專利名稱：：包含雙胍的脂質體的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及包含雙胍的脂質體，基于包含至少一種雙胍作為殺微生物活性劑的脂質體的抗菌制劑，所述包含雙胍的脂質體和抗菌制劑的制備，以及它們的可能的用途和利用它們的用途的產品。
背景技術：
：若創(chuàng)傷脫水、創(chuàng)傷中有大量的細菌存在和/或創(chuàng)傷用毒性試劑處理，則創(chuàng)傷的愈合過程將顯著地惡化。通過比較，潮濕的環(huán)境、缺少病原體的移生以及生長因子存在度的增加將促進上皮形成和肉芽組織的形成。在專家中潮濕的創(chuàng)傷愈合的優(yōu)點是無可置疑的，其中創(chuàng)傷中的潮濕環(huán)境是為了刺激細胞生長并由此達到被損傷組織的最快的可能的再生。另一方面，潮濕的環(huán)境也為細菌提供了良好的生長條件。然而，創(chuàng)傷的微生物污染將顯著地影響創(chuàng)傷愈合的過程，尤其最近幾年由于微生物對于抗生素的耐藥性提高，因而引起更多的問題。由于具有微生物(口語為"細菌")的創(chuàng)傷的低度移生是個規(guī)律，因此創(chuàng)傷的微生物污染的擴散應該被盡可能地阻止或避免。尤其是如耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)的多重耐藥的致病性微生物的污染需要處理以阻止其進一步擴散。因此，被微生物污染或感染的創(chuàng)傷應該抗菌處理，因為-只要創(chuàng)傷有微生物移生，就有可能形成感染；-只要創(chuàng)傷仍被感染，創(chuàng)傷的愈合過程就不完全，或完全但被延緩；-創(chuàng)傷的感染可能擴散并導致敗血癥；以及-對于被多重耐藥的病原體移生的創(chuàng)傷而言，這些病原體的進一步的擴散必須被阻止。特別是對于燒傷創(chuàng)面，必須盡早阻止創(chuàng)傷感染，尤其是預期的大面積創(chuàng)傷的污染的情況。技術文獻描述了多種用于清潔具有耐抗生素的微生物的創(chuàng)傷的方法。例如，已提出通過沖洗溶液的方法從創(chuàng)傷去除菌斑和粗污染。通常，林格氏(Ringer's)液、林格氏乳酸鹽溶液或等滲氯化鈉溶液可用于這些目的。但是，這些溶液沒有抗菌活性且它們僅僅達到清潔創(chuàng)傷的目的。具有抗微生物活性的清潔創(chuàng)傷的溶液也可在市場上獲得。例如，這些產品是碘溶液、過氧化氫溶液、銀鹽溶液或聚己縮胍溶液，但是它們都具有某些缺點。碘具有強大的氧化作用，它能導致抗革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌、真菌和原蟲，以及許多病毒的可靠的殺微生物活性。與以前經常使用的含有乙醇的碘溶液(碘酒)的使用相比，提供水溶性的聚維酮碘(PVP硪、聚乙烯吡咯烷酮碘)使得創(chuàng)傷處理基本沒有疼痛，但是在PVP碘的使用中仍然存在許多禁忌癥和問題。例如，PVP碘中的碘經過皮膚由組織吸收，已知的碘變態(tài)反應和碘不耐性可與PVP碘的使用產生沖突，并且已證明碘可以抑制細胞分裂。因此，用PVP碘處理創(chuàng)傷導致延緩的創(chuàng)傷愈合。通過將PVP石典摻入到脂質體中，其以Repithef(MundipharmaGmbH，林堡市，德國)的名稱可商業(yè)獲得，組織對PVP碘的耐力可顯著地改善，而不影響所述PVP碘的效力。Repithef的基本物質是聚丙烯酸酯凝膠，其除了水之外，包含所謂的水質體(hydrosome),也就是，特殊的多層脂質體。除了包含PVP捵作為小劑量抗菌劑之外，這些脂質體(其由多個像洋蔥皮排列的磷脂雙層組成)還包含大量的水。由此Repithd⑧能夠像常規(guī)的水凝聚制劑一樣釋放和吸收水；這樣，它能產生水分平衡。然而，就像PVP碘或眾所周知的碘酒一樣，Repithe產主要是暫時地導致處理區(qū)著色。PVP碘固有的褐色表明含有PVP碘的制劑的效力，但它也導致織物染色。此外，當使用Repithef或任何其他的含有碘的制劑時，下面的禁忌癥必須考慮甲狀腺的曱狀腺機能亢進疾病、皰疹樣皮炎、對碘的超敏反應。此外，Repithe產不能在放射治療的前后使用。同樣，在懷孕和哺乳期間，以及新生兒和不到6個月齡的嬰兒，含碘的制劑應該僅在非常小心的考慮并通過醫(yī)師監(jiān)控曱狀腺功能之后才能使用。