專利名稱：：一種抗糖尿病的紅灌木提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種作為降血糖劑使用的，即用于降低哺乳動(dòng)物的血糖水平的植物提取物，所述的哺乳動(dòng)物有前驅(qū)糖尿病或2型糖尿病(T2D)或1型糖尿病(T1D)。
背景技術(shù)：
：非傳染性疾病糖尿病可分為兩大類，即1型糖尿病(T1D)和2型糖尿病(T2D)。T1D的特征在于P細(xì)胞的自身免疫性。在T2D中，胰腺13細(xì)胞產(chǎn)生胰島素不足，并且周緣組織(肝臟、肌肉及脂肪組織)對(duì)胰島素的作用是有"抵抗性"的，即在這些靶組織中葡萄糖攝取是無(wú)效的。在T2D后期13細(xì)胞也常常受到破壞從而使得患者依賴于胰島素治療。糖尿病患者中，大約5-10%的患者為1型，90-95%的患者為2型糖尿病。主要的糖尿病并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病變、腦血管病、冠心病、神經(jīng)病、周圍性血管病、潰瘍以及截肢。因此糖尿病會(huì)影響整個(gè)身體的多個(gè)器官和組織。促成糖尿病發(fā)展的因素包括種族(其中某些種群具有上升的T2D發(fā)病率，特別是如果他們進(jìn)行遷移的話)、肥胖、高脂肪飲食、子宮內(nèi)的環(huán)境、胰島素抗藥性及特定的候選基因。世界范圍內(nèi)2型糖尿病的發(fā)病率正在不斷增加。雖然遺傳因素可能發(fā)揮作用，但生活方式改變(如采用高脂肪的西方飲食導(dǎo)致肥胖可能是其中一個(gè)因素)也會(huì)促進(jìn)該疾病增加。生活方式因素如脂肪攝入增加和運(yùn)動(dòng)減少已經(jīng)顯示出與肥胖和胰島素抗藥性有關(guān)(Lipman等人，1972;Lovejoy和DiGirolamo，1992)。在大鼠中，高脂肪飼養(yǎng)誘導(dǎo)了一種伴有胰島素剌激的糖酵解和糖原合成減少的胰島素抗藥性狀態(tài)(Kim等人，2000)。這種疾病是由于外周胰島素應(yīng)答組織，如肌肉和脂肪組織表現(xiàn)出對(duì)胰島素的響應(yīng)顯著降低，從而導(dǎo)致血液中循環(huán)的葡萄糖和脂肪酸增加的結(jié)果。對(duì)胰島素的低響應(yīng)會(huì)導(dǎo)致糖酵解減少，這反過(guò)來(lái)又會(huì)引起肝臟內(nèi)糖原異生和糖原病，在正常狀態(tài)下這兩者都是由胰島素來(lái)"阻斷"的。胰腺P細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生過(guò)量的胰島素和增加分泌的胰島素量能夠應(yīng)付最初的胰島素抗藥性階段(Pirol等人，2004)。所述的為維持正常血糖(normoglycaemia)而引起的高胰島素血癥(hyperinsulinaemia)最終會(huì)造成細(xì)胞功能障礙(Khan，2003)，其會(huì)導(dǎo)致顯性糖尿病。顯然，2型糖尿病取決于外周和細(xì)胞水平上存在的損傷(Khan等人，2000)。已經(jīng)證實(shí)胰島素抗藥性和繼發(fā)的13-細(xì)胞衰竭是影響正常葡萄糖耐量到葡萄糖耐量降低再到T2D進(jìn)展的主要因素。與從農(nóng)村遷移到城市地區(qū)有關(guān)的生活方式的改變導(dǎo)致了南非住在城市中的黑人的肥胖癥增加，并且這與胰島素抗藥性(為T2D的另一特征)有關(guān)。為補(bǔ)償胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，P-細(xì)胞產(chǎn)生出更多的胰島素，這會(huì)導(dǎo)致本來(lái)已超負(fù)荷的P_細(xì)胞更大的消耗從而將導(dǎo)致13_細(xì)胞耗竭并最終導(dǎo)致P_細(xì)胞衰竭。1985年估計(jì)世界上有3000萬(wàn)的糖尿病人。到1995年這一數(shù)字已增加到13500萬(wàn)。世界衛(wèi)生組織(WHO)最新估計(jì)到2025年將有30000萬(wàn)人患有糖尿病，將增長(zhǎng)122%。這與國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)(IDF)到2025年有33300萬(wàn)的糖尿病人(6.3%的患病率)，同時(shí)47200萬(wàn)人將被診斷為葡萄糖耐量降低(IGT;9^的患病率)的估計(jì)相一致。對(duì)發(fā)達(dá)國(guó)家來(lái)說(shuō)(在這些國(guó)家超重和肥胖者的發(fā)病率增加，增加了其變成糖尿病的風(fēng)險(xiǎn))，估計(jì)將會(huì)有42%的增長(zhǎng)(從5100萬(wàn)增至7200萬(wàn))，并且對(duì)發(fā)展中國(guó)家來(lái)說(shuō)(由于多種因素包括飲食變5化、增加的體力活動(dòng)及快速城市化)將會(huì)有170%的增長(zhǎng)(從8400萬(wàn)增至22800萬(wàn))。因此雖然糖尿病以前被認(rèn)為是一種影響發(fā)達(dá)國(guó)家人們的西方生活方式疾病，但目前的趨勢(shì)表明到2025年所有糖尿病人將有超過(guò)75%會(huì)在發(fā)展中國(guó)家。發(fā)展中國(guó)家糖尿病發(fā)病率增加的另一個(gè)促成因素是發(fā)育過(guò)程(developmentalprogramming)。在發(fā)展中國(guó)家的許多地區(qū)，人們?cè)谧訉m內(nèi)常常面對(duì)不良飲食(營(yíng)養(yǎng)不良)然后營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，這種情況已被證明易使個(gè)體發(fā)展為T2D。此外，目前共有11億人超重并且3.2億人肥胖(IDF)。這加重了全球肥胖癥的巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且由于肥胖是發(fā)展中的糖尿病的一個(gè)主要的危險(xiǎn)因素，因此其可能會(huì)潛在地進(jìn)一步加劇與糖尿病有關(guān)的已經(jīng)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。對(duì)南非基于最低數(shù)據(jù)的保守估計(jì)預(yù)計(jì)將會(huì)從2000年的560萬(wàn)人上升至2010年的超過(guò)800萬(wàn)人。由于城市化最大增幅最有可能出現(xiàn)在黑人群體，因?yàn)檫@伴隨著生活方式和從低脂肪到高脂肪飲食的改變。1998年的數(shù)字表明南非城市中的黑人具有年齡校正患病率接近8%的T2D上升的發(fā)病率(Levitt，1993)，其為在1974年公布的數(shù)字4.2%的幾乎兩倍(Joffe&Seftel)。1996年南非前20位的死亡原因數(shù)據(jù)(Bradshaw等人，1996)顯示，糖尿病在男性中為第10位，在女性中為第7位。然而，糖尿病并發(fā)癥諸如缺血性心臟病及其他心血管和腎臟并發(fā)癥對(duì)死亡人數(shù)也有極為重要的影響，調(diào)整后的數(shù)字可能會(huì)使糖尿病位居南非死亡原因的前3或前4位。在南非T2D的發(fā)病率比HIV更高，因此T2D值得引起全國(guó)關(guān)注。糖尿病是一種花費(fèi)高的疾病，雖然沒(méi)有可用的南非治療糖尿病的費(fèi)用信息，但有許多間接損失。這些損失包括生活質(zhì)量降低、對(duì)社會(huì)做出貢獻(xiàn)的能力降低以及勞動(dòng)力減少，和其對(duì)經(jīng)濟(jì)的影響。醫(yī)療救助計(jì)劃(MedicalAidSchemes)成本增加從而導(dǎo)致醫(yī)療救助額外費(fèi)用(MedicalAidpremiums)的增加加劇了這一損失。糖尿病也直接影響到經(jīng)濟(jì)。在南非缺少糖尿病的相關(guān)財(cái)務(wù)數(shù)據(jù)的情況下，來(lái)源于英國(guó)公開發(fā)表的數(shù)據(jù)表明，英國(guó)目前被診斷為糖尿病及其并發(fā)癥的超過(guò)150萬(wàn)的成年人，每年總的(英國(guó))國(guó)民健康保險(xiǎn)制度(NHS)費(fèi)用為52億英鎊，其占NHS總預(yù)算的9%。在美國(guó)，估計(jì)的直接費(fèi)用為440億美元，算上生產(chǎn)力的損失，這一數(shù)字則增加到980億美元。類似的數(shù)字可用于其他許多國(guó)家。T2D是通過(guò)血漿葡萄糖的升高水平來(lái)進(jìn)行診斷的。然而，我們以前的研究表明血漿葡萄糖水平增加時(shí)，在心血管系統(tǒng)和胰腺已經(jīng)發(fā)生了嚴(yán)重的損傷。由升高的血葡萄糖水平診斷為糖尿病后，治療如節(jié)食和鍛煉和/或可用的藥物，能夠暫時(shí)改善血漿葡萄糖水平但不能阻止該疾病的發(fā)展。這些治療的失敗率與P-細(xì)胞持續(xù)的衰退率有關(guān)。目前的治療包括胰島素注射或剌激胰島素釋放和/或藥物作用。用于解釋胰腺胰島素生產(chǎn)損傷從而導(dǎo)致糖尿病的理論有很多。參考文獻(xiàn)為兩篇論文由NerupJ、Mandrup-PoulsenT、MolvigJ、HelqvistS、WogensenL、EgebergJ，在糖尿病護(hù)理(DiabetesCare)上發(fā)表的《1型糖尿病中的胰腺3-細(xì)胞破壞機(jī)制》("Mechanismsofpancreaticbeta-celldestructionintypeIdiabetes")，1988;11Suppl1:16_23;和第二篇題為《自身免疫失調(diào)和與有抵抗的、有傾向的及糖尿病動(dòng)物有關(guān)的雙陰性T細(xì)胞》(〃AutoimmuneImbalanceandDoubleNegativeTCellsAssociatedwithResistant,ProneandDiabeticAnimals")，Hosszufalusi，N.、Chan，E.、Granger,G.，禾口Charles,M.;JAutoimmun，5:305-18(1992)。這些論文表明胰島發(fā)炎會(huì)阻礙胰島素的產(chǎn)生。特別是通過(guò)免疫攻擊破壞了胰島中產(chǎn)生胰島素的P-細(xì)胞。人們公認(rèn)這種P細(xì)胞破壞是由于受到幾種類型的免疫細(xì)胞包括NK(自然殺傷)細(xì)胞和雙陰性T-淋巴細(xì)胞的攻擊所致。因?yàn)樘悄虿∫阎荒苤斡员徽J(rèn)為是難以對(duì)付的。然而各種治療已被用來(lái)改善糖尿病。例如，飲食措已被用來(lái)平衡病人的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物的相對(duì)量。在一些國(guó)家還實(shí)施了糖尿病教育和宣傳方案。此外，通過(guò)胰島素給藥對(duì)中度或重度糖尿病進(jìn)行治療。而且，處方藥如"葡糖苷"已被用來(lái)恢復(fù)成人發(fā)病型糖尿病受損的胰島素生產(chǎn)。其他藥物是用來(lái)調(diào)節(jié)胰島素效力的?？傊?，不管是青少年還是成年型糖尿病的治療都僅僅只是獲得了部分成功。這是因?yàn)榇蟛糠炙幬锇迅纳芿-細(xì)胞功能或降低胰島素抗藥性作為目標(biāo)，隨著疾病逐漸惡化作用衰減。因此病人需要使用(通常為每天)藥物組合來(lái)控制該疾病。在1950年代末雙胍類如二甲雙胍可用于治療2型糖尿病，并從此成為有效的降血糖藥物(Vigneri和Goldfine，1987)。人們對(duì)這些藥物的確切分子作用機(jī)制知道的很少。作為一種胰島素增敏劑，二甲雙胍主要在肝臟起作用(它在這里抑制葡萄糖釋放)(Goldfine，2001)。