專(zhuān)利名稱(chēng)：：硼酸化合物的脂質(zhì)體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供包含硼酸化合物特別是肽硼酸化合物的脂質(zhì)體組合物。更具體而言，本發(fā)明提供包含肽硼酸化合物和如下面定義的式I和/或式II化合物的脂質(zhì)體組合物。
背景技術(shù)：
：脂質(zhì)體(或脂質(zhì)雙層小泡)是由可包封水相的同心有序脂質(zhì)雙層構(gòu)成的圓形小泡。脂質(zhì)體可作為包含于水相或脂質(zhì)雙層中的治療和診斷劑的遞送載體。以脂質(zhì)體包封形式遞送藥物可提供許多優(yōu)勢(shì)，視藥物而定，包括例如降低藥物毒性、改變藥代動(dòng)力學(xué)或提高藥物溶解度。脂質(zhì)體在被配制成包括親水聚合物鏈的表面包衣，即所謂的STEALTH⑧或長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體時(shí)，可提供另一優(yōu)勢(shì)即長(zhǎng)的血液循環(huán)壽命，這部分歸因于單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)脂質(zhì)體的清除減少。通常，延長(zhǎng)的壽命是必要的，以使脂質(zhì)體從注射部位到達(dá)它們的理想靶區(qū)域或細(xì)胞。理想的是，可制備這類(lèi)脂質(zhì)體以包括被包封的治療或診斷化合物，其(i)具有高的載藥效率，(ii)被包封化合物的濃度高，和(iii)處于穩(wěn)定的形式，即在儲(chǔ)存期間幾乎沒(méi)有化合物滲漏。一類(lèi)尤其令人感興趣的治療化合物為肽硼酸化合物，其為在肽序列的酸性末端或C-端含有a-氨基硼酸的肽蛋白酶體抑制劑化合物。一種該類(lèi)肽硼酸化合物為硼替佐米，以前稱(chēng)作PS-341(VELCADE,MillenniumPharmaceuticals,Inc，Cambridge,MA)。硼替佐米為二肽硼酸衍生物并被合成為&為0.6nmol/L的高選擇性、強(qiáng)效、可逆蛋白酶體抑制劑(Ad塞，Semin.0nco1.28(6):613-619(2001))。使用國(guó)家癌癥中心(NationalCancerInstitute)的體外篩選，硼替佐米顯示出對(duì)一系列腫瘤系的細(xì)胞毒性(Adams，同上)并對(duì)人前列腺癌異種移植物模型(Frankel等人，Clin.CancerRes.6(9):3719-3728(2000);DiPaola等人，Hematol.Oncol.Clin.NorthAm.15(3):509-524(2001))和肺癌異種移植物模型(0yaizu等人，0ncol.R印.8(4):825-829(2001))具有抗腫瘤活性。由具有包封于脂質(zhì)體中的肽硼酸蛋白酶體抑制劑化合物的脂質(zhì)體構(gòu)成的脂質(zhì)體組合物在國(guó)際申請(qǐng)案WO2006/052734中有所描述，該申請(qǐng)案于2006年5月18日在專(zhuān)利合作條約(PatentCooperationTreaty)下出版。肽硼酸化合物以硼酸酯的形式包封于脂質(zhì)體中，該硼酸酯是在與脂質(zhì)體包封的多元醇反應(yīng)后形成的。在一個(gè)實(shí)施例中，脂質(zhì)體包封的多元醇為含有醇羥基基團(tuán)的單體或多聚體化合物，其中所述多元醇可為脂族化合物、環(huán)狀化合物二醇、多酚等。在另一個(gè)實(shí)施例中，單體多元醇包括糖類(lèi)、甘油、二醇類(lèi)、碳水化合物、氨基糖類(lèi)(尤其是氨基_山梨醇)、糖_醇類(lèi)、脫氧山梨醇、葡糖酸、酒石酸、沒(méi)食子酸等。期望將該肽硼酸化合物包封于脂質(zhì)體載體中。然而，如何有效裝載這些相對(duì)非極性的二肽并使它們以穩(wěn)定的被包封形式滯留在脂質(zhì)體存在困難。更具體而言，本主題涉及用可改善肽硼酸化合物在脂質(zhì)體內(nèi)的裝載和滯留的組分制備的脂質(zhì)體。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)在于提供包含穩(wěn)定包封于脂質(zhì)體中的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體組合物。另一目標(biāo)為提供具有以肽硼酸酯的穩(wěn)定形式包封于脂質(zhì)體中的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體混懸液。在一個(gè)實(shí)施例中，提供一種脂質(zhì)體組合物，其包含穩(wěn)定包封于脂質(zhì)體中的肽硼酸化合物，其中所述肽硼酸化合物為二肽基硼酸化合物。一種示例性的二肽基硼酸化合物為硼替佐米。在一方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含由小泡形成脂質(zhì)形成的脂質(zhì)體和包封于所述脂質(zhì)體中的硼酸酯化合物，該硼酸酯化合物由肽硼酸化合物和式I化合物及其任何對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體構(gòu)成。式I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>R=(H，A)R2=(H，A)R3=(H，A)R4=(H，A)R5=(H，A)R6=(H，A)R7=(H，A)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>X=(R20(n=1，2，3，4)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中X、Y、A、B、E、RpR2、R3、R4、Rs、R6和R7如上文所述，然而前提條件是Y、&、R2、Rs、R4和R5不各自為H。在另一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為H的化合物。一種示例性化合物中Y為H并且&為H。另一示例性化合物中Y為H并且R2為H。另一示例性化合物中Y為H并且R3為H。另一示例性化合物中Y為H并且R4為H。另一示例性化合物中Y為H并且R5為H。另一示例性化合物中Y為H并且R3為A。特別是，化合物中Y、&、R2、R4、R5為H且R3為A。在另一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為B的化合物。一種示例性化合物中Y為B并且&為H。另一示例性化合物中Y為B并且R2為H。另一示例性化合物中Y為B并且R3為H。另一示例性化合物中Y為B并且R4為H。另一示例性化合物中Y為B并且R5為H。特別是，Y為B并且1、R2、R3、R4且R5為H。另一示例性化合物中Y為B并且R3為A。特別是，化合物中Y為B并且R2、R4、R5為H且R3為A。在另一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為E的化合物。一種示例性化合物中Y為E并且&為H。另一示例性化合物中Y是E并且R2為H。另一示例性化合物中Y是E并且R3為H。另一示例性化合物中Y是E并且R4為H。另一示例性化合物中Y是E并且R5為H。另一示例性化合物中Y是E并且Re為H。另一示例性化合物中Y是E并且I^為H。特別是，化合物中Y是E且HmRe且R7為H。另一示例性化合物中Y是E且R3為A。特別是，化合物中Y是E并且R2、R4、R5、R6、R7為H且R3為A。在一方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含由小泡形成脂質(zhì)形成的脂質(zhì)體和包封于所述脂質(zhì)體中的硼酸酯化合物，該硼酸酯化合物由肽硼酸化合物和為共軛樹(shù)枝狀聚合物的式II化合物構(gòu)成。式II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>n=3-30<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中D、X、A、R2、R3、R4和R5是如上文所述。在一個(gè)實(shí)施例中，式II化合物為其中樹(shù)枝狀聚合物為^或G2樹(shù)枝狀聚合物的化合物。一種示例性化合物中樹(shù)枝狀聚合物為Gp另一示例性化合物中樹(shù)枝狀聚合物為G2。在另一個(gè)實(shí)施例中，式II化合物為其中n為3至30之間整數(shù)的化合物。一種示例性化合物中&為H。另一示例性化合物中R2為H。另一示例性化合物中&為H。另一示例性化合物中R4為H。另一示例性化合物中R5為H。特別是，化合中R2、R3、R4和R5為H。特別是，該化合物為共軛62樹(shù)枝狀聚合物。在一個(gè)實(shí)施例中，^樹(shù)枝狀聚合物每分子具有16個(gè)氨基基團(tuán)。在另一個(gè)實(shí)施例中，脂質(zhì)體還包括內(nèi)部較高/外部較低的離子梯度。該離子梯度可為例如氫離子(PH)梯度。