創(chuàng)傷中的過氧化氫在釋放氧氣下快速分解成水。釋放的氧氣能氧化污染的細菌的細胞壁。因為它的通過快速釋放氧氣而引起的泡沫活動，所以使用過氧化氫能夠成功地機械性清潔特別是被污染的和/或結痂性的創(chuàng)傷。另一方面，用過氧化氫處理也導致創(chuàng)傷的表面的化學灼傷，這至少會拖延創(chuàng)傷愈合。因此，過氧化氫不適合長期使用，尤其在慢性創(chuàng)傷的情況下。銀鹽溶液通過破環(huán)細菌的細胞壁和使細菌酶變性而進行殺菌的。但是問題是硝酸銀溶液的穩(wěn)定性不好，銀離子的可能的吸收，以及由于銀引起的蛋白凝固而導致的皮膚表面的破壞。由于這些原因，專家一度認為使用銀鹽溶液處理創(chuàng)傷已經過時了。如果僅由于所述抗生素部分，使用磺胺嘧咬銀(銀和磺酰胺磺胺嗜啶的配合物)不再被認為是可接受的。用于創(chuàng)傷愈合的即用型聚己縮胍溶液可商業(yè)獲得，名稱為Lavasept(費森尤斯，巴德霍姆堡，德國)或Prontosan(貝朗派佐德有限公司，麥松根，德國)。聚己縮胍(聚亞己基縮雙胍；PHMB)被認為是具有作用范圍廣和良好耐受性的局部抗菌劑。通過其陽離子電荷，聚己縮胍通過提高細菌細胞膜的滲透性和通過提高的滲透性引起的鉀損失和細胞漿的其他成分損失導致細胞死亡從而進行抗菌的。由于它的起效相當?shù)穆?，因此聚己縮胍更被推薦用于慢性不良愈合或敏感創(chuàng)傷的重復使用。然而，使用聚己縮胍溶液的缺點是在甚至少量的帶負電離子的存在下，例如藻酸鹽、丙烯酸鹽、乳酸鹽或碘離子的存在下，這些抗菌劑會失去它們的活性的事實。由于這個原因，必須注意聚己縮胍溶液不能和其他的創(chuàng)傷治療法和/或現(xiàn)代的創(chuàng)傷繃帶一起使用。同樣，當選擇創(chuàng)傷覆蓋物時，必須確保這些創(chuàng)傷覆蓋物不含非活性劑。除了所述抗菌溶液，許多還包含用來保護敷料免受微生物移生并減少創(chuàng)傷中的病菌數(shù)量的活性劑的創(chuàng)傷敷料也是可獲得的。尤其是包含銀或銀鹽作為抗微生物整理的創(chuàng)傷敷料已被廣泛使用，例如，產品Actisorb(Johnson&JohnsonWM,Norderstedt，德國)和Contreet-H(ColoplastGmbH，漢堡，德國)。所述Actisorb⑧創(chuàng)傷敷料(它是元素銀和活性炭的組合)特有根據創(chuàng)傷的滲出行為在創(chuàng)傷中產生抗菌的銀濃度的被包封的銀離子的水膠體敷料。曾一度也出現(xiàn)了基于膠原、纖維素衍生物或藻酸鹽的創(chuàng)傷敷料，在大多數(shù)情況下，其包含濃度為0.52%的聚己縮胍作為抗微生物活性劑。這些創(chuàng)傷敷料是通過用包含聚己縮胍的水溶液噴射或浸潤基質或載體材料而制備的。然而，已表明，聚己縮胍很好地結合到經常用于生產創(chuàng)傷敷料和繃帶的基質或載體材料。這影響了聚己縮胍從創(chuàng)傷敷料中釋放，且最終也影響了聚己縮胍的抗微生物活性。
發(fā)明內容本發(fā)明的任務是提供一種抗菌制劑，通過該抗菌制劑創(chuàng)傷能被清潔和/或處理，其具有廣泛的作用和良好的耐受性，其既不會導致變性現(xiàn)象也體變色，且其也適合在如慢性創(chuàng)傷的情況下長期使用。本發(fā)明的一個目的是提供一種抗菌制劑，通過該抗菌制劑潮濕創(chuàng)傷處理的觀念能被保留，而不必擔'"、創(chuàng)傷或必須使用的創(chuàng)傷敷料的污染。本發(fā)明的另一目的是提供一種制備穩(wěn)定的且包含至少一種具有抗微生物活性的雙胍的脂質體的方法。本發(fā)明的又一目的是提供包含至少一種具有抗微生物活性的雙胍的抗菌創(chuàng)傷敷料，其中雙胍的利用率和由此其抗微生物活性最終被提高。根據本發(fā)明，這些目的是通過提供包含至少一種具有抗微生物活性的雙胍的特定組合物的脂質體而實現(xiàn)的。因此，如果在脂質體的制備中，沒有使用具有陰離子首基(例如磷脂酰甘油)的類脂，在雙胍的存在下可能制備穩(wěn)定的脂質體。為了制備和負載具有雙胍的脂質體，在WO02/36257中描述的交叉流注入法由于它的非常溫和的加工條件和高效率而特別有益。然而，負載有雙胍的脂質體的制備不限于這種方法。現(xiàn)有技術中已知的用于制備和負載脂質體的其他方法也能用于此目的，例如高壓勻質法、微流化法或超聲法?？