二甲雙胍也被證明可抑制呼吸鏈復(fù)合物I的酶活性并因此可削弱線粒體功能和減少細(xì)胞呼吸，在這種情況下可降低ATP/ADP比，其可激活A(yù)MP活化的、在短期內(nèi)可引起分解代謝反應(yīng)和長(zhǎng)期可引起胰島素敏化的蛋白激酶(Br皿mair等人，2004;Tiikkainen等人，2004)。已證實(shí)該藥在單一療法和與磺脲類或胰島素聯(lián)用時(shí)都是有效的(Davidson和Peters,1997)。青年中的糖尿病是一個(gè)全球性的現(xiàn)象并且其發(fā)病率正在增加。一些對(duì)P-細(xì)胞發(fā)育、分化和功能重要的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子就與青年中的糖尿病有關(guān)。其中一些(因子)是目前的治療劑的直接靶點(diǎn)。目前糖尿病藥物的價(jià)格非常高，開發(fā)更便宜的替代療法將很有優(yōu)勢(shì)。全球T2D的負(fù)擔(dān)是巨大的。需要采取戰(zhàn)略行動(dòng)來(lái)確?？商峁┑奶悄虿≈委焷?lái)改善這些受影響個(gè)體的生活質(zhì)量。對(duì)于發(fā)展中國(guó)家來(lái)說(shuō)尤其如此。正是出于這個(gè)原因科學(xué)家們?cè)谄渥约旱膰?guó)家正在研究本地植物提取物的功效。紅灌木(Rooibos)(學(xué)名Aspalathuslinearis)是一種豆科植物并被用于制備湯藥(草本茶)。Aspalathuslinearis是一種用于生產(chǎn)紅灌木茶的、獨(dú)特的南非fynbos栽培植物。紅灌木茶是用該植物的莖和葉，通過(guò)將莖和葉切碎、研碎并潤(rùn)濕，然后經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的開放式空氣氧化("發(fā)酵")并將其曬干從而產(chǎn)生出紅灌木特有的顏色和氣味而制成的。然后將處理后的植物原料進(jìn)行過(guò)篩并包裝成松散的葉或包于茶袋中。所述的處理后的原料是指"已發(fā)酵的紅灌木茶"?！ňG〃紅灌木茶是指通過(guò)防止或限制氧化變化的方式進(jìn)行加工的未氧化的("未發(fā)酵的")紅灌木植物原料。與紅灌木茶有關(guān)的促進(jìn)健康方面的性質(zhì)包括緩解失眠、神經(jīng)緊張、胃痙攣和過(guò)敏癥狀。紅灌木茶中的黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化性和自由基清除活性并有充當(dāng)抗癌和抗動(dòng)脈硬化劑的潛能。紅灌木茶及其衍生產(chǎn)品在食品/營(yíng)養(yǎng)食品，制藥和/或化妝品工業(yè)的應(yīng)用中有重要價(jià)值。目前，1型糖尿病患者用胰島素進(jìn)行治療，而大多數(shù)2型糖尿病患者用降血糖藥如剌激P_細(xì)胞功能的磺脲類進(jìn)行治療，用可增強(qiáng)患者對(duì)胰島素的組織選擇性的其他藥物，或用胰島素本身進(jìn)行治療。遺憾的是，通常目前通過(guò)自我注射給藥的胰島素的使用需要每日多劑量，需要經(jīng)常估計(jì)血液或尿中糖以確定恰當(dāng)?shù)囊葝u素劑量，由患者或醫(yī)生給藥來(lái)完成。無(wú)意的給予超過(guò)劑量的胰島素會(huì)導(dǎo)致低血糖癥，和輕度血糖異常到昏迷，甚至死亡范圍內(nèi)的不良反應(yīng)。雖然降血糖藥如磺脲類已被廣泛用于治療NIDDM，但這種治療在許多情況下不能完全令人滿意。在存在的治療顯示在使患者的血糖水平正?；療o(wú)效的情況下，患糖尿7病合并癥的風(fēng)險(xiǎn)則會(huì)增加。而且，許多病人逐漸失去了對(duì)用磺脲類治療的響應(yīng)能力并因此逐漸被迫采用胰島素治療。由于許多現(xiàn)存的糖尿病治療形式已被證明未能實(shí)現(xiàn)令人滿意的血糖控制，因此對(duì)新的治療方法仍然有很大的需求。由于其致肥作用的結(jié)果，胰島素具有引起2型糖尿病患者肥胖的不良作用(參見Moller，D.E.(2001)Nature414:821-827)。遺憾的是其他抗糖尿病藥包括目前被用于剌激2型糖尿病病人葡萄糖轉(zhuǎn)換的二甲雙胍也具有致肥活性。因此雖然目前的藥物治療可以降低血糖，但它們常常會(huì)引起肥胖。因此，治療高血糖癥的新的組合物和方法是值得期待的?？韶菁て咸烟菙z取同時(shí)又不產(chǎn)生致肥副作用的組合物是特別令人期待的。發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于治療糖尿病的，來(lái)源于紅灌木的新的和有用的組合物。本發(fā)明特別是涉及2型糖尿病的治療及相應(yīng)的抗糖尿病劑。就aspalathin和蘆丁及含有它們的組合物在用于預(yù)防和治療糖尿病方面而言，本發(fā)明提供了的一種新的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種抗糖尿病劑、一種包含抗糖尿病劑的抗糖尿病組合物、一種含有抗糖尿病劑的食品或飲料、以抗糖尿病劑為基礎(chǔ)的試劑盒、一種預(yù)防或治療糖尿病或葡萄糖耐量降低的方法，以及一種降低血糖水平的方法。所述的抗糖尿病劑可以是紅灌木(Aspalathusspp.)的提取物，aspalathin本身或與戸丁的組合。因?yàn)榘l(fā)明人發(fā)現(xiàn)紅灌木(Aspalathusssp)的蒸汽或水提取物對(duì)控制血糖是有效的，所以本發(fā)明的治療被發(fā)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)療應(yīng)用采集該植物、將其進(jìn)行干燥并與溶劑如水和/或醇優(yōu)選乙醇結(jié)合。人們驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)本發(fā)明的植物提取物的給藥劑量范圍為約1毫克至約5毫克，優(yōu)選至約2.5毫克每千克體重時(shí)，其顯示出優(yōu)良的的抗糖尿病作用。因此，本發(fā)明第一個(gè)方面涉及一種包含Aspalathus屬植物(優(yōu)選Aspalathuslinearis)的水提取物的抗糖尿病組合物，所述組合物給藥的劑量范圍為每公斤體重l-5mg，優(yōu)選至約2.5mg。本發(fā)明另一方面提供了一種分離具抗糖尿病作用的、植物Aspalathus的治療提取物的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供Aspalathus植物或其部分，(b)將所述植物或其部分與適于溶解該植物提取物的、無(wú)毒的溶劑如水和/或醇，優(yōu)選乙醇結(jié)合，(c)回收該植物提取物，并(d)任選地干燥。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)Aspalathus屬植物的提取物給藥可以治療糖尿病，特別是糖尿病初期階段(也被稱為前驅(qū)糖尿病狀態(tài))。因此，本發(fā)明涉及來(lái)源于Aspalathus屬植物的組合物和治療血糖過(guò)多的受試者，特別是2型糖尿病受試者以及超重的糖尿病受試者的方法。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于治療血糖過(guò)多受試者的Aspalathus植物的提取物。本發(fā)明還提供了降低血糖過(guò)多的受試者血糖水平的方法。該方法包括給予血糖過(guò)多的受試者使用Aspalathus植物提取物。盡管可以通過(guò)注射對(duì)受試者給予提取物，但優(yōu)選的給藥方法包括口服給藥。該方法用于治療血糖過(guò)多的受試者，以及患有糖尿病的受試者。該方法特別是用于治療患有2型糖尿病的，特別是2型糖尿病初期階段的超重的受試者。本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的提取物可以獨(dú)立地增強(qiáng)Glut4和Glu2的活性而使得在某些情況下這兩個(gè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白都是更活躍的，而其它情況下它們之中僅僅只有一個(gè)是活躍的。因此，本發(fā)明還提供了一種控制哺乳動(dòng)物糖尿病的方法，其包括以可增強(qiáng)Glut4和/或Glut2活性的數(shù)量給予哺乳動(dòng)物Aspalathus提取物的步驟。因此，本發(fā)明還可用于篩選所述提取物的活性成分。因此本發(fā)明還提供了一種用哺乳動(dòng)物篩選具有抗糖尿病活性的該提取物的特定化合物的方法，其包括確定增強(qiáng)Glut4和/或Glut2活性的化合物的步驟。因?yàn)榘l(fā)明人發(fā)現(xiàn)Aspalathus的蒸汽或水提取物在控制血糖方面是有效的，所以了本發(fā)明的治療被發(fā)現(xiàn)。將該植物進(jìn)行采集、干燥并與沸水結(jié)合以供使用。然后由病人定期口服該提取物。已知Aspalathus富含黃酮類化合物和其它的次級(jí)植物產(chǎn)物。已將該提取物和本文所述的純化的活性成分給予糖尿病大鼠和猴子服用；該結(jié)果清楚明確地表明這些提取物將對(duì)人類糖尿病的未來(lái)治療產(chǎn)生重大的影響。已經(jīng)從Aspalathus提取和組分分離出了特定的黃酮類化合物并將其給予糖尿病大鼠，結(jié)果類似于使用提取物時(shí)所產(chǎn)生的結(jié)果。所使用的具體的黃酮類化合物為aspalathin和蘆丁。然后人們發(fā)現(xiàn)這些黃酮類化合物組合時(shí)是最有效的。真正令人驚訝的是人們發(fā)現(xiàn)單獨(dú)的aspalathin或其與蘆丁聯(lián)合，尤其可以有效降低T1D和T2D大鼠的血糖和廣泛地減輕T1D和T2D大鼠的糖尿病癥狀。這一結(jié)果出人意料因?yàn)閭鹘y(tǒng)的知識(shí)告訴我們這兩種形式的糖尿病其原因基本上是不同的(分別為P-細(xì)胞損壞和肌肉的胰島素抗藥性)。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1.所示為用于制備GMPARC61的紅灌木植物原料水提物的HPLC指紋圖譜(A=288nm的色譜圖；B=320nm的色譜圖)。圖2.所示為GMPARC61的HPLC指紋圖譜(A=288nm的色譜圖；B=320nm的色譜圖)。圖3.所示為在6小時(shí)監(jiān)測(cè)期的時(shí)間內(nèi)所標(biāo)繪的，兩只對(duì)照猴子的每小時(shí)血糖值?；鶞?zhǔn)值(O小時(shí))表示的是在把維持飲食的食團(tuán)(maintenancedietbolus)喂給猴子之前的禁食血葡萄糖值。圖4.表示了由基準(zhǔn)血糖水平所計(jì)算出的對(duì)照組中的血糖降低或增加的平均百分比。在猴子接受70g維持飲食后，血糖值保持在基準(zhǔn)值附近，并在3、4和5小時(shí)可以看到有輕微的下降值。圖5.所示為在6小時(shí)監(jiān)測(cè)期的內(nèi)所標(biāo)繪的，接受了1.Omg/kgGMPARC61的實(shí)驗(yàn)組的兩只猴子的血糖值。基準(zhǔn)值(0小時(shí))表示的是在把含有1.Omg/kgGMPARC61的維持飲食的食團(tuán)喂給猴子之前的禁食血葡萄糖值。圖6.表示了由基準(zhǔn)血葡萄糖水平所計(jì)算出的血糖降低或增加的平均百分比。血葡萄糖降低的最高百分比發(fā)生在接受l.Omg/kgGMPARC613小時(shí)后。一直保持明顯較低的葡萄糖水平超過(guò)5小時(shí)。圖7.所示為在6小時(shí)監(jiān)測(cè)期的時(shí)間內(nèi)所標(biāo)繪的，接受了2.5mg/kgGMPARC61的實(shí)驗(yàn)組的三只猴子的血葡萄糖值?；鶞?zhǔn)值(0小時(shí))表示的是在把含有2.5mg/kgGMPARC61的維持飲食的食團(tuán)喂給猴子之前的禁食血葡萄糖值。圖8.表示了由基準(zhǔn)血糖水平所計(jì)算出的血葡萄糖降低或增加的平均百分比。