當(dāng)離子梯度為pH梯度時(shí)，脂質(zhì)體的內(nèi)部pH可為約7.5-8.5，并且脂質(zhì)體外部環(huán)境的PH可為約6-7。在另一個(gè)實(shí)施例中，脂質(zhì)體還包括約1-20摩爾百分比的用親水聚合物衍生的疏水部分。在脂質(zhì)體包括與親水聚合物共價(jià)連接的疏水部分的實(shí)施例中，優(yōu)選的聚合物為聚乙二醇。優(yōu)選的疏水部分為脂質(zhì)，并且優(yōu)選為小泡形成脂質(zhì)。在另一方面，本發(fā)明提供遞送肽硼酸化合物的方法，其包括制備脂質(zhì)體在水溶液中的混懸液，所述脂質(zhì)體具有被包封的與式I或II化合物共價(jià)結(jié)合以形成肽基硼酸酯化合物的肽硼酸化合物，并將該脂質(zhì)體混懸液施用給受試者。在一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)注射施用脂質(zhì)體。在另一方面，本發(fā)明提供在接受放射治療的荷瘤受試者中選擇性破壞腫瘤組織的方法，該方法包括給荷瘤受試者施用脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體具有被包封的與式I或II化合物共價(jià)結(jié)合以形成肽基硼酸酯化合物的肽硼酸和硼同位素；并讓所述受試者接受中子放射療法。在一個(gè)實(shí)施例中，硼同位素是在肽硼酸中，例如1QB。除了上述的示例性方面和實(shí)施例，通過(guò)參照附圖和下文描述的試驗(yàn)，本發(fā)明其他方面和實(shí)施例將變得顯而易見(jiàn)。圖1A-1C示出了示例性的硼酸化合物的結(jié)構(gòu)。圖2示出了在內(nèi)部較高/外部較低的pH梯度下裝載硼酸化合物至脂質(zhì)體中以在脂質(zhì)體內(nèi)形成硼酸酯化合物。具體實(shí)施方式I.定義"肽硼酸化合物"意指下式化合物其中R1、R2和R3為彼此相同或不同的獨(dú)立選擇部分，并且n為1_8，優(yōu)選1_4。"親水聚合物"意指在室溫下在水中具有一定量溶解度的聚合物。示例性的親水聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基甲基醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸羥丙基酯、聚丙烯酸羥乙基酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬酰胺和親水性肽序列。這些聚合物可作為均聚物或作為嵌段共聚物或無(wú)規(guī)共聚物使用。優(yōu)選的親水聚合物鏈為聚乙二醇(PEG)，優(yōu)選分子量為500-10，000道爾頓的PEG鏈，更優(yōu)選為750-10，000道爾頓，還更優(yōu)選為750-5，000道爾頓。"內(nèi)部較高/外部較低的pH梯度"指脂質(zhì)體內(nèi)部(較高pH)和脂質(zhì)體懸浮于其中的外部介質(zhì)(較低PH)之間的跨膜pH梯度。通常，脂質(zhì)體內(nèi)部pH至少比外部介質(zhì)pH大l個(gè)PH單位，并優(yōu)選大2-4個(gè)單位。"脂質(zhì)體包封的"意指隱蔽在脂質(zhì)體中心的水性隔室中、脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層之間的水性空間，或雙層本身內(nèi)的化合物。II.脂質(zhì)體制劑在一個(gè)方面，本發(fā)明提供具有被包封的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體組合物。在這部分，將描述脂質(zhì)體組合物和制備方法。A.月旨制糊,分如上文所述，脂質(zhì)體制劑由包含被包封的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體構(gòu)成。肽硼酸化合物是在肽序列的酸性末端或C末端包含a-氨基硼酸的肽。一般而言，肽硼酸化合物的形式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中&、1^和R3為彼此相同或不同的獨(dú)立選擇部分，并且n為l-8，優(yōu)選1_4。還可以考慮具有以硼酸作為側(cè)鏈的天冬氨酸殘基或谷氨酸殘基的化合物。優(yōu)選的是，1^、12和13獨(dú)立地選自氫、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷基、芳烷氧基、環(huán)烷基或雜環(huán)；或1^、12和13中任意一者可與肽骨架中的相鄰氮原子形成雜環(huán)。烷基包括烷氧基、芳烷基和芳烷氧基中的烷基組分，優(yōu)選為1至IO個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至6個(gè)碳原子，并且可為直鏈或支鏈。芳基包括芳氧基、芳烷基和芳烷氧基中的芳基組分，優(yōu)選為單核或雙核(即兩個(gè)稠環(huán))，更優(yōu)選為單核，例如芐基、苯甲氧基或苯基。芳基還包括雜芳基，即在環(huán)中具有一個(gè)或多個(gè)氮、氧或硫原子的芳香環(huán)，例如呋喃基、吡咯、吡啶、吡嗪或吲哚。環(huán)烷基優(yōu)選為3-6個(gè)碳原子。雜環(huán)指在環(huán)中具有一個(gè)或多個(gè)氮、氧或硫原子的非芳香環(huán)，優(yōu)選具有3-6個(gè)碳原子的5元至7元環(huán)。這類(lèi)雜環(huán)包括(例如)吡咯烷、哌啶、哌嗪和嗎啉。環(huán)烷基或雜環(huán)可與烷基組合；例如環(huán)己基甲基。上述任何基團(tuán)(不包括氫)可被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代鹵素，優(yōu)選氟或氯；羥基；低級(jí)烷基；低級(jí)烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；酮；醛；羧酸、酯、酰胺、碳酸酯或氨基甲酸酯；磺酸或酯；氰基；伯、仲或叔胺；硝基；脒基；和硫基或烷硫基。優(yōu)選的是，該基團(tuán)包括最多兩個(gè)這類(lèi)取代基。示例性的肽硼酸化合物顯示于圖1A-1C中。&、&和R3的具體例子在圖1A-1C中示出，包括正丁基、異丁基和新戊基(烷基)；苯基或吡唑基(芳基)；4-((叔-丁氧基羰基)氨基)丁基、3-(硝基脒基)丙基和(l-環(huán)戊基-9-氰基)壬基(經(jīng)取代的烷基)；萘基甲基和芐基(芳烷基)；苯甲氧基(芳烷氧基)；和吡咯烷(R2與相鄰的氮原子形成雜環(huán))?！愣?，肽硼酸化合物可為單肽、二肽、三肽或更高級(jí)的肽化合物。其他示例性的肽硼酸化合物在美國(guó)專(zhuān)利No.6，083，903、No.6，297，217和No.6，617，317中有所描述，將所述專(zhuān)利以引用的方式并入本文。肽硼酸化合物例如硼替佐米為在序列的酸性末端、C-末端包含氨基硼酸的通常2-4個(gè)氨基酸短肽的衍生物(Zembower等人，Int.J.P印t.ProteinRes.虹(5):405-413(1996))。由于可在硼酸基團(tuán)和活性位點(diǎn)絲氨酸或蘇氨酸部分之間形成穩(wěn)定的四面體硼酸酯復(fù)合物，肽硼酸為強(qiáng)效的絲氨酸蛋白酶抑制劑。通過(guò)改變肽硼酸的序列并引入非天然氨基酸殘基和其他取代基通?？稍鰪?qiáng)該活性并使其對(duì)特定蛋白酶體有高度特異性。這使得可選擇具有強(qiáng)效抗病毒活性(Priestley,E.S.和Decicco，CP.，Org.Lett.2(20):3095-3097(2000);Bukhtiyarova，M.等人，Antivir.Chem.Chemother.H(6):367-73(2001);Archer，S.J.等人，Chem.Biol.9(1):79-92(2002);Pristley，E.S.等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.12(21):3199-202和細(xì)胞毒性活性(Teicher，B.A.等人，Clin.CancerRes.，互(9):2638—45(1999);Frankel等人，Clin.CancerRes.g(9):3719-28(2000);Lightcap，E.S.等人，Clin.Chem.巡(5):673-83(2000);Adams，J.，Semin.Oncol.，^(6):613-19(2001);Cusack，J.C.，Jr.等人，CancerRes.虹(9):83535-40(2001);Shah，S.A.等人，J.Cell.Biochem.§2(1):110-22，(2001);Adams，J.，Curr.Opin.Chem.Biol.g(4):493-500(2002);0rlowski，R.Z.禾口Dees，E.C.，BreastCancerRes.5(1):1-7(2002);0rlowski，R.Z.等人，J.Clin.Oncol.^(22):4420—27，(2002);Schenkein，D.