梢該饺氲礁鶕景l(fā)明的脂質體中的雙胍優(yōu)先選自藥理學上可接受的雙胍的組中，所述藥理學上可接受的雙胍包括1,1'-亞己基-二-{5-(4-氯苯基)-雙胍}(氯己定)、1,1'-亞己基-二-{5-(4-氟苯基)-雙胍}(氟己定)、聚亞己基縮雙胍(PHMB)、阿來西定(N,N"-二(2-乙基己基)-3,12-二亞胺基-2,4,11，13陽四氮雜四癸烷二酰亞胺(tetraazatetradecanediimidamine))、l，l'-亞己基-二[5-(2-乙基己基)雙胍])和VantociflB型(ICI)的聚亞己基縮雙胍化合物。此外，所述雙胍也可以選自在US2,684,924、US2,990,425、US3，468，898、US4,022,834、US4,053，636、US4,198,392、US4，891，423、US5,182,101、US6,503,952、GB705,838和GB702,268中描述的藥理學上可接受的雙胍化合物之中。在特別優(yōu)選的實施方式中，所述雙胍以它們的可溶于水的、生理學上可接受的鹽的形式摻入到所述脂質體中。例如，可以摻入到所述脂質體中的特別優(yōu)選的雙胍為聚亞己基縮雙胍鹽酸鹽、氯己定二葡糖酸鹽、氯己定二乙酸鹽、氯己定二鹽酸鹽和阿來西定鹽酸鹽。由于所述包含雙胍的脂質體的抗微生物性質即使在脂質體被冷凍干燥之后也令人驚訝地保持不變，因此對于創(chuàng)傷敷料的制備，根據本發(fā)明的脂質體可以幾乎任何形式的外觀使用。具體實施例方式接下來，通過特別優(yōu)選的實施方式對本發(fā)明進行更加詳細的描述。然而，這些描述不能解釋為限制本發(fā)明的性質于下文描述的實施方式。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)如果所述脂質體基本上沒有具有陰離子首基的類脂，則聚己縮胍能被穩(wěn)定地摻入到脂質體中。通過負載類脂層或通過負載脂質體內的水相，可以使脂質體負載有活性劑。當聚己縮胍為可溶于水的物質時，認為這些分子不能被穩(wěn)定地摻入到脂質體的類脂雙層中，但是應該保留在脂質體內的相中。由此，試圖使水相負載有聚己縮胍。ii為此目的，在適合的負載緩沖液，優(yōu)選Tris-HCl(pH7.5)和HEPES(pH7.0)中制備各種組分的脂質體。為了制備所述脂質體，將使用的每種類脂溶解在96%的乙醇中，并使用交叉流注入法通過壓力控制注射器將其注入到水相中。這樣形成的脂質體的尺寸通過注入點的局部類脂濃度調節(jié)，其由乙醇相中的類脂濃度、乙醇濃度、注入壓力、注射器孔和注入點的水相的流速來確定。將類脂注入到水相之后立刻將混懸液用更多量的水相稀釋以降低乙醇的濃度到容許的水平，優(yōu)選降低到7.5~15%。最初，作為初步實驗，制備了2種脂質體混懸液?；鞈乙?1由氬化大豆磷脂酰膽堿(S100-3=87%二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)和13%二棕櫚酰磷脂酰膽石咸(DPPC;10|imol/ml))和膽固醇(2|nmol/ml)組成?；鞈乙?2由氫化大豆磷脂酰膽堿(5pmol/ml)、蛋黃磷脂酰甘油(E-PG;5nmol/ml)和膽固醇(2|imol/ml)組成。通過動態(tài)光散射測定兩種脂質體混懸液的嚢泡尺寸和尺寸分布且得到了相似的制備結果，平均嚢泡尺寸為直徑120~130nm和多分散指數(shù)(PDIX作為散射的測量)為0.23~0.24。隨后，將CosmocilCQ(Archchemicals,Inc,US)加入到這些脂質體混懸液(9體積份脂質體混懸液+1體積份CosmocilGQ)，CosmocilGQ為20%的聚己縮胍水溶液(聚(亞氨基亞氨羰基)亞氨六亞曱基鹽酸鹽溶液)，因此所述脂質體混懸液包含2%的聚己縮胍。在幾分鐘內，在混懸液#2中觀察到大量的沉淀，但是在混懸液#1中未觀察到。比較的光散射測定結果顯示混懸液#1中的脂質體的尺寸沒有變化。對于具有聚己縮胍的混懸液#2，得到大于4,000到5,000nm的平均嚢泡尺寸的比較的測量結果與沒有加入聚己縮胍的混懸液#2中的脂質體尺寸相比，顯示顯著的變化。在聚己縮胍的存在下，制備具有與混懸液#1和混懸液#2中相同類脂組成的脂質體同樣也得到相似的結果。為了制備這些脂質體，用PBS以1:1稀釋CosmocilGQ制備10%的聚己縮胍溶液。使用交叉流注入法，在55。C將此溶液注入到類脂/乙醇溶液中，且隨后用PBS以l:5稀釋?