專利名稱：：毒蕈堿性受體拮抗劑和β-2腎上腺素受體激動(dòng)劑的組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于治療呼吸系統(tǒng)疾病(尤其是慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘)的藥學(xué)活性物質(zhì)的組合。
背景技術(shù)：
：肺的本質(zhì)功能要求一種脆弱的結(jié)構(gòu)廣泛暴露于包括污染物、微生物、變應(yīng)原(allergen)和致癌物在內(nèi)的環(huán)境中。起因于生活方式選擇和遺傳組成的相互作用的宿主因素影響了對(duì)這種暴露的響應(yīng)。對(duì)肺的傷害或感染能夠產(chǎn)生廣泛的呼吸系統(tǒng)疾病(或呼吸疾病(respiratorydisease))。這些疾病中的多種具有巨大的公共衛(wèi)生重要性。呼吸系統(tǒng)疾病包括急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、職業(yè)性肺部疾病、肺癌、結(jié)核、纖維化、塵肺(pneumoconiosis)、肺炎、肺氣腫、慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘。最常見的呼吸系統(tǒng)疾病是哮喘。哮喘一般定義為氣道的炎性病癥，其臨床癥狀是由間歇性氣流阻塞引起的。其臨床特征為喘鳴(wheezing)、呼吸困難和咳嗽的發(fā)作。它是一種慢性衰竭性病癥，其患病率和嚴(yán)重性似乎一直在增加。據(jù)估計(jì)在發(fā)達(dá)國(guó)家的人口中，15%的兒童和5%的成人患有哮喘。因此，治療應(yīng)當(dāng)針對(duì)控制癥狀，以便正常的生活成為可能，與此同時(shí)為治療根本性炎癥提供基礎(chǔ)。COPD是表示一大類能夠干擾正常呼吸的肺病的術(shù)語。目前的臨床準(zhǔn)則將COPD定義為以不完全可逆的氣流受限(airflowlimitation)為特征的病癥。氣流受限通常既是進(jìn)行性的，又與肺對(duì)有害顆粒和氣體的異常炎性響應(yīng)有關(guān)。這類顆粒和氣體的最重要貢獻(xiàn)來源至少在西方世界是吸煙。COPD患者具有多種癥狀，包括咳嗽、呼吸短促和痰生成過多；這類癥狀來源于大量細(xì)胞區(qū)室(包括嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞)的功能障礙。COPD涵蓋的兩種最重要的病癥是慢性支氣管炎和肺氣肺。慢性支氣管炎是支氣管的長(zhǎng)期炎癥，導(dǎo)致粘液生成增加以及其它變化?；颊叩陌Y狀為咳嗽和咳痰。慢性支氣管炎能夠引起更頻繁和更嚴(yán)重的呼吸4系統(tǒng)感染、支氣管變窄和堵塞、呼吸困難和能力喪失。肺氣腫是影響肺泡和/或最小支氣管末梢的慢性肺疾病。肺喪失其彈性，因此肺的這些區(qū)域變得腫大。這些腫大的區(qū)域困住陳腐的氣體，不會(huì)有效地與新鮮空氣交換。這導(dǎo)致呼吸困難，并且可能導(dǎo)致對(duì)血液的供氧不足。肺氣腫患者的主要癥狀是呼吸短促。用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的治療劑包括|32腎上腺素受體激動(dòng)劑。這些成分(也稱為beta2((32)激動(dòng)劑)可以用于通過松弛支氣管平滑M^、減少氣道阻塞、減少肺充氣過度和降低呼吸短促來減輕呼吸系統(tǒng)疾病的癥狀。目前正在進(jìn)行評(píng)價(jià)的作為每日一次P2激動(dòng)劑的化合物描述在ExpertOpin.Investig.Drugs14(7)，775-783(2005)中。用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的另一類治療藥物是毒蕈堿性受體拮抗劑(muscarinicantagonists)。毒蕈堿性受體是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)家族，其具有五種家族成員M,、M2、M3、M4和Ms。在這五種毒蕈堿亞型中，已知三種(M，、M2和Ms)對(duì)人肺組織產(chǎn)生生理作用。副交感神經(jīng)(Parasympatheticnerve)是人氣道中用于反射支氣管收縮的主要途徑，并且通過將乙酰膽石咸釋放在毒蕈堿性受體上介導(dǎo)氣道緊張(airwaytone)。氣道緊張?jiān)诤粑到y(tǒng)病癥如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)患者中增加，出于這種原因已經(jīng)開發(fā)了毒蕈堿性受體拮抗劑用于治療氣道疾病。毒蕈堿性受體拮抗劑，在臨床實(shí)踐中通常稱為抗膽堿能藥(anticholinergic)，已經(jīng)作為對(duì)患有COPD個(gè)體的首要治療而獲得廣泛的接受，它們的用途已經(jīng)在文獻(xiàn)中得到了廣泛的綜述(例如Leeetal，CurrentOpinioninPharmacology2001，1,223-229。盡管用|32腎上腺素受體激動(dòng)劑或毒蕈堿性受體拮抗劑治療能夠產(chǎn)生重要的益處，但是這些藥物的功效經(jīng)常遠(yuǎn)不能令人滿意。鑒于呼吸系統(tǒng)疾病(如哮喘和COPD)的復(fù)雜性，任何一種調(diào)節(jié)劑可令人滿意地單獨(dú)治療這些疾病的情況是不可能的。因此，醫(yī)學(xué)上迫切需要抗呼吸系統(tǒng)疾病例如COPD和哮喘的新療法，特別是具有疾病緩和潛力的療法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了藥物產(chǎn)品(pharmaceuticalproduct)其包含第一活性成分和第二活性成分的組合，所述第一活性成分為選自以下的毒蕈堿性受體拮抗[2-((S)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，P-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基H3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，-[2-(3，4-二氯-卡基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽，以及-[2-((尺)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-銨鹽；所述第二活性成分為|32腎上腺素受體激動(dòng)劑。在呼吸系統(tǒng)疾病的治療中若將本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑與P2腎上腺素受體激動(dòng)劑組合使用，則觀察到有益的治療效果。當(dāng)這兩種活性物質(zhì)同時(shí)給藥(要么以單一藥物制劑形式給藥，要么經(jīng)由分開的藥物制劑給藥)，或經(jīng)由分開的藥物制劑依次給藥或分開給藥時(shí)，可觀察到有益的效果。本發(fā)明的藥物產(chǎn)品例如可為包含呈混合物形式的第一和第二活性成分的組合物?；蛘?，藥物產(chǎn)品可以是例如試劑盒(kit)，其包含第一活性成分的制劑(preparation)和第二活性成分的制劑，和任選的說明書，所述說明書指導(dǎo)對(duì)有所述需要的患者同時(shí)、依次或分開給予所述制劑。在本發(fā)明的組合中的第一活性成分是選自下列的毒蕈堿性受體拮抗劑-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基]-[2-(3,4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽；以及-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-銨鹽。本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑是描述于WO2007/017669(PCT/GB2006/002956)中的一類新穎的化合物中的所選擇的成員，其顯示出對(duì)于M3受體的高效能。所述毒蕈堿性受體拮抗劑的名稱是由IsisDraw2.5版本(由MDLInformationSystemsInc.提供)的Autonom2000插件基于實(shí)施例中描述的結(jié)構(gòu)和根據(jù)Cahn-Ingold-Prelog系統(tǒng)指定的立體化學(xué)所生成的IUPAC名稱。例如，名稱[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨是從以下結(jié)構(gòu)生成的本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑是銨鹽。