，Clin.Lymphoma^(1):49-55(2002);Ling，Y.H.等人，ClinCancerRes2(3):1145-54(2003))的肽硼酸。這些衍生物受累于和其他短肽相同的問(wèn)題，最值得注意到是清除非?？焖俸筒荒艿竭_(dá)體內(nèi)靶部位。許多肽硼酸化合物缺乏易于離子化的氨基基團(tuán)，或極性較大，并因此使用上文討論的常規(guī)遠(yuǎn)距離裝載操作難以裝載至脂質(zhì)體中。因此，已經(jīng)設(shè)計(jì)了適用于肽硼酸化合物的裝載方法，以提供其中肽硼酸化合物以肽硼酸酯的形式包封于脂質(zhì)體中的脂質(zhì)體制劑，如現(xiàn)在將會(huì)參照?qǐng)D2所描述的。圖2示出了具有脂質(zhì)雙層膜(由單實(shí)線(xiàn)12表示)的脂質(zhì)體10。應(yīng)當(dāng)理解，在多室脂質(zhì)體中脂質(zhì)雙層膜由具有居間的水性空間的多個(gè)脂質(zhì)雙層構(gòu)成。脂質(zhì)體10懸浮于外部介質(zhì)14中，其中外部介質(zhì)的pH約7.O，通常在5.5-7.0之間，更通常在6.0-7.0之間。脂質(zhì)體10具有由脂質(zhì)雙層膜限定的內(nèi)部水性隔室16。包封在內(nèi)部水相室中的是化合物18，優(yōu)選式I化合物。式I化合物優(yōu)選為具有多個(gè)羥基官能團(tuán)的部分，下面提供了示例性的化合物。內(nèi)部水相室的pH優(yōu)選大于約7.0，更優(yōu)選7.1-9.0，還更優(yōu)選在7.5和8.5之間。也包封在脂質(zhì)體中的有肽硼酸化合物，在圖2中由硼替佐米代表。在通過(guò)脂質(zhì)雙層膜之前，硼替佐米也顯示在外部水性介質(zhì)中。在外部水相介質(zhì)中，該化合物絕大部分不帶電荷，這歸因于該略微酸性的介質(zhì)。在其不帶電狀態(tài)下，該化合物可自由滲透穿過(guò)脂質(zhì)雙層。硼酸酯的形成將使該平衡改變而引起更多化合物從外部介質(zhì)滲透通過(guò)脂質(zhì)雙層，導(dǎo)致該化合物在脂質(zhì)體中的積聚。在另一個(gè)實(shí)施例中，外部混懸介質(zhì)中較低PH和脂質(zhì)體內(nèi)部較高pH，結(jié)合脂質(zhì)體內(nèi)部的絡(luò)合劑，誘導(dǎo)藥物積聚在脂質(zhì)體的水性?xún)?nèi)部隔室中。一旦進(jìn)入脂質(zhì)體，該化合物與絡(luò)合劑反應(yīng)而形成硼酸酯。硼酸酯基本不能跨過(guò)脂質(zhì)體雙層，從而硼酸酯形式的藥物化合物積聚在脂質(zhì)體內(nèi)部。脂質(zhì)體內(nèi)部絡(luò)合劑的濃度優(yōu)選為使得帶電的基團(tuán)(例如羥基基團(tuán))的濃度高于硼酸化合物的濃度。例如，在藥物終濃度為lOOmM的組合物中，聚合物帶電基團(tuán)的內(nèi)部化合物濃度將通常至少為這么大。絡(luò)合劑以高-內(nèi)部/低_外部的濃度存在；即，存在跨越脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層膜的絡(luò)合劑濃度梯度。如果在外部體相中存在大量的絡(luò)合劑，則該絡(luò)合劑與外部介質(zhì)中的肽硼酸化合物反應(yīng)，減慢化合物在脂質(zhì)體內(nèi)部的積聚。因此，優(yōu)選的是，如下文所述制備脂質(zhì)體，以使得該組合物在體相(水相之外)中基本不含該絡(luò)合劑。適合用做絡(luò)合劑的各種分子為上面示出的式I或式II化合物。式I或II化合物可形成硼酸酯?？煽紤]可利用式I或II化合物之間的反應(yīng)性差異來(lái)制備具有包封強(qiáng)度梯度的脂質(zhì)體制劑，由此可微調(diào)藥物釋放特性。一般而言，絡(luò)合劑的滯留強(qiáng)度與絡(luò)合劑的分子量和疏水性質(zhì)相關(guān)。絡(luò)合劑的分子量越大以及疏水性越低，硼酸化合物的滯留時(shí)間則越長(zhǎng)。在一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為H的化合物。一種示例性化合物中Y為H且&為H。另一示例性化合物中Y為H且R2為H。另一示例性化合物中Y為H且R3為H。另一示例性化合物中Y為H且R4為H。另一示例性化合物中Y為H且R5為H。另一示例性化合物中Y為H且R3為A。特別是，化合物中Y、R2、R4、R5為H且R3為A。其中Y為H的式I化合物可商購(gòu)獲得或根據(jù)實(shí)例1列出的操作制備。在另一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為B的化合物。一種示例性化合物中Y為B且&為H。另一示例性化合物中Y為B且R2為H。另一示例性化合物中Y為B且R3為H。另一示例性化合物中Y為B且R4為H。另一示例性化合物中Y為B且R5為H。特別是，化合物中Y為B且&、12、13、14和R5為H。另一示例性化合物中Y為B且R3為A。特別是，化合物中Y為B且R2、R4、R5為H且R3為A。其中Y為B的式I化合物可商購(gòu)獲得或根據(jù)實(shí)例2-3列出的操作制備。在另一個(gè)實(shí)施例中，式I化合物為其中Y為E的化合物。一種示例性化合物中Y是E且&為H。另一示例性化合物中Y是E且R2為H。另一示例性化合物中Y是E且R3為H。另一示例性化合物中Y是E且&為H。另一示例性化合物中Y是E且Rs為H。一種示例性化合物中Y是E且&、R2、R3、R4和R5為H。另一示例性化合物中Y是E且R3為A。特別是，化合物中Y是E且R2、R4、R5為H且R3為A。其中Y為E的式I化合物可商購(gòu)獲得或根據(jù)實(shí)例5列出的操作制備。在一個(gè)實(shí)施例中，式II化合物為其中樹(shù)枝狀聚合物為^或G2樹(shù)枝狀聚合物的化合物。一種示例性化合物中樹(shù)枝狀聚合物為Gp另一示例性化合物中樹(shù)枝狀聚合物為G2。在另一個(gè)實(shí)施例中，式II化合物為共軛樹(shù)枝狀聚合物。一種示例性化合物為化合物D，其中n為3至30之間整數(shù)。一種示例性化合物中&為H。另一示例性化合物中R2為H。另一示例性化合物中R3為H。另一示例性化合物中R4為H。另一示例性化合物中R5為H。特別是，化合中Rp&、R3、R4和R5為H。特別是，化合物為共軛^樹(shù)枝狀聚合物。在一個(gè)實(shí)施例中，G2樹(shù)枝狀聚合物每分子具有16個(gè)氨基基團(tuán)。式II化合物可商購(gòu)獲得或根據(jù)實(shí)例4列出的操作制備。組合物中的脂質(zhì)體主要由小泡形成脂質(zhì)構(gòu)成。該類(lèi)小泡形成脂質(zhì)為可在水中自發(fā)形成雙層小泡的脂質(zhì)，例如磷脂類(lèi)，其疏水部分與內(nèi)部(雙層膜的疏水區(qū))接觸，其頭部基團(tuán)部分朝外部(該膜的極性表面)取向。能夠穩(wěn)定摻入脂質(zhì)雙層的脂質(zhì)(例如膽固醇及其多種類(lèi)似物)也可用于脂質(zhì)體中。小泡形成脂質(zhì)優(yōu)選為具有兩個(gè)烴鏈(通常為?；?和一個(gè)極性或非極性頭部基團(tuán)的脂質(zhì)。有許多合成的小泡形成脂質(zhì)和天然的小泡形成脂質(zhì)，包括磷脂類(lèi)，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇和鞘磷脂，其中兩條烴鏈的長(zhǎng)度通常為約14-22個(gè)碳原子，并且具有不同程度的不飽和度。其酰基鏈具有不同飽和度的上述脂質(zhì)和磷脂可商購(gòu)獲得或根據(jù)公開(kāi)的方法制備。其他合適的脂質(zhì)包括糖脂類(lèi)、腦苷脂類(lèi)和甾醇類(lèi)例如膽固醇?？蛇x擇小泡形成脂質(zhì)以實(shí)現(xiàn)特定程度的流動(dòng)性或剛度，以控制脂質(zhì)體在血清中的穩(wěn)定性和/或控制脂質(zhì)體中被包封物質(zhì)的釋放速率。具有剛性更大的脂質(zhì)雙層或液晶雙層的脂質(zhì)體可通過(guò)摻入相對(duì)剛性的脂質(zhì)(例如具有相對(duì)較高的相變溫度，如高達(dá)6(TC)的脂質(zhì)來(lái)獲得。剛性的、即飽和的脂質(zhì)有助于使脂質(zhì)雙層具有更大的膜剛性。其他脂質(zhì)組分例如膽固醇也已知可有助于脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的膜剛性。另一方面，脂質(zhì)流動(dòng)性可通過(guò)摻入相對(duì)流動(dòng)的脂質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)，通常為具有相對(duì)低的液相至液晶相轉(zhuǎn)變溫度(例如室溫或低于室溫)的脂相的脂質(zhì)。脂質(zhì)體可任選包括與親水聚合物共價(jià)連接的小泡形成脂質(zhì)。如美國(guó)專(zhuān)利No.5，013，556已描述的，在脂質(zhì)體組合物中包括這樣一種聚合物衍生的脂質(zhì)可在脂質(zhì)體周?chē)纬捎H水聚合物鏈的表面包衣。