；鞈乙?3(S100-3，膽固醇和聚己縮胍)包含通過光散射測量得到的平均尺寸為360370nm的脂質體。然而，混懸液#4(S100-3，E-PG，膽固醇和聚己縮胍)在加入聚己縮胍之后顯示出類似于混懸液#2的沉淀行為。混懸液#4中的嚢泡尺寸為3,000~4,000nm。這些結果顯示只要沒有磷脂酰甘油摻入到脂質體膜中，脂質體可在聚己縮胍的存在下制備。磷脂酰甘油是具有陰離子首基的磷脂。此外，在這些實驗中觀察到在加熱過程中，在PBS/聚己縮胍溶液中出現(xiàn)了反復的輕微的混濁。因此，即使PBS基本上適合作為水相的緩沖液，但是對于制備包含聚己縮胍的脂質體，PBS不是最佳的緩沖液。由于被考慮用于制備脂質體的類脂在約pH7.0時顯示良好的穩(wěn)定性，因此考慮緩沖液適合在該pH使用，選擇各種緩沖液來代替PBS緩沖液用于初步實驗。在這些實驗中發(fā)現(xiàn)加入聚己縮胍時50mM檸檬酸(pH7.0)導致強的濁度反應，其雖然在過程溫度加熱到40~50。C時消失，一旦冷卻又會出現(xiàn)。20mM的Tris緩沖液(pH7.5)和20mM的HEPES緩沖液(pH7.0)例如將被作為緩沖溶液提及，其被證明特別適合于在制備包含聚己縮胍的脂質體中稀釋聚己縮胍，在聚己縮胍的存在下，兩者都不會導致濁度反應。此外，使用這兩種最后提及的緩沖液得到包含聚己縮胍的脂質體就它們的尺寸、負載聚己縮胍和穩(wěn)定性而言都沒有顯著區(qū)別。在其他的一系列實驗中，使用不同類脂制備包含聚己縮胍的脂質體，即-S100-3=氫化大豆磷脂酰膽堿(87。/。二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)和13。/。二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)的混合鏈、氬化磷脂)；-E-PC=來自蛋黃的磷脂酰膽堿(具有不飽和脂肪酸的天然、混合鏈的磷脂)；-E80S=來自蛋黃的80。/。磷脂酰膽堿(E-PC)和20%磷脂酰乙醇(E-PE;l-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇)的混合物(具有不飽和脂肪酸和荷電部分的天然、混合鏈的磷脂)；-DMPC=二肉豆蔻酰磷脂酰膽石咸；和-DPPC=二棕櫚酰磷脂酰膽堿。所述脂質體的尺寸分布產生不同的結果。在缺少膽固醇下，用S100-3在55。C與10%聚己縮胍制備的脂質體(混懸液#6)顯示出平均脂質體尺寸200250nm的單峰分布。通過比較，膽固醇的存在導致多峰分布的脂質體混懸液(混懸液#5),其不用于進一步的研究。在膽固醇的存在下，在35。C用E-PC制備的包含聚己縮胍的脂質體(混懸液#7)產生具有平均直徑200nm的均勻的單峰嚢泡群，但是在缺少膽固醇(混懸液#8)下卻沒有。存在或缺少1520mol。/。膽固醇下^f吏用E80-S制備的混懸液(混懸液#9和混懸液#10)對脂質體的形成沒有影響。由于膽固醇不是成膜類脂，所以膽固醇即使以高達或稍微低于50mol。/。的量也是可應用的，而不會影響脂質體的形成。在混懸液#6、#7、#9和#10中脂質體的單峰尺寸分布得出在聚己縮胍和膜類脂之間存在很小或沒有相互作用的結論。在多峰粒徑分布的情況下，聚己縮胍可能與膜或與其單個成分相互作用并由此破壞了均一的囊泡的形成。僅具有嚢泡的單峰尺寸分布的脂質體混懸液被用于進一步分析和制備。這些混懸液在具有醋酸纖維素膜(其具有100kDa的分子排阻限度)的10mlAmicon攪拌式超濾杯中(Amiconstircell)過濾除去未摻入的聚己縮胍部分。隨后，使用曙紅實驗法測定在過濾中得到的所有部分的聚己縮胍含量。平均15~25%的加入的聚己縮胍摻入到了檢測的脂質體中。濾液的分析也顯示出在脂質體中聚己縮胍保持穩(wěn)定，在連續(xù)的濾液中聚己縮胍的量不斷減少，且滲余物中聚己縮胍含量在預期的范圍之內。使用合成的類脂DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)和DMPC(二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿)也進行了相應的實驗。在這些實驗中發(fā)現(xiàn)不論在膽固醇的存在(混懸液#11)或膽固醇的缺失(混懸液#12)下，使用DPPC在5055。C制備的脂質體混懸液均顯示多峰的尺寸分布。像不飽和類脂混合物制備的脂質體(混懸液#7和#8)—樣，在35。