鹽陰離子可以是一價(jià)或多Y介(如二價(jià))酸的任何藥用陰離子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹽陰離子選自氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根離子、苯磺酸根離子、曱苯磺酸根離子(tosylate)、1,5-萘二磺酸根離子(napadisylate)(萘-l,5-二磺酸根離子)、乙二磺酸根離子(edisylate)(乙-l，2-二磺酸根離子)、羥乙基磺酸根離子(isethionate)(2-羥基乙基磺酸根離子)、磷酸根離子、乙酸根離子、枸櫞酸根離子、乳酸根離子、酒石酸根離子、油酸根離子、曱磺酸根離子(methanesulfonate)、馬來酸根離子((Z)-3-羧基-丙烯酸根離子)、富馬酸才艮離子、琥珀酸根離子(3-羧基-丙酸根離子)、蘋果酸根離子((S)-3-羧基-2-羥基-丙酸根離子)、昔萘酸根離子(xinafoate)和對(duì)乙酰氨基苯曱酸根離子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑選自溴化[2-((S)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨、澳化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-魂唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨、曱苯磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-魂.唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨、馬來酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基一丙基)-銨、琥珀酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-(3-笨氧基-丙基)-銨、蘋果酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨、1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨、溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨、1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨、曱磺酸[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨、溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨、1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨、溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-口惡唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-節(jié)基氧基)-乙基]-二曱基-銨、1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5_基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二甲基-銨、溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((11)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-銨、1,5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基甲基]-二曱基-銨，以及曱磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑呈溴鹽或1，5-萘二磺酸鹽的形式。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑呈1，5-萘二磺酸鹽的形式。當(dāng)毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸鹽時(shí)，陽離子/陰離子比例可變化，以及例如可為1:1或2:1或1:1和2:1之間的值。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑呈1,5-萘二磺酸鹽的形式，其中所述1,5-萘二磺酸鹽陽離子/陰離子比例為2:1,即半1,5-萘二磺酸鹽。本實(shí)施方案的毒蕈堿性受體拮抗劑的實(shí)例包括半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨，半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨，半-萘-l，5-二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨，半-萘-l，5-二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基〗-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二甲基-銨，以及半-萘-1，5-二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑呈溴鹽(bromidesalt)的形式。在本發(fā)明的組合中的第二活性成分是p2腎上腺素受體激動(dòng)劑。本發(fā)明的卩2腎上腺素受體激動(dòng)劑可以是能夠刺激P2受體并充當(dāng)支氣管擴(kuò)張劑(bronchodilator)的任何化合物。在本發(fā)明說明書的上下文中，除非另有i兌明，任何對(duì)于P2腎上腺素受體激動(dòng)劑的稱謂包括可以從所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑生成的活性鹽、溶劑化物或衍生物及其任意對(duì)映異構(gòu)體，以及對(duì)映異構(gòu)體的混合物。p2腎上腺素受體激動(dòng)劑的可能的鹽或衍生物的實(shí)例是酸加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、曱磺酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、l-羥基-2-萘羧酸鹽、馬來酸鹽和藥用酯(例如CrC6烷基酯)。j32-激動(dòng)劑也可以呈溶劑化物的形式，例如水合物的形式?？捎糜诒緦?shí)施方案的藥物產(chǎn)品的p2腎上腺素受體激動(dòng)劑的實(shí)例包括間羥異丙腎上腺素(metaproterenol)、異丙去甲腎上腺素(isoproterenol)、異丙腎上)、舒喘靈(albuterol)、沙丁胺醇(例如為硫酸鹽)、福莫特羅(例如為富馬酸鹽)、沙美特羅(例如為昔萘酸鹽)、特布他林、奧西那4木、比托特羅(例如為曱磺酸鹽)、吡布特羅或茚達(dá)特羅(indacaterol)。本實(shí)施方案的(32腎上腺素受體激動(dòng)劑可為長(zhǎng)效的P2激動(dòng)劑(即活性持續(xù)超過24小時(shí)的(32激動(dòng)劑)，例如沙美特羅(例如為昔萘酸鹽)、福莫特羅(例如為富馬酸鹽)、班布特羅(例如為鹽酸鹽)、卡莫特羅(carmoterol)(TA2005,以化學(xué)方法鑒定為[R-(R、R^)]8-羥基-5-[l-羥基-2-[[2-(4-曱氧基-苯基)-l-曱基乙基]-氨基]乙基]-2(1H)-會(huì)諾酮一鹽酸鹽，也是通過化學(xué)摘要"良務(wù)登記號(hào)(ChemicalAbstractServiceRegistryNumber)137888-ll-0鑒定的，并^^開于美國(guó)專利4,579,854中)、茚達(dá)特羅(CAS號(hào)312753-06-3;QAB-149)、曱酰氨基苯衍生物例如WO2002/76933公開的3-(4-{[6-({(211)-2-[3-(曱?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧基}-丁基)-苯磺酰胺、苯磺酰胺衍生物例如WO2002/88167公開的3-(4-([6-(((2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基-曱基)苯基]乙基}氨基)-己基]氧基}丁基)苯磺酰胺、如WO2003/042164和WO2005/025555中公開的芳基苯胺受體激動(dòng)劑、如WO2004/032921和US2005/222144中公開的n引咮衍生物，以及化合物GSK159797、GSK159802、GSK597901、GSK642444和GSK678007。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述腎上腺素受體激動(dòng)劑是福莫特羅。福莫特羅的化學(xué)名稱是A42-羥基-5-[(l)-l-羥基-2-[[(l)-2-(4-曱氧基苯基)-l-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-曱酰胺。福莫特羅的制備例如描述于WO92/05147中。在這種實(shí)施方案的一方面中，p2腎上腺素受體激動(dòng)劑是富馬酸福莫特羅。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明涵蓋福莫特羅的所有光學(xué)異構(gòu)體及其混合物、包括外消旋物的用途。