專利名稱：MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體的調節(jié)的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及調節(jié)MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R這三種受體中至少一種的表達的物質，特別是在皮膚水平的表達，以改善神經(jīng)介質的效應，從而允許對參與皮膚神經(jīng)分布、血管形成和上皮形成的其他介質的合成的級聯(lián)誘導。
本發(fā)明涉及至少一種調節(jié)MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R這三種受體的基因中至少一種的表達的物質，特別是在皮膚水平上的表達，以維持或促進皮膚水平的細胞穩(wěn)態(tài)，修復皮膚的神經(jīng)分布或血液滋養(yǎng)，并調節(jié)黑色素生成。
對于調節(jié)受體MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中的至少一種的表達，本發(fā)明人指調節(jié)(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)分別編碼蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的基因中的至少一種，并調節(jié)(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中至少一種的相應信使RNA的合成，以及調節(jié)(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的活性。
對于刺激受體MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中的至少一種的表達，本發(fā)明人指刺激，可能是部分刺激分別編碼蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的基因中的至少一種，并刺激，可能是部分刺激對蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中至少一種的相應信使RNA的合成，以及刺激，可能是部分刺激蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的活性。
對于抑制受體MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中的至少一種的表達，本發(fā)明人指抑制，可能是部分抑制分別編碼蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的基因中的至少一種，并抑制，可能是部分抑制對蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質受體中至少一種的相應信使RNA的合成，以及抑制，可能是部分抑制蛋白質MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的活性。
對于術語“修復”，本發(fā)明人是針對某參數(shù)而言，是指此參數(shù)從低于或高于良好生理功能所需的水平恢復到更適合相關受試者的生理水平。
對于術語“產(chǎn)生康樂感“，本發(fā)明人指通過釋放容易與μ-阿片樣物質受體結合的β內啡肽產(chǎn)生的康樂感。
本發(fā)明尤其涉及調節(jié)，尤其優(yōu)選刺激MC-1R基因和/或MC-2R基因和/或μ阿片樣物質R基因的表達，和/或分別由這些基因編碼的蛋白質的表達，特別是在人體中。
本發(fā)明還特別涉及調節(jié)POMC基因產(chǎn)物，以及MC-1R和/或MC-2R受體，和/或μ阿片樣物質R，以提高受體-配體復合物的效用；因此還可調節(jié)POMC基因表達的活性物質也是優(yōu)選的。對于黑色素生成，優(yōu)選刺激或維持或降低POMC基因的表達，以減輕色素沉著。
調節(jié)作用優(yōu)選足以有效實現(xiàn)對表達這些受體中的至少一種受體的目標皮膚細胞增殖和/或分化的刺激，和/或修復，至少部分修復皮膚的神經(jīng)分布。
與對照模型(不接觸活性組分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體基因的表達水平相比，活性組分能夠使模型中這些受體基因的表達提高至少約1.2倍，優(yōu)選至少約2倍，該模型包含至少一種細胞類型，這種細胞類型與該活性組分接觸時會表達這些受體，該活性組分被認為能有效刺激或激活上述受體基因。
與對照模型(不接觸活性組分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質R的蛋白質表達水平相比，活性組分能夠使模型中這些蛋白質的表達提高至少約1.1倍，優(yōu)選至少約1.2倍，這種模型包含至少一種細胞類型，這種細胞類型與該活性組分接觸時會表達這些受體，該活性組分被認為能有效刺激或激活上述受體的表達。
與對照模型(不接觸活性組分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質R基因的表達水平相比，活性組分使得模型中這些基因的表達水平約低于或等于其0.95倍，優(yōu)選0.8倍，這種模型包含至少一種細胞類型，這種細胞類型與該活性組分接觸時會表達這些受體，該活性組分被認為能有效抑制或降低上述受體的表達。
與對照模型(不接觸活性組分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質R基因的表達水平相比，活性組分使得模型中這些基因的表達水平約低于或等于其0.95倍，優(yōu)選0.8倍，這種模型包含至少一種細胞類型，這種細胞類型與該活性組分接觸時會表達這些受體，該活性組分被認為能有效抑制或降低上述受體的表達。
根據(jù)一種具體實施方法，優(yōu)選激活或刺激MC-1R、MC-2R，和/或μ阿片樣物質受體基因，和/或MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體蛋白質的表達，并可能維持或激活POMC基因和/或在角質形成細胞中和/或神經(jīng)細胞，特別是皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡中的神經(jīng)細胞中由POMC基因編碼的神經(jīng)介質。
根據(jù)另一實施方法，這些被表達的受體中的至少一種在角質形成細胞中的表達被抑制或降低，以減少角質形成細胞增殖，特別是與這些皮膚細胞的過度增殖有關的病理學。被表達的受體MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體中的至少一種的表達優(yōu)選在角質形成細胞中被刺激，以減少炎癥反應，特別是與這些皮膚細胞的病狀有關的炎癥反應，包括與這些皮膚細胞的過度增殖有關的病理學。
根據(jù)另一具體實施方法，對黑色素細胞中基因MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達，和/或蛋白質MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達，以及可能的POMC基因的表達和/或POMC基因編碼的神經(jīng)介質的表達進行了調節(jié)。根據(jù)一種具體實施方案，基因MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達，和/或蛋白質MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達被降低以達到增白效果，以及另外可能會維持或降低POMC基因的表達和/或POMC基因編碼的神經(jīng)介質的表達。根據(jù)另一具體實施方案，基因MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達，和/或蛋白質MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達被刺激以達到著色效果，以及另外可能會維持或刺激POMC基因的表達和/或POMC基因編碼的神經(jīng)介質的表達。
本發(fā)明的一方面涉及一種鑒定活性物質的方法，該活性物質能夠調節(jié)至少一種類型的活細胞的增殖和分化，這種細胞能夠表達MC-1R、MC-2R和/或已表征的μ阿片樣物質受體，其特征在于其包括 -使至少一種類型的能夠表達MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體，并可能表達POMC基因的活細胞接觸這種活性物質； -分析MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的表達，其特別目的是鑒定調節(jié)，優(yōu)選刺激MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體表達的活性物質。
有利地，通過對編碼MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的核苷酸序列的表達進行定性和/或定量分析，來分析受體MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的基因表達。
有利地，RT-PCR包括用與SEQ ID No.1、2、3、4互補的DNA核苷酸序列中的至少一部分雜交的引物來擴增編碼MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體，并可能編碼POMC基因核苷酸序列的至少一部分。
SEQ ID N°1MC-1R NM_002386 SEQ ID N°2MC-2R NM_000529 SEQ ID N°3μ阿片樣物質受體NM_000914 SEQ ID N°4POMC NM_000939 所用的活細胞優(yōu)選包括角質形成細胞和/或黑色素細胞和/或神經(jīng)細胞，包括皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡，特別是提取自成年人類受試者特定部位(腹部、胸部等)的皮膚。優(yōu)選使用所謂的“正?！奔毎?，即，例如非轉化細胞(非轉化的腫瘤細胞或非轉化的遺傳修飾細胞)和具有顯著代表性，可用于被研究對象組的細胞類型試驗。