C使用DMPC和膽固醇制備的脂質體(混懸液#13)顯示出較好的結果，即脂質體的平均直徑約400~500nm且加入的PHMB的約3040%的穩(wěn)定的摻入。由于不能確定地闡明是否用于上述實驗的Tris緩沖液能被用于藥物制劑或醫(yī)療產品，并且由于已證明HEPES緩沖液一直在藥物制劑中使用，因此使用20mMHEPES緩沖液(pH7.0)代替Tris緩沖液，重復當使用Tris緩沖液時得到滿意結果(即混懸液#7、#9、#10和#13)的脂質體制備。如通過比較混懸液#7、#9、#10和#13與混懸液#15#18的嚢泡尺寸和聚己縮胍負載量所顯示的(見表1)，在使用Tris緩沖液制備的脂質體和HEPES緩沖液制備的脂質體之間沒有發(fā)現(xiàn)差異。關于嚢泡的尺寸以及它們的尺寸分布，和聚己縮胍的包封行為，都沒有發(fā)現(xiàn)顯著的差異。僅包含E-PC/膽固醇的脂質體混懸液(混懸液#7和#15)在分析中顯示比其余的脂質體制劑更寬范圍的測量值。在進一步的實驗中，為了保護由不飽和類脂制備的脂質體在其貯藏過程中免受氧化降解并通過加入微生素E改善創(chuàng)傷愈合而在制備過程中另外將這些自由基清除劑加入到類脂/乙醇溶液中。首先，測定出維生素E的沒有不利地影響嚢泡形成過程的最適量。結果發(fā)現(xiàn)可以將高至40mol%的維生素E加入到類脂相而不影響嚢泡形成?；谶@些結果，在進一步的實驗中，制備具有20mol。/。維生素E的包含聚己縮胍的脂質體，并隨后過濾和分析。就嚢泡粒徑和聚己縮胍的成嚢泡量而言，由這些制備物制得的脂質體(混懸液#19#21)的性質與沒有加入維生素E的制備物制得的脂質體(混懸液#15、#16、#17)的性質相同。當使用維生素E時，加入的PHMB的約20~25%也同樣被以脂質體的方式纟參入。脂質體對于聚己縮胍的負載量取決于其嚢泡尺寸。具有150~200nm直徑的脂質體通常能負載15~20%的加入到制劑的聚己縮胍，具有400500nm直徑的脂質體通常能穩(wěn)定地負載30~40%的加入到制備物中的聚己縮胍。為了制備抗菌活性的脂質體混懸液，除了優(yōu)選已被證實具有良好的耐受性和作用廣泛的聚己縮胍之外，也可以使用任何其他的具有抗微生物活性的且是生理學上可接受的雙胍。所使用的聚己縮胍的分子量沒有任何實質性地限制。迄今使用的任何分子量的聚己縮胍都可以使用。優(yōu)選的PHMB具有1，50015,000g/mo1范圍的分子量。優(yōu)選的聚己縮胍為聚合度為1216的聚己縮胍。所述聚合度表示在聚合反應過程中連接形成一個大分子的單體分子的平均數(shù)量。以脂質體方式摻入的聚己縮胍或其他的以脂質體方式摻入的雙胍加入到創(chuàng)傷敷料中可以不同的方式完成。例如，可以將包含聚己縮胍的脂質體加入到用于創(chuàng)傷敷料的載體材料的聚合物溶液中。隨后通過蒸發(fā)或冷凍干燥去除溶劑。為了制備潮濕的創(chuàng)傷敷料，在進一步加工創(chuàng)傷敷料之前，所述溶劑可以全部或部分保留在創(chuàng)傷敷料，分別在用于創(chuàng)傷敷料的載體材料中。作為選擇，也可以使用聚己縮胍溶液所用的方法將包含雙胍的脂質體的混懸液涂布到載體材料。由此，所述包含雙胍的脂質體可以通過噴灑或噴霧涂布到載體材料。因此，本發(fā)明涉及基于包封在脂質體中的活性劑的抗菌制劑，且其特征在于所述脂質體不含具有陰離子首基的類脂，在其內部具有水性介質，并且在所述的水性介質中包含至少一種雙胍組中的抗;微生物活性劑。表1:制備的脂質體混懸液的組成和性質的概括<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>在特別優(yōu)選的實施方式中，根據本發(fā)明的組合物包括作為具有抗微生物活性的質量聚合物雙胍的聚己縮胍，特別優(yōu)選聚己縮胍具有1,500~15,000g/mol的分子量和/或12~16的聚合度。所述水性介質優(yōu)選為緩沖液，且特別優(yōu)選PBS、Tris緩沖液和HEPES緩沖液。所述水性介質應當具有6~8的pH值，優(yōu)選pH值為7.0-7.5。在優(yōu)選的實施方式中，所述脂質體，更確切的是所述脂質體的類脂雙層，包含膽固醇。在所述脂質體中，膽固醇含量可以總計達到50mol%;優(yōu)選地，膽固醇含量為15~20mol%。在另一優(yōu)選的實施方式中，除了膽固醇適用之外，在每個情況中相對于總的類脂，所述脂質體，更確切的是所述脂質體的類脂雙層，以高至40mol%的量、優(yōu)選以20mol%的量含有維生素E。