血葡萄糖降低的最高百分比發(fā)生在接受2.5mg/kgGMPARC612小時(shí)后。在6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)一直保持著明顯較低的葡萄糖水平。圖9.所示為在6小時(shí)監(jiān)測(cè)期的時(shí)間內(nèi)所標(biāo)繪的，接受了5mg/kgGMPARC61的實(shí)驗(yàn)組的三只猴子的血葡萄糖值?；鶞?zhǔn)值(0小時(shí))表示的是在把含有5mg/kgGMPARC61的維持飲食的食團(tuán)喂給猴子之前的禁食血葡萄糖值。圖10.表示了由基準(zhǔn)血葡萄糖水平所計(jì)算出的血葡萄糖降低或增加的平均百分比。血糖葡萄降低的最高百分比發(fā)生在接受5mg/kgGMPARC613小時(shí)后。在監(jiān)測(cè)期的其余時(shí)間內(nèi)一直保持著較低的葡萄糖濃度。圖11.所示為在6小時(shí)監(jiān)測(cè)期內(nèi)所標(biāo)繪的，接受了25mg/kgGMPARC61的實(shí)驗(yàn)組的兩只猴子的血葡萄糖值?；鶞?zhǔn)值(0小時(shí))表示的是在把含有25mg/kgGMPARC61的維持飲食的食團(tuán)喂給猴子之前的禁食血葡萄糖值。圖12.表示了由基準(zhǔn)血葡萄糖水平所計(jì)算出的血葡萄糖降低或增加的平均百分比。在接受25mg/kgGMPARC61后，從3小時(shí)起血葡萄糖百分比與基線水平相比明顯較低，血葡萄糖百分比降低的最高百分比發(fā)生在5小時(shí)和6小時(shí)。圖13.表示了單一50mg/kgGMPARC61口服劑量3小時(shí)后所進(jìn)行的OGTT(lg/kg葡萄糖)的結(jié)果。所產(chǎn)生的STZ大鼠的血漿葡萄糖水平在所有時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照葡萄糖值相比均較低。圖14.表示了單一5mg/kgGMPARC61口服劑量3小時(shí)后所進(jìn)行的OGTT(1.75g/kg葡萄糖)的結(jié)果。在最初的30分鐘之后#1081猴子所產(chǎn)生的血葡萄糖濃度在所有時(shí)間點(diǎn)與未經(jīng)治療的猴子的葡萄糖值相比均較低。圖15.所示為給予絲絨猴(Vervetmonkey)7天不同劑量的提取物(ARC61)后，在6小時(shí)的時(shí)間里血漿葡萄糖下降的百分比。本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明下面提供的說(shuō)明使得本領(lǐng)域任何技術(shù)人員能夠制造和使用本發(fā)明，并且敘述了發(fā)明人實(shí)施本發(fā)明時(shí)考慮的最佳方式。但是，因?yàn)楸景l(fā)明的一般原理在本文已經(jīng)被具體定義為通過(guò)給予黃酮類化合物，特別是通過(guò)給予本發(fā)明的植物提取物來(lái)提供對(duì)胰島素依賴性和胰島素非依賴性糖尿病的治療，因此，各種變型對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將仍然是顯而易見的。定義術(shù)語(yǔ)"糖尿病(diabetesmellitus)"或"糖尿病(diabetes)"是指一種特征在于葡萄糖產(chǎn)生和利用方面產(chǎn)生導(dǎo)致不能維持機(jī)體適宜血糖濃度的代謝缺陷的疾病或情況。這些缺陷的結(jié)果就是被稱為"高血糖癥"的升高的血糖。糖尿病的兩種主要形式為l型糖尿病和2型糖尿病。如上所述，l型糖尿病通常為胰島素(調(diào)節(jié)葡萄糖利用的荷爾蒙)絕對(duì)缺乏的結(jié)果。2型糖尿病常常發(fā)生于正常或者甚至是胰島素濃度升高的情況下并且可能因組織對(duì)胰島素?zé)o法做出適當(dāng)?shù)捻憫?yīng)所引起。大多數(shù)2型糖尿病患者有胰島素抵抗性，并且由于胰島素分泌不能彌補(bǔ)周緣組織對(duì)胰島素響應(yīng)的抵抗力而具有相對(duì)不足的胰島素。此外，許多2型糖尿病患者是肥胖的。其它類型的葡萄糖穩(wěn)態(tài)失調(diào)包括葡萄糖耐量降低(其為正常葡萄糖穩(wěn)態(tài)和糖尿病之間的中間代謝期)。2型糖尿病和葡萄糖耐量降低的診斷指南已由美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)進(jìn)行了介紹(參見，例如，關(guān)于糖尿病診斷和分類的專家委員會(huì)(TheExpertCommitteeontheDiagnosisandClassificationofDiabetesMellitus)，糖尿病護(hù)理(DiabetesCare)，(1999)巻2(S聊11):S5_19)。術(shù)語(yǔ)糖尿病"癥狀"非限制性地包括包含其習(xí)慣用法的，多尿、煩渴、多食、超高胰島素血癥，和本文所用的高血糖癥。例如，"多尿"是指在一定時(shí)期內(nèi)大量尿液的通過(guò)；"煩渴"是指長(zhǎng)期、過(guò)度口渴；"多食"是指進(jìn)食過(guò)量，超高胰島素血癥是指升高了的胰島素血液濃度。其他糖尿病癥狀包括例如，對(duì)某些感染(特別是真菌和葡萄球菌感染)的易感性增加，惡心，及酮酸中毒(血中酮體生成增多)。齊[J量以治療有效量給予受試者紅灌木(Aspalathusssp.)植物提取物。本文所用術(shù)語(yǔ)"治療有效量"是指足以表明一個(gè)有意義獲益的總量，即降低受試者的血葡萄糖水平。根據(jù)本公開內(nèi)容本領(lǐng)域普通技術(shù)人員采用適當(dāng)?shù)膶?duì)照通過(guò)進(jìn)行常規(guī)試驗(yàn)可以測(cè)定出為獲得有意效果而所需的植物提取物的劑量。適當(dāng)?shù)闹委熃M與對(duì)照組的比較會(huì)顯示出特定的劑量對(duì)于降低受試者的血葡萄糖水平是否有效。當(dāng)口服給藥時(shí)，該提取物的給藥劑量應(yīng)為至少0.lmg/kg體重，優(yōu)選至少lmg/kg，更優(yōu)選至少2.5mg/kg，甚至更優(yōu)選至少5mg/kg，最優(yōu)選至少25mg/kg如至少50mg/kg、至少75mg/kg、至少100mg/kg、至少250mg/kg、禾P至少500mg/kg。所需的植物提取物量取決于所治療病情的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，和以前受試者所接受的治療的性質(zhì)。最終，該劑量將利用臨床試驗(yàn)來(lái)確定。最初，臨床醫(yī)師將給予得自動(dòng)物研究的劑量?？赏ㄟ^(guò)該組合物的一次給藥來(lái)獲得有效量?；蛘撸ㄟ^(guò)重復(fù)給予受試者該組合物來(lái)獲得有效量。在體外，以兩倍遞增的方式給予生物有效量即足以誘導(dǎo)葡萄糖攝取的量，以確定活性的最大范圍。口服、皮下和靜脈給藥的療效是在臨床研究中確定的。雖然該提取物的單次給藥可能是有益的，但預(yù)期將優(yōu)選多次給藥。遞送紅灌木植物提取物的給藥優(yōu)選地是口服給藥。雖然較不優(yōu)選，但該提取物也可經(jīng)注射給藥。適于口服給藥的本發(fā)明制劑可以以離散單位的形式存在，所述離散單位如膠囊、扁囊劑、片劑、大藥丸或錠劑，其各自包含預(yù)定數(shù)量的活性成分；還可以以粉末或顆粒的形式存在；或者為液體形式，例如水溶液、混懸液、糖漿、酏劑、乳劑、分散體等。該提取物可以以丸劑(位于膠囊中的粉末或濃縮液)或以在放到水中之后可以消費(fèi)(與飲茶或咖啡相似)的粉末形式(例如干燥的但是被壓縮成顆粒的粉末)進(jìn)行給藥。方便的適于腸胃外給藥的制劑包括活性化合物在例如注射用水、鹽水、聚乙二醇溶液等中的無(wú)菌制劑，其優(yōu)選地為是與接受者血液等滲的。有用的制劑還包括含有紅灌木植物提取物的濃縮的溶液或固體，其在用適宜的溶劑稀釋時(shí)，其可給出適于腸胃外給藥的溶液。除上述成分外，本發(fā)明所述制劑可進(jìn)一步包括任選的一種或多種藥物制劑領(lǐng)域所使用的配合劑，即稀釋劑、緩沖劑、調(diào)味劑、著色劑、粘合劑、表面活性劑、增稠劑、潤(rùn)滑劑、混懸劑、防腐劑(包括抗氧化劑)等等。對(duì)于任何所示情況而言有效的所需紅灌木植物提取物的數(shù)量當(dāng)然將隨著所治療的各哺乳動(dòng)物來(lái)進(jìn)行變化，并且最終由醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)從業(yè)者慎重考慮決定。需要考慮的因素11包括所治療的病情，給藥途徑，制劑的性質(zhì)，哺乳動(dòng)物的體重、體表面積、年齡和一般狀況，及所給的特定提取物。每日總劑量可以以單劑量、多劑量例如每日2至6次給予，或在選定的時(shí)間經(jīng)靜脈輸注的形式給予。高于或低于上述范圍的劑量也是在本發(fā)明范圍之內(nèi)的，并且如有需要和必要可以將其給予個(gè)別病人。所述組合物包含生物有效量的紅灌木植物提取物，和任選的相對(duì)惰性的載體。許多這樣的載體是經(jīng)常被使用的并可通過(guò)參考藥學(xué)文件來(lái)確定。所述的可接受的載體是生理可接受的稀釋劑或輔劑。術(shù)語(yǔ)生理可接受的意思是不會(huì)干擾類似物效能的無(wú)毒的材料。載體的特性將取決于給藥途徑和特定化合物或組合物中的化合物組合。這些制劑的制備在本領(lǐng)域的技術(shù)水平之內(nèi)。該組合物可進(jìn)一步包含可提高類似物的活性或彌補(bǔ)其活性的其它物質(zhì)。該組合物可進(jìn)一步包含填充劑、鹽類、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑，及其它本領(lǐng)域所熟知的材料。就本發(fā)明所述的黃酮類化合物而言，以下內(nèi)容是值得一提的。Aspalathin是在紅灌木中所發(fā)現(xiàn)的一種天然分子。該分子被列為黃酮類，是已知的至少4000個(gè)黃酮類化合物之一。Aspalathin是Aspalathuslinearis葉中所存在的主要單體多酚。Aspalathin的化學(xué)名為3'-C-fl-D-吡喃葡萄糖基_2'，3，4，4'，6'-五羥基二氫查爾酮(I)并具有如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>在紅灌木中存在其它具2-苯基色烯-4-酮(2-苯基-1-苯并吡喃-4-酮)主鏈的被稱作黃酮的相關(guān)化合物，所有這些化合物產(chǎn)生出某種抗糖尿病的活性(在體外已經(jīng)證實(shí))。盡管比例不同，但不同種的紅灌木都含有這些或類似的黃酮類化合物。已經(jīng)用糖尿病試驗(yàn)動(dòng)物(大鼠)進(jìn)行了試驗(yàn)。在這些模型系統(tǒng)中，本發(fā)明的紅灌木提取物在血葡萄糖控制方面是有效的。而且，合成的黃酮類化合物給藥在降低葡萄糖濃度方面也是有效的。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)Aspalathin與其它黃酮類特別是蘆丁的聯(lián)合會(huì)產(chǎn)生增強(qiáng)(協(xié)同)效應(yīng)，因?yàn)橛幂^低劑量的總黃酮類就能夠最大限度的降低血葡萄糖。當(dāng)aspalathin的摩爾濃度是蘆丁摩爾濃度的至少兩倍時(shí)該效應(yīng)最為明顯。此外還發(fā)現(xiàn)，這些黃酮類化合物的抗糖尿病作用當(dāng)以本發(fā)明所述植物提取物形式比其以純化的形式存在時(shí)更強(qiáng)。根據(jù)本發(fā)明，以及如上文和下文所述"糖尿病"優(yōu)選地是指非胰島素依賴型糖尿病(2型)；〃抗糖尿病的〃是指對(duì)"糖尿病"的"治療"有用的活性，其包括預(yù)防糖尿病的發(fā)展，和/或治療已確證的糖尿??；其還包括預(yù)防糖尿病的起因，和/或減少或消除糖尿病的癥狀和/或后果。