與缺少這種包衣的脂質(zhì)體相比，親水化合物鏈表面包衣可有效增加該脂質(zhì)體的體內(nèi)血液循環(huán)壽命。由甲氧基(聚乙二醇)(mPEG)和磷脂酰乙醇胺(例如二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)或二油酰磷脂酰乙醇胺)構(gòu)成的具有各種mPEG分子量(350、550、750、1，000、2，000、3，000和5，000道爾頓)的聚合物衍生的脂質(zhì)可購(gòu)自AvantiPolarLipids,Inc.(Alabaster,AL)。mPEG-神經(jīng)酰胺的脂質(zhì)聚合物也可購(gòu)自AvantiPolarLipids,Inc。脂質(zhì)-聚合物綴合物的制備也在文獻(xiàn)中有所描述，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No.5，631，018、No.6，586，001和No.5，013，556;Zalipsky，S.等人，BioconjugateChem.g:111(1997);Zalipsky，S.等人，Meth.Enzymol.，50(2004)。這些脂質(zhì)聚合物可制備成具有高純度和最小分子量分散度的明確定義的均相材料(Zalipsky，S.等人，BioconjugateChem.§:111(1997);Wong，J.等人，Science^:820(1997))。脂質(zhì)聚合物也可為"中性"脂質(zhì)聚合物，例如聚合物_二硬脂酰綴合物，如美國(guó)專(zhuān)利No.6，586，001中所述，將該專(zhuān)利以引用的方式并入本文。當(dāng)脂質(zhì)體中包含脂質(zhì)_聚合物綴合物時(shí)，通常將1-20摩爾百分比的脂質(zhì)_聚合物綴合物摻入總體脂質(zhì)混合物中(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利No.5，013，556)。脂質(zhì)體可另外包含經(jīng)改性而包括配基的脂質(zhì)聚合物，形成脂質(zhì)_聚合物_配基綴合物，本文中也稱(chēng)作"脂質(zhì)聚合物-配基綴合物"。該配基可為治療分子，例如藥物或具有體內(nèi)活性的生物分子，可為診斷分子，例如造影劑或生物分子，或?qū)Y(jié)合配偶體(優(yōu)選細(xì)胞表面的結(jié)合配偶體)具有結(jié)合親和力的靶向分子。優(yōu)選的配基對(duì)細(xì)胞表面具有結(jié)合親和力并輔助脂質(zhì)體通過(guò)細(xì)胞內(nèi)化作用進(jìn)入胞質(zhì)。存在于包括該脂質(zhì)聚合物-配基的脂質(zhì)體中的配基從脂質(zhì)體表面朝外取向，并因此可與其同源受體相互作用。將配基連接至脂質(zhì)聚合物的方法是已知的，其中該聚合物可經(jīng)官能化以用于和所選配基的后續(xù)反應(yīng)。(美國(guó)專(zhuān)利No.6，180，134;Zalipsky，S.等人，F(xiàn)EBSLett.353:71(1994);Zalipsky，S.等人，BioconjugateChem.4:296(1993);Zalipsky，S.等人，J.Control.Rel.巡153(1996);Zalipsky，S.等人，BioconjugateChem.,:111(1997);Zalipsky，S.等人，Meth.Enzymol.里:50(2004))。官能化的聚合物_脂質(zhì)綴合物，例如末端官能化的PEG-脂質(zhì)綴合物也可以商購(gòu)獲得(AvantiPolarLipids,Inc.)。配基和聚合物之間的鍵合可以是穩(wěn)定的共價(jià)鍵合或可響應(yīng)剌激(例如pH變化或還原劑存在)而裂解的可釋放鍵合。配基可以是對(duì)細(xì)胞受體或?qū)ρh(huán)于血液中的病原體具有結(jié)合親和力的分子。配基也可為治療或診斷分子，特別是當(dāng)以游離形式施用時(shí)具有較短血液循環(huán)壽命的分子。在一個(gè)實(shí)施例中，配基為生物配基，并優(yōu)選為對(duì)細(xì)胞受體具有結(jié)合親和力的配基。示例性生物配基為對(duì)以下分子的受體具有結(jié)合親和力的分子CD4、葉酸、胰島素、LDL、維生素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、脫唾液酸糖蛋白、選擇蛋白(例如E、L和P選擇蛋白)、Flk-1，2、FGF、EGF、整聯(lián)蛋白特別是av|33、civl^、av|35、av|36整聯(lián)蛋白、HER2，以及其他。優(yōu)選的配基包括蛋白質(zhì)和肽，包括抗體和抗體片段，例如F(ab')2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv(由重鏈和輕鏈可變區(qū)組成的片段)和scFv(其中的輕鏈和重鏈可變區(qū)通過(guò)肽接頭連接的重組單鏈多肽分子)等。配基也可為小分子模擬肽。應(yīng)當(dāng)理解，細(xì)胞表面受體或其片段可作為配基。其他示例性靶向配基包括但不限于維生素分子(例如生物素、葉酸、氰鈷胺素)、寡肽、寡糖。其他示例性的配基在美國(guó)專(zhuān)利No.6，214，388、No.6，316，024、No.6，056，973和No.6，043，094中示出，將這些專(zhuān)利以引用的方式并入本文。B.月旨制本先U誦燃肽硼酸化合物通過(guò)在脂質(zhì)體包封的式I化合物的羥基官能團(tuán)和硼酸化合物之間形成硼酸酯的形式積累和包封于脂質(zhì)體中(Eggert，H.等人，J.Org.Chem.M:3846-52(1999))。簡(jiǎn)而言之，將含有多個(gè)羥基官能團(tuán)的式I化合物置于脂質(zhì)體內(nèi)，肽硼酸化合物擴(kuò)散穿過(guò)脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層膜，并形成硼酸酯，將肽硼酸化合物包封于脂質(zhì)體中。在一個(gè)實(shí)施例中，該過(guò)程由pH驅(qū)動(dòng)，其中脂質(zhì)體外部pH較低(如pH6-7)而脂質(zhì)體內(nèi)部pH稍高(pH7.5-8.5)，加上式I或II化合物的存在，誘導(dǎo)了該化合物的積聚和裝載。在該實(shí)施例中，通過(guò)配制具有內(nèi)部較高/外部較低的式I或II化合物梯度的脂質(zhì)體來(lái)制備組合物。制備所需濃度(如上文所述測(cè)定)的式I或II化合物(如上文所述選擇)的水溶液。優(yōu)選式I或II化合物在溶液中時(shí)具有適于脂質(zhì)水合的粘度，如下文所述。式I或II化合物水溶液的pH優(yōu)選大于7.0。含水的式I或II化合物化合物被用于使干燥的脂質(zhì)膜水合，該脂質(zhì)膜是用小泡形成脂質(zhì)、非小泡形成脂質(zhì)(例如膽固醇、DOPE等)、脂質(zhì)聚合物例如mPEG-DSPE和任何其他需要的脂質(zhì)雙層組分制備。干燥的脂質(zhì)膜可這樣制備將所選的脂質(zhì)溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲校ǔ閾]發(fā)性有機(jī)溶液，并使溶劑揮發(fā)以留下干燥膜。用含有式I或II化合物的溶液水合該脂質(zhì)膜，調(diào)節(jié)至大于約7.0的pH，以形成脂質(zhì)體。實(shí)例1-5描述了制備由脂質(zhì)磷脂酰膽堿酰膽堿(PC)、膽固醇和聚乙二醇衍生的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)構(gòu)成的脂質(zhì)體。將PC:CHOL:PEG-DSPE摩爾比為10:5:l的脂質(zhì)溶解于氯仿中并蒸發(fā)溶劑以形成脂質(zhì)膜。用聚乙烯醇水溶液pH7.5水合脂質(zhì)膜，以形成式I或II化合物包封在內(nèi)的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體形成后，可對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行整粒以得到具有基本均一大小范圍的脂質(zhì)體群體，通常在約0.01至0.5微米之間，更優(yōu)選在0.03-0.40微米之間。一種用于REV和MLV的有效整粒方法涉及將脂質(zhì)體的含水混懸液擠壓透過(guò)具有所選擇的均一孔徑(在0.03至0.2微米的范圍內(nèi)，通常為0.05、0.08、0.l或0.2微米)的一系列聚碳酸酯膜。該膜的孔徑大致對(duì)應(yīng)于由擠壓透過(guò)該膜，尤其是兩次或更多次擠壓透過(guò)相同膜進(jìn)行制備時(shí)而產(chǎn)生的脂質(zhì)體的最大尺寸。勻化方法也可用于減小脂質(zhì)體至大小為100nm或更小(Martin，F(xiàn).J.