根據本發(fā)明的所述脂質體優(yōu)選具有50~800nm的平均尺寸，特別優(yōu)選平均尺寸150~500nm的脂質體。根據本發(fā)明的制劑可以如混懸劑、乳劑、洗劑、酊劑、噴霧劑、凝膠劑、乳膏劑或軟膏劑的形式存在。本發(fā)明也涉及制備基于包封在脂質體中的選自雙胍組中的抗微生物活性劑的抗菌組合物的方法，其中所述脂質體不含具有陰離子首基的類脂，且所述方法的特征在于，最初通過壓力控制注射器將乙醇類脂相注入到包含選自雙胍組中的抗微生物活性劑的水相中，在嚢泡的形成發(fā)生之后用緩沖液稀釋所述水相，以及隨后去除未摻入的活性劑。優(yōu)選地，用于稀釋所述脂質體混懸液的緩沖液與用于制備水相的緩沖液相同。在根據本發(fā)明的方法中，用于類脂相的磷脂優(yōu)選選自由天然的或合成的選自由磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿及其混合物組成的組中的磷脂；且所述天然的磷脂優(yōu)選源自蛋黃或大豆。優(yōu)選地，氯己定、氟已定、阿來西定或聚己縮胍用作具有抗微生物活性的雙胍；特別優(yōu)選具有1,500~15,000g/mo1的分子量和/或12~16的聚合度的聚己縮胍。在根據本發(fā)明的方法中，所述水相優(yōu)選由緩沖系統(tǒng)制備，特別優(yōu)選選自由PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)、Tris緩沖液和HEPES緩沖液組成的組中的。所述水相的pH調節(jié)到6~8;特別優(yōu)選地，所述pH值為7.07.5。在特別優(yōu)選的方法中，在每種情況中相對于總的類脂，所述類脂相以050mol%的量、優(yōu)選以15~20mol%的量包含膽固醇；和/或以040mol%的量、優(yōu)選以20mol%的量包含維生素E。本發(fā)明也涉及根據本發(fā)明的抗菌組合物的用途，更具體地涉及其用于生產創(chuàng)傷敷料的用途，可以例如通過噴灑、噴霧或浸潤給提供抗微生物脂質體。適合作為生產所述創(chuàng)傷敷料的載體材料是常規(guī)的用于此目的且本領域技術人員公知的任何材料，例如膠原、纖維素和纖維素衍生物、聚氨基曱酸酯、藻酸鹽，單獨或與由藻酸鹽、透明質酸及其鹽(透明質酸鹽)、果膠、角叉藻聚糖、黃原膠、硫酸化右旋糖酐、纖維素衍生物、如氧化再生纖維素的氧化纖維素、軟骨素、4-硫酸軟骨素、6-硫酸軟骨素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸角質素、硫酸皮膚素、淀粉衍生物及其混合物組成的組中的多糖組合。在另一優(yōu)選的用途中，例如膠原溶液的聚合物溶液與所述脂質體混懸液混合，且隨后通過干燥或冷凍干燥將所述一種或多種溶劑全部或部分去除，由此可得到具有抗微生物活性脂質體的海綿。因此本發(fā)明也涉及創(chuàng)傷敷料，其包括包含雙胍的脂質體且是基于例如纖維素、如羥曱基纖維素的纖維素衍生物、藻酸鹽、脫乙酰殼多糖、淀粉或淀粉衍生物、膠原、聚丙烯酸酯、聚氨基曱酸酯或上述化合物的混合物作為載體材料。根據本發(fā)明的創(chuàng)傷敷料的優(yōu)選實施方式為水凝膠、水膠體、海綿、薄膜(film)、膜(membrane)、非紡織物、紡織物、編織物、其他織物、梳棉生條、填塞等。特別優(yōu)選地，相對于所述敷料的干重，根據本發(fā)明的創(chuàng)傷敷料以0.01~1.0wt%的量包含以脂質體方式加入的抗微生物活性的雙胍，優(yōu)選聚己縮胍。實施例為了制備具有抗菌效果的膠原海綿，將1%膠原混懸液(來源于牛)與確定量的脂質體混懸液(在Tris緩沖液中)徹底混合，隨后置于塑料皿中。然后將混合物在-50。C低溫快速冷凍并接著凍干。這樣，相對于膠原的干重，制備出具有聚己縮胍含量為0.05wt%、0.1wt%、0.5wt。/o或lwt。/。的膠原海綿。使用三種不同的脂質體混懸液I.E80-S、膽固醇和維生素E的脂質體(混懸液#20);II.E80-S和維生素E(混懸液^21);和III.DMPC和膽固醇的脂質體(混懸液#22)。通過瓊脂擴散實驗更加詳細地檢測包括含有聚己縮胍的脂質體的膠原海綿和用于制備這些膠原海綿的脂質體混懸液對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的抗微生物活性。