尤其是，人們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物至少具有如下的雙重治療作用i)預(yù)防糖尿病，由于本發(fā)明所述化合物能夠治療葡萄糖耐量降低；禾口ii)實(shí)際治療已確證的糖尿病，由于本發(fā)明所述化合物能夠降低血葡萄糖水平。本發(fā)明的提取物優(yōu)選地包含一種作為活性成分的、具有aspalathin的基本特征的化合物和/或其可藥用鹽或前體藥物。該提取物更優(yōu)選地還包含一種作為活性成分的、具有蘆丁的基本特征的化合物。aspalathin的摩爾濃度最優(yōu)選地是為蘆丁摩爾濃度的至少兩倍。本發(fā)明另一方面還涉及用作具有抗糖尿病活性的藥物的所述提取物。本發(fā)明還涉及一種具抗糖尿病活性的、包含有效量所述提取物的藥物組合物；和涉及具抗糖尿病活性的aspalathin和蘆丁。本發(fā)明還提供了一種通過(guò)向人或動(dòng)物給予有效劑量的所述提取物或所述組合物來(lái)治療糖尿病的方法。本發(fā)明另一方面還涉及所述提取物在生產(chǎn)攝取后具有抗糖尿病作用的食品或飲料中的應(yīng)用。包含有效量所述提取物的攝入后具有抗糖尿病作用的所述的食品或飲料也是本發(fā)明的一部分。所述提取物優(yōu)選地包含作為活性成分的aspalathin和/或其可藥用鹽或前體藥物。本發(fā)明另一方面還涉及用作具有抗糖尿病活性的藥物的所述提取物。本發(fā)明還涉及一種具抗糖尿病活性的、包含有效量所述提取物的藥物組合物；和涉及具抗糖尿病活性的aspalathin。該活性成分可以是得自Aspalathus屬植物的提取物，或者具如下結(jié)構(gòu)的化合物(aspalathin)-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>或提取自Aspalathus屬植物的或合成制備的或其衍生物。所述植物可以為Aspalathus1優(yōu)選地本發(fā)明的化合物可以被制備成可藥用劑型。該抗糖尿病組合物或制劑可以包含與藥用輔料、稀釋劑或載體混合的抗糖尿病劑。可以添加其他適當(dāng)?shù)母郊觿┌ǚ€(wěn)定劑和可能需要的其他此類成分。該組合物可以被制備為單元?jiǎng)┬?。作為一種抗糖尿病劑，aspalathin或aspalathin與戸丁的聯(lián)合給人類使用的有益劑量為約0.05mg/kg/天至約100mg/kg/天。優(yōu)選的劑量范圍為約0.lmg/kg/天至約50mg/kg/天。當(dāng)使用本發(fā)明提取物的噴霧干粉形式時(shí)，優(yōu)選的劑量范圍為約0.5mg/kg/天至約100mg/kg/天；特別優(yōu)選地是約lmg/kg/天至約50mg/kg/天。Aspalathin與蘆丁優(yōu)選地摩爾比為1:1至2:1。本發(fā)明另一方面還涉及一種藥物組合物，其包含有效量的i)上述提取物或aspalathin或aspalathin與戸丁結(jié)合，以及ii)—種或多種選自以下的其他藥物治療糖尿病的代表藥物(r印resentativeagentstotreatdiabetes)、糖原磷酸化酶抑制劑、山梨醇脫氫酶抑制劑、葡糖苷酶抑制劑、醛糖還原酶抑制劑?？捎糜谥委熖悄虿〉拇硭幬锇ㄒ葝u素和胰島素類似物(例如，LysPro胰島素，含胰島素的吸入制劑);GLP-l(7-37)(胰島素調(diào)理素)和GLP-l(7-36)-NH2;磺脲類及類似物氯磺丙脲、格列本脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、醋酸己脲、格列吡嗪(glypizide)、格列美脲、瑞格列奈、氯茴苯酸；雙胍類二甲雙胍、苯乙雙胍、丁雙胍；a2-拮抗劑和咪唑啉咪格列唑、伊格列哚、德格列哚、咪唑克生、依法克生、氟洛克生；其他胰島素促分泌劑利諾格列、胰島素調(diào)理素、exendin-4、BTS-67582、A-4166;格列酮類環(huán)格列酮、吡格列酮、恩格列酮、曲格列酮、達(dá)格列酮、羅格列酮；PPAR-y激動(dòng)劑；RXR激動(dòng)劑JTT-501、MCC-555、MX-6054、DRF2593、GI_262570、KRP_297、LG100268;脂肪酸氧化抑制劑氯莫克舍、乙莫克舍；a-葡糖苷酶抑制劑阿卡波糖(precose)、阿卡波糖(acarbose)、米格列醇、乙格列酯、伏格列波糖、MDL-25，637、卡格列波糖、MDL-73，945;P-激動(dòng)劑BRL35135、BRL37344、Ro16-8714、ICID7114、CL316，243、TAK-667、AZ40140;磷酸二酯酶抑制劑(cAMP和cGMP型):西地那非、L686398:L_386，398;降脂藥苯氟雷司、阿托伐他汀；抗肥胖劑芬氟拉明、奧利司他、西布曲明；釩酸鹽和釩復(fù)合物(例如Naglivan⑧)及過(guò)氧釩酸鈉復(fù)合物；胰淀素(amylin)拮抗劑普蘭林肽、AC-137;脂氧合酶抑制劑mas叩rocal;生長(zhǎng)抑素類似物BM-23014、司格列肽、奧曲肽；胰高血糖素拮抗劑BAY276-9955;胰島素信號(hào)肽激動(dòng)劑、胰島素?cái)M似物(insulinmimetics)、PTP1B抑制劑L_783281、TER17411、TER17529;糖原異生抑制劑GP3034;生長(zhǎng)抑素類似物及拮抗劑；抗脂肪分解劑煙酸、阿昔莫司、WAG994;葡萄糖轉(zhuǎn)換剌激劑BM-130795;糖原磷酸化酶抑制劑葡萄糖合激酶(glucosesynthasekinase)抑制劑氯化鋰、CT98014、CT98023;促生長(zhǎng)激素神經(jīng)肽受體激動(dòng)劑；MTP抑制劑(如美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No.60/164，803中所公開的那些)；生長(zhǎng)激素促分泌素(如PCT公開號(hào)W097/24369和WO98/58947中所公開的那些)；NPY拮抗劑PD-160170、BW-383、BW1229、CGP-71683A、NGD95-1、L-152804;厭食藥包括5-HT和5-HT2C受體拮抗劑和/或擬似物右芬氟拉明、PrOZaC⑧、Zoloft;CCK受體激動(dòng)劑SR-27897B;促生長(zhǎng)激素神經(jīng)肽受體拮抗劑；MCR-4拮抗劑HP-228;瘦素或擬似物瘦素；11_|3_羥基固醇脫氫酶1_型抑制劑；尿皮質(zhì)素?cái)M似物，CRF拮抗劑，和CRF結(jié)合蛋白R(shí)U-486、尿皮質(zhì)素。其他可使用的抗糖尿病藥物包括ergoset和D_手性肌醇。其它抗糖尿病藥對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是已知的。任何糖原磷酸化酶抑制劑可被用作本發(fā)明的第二化合物。術(shù)語(yǔ)糖原磷酸化酶抑制劑是指會(huì)減少、延遲、或消除糖原磷酸化酶的酶促作用的任何物質(zhì)或者藥物或者物質(zhì)和/或藥物的任何組合。目前已知的糖原磷酸化酶的酶促作用是通過(guò)催化糖原高分子和無(wú)機(jī)磷酸鹽生成葡萄糖-l-磷酸和比原來(lái)的糖原高分子少一個(gè)葡糖殘基的糖原高分子(糖原分解的正向)的可逆反應(yīng)，來(lái)降解糖原的。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)(例如如下文所述)可以容易地測(cè)定這些作用。下列已公開的PCT專利申請(qǐng)中包括有許多種這樣的化合物PCT申請(qǐng)公開號(hào)WO96/39384和W096/39385。然而，其他糖原磷酸化酶抑制劑對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是已知的。任何山梨醇脫氫酶抑制劑可被用作本發(fā)明的第二化合物。山梨醇脫氫酶抑制劑可降低果糖水平并且已被用于治療或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥如神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病變、腎病變、心肌病、微血管病，以及大血管病。美國(guó)專利5，728，704和No.5，866，578公開了通過(guò)抑制山梨醇脫氫酶來(lái)治療或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的化合物和方法。葡糖苷酶抑制劑可抑制由糖苷水解酶例如淀粉酶或麥芽糖酶將復(fù)合碳水化合物(complexcarbohydrates)轉(zhuǎn)化成生物可用的單糖例如葡萄糖的酶解作用。葡糖苷酶的快速代謝作用(特別是繼高水平碳水化合物攝入后的快速代謝作用)可導(dǎo)致肥胖或糖尿病個(gè)體的營(yíng)養(yǎng)性高血糖癥狀態(tài)，該狀態(tài)可導(dǎo)致胰島素分泌增強(qiáng)、脂肪合成增加以及脂肪分解減少。繼這些高血糖癥之后，由于存在的胰島素濃度增大，所以常常會(huì)發(fā)生低血糖癥。此外，已知低血糖和胃中存留的食糜會(huì)促進(jìn)胃液的產(chǎn)生，這會(huì)引起或促進(jìn)胃炎或十二指腸潰瘍的發(fā)展。因此，葡糖苷酶抑制劑被認(rèn)為具有促進(jìn)從胃中排出碳水化合物和抑制從腸道吸收葡萄糖的作用。而且，碳水化合物向脂肪組織的脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化和后來(lái)結(jié)合的營(yíng)養(yǎng)性脂肪(alimentaryfat)向脂肪組織沉著物中的摻入相應(yīng)地減少或延遲，具有減少或防止由此產(chǎn)生的有害的異常情況的益處。任何葡糖苷酶抑制劑可以被用來(lái)與本發(fā)明的提取物聯(lián)合，和與aspalathin或aspalathin與蘆丁、其立體異構(gòu)體及前體藥物，和這些化合物的可藥用鹽、立體異構(gòu)體及前體藥物的組合聯(lián)合。然而，通常葡糖苷酶抑制劑優(yōu)選地包含淀粉酶抑制劑。淀粉酶抑制劑為一種抑制淀粉或糖原酶降解成麥芽糖的葡糖苷酶抑制劑。抑制這種酶的降解在減少生物可利用糖(包括葡萄糖和麥芽糖)量和伴發(fā)的由此產(chǎn)生的有害情況方面是有利的。各種葡糖苷酶抑制劑對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言將是已知的。但是，在本發(fā)明所述的藥物組合物、組合、方法，以及試劑盒的實(shí)踐中，通常優(yōu)選的葡糖苷酶抑制劑為選自阿卡波糖(acarbose)、脂解素、伏格列波糖、米格列醇、乙格列酯、MDL-25637、卡格列波糖、tendamistate、AI-3688、trestatin、普拉米星-Q以及salbostatin的那些抑制劑。在美國(guó)專利No.4，062，950和No.4，174，439中分別公開了葡糖苷酶抑制劑阿卡波糖(acarbose)、0-4，6_二脫氧_4_[[(1S，4R，5S，6S)-4，5，6-三羥基-3-(羥甲基)-2-環(huán)己烯-1-基]-氨基]-a-吡喃葡萄糖基-(1—4)-0-a-D-吡喃葡萄糖基_(1—4)_D_葡萄糖、與此相關(guān)的各種氨基糖衍生物和通過(guò)游動(dòng)放線菌菌株SE50(CBS961.70)、SB18(CBS957.70)、SE82(CBS615.71)、SE50/13(614.71)和SE50/110(674.73)的微生物培養(yǎng)來(lái)對(duì)其進(jìn)行制備的過(guò)程。在美國(guó)專利No.4，254，256中公開了由1型和2型脂解素組成的葡糖苷酶抑制劑脂解素。此外，在Namiki等人，J.Antiobiotics，35，1234-1236(1982)中公開了脂解素的制備和純化過(guò)程。在美國(guó)專利No.4，701，559中公開了葡糖苷酶抑制劑伏格列波糖、3，4-二脫氧-4-[[2-羥基-l-(羥甲基)乙基]氨基]-2-C-(羥甲基)-D-表-肌醇，及與此相關(guān)的各種N-取代的假-氨基糖。