，SpecializedDrugDeliverySystems—MMiufacturingMidProductionTechnology,P.Tyle(編輯)，MarcelDekker，NewYork,第267-316頁(yè)(1990))。整粒后，通過(guò)適當(dāng)?shù)募夹g(shù)例如透析、離心、尺寸排阻色譜法或離子交換移除未包封的體相式I或II化合物，以獲得具有內(nèi)部高濃度的式I或II化合物并優(yōu)選外部幾乎沒(méi)有式I或II化合物的脂質(zhì)體混懸液。同樣在脂質(zhì)體形成后，通過(guò)滴定、透析等調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的外部相至低于pH7.0。接著將硼酸化合物加入脂質(zhì)體混懸液中以主動(dòng)裝載至脂質(zhì)體中。加入的肽硼酸化合物的量可根據(jù)待包封藥物的總量，假設(shè)100%的包封率，即加入的化合物最終全部以硼酸酯的形式裝載進(jìn)脂質(zhì)體中來(lái)確定。將化合物和脂質(zhì)體分散體的混合物在這樣的條件下孵育使得脂質(zhì)體攝取化合物達(dá)到的化合物濃度為主體介質(zhì)中化合物濃度的數(shù)倍，這可通過(guò)在脂質(zhì)體中形成沉淀來(lái)表明。后者可通過(guò)(例如)標(biāo)準(zhǔn)的電子顯微鏡或x-射線(xiàn)衍射技術(shù)來(lái)確認(rèn)。通常在高溫下，并優(yōu)選在高于脂質(zhì)體脂質(zhì)的相變溫度Tp下進(jìn)行孵育。例如，對(duì)于T為5(TC的高相變脂質(zhì)，可在55-6(TC下進(jìn)行孵育。孵育時(shí)間可在一小時(shí)至小于12小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)變化，視孵育溫度而定。在該孵育步驟結(jié)束時(shí)，可進(jìn)一步處理混懸液以移除游離的(未包封的)化合物，例如使用上文提及的用于從含有被包封的式I或II化合物的起始脂質(zhì)體分散體中移除游離聚合物的任何方法。實(shí)例1-5描述了制備包含硼酸酯形式的硼酸化合物和式I或II化合物的脂質(zhì)體的方法，其中式I或II化合物為絡(luò)合劑。在這些實(shí)例中，制備卵PC和膽固醇的薄脂質(zhì)膜。用式I或II化合物的溶液水合脂質(zhì)膜，以形成具有包封于內(nèi)部水性隔室內(nèi)的式I或II化合物的脂質(zhì)體。通過(guò)適當(dāng)?shù)募夹g(shù)例如透析、離心、尺寸排阻色譜法或離子交換移除未包封的式I或II化合物，以獲得具有內(nèi)部高濃度的式I或II化合物并優(yōu)選外部幾乎沒(méi)有式I或II化合物的脂質(zhì)體混懸液。然后，將所需肽硼酸化合物加入外部介質(zhì)。非離子狀態(tài)的化合物可自由滲透穿過(guò)脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層。一旦進(jìn)入脂質(zhì)體，該化合物則與被包封的式I或II化合物反應(yīng)而形成硼酸酯，將平衡移向更多的藥物穿過(guò)脂質(zhì)雙層。通過(guò)這一方式，肽硼酸化合物積累在脂質(zhì)體中并且穩(wěn)定地包封于其中。包括脂質(zhì)-聚合物-配基靶向綴合物的脂質(zhì)體制劑可通過(guò)多種方法制備。一種方法涉及制備包括末端官能化的脂質(zhì)-聚合物衍生物的脂質(zhì)小泡；即，其中游離聚合物末端為反應(yīng)性的或"活化的"的脂質(zhì)_聚合物綴合物(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No.6，326，353和No.6，132，763)。這種活化綴合物包括在脂質(zhì)體組合物中并且在脂質(zhì)體形成后活化的聚合物末端可與靶向配基反應(yīng)。在另一方法中，脂質(zhì)_聚合物_配基綴合物在脂質(zhì)體形成時(shí)包括于脂質(zhì)組合物中(參見(jiàn)，美國(guó)專(zhuān)利No.6，224，903和No.5，620，689)。在又一方法中，將脂質(zhì)_聚合物_配基綴合物的膠束溶液與脂質(zhì)體混懸液孵育并將脂質(zhì)_聚合物_配基綴合物插入預(yù)形成的脂質(zhì)體中(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利No.6，056，973和No.6，316，024)。III.使用方法具有以硼酸酯形式包封的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體制劑可用于治療荷瘤患者。在肽硼酸化合物包括硼同位素的實(shí)施例中，該脂質(zhì)體制劑可用于硼中子捕獲療法。現(xiàn)描述這些用途A.腫瘤治療硼酸化合物屬于被稱(chēng)作蛋白酶體抑制劑的一類(lèi)藥物。蛋白酶體抑制劑可通過(guò)它們抑制細(xì)胞蛋白酶體活性的能力誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。更具體而言，在真核細(xì)胞中，泛素-蛋白酶體途徑是胞內(nèi)蛋白質(zhì)的蛋白降解的中心途徑。通過(guò)連接多聚泛素鏈蛋白質(zhì)首先被靶向以進(jìn)行蛋白水解，接著通過(guò)蛋白酶體快速降解成小肽并釋放和回收泛素。這一協(xié)調(diào)的蛋白水解途徑依賴(lài)于泛素-綴合系統(tǒng)和26S蛋白酶體的協(xié)同活性。26S蛋白酶體為存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞核和胞質(zhì)中的大分子量(1，500-2，000kDa)多亞基復(fù)合物。該復(fù)合物的催化核心，稱(chēng)作20S蛋白酶體，是由四個(gè)包含_和_亞基的七聚體環(huán)組成的圓柱結(jié)構(gòu)。該蛋白酶體是蘇氨酸蛋白酶，-亞基的N-端蘇氨酸提供攻擊靶蛋白質(zhì)中的肽鍵羰基基團(tuán)的親核體。至少有三種不同的蛋白水解活性與該蛋白酶體相關(guān)糜蛋白酶、胰蛋白酶和肽基谷氨酰胺酶活性。識(shí)別和結(jié)合多泛素化底物的能力來(lái)自19S(PA700)亞基，其結(jié)合至20S蛋白酶體的各個(gè)末端。這些附屬亞基使底物去折疊并將它們提供至20S催化復(fù)合物中，同時(shí)移除連接的泛素分子。26S蛋白酶體的組裝和蛋白質(zhì)底物的降解均為ATP-依賴(lài)性的(Almond,Leukemia顯433(2002))。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)通過(guò)蛋白質(zhì)的協(xié)同和暫時(shí)性降解調(diào)節(jié)許多細(xì)胞過(guò)程。通過(guò)控制許多關(guān)鍵細(xì)胞蛋白質(zhì)的水平，蛋白酶體可作為細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的調(diào)節(jié)劑并且對(duì)其活性的破壞對(duì)細(xì)胞周期具有深遠(yuǎn)影響。例如，缺陷凋亡與數(shù)種疾病包括一些癌癥例如B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病(存在靜止期腫瘤細(xì)胞的積聚)的發(fā)病機(jī)理相關(guān)。作為一類(lèi)化合物，蛋白酶體抑制劑通常通過(guò)抑制蛋白酶體對(duì)蛋白質(zhì)的降解來(lái)發(fā)揮作用。這類(lèi)化合物包括肽醛、肽乙烯基砜，其通過(guò)結(jié)合并直接抑制蛋白酶體20S核心內(nèi)的活性位點(diǎn)來(lái)發(fā)揮作用。然而你，肽醛和肽乙烯基砜以不可逆方式結(jié)合20S核心顆粒，從而在將它們?nèi)コ龝r(shí)蛋白水解活性不可恢復(fù)。相反，肽硼酸化合物可穩(wěn)定抑制蛋白酶體，但可從蛋白酶體緩慢解離。肽硼酸化合物比它們的肽醛類(lèi)似物作用更強(qiáng)，并更特異性地發(fā)揮作用，因?yàn)榕鸷土蛑g的弱相互作用意味著肽硼酸酯不抑制巰基蛋白酶(Richardson,P.G.，等人，CancerControl.邊(5):361，(2003))。將各種腫瘤衍生細(xì)胞系與蛋白酶體抑制劑接觸可引發(fā)凋亡，很可能是對(duì)數(shù)個(gè)途徑作用的結(jié)果，包括細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白p53和核因子B(NF-kB)(Grimm，L.M.和0sborne，B.A.，ResultsProbl.Cell.Differ.益209-28(1999);0rlowski，R.Z.，CellDeathDiffer.&(4):303-13(1999))。許多證明蛋白酶體抑制劑介導(dǎo)的凋亡的初步研究使用造血源細(xì)胞，包括成單核細(xì)胞(I腿joh-0hmi，S.