優(yōu)選根據(jù)年齡進行分類，以建立年齡/基因表達關系和年齡/蛋白質合成關系。年輕受試者的年齡介于17至40歲之間；中年受試者的年齡介于40至50歲之間，老年受試者為超過50歲。
鑒定方法優(yōu)選包括分析蛋白質MC-1R(34.7kDa)、MC-2R(33.9kDa)和/或μ阿片樣物質受體(44.8kDa)表達的步驟，該步驟通過這種方法進行，即將凝膠中的蛋白質轉移到硝酸纖維素膜上(Western印記)，此方法特別用于檢測當活性物質與上述活細胞接觸時，對相應蛋白質表達的調節(jié)。
根據(jù)第一種優(yōu)選的實施方法，可表達MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的活細胞類型為角質形成細胞。在這種情況中，發(fā)現(xiàn)該活性組分刺激或提高MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的表達，并可能降低POMC基因的表達。
根據(jù)第二種實施方法，可表達MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的活細胞類型為黑色素細胞。在這種情況中，發(fā)現(xiàn)該活性組分調節(jié)MC-1R和/或μ阿片樣物質受體的表達，并可能調節(jié)POMC基因的表達。
有利地，作用于角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞，包括皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡時，所述活性物質誘導對NGF和VEGF合成的級聯(lián)增加，并因此分別刺激神經(jīng)分布(神經(jīng)元密度和樹突形成)和血管新生。
本發(fā)明的第二個方面涉及上述活性物質的用途；即，該物質可根據(jù)上述篩選方法被鑒定為是有活性的，作為用于化妝用組合物或營養(yǎng)保健用組合物中的活性物質，或用于生產(chǎn)藥品，優(yōu)選皮膚藥組合物，尤其用來調節(jié)，優(yōu)選刺激或降低蛋白質MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的合成，尤其用來誘導角質形成細胞和/或黑色素細胞和/或神經(jīng)細胞(特別是皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡中的神經(jīng)細胞)的增殖和/或分化和/或成熟。
本發(fā)明的第三方面涉及上述活性物質的用途，作為活性物質用于化妝用組合物或營養(yǎng)保健用組合物，或用于生產(chǎn)藥物組合物，優(yōu)選地是皮膚藥組合物，特別用來預防和/或抵抗時間性皮膚老化或由日光導致的老化和/或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，或增強上皮形成，或改善細胞增殖和分化，特別是在表皮水平，或預防或抵抗皮膚血管形成的減少，或改善皮膚血管形成，或改善血管通透性過高(hyperpermeability)，或改善皮膚結疤過程中的血管生成，或預防和/或抵抗皮膚神經(jīng)分布減弱，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生一種康樂感，或改善膚色和/或色澤和/或減輕皮膚色素沉著，特別是通過增加或減少皮膚色素沉著來改善，特別是當這種色素沉著表現(xiàn)出局部斑點例如色斑時。
本發(fā)明的第四方面涉及化妝用組合物或營養(yǎng)保健用組合物，用來預防和/或抵抗皮膚老化和/或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，或增強上皮形成，或改善細胞增殖和分化，特別是在表皮水平，或預防或抵抗皮膚血管形成的減少，或改善皮膚血管形成，或改善血管通透性過高，或改善皮膚結疤過程中的血管生成，或預防和/或抵抗皮膚神經(jīng)分布減少，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生一種康樂感，或改善膚色和/或色澤和/或減輕皮膚色素沉著，特別是通過增加或減少皮膚色素沉著改善，特別是當這種色素沉著表現(xiàn)出局部斑點例如色斑時；上述組合物包括作為活性組分的上述定義的活性物質，可能還包括上述物質。
本發(fā)明的第五方面涉及一種藥物組合物，特別用來預防和/或抵抗皮膚老化或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，或增強上皮形成，或改善細胞增殖和分化，特別是在表皮水平，或預防和/或抵抗皮膚血管形成的減少，或改善血管通透性過高，或改善皮膚結疤過程中的血管生成，或預防或抵抗皮膚神經(jīng)分布減弱，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生一種康樂感，或改善膚色和/或色澤和/或改善皮膚色素沉著，特別是通過增加或減少皮膚色素沉著改善，特別是當這種色素沉著表現(xiàn)出局部斑點例如色斑時；上述組合物包括作為活性組分的上述定義的活性物質，可能還包括上述物質。
本發(fā)明的第六方面涉及化妝性護理方法，其特征是將上述定義的化妝用組合物，或上述定義的活性物質用于皮膚以獲得改善的美化效果。
由專業(yè)人員通過簡單的常規(guī)做法確定所述活性物質的有效量。
本發(fā)明還涉及預防或治療處理方法，作為上述全部目的和應用的一部分。
發(fā)明詳述 本發(fā)明人已首次表明在時間性皮膚老化過程中受體MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R的表達會降低，特別是當這些受體由人類皮膚的角質形成細胞表達時。
本發(fā)明人還首次鑒定了在時間性皮膚老化過程中POMC基因表達的提高，特別是在人類皮膚角質形成細胞中。
因此本發(fā)明人開發(fā)了角質形成細胞中的篩選方法，用以尋找活性物質，特別是植物提取物或已表征的化學分子或通過生物技術轉化而來的分子中的活性物質，這些活性物質特別是刺激編碼受體MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R的mRNA的表達，并可能維持、刺激或抑制編碼神經(jīng)介質(由POMC基因編碼)的mRNA的表達。然后測試所選活性物質對mRNA相應的蛋白質表達的作用。
本發(fā)明人還表征了角質形成細胞中MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體的表達。之前，僅鑒定了角質形成細胞中MC-2R的mRNA(Moustafa M，Szabo M，Ghanem GE，Morandini R，Kemp EH，MacNellS，Haycock JW.，J Invest Dermatol.，2002年12月；119(6)1244-53.)，因此本發(fā)明人最先鑒定了角質形成細胞中的蛋白質MC-2R，并指出ACTH不僅通過與角質形成細胞中的MC-1R結合發(fā)揮其活性，還通過與MC-2R結合發(fā)揮其活性。
因此，本發(fā)明描述了物質的用途，所述物質刺激編碼神經(jīng)介質(由POMC基因編碼)的至少一種受體的基因中的至少一種的表達，該受體優(yōu)選選自至少一種皮膚細胞類型中的MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R，這種皮膚細胞表達這些受體中的至少一種。本發(fā)明描述了物質作為活性物質的用途，用于組合物的制備，以刺激選自α-MSH、ACTH和β-內啡肽中的一種神經(jīng)介質與其相應受體間的相互作用。
已經(jīng)將所選活性物質用于化妝用組合物、營養(yǎng)保健用組合物和藥物組合物中，優(yōu)選是皮膚藥組合物，特別用于預防和/或抵抗表皮變薄，特別是時間性或光誘導的皮膚老化過程中的表皮變薄。
有利地，上述物質提高或刺激編碼神經(jīng)介質(由POMC基因編碼)的受體的基因的表達，以抵抗或預防角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞中配體和受體間平衡的失調。
有利地，上述物質降低POMC基因的表達，以抵抗或預防在角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞中分別觀察到的配體和受體表達的失調，特別是在老化過程中。
有利地，上述物質組合使用，以抑制POMC基因的表達并刺激受體基因的表達。
有利地，上述物質提高或維持POMC基因的表達以提高α-MSH、ACTH和β-內啡肽的上述作用。
有利地，上述物質提高角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞中由POMC基因編碼的神經(jīng)介質的至少一種受體的表達，以預防和/或抵抗皮膚老化或應激作用引起的變化，如皮膚老化過程中所觀察到的那些變化。
因此，本發(fā)明涉及這些受體的調節(jié)，優(yōu)選刺激，特別是減輕失調，尤其是α-MSH，和/或ACTH，和/或β-內啡肽與其相應受體的相互作用的減少，該作用的減少與細胞老化有關，并影響角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞，包括皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡。
有利地，上述物質增加NGF的合成，從而可能在皮膚水平上增加外周神經(jīng)的生長。因此本發(fā)明涉及物質的用途，該物質允許皮膚神經(jīng)分布的增加，并被觀察到在老化過程中或應激作用引起的變化中會減少，正如在皮膚老化過程中所觀察到的那些變化。
有利地，上述物質增加VEGF的合成，從而可能在皮膚水平上增加血管形成。因此本發(fā)明涉及物質的用途，該物質可使皮膚得到更好的滋養(yǎng)，并被觀察到在老化過程中或應激作用引起的變化中會減少，正如在皮膚老化過程中所觀察到的那些變化。
