生化合物15' (27%產(chǎn) 率)；1H-NMR (600MHz，MeOD) 8 1. 16-1. 21 (m, 6H), 2. 67-2. 77 (m, 2H), 2. 91-2. 99 (m, 2H),
4.04 (dd, J = 7. 08，14. 04Hz，2H)，4. 12 (dd, J = 7. 14，14. 28Hz，2H)，4. 70 (t, J = 6. 06Hz, 1H)，5. 21(dd，J = 5. 52，7. 56Hz, 1H)，6. 23(d, J = 15. 9Hz, 1H)，6. 52(dd, J = 1. 92，8. 04Hz, 1H)，6. 62 (d, J = 8. 04Hz, 1H)，6. 65 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，6. 73 (d, J = 8. 16Hz, 1H)，6. 91 (dd, J = 1. 98，8. 16Hz, 1H)，6. 99 (d, J = 1. 92Hz, 1H)，7. 52 (d, J = 15. 9Hz, 1H)。將化合物15' (100mg，0. 19mmole)溶于4. 0ml的乙腈與水之共溶劑(1 1)中。 在0°C下，將LiOH(46mg，1. 9mmole)加入該溶液中，接著在0°C下攪拌該全部溶液并以TLC 盤監(jiān)測。以6N HCl(aq)將該溶液酸化至pH = 2，并在0°C下攪拌30min。以乙酸乙酯萃取水層 4次并收集有機層，以MgS04(s)去水，再進行濃縮，以產(chǎn)生粗產(chǎn)物。使用乙酸乙酯/己烷接續(xù) 乙酸乙酯/甲醇之梯度溶析，在硅膠上純化該粗產(chǎn)物，以產(chǎn)生化合物15(40mg，44%產(chǎn)率)； iH-WR(600MHz，MeOD) 8 2. 73 (d, J = 5. 7Hz，2H)，2. 91-3. 01(m，2H)，4. 65 (t, J = 5. 58Hz, 1H)，5. 24 (dd, J = 4. 8,8. 22Hz, 1H)，6. 22 (d, J = 15. 9Hz, 1H)，6. 52 (dd, J = 1. 68，7_98Hz， 1H)，6. 61 (d, J = 8. 1Hz, 1H)，6. 65 (d, J = 1. 68Hz, 1H)，6. 72 (d, J = 8. 16Hz, 1H)，6. 90 (dd, J = 1. 8,8. 16Hz, 1H)，6. 99 (d, J = 1. 8Hz, 1H)，7. 50 (d, J = 15. 84Hz, 1H)。實施例13 化合物16之合成根據(jù)圖14中所示流程的具體實施，以和針對化合物13所述之相同流程處理 左旋多巴_C00CH3.HC1，除其使用化合物12，以產(chǎn)生化合物16 ；1H-NMR(500MHz, MeOD) 8 2. 73-2. 83 (m, 4H)，3. 60 (s, 3H)，447-4. 49 (m, 1H)，5. 26 (dd, J = 4. 69，8. 53Hz，1H)， 6. 09 (d, J = 15. 8Hz, 1H) ,6. 32 (dd, J = 2. 06，8. 03Hz，1H)，6. 47 (d，J = 2. 02Hz，1H)， 6. 50(d, J = 8. 0Hz, 1H)，6. 63 (s, 1H)，6. 68(d, J = 8. 15Hz, 1H)，6. 86(dd, J = 2. 02，8. 23Hz, 1H) ,6. 95 (d, J = 2. 01Hz, 1H)，7. 00-7. 04 (m, 1H)，7. 13-7. 16 (m, 1H)。實施例14 化合物21之合成再次參見圖14中所示本發(fā)明的具體實施，以和針對化合物15所述之相同流 程處理化合物16，以產(chǎn)生化合物21。根據(jù)具體實施，化合物21系以52%產(chǎn)率回收。 C27H23N2013 [M-H]-之 HRMS 計算值583. 4771，實驗值583. 4768。實施例15 化合物17之合成根據(jù)具體實施且如圖15中之流程所示合成化合物17，以和針對化合物13所述 之相同流程處理迷迭香酸，除其使用L-色胺酸甲酯.HC1，以產(chǎn)生化合物17(43%產(chǎn)率)； ^-WR (500MHz，MeOD) 8 2. 82-2. 89 (m, 2H), 3. 12-3. 24 (m，2H)，3. 61 (s，3H)，4. 73 (dd，J =
5.92，7. 18Hz, 1H)，5. 24(dd, J = 5. 39，7. 37Hz, 1H)，6. 14 (d, J = 15. 9Hz, 1H)，6. 46(dd, J = 1. 88，8. 06Hz, 1H)，6. 63(d, J = 8. 04Hz, 1H)，6. 66(d, J = 1. 86Hz, 1H)，6. 76(d, J = 8. 18Hz, 1H)，6. 88-6. 96(m，3H)，7. 01(dd，J = 6. 62，8. 15Hz，2H)，7. 25 (d, J = 8. 09Hz，lH)，7. 43 (d,J = 7. 88Hz, 1H)，7. 47 (d, J = 15. 9Hz, 1H)。實施例16 化合物18之合成根據(jù)具體實施且如圖15中之流程所示，以和針對化合物15所述之相同流程 處理化合物 17，以產(chǎn)生化合物 18(45% 產(chǎn)率)；1H-NMR(600MHz，MeOD) 8 2. 75-2. 83 (m, 2H), 3. 09-3. 25 (m，2H)，4. 48 (s, 1H)，5. 14 (s，1H)，5. 96 (d, J = 15. 84Hz，1H)，6. 36 (d, J = 7. 98Hz, 1H) ,6. 50 (d, J = 8. 04Hz, 1 H)，6. 53 (s，1H)，6. 66 (d，J = 7.92Hz，lH)，