等人，Biochem.Biophys.Res.Co匪n.217(3):1070-77(1995))、T-細(xì)胞和淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞(Shinohara，K.等人，Biochem.J.317(Pt2):385-88，(1996))、淋巴瘤細(xì)胞(Tanimoto，Y.等人，J.Biochem.(Tokyo)121(3):542-49(1997))和前髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞(Drexler，H.C.，Proc.Natl，Acad，Aci.U.S.A.M(3):855-60(1997))。對(duì)蛋白酶體抑制劑的體內(nèi)抗腫瘤活性的第一次闡述使用了人淋巴瘤異種移植物模型(0rlowski，R.Z.等人，CancerRes顯(19):4342-48(1998))。而且，據(jù)報(bào)導(dǎo)，蛋白酶體抑制劑可誘導(dǎo)患者衍生的淋巴瘤(Or1owski，R.Z.等人，CancerRes顯(19):4342-48(1998))和白血病細(xì)胞(Masdehors，P.等人，Br.J.Haematol.，(3):752-57(1999))的優(yōu)先凋亡并優(yōu)先抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖(Hideshima，T.等人，CencerRes.，虹(7):3071-76(2001))，而對(duì)對(duì)照、非轉(zhuǎn)化細(xì)胞則相對(duì)不足。因此，蛋白酶體抑制劑尤其可用作患有難以治愈的血液惡性腫瘤的患者的治療藥物。在一個(gè)實(shí)施例中，包含肽硼酸化合物的脂質(zhì)體制劑被用于治療癌癥，更具體而言用于在癌癥患者中治療腫瘤。多發(fā)性骨髓瘤是一種不可治愈的惡性腫瘤，在美國(guó)每年有大約15，000人被診斷出該疾病(Richardson,P.G.等人，CancerControl.蓋(5):361(2003))。它是一種血液惡性腫瘤，其特征通常在于同源漿細(xì)胞在骨髓的多個(gè)位點(diǎn)積聚。大部分患者可響應(yīng)化療和放射的初步治療，然而由于抗性腫瘤細(xì)胞的增殖絕大多數(shù)最終會(huì)復(fù)發(fā)。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了治療多發(fā)性骨髓瘤的方法，該方法通過(guò)施用包含硼酸酯形式的包封的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體制劑。該脂質(zhì)體制劑還可通過(guò)幫助克服癌細(xì)胞抵抗化療作用的一些主要途徑，而有效用于乳腺癌治療。例如，通過(guò)NF-kB(凋亡調(diào)節(jié)劑)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和p44/42分裂素活化蛋白激酶途徑可以抗凋亡。因?yàn)榈鞍酌阁w抑制劑可阻斷這些途徑，所以這些化合物可激活凋亡。因此，本發(fā)明提供了用于治療患乳腺癌的受試者的方法，該方法是通過(guò)施用包含肽硼酸化合物的脂質(zhì)體。此外，因?yàn)榛熕幬锢缱仙纪轭?lèi)和蒽環(huán)類(lèi)已顯示可激活這些途徑之一或二者，蛋白酶體抑制劑與常規(guī)化療藥物結(jié)合使用可增強(qiáng)藥物例如紫杉醇和多柔比星的抗腫瘤活性。因此，在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種治療方法，其中游離形式或脂質(zhì)體包封形式的化療藥物與脂質(zhì)體包封的肽硼酸化合物聯(lián)合使用。脂質(zhì)體制劑的劑量和給藥方案取決于所治療的癌、癌階段、患者的體型大小和健康狀況以及對(duì)醫(yī)護(hù)人員而言顯而易見(jiàn)的其他因素。此外，用蛋白酶體抑制劑硼替佐米、Pyz-Phe-boroLeu(PS-341)進(jìn)行的臨床研究提供了適當(dāng)劑量和給藥方案的充分指導(dǎo)。例如，每周一次或兩次靜脈內(nèi)給藥，實(shí)體瘤患者的最大耐受劑量為1.3mg/m2(0rlOWski，R.Z.等人，BreastCancerRes.互1-7(2003))。在另一試驗(yàn)中，在為期3周的周期的第1、4、8和11天靜脈內(nèi)推注硼替佐米表明最大耐受劑量為1.56mg/m2(Vorhees，P.M.等人，ClinicalCancerRes.2:6316(2003))。通常腸胃外施用脂質(zhì)體制劑，優(yōu)選靜脈內(nèi)施用。應(yīng)當(dāng)理解，制劑可包括輔助遞送的任何必要的或需要的藥用輔料。在上述治療方法中，優(yōu)選的蛋白酶體抑制劑為硼替佐米(Pyz-Phe-boroLeu;Pyz:2，5-吡嗪酸；PS-341)，其具有以下結(jié)構(gòu)硼替佐米已顯示對(duì)各種癌組織包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌以及對(duì)各種腫瘤例如胰腺瘤、淋巴瘤和黑素瘤具有活性。(Teicher，B.A.等人，Clin.CancerRes.5(9):2638-45(1999);Adams，J.，Semin.Oncol.，^(6):613-19(2001);0rlowski，R.ZS.和Dees.E.C.，BreastCancerRes.互(l):1-7(2002);F屋kel等人，Clin.CancerRes.&(9):3719-28(2000);Shah，S.A.等人，J.Cell.Biochem.§^(1):110-22(2001))。b.辨補(bǔ)雙m去在另一方面，本發(fā)明提供施用硼-10同位素至腫瘤，用于硼-中子捕獲療法(1QB-NCT)的方法。根據(jù)以下等式，用于癌癥治療的中子-捕獲療法是基于、同位素與熱中子(各自均相對(duì)無(wú)害)的相互作用"B+'n—7Li+4He+2.4MeV該反應(yīng)導(dǎo)致限定至單個(gè)癌細(xì)胞或鄰近的癌細(xì)胞的強(qiáng)烈電離輻射。因此，對(duì)于成功的治療，需要遞送足夠量的硼-10同位素至腫瘤。本文描述的脂質(zhì)體制劑提供了將帶有、同位素的肽硼酸化合物包封在脂質(zhì)體內(nèi)的手段。由于這種脂質(zhì)體長(zhǎng)的血液循環(huán)壽命，包括表面包覆有親水聚合物鏈的該脂質(zhì)體優(yōu)先積聚在腫瘤中(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No.5，013，556和No.5，213，804)。裝載了帶有1QB同位素的肽硼酸化合物的脂質(zhì)體通過(guò)兩種獨(dú)立的機(jī)制根除腫瘤脂質(zhì)體在腫瘤中作為藥物貯庫(kù)起作用并在該腫瘤中逐漸釋放抗癌化合物；以及脂質(zhì)體用于在腫瘤中積聚大量的硼10同位素，促進(jìn)硼中子捕獲療法的效率。根據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明的各個(gè)方面和特征將顯而易見(jiàn)。本文描述了包含水溶性的不可滲透脂質(zhì)雙層的式I或II化合物和肽硼酸化合物的脂質(zhì)體。該脂質(zhì)體通過(guò)如下方式制備將式I或II化合物包封在脂質(zhì)體的內(nèi)部水性隔室內(nèi)，從外部介質(zhì)移除任何未包封的式I或II化合物，加入可滲透脂質(zhì)雙層的硼酸化合物，其穿過(guò)脂質(zhì)雙層膜與式I或II化合物的鄰位羥基部分形成不可逆的酯鍵。通過(guò)該方式，正常情況下可自由滲透通過(guò)脂質(zhì)雙層的硼酸化合物被穩(wěn)定地包封于脂質(zhì)體中。肽硼酸化合物向脂質(zhì)體內(nèi)積聚發(fā)生在無(wú)離子梯度存在的情況下，然而，需要時(shí)可存在離子梯度。以下實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明了本文描述的發(fā)明并且絕不旨在限制本發(fā)明的范圍。實(shí)例1化合物1絡(luò)合劑的合成將乳糖(4.lg，12mmol)、鹽酸甲胺(1.35g，20翻l)和氰基硼氫化鈉(5M，1.2mL，6mmo1)加入壓力管，充氬氣，調(diào)pH至7.0(pH試紙)。密封反應(yīng)管，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物24小時(shí)，然后于40-5(TC加熱16小時(shí)。通過(guò)TLC(Si02，乙醇/乙酸/水5:1:2)監(jiān)測(cè)反應(yīng)。在乙醇(400mL)中沉淀反應(yīng)混合物。過(guò)濾分離沉淀，在離子交換樹(shù)脂柱(Bio-Rex70，水為洗脫劑)上純化。通過(guò)離子交換純化產(chǎn)物兩次。合并產(chǎn)物級(jí)分，凍干得到1.373g白色固體產(chǎn)物。'