因而例如，術(shù)語"福莫特羅"涵蓋iV-[2-羥基-5-[(1/)-1-羥基-2-[[(1"-2-(4-曱氧基苯基)-1-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺、A42-羥基-5-[(lQ-l-羥基-^[[(lQ-^(4-甲氧基苯基)-l-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-曱酰胺和這些對(duì)映異構(gòu)體的混合物，包括外消旋體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑選自7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并噻唑-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺，A4:(二乙基氨基)乙基]-AK2-{[2-(4-羥基-2-氧代_2,3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺，以及7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-酮，或它們的藥用鹽。本實(shí)施方案的(32腎上腺素受體激動(dòng)劑可如本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)制備部分所述制備。本實(shí)施方案的P2腎上腺素受體激動(dòng)劑的名稱由IUPACNAME,ACDLabs8版本命名軟件包生成。在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述P2腎上腺素受體激動(dòng)劑選自A42-(二乙基氨基)乙基]-AH2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并噻唑_7-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺二氫澳酸鹽，；v-p-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2_(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺二氫溴酸鹽，以及7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)小羥基乙基]一4-羥基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮二氬溴酸鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，以及所述卩2腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅(例如為富馬酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨(例如半-萘-l，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，以及所述|32腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅(例如為富馬酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-魂、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨(例如半-萘-1,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-魂唑-5-基甲基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，以及所述P2腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅(例如為富馬酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨(例如半-萘-1，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅(例如為富馬酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥、基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((11)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-銨鹽，以及所述P2腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅(例如為富馬酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，以及所述卩2腎上腺素受體激動(dòng)劑為iV-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈石烕性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨(例如半-萘-1,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為^-[2-(二乙基氨基)乙基]-叢(2-{[2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2_(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氬溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨(例如半-萘-l，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，以及所述p2腎上腺素受體激動(dòng)劑為A42-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l,3-笨并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸補(bǔ)、JBLJ。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽，以及所述p2腎上腺素受體激動(dòng)劑為7\42-(二乙基氨基)乙基]-叢(2-{[2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基甲基]-[2-(3,4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)一噁唑_5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨(例如半-萘-1,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，以及所述卩2腎上腺素受體激動(dòng)劑為A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈;威性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨(例如半-萘-l，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，以及所述p2腎上腺素受體激動(dòng)劑為Aq2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氬溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌唑-5-基甲基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨(例如半-萘-l，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，以及所述p2腎上腺素受體激動(dòng)劑為7^-[2-(二乙基氨基)乙基]-叢(2-{[2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯苯氧基)-丙基]二曱基-銨(例如半-萘-1，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽，以及所述p2腎上腺素受體激動(dòng)劑為A42-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二曱基-銨(例如半-萘-1，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-銨鹽，以及所述|32腎上腺素受體激動(dòng)劑為7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，以及所述卩2腎上腺素受體激動(dòng)劑為7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-輕基乙基]-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-@同或其藥用鹽(例如二氪溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨(例如半-萘-1,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為7-[(1司-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮或其藥用鹽(例如二氬溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-l，3-苯并噻唑-2(3/7)-酮或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴化[[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-銨(例如半-萘-l，5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨鹽，以及所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑為7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-@同或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈^s咸性受體拮抗劑為溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-銨(例如半-萘-l,5-二磺酸鹽)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨鹽，以及所述P2腎上腺素受體激動(dòng)劑為7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮或其藥用鹽(例如二氫溴酸鹽)。在本實(shí)施方案的一個(gè)方面中，所述毒蕈4i性受體拮抗劑為溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-銨。在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面中，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-銨(例如半-萘-1,5-二磺酸鹽)。本發(fā)明的組合在呼吸系統(tǒng)疾病的治療中可提供有益的治療效果。這種可能的效果的實(shí)例包括改善以下參數(shù)中的一個(gè)或多個(gè)降低炎癥細(xì)胞流入肺中、中度和重度惡化(exacerbation)、FEV"—秒鐘用力呼氣量(forcedexpiratoryvolumeinonesecond))、肺活量(VC)、最大呼氣流量(PEF)、癥狀評(píng)分和生活質(zhì)量。本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑(第一活性成分)和P2腎上腺素受體激動(dòng)劑(二活性成分)可以同時(shí)(simultaneously)、依次(sequentially)或分開(separately)給藥，治療呼吸系統(tǒng)疾病。"依次"是指活性成分按任意順序給藥，給藥一種之后，立即給予給藥另一種。如果將它們分開給藥，則它們?nèi)匀痪哂兴璧男Ч?，但是在按這種方式給藥時(shí)，它們的給藥間隔一般小于4小時(shí)，更適宜地間隔小于2小時(shí)，更更適宜地間隔小于30分鐘，最適宜地間隔小于10分鐘?？梢圆捎贸Ｒ?guī)的系統(tǒng)劑型(systemicdosageform),例如片劑、膠嚢劑、丸劑、粉劑、水性或油性溶液劑或混懸劑、乳液和無菌注射的水性或油性溶液劑或混懸劑，將本發(fā)明的活性成分通過口服或腸胃外(例如靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或關(guān)節(jié)內(nèi))給藥?；钚猿煞忠部梢砸匀芤簞⒒鞈覄?、氣霧劑和干粉制劑的形式局部給藥(至肺和/或氣道)。這些劑型通常將包括一種或多種藥用成分，它們可以選自例如輔料、載體、粘合劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、乳化劑、粘度調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、防腐劑、矯味劑和著色劑。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，給藥活性成分的最適當(dāng)方法取決于多種因素。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，活性戍分是經(jīng)由分開的藥物制劑給藥的。因此，在一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，其包含第一活性成分的制劑和第二活性成分的制劑和任選的說明書，所述第一活性成分是本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分是P2腎上腺素受體激動(dòng)劑，所述說明書指導(dǎo)對(duì)有所述需要的患者同時(shí)、依次或分開給予所迷制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，活性成分可以經(jīng)由單一的藥物組合物給藥。因200880010661.5此，本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物組合物，其包含呈混合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分是P2腎上腺素受體激動(dòng)劑。本發(fā)明的藥物組合物可以如下制備將毒蕈堿性受體拮抗劑(第一活性成分)和P2腎上腺素受體激動(dòng)劑(二活性成分)與藥用輔料、稀釋劑或載體混合。因此，在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供制備藥物組合物的方法，包括將本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑與腎上腺素受體激動(dòng)劑和藥用輔料、稀釋劑或載體混合。應(yīng)當(dāng)理解的是，根據(jù)本發(fā)明，所給藥的每種活性成分的治療劑量隨所采用的特定活性成分、給予活性成分的模式和所治療的病癥或疾病而變化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑是經(jīng)由吸入給藥的。在經(jīng)由吸入給藥時(shí)，本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑的劑量一般為如下的范圍0.1微克(嗎)至5000(Ag、0.1至1000嗎、0.1至500嗎、0.1至100嗎、0.1至50ng、0.1至5pg、5至5000pg、5至1000pg、5至500pg、5至100(ig、5至50pg、5至10^ig、10至5000iig、10至1000pg、10至500^g、10至100|ig、10至50pg、20至5000ng、20至1000jig、20至500|Lig、20至100嗎、20至50嗎、50至5000昭、50至1000昭、50至500(ig、50至100嗎、100至5000嗎、100至1000ng或100至500嗎。所述劑量一般為每天分1至4次給予，適宜地每天一次或兩次，最適宜地每天一次。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，p2腎上腺素受體激動(dòng)劑是經(jīng)由吸入給藥的。在經(jīng)由吸入給藥時(shí)，p2激動(dòng)劑的劑量一般為如下的范圍0.1至50嗎、0.1至40|ig、0.1至30|ig、0.1至20嗎、0.1至10嗎、5至10嗎、5至50pg、5至40jig、5至30pg、5至20jxg、5至10嗎、10至50昭、10至40ng10至30嗎或10至20嗎。所述劑量一般為每天分1至4次給予，適宜地每天一次或兩次，最適宜地每天一次。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物產(chǎn)品，其包含呈組合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分是|32腎上腺素受體激動(dòng)劑，其中配制每種活性成分用于吸入給藥。本發(fā)明的活性成分適宜地以溶液劑、混懸劑、氣霧劑或干粉制劑的形18式經(jīng)由吸入給藥(例如局部給藥至肺和/或氣道)。給藥可以是經(jīng)口吸入或鼻內(nèi)吸入。例如計(jì)量吸入裝置可以用于給予分散在適合的推進(jìn)劑中的活性成分，其中含有或不含額外的賦形劑(例如乙醇)、表面活性劑、潤(rùn)滑劑或穩(wěn)定劑。適合的推進(jìn)劑包括烴、氯氟碳和氬氟烷(例如七氟烷)推進(jìn)劑，或者所述推進(jìn)劑的任意混合物。優(yōu)選的推進(jìn)劑是P134a和P227,它們各自可以單獨(dú)使用或者與其他推進(jìn)劑和/或表面活性劑和/或其他賦形劑組合使用。也可以使用單位劑量或多劑量制劑形式的霧化含水混懸劑，或者優(yōu)選為溶液劑，其中含有或不含適合的pH和/或張力調(diào)節(jié)劑?；钚猿煞值母煞壑苿┖图訅篐FA(七氟烷)氣霧劑可經(jīng)口或經(jīng)鼻吸入給藥。對(duì)于吸入給藥而言，化合物期望地為微細(xì)粉碎的。微細(xì)粉碎的化合物優(yōu)選具有小于10nm的中位直徑(mediandiameter),并且可在分散劑如C8-C20脂肪酸或其鹽(例如油酸)、膽汁鹽、磷脂、烷基糖(alkylsaccharide),全氟化或聚乙氧基化表面活性劑或其它藥用分散劑的輔助下懸浮在推進(jìn)劑混合物中。