6.78-6. 88(m，5H)，7. 06(d，J = 7. 98Hz，1H)，7. 29 (d，J = 15. 96Hz，1H)，7. 40 (d，J =
7.86Hz, 1H)。實施例17 化合物19之合成根據(jù)具體實施且如圖16中之流程所示，以和針對化合物13所述之相同流程處理 左旋多巴-C00CH3. HC1，除其使用化合物7，以產(chǎn)生化合物19 (70%產(chǎn)率)；1H_NMR(600MHz， MeOD) 8 2. 73-2. 94 (m, 4H), 3. 6 (s, 3H), 4. 52 (t, J = 6. 7Hz, 1H) ,4. 59 (dd, J = 6. 5Hz, 1H)，6. 33 (d, J = 15. 7Hz, 1H)，6. 35 (d, J = 2. 04Hz, 1H)，6. 39-6. 42 (m, 1H)，6. 49 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，6. 51 (dd, J = 1. 98，13. 62Hz, 1H)，6. 56-6. 62(m，4H)，6. 70 (d, J = 8. 16Hz, 1H)， 6. 84-6. 89 (m, 1H)，6. 95 (d, J = 1. 98Hz, 1H)，7. 31 (d，J = 15. 7Hz, 1H)。實施例18 化合物20之合成根據(jù)具體實施且如圖16中之流程所示，以和針對化合物7所述之相同流程 處理化合物 19，以產(chǎn)生化合物 20 (44% 產(chǎn)率)；1H-NMR(600MHz，MeOD) 8 2. 62-2. 71 (m, 1H), 2. 76-2. 91 (m, 2H), 2. 95-2. 99 (m, 1H), 4. 51 (dd, J = 5. 76，12. 6Hz，1H)，4. 61 (m，1H)， 6. 31 (d, J = 15. 7Hz, 1H) ,6. 37 (d, J = 8. 04Hz, 1H) ,6. 45 (dd, J = 1. 86，8. 04Hz，1H)， 6. 50 (dd, J = 1. 8，8. 04Hz，1H)，6. 57-6. 63(m，4H)，6. 70(J = 8. 16Hz，1H)，6. 85 (dd，J = 1. 86，8. 28Hz, 1H)，6. 94 (d, J = 1. 8Hz, 1H)，7. 29 (d, J = 15. 7Hz, 1H)。實施例19 材料及方法一由左手香分離及純化Mena 987/998/9102及迷迭香酸材料以雙去離子H20徹底清洗左手香之葉(批次#9)，再短暫風(fēng)干，以在進行勻漿化前 除去水殘余物。以型號Beckman之離心機，在4°C下，以10，OOOxg離心該粗制葉汁30分鐘。 使該回收自粗制葉汁之澄清上清液通過No. 1濾紙(125mm, Advantec, lot no. 60821017) 進一步過濾，以除去不純物以及葉之碎片。接著凍干該濾液，并將該干燥粉末貯存在室溫之 下，直到進行RPC18-HPLC分級分離。根據(jù)我們的估計，476. 3g之左手香葉可產(chǎn)生440ml之 葉汁(7. 4g之干燥粉末)。左手香之粗制樣本制備將左手香之干燥粉末(lg)溶于可能為含0. 三氟乙酸之25%乙腈/水混合物 中。在各次注入之前，以桌上型離心機，在室溫下，以14，000x rpm對樣本進行離心lmin。RPC18-HPLC 純化HPLC純化系在配備4-管道可編程性泵及型號G 13658之UV/VIS偵測器的 Angilent Technologies 1200系統(tǒng)上進行。在RPC18-HPLC實驗中，所有樣本皆在214nm監(jiān) 測。在 Discovery BIO Wide Pore C18 反相管柱(5 ii m，25cmxl0mm，Supelco)上，以 2. 5ml/ min之流速，并以100 ill之注射量，初步分離此等樣本。使用60min內(nèi)之由溶劑A(98% 水，2%乙腈，及0. 三氟乙酸)至溶劑B(90%乙腈，10%水，及0. 三氟乙酸)的線性梯度進行分離。在各次注入之前，以100%溶劑A對該管柱進行再次平衡20分鐘。將以 RPC18-HPLC純化之產(chǎn)物凍干以除去移動相，接著在進行進一步之分離之前貯存在室溫下。根 據(jù)溶析特征，由型號CHF 122SB之Advantec級份收集器收集到3個級份。Frac#8系自19. 5 至 21. 5min 收集，F(xiàn)rac#9 系自 21. 5 至 23. 5min 收集，而 Frac#10 系自 23. 5 至 25. 5min 收 集。一般而言，lg之左手香干燥粉末可產(chǎn)生4. 8mg Frac#8、14mg Frac#9、及12. 7mgFrac#10。
盡管該等組合物及方法已以目前視為最為實際且較佳的具體實施進行敘述，咸須 明了，該揭示內(nèi)容并不須限于所揭示的具體實施。其系欲涵括權(quán)利要求之精神及范圍內(nèi)所 包括之各種不同修飾及類似安排，該權(quán)利要求之范圍應(yīng)符合其最廣釋義，以使其涵括所有 此等修飾及類似結(jié)構(gòu)。本揭示內(nèi)容包括上述權(quán)利要求之任何及所有具體實施。