能刺激角質形成細胞和/或神經(jīng)細胞中MC-1R和/或MC-2R和/或μ阿片樣物質受體表達的物質優(yōu)選選自 4種已表征的分子 -苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氫-薁并[4，5-b]呋喃-4-基， -Z-十氫-6，8a-二羥基-1-異丙基-3a，6-二甲基薁-5-基-2-甲基丁-2-烯酸酯 -2.6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5-6(1-異丙基-1-羥基環(huán)戊烷))1，2環(huán)氧環(huán)庚烷(CAS號352220-52-1)及其酯 -7-乙酸酯-2，6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5-6(1-異丙基-1-羥基環(huán)戊烷))1，2環(huán)氧環(huán)庚烷，已知其CAS號為86992-41-8，其通用名為lapiferrin； 以及含有這些已表征的分子的植物提取物。
6種植物提取物淡黃鼬瓣花(Galeopsis ochroleuca)(野生大麻)、普通歐蓍草(Achillea millefolium)、野生芋頭(Colocasia esculenta)、歐洲酸櫻桃(Prunus cerasus)、黑刺李(Prunus spinosa)、長春布寧提取物(夾竹桃科(Apocynacea)Amsonia Abrenaemontan) 4種生物技術水解產(chǎn)物，通過用現(xiàn)有微生物發(fā)酵植物提取物獲得用乳酸菌特別是乳桿菌，例如植物乳桿菌(lactobacillus plantarum)轉化芒果、椰棗或番木瓜提取物，或用乳酸菌特別是乳桿菌，例如副干酪乳桿菌(lactobacillus paracasei)轉化香蕉提取物，及其混合物。
在這些已表征的分子中，lapiferin，特別是多石阿魏(Ferula lapidosa)提取物中的，或來自多石阿魏提取物的，以及苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氫-薁并[4，5-b]呋喃-4-基是本發(fā)明的優(yōu)選物質。
在植物提取物中，普通歐蓍草和黑刺李是本發(fā)明的優(yōu)選物質。
根據(jù)優(yōu)選實施方案，所述植物提取物優(yōu)選通過將植物(優(yōu)選根、根狀莖、莖、樹皮、花、果實、種子、胚原基或葉)浸泡于1-10％(p/p)(通常為1-5％)的溶劑中或溶劑混合物中獲得，通常為水和醇、二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例為100/0至0/100，優(yōu)選浸泡于水中。最后將獲得的提取物過濾或蒸餾，以回收可溶部分，將此部分過濾，優(yōu)選用0.45μm的濾膜。在微生物存在下通過發(fā)酵植物提取物以獲得生物技術水解產(chǎn)物，該微生物通常來自乳桿菌科，特別是植物乳桿菌或副干酪乳桿菌，和雙歧桿菌(bifidobacterium)科，特別是長雙歧桿菌(bifidobacterium longum)，或酵母屬(Saccharomyces)。優(yōu)選對這些水解產(chǎn)物進行進一步過濾，優(yōu)選用0.45μm的濾膜，以獲得活性組分。
通過溶解于溶劑中制備已表征的分子(包括lapiferin和苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氫-薁并[4，5-b]呋喃-4-基)，這種溶劑通常為DMSO、乙醇、二醇，特別是溶解于濃度為0.1％的DMSO中。
上述活性物質用于化妝用組合物時，對于植物提取物和生物技術水解產(chǎn)物，其含量優(yōu)選介于0.01％至5％(v/v)，對于已表征的分子，其含量介于1.10-7％至1％(v/v)，優(yōu)選介于1.10-5％至1.10-1％。
上述物質還表現(xiàn)出對神經(jīng)細胞中的MC-1R和/或MC-2R和/或μ阿片樣物質受體表達的刺激作用，特別是在皮膚神經(jīng)網(wǎng)絡中。
本發(fā)明特別涉及一種用于化妝護理或預防或治療處理的組合物，用于改善皮膚結疤過程中的通透性過高，改善細胞增殖和分化，特別是在表皮水平，從而改善皮膚上皮形成，促進維持皮膚神經(jīng)分布。
本發(fā)明還涉及用于預防或治療處理的組合物，以改善神經(jīng)分布，預防和/或抵抗由于與神經(jīng)細胞數(shù)量減少和/或活力降低相關導致的病理學，特別是在結疤和/或傷口愈合、妊娠紋、燒傷、牛皮蘚或皮炎的情況下。
上述活性物質以及下文所述的調節(jié)MC-1R和/或μ阿片樣物質R表達的活性物質優(yōu)選與選自以下的活性物質組合使用 -刺激皮膚神經(jīng)營養(yǎng)性能和/或活化敏感皮膚神經(jīng)的活性組分，例如專利申請FR 2825273所引用的組分，紅椒(Capsicum annuum)的提取物、紅色素(紅辣椒)、或胡椒(Piper nigrum)、或谷氨酰胺基乙基吲哚(Exsymol)； 具有模擬β內啡肽效果的活性組分，以改善皮膚的屏障功能，例如專利申請US 2006069032所引用的組分，可可豆殼提取物； -刺激β內啡肽合成的活性組分，可獲得康樂感，例如Tephroline，來自一種植物灰毛豆(tephrosia purpurea)(Soliance)； -刺激細胞增殖和/或細胞分化的活性組分，旨在具有抗老化活性，例如下列分子NGF、α-MSH、β內啡肽、或衍生物，例如專利申請FR2857874中所述的那些物質，P3-內啡肽。
-保護成纖維細胞生長因子(特別是FGF2)不被降解的活性組分，例如申請人提交并公布的GB 244036專利申請中所述的植物提取物，特別是黃葵(Hibiscus Abelmoscus)提取物； -刺激成纖維細胞活性和/或增殖的活性組分，例如發(fā)酵大豆多肽，這是申請人以Phytokine TM這一商品名銷售的產(chǎn)品，可與黃葵提取物組合使用； -活化透明質酸酶合成酶的活性組分，特別是活化透明質酸酶合成酶2，如專利FR2893252所述； -刺激賴氨酰氧化酶(例如LOXL)活性和/或合成的活性組分，例如專利FR2855968所述的組分，特別是用于刺激彈性纖維的蒔蘿提取物。
-具有消炎特性(例如抑制PLA2)的活性組分，特別是專利FR2847267中所述的組分，特別是野葛根提取物
-可改變膚色的活性物質，例如用于亮化和/或美白皮膚的活性組分； -具有消除浮腫特性的活性物質，例如橙皮素月桂酸酯

或五羥黃酮辛酸酯
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，發(fā)明人鑒定了一些活性物質，這些活性物質可調節(jié)，優(yōu)選提高或降低選自以下的至少一種受體的表達黑色素細胞表達的MC-1R和μ阿片樣物質受體，和/或調節(jié)黑色素細胞表達的POMC基因的表達。此實施方案的具體目標在于改善膚色和/或改善皮膚色素沉著，特別是當這種色素沉著表現(xiàn)出局部瑕疵例如色斑時，以預防和/或抵抗與老化有關或無關的特定色素斑點的色素沉著或色素脫失，如下文所述。
本發(fā)明人還開發(fā)了一種用于黑色素細胞的篩選方法，以尋找活性物質，特別是植物提取物或已表征的化學分子或通過技術轉化而來的分子等活性物質，特別用來調節(jié)編碼MC-1R和μ阿片樣物質R的mRNA的表達，并可能調節(jié)編碼神經(jīng)介質(由POMC基因編碼)的mRNA的表達。然后測試此類選擇的活性物質對mRNA的相應蛋白質表達的作用。
并將所選活性物質并入化妝用組合物、營養(yǎng)保健用組合物和藥物組合物中，優(yōu)選是皮膚藥制劑，特別用于預防和/或抵抗色素沉著或色素脫失。
有利地，上述物質調節(jié)黑色素細胞中由POMC基因編碼的神經(jīng)介質的至少一種受體的表達，以預防或抵抗色素沉著或色素脫失。
有利地，上述物質POMC基因的表達，以預防或抵抗色素沉著或色素脫失；特別是，保留可同時刺激黑色素細胞中的POMC和受體的物質以增加色素沉著，并保留可同時減少或抑制黑色素細胞中的POMC和受體的物質以減少色素沉著。這些物質可組合使用以刺激POMC表達和/或受體表達并增加色素沉著或抑制POMC和受體并減少色素沉著。
根據(jù)一個實施方案，刺激黑色素細胞中MC-1R和/或μ阿片樣物質受體中至少一種受體的表達和/或刺激POMC表達的物質可為選自以下的物質 -1種已表征的分子1甲基β咔啉3羧酸； -下列植物提取物大豆粉、(紅色)菝葜(salsaparilla)(麗花菝葜(Smilax ornata))、普通歐蓍草、Cecropia obtusa、月見草(Oenotherabiennis)、胡蘿卜、綿馬、歐洲酸櫻桃(歐洲酸櫻桃)、或其任何混合物，以及； -通過用現(xiàn)有微生物發(fā)酵植物提取物獲得的生物技術水解產(chǎn)物，其選自發(fā)酵過的酵母或羽扇豆，尤其是用乳酸菌(例如植物乳桿菌)發(fā)酵發(fā)酵植物提取物獲得的生物技術水解產(chǎn)物；用乳酸菌轉化(尤其是用乳桿菌轉化，例如植物乳桿菌)的番木瓜、椰棗或大豆提取物；用雙歧桿菌(例如長雙歧桿菌)發(fā)酵的檸檬提取物，及其任何混合物。
活性物質優(yōu)選可刺激MC-1R受體和/或刺激黑色素細胞中的POMC的表達的那些活性物質，優(yōu)選為 -1種已表征的分子1甲基β咔啉3羧酸； -下列植物提取物大豆粉、月見草、菝葜(麗花菝葜)、Cecropiaobtusia、普通歐蓍草、胡蘿卜、歐洲酸櫻桃。
-通過用現(xiàn)有微生物發(fā)酵植物提取物獲得的生物技術水解產(chǎn)物，其選自用乳酸菌轉化(尤其是用乳桿菌轉化，例如植物乳桿菌)的番木瓜、羽扇豆、酵母、椰棗或大豆提取物。
該組合物特別用于增加色素沉著，具有增黑作用，以預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素脫失斑點。
根據(jù)第二個實施方案，降低黑色素細胞中POMC基因表達的物質可為淡黃鼬瓣花(野生大麻)以及歐刺柏(Juniperus communis)(杜松子)的水提取物或水醇(hydroalcoolic)提取物，并且/或者降低黑色素細胞中MC-1R和/或μ阿片樣物質受體中至少一種的表達的物質為歐刺柏(杜松子)的水提取物或水醇提取物。
該組合物特別用于減少色素沉著，具有增白或增亮作用，以提高皮膚亮度，預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素沉著斑點。
本發(fā)明特別涉及用于化妝品或皮膚-化妝護理或預防性處理或治療性處理的組合物，用來改變皮膚亮度以及色素沉著，特別是與老化有關或無關的色素斑點。