一種可能是將本發(fā)明的微細(xì)粉碎的化合物與載體物質(zhì)例如單糖、二糖或多糖、糖醇或另一種多元醇混合。合適的載體為糖，例如乳糖、葡萄糖、棉子糖(raffinose)、松三糖(melezitose、拉克替醇(lactitol)、麥芽糖醇(maltitol)、海藻糖、蔗糖、甘露醇；以及淀粉?？晒┻x擇地所述微細(xì)粉碎的化合物可由另一種物質(zhì)包衣。也可將粉末混合物分配到硬明膠膠嚢中，從而每個(gè)膠嚢含有期望劑量的活性化合物。另一個(gè)可能是將微細(xì)粉碎的粉末加工成在吸入過程中破碎的球?？蓪⑦@種球形粉末填充到多劑量吸入器(例如稱為Turbuhaler⑧的吸入器)的藥物貯器中，在所述吸入器中劑量單位量取隨后由患者吸入的期望的劑量。在這種系統(tǒng)存在下，將活性成分與載體物質(zhì)一起或不與載體物質(zhì)一起遞送至患者。本發(fā)明的組合用于治療或預(yù)防呼吸道病癥如慢性阻塞性肺病(COPD)、所有類型的慢性支氣管炎(包括與其相關(guān)的呼吸困難)、哞喘(變應(yīng)性哮喘和非變應(yīng)性哮喘；"喘鳴-嬰兒綜合征(wheezy-infantsyndrome)")、成人/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、慢性呼吸阻塞、支氣管高反應(yīng)性(bronchialhyperactivity)、肺纖維化、肺氣胂和變應(yīng)性鼻炎、由其它藥物治療(特別是其它吸入藥物治療)引起的氣道高反應(yīng)性的惡化，或塵肺(pneumoconiosis)(例如石凡土月申(aluminosis)、炭末5兄著(anthracosis)、石才帛肺(asbestosis)、石末肺(chalicosis)、鴕鳥毛塵肺(ptilosis)、鐵沉著(siderosis)、矽肺(silicosis)、煙草塵月申(tabacosis)和棉塵肺(byssinosis))。干粉吸入器可以用于單獨(dú)地給予活性成分或者給予活性成分與藥用載體的組合，在給予活性成分與藥用載體的組合情況時(shí)，以微細(xì)粉碎的粉末或者有序混合物的形式給藥。干粉吸入器可以是單劑量或多劑量，并且可以采用干粉或含有粉末的膠嚢。計(jì)量吸入器、霧化器和干粉吸入裝置是公知的，多種這類裝置是可獲得的。本發(fā)明進(jìn)一步提供在治療中同時(shí)、依次或分開使用的本發(fā)明的藥物產(chǎn)品、試劑盒或藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明的藥物產(chǎn)品、試劑盒或藥物組合物在治療呼吸系統(tǒng)疾病，尤其是慢性阻塞性肺病或哮喘中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明的藥物產(chǎn)品、試劑盒或藥物組合物在制備用于治療呼吸系統(tǒng)疾病，尤其是慢性阻塞性肺病或哞喘的藥物中的用途。本發(fā)明更進(jìn)一步提供治療呼吸系統(tǒng)疾病的方法，包含對(duì)有此需要的患者同時(shí)、依次或分開給予(a)(治療有效)劑量的第一活性成分，其是本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑；和(b)(治療有效)劑量的第二活性成分，其是|32腎上腺素受體激動(dòng)劑。在本申請(qǐng)說明書的上下文中，除非另有相反的具體說明，術(shù)語"治療"也包括"預(yù)防"。術(shù)語"治療的"和"治療地"也可相應(yīng)地解釋。預(yù)防被認(rèn)為與經(jīng)受所述疾病或病癥的先前發(fā)作的人員的治療特別有關(guān)，或被認(rèn)為與面臨所述疾病或病癥的增加危險(xiǎn)之中的人員的治療特別有關(guān)。面臨發(fā)展具體疾病或病癥的危險(xiǎn)之中的人員，通常包括具有該疾病或病癥的家族史的人員，或已經(jīng)通過遺傳學(xué)試驗(yàn)或篩選確定為對(duì)特別易發(fā)展該疾病或病癥的人員。本發(fā)明的藥物產(chǎn)品、試劑盒或組合物可以任選地包含第三活性成分，該第三活性成分是適合用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的物質(zhì)。可引入本發(fā)明的第三活性成分的實(shí)例包括磷酸二酯酶抑制劑，趨化因子受體功能調(diào)節(jié)劑，激酶功能抑制劑劑，蛋白酶抑制劑，甾類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑，以及非甾類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑。可用作本實(shí)施方案的第三活性成分的磷酸二酯酶抑制劑的實(shí)例包括PDE4抑制劑(如同工型PDE4D抑制劑)、PDE3抑制劑和PDE5抑制劑。所述實(shí)例包括以下化合物(Z)-3-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[4-(2-茚滿基氧基-5-曱氧基-2-處咬基]丙烯腈，N-[9-氨基-4-氧代-l-苯基-3,4,6，7-四氫吡咯并[3,2，l-jk][l，4]苯并二氮雜蕈-3(R)-基]吡啶-3-曱酰胺(CI-1044),3-(苯曱基氧基)-1-(4-氟苯曱基)-N-[3-(曱基磺?；?苯基]-lH-吲哚-2-曱酰胺，(1S-外)-5-[3-(二環(huán)[2.2.1]庚-2-基氧基)-4-甲氧基苯基]四氫-2(lH)-嘧啶酮((1S-exo)-5-[3-(bicyclo[2.2.1]hept-2-yloxy)-4畫methoxyphenyl]tetrahydro-2(IH)-pyrimidinone)(Atizoram)，N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[l-(4-氟苯曱基)-5-羥基-lH-吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(AWD-12-281),卩-[3-(環(huán)戊基氧基)-4-曱氧基苯基]-1，3-二氫-1，3-二氧代-2H-異吲哚-2-丙酰胺(CDC-801),N-[9-曱基-4-氧代-l-苯基-3，4，6,7-四氫吡咯并[3,2,l-jk][l，4]苯并二氮雜萆-3(R)-基]吡啶-4-曱酰胺(CI-1018),順式-[4-氰基-4-(3-環(huán)戊基氧基-4-曱氧基苯基)環(huán)己烷-l-羧酸(西洛司特(Cilomilast))，8-氨基-1,3-二(環(huán)丙基曱基)黃嘌呤(西潘茶堿(Cipamfylline)),^(2，5-二氯-3-吡啶基)-8-曱氧基-5-喹啉曱酰胺(D-4418)，5-(3，5-二叔丁基-4-羥基亞千基)-2-亞氨基噻唑烷-4-酮(達(dá)布非酮(Darbufelone)),2-曱基-l-[2-(l-曱基乙基)吡唑并[l，5-a]吡啶-3-基]-l-丙酮(異丁司特(Ibudilast))，曱磺酸2-(2，4-二氯苯基羰基)-3-脲基苯并呋喃-6-基酯(Lirimilast)，21(-)-(R)-5-(4-曱氧基-3-丙氧基苯基)-5-曱基碌、唑烷J-酮(Mesopram),(-)-順式-9-乙氧基-8-曱氧基-2-曱基-1,2,3，4，4a,10b-六氬-6-(4-二異丙基氨基羰基苯基)-苯并[c][l,6]二氮雜萘(普馬芬群(Pumafentrine))，3-(環(huán)丙基曱氧基)-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-(二氟曱氧基)苯曱酰胺(羅氟司特(Roflumilast))，羅氟司特的N-氧化物，5,6-二乙氧基苯并[b]p塞吩-2-羧酸(硫苯司特(Tibenelast)),2,3,6,7-四氫-2-(均三曱基苯基亞氨基)-9，10-二曱氧基-3-曱基-4H-嘧啶并[6，1-a]異喹啉-4-酮(曲喹辛(Tr叫uinsin)),以及3-[[3-(環(huán)戊基氧基)-4-曱氧基苯基]-曱基]-N-乙基-8-(1-曱基乙基)-3H-嘌呤-6-胺(V-11294A)?？捎米鞅緦?shí)施方案的第三活性成分的趨化因子受體功能的調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括CCR3受體拮抗劑、CCR4受體拮抗劑、CCR5受體拮抗劑和CCR8受體拮抗劑?？捎米鞅緦?shí)施方案的第三活性成分的激酶功能抑制劑的實(shí)例包括p38激酶抑制劑和IKK抑制劑?？捎米鞅緦?shí)施方案的第三活性成分的的蛋白酶抑制劑的實(shí)例包括中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophilelastase)抑制劑或MMP12抑制劑?？