權(quán)利要求
一種組合物，其包含左手香((Plectranthus amboinicus)萃取物以及醫(yī)藥可接受之載體；其中該組合物系制備而供投與至具有發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之病患。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中該左手香萃取物包含下式化合物之組合物 其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基、0CH20、CH3、F、CI、Br、I、NHY、 N02、C00Z、以及 ZCO ；其中 A 是選自由 H、C00R、C0NRR'、S03H、S02NRR'、及 P0(0R)(0R')所組成之群; 其中R及R'是獨立選自由H、C1-C6烷基、及芳基所組成之群； 其中X是選自由CH2、0、及NH所組成之群； 其中Y是選自由H及0C0CH3所組成之群；且 其中Z是選自由H或烷基所組成之群。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中該式之官能基是選自由下列者所組成之群Ar1 是 3，4-二羥基苯基，X 是 NH，A 是選自由 COOMe、COOEt、C00H、H、及 P0 (OEt) 2 所組 成之群，且Ar2是3，4- 二羥基苯基；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，A是COOEt，且Ar2是3，4- 二羥基苯基； Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，A是C00H，且Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基苯基；及 Ar1是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，X是0，A是C00H，且Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基 苯基。
4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中該左手香萃取物包含下式化合物之組合物 其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基、0CH20、CH3、F、CI、Br、I、NHY、 N02、C00Z、以及 ZCO ；其中R1是選自H、C1-C6烷基、及芳基； 其中R2是選自C00H、COOEt、芳基、及羥基-芳基； 其中X是選自由CH2、0、及NH所組成之群； 其中Y是選自由H及0C0CH3所組成之群；且 其中Z是選自由H或烷基所組成之群。
5.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中該式之官能基是選自由下列者所組成之群 Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me、Et，且R2是3，4- 二羥基苯基；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是H，且R2系C00H ；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，R1系Me，且R2是 3，4-羥基苯基;Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me及H，且R2是3-1H-吲哚；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是NH，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me及H，且R2是3，4-二羥基苯基；及Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是NH，Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，R1是H，且R2是 3，4-二羥基苯基。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中該發(fā)炎相關(guān)性病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