本發(fā)明的化合物被制成局部用組合物的形式，特別是化妝用組合物或藥物組合物，優(yōu)選可用于皮膚的皮膚用組合物。因此，對于這些組合物，賦形劑例如包含選自以下的至少一種化合物防腐劑、軟化劑、乳化劑、表面活性劑、保濕劑、增稠劑、調節(jié)劑、消光處理劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、調質劑、閃光劑、成膜劑、增溶劑、色素、染料、香料和遮光劑。這些賦形劑優(yōu)選選自氨基酸及其衍生物、聚甘油類、酯類、聚合物和纖維素衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂類、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶、基于蔗糖的穩(wěn)定劑、維生素E及其衍生物、天然和合成蠟、植物油、甘油三酯、不可皂化物、植物固醇類、植物酯類、硅氧烷及其衍生物、蛋白水解產(chǎn)物、荷荷芭油及其衍生物、脂溶性/水溶性酯、甜菜堿類、胺化物、蔗糖酯植物提取物、二氧化鈦、甘氨酸、對羥苯甲酸酯，更優(yōu)選丁二醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、乙二醇-15硬脂基醚、鯨蠟硬脂醇(cetearyl alcohol)、苯氧乙醇、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯、羥苯甲酸丁酯、丁二醇、天然生育酚、甘油、二羥鯨蠟醇磷酸酯鈉(sodium dihydroxycetyl Phosphate)、異丙基羥基鯨蠟基醚(isopropyl hydroxycetyl ether)、硬脂酸乙二醇酯、三異壬酸甘油酯(triisononanoin)、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、異鏈烷烴、月桂基聚氧乙烯(7)醚、卡波姆、丙二醇、甘油、沒藥醇、聚二甲基硅氧烷、氫氧化鈉、PEG 30-二聚羥基硬脂酸、癸酸/辛酸甘油三酯、鯨蠟硬脂醇辛酸酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、荷荷芭油、硫酸鎂、EDTA、環(huán)狀聚二甲基硅氧烷、黃原酸膠、檸檬酸、十二烷基硫酸鈉、礦物蠟和礦物油、異硬脂醇異硬脂酸酯、丙二醇二壬酸、丙二醇異硬脂酸酯、PEG 8、蜂蠟、氫化棕櫚仁油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、鯨蠟醇乳酸酯、羊毛脂醇、二氧化鈦、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯和等滲鹽水。
理想地，上述化合物配制成選自以下的劑型水溶液或基于油的溶液、基于水的乳膏或凝膠或油基凝膠，特別是瓶裝或管裝，特別是沐浴液、香波、乳液、乳劑、微乳劑或納米乳劑，特別是水包油或油包水或各種基于硅氧烷的乳膏或凝膠或油基凝膠；潤膚液，特別是玻璃瓶裝或塑料瓶裝或噴霧裝、吸塑裝、液體皂、皮膚用皂、香膏劑、泡沫劑、無水產(chǎn)品，優(yōu)選液體、乳膏劑或固體，例如棒狀的，特別是唇膏。
本文所用的術語“局部應用”指將本發(fā)明的組合物用于或噴在皮膚表面。
本文所用的術語“可用于皮膚”表示所用化合物適合與人的皮膚接觸，不會產(chǎn)生不必要的毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、過敏反應或其等同狀況。
專業(yè)人員將許多用于活性化妝品成分用于改善皮膚健康和/或外觀。這些專業(yè)人員知道怎樣配制這些化妝品或皮膚用組合物以獲得最佳效果。此外，本發(fā)明所述的化合物與其他物質組合使用時具有協(xié)同作用。這些組合使用也在本發(fā)明范圍內。CFTA Cosmetic Ingredient Handbook(CFTA化妝品成分手冊)第二版(1992)描述了化妝品和藥品行業(yè)目前常用的特別適合局部使用的各種化妝品和藥品成分。這類成分的一些實例包括但不限于下列化合物研磨劑、吸收劑化合物、具有美化目的化合物例如香水、色素、染料、精油、收斂劑等(例如，丁香油、薄荷腦、樟腦、桉樹油、丁香酚、乳酸甲酯、金縷梅精餾液)，祛痘劑、抗絮凝劑、消沫劑、抗菌劑(例如碘代丙烷基丁基氨基甲酸酯)、抗氧化劑、粘合劑、生物添加劑、吸濕劑、膨脹劑、螯合劑、添加劑、殺菌劑、變性劑、外部止痛劑、成膜材料、聚合物、乳濁劑、pH調節(jié)劑、還原劑、褪色或澄清劑(例如，對苯二酚、曲酸、抗壞血酸、磷酸抗壞血酸酯鎂鹽、抗壞血酸葡萄糖胺)、調節(jié)劑(例如保濕劑)、皮膚舒緩及和/或抗疤痕劑(例如泛醇及其衍生物，例如乙基泛醇)、蘆薈、泛酸及其衍生物、尿囊素、沒藥醇和甘草酸二鉀鹽、增稠劑、維生素及其衍生物或等同物。
附圖簡述 在圖中

圖1顯示了在老化過程中，人體活組織切片的角質形成細胞中的受體MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體基因表達的顯著降低。
圖2顯示了通過對人體正常皮膚的活組織切片部分進行免疫熒光檢查觀察到的微管蛋白βIII和200神經(jīng)絲表達的顯著降低。
圖3和4分別顯示了年齡介于15至75歲的受試者的微管蛋白βIII和200神經(jīng)絲的相對表達率。
圖5和6分別顯示了與圖3和4中的研究相對應的統(tǒng)計分析。
當閱讀解釋性描述時，這些描述涉及僅用于說明目的且不以任何方式限制本發(fā)明領域的實施例，本發(fā)明的其他目的、特性和益處對本領域技術人員而言是顯而易見的。
這些實施例是本發(fā)明不可或缺的一部分，對于本文所述的與任何先前技術相比的任何新特性，其整體包括實施例，均為構成本發(fā)明功能及一般方面完整性的一部分。
因此，每個實施例都有一般范圍。
實施例 實施例1通過免疫組織學證明人體活組織切片上的蛋白質MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體的表達水平在老化過程中的降低 發(fā)明人已經(jīng)證明了取自年輕女性(年齡低于40歲)和老年女性(年齡超過50歲)的活組織切片中MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體在蛋白質水平上的表達在時間性老化過程中的變化。(見圖1取自30或60歲人類患者的人體活組織切片中的受體表達-免疫組織化學結果) 此研究用免疫組織學方法進行。
由于使用了抗-MC-1R(1/500)、抗-MC-2R(1/200)和抗-μ阿片樣物質受體(1/1000)的抗體，從而得以明確的證明。
將重建的皮膚模型(

Coletica，里昂，法國)和活組織切片制成冷凍橫切片，或者然后用石蠟密封，用于免疫標記。
所用抗體為抗-MC-1R、抗-MC-2R和抗-μ阿片樣物質受體(Chemicon International公司)的抗體。用合適的經(jīng)綴合的二抗進行檢測。
結果示于圖1，其證明老化過程中角質形成細胞中的受體MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R的基因的表達水平降低。
實施例2通過實時RT-PCR方法證明在老化過程中成年人角質形成細胞中MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體基因表達水平的降低和POMC基因表達水平的增加 本發(fā)明還涉及在時間性老化過程中，人類活組織切片的角質形成細胞的受體MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R基因表達的變化，和POMC基因表達水平的變化。用實時RT-PCR(逆轉錄酶聚合酶定量鏈式反應)分析這四種目的基因及肌動蛋白基因的表達。此技術通過將一種基因與肌動蛋白基因的表達(視為常數(shù))進行對比，對這種基因表達進行精確定量。從而對此基因表達水平的調節(jié)進行定量。
將總RNA用“SV 96總RNA分離系統(tǒng)”試劑盒(Promega，Charbonnieres，法國)純化。將純化的RNA懸于100μl無RNA酶水(Promega，Charbonnieres，法國)中，測定后分到平板中(96孔微量滴定板，10μl總RNA(5ng/μl每PCR))。此項目中選用的引物如表I所示 表I 在OPTICON溫度循環(huán)器中用“Quanti Tect SYBR Green RT-PCR”試劑盒(Qiagen，法國)對含mRNA的平板進行實時RT-PCR技術，其進行擴增循環(huán)。在50℃下逆轉錄(RT)30分鐘，然后在95℃下15分鐘，以抑制逆轉錄酶，激活聚合酶，變性獲得的互補DNA(cDNA)。順序進行50個循環(huán)的序列聚合反應(PCR)(95℃15秒，60℃30秒，72℃30秒)。每個循環(huán)結束時，讀取熒光值，該值與片段數(shù)成比例。用每個基因的表達水平與肌動蛋白表達水平之比定義表達水平。
發(fā)明人指出年齡超過52歲的女性中MC-1R基因的表達比年輕女性低4倍，這具有統(tǒng)計學顯著性。
發(fā)明人指出與年輕女性年齡超過5歲的女性中MC-2R基因的表達比該年輕女性低8倍，這具有統(tǒng)計學顯著性。
發(fā)明人指出年齡超過55歲的女性中μ阿片樣物質受體基因的表達比年輕女性低6.5倍，這具有統(tǒng)計學顯著性。
發(fā)明人指出年齡超過50歲的女性中POMC基因的表達比年輕女性高5倍，這具有統(tǒng)計學顯著性。
總之，本發(fā)明允許人體角質形成細胞中的受體及其配體表達間的平衡出現(xiàn)波動，以支持配體增多和所有受體減少。
實施例3分析受體MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質R的信使RNA和POMC的mRNA的表達，例如在使角質形成細胞與活性組分接觸或不與其接觸的條件下，通過定量RT-PRC進行分析 本發(fā)明特別涉及篩選新分子的方法，此分子可誘導3種受體MC-1R、MC-2R和/或μ阿片樣物質受體的合成，以恢復重建皮膚，恢復人體皮膚活組織切片中的老化角質形成細胞中相關受體的生理表達，這種生理表達可在年輕皮膚中的角質形成細胞中觀察到。
所述活性組分具有不同來源(例如植物或合成分子)。
特別是，所述植物提取物通過將植物(優(yōu)選根、根狀莖、莖、樹皮、花、果實、種子、胚芽或葉)浸泡于1-10％(p/p)(通常為1-5％)的一種溶劑或溶劑混合物中獲得，通常為水和乙醇、乙二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例為100/0至0/100，優(yōu)選浸泡于水中。最后將獲得的提取物過濾或蒸餾，以回收可溶部分，將此部分過濾，優(yōu)選0.45pm的濾膜。在微生物存在下通過發(fā)酵植物提取物獲得生物技術水解產(chǎn)物，其中所述微生物通常來自乳桿菌屬，特別是植物乳桿菌或副干酪乳桿菌，和雙歧桿菌屬，特別是長雙歧桿菌或酵母菌。然后對這些水解產(chǎn)物進行進一步過濾，優(yōu)選0.45μm的濾膜，以獲得活性組分。