在美國(guó)專利No.4，639，436中公開了葡糖苷酶抑制劑米格列醇、(2R，3R，4R，5S)-1-(2-羥乙基)-2-(羥甲基)-3，4，5-piperidinerto1，以及與此相關(guān)的各種3，4，5-三羥基哌啶類化合物。在美國(guó)專利No.5，192，772中公開了葡糖苷酶抑制劑乙格列酯、乙基p_[2-[(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-2-(羥甲基)哌啶基]乙氧基]-benzota，與此相關(guān)的各種衍生物和其可藥用酸加成鹽。在美國(guó)專利No.4，634，765中公開了葡糖苷酶抑制劑MDL-25637、2，6-二脫氧-7-0-13-D-吡喃葡萄糖基_2，6-亞氨基-D-甘油-L-葡糖-庚糖醇，與此相關(guān)的各種同構(gòu)二糖(homodisaccharides)和其可藥用酸加成鹽。在美國(guó)專利No.5，157，116和No.5，504，078中公開了葡糖苷酶抑制劑卡格列波糖、甲基6-脫氧_6-[(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羥基-2-(羥甲基hrdroxymethyl)哌啶子基]13-D-吡喃葡萄糖苷倍半水合物、與此相關(guān)的脫氧_野尻霉素衍生物，各種其可藥用鹽和對(duì)其進(jìn)行制備的合成方法。在美國(guó)專利No.5，091，418和No.5，217，877中分別公開了葡糖苷酶抑制劑普拉米星-Q和用疣孢馬杜拉放線菌菌株R103-3或A10102的微生物培養(yǎng)來(lái)對(duì)其進(jìn)行制備的過(guò)程。在美國(guó)專利No.5，091，524中公開了糖苷酶抑制劑salbostatin、與此相關(guān)的各種假糖(pseudosaccharides)、各種其可藥用鹽和用白色鏈霉菌菌株ATCC21838的微生物培養(yǎng)來(lái)對(duì)其進(jìn)行制備的過(guò)程?？蓪⑷魏稳┨沁€原酶抑制劑用于本發(fā)明的藥物組合物、方法和試劑盒中。術(shù)語(yǔ)指會(huì)抑制由醛糖還原酶催化的由葡萄糖轉(zhuǎn)化成山梨醇的生物轉(zhuǎn)化的一種化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員按照標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)(standardassays)可迅速的確定這些抑制作用(J.Malone，糖尿病(Diabetes)，29:861-864，1980.《紅細(xì)胞山梨醇，一種糖尿病控制指示劑》(RedCellSorbitol,anIndicatorofDiabeticControl))。下述專利和專利申請(qǐng)，將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考，就可用于本發(fā)明所述的組合物、方法及試劑盒的醛糖還原酶抑制劑，和涉及制備這些醛糖還原酶抑制劑的方法舉例說(shuō)明美國(guó)專利No.4，251，528;美國(guó)專利No.4，600，724;美國(guó)專利No.4，464，382，美國(guó)專利No.4，791，126，美國(guó)專利No.4，831，045;美國(guó)專利No.4，734，419;4，883，800;美國(guó)專利No.4，883，410;美國(guó)專利No.4，883,410;美國(guó)專利No.4，771,050;美國(guó)專利No.5，252，572;美國(guó)專利No.5，270，342;美國(guó)專利No.5，430，060;美國(guó)專利No.4，130，714;美國(guó)專利No.4，540，704;美國(guó)專利No.4，438，272;美國(guó)專利No.4，436，745，美國(guó)專利No.4，438，272;美國(guó)專利No.4，436，745，美國(guó)專利No.4，438，272;美國(guó)專利No.4，436，745，美國(guó)專利No.4，438，272;美國(guó)專利No.4，980，357;美國(guó)專利No.5，066，659;美國(guó)專利No.5，447，946;美國(guó)專利No.5，037，831。下文特別對(duì)各種醛糖還原酶抑制劑進(jìn)行了描述和提供了參考，然而，其它醛糖還原酶抑制劑將會(huì)被本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。而且，在適宜的情況中還在括號(hào)中給出了USAN通用化學(xué)名稱或其它命名，以及公開了該化合物的適宜專利文獻(xiàn)的參考資料。因此，用于本發(fā)明的組合物、方法及試劑盒的醛糖還原酶抑制劑的實(shí)例包括1.3-(4-溴-2-氟苯甲基)-3，4-二氫-4-氧代-l-酞嗪乙酸(泊那司他，美國(guó)專利No.4，251，528);2.N[[(5_三氟甲基)-e-甲氧基-1-萘基]硫代甲基}-N-甲基甘氨酸(托瑞司他，美國(guó)專利No.4，600，724);3.5-[(Z，E)-P-甲基亞肉桂基]-4-氧代-2-硫代-3-噻唑烷乙酸(thiazolideneaceticacid)(依帕司他，美國(guó)專利No.4，464，382、美國(guó)專利No.4，791，126、美國(guó)專利No.4，831，045);4.3-(4-溴-2-氟苯甲基)-7-氯-3，4-二氫-2，4-二氧代-l(2H)-喹唑啉乙酸(折那司他，美國(guó)專利No.4，734，419，和美國(guó)專利No.4，883，800);5.2R，4R-6，7-二氯-4-羥基-2-甲基色滿-4-乙酸(美國(guó)專利No.4,883,410);6.2R，4R-6，7-二氯-6-氟-4-羥基-2-甲基色滿-4-乙酸(美國(guó)專利No.4，883，410);7.3，4-二氫-2，8-二異丙基-3-氧代-211-1，4-苯并噁嗪-4-乙酸(美國(guó)專利No.4，771，050);8.3，4-二氫-3-氧代-4-[(4，5，7-三氟-2-苯并噻唑基)甲基]_2H_1，4-苯并噻嗪_2乙酸(SPR-210，美國(guó)專利No.5，252，572);9.N-[3，5-二甲基-4-[(硝甲基)磺?；鵠苯基]_2-甲基-苯乙酰胺(ZD5522，美國(guó)專利No.5，270，342和美國(guó)專利No.5，430，060);10.(S)-6-氟螺[色滿-4，4'-咪唑烷]_2，5小-二酮(索比尼爾，美國(guó)專利No.4，130，714);11.d-2-甲基-6-氟-螺(色滿-4'，4'-咪唑烷)_2'，5'-二酮(美國(guó)專利17No.4，540，704);12.2-氟-螺(9H-芴_9，4'-咪唑烷)_2'，5'-二酮(美國(guó)專利No.4，438，272);13.2，7-二氟-螺(9H-芴-9，4'-咪唑烷)_2'，5'-二酮(美國(guó)專利No.4，436，745、美國(guó)專利No.4，438，272);14.2，7-二氟-5_甲氧基-螺(9H-芴-9，4'-咪唑烷)_2'，5'-二酮(美國(guó)專利No.4，436，745、美國(guó)專利No.4，438，272);15.7-氟-螺(5H-茚并[l，2_b]吡啶-5，3'-吡咯烷)_2，5'-二酮(美國(guó)專利No.4，436，745、美國(guó)專利No.4，438，272);16.d-順-6'-氯_2'，3'-二氫_2'_甲基_螺_(咪唑烷_4，4'-4'H-吡喃并(2，3-b)吡啶)-2，5-二酮(美國(guó)專利No.4，980，357);17.螺[咪唑烷-4，5'(6H)-喹啉]-2，5-二酮-3'_氯_7'，8'_二氫_7'，8'-二氫_7'-甲基-(5-'_順)(美國(guó)專利No.5，066，659);18.(2S，4S)-6-氟-2'，5'_二氧代螺(色滿_4，4'_咪唑烷)_2_氨甲酰(非達(dá)司他，美國(guó)專利No.5，447，946);禾口19.2-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-6-氟螺[異喹啉-4(lH)，3'-吡咯烷]-l，2'，3，5'(2H)-四酮(米那司他，美國(guó)專利No.5，037，831).本發(fā)明還涉及如上所述的成分i)和ii)的所述聯(lián)合在制備具有抗糖尿病活性的藥物中的應(yīng)用；治療或預(yù)防糖尿病的方法，其包括給予人或動(dòng)物有效量的所述聯(lián)合；禾口聯(lián)合用于治療或預(yù)防糖尿病的上述活性成分(i)和(ii)的試劑盒或單個(gè)包裝。成分i)和ii)的聯(lián)合可以被同時(shí)、分別、或以任意順序順次地給藥。優(yōu)選地本發(fā)明涉及一種降低或維持葡萄糖血液水平的方法，其通過(guò)給予人或動(dòng)物有效量的提取物，或如上所述的化合物或含與此相同成分的組合物來(lái)進(jìn)行。優(yōu)選地本發(fā)明涉及通過(guò)食用含提取物，或如上所述的化合物的食品或飲料來(lái)降低或維持血液葡萄糖濃度的方法。更優(yōu)選地是，本發(fā)明還涉及葡萄糖耐量降低的治療。而且更優(yōu)選地是，本發(fā)明提供了一種保護(hù)作用，其可以使得在攝取上述的提取物、化合物、組合物和/或食品或飲料后，葡萄糖血液水平基本上不會(huì)增加。本發(fā)明還提供了一種用于從Aspalathuslinearis中提取該活性成分的方法。具抗糖尿病活性的本發(fā)明提取物可以按照下述方法進(jìn)行制備。用于制備含有抗糖尿病劑的Aspalathus屬植物提取物的方法包括以下步驟用溶劑處理收集的植物原料以提取具抗糖尿病活性的級(jí)分，從剩余的植物原料中分離該提取物溶液，除去提取物溶液中的溶劑并回收該提取物?？蓪⒃摶厥盏奶崛∥镞M(jìn)行進(jìn)一步的純化，例如用適當(dāng)?shù)娜軇┹腿》椒?。可以從植物原料如Aspalathus屬植物的葉、莖和根中制備該提取物。在本發(fā)明的一個(gè)應(yīng)用中，該抗糖尿病提取物是從Aspalathuslinearis中得到的。在適當(dāng)溶劑如(例如甲醇/二氯甲烷溶劑)存在的情況下用裝置如華林?jǐn)嚢杵?Waringblender)可將該植物原料均質(zhì)化。然后用適當(dāng)?shù)姆蛛x手段如過(guò)濾或離心可以將該提取液從剩余的植物原料中分離出來(lái)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，優(yōu)選在6(TC水浴中可以將該溶劑除去。然后在被分成二氯甲烷提取物和水提取物之前進(jìn)一步用二氯甲烷和水對(duì)該已分離的粗提物進(jìn)行萃取。二氯甲烷提取物中的溶劑優(yōu)選地在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)除去，可以用甲醇/己烷萃取的方法對(duì)所得的提取物進(jìn)行進(jìn)一步純化。然后分離該甲醇/己烷萃取產(chǎn)物從而得到甲醇提取物和己烷提取物。蒸發(fā)除去甲醇提取物的溶劑從而得到部分純化的活性提取物?？蓪⒃摬糠旨兓幕钚蕴崛∥锶茉诩状贾?，并通過(guò)用硅膠作吸附劑，用氯仿/30%甲醇混合物作洗脫劑的柱層析進(jìn)行進(jìn)一步的組分分離?？梢缘玫蕉鄠€(gè)不同的級(jí)分，并用適當(dāng)?shù)纳餃y(cè)試手段可以對(duì)每一級(jí)分進(jìn)行評(píng)價(jià)，以測(cè)定其抗糖尿病活性。具抗糖尿病活性的級(jí)分優(yōu)選地可以通過(guò)用如硅膠作吸附劑，用氯仿甲醇(9:1)溶劑的柱層析進(jìn)行進(jìn)一步的組分分離，并生物測(cè)定由此得到的亞級(jí)分(sub-fractions)的抗糖尿病活性。如有需要，可以方便地使用柱層析法(用硅膠作吸附劑，乙酸乙酯己烷(9:i)作為洗脫劑)將顯示出抗糖尿病活性的亞級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步的組分分離和純化。