7.一種方法，其包含提供至少含有左手香萃取物以及醫(yī)藥可接受之載體的組合物，用于以治療有效量投予 至有需要的病患；其中該組合物系制備而供投予至具有發(fā)炎或發(fā)炎相關(guān)性病癥之病患。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中該左手香萃取物包含下式化合物之組合物 其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基、0CH20、CH3、F、CI、Br、I、NHY、 N02、C00Z、以及 ZCO ；其中 A 是選自由 H、C00R、C0NRR'、S03H、S02NRR'、及 P0(0R)(0R')所組成之群; 其中R及R'是獨立選自由H、C1-C6烷基、及芳基所組成之群； 其中X是選自由CH2、0、及NH所組成之群； 其中Y是選自由H及0C0CH3所組成之群；且 其中Z是選自由H或烷基所組成之群。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中該式之官能基是選自由下列者所組成之群Ar1 是 3，4-二羥基苯基，X 是 NH，A 是選自由 COOMe、COOEt、C00H、H、及 P0 (OEt) 2 所組 成之群，且Ar2是3，4- 二羥基苯基；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，A是COOEt，且Ar2是3，4- 二羥基苯基； Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，A是C00H，且Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基苯基；及 Ar1是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，X是0，A是C00H，且Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基 苯基。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中該左手香萃取物包含下式化合物之組合物 其中Ar1及Ar2是獨立選自苯基、單、雙及多取代之苯基、0CH20、CH3、F、CI、Br、I、NHY、N02、C00Z、以及 ZC0 ；其中R1是選自H、C1-C6烷基、及芳基； 其中R2是選自C00H、COOEt、芳基、及羥基-芳基； 其中X是選自由CH2、0、及NH所組成之群； 其中Y是選自由H及0C0CH3所組成之群；且 其中Z是選自由H或烷基所組成之群。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中該式之官能基是選自由下列者所組成之群Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me、Et，且R2是3，4- 二羥基苯基；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是H，且R2系C00H ； Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，R1系Me，且R2是 3，4-二羥基苯基；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是0，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me及H，且R2是3-1H-吲哚；Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是NH，Ar2是3，4- 二羥基苯基，R1是選自Me及H，且R2是3，4-二羥基苯基；及Ar1是3，4- 二羥基苯基，X是NH，Ar2是3，4- 二羥基-6-硝基-苯基，R1是H，且R2是 3，4-二羥基苯基。
12.如權(quán)利要求7所述的方法，其中該發(fā)炎相關(guān)性病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
13.一種方法，其包含制備重組Fos-Jim復(fù)合物；其中該Fos-Jim復(fù)合物是由具有Fos基因及Jim基因以及與該Fos基因相關(guān)之第一標 記基因及與該His基因相關(guān)之第二標記基因的載體制備； 其中該第一標記基因與該第二標記基因不同；以一標記對該載體之基因產(chǎn)物進行第一篩選而篩選Fos-Jim復(fù)合物，以產(chǎn)生經(jīng)部份篩 選之基因產(chǎn)物組；以及以另一標記篩選該經(jīng)部份篩選之基因產(chǎn)物組，以分離該Fos-Jim復(fù)合物。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中該第一基因標記及該第二基因標記是選自由組胺 酸標記及鏈霉親和素標記所組成之群。
全文摘要
左手香(Plectranthus amboinicus(PA))之粗萃取物具有抗發(fā)炎之效應(yīng)，且可在試管內(nèi)抑制AP-1之結(jié)合。與PA粗萃取物之共置可在HUVEC細胞中顯著抑制IL-6、IL-12、MCP-1、及RANTES之LPS-誘發(fā)性表現(xiàn)。在使用制備性HPLC對該粗萃取物進一步進行分級分離后，辨識出級份8、9、10、及11可抑制AP-1結(jié)合活性。級份8之活性組成份為Mena 987；級份9為Mena 998；級份10為Mena 9102；而級份11為迷迭香酸及合成之迷迭香酸類似物。其它化合物亦顯示具有抑制活性。此等化合物對于AP-1活性具有抑制效應(yīng)，且可作為預(yù)防劑或療劑而用于其中涉及AP-1之過量表現(xiàn)或活性的疾病。
文檔編號A61K36/18GK101854944SQ200880115580
公開日2010年10月6日 申請日期2008年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月17日
發(fā)明者余惠敏, 吳宗益, 方俊民, 翁啟惠, 鄭義循, 鄭婷仁 申請人:梁啟銘