通過溶解于溶劑中制備所述已表征的分子，這種溶劑通常為DMSO、乙醇、乙二醇，特別是溶解于濃度為0.1％的DMSO中。
將活性組分溶于培養(yǎng)環(huán)境中，然后對角質形成細胞進行試驗對于植物提取物和生物技術水解產(chǎn)物，其含量通常介于0.1％至2％(v/v)，特別是介于0.5％至1％，對于已表征的分子，通常介于0.001％至0.01％。在本實施例培養(yǎng)環(huán)境中，對與植物提取物和生物技術水解產(chǎn)物，采用的是1％的含量，對于已表征的分子，采用的是0.01％的含量。
通過酶消化從正常人的整形手術中獲取角質形成細胞，在用于角質形成細胞的特異性環(huán)境中使該角質形成細胞增殖，然后接種(例如每平方厘米50000個)到24孔板中，然后在嚴格無血清環(huán)境中在單層板中進行培養(yǎng)。匯合后，將細胞與用培養(yǎng)基稀釋的活性物質接觸，通常接觸24小時。
用未處理的對照樣(僅培養(yǎng)基)和3個陽性對照樣(1ng/ml TGF-β，50pg/ml IL-1α和100ng/ml TNF-α)進行平行試驗，例如在同一個培養(yǎng)板上。先前已試驗1ng/ml TGF-β，50pg/ml IL-1α和100ng/ml TNF-α，通過分析mRNA(例如通過定量RT-PCR，對于這3種誘導劑用x2或x.08)，已經(jīng)驗證這三種濃度的細胞因子對3種受體的mRNA合成的刺激作用. 將細胞與活性物質接觸后，例如接觸24小時后，移去培養(yǎng)環(huán)境，保藏細胞，例如先用pH 7.4的磷酸鹽溶液洗滌，然后在-80℃冷凍干燥。提取總RNA，例如用二氧化硅柱96-孔提取試劑盒，然后分到96-孔分光光度計上，在260nm處進行測定(純度指標280nm處蛋白質的量)。將RNA稀釋，例如稀釋到5ng/μl。進行第1步中的定量RT-PCR，例如在96-孔板上對50ng初始RNA進行，對肌動蛋白、MC-1R、MC-2R、μ阿片樣物質R和POMC基因進行。使用每種基因的特定引物，例如0.5μM，見上表I中的明確說明。
擴增的各項參數(shù)如下在OPTICON溫度循環(huán)器中用“Quanti TectSYBR Green RT-PCR”試劑盒(Qiagen，法國)對含mRNA的板實施實時RT-PCR技術，進行擴增循環(huán)。在50℃下逆轉錄(RT)30分鐘，然后在95℃下15分鐘，以抑制逆轉錄酶，激活聚合酶，變性獲得的互補DNA(cDNA)。順序進行50個循環(huán)的聚合(PCR)(95℃15秒，60℃30秒，72℃30秒)。每個循環(huán)結束時，讀取熒光值，該值與擴增的片段數(shù)成比例。用每個基因的表達水平與肌動蛋白基因表達水平之比定義表達水平。
基因MC-IR、MC-2R、μ阿片樣物質受體和POMC的表達水平用與陰性對照(未處理)進行比較得出的變化百分數(shù)表示。作為受試物的這些活性物質如下表II所示 表II “對照X”指“對照乘以” 結論960中的13種活性物質在所考慮的條件下可顯著提高角質形成細胞中編碼MC-1R、MC-2R或μ阿片樣物質R的基因的mRNA的(表達)率。此外，4種活性物質特別抑制了POMC基因的表達。
實施例4分析受體MC-1R和μ阿片樣物質R的信使RNA的表達，例如在使黑色素細胞與活性組分接觸或不接觸的條件下，通過定量RT-PRC進行 除了細胞培養(yǎng)以外，此實驗的其他實驗條件與上一個實施例相同。
通過酶消化從正常成人的整形手術中獲取黑色素細胞，在黑色素細胞特定的環(huán)境中使黑色素細胞增殖，然后接種(例如每平方厘米50000個)到24孔板中，然后在黑色素細胞特定的環(huán)境中培養(yǎng)。匯合后，將細胞在培養(yǎng)環(huán)境中與稀釋的活性物質接觸，通常接觸24小時。
表III “對照X”指“對照乘以” 結論10種活性物質提高了黑色素細胞中MC-1R基因的表達；9種活性物質提高了POMC基因的表達，并且2種活性物質降低了黑色素細胞中POMC基因的表達。
實施例5檢測活性組分作用后角質形成細胞中的MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體蛋白 分別用下列商業(yè)化的多克隆抗體通過電泳確定蛋白質MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體的特性OPA1-15013(Affinity生物試劑)、AB5128(Chemicon International)和AB5511(Chemicon International)。
在K-SFM環(huán)境中在含5％CO2的大氣中于37℃下培養(yǎng)細胞，K-SFM(Invitrogen)中含BPE(25mg)、EGF(2.5μg)和normocin。
用PBS溶液洗滌細胞，在4℃下在蛋白酶抑制劑的存在下用裂解液(Tris 50mM，NaCl 250mM，pH 7.5，1％triton)提取30分鐘，提取出蛋白質。將裂解產(chǎn)物離心分離(15分鐘，13,000g)。用β-巰基乙醇存在下用Laemmli溶液稀釋漂浮物，然后電泳。
將蛋白質在4-12％SDS-聚丙烯酰胺凝膠中電泳分離，用于免疫檢測。將所得蛋白質轉移到硝酸纖維素膜(Biorad)上。然后在室溫下將膜浸泡于含3％BSA的TBS溶液中一小時。在4℃下用一抗培養(yǎng)過夜，然后在室溫下用偶聯(lián)了Alexa 488(invitrogen)的二抗對上述蛋白質進行免疫檢測，時間為1小時。
上述抗體以如下稀釋度使用5μg/mL抗-MC-1R(抗體)、5μg/mL抗-MC-2R(抗體)和1/1000抗-μ阿片樣物質R(抗體)。
通過圖像分析進行半定量化。作為受試物的這些活性物質如下表IV所示 表IV “對照X”指“對照乘以” 結論蛋白質水平的提高證實了在基因水平所觀察到的由活性物質誘導的提高。淡黃鼬瓣花、月見草和兩種已表征的分子雖然未提高μ阿片樣物質R基因的表達，但是誘導了其蛋白質表達的提高。
實施例6人體活組織切片中βIII微管蛋白和神經(jīng)絲200的免疫檢測 發(fā)明人已通過免疫熒光法表明在時間性老化過程中，微管蛋白βIII和神經(jīng)絲200在神經(jīng)生物性老化過程中會減少(圖2)。發(fā)明人選擇了這兩種標記物用于檢測皮膚中軸突延長的存在。標記物微管蛋白βIII可用于對細胞核數(shù)量和神經(jīng)網(wǎng)絡密度進行定量化，標記物神經(jīng)絲200更適于指示成熟的神經(jīng)網(wǎng)絡。通過對80位年齡介于17歲至75歲的女性的乳房造影法活組織切片進行的免疫熒光學檢查，發(fā)明人已證實超過38歲的女性的微管蛋白βIII的表達要降低3.7倍，神經(jīng)絲200的表達則降低3.5倍。上述抗體被用于下列稀釋液中1∶500(抗-微管蛋白βIII)和1∶500(抗-神經(jīng)絲200)。用結合了ALEXA 594的抗小鼠IgG(山羊)加入到ALEXA594，稀釋到1∶100來檢測免疫復合物。
圖2顯示了通過免疫熒光法對人體正常皮膚中的微管蛋白βIII和神經(jīng)絲200進行的檢測。
所謂的年輕受試者(26歲)體內微管蛋白βIII的免疫檢測見圖A，所謂的老年受試者(56歲)體內微管蛋白βIII的免疫檢測見圖B。所謂的年輕受試者(26歲)體內神經(jīng)絲200的免疫檢測見圖C，所謂的老年受試者(56歲)體內神經(jīng)絲200的免疫檢測見圖D。用白線表示真皮-表皮的交界處。每個圖左上方的方塊表示使用對照同種型抗體的陰性對照。
圖3和4分別顯示了年齡介于15至75歲的受試者的微管蛋白βIII和200神經(jīng)絲的相對表達率。紅色箭頭表示曲線轉折點。圖5和6分別顯示了與圖3和4中的研究相對應的統(tǒng)計分析。結果顯示，年輕受試者體內βIII微管蛋白和神經(jīng)絲200的表達比38歲受試者體內的分別高3.7和3.5倍。所得結果代表了平均±SD，t檢驗的p值＝0.05。
實施例7角質形成細胞培養(yǎng)中的漂浮物(floater)分泌的NGF和VEGF的量 將老年受試者的角質形成細胞進行培養(yǎng)，將細胞與活性物質接觸一段時間，例如24小時，然后恢復環(huán)境，用ELISA技術檢測角質形成細胞分泌的NGF或VEGF。所用方法與研發(fā)系統(tǒng)提供者(DY256)用于NGF的方法和Clinisciences(KHG0112)用于VEGF的方案一致。受試活性物質中，下列受試活性物質表現(xiàn)出了最強的調節(jié)作用，特別是對NGF，如表V所示。
表V 實施例8存活的人體活組織切片中βlll微管蛋白和神經(jīng)絲200的免疫檢測 在DMEM培養(yǎng)基中，在存在或不存在NGF或活性組分的條件下，培養(yǎng)從成人整形手術中獲得的活組織切片，保持存活4天。然后將活組織切片冷凍，進行免疫熒光學研究，以識別神經(jīng)元標記物，特別是實施例6中所述的物質。
實施例9重建的皮膚模型中分化和增殖標記物的免疫檢測 此模型結合了重建真皮的培養(yǎng)和在此基礎上進行的重建表皮的補充培養(yǎng)。
采用下列方案創(chuàng)建重建的真皮模型 -將0.5至1.106人體正常皮膚成纖維細胞接種到膠原蛋白基基底培養(yǎng)基上，通常為糖胺聚糖殼聚糖，然后在營養(yǎng)性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，例如DMEM-Glutamax，其中補充了10％小牛血清、抗壞血酸最終濃度優(yōu)選為1mM、EGF(表皮生長因子)最終濃度優(yōu)選為10ng/mL、以及Normocin最終濃度優(yōu)選為100μg/mL，培養(yǎng)21天。
采用下列方案創(chuàng)建重建的皮膚模型 -將0.5至1.106人體正常角質形成細胞接種到真皮替代物上，然后在營養(yǎng)性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，例如DMEM-Glutamax/Ham F-12(比例3/1v/v)，其中補充了小牛血清、抗壞血酸最終濃度優(yōu)選為1mM、EGF(表皮生長因子)最終濃度優(yōu)選為10ng/mL、氫化可的松最終濃度優(yōu)選為0.4μg/mL、umuline最終濃度優(yōu)選為0.12UI/mL、異丙腎上腺素最終濃度優(yōu)選為0.4μg/mL、三碘甲狀腺原氨酸最終濃度優(yōu)選為2.10-9M、腺嘌呤最終濃度優(yōu)選為24.3μg/mL和Normocin最終濃度優(yōu)選為100μg/mL。在浸泡條件下培養(yǎng)7天。將培養(yǎng)物置于氣-液界面處再培養(yǎng)14天，所用培養(yǎng)環(huán)境與浸泡培養(yǎng)時的培養(yǎng)基相同，除了小牛血清、氫化可的松、異丙腎上腺素、三碘甲狀腺原氨酸和umuline之外。