為此目的，將所述微生物在非選擇性液態(tài)培養(yǎng)基中于3035。C培養(yǎng)24h，且隨后用含有1%蛋白胨的l%NaCl溶液分別稀釋到1xio8CFU/ml(菌落形成單位)和3.8x107CFU/ml(白色念珠菌)。將每種稀釋液100pl分別涂到CSA和SDA皿上(CSA=酪蛋白-大豆-蛋白胨瓊脂；SDA=沙氏葡糖瓊脂(Sabouraud-dextroseagar))。將所述瓊脂皿干燥3~5分鐘。在涂布所述溶液、脂質體混懸液或膠原海綿之后，在測定抑制區(qū)之前，所述皿分別在30~35。C培養(yǎng)24h并在2025。C培養(yǎng)48h(白色念珠菌)。通過測定從海綿或瓊脂皿中用于溶液或混懸液填入的孔到抑制暈的邊緣的距離定量抑制的面積。所述結果以半定量的形式概述在表2中。所述包括負載有聚己縮胍的脂質體的膠原海綿對三種檢測的微生物(金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和白色念珠菌)顯示出良好的抗微生物活性。在這些檢測中，與具有包含聚己縮胍的基于E80-S的脂質體的膠原海綿相比，基于DMPC的、具有包含聚己縮胍的基于DMPC的脂質體的膠原海綿對檢測的微生物顯示出最弱的抗微生物活性。即使僅負載有少量的聚己縮胍，具有包含聚己縮胍的基于E80-S的脂質體的膠原敷料對金黃色葡萄球菌和白色念珠菌也顯示出良好的活性。這些創(chuàng)傷敷料對于綠膿桿菌的抗微生物活性是不一致的；然而，即使在所述創(chuàng)傷敷料負載少量的聚己縮胍的情況下，也沒有發(fā)生創(chuàng)傷敷料的微生物污染。所述脂質體混懸液的冷凍干燥對于所述制劑的抗微生物活性沒有負面的影響。本結果顯示使用以脂質體方式加入的聚己縮胍，至少在膠原或使用膠原的基礎上，可能制備具有優(yōu)異抗微生物活性的創(chuàng)傷敷料。表2:包含聚己縮胍的制劑的抗微生物活性的半定量評價<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>權利要求1、基于包封在脂質體中的抗微生物活性劑的抗菌組合物，其特征在于，所述脂質體不含具有陰離子首基的類脂，所述脂質體在其內部具有水性介質，且在所述水性介質中含有至少一種雙胍組中的抗微生物活性劑。2、根據權利要求1所述的抗菌組合物，其特征在于，所述脂質體包括磷脂，所述磷脂選自天然和合成的包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿及其混合物的磷脂的組中。3、根據權利要求2所述的抗菌組合物，其特征在于，所述脂質體包含具有至少14個碳原子，優(yōu)選至少16個碳原子的?；滈L度的磷脂。4、根據權利要求2所述的抗菌組合物，其特征在于，所述天然磷脂源自蛋黃或大豆。5、根據權利要求14中的任意一項所述的抗菌制劑，其特征在于，所述雙胍選自包括氯己定、氟已定、阿來西定、聚己縮胍及其水溶性生理學上可接受的鹽的雙胍的組中。6、根據權利要求5所述的抗菌制劑，其特征在于，所述聚己縮胍具有1,500~15,000g/mo1的分子量和/或12~16的聚合度。7、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，所述水性介質為選自由PBS、Tris緩沖液和HEPES緩沖液組成的組中的緩沖液。8、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，所述水性介質的pH值為68,優(yōu)選7.07.5。9、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，在每種情況中相對于總的類脂，所述脂質體優(yōu)選含有高至50mol%，更優(yōu)選含有15~20mol%的膽固醇。10、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，在每種情況中相對于總的類脂，所述脂質體優(yōu)選含有高至40mol%，更優(yōu)選含有20mol°/。的維生素E。11、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，所述脂質體平均尺寸為50800nm，優(yōu)選150500nm。