捎米鞅緦?shí)施方案的第三活性成分的甾類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑的實(shí)例包括布地奈德、氟替卡松(例如為丙酸酯)、莫米松(例如為糠酸酯)、倍氯米松(例如為17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、環(huán)索奈德、氯替潑諾(例如為依碳酸鹽)、依替潑諾(etiprednol)(例如為二氯乙酸鹽)、曲安西龍(例如為縮酮化合物(acetonide))、氟尼縮松、zoticasone、氟莫奈德、羅氟奈德、布替可特(例如為丙酸酯)、潑尼松龍、潑尼松、替潑尼旦、甾類酯例如6a,9a-二氟-17a-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11卩-羥基-16a-曱基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17卩-硫代羧酸S-氟曱酯、6a，9a-二氟-ll(3-羥基-16a-曱基-3-氧代-17a-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17|3-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫呋喃-3S-基)酉旨和6a，9a-二氟-ll卩-羥基-16a-曱基-17a-[(4-曱基-1,3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17卩-硫代羧酸S-氟曱酯、DE4129535公開的甾類酯、WO2002/00679或WO2005/041980公開的甾類或甾類GSK870086、GSK685698和GSK799943?？捎米鞅緦?shí)施方案的第三活性成分的非甾類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑的實(shí)例包括WO2006/046916中公開的非甾類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑?，F(xiàn)參照以下非限制性實(shí)施例解釋本發(fā)明。在實(shí)施例中說明了以下附圖圖1:毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2)溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨結(jié)晶形式A的X射線粉末衍射圖。圖2:毒蕈堿性受體拮抗劑7(MA7)半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨結(jié)晶形式1的X射線粉末衍射圖。圖3:毒蕈堿性受體拮抗劑7(MA7):結(jié)晶形式2的X射線粉末衍射圖。圖4:毒蕈堿性受體拮抗劑7(MA7):結(jié)晶形式3的X射線粉末衍射圖。圖5:毒蕈堿性受體拮抗劑11(MA11)半-萘-l,5-二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨結(jié)晶形式A的X射線粉末衍射圖。圖6:福莫特羅(lnM)、化合物A(MA2)(10nM)和化合物A(10nM)(在福莫特羅(1nM)存在下)在體外豚鼠氣管中對(duì)lpM乙酰曱膽堿誘發(fā)的緊張的％抑制。圖7:%福莫特羅(lnM)、化合物B(MAll)(10nM)和化合物B(10nM)(在福莫特羅(lnM)存在下)在體外豚鼠氣管中對(duì)l|iM乙酰曱膽堿誘發(fā)的緊張的％抑制。圖8:乙酰曱膽堿誘發(fā)的豚鼠支氣管收縮3pg/kg和27嗎/kg化合物A(BA1),0.2|ig/kg化合物Z(MA2)或3pg/kg化合物A和0.2pg/kg化合物Z的組合。圖9:乙酰甲膽堿誘發(fā)的豚鼠支氣管收縮1pg/kg和27pg/kg化合物A(BA1),0.01叱/kg化合物Y(MA11)或1pg/kg化合物A和0.01嗎/kg化合物Y的組合。具體實(shí)施例方式毒蕈堿性受體拮抗劑的制備本發(fā)明的毒蕈堿性受體拮抗劑可如下制備。本申請(qǐng)所述的鹽的供選鹽可使用與所述的方法所類似的方法通過常規(guī)化學(xué)制備。制備毒蕈堿性受體拮抗劑的一般實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)除非另有說明，在毒蕈堿性受體拮抗劑的制備中使用以下一般條件。除非另有說明，所有反應(yīng)都在氮?dú)鈿夥障逻M(jìn)行。在以下儀器上獲得NMR光鐠在400MHz操作的配有5mm反檢測(cè)三聯(lián)共振探針(inversedetectiontripleresonanceprobe)的VarianUnityInova400光譜儀，在400MHz操作的配有5mm反檢測(cè)三聯(lián)共振TXI探針的BmkerAvanceDRX400光語儀，或在300MHz操作的配有標(biāo)準(zhǔn)5mm雙頻探針(dualfrequencyprobe)的BrukerAvanceDPX300光詣—義。位移以相對(duì)于四曱基硅烷的ppm(百萬分之一)形式給出。當(dāng)產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化時(shí)，"快速硅膠"是指用于色語的0.035至0.070mm(220至440目)硅膠(例如Fluka硅膠60),并且所應(yīng)用的至多10p.s.i的氮?dú)鈮毫铀倭酥疵摗．?dāng)使用薄層色譜(TLC)時(shí)，其是指硅膠TLC用板，通常為鋁箔板上的3x6cm硅膠，所述硅膠含有熒光指示劑(254nm)(例如Fluka60778)。所有溶劑都是市售的并且原樣使用。除非另有說明，獲得了含有堿性中心的化合物(經(jīng)HPLC純化)，這些化合物都是TFA鹽。制備性HPLC條件C18-反相柱(100x22.5mm內(nèi)徑Genesis柱，7粒度)。在230nm進(jìn)行UY檢測(cè)。LC/MS系統(tǒng)使用液相色譜質(zhì)鐠(LC/MS)系統(tǒng)LC-MS方法1WatersPlatformLCT,C18-反相柱(100x3.0mmHigginsClipeus,5|im粒度)，用A:水+0.1%甲酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脫。梯度為梯度時(shí)間流速mL/min°/。A%B0.001.09551.001.095515.001.059520.001.059522.001.095525.001.0955檢測(cè)-MS、ELS、UV(100piMS分流液(split)，配備在254nm進(jìn)行檢測(cè)的在線uv檢測(cè)器)。MS離子化方法-電噴霧(正離子)。LC-MS方法2WatersPlatformLC，C18-反相柱(30x4.6mmPhenomenexLuna3粒度)，用A:水+0.1%曱酸；B:乙腈+0.1°/。甲酸洗脫。梯度為梯度時(shí)間流速mL/min%A%B0.002.0950.502,0954.502.0955,502.0956.002.0955檢測(cè)-MS、ELS、UV(100iilMS分流液，配備在線UV檢測(cè)器)。MS離子化方法-電噴霧(正離子和負(fù)離子)。LC-MS方法3WatersMicromassZQ，CI8-反相柱(30x4.6mmPhenomenexLuna3粒度)，用A:水+0.1%曱酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脫。梯度為梯度時(shí)間流速mL/min%A%B0.002.09550.502.09554.502.05955.502.05956.002.0955才企測(cè)-MS、ELS、UV(100m1MS分流液，配備在線UV^r測(cè)器)。MS離子化方法-電噴霧(正離子和負(fù)離子)。LC-MS方法4WatersMicromassZQ，C18隱反相柱(100x3,0mmHigginsClipeuswith5pm粒度)，用A:水+0.1%甲酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脫。梯度為梯度時(shí)間流速mL/min%A%B0.001.09551.001.095515.001.059520.001.059522.001.095525.001.0955檢測(cè)-MS、ELS、UV(100plMS分流液，配備在254nm進(jìn)行檢測(cè)的在線UV檢測(cè)器)。MS離子化方法-電噴霧(正離子)。在高分辨PhilipsX-PertMPD機(jī)器上以反射模式和6-26構(gòu)型，在2。至40°26的掃描范圍收集X-射線粉末衍射(XRPD)圖，每0.03。增量暴露100秒。X射線由在45kV和40m操作的銅管產(chǎn)生。當(dāng)使用單色器時(shí)直束X射線的波長(zhǎng)為1.5406A(Kal)。在放有約2mg化合物的零背景固定器(holder)上收集數(shù)據(jù)。固定器(由PANalytical提供)由硅單晶制成，將所述硅單晶沿著非衍射平面在2。至40。26的范圍切割，然后在光學(xué)平面拋光臺(tái)上進(jìn)行拋光。在該表面上的X射線入射由布拉格消光(Braggextinction)抵消。原始數(shù)據(jù)以電子形式儲(chǔ)存，在原始或經(jīng)平滑的衍射圖上進(jìn)行評(píng)價(jià)。在環(huán)境溫度和相對(duì)濕度記錄XRPD。差示掃描量熱法(DSC)熱分析圖使用配有鋁盤(aluminiumpan)和穿孔蓋(piercedlid)TAQ1000差示掃描量熱計(jì)測(cè)量。樣品重量在0.5至5mg之間變化。該操作在氮?dú)饬?50ml/min)下進(jìn)行，進(jìn)行研究的溫度為25至300。C，溫度增量為每分鐘10°C的恒定速率。熱重分析(TGA)熱分析圖使用配有鋁盤的TAQ500熱重分析儀測(cè)量。樣品重量在1至5mg之間變化。該操作在氮?dú)饬?60ml/min)下進(jìn)行，進(jìn)行研究的溫度為25至300°C，溫度增量為每分鐘10。C的恒定速率。GVS分布4吏用動(dòng)力蒸汽吸收DVS-1(DynamicVapourSorptionDVS國(guó)1instrument)設(shè)備測(cè)量。