然后在Boulin固定液(LOX、LOXL、彈力蛋白)或10％甲醛溶液(用于彈力蛋白)中制備重建皮膚(

Coletica，里昂，法國)，然后用石蠟密封，用于免疫組織化學研究，或直接用液氮冷凍，用于免疫熒光分析。從石蠟中取出6μm厚的切片，在甘氨酸-HCl(100mmol/l)中漂白。在第45天對重建皮膚進行Ki67(增殖標記物)、角蛋白14(所有細胞層的標記物)、角蛋白10(上基部的上層角質形成細胞層標記物)、內披蛋白、轉谷胺酰胺酶、巢蛋白免疫檢測。
實施例10組合使用本發(fā)明產(chǎn)品和現(xiàn)有專利分子 可以將本發(fā)明產(chǎn)品與特別是可刺激對敏感皮神經(jīng)起作用的皮膚神經(jīng)營養(yǎng)機能的提取物組合使用，例如紅椒提取物(甜椒)和/或紅色素(紅辣椒)和/或胡椒(L ′OREAL FR2825273)，和/或谷氨酰胺基乙基吲哚(Exsymol)。
可將本發(fā)明的產(chǎn)品與模擬β內啡肽作用以改善皮膚屏障功能的提取物組合使用，例如可可豆殼提取物(L′OREAL US2006069032)。
還可將本發(fā)明產(chǎn)品與活化β內啡肽以產(chǎn)生康樂感的提取物組合使用，例如Tephrosia purpurea(灰毛豆)提取物。
還可將本發(fā)明產(chǎn)品與其他分子或其衍生物組合使用，對于其他分子，例如α-MSH、β內啡肽，對于其衍生物，例如P3內啡肽和精油，以刺激角質形成細胞分化，以獲得NGF的抗老化作用(CODIF FR2857874)，從而影響神經(jīng)營養(yǎng)機能。
實施例11將本發(fā)明產(chǎn)品配制成水包油乳劑型化妝品或藥物制劑 配方11a

配方11b
配方11c

實施例12將本發(fā)明產(chǎn)品配制成油包水型
實施例13將本發(fā)明產(chǎn)品配制成香波或沐浴凝膠型

實施例14將本發(fā)明產(chǎn)品配制成唇膏型或其他無水產(chǎn)品
實施例15將本發(fā)明產(chǎn)品配制成水凝膠(眼影、減肥霜等)

實施例16將本發(fā)明產(chǎn)品配制成三重乳液型 初級乳W1/O
二級乳W1/O/W2
實施例17含有本發(fā)明產(chǎn)品的藥物制劑的制備 配方17a丸劑的制備
＊例如，按照實施例3中描述的提取過程，然后干燥，即可獲得本發(fā)明產(chǎn)品。
配方17b香膏劑的制備
＊例如，按照實施例3中描述的提取過程，然后干燥，即可獲得本發(fā)明產(chǎn)品。
配方17c可注射制劑的制備
＊例如，按照實施例3中描述的提取過程，然后干燥，即可獲得本發(fā)明產(chǎn)品。
序列表
<110>巴斯夫美容護理法國公司(BASF BEAUTY CARE SOLUTIONS FRANCE SAS)
<120>MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體的調節(jié)
<130>H197810/68 PCT2
<150>FR 07 55529
<151>2007-06-06
<160>14
<170>PatentIn版本3.3
<210>1
<211>2360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>1
gagagggcag gtcccgggga agctccggac tcctagaggg gcggccaggt gggggccctg 60
gtgaccagga cagactgtgg tgttttttaa cgtaaaggag atccgcggtg tgagggaccc 120
cctgggtcct gcacgccgcc tggtggcagg ccgggccatg gtgggtgctc acgcccccgg 180
catgtggccg ccctcagtgg gaggggctct gagaacgact ttttaaaacg cagagaaaag 240
ctccattctt cccaggacct cagcgcagcc ctggcccagg aaggcaggag acagaggcca 300
ggacggtcca gaggtgtcga aatgtcctgg ggacctgagc agcagccacc agggaagagg 360
cagggaggga gctgaggacc aggcttggtt gtgagaatcc ctgagcccag gcggtagatg 420
ccaggaggtg tctggactgg ctgggccatg cctgggctga cctgtccagc cagggagagg 480
gtgtgagggc agatctgggg gtgcccagat ggaaggaggc aggcatgggg gacacccaag 540
gccccctggc agcaccatga actaagcagg acacctggag gggaagaact gtggggacct 600
ggaggcctcc aacgactcct tcctgcttcc tggacaggac tatggctgtg cagggatccc 660
agagaagact tctgggctcc ctcaactcca cccccacagc catcccccag ctggggctgg 720
ctgccaacca gacaggagcc cggtgcctgg aggtgtccat ctctgacggg ctcttcctca 780
gcctggggct ggtgagcttg gtggagaacg cgctggtggt ggccaccatc gccaagaacc 840
ggaacctgca ctcacccatg tactgcttca tctgctgcct ggccttgtcg gacctgctgg 900
tgagcgggag caacgtgctg gagacggccg tcatcctcct gctggaggcc ggtgcactgg 960
tggcccgggc tgcggtgctg cagcagctgg acaatgtcat tgacgtgatc acctgcagct1020
ccatgctgtc cagcctctgc ttcctgggcg ccatcgccgt ggaccgctac atctccatct1080
tctacgcact gcgctaccac agcatcgtga ccctgccgcg ggcgcggcga gccgttgcgg1140
ccatctgggt ggccagtgtc gtcttcagca cgctcttcat cgcctactac gaccacgtgg1200
ccgtcctgct gtgcctcgtg gtcttcttcc tggctatgct ggtgctcatg gccgtgctgt1260
acgtccacat gctggcccgg gcctgccagc acgcccaggg catcgcccgg ctccacaaga1320
ggcagcgccc ggtccaccag ggctttggcc ttaaaggcgc tgtcaccctc accatcctgc1380
tgggcatttt cttcctctgc tggggcccct tcttcctgca tctcacactc atcgtcctct1440
gccccgagca ccccacgtgc ggctgcatct tcaagaactt caacctcttt ctcgccctca1500
tcatctgcaa tgccatcatc gaccccctca tctacgcctt ccacagccag gagctccgca1560
ggacgctcaa ggaggtgctg acatgctcct ggtgagcgcg gtgcacgcgg ctttaagtgt1620
gctgggcaga gggaggtggt gatattgtgt ggtctggttc ctgtgtgacc ctgggcagtt1680
ccttacctcc ctggtccccg tttgtcaaag aggatggact aaatgatctc tgaaagtgtt1740
gaagcgcgga cccttctggg tccagggagg ggtccctgca aaactccagg caggacttct1800
caccagcagt cgtggggaac ggaggaggac atggggaggt tgtggggcct caggctccgg1860
gcaccagggg ccaacctcag gctcctaaag agacattttc cgcccactcc tgggacactc1920
cgtctgctcc aatgactgag cagcatccac cccaccccat ctttgctgcc agctctcagg1980
accgtgccct cgtcagctgg gatgtgaagt ctctgggtgg aagtgtgtgc caagagctac2040
tcccacagca gccccaggag aaggggcttt gtgaccagaa agcttcatcc acagccttgc2100
agcggctcct gcaaaaggag gtgaaatccc tgcctcaggc caagggacca ggtttgcagg2160
agccccccta gtggtatggg gctgagccct cctgagggcc ggttctaagg ctcagactgg2220
gcactggggc ctcagcctgc tttcctgcag cagtcgccca agcagacagc cctggcaaat2280
gcctgactca gtgaccagtg cctgtgagca tggggccagg aaagtctggt aataaatgtg2340
actcagcatc acccacctta2360
<210>2
<211>894
<212>DNA
<213>人
<400>2
atgaagcaca ttatcaactc gtatgaaaac atcaacaaca cagcaagaaa taattccgac 60
tgtcctcgtg tggttttgcc ggaggagata tttttcacaa tttccattgt tggagttttg120
gagaatctga tcgtcctgct ggctgtgttc aagaataaga atctccaggc acccatgtac180
tttttcatct gtagcttggc catatctgat atgctgggca gcctatataa gatcttggaa240