所得的純化級(jí)分可以再次用適當(dāng)?shù)纳餃y(cè)定手段來(lái)對(duì)其進(jìn)行抗糖尿病活性評(píng)估。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這些純化級(jí)分中至少有一個(gè)具有優(yōu)良的抗糖尿病活性，并且用常規(guī)的化學(xué)技術(shù)包括核磁共振鑒定了該級(jí)分中的活性成分，并發(fā)現(xiàn)其為aspalathin。可以干燥該提取物(例如通過(guò)用噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥)以去除其水分，形成能自由流動(dòng)的粉末。用下面的實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明及其功效進(jìn)行了進(jìn)一步描述，但是并不是要用其對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1植物提取物(實(shí)驗(yàn)室規(guī)模)綠色植物原料(Greenplantmaterial)是指以防止植物多酚和特別是黃酮類的酶性氧化/化學(xué)氧化的方式進(jìn)行干燥的植物原料。可使用各種不同的干燥方法。氧化的植物原料是指在切割葉和莖后，被氧化幾個(gè)小時(shí)的植物原料。后一過(guò)程引起了多酚特別是黃酮類的酶性氧化和化學(xué)氧化。可以加入水/酶混合物以幫助在加工中的氧化過(guò)程期間發(fā)生的酶/化學(xué)變化。在下述的實(shí)施例中，所用的植物提取物已經(jīng)通過(guò)如下操作得到。該制備過(guò)程包括在1000ml新鮮煮沸的去離子水中將100g粉碎的植物原料/Aspalathuslinearis葉(lmm篩網(wǎng))浸泡5分鐘。然后用布氏漏斗，125ym的合成網(wǎng)眼布(PolymerPESD25/35,由瑞士SilkBoltingClothMfg.有限公司提供，蘇黎世，瑞士)粗濾提取物，接著用WhatmanNo.4濾紙(WhatmanInternationalLtd.，梅德斯通，英國(guó))除去細(xì)小的顆粒。將該濾液在塑料托盤(170X115X30mm)中在-2(rC條件冷凍后，再在Atlas中試規(guī)模的凍干機(jī)中(Denmark型，哥本哈根，丹麥，4(TC擱板溫度)將其冷凍干燥。將凍干的水提物置于透明的玻璃小瓶中并儲(chǔ)存在暗處的真空干燥器中。1.飽鄰培養(yǎng)用于抗糖尿病篩詵的體外測(cè)li式樽型(細(xì)胞系)糖尿病是一種會(huì)影響多個(gè)不同器官的多因子疾病。因此，用各自代表受糖尿病影響的不同器官的三個(gè)細(xì)胞系的組合和獨(dú)特而簡(jiǎn)單的、非放射性的方法來(lái)測(cè)定代替葡萄糖轉(zhuǎn)換的葡萄糖利用。方法本方法通過(guò)用96孔板中的3T3-L1脂肪細(xì)胞、張氏肝細(xì)胞和C2C12肌細(xì)胞，在1至3小時(shí)的時(shí)間里(其取決于細(xì)胞系)測(cè)定葡萄糖利用。這是通過(guò)讓細(xì)胞挨餓，加入葡萄糖，然后監(jiān)測(cè)葡萄糖從孵化介質(zhì)(存在和不存在測(cè)試樣本的孵化介質(zhì))中的消失情況來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在測(cè)定葡萄糖利用之前，將脂肪細(xì)胞和肝臟細(xì)胞預(yù)先暴露于測(cè)試樣本48小時(shí)，以確保還考慮了任何慢性作用。將暴露于提取物48小時(shí)的細(xì)胞的生存能力與對(duì)照組細(xì)胞的生存能力進(jìn)行比較，從而可以確定有潛在毒性的樣本。較長(zhǎng)的孵育時(shí)間，以及測(cè)定葡萄糖利用或代謝能夠使任何包含在葡萄糖代謝而不僅僅是葡萄糖轉(zhuǎn)換途徑的變化被檢測(cè)出來(lái)。表1概述了所測(cè)定的這三種細(xì)胞系的響應(yīng)。這些組合涵蓋了除減少腸道葡萄糖吸收的那些藥物外的、目前可用于治療2型糖尿病的所有類型降血糖藥物的作用機(jī)理。表l.用于常規(guī)抗糖尿病篩選的三種細(xì)胞系概述<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述的提取物可有效提高C2C12細(xì)胞系的葡萄糖攝取，表現(xiàn)出與胰島素相似的活性。該提取物有效作用于張氏肝臟細(xì)胞，表現(xiàn)出相似于雙胍的活性。2.鏈脲菌素樽型(T1D)或晚期T2D在本研究期間使用成年雄性Wistar大鼠(200-250g)。以36mg/kg的劑量給成年雄性Wistar大鼠肌內(nèi)注射鏈唑霉素(STZ)以降低或耗竭產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞數(shù)量和在典型1型糖尿病或晚期T2D水平下誘導(dǎo)高血糖癥。將大鼠禁食3小時(shí)，但是使其可自由飲水。在STZ注射后72小時(shí)，從其尾靜脈取血樣。用血糖測(cè)定儀(PrecisionQ.I.D.;AbbottLaboratories)，用葡萄糖氧合酶法測(cè)定血槳葡萄糖濃度。認(rèn)為血葡萄糖水平比禁食水平高300%的大鼠有糖尿病并選擇該類大鼠進(jìn)行所述研究。所述提取物對(duì)STZ大鼠血槳葡萄糖的急性作用將糖尿病大鼠分成4組，每組6只大鼠。灌胃操作用20mg/kg的戊巴比妥鈉對(duì)糖尿病大鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)注射以誘導(dǎo)輕微麻醉狀態(tài)。大約10至15分鐘后，這些大鼠已足夠平靜從而可以容易和輕松地對(duì)其進(jìn)行處理，但其吞咽反射是完好無(wú)損的。將一根Teflon管飼導(dǎo)管通過(guò)口腔和食管放置到動(dòng)物的胃中，并將lml含有所需提取物的水直接注射到其胃中。然后，再向其中注射大約200ul水以將該飼導(dǎo)管中的任何剩余提取物沖洗下來(lái)。然后，將該導(dǎo)管迅速取出并將大鼠放回到其籠子中使其進(jìn)行恢復(fù)。A組被給予生理鹽水，B組被給予5mg/kg的植物提取物，C組被給予25mg/kg的植物提取物和D組被給予50mg/kg的植物提取物。以1小時(shí)的時(shí)間間隔，測(cè)定6小時(shí)的血漿葡萄糖?？诜咸烟悄土吭囼?yàn)(OGTT)在輕微麻醉(氟烷)下，禁食16小時(shí)的糖尿病STZ大鼠以25mg/kg的劑量通過(guò)灌胃接受植物提取物。在3小時(shí)后，這些動(dòng)物以lg/kg的劑量口服葡萄糖藥丸。在0、1、5U0、15、20、30、60和120分鐘，以mmo1/1為單位測(cè)量血漿葡萄糖水平。在注射了用于減少或耗盡B-細(xì)胞的鏈脲菌素的成年雄性Wistar大鼠中，急性口服所述提取物在6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)引起血糖進(jìn)行性降低。在5mg/kg的最低劑量下，該植物提取物在1小時(shí)后將血漿葡萄糖降低16%，在6小時(shí)后，該降低增加至31%。在25mg/kg的單次口服劑量后，進(jìn)行了3小時(shí)的0GTT(lg/kg葡萄糖)的結(jié)果表明在所有的取樣時(shí)間點(diǎn)，STZ大鼠的血漿葡萄糖水平都低于對(duì)照的葡萄糖值(見圖3)。3.Wistar大鼠骨骼肌樽型2-脫,氧,葡萄糖攝取在本研究期間使用無(wú)脂肪成年雄性Wistar大鼠(200_250g)。將無(wú)脂肪大鼠分成7組，每組6只。灌胃操作用20mg/kg的戊巴比妥鈉對(duì)無(wú)脂肪大鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)注射以誘導(dǎo)輕微麻醉狀態(tài)。大約10至15分鐘之后，這些大鼠已足夠平靜從而可以容易和輕松地對(duì)其進(jìn)行處理，但其吞咽反射是完好無(wú)損的。在20秒的時(shí)間內(nèi)用0.5mg/kg的50%的葡萄糖對(duì)這些大鼠進(jìn)行尾靜脈注射。將一根Teflon管飼導(dǎo)管通過(guò)口腔和食管放置到動(dòng)物的胃中，并將lml含有所需提取物的水直接注射到其胃中。然后，再向其中注射大約200ul水以將該飼導(dǎo)管中的任何剩余提取物沖洗下來(lái)。然后，將該導(dǎo)管迅速取出并將大鼠放回到其籠子中使其進(jìn)行恢復(fù)。A組被給予水，B組被給予2.5mg/kg的所述植物提取物，C組被給予5mg/kg的所述植物提取物，D組被給予12.5mg/kg的所述植物提取物，E組被給予25mg/kg的所述植物提取物，F(xiàn)組被給予50mg/kg的所述植物提取物，G組被給予300mg/kg的所述植物提取物。在1小時(shí)后，將這些動(dòng)物安樂(lè)死，收集骨骼肌并將其冷凍在液氮中。以5mg/kg和50mg/kg獲得了無(wú)脂肪大鼠骨骼肌葡萄糖攝取的最佳結(jié)果?？傮w結(jié)果在用str印totocin處理的大鼠體內(nèi)，用本發(fā)明提取物處理顯著降低了禁食血葡萄糖水平。結(jié)論在葡萄糖攝取增加方面，所述植物2提取物表現(xiàn)出與噻唑烷類和胰島素(在脂肪細(xì)胞研究中)和雙胍類(在張氏肝臟細(xì)胞中)相似的功效。用該植物提取物進(jìn)行處理可有效降低鏈脲菌素處理的(晚期T2D)血槳葡萄糖水平。該提取物在使受所損害的葡萄糖水平正?；矫姹憩F(xiàn)出令人鼓舞的功效。實(shí)驗(yàn)II本實(shí)驗(yàn)闡述了用于降低血漿葡萄糖水平的本發(fā)明植物提取物的最佳劑量。在本實(shí)驗(yàn)中使用猴子是為了盡可能的類似于人類的情況。使用的論證和驗(yàn)證絲絨猴(Chlorocebusaethiops)也被稱作非洲綠猴，是兩個(gè)非洲非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物物種之一，被普遍用于生物醫(yī)學(xué)研究和南部非洲地方病(研究)中。除了幾個(gè)例外，國(guó)際上非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的使用更多的是受地緣政治學(xué)和邏輯學(xué)方面而不是受生物學(xué)方面考慮的影響。因?yàn)樗鼈兌紝儆谙嗤膩喛疲越z絨猴分類學(xué)上與獼猴(macaques)(即恒河猴(rhesus))密切相關(guān)(Fairbanks2002)。雖然絲絨猴被用于許多領(lǐng)域，包括病毒學(xué)、細(xì)菌學(xué)、寄生蟲學(xué)、神經(jīng)病學(xué)、毒理學(xué)、生殖和細(xì)胞生物學(xué)，但已證明它們?cè)谛难芎痛x疾病領(lǐng)域是特別有用的。因此，有豐富的文獻(xiàn)具有確認(rèn)這種充分建立了的模型的信息和數(shù)據(jù)(deVries等人2007、Fairbanks2002、Fincham等人1998、Kavanagh等人2007、Louw等人1997、Martin等人1990、Rudel等人1981、Smuts等人1992、Suckling和Jackson1993、Wallace等人2005、Weight等人1988)。需要著重注意的是，絲絨猴會(huì)發(fā)生自發(fā)性肥胖、胰島素抵抗性和2型糖尿病(Fairbanks2002，F(xiàn)rancis等人1999，Kavannagh等人2007，Tigno等人2005)。已有報(bào)道某一特定群體差不多有25%的雌性和16%的雄性是肥胖的(Kava皿agh等人2007)。像人類一樣，非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物產(chǎn)生了包括腎臟、血管和神經(jīng)學(xué)上的所有相關(guān)并發(fā)癥(Tigno等人2005)。