12、根據前述權利要求中的任意一項所述的抗菌組合物，其特征在于，所述抗菌組合物以混懸劑、乳劑、洗劑、酊劑、噴霧劑、凝膠劑、乳膏劑或軟膏劑的形式存在。13、制備基于包封在脂質體中的抗微生物活性劑的抗菌組合物的方法，其中所述脂質體不含具有陰離子首基的類脂且在其內部具有水性介質，且其中在所述水性介質中含有至少一種雙胍組中的抗微生物活性劑，其特征在于，-通過壓力控制的注射器將乙醇類脂相注入到含有雙胍組中的抗微生物活性劑的水相中；-在嚢泡的形成Jl.生之后，用緩沖液稀釋所述水相；以及-去除未摻入的活性劑。14、根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述類脂相包括選自天然或合成磷脂的組中的磷脂，優(yōu)選自由磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿及其混合物組成的組中。15、根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述磷脂選自具有至少14個碳原子的?；滈L度的磷脂的組中，且優(yōu)選自具有至少16個碳原子的?；滈L度的磷脂的組中。16、根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述天然磷脂源自蛋黃或大豆。17、根據權利要求1316中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述雙胍選自包括氯己定、氟已定、阿來西定、聚己縮胍及其水溶性生理學上可接受的鹽的雙胍的組中。18、根據權利要求17所述的方法，其特征在于，所述聚己縮胍選自具有1,50015,000g/mol的分子量和/或12~16的聚合度的聚己縮胍的組中。19、根據權利要求1318中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述水性介質為選自由PBS、Tris緩沖液和HEPES緩沖液組成的組中的緩沖液。20、根據權利要求1319中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述水性介質的pH值為6~8，優(yōu)選7.0~7.5。21、根據權利要求1320中任意一項所述的方法，其特征在于，在每種情況中相對于總的類脂，所述類脂相優(yōu)選含有高至50mol%，更優(yōu)選含有15~20mol。/。的膽固醇。22、根據權利要求13~21中的任意一項所述的方法，其特征在于，在每種情況中相對于總的類脂，所述類脂相優(yōu)選含有高至40mol%，更優(yōu)選含有20mol%的維生素E。23、根據權利要求1~12中的任意一項所述的抗菌組合物用于制備創(chuàng)傷敷料的用途。24、根據權利要求23所述的用途，其特征在于，用所述組合物噴灑、噴霧或浸潤所述創(chuàng)傷敷料的載體材料。25、根據權利要求24所述的用途，其特征在于，將聚合物溶液與所述組合物混合，并通過干燥或冷凍干燥將所述溶劑完全或部分回收。26、創(chuàng)傷敷料，其特征在于，所述創(chuàng)傷敷料包括根據權利要求112中的任意一項所述的抗菌組合物。27、根據權利要求26所述的創(chuàng)傷敷料，其特征在于，所述創(chuàng)傷敷料是基于纖維素、如輕曱基纖維素的纖維素衍生物、藻酸鹽、脫乙酰殼多糖、淀粉、膠原、聚丙烯酸酯、聚氨基曱酸酯或前述化合物的混合物作為載體材料的。28、根據權利要求26或27所述的創(chuàng)傷敷料，其特征在于，所述創(chuàng)傷敷料以水凝膠、水膠體、海綿、薄膜、膜、非紡織物、紡織物、編織物、梳棉生條或填塞的形式存在。29、根據權利要求2628中的任意一項所述的創(chuàng)傷敷料，其特征在于，相對于所述敷料的干重，所述創(chuàng)傷敷料含有0.01~1.0wt。/。的雙胍。全文摘要本發(fā)明涉及包含雙胍的脂質體和基于該包含雙胍的脂質體的抗菌制劑，所述包含雙胍的脂質體和抗菌制劑的制備，以及它們可能的用途和利用它們的用途的產品，尤其是創(chuàng)傷敷料，其中所述脂質體的特征在于其基本上不含具有陰離子首基的類脂。文檔編號A61K9/127GK101410090SQ200780011145公開日2009年4月15日申請日期2007年3月15日優(yōu)先權日2006年4月1日發(fā)明者克里斯琴·勒雷爾,安德烈亞斯·瓦格納,蒂姆·阿克塞爾·威廉斯申請人:洛曼-勞舍爾國際股份有限公司