aatatcctga tcatattgag aaacatgggc tatctcaagc cacgtggcag ttttgaaacc300
acagccgatg acatcatcga ctccctgttt gtcctctccc tgcttggctc catcttcagc360
ctgtctgtga ttgctgcgga ccgctacatc accatcttcc acgcactgcg gtaccacagc420
atcgtgacca tgcgccgcac tgtggtggtg cttacggtca tctggacgtt ctgcacgggg480
actggcatca ccatggtgat cttctcccat catgtgccca cagtgatcac cttcacgtcg540
ctgttcccgc tgatgctggt cttcatcctg tgcctctatg tgcacatgtt cctgctggct600
cgatcccaca ccaggaagat ctccaccctc cccagagcca acatgaaagg ggccatcaca660
ctgaccatcc tgctcggggt cttcatcttc tgctgggccc cctttgtgct tcatgtcctc720
ttgatgacat tctgcccaag taacccctac tgcgcctgct acatgtctct cttccaggtg780
aacggcatgt tgatcatgtg caatgccgtc attgacccct tcatatatgc cttccggagc840
ccagagctca gggacgcatt caaaaagatg atcttctgca gcaggtactg gtag 894
<210>3
<211>1891
<212>DNA
<213>人
<400>3
gatgagcctc tgtgaactac taaggtggga gggggctata cgcagaggag aatgtcagat 60
gctcagctcg gtcccctccg cctgacgctc ctctctgtct cagccaggac tggtttctgt120
aagaaacagc aggagctgtg gcagcggcga aaggaagcgg ctgaggcgct tggaacccga180
aaagtctcgg tgctcctggc tacctcgcac agcggtgccc gcccggccgt cagtaccatg240
gacagcagcg ctgcccccac gaacgccagc aattgcactg atgccttggc gtactcaagt300
tgctccccag cacccagccc cggttcctgg gtcaacttgt cccacttaga tggcaacctg360
tccgacccat gcggtccgaa ccgcaccgac ctgggcggga gagacagcct gtgccctccg 420
accggcagtc cctccatgat cacggccatc acgatcatgg ccctctactc catcgtgtgc 480
gtggtggggc tcttcggaaa cttcctggtc atgtatgtga ttgtcagata caccaagatg 540
aagactgcca ccaacatcta cattttcaac cttgctctgg cagatgcctt agccaccagt 600
accctgccct tccagagtgt gaattaccta atgggaacat ggccatttgg aaccatcctt 660
tgcaagatag tgatctccat agattactat aacatgttca ccagcatatt caccctctgc 720
accatgagtg ttgatcgata cattgcagtc tgccaccctg tcaaggcctt agatttccgt 780
actccccgaa atgccaaaat tatcaatgtc tgcaactgga tcctctcttc agccattggt 840
cttcctgtaa tgttcatggc tacaacaaaa tacaggcaag gttccataga ttgtacacta 900
acattctctc atccaacctg gtactgggaa aacctgctga agatctgtgt tttcatcttc 960
gccttcatta tgccagtgct catcattacc gtgtgctatg gactgatgat cttgcgcctc1020
aagagtgtcc gcatgctctc tggctccaaa gaaaaggaca ggaatcttcg aaggatcacc1080
aggatggtgc tggtggtggt ggctgtgttc atcgtctgct ggactcccat tcacatttac1140
gtcatcatta aagccttggt tacaatccca gaaactacgt tccagactgt ttcttggcac1200
ttctgcattg ctctaggtta cacaaacagc tgcctcaacc cagtccttta tgcatttctg1260
gatgaaaact tcaaacgatg cttcagagag ttctgtatcc caacctcttc caacattgag1320
caacaaaact ccactcgaat tcgtcagaac actagagacc acccctccac ggccaataca1380
gtggatagaa ctaatcatca gctagaaaat ctggaagcag aaactgctcc gttgccctaa1440
cagggtctca tgccattccg accttcacca agcttagaag ccaccatgta tgtggaagca1500
ggttgcttca agaatgtgta ggaggctcta attctctagg aaagtgcctg cttttaggtc1560
atccaacctc tttcctctct ggccactctg ctctgcacat tagagggaca gccaaaagta1620
agtggagcat ttggaaggaa aggaatatac cacaccgagg agtccagttt gtgcaagaca1680
cccagtggaa ccaaaaccca tcgtggtatg tgaattgaag tcatcataaa aggtgaccct1740
tctgtctgta agattttatt ttcaagcaaa tatttatgac ctcaacaaag aagaaccatc1800
ttttgttaag ttcaccgtag taacacataa agtaaatgct acctctgatc aaagcacctt1860
gaatggaagg tccgagtctt tttagtgttt t 1891
<210>4
<211>1071
<212>DNA
<213>人
<400>4
agcggcggcg aaggagggga agaagagccg cgaccgagag aggccgccga gcgtccccgc 60
cctcagagag cagcctcccg agacagagcc tcagcctgcc tggaagatgc cgagatcgtg 120
ctgcagccgc tcgggggccc tgttgctggc cttgctgctt caggcctcca tggaagtgcg 180
tggctggtgc ctggagagca gccagtgtca ggacctcacc acggaaagca acctgctgga 240
gtgcatccgg gcctgcaagc ccgacctctc ggccgagact cccatgttcc cgggaaatgg 300
cgacgagcag cctctgaccg agaacccccg gaagtacgtc atgggccact tccgctggga 360
ccgattcggc cgccgcaaca gcagcagcag cggcagcagc ggcgcagggc agaagcgcga 420
ggacgtctca gcgggcgaag actgcggccc gctgcctgag ggcggccccg agccccgcag 480
cgatggtgcc aagccgggcc cgcgcgaggg caagcgctcc tactccatgg agcacttccg 540
ctggggcaag ccggtgggca agaagcggcg cccagtgaag gtgtacccta acggcgccga 600
ggacgagtcg gccgaggcct tccccctgga gttcaagagg gagctgactg gccagcgact 660
ccgggaggga gatggccccg acggccctgc cgatgacggc gcaggggccc aggccgacct 720
ggagcacagc ctgctggtgg cggccgagaa gaaggacgag ggcccctaca ggatggagca 780
cttccgctgg ggcagcccgc ccaaggacaa gcgctacggc ggtttcatga cctccgagaa 840
gagccagacg cccctggtga cgctgttcaa aaacgccatc atcaagaacg cctacaagaa 900
gggcgagtga gggcacagcg ggccccaggg ctaccctccc ccaggaggtc gaccccaaag 960
ccccttgctc tcccctgccc tgctgccgcc tcccagcctg gggggtcgtg gcagataatc 1020
agcctcttaa agctgcctgt agttaggaaa taaaaccttt caaatttcac a 1071
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde肌動蛋白有義鏈
<400>5
gtggggcgcc ccaggcacca 20
<210>6
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde肌動蛋白反義鏈
<400>6
ctcct taatg tcacgcacga tttc 24
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Sonde MCR有義鏈
<400>7
gggctctgag aacgactttt 20