HNMR(400MHz，D20)S4.53(d，J=8Hz，1H)，4.23-4.19(m，1H)，3.97-3.53(m，10H)，3.55(dd，J=10and8Hz，1H)，3.361(dd，J=13and3Hz，lH)，3.14(dd，J=13and10Hz，1H)，2.77(s，3H)。裝載硼替佐米的fl旨質(zhì)體將化合物l溶解于水中并調(diào)pH至7.4。將摩爾比為IO:5:l的卵磷脂酰膽堿、膽固醇和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE，PEG分子量2，OOODa，AvantiPolarLipids,Birmingham,AL)混合物溶解于氯仿中，真空蒸干溶劑，將脂質(zhì)膜在化合物l溶液中振搖孵育，在壓力下將脂質(zhì)分散體擠壓透過(guò)2層重疊的孔徑為0.2ym的Nucleopore(Pleasanton，CA)膜。用S印haroseCL-4B(Pharmacia,Piscataway，NJ)上的凝膠色譜將外緩沖液交換為P朋.5包含5mM羥乙基哌嗪乙磺酸鈉(HEPES)的0.14MNaCl;與此同時(shí)，移除未包封的化合物1。向如此獲得的脂質(zhì)體中加入硼替佐米。將混合物于37t:振搖孵育過(guò)夜，用Dowex50WX4(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)處理，并用NaCl-HEPES溶液平衡以移除未包封的硼替佐米。通過(guò)濾過(guò)0.2m濾器將所得脂質(zhì)體除菌。實(shí)例2化合物2絡(luò)合劑的合成將乳糖(4.79g，14mmo1)、L-賴(lài)氨酸(0.985g，6mmo1)、氰基硼氫化鈉(5M，3mL，15rnmo1)和MilliQ水(8mL)加入裝有磁性攪拌棒的壓力管中。向管中充入氬氣，密封，并在50-6(TC下攪拌2天。在乙醇中沉淀反應(yīng)混合物。分離沉淀，然后溶于MilliQ水，加入透析管(MWC0=500)中，在水中透析。在乙醇中再次沉淀產(chǎn)物，過(guò)濾，并將固體真空干燥2天，獲得3.081g白色固體產(chǎn)物。力NMR(400MHz，D20)S4.52(d，J=6Hz，1H)，4.50(d，J=6Hz，161H)，4.25-4.12(m，2H)，3.97—3.50(m，28H)，3.07(m，2H)，1.70(broad,m，4H)，1.40(broadm，2H)?？検笱ゼ?xì)薩本將化合物2溶解于水中并調(diào)pH至7.4。將摩爾比為IO:5:1的卵磷脂酰膽堿、膽固醇和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE，PEG分子量2，000Da，AvantiPolarLipids,Birmingham,AL)混合物溶解于氯仿中，真空蒸干溶劑，將脂質(zhì)膜在化合物.2溶液中振搖孵育，并在壓力下將脂質(zhì)分散體擠壓透過(guò)兩層重疊的孔徑為0.2m的Nucleopore(Pleasanton，CA)膜。用S印haroseCL-4B(Pharmacia,Piscataway，NJ)上的凝膠色譜將外緩沖液交換為P朋.5包含5mM羥乙基哌嗪乙磺酸鈉(HEPES)的0.14MNaCl;與此同時(shí)，移除未包封的化合物2。向如此獲得的脂質(zhì)體中加入硼替佐米。將混合物于37t:振搖孵育過(guò)夜，用Dowex50WX4(SigmaChemicalCo.，St.Louis，M0)處理，并用NaCl-HEPES溶液平衡以移除未包封的硼替佐米。通過(guò)濾過(guò)0.2m濾器將所得脂質(zhì)體除菌。實(shí)例3化合物3絡(luò)合劑的合成將右旋糖(4.5g，25mmo1)、L-賴(lài)氨酸(0.985g，6mmo1)、氰基硼氫化鈉(5M，5mL，25mmol)和MilliQ水(8mL)加入裝有磁性攪拌棒的壓力管中。向管中充入氬氣，密封，在50-6(TC下攪拌2天。在乙醇中沉淀反應(yīng)混合物。分離沉淀，然后溶解于MilliQ水中，加入透析管(麗C0=500)，在水中透析。在乙醇中再次沉淀產(chǎn)物，過(guò)濾，并將固體真空干燥16小時(shí)，獲得3.22g白色固體產(chǎn)物。力NMR(400MHz，D20)S3.84-3.60(m，15H)，3.09(broadm，4H)，1.70(broad,m，4H)，1.40(broadm，2H)。裝載硼替佐米的fl旨質(zhì)體將化合物3溶解于水中并調(diào)pH至7。將摩爾比為10:5:l的卵磷脂酰膽堿、膽固醇和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE，PEG分子量2，000Da，AvantiPolarLipids,Birmingham,AL)混合物溶解于氯仿中，真空蒸干溶劑，將脂質(zhì)膜在化合物3溶液中振搖孵育，在壓力下將脂質(zhì)分散體擠壓透過(guò)2層重疊的孔徑為0.2ym的Nucleopore(Pleasanton,CA)膜。用S印haroseCL-4B(Pharmacia,Piscataway,NJ)上的凝膠色譜將外緩沖液交換為P朋.5包含5mM羥乙基哌嗪乙磺酸鈉(HEPES)的0.14MNaCl;與此同時(shí)，移除未包封的化合物3。向如此獲得的脂質(zhì)體中加入硼替佐米。將混合物于37t:振搖孵育過(guò)夜，用Dowex50WX4(SigmaChemicalCo.，St.Louis，M0)處理，并用NaCl-HEPES溶液平衡以移除未包封的硼替佐米。通過(guò)濾過(guò)0.2m濾器將所得脂質(zhì)體除菌。實(shí)例4化合物4絡(luò)合劑的合成將樹(shù)枝狀聚合物(PAMAM，第二代，分子量為3284，在Me0H中為20重量X，2g)減壓蒸干。將殘余物溶解于水(5mL)中，轉(zhuǎn)移至壓力管，并用鹽酸調(diào)pH至7.0。將右旋糖(0.51g，2.83mmo1)和氰基硼氫化鈉(5M，3mL，15mmo1)加入裝有磁性攪拌棒的壓力管中。向管中充入氬氣，密封，在4(TC下攪拌16小時(shí)。在乙醇中沉淀反應(yīng)混合物。分離沉淀，然后溶于MilliQ水，加入透析管(MWC0=l，OOO)中，在水中透析。然后在乙醇中沉淀產(chǎn)物，過(guò)濾，并將固體真空干燥16小時(shí)，獲得0.48g白色固體產(chǎn)物。所用的樹(shù)枝狀體每分子具有16個(gè)氨基。分子量為3284?；衔?是數(shù)種不同綴合物數(shù)目的混合物。織石朋靴細(xì)薩本將化合物4溶解于水中并調(diào)pH至7.4。將摩爾比為IO:5:1的卵磷脂酰膽堿、膽固醇和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE，PEG分子量2，000Da，AvantiPolarLipids,Birmingham,AL)混合物溶解于氯仿中，真空蒸干溶劑，將脂質(zhì)膜在化合物4溶液中振搖孵育，在壓力下將脂質(zhì)分散體擠壓透過(guò)2層重疊的孔徑為0.2m的Nucleopore(Pleasanton，CA)膜。用S印haroseCL-4B(Pharmacia,Piscataway，NJ)上的凝膠色譜將外緩沖液交換為P朋.5包含5mM羥乙基哌嗪乙磺酸鈉(HEPES)的0.14MNaCl;與此同時(shí)，移除未包封的化合物4。向如此獲得的脂質(zhì)體中加入硼替佐米。將混合物于37t:振搖孵育過(guò)夜，用Dowex50WX4(SigmaChemicalCo.，St.Louis，M0)處理，并用NaCl-HEPES溶液平衡以移除未包封的硼替佐米。通過(guò)濾過(guò)0.2m濾器將所得脂質(zhì)體除菌。實(shí)例5化合物5絡(luò)合劑的合成將乳糖(5.13g，25mmol)、3-氨基-l，2-丙二醇(1.64g，18mmol)、氰基硼氫化鈉(5M，3.6mL，18mmo1)和MilliQ水(6mL)加入裝有磁性攪拌棒的壓力管中。向管中充入氬氣，密封，并在40-5(TC下攪拌2天。在乙醇中沉淀反應(yīng)混合物。分離沉淀，然后溶解于MilliQ水中，加入透析管(MWC0=100)中，在水中透析。然后在乙醇中沉淀產(chǎn)物，過(guò)濾，將固體真空干燥16小時(shí)，獲得1.07g白色固體產(chǎn)物？HNMR(400MHz，D20)S3.84-3.60(m，15H)，3.09(寬峰，m，4H)，1.70(寬峰，m，4H)，1.40(寬峰，m，2H)。織石朋靴細(xì)薩本將化合物5溶解于水中并調(diào)pH至7.4。將摩爾比為10:5:1的卵磷脂酰膽堿、膽固醇和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE，PEG分子量2，000Da，AvantiPolarLipids,Birmingham,AL)混合物溶解于氯仿中，真空蒸干溶劑，將脂質(zhì)膜在化合物5溶液中振搖孵育，在壓力下將脂質(zhì)分散體擠壓透過(guò)2層重疊的孔徑為0.2m的Nucleopore(Pleasanton,CA)膜。用S印haroseCL-4B(Pharmacia,Piscataway,NJ)上的凝膠色譜將外緩沖液交換為P朋.5包含5mM羥乙基哌嗪乙磺酸鈉(HEPES)的0.14MNaCl;與此同時(shí)，移除未包封的化合物5。