在一些絲絨猴群體中差不多有4%的猴子可能具有異常的高血漿葡萄糖濃度(Fairbanks2002，Kavanagh等人2007)，并且腰圍、增加的血漿胰島素及血漿甘油三酯濃度之間有顯著的正相關(guān)(Kava皿agh等人2007)。還已證實(shí)在該物種中，肥胖和相關(guān)的血漿脂質(zhì)以及其它危險(xiǎn)因素是可以遺傳的(Kava皿agh等人2007)。還需要著重注意的是絲絨猴可產(chǎn)生自發(fā)性動(dòng)脈粥樣硬化，并對(duì)實(shí)驗(yàn)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控響應(yīng)良好從而可產(chǎn)生血脂異常(dyslipidaemia)并最終產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化(Fairbanks2002，Rudel等人1981，F(xiàn)incham等人1998，Suckling和Jackson1993)。在機(jī)理和損傷模型下相關(guān)的人類情況(Fincham等人，1996、Fincham等人，1998、Rudel等人，1981)和絲絨猴對(duì)有良好記載的較早和更新的藥物干預(yù)策略都有響應(yīng)(Fincham等人1996、St.Clair等人1981、Wallace等人2005)。靈長(zhǎng)類動(dòng)物的管理在本研究中，按照文件化的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Mdhluli2005)，和關(guān)于研究和訓(xùn)練中動(dòng)物使用的MRC指南(MRCGuidelinesontheUseofAnimalsinResearchandTraining)、研究中所用動(dòng)物的國(guó)家代碼(theNationalCodeforAnimalUseinResearch)、南非藥物和相關(guān)物質(zhì)的教育、診斷和檢測(cè)(Education,DiagnosisandTestingofDrugsandrelatedSubstancesinSouthAfrica)，和1997年獸醫(yī)和準(zhǔn)獸醫(yī)職業(yè)法(VeterinaryandPara-VeterinaryProfessionsActof1997):關(guān)于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物技術(shù)人員的準(zhǔn)獸醫(yī)職業(yè)從業(yè)條例(RulesrelatingtothepracticingofthePara-VeterinaryProfessionofLaboratoryAnimalTechnologist)對(duì)靈長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)行管理禾口護(hù)理。猴子的選擇及其永久性身份證明本研究所選用的所有個(gè)體都是第二代人工繁育的、平均重量分別為5.56kg(±0.724)和3.16kg(±0.266)的、健康的成年雄性和雌性。雄性的平均年齡為12歲，雌性的為7歲。圈養(yǎng)的雌性絲絨猴性成熟大約在2.5至3.0歲，雄性大約在3.0至4.0歲(Eley1992)。所有的個(gè)體在通過(guò)體格檢查和以前的臨床記錄進(jìn)行判斷時(shí)都沒(méi)有明顯的病狀，具有與年齡相當(dāng)?shù)恼ｓw重，并且用墨水紋身上的永久編號(hào)對(duì)其進(jìn)行了鑒定。此外，根據(jù)個(gè)體號(hào)、小組名稱和試驗(yàn)號(hào)對(duì)籠子進(jìn)行標(biāo)記。環(huán)境條件本項(xiàng)研究所用的所有絲絨猴都被維持在MRC的技術(shù)創(chuàng)新董事會(huì)的靈長(zhǎng)類動(dòng)物單位(PrimateUnitoftheTechnologyandI皿ovationdirectorateoftheMRC)中，維持在相同居住條件下。在一種保持在24-26t:的溫度，約45%的濕度，每小時(shí)換氣約15-20次和12小時(shí)光照的封閉的室內(nèi)環(huán)境條件下，該設(shè)備由14個(gè)全空調(diào)的動(dòng)物房間組成。所有房間都保持正壓并具有獨(dú)立的空氣供給。住所在本研究期間，籠框是各自獨(dú)立的，其由90X70X120cm的懸掛的電鍍鋼籠所組成，并在一個(gè)室中供養(yǎng)24只猴子。動(dòng)物室每天消毒一次?；\子的尺寸針對(duì)單個(gè)動(dòng)物的南非國(guó)家法規(guī)(SouthAfricanNationalCode)的要求一致。食物和水水由自動(dòng)供水裝置供給。以維持飲食為基礎(chǔ)的玉米粉是在靈長(zhǎng)類動(dòng)物單位(PrimateUnit)中生產(chǎn)的，并且已經(jīng)為三代動(dòng)物提供了良好生長(zhǎng)和繁育支持(Seier1986)。將70g由干玉米粉組成的、含有附加的微量營(yíng)養(yǎng)素和大量營(yíng)養(yǎng)素的維持飲食與水混合從而得到一種稠硬狀物，并在7:00am，11:00am時(shí)將其喂給猴子，將另外70g但不添加營(yíng)養(yǎng)素的玉米粉在3:00pm時(shí)喂給猴子。這可以每天為每只猴子提供2412kJ的能量，12%的能量來(lái)自蛋白，20%來(lái)自脂肪，68%來(lái)自碳水化合物。此外，每天中午喂給每只猴子70g的蘋果或橘子。早前已有了對(duì)該飲食詳細(xì)成分的描述(Fincham等人1987，Venter等人1993)。支持裝置對(duì)于研究、操作(即采血)、手術(shù)(手術(shù)室)和驗(yàn)尸中的籠子衛(wèi)生設(shè)備、食物制備和儲(chǔ)存、化合物的儲(chǔ)存和配制而言，靈長(zhǎng)類動(dòng)物單位的所有活動(dòng)都是通過(guò)專用區(qū)域和房間而完全物理隔離的。環(huán)境強(qiáng)化單個(gè)的籠子都裝了離籠子地板高80cm的靜止的棲木，覓食鍋和溝通面板(communicationpanels)(其使得同種個(gè)體之間可以相互梳理毛發(fā)和身體接觸)。每只猴子每星期可使用三次大小為90X70X200cm的運(yùn)動(dòng)籠(exercisecage)，該籠可使猴子離開家籠(homecage)并進(jìn)行一些在家籠中不能進(jìn)行的活動(dòng)(Seier和deLange1996)。該籠子還可以使得猴子能夠與在該房間以及隔壁房間(通過(guò)玻璃面)中的其它動(dòng)物進(jìn)行360。的交流。在每個(gè)動(dòng)物房間播放輕柔的音樂(lè)和鳥的聲音以減輕聽覺上的單調(diào)。早前已有了對(duì)其它強(qiáng)化方法的描述(Seier等人2004)。健康和疾病控制通過(guò)向上眼瞼皮內(nèi)注射3000單位的PPD，每年對(duì)所有的動(dòng)物進(jìn)行四次TB檢查。通過(guò)分枝桿菌支氣管分泌物的培養(yǎng)，每年對(duì)MRC全體職工和學(xué)生，以及服務(wù)提供者進(jìn)行兩次TB檢查。按照靈長(zhǎng)類動(dòng)物單位的SOP規(guī)定，有時(shí)對(duì)絲絨猴進(jìn)行附加的細(xì)菌和血清學(xué)檢測(cè)，并且檢測(cè)是符合公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)的(FELASA1998)。其包括檢測(cè)志賀氏菌、沙門氏菌、彎曲桿菌以及耶爾森氏菌。23絲絨猴的處理、給藥，以及樣品采集絲絨猴的操作和處理應(yīng)按照靈長(zhǎng)類動(dòng)物單元SOP，和所有其它前言中所提到的指南的規(guī)定。其由完全合格的及有經(jīng)驗(yàn)的、已在SA實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物技術(shù)獸醫(yī)委員會(huì)注冊(cè)的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物技術(shù)人員來(lái)執(zhí)行和/或監(jiān)督。觀察每天對(duì)所有的動(dòng)物進(jìn)行三次觀察以確定該治療潛在的身體方面的副作用。采用下列標(biāo)準(zhǔn)姿勢(shì)、協(xié)調(diào)性、運(yùn)動(dòng)性、活動(dòng)性、行為情況(警覺的、不安的、攻擊性的、困惑的、沮喪的、發(fā)聲的樣子)、從室口中釋放的情況(dischargefromorifices)、食欲、大小便情況。GMPARC61制劑制備本發(fā)明的植物提取物制劑以在靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型中測(cè)定生物活性。預(yù)先測(cè)試了生物活性的"發(fā)酵的"Aspalathuslinearis的葉和莖，是在cGMP設(shè)施中制備的。生產(chǎn)詳情兩種產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程包括下述單元操作提取該植物原料，分離提取物和小顆粒物，蒸發(fā)，對(duì)濃縮物進(jìn)行HTST滅菌，真空干燥濃縮物，并對(duì)最終的產(chǎn)品粉末進(jìn)行過(guò)篩。提取物的制備將植物原料(Aspalathuslinearis的葉和莖)在每個(gè)滲漉筒300kg的兩個(gè)子設(shè)備進(jìn)行提取。將預(yù)熱至93t:的純凈水(3000kg)以i:io的比例從頂端加入到滲漉筒中，并將所得的提取物循環(huán)35分鐘。提取完成時(shí)，將子設(shè)備l排放出來(lái)，共得到2445kg、具1.24%干渣的水提物(干浸膏收率-10.1%)。用類似的方法提取子設(shè)備2，但在排放后，再用300kg純凈水沖洗進(jìn)行了提取的植物原料，從而得到2771kg、具1.25%干渣的水提物(干浸膏收率-ll.6%)。將該提取物以7001/h的流速溫?zé)犭x心，每隔30分鐘進(jìn)行沉積物的排放循環(huán)。離心后最終回收5130kg的、具1.24%干膏的提取物。在離心后，將入口溫度<781:的該水提物用板式蒸發(fā)器在<55t:的真空下濃縮至310kg和21.95%的干渣。以385-4451/h的流速在121_123°C(ca68s)條件下對(duì)濃縮物進(jìn)行HTST滅菌。滅菌后，將該濃縮物冷卻至<25°C。用純凈水沖洗該設(shè)備，得到最終的已滅菌的322kg、具20%干渣的濃縮物。在真空干燥器(型號(hào)2000)，產(chǎn)品溫度<35t:的條件下將該已滅菌的濃縮物干燥36小時(shí)，然后在4『C的條件下干燥24小時(shí)。干燥后，將該粉末過(guò)兩種篩(先過(guò)2mm，然后過(guò)0.5mm篩)以除去真空干燥機(jī)的漿板旋轉(zhuǎn)期間所形成的團(tuán)塊。將過(guò)篩的粉末放在一個(gè)PE袋中(51.2kg)，然后將其密封在鍍鋁層的厚纖維紙桶中。植物原料用本發(fā)明的水提取物來(lái)測(cè)定該植物原料的HPLC指紋圖譜。通過(guò)下述操作來(lái)制備該提取物在水浴中用90-93t:的去離子純凈水(以l:IO的比例)提取該植物原料30分鐘，用Whatman4號(hào)濾紙趁熱過(guò)濾，并將其冷凍，然后將其凍干。將該凍干提取物重新溶解于純凈水中以用于HPLC分析。結(jié)果用本發(fā)明的水提取物來(lái)測(cè)定該植物原料的HPLC指紋圖譜。通過(guò)下述操作來(lái)制備該提取物在水浴中用90-93t:的去離子純凈水(以l:IO的比例)提取該植物原料30分鐘，用Whatman4號(hào)濾紙趁熱過(guò)濾，并將其冷凍，然后將其凍干。