將約l-5mg固體樣品置于玻璃小瓶中，然后在雙循環(huán)步驟方法(dualcyclestepmethod)(40-卯至0-90至0。/。的相對(duì)濕度(RH),幅度為10。/。RH)過程中記錄樣品的重量。GVS分布在環(huán)境溫度記錄。在實(shí)驗(yàn)部分使用以下縮寫Aq=水溶液DCM=二氯曱烷DMF=二曱基甲酰胺EtOAc=乙酸乙酯EtOH=乙醇GVS=重量蒸汽吸收(Gravimetricvapoursorption)MeOH=曱醇RT=室溫Rt=保留時(shí)間THF=四氫^^喃Satd=飽和的將本申請(qǐng)描述的毒蕈堿性受體拮抗劑和在其制備中使用的中間體，給出了由IsisDraw2.5片反本(由MDLInformationSystemsInc.才是供)的Autonom2000插件產(chǎn)生的IUPAC名稱。在毒蕈堿性受體拮抗劑的制備中使用的中間體在毒蕈堿性受體拮抗劑的制備中使用的以下中間體1-6如下制備^_中間體1:2-氧代-2-苯基-iV-丙-2-炔基-乙酰胺將草酰氯(6.1g,48mmol)加到苯基乙醛酸(6.0g,40mmol)和3滴DMF于無水DCM(50mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h,然后除去溶劑。殘余物吸收在無水(50mL)DCM中，將溶液冷卻至0。C。歷時(shí)10分鐘的一段時(shí)間小心加入炔丙胺(2.2g,40mmol)和三乙胺(4.05g，40mmol)的混合物，然后使混合物溫?zé)嶂潦覝亍＠^續(xù)攪拌2.5h,然后加入水(10mL)?；旌衔锵群笥?MHC1、飽和碳酸氫鈉(aq.)和鹽水洗滌。然后將有機(jī)相干燥(Na2S04)并除去溶劑。殘余物從環(huán)己烷結(jié)晶得到產(chǎn)物其為淡棕色固體。收率5.75g,76°/。。LC-MS(方法3):Rt2.47分鐘，m/z188[Mlf]。中間體2:(5-甲基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮27'J、、0將曱磺酸(IOg,104mmol)滴加到2-氧代-2-苯基-iV-丙-2-炔基-乙酰胺(中間體1)(2.4g，12.83mmol)于1，4-二氧雜環(huán)己烷(20mL)中的溶液中。將得到的溶液在90。C加熱66h。將反應(yīng)混合物冷卻，除去溶劑。深色殘余物在DCM和水之間分配。DCM級(jí)份先后用1MHC1(2x)、飽和碳酸氫鈉溶液(aq.，2x)和鹽水洗滌。將溶液干燥(Na2S04)并除去溶劑，得到粗產(chǎn)物。經(jīng)由柱色譜(用環(huán)己烷/EtOAc(4:l)洗脫)進(jìn)行純化。這得到產(chǎn)物，其為灰白色固體。收率1.0g,41%。LC-MS(方法3):Rt2.94分鐘，m/z188[Mlf]。中間體3:(5-溴甲基-唾、唑-2-基)-苯基-曱酮將(5-曱基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮(中間體2)(0.8g,4,28mmo1)、iV-溴-琥珀酰亞胺(0.9g,5.06mmol)和2，2，-偶氮二(2-曱基丙腈)(56mg,0.34mmol)于四氯化碳(8mL)中的混合物回流加熱1.5h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過濾。濾液用DCM稀釋，然后用水、飽和碳酸氫鈉溶液(aq.)和鹽水洗滌。將其干燥(Na2S04)并除去溶劑。經(jīng)由柱色語(用環(huán)己烷/EtOAc(4:1)洗脫)進(jìn)行純化。這得到產(chǎn)物，其為黃色固體。收率0.9g,79%。LC-MS(方法3):Rt3.26分鐘，m/z266，268[MPT〗。中間體4:(5-二曱基JL&乙基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮將(5-溴曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮(中間體3)(0.18g,0.68mmol)溶于2M二曱胺于THF(3mL，6mmol)中的溶液中。將混合物在室溫?cái)嚢?h，此時(shí)幾乎立即形成沉淀。除去溶劑，殘余物在DCM和飽和碳酸氬鈉溶液(aq.)之間分配。水相用DCM萃取，合并的有機(jī)相干燥(Na2S04),然后除去溶劑得到產(chǎn)物，其為靜置時(shí)結(jié)晶的橙色油狀物。收率0.16g,99%。LC-MS(方法2):Rtl.22分鐘，m/z231[MH"]。中間體5:環(huán)己基-(5-甲基-碌唑-2-基V苯基-甲醇在0。C在氮?dú)庀職v時(shí)10分鐘將(5-甲基-碌、唑-2-基)-苯基-甲酮(中間體2)(3.0g,16mmol)于32mL無水THF中的溶液用2M的環(huán)己基氯化鎂于乙醚(IOmL,20mmol)中的溶液逐滴處理。得到的深黃色、溶液在O'C攪拌約30分鐘，在這期間形成沉淀，然后在室溫?cái)嚢?.5h。將反應(yīng)混合物再次冷卻至0。C，然后用飽和氯化銨溶液(叫.)小心處理。將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后用水(IOmL)稀釋。分離各相，有機(jī)相用鹽水洗滌。合并的水相用DCM萃取，將合并的有機(jī)相干燥(MgS04)并真空濃縮得到粗產(chǎn)物，將其用乙醚研磨，濾出并干燥。收率3.65g,84%。LCMS(方法3):Rt3.78分鐘，m/z272[Mir]。中間體6:(5-溴甲基-碌.唑-2-基)-環(huán)己基-苯基-甲醇.將環(huán)己基-(5-曱基-碌、唑-2-基)-苯基-曱醇(中間體S)(3.0g,11.1mmol)于1,2-二氯乙烷(22mL)中的溶液先后用AT-溴-琥珀酰亞胺(2.16g，12.2mmol)和2，2，-偶氮二(2-曱基丙腈)(0.18g，2.1mmol)處理。將混合物加熱至80°C并保持2.5h,然后使其冷卻至室溫。加入飽和碳酸氫鈉溶液(aq.),'然后分離各相。有機(jī)層用鹽水洗滌，合并的水層用DCM萃取。合并的有機(jī)相干燥(MgS04)并真空濃縮，得到粗產(chǎn)物，其為棕色油狀物。經(jīng)由柱色語(先后用33-100Q/。DCM/環(huán)己烷和25%EtOAc/DCM洗脫)進(jìn)行純化。收率1.85g,48%。LCMS(方法3):Rt4.27分鐘，m/z350，352[MKT]。中間體7:2-苯乙基氧基-乙醇2-苯乙基氧基-乙醇的制備描述在JC/7em.1983，26，1570-1576中。中間體8:[2-(2-溴-乙氧基)-乙基l-苯將三苯基膦(1.65g,6.3mmol)加到2-苯乙基氧基-乙醇(中間體7)(950mg,5.7mmol)和四溴化碳(2.09g,6.3mmol)于DCM(25mL)中的溶液中，然后在室溫?cái)嚢?h。然后加入另一當(dāng)量三苯基膦和四溴化碳并攪拌過夜。將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱色i普(使用環(huán)己烷作為洗脫劑)純化。濃縮純級(jí)份得到產(chǎn)物，其為澄清油狀物。收率1.25g，96%。畫R(CDC13):52.91(t，2H),3.44(t，2H)，3.71(t,2H)，3.76(t，2H),7.19-7.24(m,3H),7.27-7.31(m，2H)ppm。中間體9:2-f4-曱基-芐基氧基)-乙醇將氫氧化鉀(1.19g，21.3mmol)于乙二醇(12mL,213mmol)中的混合物在130。C加熱3h，然后冷卻至35。C，加入4-曱基千基溴(3.94g,21.3mmol)。反應(yīng)混合物在35。C加熱20h，冷卻至室溫，然后在水和乙醚之間分配。水層用乙醚萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(MgS04),并濃縮至干得到棕色油狀物。將其經(jīng)硅膠柱色語(使用0-100%乙醚/環(huán)己烷的梯度)純化。合并純級(jí)份并濃縮，得到黃色液體。收率2.97g,84°/。。&NMR(CDC13):52.04(t,1H),2.35(s，3H),3.58(t,2H)，3.75(m，2H)，4.52(s，2H),7.16(d，2H),7.23(d，2H)ppm。中間體10:1-(2-溴-乙氧基甲基)-4-甲基-苯根據(jù)類似于制備中間體8的方法制備，但使用2-(4-甲基-節(jié)基氧基)-乙醇(中間體9)替代2-苯乙基氧基-乙醇(中間體7),收率85%。)H畫R(CDC13):S2.35(s,3H),3.47(t,2H)，3.76(t,2H),4.55(s，2H)，7.16(d，2H),7.24(d,2H)ppm。中間體11:4-(3-溴-丙氧基)-l,2-二氯-苯將3，4-二氯苯酚(1.98g,12.14薩ol)、1,3-二溴丙烷(6.0mL，59腿ol)和碳酸鉀(2.5g,18mmol)于乙腈中的混合物在80°C加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾，濾液在水和乙醚之間分配。有機(jī)層干燥(MgS04)，濃縮，然后經(jīng)硅膠柱色譜(使用0-10%乙醚/環(huán)己烷作為洗脫劑)純化，得到產(chǎn)物。收率2.96g,86%。'HNMR(CDC13):S2.32(m，2H),3.59(t，2H)，4.08(t，2H)，6.77(dd，1H)，7.00(d，1H),7.32(d,1H)ppm。