向如此獲得的脂質(zhì)體中加入硼替佐米。將混合物于37t:振搖孵育過(guò)夜，用Dowex50WX4(SigmaChemicalCo.，St.Louis，M0)處理，并用NaCl-HEPES溶液平衡以移除未包封的硼替佐米。通過(guò)濾過(guò)0.2m濾器將所得脂質(zhì)體除菌。實(shí)例6脂質(zhì)體包封的硼替佐米的體外活件讓多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞在微量滴定板上生長(zhǎng)至匯合。將這些細(xì)胞與如實(shí)例1-5所述以不同濃度的肽硼酸化合物制備的脂質(zhì)體一起孵育。在24小時(shí)孵育期后，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。發(fā)現(xiàn)，經(jīng)脂質(zhì)體制劑處理的細(xì)胞比對(duì)照細(xì)胞具有更高的凋亡發(fā)生率。實(shí)例7脂質(zhì)體包封硼替佐米的體外活件對(duì)如實(shí)例1-5所述制備的脂質(zhì)體進(jìn)行數(shù)個(gè)體外試驗(yàn)，用以葡甲胺作為絡(luò)合劑的脂質(zhì)體包封的硼替佐米作為對(duì)照。數(shù)據(jù)來(lái)自(1)硼替佐米與脂質(zhì)體中所用的絡(luò)合劑的ITC結(jié)合試驗(yàn)，(2)脂質(zhì)體的藥物釋放試驗(yàn)；和(3)載藥穩(wěn)定性試驗(yàn)。ITC藥物結(jié)合試驗(yàn)通過(guò)可控參數(shù)下的溫滴定微量熱儀(VP-ITC，MicroCal，Northampton,MA)來(lái)研究多種絡(luò)合劑與硼替佐米的結(jié)合。在相同的甘氨酸儲(chǔ)液(Sigma-Aldrich，100mM，pH9.5)中溶解所需量的材料來(lái)單獨(dú)制備實(shí)例1-5的絡(luò)合劑、葡甲胺(ImM)和硼替佐米(18.2mM)溶液，以保證與甘氨酸濃度和pH匹配。檢查pH水平兩次，必要時(shí)調(diào)整至O.2個(gè)單位以?xún)?nèi)。將溶液脫氣10-15分鐘。將硼替佐米溶液上樣至自動(dòng)注射器中并滴定(每次注射5-10iiL)至已載入ITC樣品細(xì)胞的絡(luò)合劑(CR)溶液。該試驗(yàn)在3(TC下進(jìn)行。使用與活性操作相同的參數(shù)將相同的藥物溶液滴定至100mM甘氨酸溶液進(jìn)行基準(zhǔn)操作。用ITC生產(chǎn)商提供的軟件程序(Microcaloriginv5.0)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理以產(chǎn)生結(jié)合參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>全血中的體外藥物釋放測(cè)l定法將體積比為l:4的試驗(yàn)制劑和大鼠全血的混合物以500rpm在37t:下振搖24小時(shí)。在時(shí)間點(diǎn)0、1、2、6和24小時(shí)取樣，并于以低的RPM旋轉(zhuǎn)數(shù)分鐘。取出上清血漿并用MS/MS分析游離藥物。在藥物釋放上，根據(jù)實(shí)例1制備的脂質(zhì)體和以葡甲胺為絡(luò)合劑的脂質(zhì)體包封的硼替佐米之間無(wú)顯著性差異。載藥穩(wěn)定件i式驗(yàn)于25t:孵育脂質(zhì)體包封的硼替佐米制劑，檢測(cè)其粒徑、pH和藥物包封率。用尺寸排阻色譜法測(cè)定藥物包封率。將樣品(100uL)上樣至Bio-Gel，P-6柱(0.5X30cm)中，用pH7.0，100mMHEPES-NaCl(150mM)溶液洗脫，并收集級(jí)分(lmL/管)。檢測(cè)脂質(zhì)體和游離藥物級(jí)分在270nm處的紫外吸收，并分別合并，然后用HPLC分析。25"C下的脂質(zhì)體載藥穩(wěn)定性試-險(xiǎn)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>E.E.=包封率盡管已就具體的實(shí)施例描述了本發(fā)明，但是對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，可進(jìn)行各種變化和修改而不偏離本發(fā)明。權(quán)利要求一種組合物，包含由小泡形成脂質(zhì)形成的脂質(zhì)體和包封于所述脂質(zhì)體中由肽硼酸化合物和式I或II化合物構(gòu)成的硼酸酯化合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述肽硼酸化合物為二肽基硼酸化合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述肽硼酸化合物為硼替佐米。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述化合物為式II化合物，并且其中RpR^RpR4和R5為H。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中D為每分子具有16個(gè)氨基基團(tuán)的共軛G2樹(shù)枝狀聚合物。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述化合物為式I化合物，并且其中Y為H、B或E。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中&為H，或R2為H，或R3為H或A，或R4為H，或Rs為H。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中Y、&、R2、R4、R5各自為H并且R3為A。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包括內(nèi)部較高/外部較低的離子梯度。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述離子梯度為氫離子梯度。11.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的組合物，其中所述氫離子梯度提供約7.5-8.5的內(nèi)部pH和約6-7的外部pH。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含約1-20摩爾百分比的用親水聚合物衍生的疏水部分。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述用親水聚合物衍生的疏水部分為用聚乙二醇衍生的疏水部分。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述疏水部分為脂質(zhì)。15.—種用于使用肽硼酸化合物的療法的組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中將所述組合物施用給受試者。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述組合物經(jīng)注射施用。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，用于治療多發(fā)性骨髓瘤。18.—種用于治療多發(fā)性骨髓瘤的組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體組合物。19.一種用于在接受放射療法的荷瘤受試者中選擇性破壞腫瘤組織的組合物，所述組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體混懸液，其中所述混懸液與硼的同位素聯(lián)合施用給所述受試者；并且其中所述受試者接受放射療法。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述硼的同位素是在肽硼酸中。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述硼的同位素為"B。全文摘要本發(fā)明描述一種由脂質(zhì)體構(gòu)成的脂質(zhì)體組合物，所述脂質(zhì)體具有包封于其中的肽硼酸蛋白酶體抑制劑化合物。更具體而言，將具有包封于內(nèi)部水性隔室內(nèi)的式I或II化合物的脂質(zhì)體裝載肽硼酸化合物，以在所述脂質(zhì)體水性隔室內(nèi)形成硼酸酯化合物。在一個(gè)實(shí)施例中，所述脂質(zhì)體具有親水聚合物鏈的外包衣并用于在受試者治療實(shí)體腫瘤。文檔編號(hào)A61K9/127GK101795672SQ200880105678公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2008年8月21日優(yōu)先權(quán)日2007年8月21日發(fā)明者A·黃,B·羅,J·王,Y·張申請(qǐng)人:阿爾扎公司