將該凍干提取物重新溶解于純凈水中以用于HPLC分析最終產(chǎn)品(GMPARC61)的HPLC指紋圖譜是用重新溶解于純凈水中的所述提取物來(lái)測(cè)定的。絲絨猴劑量?jī)?yōu)化研究對(duì)照組將三只猴子隨機(jī)分到對(duì)照組中。讓對(duì)照組的猴子每天三次地接受70g不含干提取物的定量維持飲食(模塑成小球形)，為期7天。第7天在猴子被禁食一整夜后(13個(gè)小時(shí))，在喂給猴子球形維持飲食的團(tuán)塊之前進(jìn)行基線血樣的采集。此后，在氯胺酮麻醉(10mg/kg體重，肌內(nèi)注射)下通過(guò)股靜脈穿剌，在6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)每小時(shí)進(jìn)行血樣的采集。實(shí)驗(yàn)組將三只猴子隨機(jī)分到四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，一天三次地接受0.lmg/kg、0.3mg/kg、lmg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg禾口25mg/kgGMPARC61(如上所述的Aspalathuslinearis的口十禾口蓬的提取物)。讓各實(shí)驗(yàn)組的所有猴子每天三次地接受被模塑進(jìn)70g團(tuán)塊狀的維持飲食中的預(yù)先稱量了的等份的植物提取物，為期7天。第7天在猴子被禁食一整夜(13個(gè)小時(shí))后，在球形的、含有各自干提取物數(shù)量的維持飲食的團(tuán)塊喂給猴子之前采集基線血樣。此后，在氯胺酮麻醉(10mg/kg體重，肌內(nèi)注射)下通過(guò)股靜脈穿剌，在6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)每小時(shí)進(jìn)行血樣的采集。結(jié)果概述對(duì)照組對(duì)照組中，在接受模制的維持飲食后，在最初的兩小時(shí)內(nèi)，進(jìn)行試驗(yàn)的三只猴子沒(méi)有一只表現(xiàn)出從基準(zhǔn)值下降的現(xiàn)象。此后，三只猴子中有兩只的葡萄糖值與其基準(zhǔn)值相比有減少。1.Omg/kgGMPARC61治療組的血葡萄糖值lmg/kgGMPARC61組的結(jié)果表明在整個(gè)6小時(shí)的監(jiān)測(cè)期內(nèi)，兩只猴子的血糖值與基準(zhǔn)血葡萄糖水平相比有顯著降低。2.5mg/kgGMPARC61治療組的血葡萄糖值接受了2.5mg/kgGMPARC67的三只猴子的血葡萄糖水平，在最初的兩個(gè)小時(shí)其血葡萄糖水平顯著減低，此后在其余的監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)一直保持著較低的血葡萄糖水平。5mg/kgGMPARC61治療組的血葡萄糖值從服用5mg/kgGMPARC61兩小時(shí)后猴子血葡萄糖水平顯著降低。在監(jiān)測(cè)期內(nèi)一直維持在該水平。25mg/kgGMPARC61治療組的血葡萄糖值在給定劑量上猴子大部分對(duì)該治療沒(méi)有響應(yīng)。圖15表示的是用不同劑量的提取物(ARC61)對(duì)絲絨猴進(jìn)行治療7天后，在6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)血漿葡萄糖降低的百分?jǐn)?shù)(平均數(shù)據(jù))。結(jié)論25在小型的初步研究中，劑量范圍在1-2.5mg/kg的GMPARC61在降低非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(Chlorocebusaethiops)的血糖方面是最為有效的。權(quán)利要求從Aspalathus植物中分離治療提取物的方法，該方法包括以下步驟(a)提供Aspalathus植物或其部分，(b)將所述植物或其部分與適于溶解所述植物提取物的無(wú)毒溶劑結(jié)合，并將該溶劑加熱到60℃至95℃之間，優(yōu)選90℃至95℃之間，(c)回收該植物提取物，(d)并任選地干燥。2.如權(quán)利要求1的方法，其中所述植物為Aspalathuslinearis。3.如權(quán)利要求l的方法，其中所述植物或其部分為干燥的粉末形式。4.如權(quán)利要求2的方法，其中所述植物或其部分為干燥的粉末形式。5.如權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)的方法，其中所述部分選自葉、莖、根和根瘤。6.如權(quán)利要求l的方法，其進(jìn)一步包括將溶解的植物提取物干燥成粉末形式的步驟。7.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的無(wú)毒溶劑為水和/或乙醇。8.根據(jù)如權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)的方法所制備的植物提取物。9.包含如權(quán)利要求8的植物提取物的藥物組合物。10.以適合于給藥以獲得治療效果的劑量單位形式存在的藥物制劑，每一劑量單位包含治療有效量的如權(quán)利要求8的植物提取物。11.如權(quán)利要求10的藥物制劑，其中所述的治療有效量為每千克體重約1毫克至約2.5毫克。12.制備原植物粉末的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供Aspalathus植物或其部分，(b)在沒(méi)有直射陽(yáng)光的條件下干燥所述植物或其部分；并(c)粉碎所述的干燥植物或其部分從而形成植物粉末。13.如權(quán)利要求12的方法，其中所述植物為Aspalathuslinearis。14.如權(quán)利要求13的方法，其中所述的部分選自葉、莖根和根瘤。15.根據(jù)如權(quán)利要求12至14中任意一項(xiàng)的方法所制備的原植物粉末。16.包含如權(quán)利要求15的原植物粉末的藥物組合物。17.以適合于給藥以獲得治療效果的劑量單位形式存在的藥物制劑，每一劑量單位包含治療有效量的如權(quán)利要求15的原植物粉末。18.如權(quán)利要求17的藥物制劑，其中所述的治療有效量為每千克體重約1毫克至約2.5毫克。19.用于治療糖尿病的如權(quán)利要求8所述的植物提取物的第一醫(yī)藥用途，其中給藥的劑量范圍為1-2.5mg/kg體重。20.用于治療糖尿病的如權(quán)利要求15所述的原植物粉末的第一醫(yī)藥用途。21.包含Aspalathus屬植物的水提取物的抗糖尿病組合物，所述組合物給藥的劑量范圍為1-2.5mg/kg體重。22.如權(quán)利要求21的抗糖尿病組合物，其中所述的提取物來(lái)自Aspalathuslinearis。23.治療糖尿病的方法，其包括給予一定量Aspalathus屬植物的水提取物以使得血葡萄糖降低的步驟。24.如權(quán)利要求23的方法，其中所述的提取物來(lái)自Aspalathuslinearis。25.控制哺乳動(dòng)物糖尿病的方法，其包括以l-5mg/kg體重的劑量范圍、以可增強(qiáng)Glut4和/或Glut2活性的數(shù)量給哺乳動(dòng)物使用Aspalathuslinearis的提取物的步驟。26.用哺乳動(dòng)物篩選具有抗糖尿病活性的如權(quán)利要求21或22的提取物的特定化合物的方法，其包括確定增強(qiáng)Glut4和/或Glut2活性的化合物的步驟。27.如權(quán)利要求21或22的提取物用于制備治療1型或2型糖尿病的藥物的應(yīng)用，其特征在于該提取物給藥的劑量范圍為l-5mg/kg體重。28.包含Aspaiathus屬植物原料的抗糖尿病組合物。29.包含Aspaiathus屬植物的水提取物的抗糖尿病組合物。30.如權(quán)利要求28所述的抗糖尿病組合物，其中所述的提取物來(lái)自Aspalathuslinearis。31.如權(quán)利要求28的抗糖尿病組合物，其由選自Aspalathin或蘆丁以及其混合物的黃酮類化合物組成。32.如權(quán)利要求31的抗糖尿病組合物，其中Aspalathin的摩爾濃度至少為蘆丁摩爾濃度的兩倍。33.治療糖尿病的方法，其包括給予一定量Aspalathus屬植物的水提取物以使得血葡萄糖降低的步驟。34.如權(quán)利要求33的方法，其中所述的提取物來(lái)自Aspalathuslinearis。35.治療糖尿病的方法，其包括給予一定量黃酮類化合物以使血葡萄糖降低的步驟，所述黃酮類化合物選自aspalathin或蘆丁以及其混合物。36.如權(quán)利要求35的方法，其中aspalathin的摩爾濃度至少為蘆丁摩爾濃度的兩倍。37.用哺乳動(dòng)物篩選具有抗糖尿病活性的一組化合物的方法，其包括確定增強(qiáng)Glut4和/或Glut2活性的組成員的步驟。38.Aspaiathin用于制備治療1型或2型糖尿病的藥物的應(yīng)用。39.Aspalathin與蘆丁聯(lián)合用于制備治療1型或2型糖尿病的藥物的應(yīng)用。40.Aspalathus屬用于制備治療1型或2型糖尿病的天然藥物的應(yīng)用。41.以其所需有效劑量給予人或其它哺乳動(dòng)物使用Aspalathus屬植物的提取物來(lái)治療2型糖尿病的方法，其中所述的提取物包含aspalathin或與其有化學(xué)相關(guān)的化合物。42.如權(quán)利要求41的方法，其中所述的植物為Aspalathuslinearis。43.如權(quán)利要求41的方法，其中所述提取物通過(guò)包括以下步驟的過(guò)程獲得用溶劑處理所收集的植物原料以分離具抗糖尿病活性的提取物溶液，從植物原料其余部分分離提取物溶液，除去該溶液中的溶劑并回收所述的提取物。44.如權(quán)利要求43的方法，其中所述過(guò)程進(jìn)一步包括通過(guò)進(jìn)一步用溶劑萃取來(lái)對(duì)所述提取物的抗糖尿病活性進(jìn)行濃縮的步驟。45.如權(quán)利要求43的方法，其中所述的溶劑處理萃取步驟中的所述的溶劑為二氯甲烷、水、甲醇、己烷、乙酸乙酯或其混合物中的一種或多種。46.如權(quán)利要求45的方法，其中所述的過(guò)程進(jìn)一步包括用層析分離的方法濃縮具抗糖尿病活性的所述提取物的步驟。47.如權(quán)利要求46的方法，其中所述的層析分離使用氯仿、甲醇、乙酸乙酯、己烷或其混合物中的一種或多種作為洗脫劑。48.如權(quán)利要求46的方法，其中所述的過(guò)程包括在柱子上進(jìn)行層析分離，收集得自柱的級(jí)分中的洗脫物，對(duì)這些級(jí)分進(jìn)行評(píng)估以確定其抗糖尿病活性，并選擇至少一個(gè)含有抗糖尿病活性的級(jí)分。49.藥物組合物，其包含與aspalathin聯(lián)合的蘆丁。全文摘要本發(fā)明提供了用于治療糖尿病的，來(lái)源于紅灌木的新的和有用的組合物。本發(fā)明特別是涉及2型糖尿病的治療。本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和治療糖尿病的，aspalathin和蘆丁以及含有它們的組合物的新的用途。本發(fā)明提供了一種抗糖尿病劑、一種含抗糖尿病劑的抗糖尿病組合物、一種含抗糖尿病劑的食品或飲料、一種預(yù)防或治療糖尿病或葡萄糖耐量降低的方法、和一種降低血葡萄糖水平的方法。所述的抗糖尿病劑可以為得自紅灌木(Aspalathusspp.)的提取物、aspalathin本身或其與蘆丁聯(lián)合。文檔編號(hào)A61K36/185GK101765433SQ200880013877公開日2010年6月30日申請(qǐng)日期2008年3月11日優(yōu)先權(quán)日2007年3月12日發(fā)明者J·洛,L·朱伯特,P·M·拉森,S·J·費(fèi)伊申請(qǐng)人:Zadec私人有限責(zé)任公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