<210>8
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde MCR1反義鏈
<400>8
ccgggctcct gtctggttgg 20
<210>9
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde MCR2有義鏈
<400>9
tcacgtcgct gttcccgctg at 22
<210>10
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde MCR2反義鏈
<400>10
aagagagaca tgtagcaggc gcagta26
<210>11
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sondeμ阿片樣物質有義鏈
<400>11
ctcagccagg actggtttct gtaaga26
<210>12
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sondeμ阿片樣物質反義鏈
<400>12
tcggacaggt tgccatctaa gtg 23
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde POMC有義鏈
<400>13
cgcccagtga aggtgtaccc 20
<210>14
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>sonde POMC反義鏈
<400>14
ggcgtctggc tcttctcgga ggtc 2權利要求
1.至少一種調節(jié)黑色素細胞中MC-R表達的物質作為活性成分在化妝用組合物中的用途，或在制備營養(yǎng)保健用組合物或制備藥物組合物，特別是皮膚用組合物中的用途。
2.根據(jù)權利要求1的用途，用于抵抗和/或預防α-MSH和/或ACTH的作用的失調。
3.根據(jù)前述權利要求中任一項的用途，用于預防或抵抗皮膚老化和/或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，和/或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，和/或促進上皮形成，和/或改善細胞增殖和分化，特別是在表皮水平，和/或預防或抵抗皮膚血管形成的減少，和/或改善皮膚血管形成，和/或改善血管的通透性過高，和/或改善皮膚結疤過程中的血管生成，和/或預防和/或抵抗皮膚神經(jīng)分布減少，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生康樂感，和/或改善膚色和/或調節(jié)皮膚色素形成，尤其是當所述色素形成表現(xiàn)為局部瑕疵例如色素斑時。
4.根據(jù)前述權利要求中任一項的用途，其中所述物質刺激MC-1R的表達，任選維持或刺激POMC的表達。
5.根據(jù)權利要求4的用途，用于增加色素沉著，具有增黑作用，以預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素脫失斑點。
6.根據(jù)權利要求4或5的用途，其中所述物質選自
-1甲基β咔啉-3-羧酸，
-乳酸菌發(fā)酵的酵母，
-雙歧桿菌發(fā)酵的檸檬提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的番木瓜提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的羽扇豆提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的大豆提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的椰棗提取物，
-大豆粉提取物，
-菝葜(麗花菝葜)提取物，
-Cecropia obtuse提取物，
-月見草提取物，
-普通歐蓍草提取物，
-月見草提取物，
-胡蘿卜提取物，
-綿馬提取物，
-歐洲酸櫻桃提取物，和
-其任何混合物。
7.根據(jù)權利要求1至3中任一項的用途，其中所述物質降低MC-1R的表達，并且任選維持或降低POMC的表達。
8.根據(jù)權利要求7的用途，用于減少皮膚色素沉著，具有增白或增亮的作用，以提高皮膚亮度，預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素沉著斑點。
9.根據(jù)權利要求7或8的用途，其中所述物質可為
-歐刺柏(杜松子)的水或水醇提取物；
-淡黃鼬瓣花的提取物；
-及其任何混合物。
10.根據(jù)前述權利要求中任一項的用途，其特征是所述物質與選自以下的其他活性組分組合使用
-刺激角質形成細胞增殖和/或分化的活性物質，旨在具有抗老化作用；
-模擬β內啡肽的作用以改善皮膚屏障功能的活性物質；
-刺激皮膚神經(jīng)營養(yǎng)機能的活性物質；
-誘導康樂感的活性物質；
-允許改變膚色的活性物質；
-刺激成纖維細胞活性和/或增殖的活性物質；
-保護成纖維細胞生長因子不被降解，尤其是FGF2不被降解的活性物質；
-刺激透明質酸酶合酶，特別是透明質酸酶合酶2的活性物質；
-刺激諸如LOXL的賴氨酰氧化酶的活性和/或合成的活性物質；
-具有消炎特性的活性物質，特別是抑制磷脂酶A2的酶活力的活性物質；
-具有消除浮腫特性的活性物質；和
-其任何組合。
11.選自以下的物質作為活性成分在化妝用組合物中的用途，或在制備營養(yǎng)保健用組合物或制備藥物組合物，特別是皮膚用組合物中的用途
-1甲基β咔啉3羧酸，
-(紅色)菝葜(麗花菝葜)提取物，
-普通歐蓍草提取物，
-Cecropia obtuse提取物，
-月見草提取物，
-胡蘿卜提取物，
-綿馬提取物，
-歐洲酸櫻桃提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的酵母，
-雙歧桿菌發(fā)酵的檸檬提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的番木瓜提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的羽扇豆提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的大豆提取物，
-乳酸菌發(fā)酵的椰棗提取物，
-大豆粉提取物，和
-其任何混合物，
旨在增加皮膚色素沉著，具有增黑作用，可預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素脫失斑點。
12.選自淡黃鼬瓣花(野生大麻)，或歐刺柏(杜松子)的水或水醇提取物的物質作為作為活性成分在化妝用組合物中的用途，或在制備營養(yǎng)保健用組合物或制備藥物組合物，特別是皮膚用組合物中的用途，旨在減少皮膚色素沉著，具有增白或增亮作用，可提高皮膚亮度，預防和/或抵抗與老化有關或無關的色素沉著斑點。
13.化妝用組合物或皮膚化妝用組合物或營養(yǎng)保健用組合物，用來預防和/或抵抗皮膚老化和/或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，或促進上皮形成，或改善細胞增殖和分化，尤其是在表皮水平，或預防或抵抗皮膚血管形成的減少，或改善皮膚血管形成，或改善血管通透性過高，或改善皮膚結疤過程中的血管生成，或預防和/或抵抗皮膚神經(jīng)分布減少，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生康樂感，或改善膚色和/或調節(jié)皮膚色素形成，特別是當所述色素形成表現(xiàn)出局部瑕疵例如色素斑時；所述組合物包含如權利要求6、9、11或12所定義的活性物質作為活性成分，可能地與權利要求10中所述的物質組合。
14.藥物組合物，優(yōu)選旨在預防和/或抵抗皮膚老化和/或抵抗在皮膚老化過程中觀察到的應激作用誘導的變化，或預防和/或抵抗表皮穩(wěn)態(tài)減弱，或促進上皮形成，或改善細胞增殖和分化，尤其是在表皮水平，或預防或抵抗皮膚血管形成的減少，或改善皮膚血管形成，或改善血管通透性過高，或改善皮膚結疤過程中的血管生成，或預防和/或抵抗皮膚神經(jīng)分布減少，或改善皮膚神經(jīng)分布，或產(chǎn)生康樂感，或改善膚色和/或調節(jié)皮膚色素形成，特別是當所述色素形成表現(xiàn)出局部瑕疵例如色素斑時；所述組合物包含如權利要求6、9、11或12所定義的活性物質作為活性成分，可能地與權利要求10中所述的物質組合。
15.美容護理方法，其包括將權利要求6、9、11或12所定義的物質用于皮膚以改善美容效果，可能地與權利要求10中所述的物質組合。
16.具有以下序列之一的核苷酸序列
GGGCTCTGAGAACGACTTTT(MC-1R有義鏈-SEQ ID No 7)；
CCGGGCTCCTGTCTGGTTGG(MC-1R反義鏈-SEQ ID No 8)；
TCACGTCGCTGTTCCCGCTGAT(MC-2R有義鏈-SEQ ID No9)；
AAGAGAGACATGTAGCAGGCGCAGTA(MC-2R反義鏈-SEQID No 10)；
CTCAGCCAGGACTGGTTTCTGTAAGA(μ阿片樣物質受體有義鏈-SEQ ID No 11)；
TCGGACAGGTTGCCATCTAAGTG(μ阿片樣物質受體反義鏈-SEQ ID No 12)；
CGCCCAGTGAAGGTGTACCC(POMC有義鏈-SEQ ID No 13)；和
GGCGTCTGGCTCTTCTCGGAGGTC(POMC反義鏈-SEQ ID No14)。
全文摘要
本發(fā)明涉及在皮膚細胞中調節(jié)POMC基因產(chǎn)物的受體(MC-1R、MC-2R和μ阿片樣物質受體)的表達，并可能調節(jié)POMC的表達的活性物質；尤其涉及調節(jié)表皮細胞的增殖和分化，以實現(xiàn)上皮再形成、維持神經(jīng)分布、滋養(yǎng)皮膚、或修復正常色素沉著、或抗衰老、或獨立地調節(jié)色素沉著、或使皮膚不老化。本發(fā)明還涉及篩選此類活性物質的方法。
文檔編號A61P17/00GK101772349SQ200880101954
公開日2010年7月7日 申請日期2008年6月6日 優(yōu)先權日2007年6月6日
發(fā)明者S·潘, C·德聚特, V·安德烈, C·雷梅爾米耶, I·奧利, E·佩里爾 申請人:巴斯夫美容護理法國公司