中間體12:2-C3,4-二氯-芐基氧基)-乙醇根據(jù)類似于制備中間體9的方法制備，但使用3,4-二氯爺基氯代替4-甲基芐基溴，收率72%。'HNMR(CDC13):51.83(br.s,1H),3.61(t,2H),3.79(t，2H)，4.52(s，2H)，7.17(dd,1H),7.42(d,1H),7.45(d，1H)ppm。中間體13:4-(2-溴-乙氧基甲基)-l,2-二氯-苯根據(jù)類似于制備中間體8的方法制備，但使用2-(3，4-二氯-芐基氧基)-乙醇(中間體12)代替2-苯乙基氧基-乙醇(中間體7)，收率定量。'H畫R(CDC13):53.50(t，2H),3.80(t,2H)，4.53(s,2H),7.19(dd,1H),7.42(d,1H)，7.46(d,1H)ppm。中間體14:曱磺酸2-(4-氯-芐基氧基)-乙基酯將曱磺酰氯(980fiL,12.6mmol)于無水DCM(IOmL)中的溶液緩慢加到冷卻的(0。C)2-(4-氯-節(jié)基氧基)-乙醇(2.14g，11.46mmol)和二異丙基乙胺(2.0mL，23mmol)于無水DCM(IOmL)中的溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜。加入水，有機(jī)層干燥(MgS04)并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(使用0-20%乙醚/環(huán)己烷的梯度)純化，得到純產(chǎn)物。收率1.87g,67%。HNMR(CDC13):53,03(s，3H)，3.74(m,2H),4.39(m,2H)，4.54(s,2H),7.27(d,2H),7.33(d，2H)ppm。中間體15:W2-溴-乙氧基甲基)-4-氯-苯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>將曱磺酸2-(4-氯-芐基氧基)-乙基酯(中間體14)(1.37g,5.18mmol)和溴化鋰(1.80g,20.7mmol)于丙酮(15mL)中的混合物回流加熱過夜。將反應(yīng)混合物濃縮至干，殘余物在DCM和水之間分配。有^L層干燥(MgS04)，并濃縮，然后經(jīng)硅膠柱色譜(使用DCM/環(huán)己烷(l:3)作為洗脫劑)純化，得到產(chǎn)物，其為無色油狀物。收率0.67g,78%。NMR(CDC13):53.49(t，2H)，3.79(t,2H),4.55(s,2H)，7.30(d，2H),7.32(d,2H)ppm。中間體16:環(huán)己基-(5-二甲基絲甲基-噁唑-2-基)-苯基-甲醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>將(5-溴曱基-。惡唑-2-基)-環(huán)己基-苯基-曱醇(中間體6)(3.2g,9.2mmol)于THF(40mL)中的溶液用2M的二曱胺于THF(40mL，80mmol)中的溶液處理。攪拌幾分鐘后形成混懸液。使反應(yīng)混合物在室溫靜置，然后濾出固體并棄去。濾液減壓濃縮，殘余物在DCM和飽和碳酸氫鈉溶液(叫,)之間分配。有機(jī)層干燥(Na2S04)并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，其為固體。收率2.74g，95%。LC-MS(方法1):Rt6.57分鐘，m/z315[Mrf]。'HNMR(DMSO-d6):50.92-1.29(m，6H)，1.42-1.74(m，4H),2.10(s，6H)，2.22(m，1H),3.45(s，2H),5.卯(s，1H)，6.98(s,1H)，7.18-7.22(m,1H)，7.27-7.34(m，2H),7,40-7.46(m,2H)ppm。環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-。惡唑-2-基)-苯基-曱醇(中間體16)(2.74g)兩種對(duì)映異構(gòu)體經(jīng)制備性手性HPLC分離，所述制備性手性HPLC使用填充有固定在5pm硅膠上的淀粉酶三(3,5-二曱基苯基-氨基曱酸酯)的250x20mmChiralpakIA柱。該柱用由0.1%二乙胺緩沖的5。/。EtOH/庚烷洗脫，流速15mL/min。首先洗脫出的對(duì)映異構(gòu)體(Rt8.5分鐘)得到(S)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基甲基-。惡唑-2-基)-苯基-曱醇(中間體16a),其為白色固體。中間體16a:fSV環(huán)己基-f5-二甲基氨基甲基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇收率0.73g,27%。LC-MS(方法1):Rt6.50分鐘，m/z315[Mlf]。'H麗R(CDC13):51.12-1.39(m，7H)，1.62-1.76(m,3H),2.25(s,6H),2.29-2.32(m，1H),3.54(ddAB,2H)，3.70(br.s，1H)，6.84(s,1H)，7.24(t，1H),7.33(t，2H),7.64(d,2H)ppm。第二次洗脫出的對(duì)映異構(gòu)體(Rt10.3分鐘)得到(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-甲醇(中間體16b)，其為白色固體。中間體16b:nRV環(huán)己基-(5-二甲基^^甲基-碌唑-2-基)-苯基-甲醇收率1.04g，38%。LC畫MS(方法1):Rt6.48分鐘，m/z315[Mtf]。'HNMR(CDC13):51.10-1.39(m,7H)，1.62-1.76(m，3H),2.25(s,6H)，2.29-2.35(m，1H),3.54(ddAB，2H),3.70(br.s，1H),6.84(s，1H)，7.24(t，1H)，7.33(t,2H),7.64(d,2H)ppm。毒蕈堿性受體拮抗劑1fMAl):溴化C-aS)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基V噁唑-5-基曱基l-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-銨使(S)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(中間體16a)(0.060g,0.19mmol)和3-苯氧基丙基溴(0.215g，1mmol)于乙腈(1.33mL)和氯仿(2mL)中的溶液在室溫靜置5天。除去溶劑，得到粗產(chǎn)物。經(jīng)柱色語(依次用DCM、2.5%MeOH/DCM、5%MeOH/DCM、10%MeOH/DCM和20%MeOH/DCM洗脫)進(jìn)行純化。收率50mg，43°/o。LC隱MS(方法1):Rt8.32分鐘，m/z449OVT]。'HNMR(CDC13):51.06-1.17(m，3H),1.23-1.36(m，4H)，1.52-1.85(m,3H),2.28-2.35(m，3H),3.32(s,3H),3.33(s,3H)，3.63(dd，2H),4.04(t,2H),5.23(ddAB，2H),6.85(d,2H)，6.98(t,1H)，7.20(t，1H),7.26-7.30(m，4H),7.55-7.58Cm,3H)ppm。毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2):溴化『2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基p惡唑-5-基曱基l-二曱基-f3-苯氧基-丙基)-銨將(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(中間體16b)(98mg,0.31mg)和3-苯氧基丙基溴(740mg,3.44mmol)于氯仿(1.5mL)和乙腈(1.5mL)中的溶液在50。C加熱22h。將反應(yīng)混合物濃縮至干，得到無色粘稠的油狀物，將其用乙醚研磨得到白色膠狀物。將其經(jīng)柱色語(用2.5-25%MeOH/DCM洗脫)純化，得到產(chǎn)物，其為混濁粘稠的油狀物。在45°C真空干燥l-2天得到白色固體。收率142mg,86%。LC-MS(方法1):Rt8.41分鐘，m/z449[]VT]。'H畫R(CDC13):M.06-1.16(m,3H),1.21-1.37(m,4H),1.59-1.74(m，3H),2.32(m，3H),3.32(s，3H),3.33(s,3H),3.61(dd,2H),4.03(t，2H),4.14(br.s,IH)，5.20(ddAs,2H),6.85(d，2H)，6.98(t,1H),7.19(t,IH)，7.26-7.30(m,4H)，7.55-7.58(m,3H)ppm。毒蕈堿性受體拮抗劑2HVIA2):溴化2-fflRV環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基甲基l-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨-結(jié)晶形式A制備MA2結(jié)晶形式A的一般實(shí)驗(yàn)條件與下文在MAll的制備[2]中所述的條件相同。OO-環(huán)己基-〖5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基V苯基-曱醇1將(5-二曱基氨基乙基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮2溶于THF(8.4L/kg)中，然后冷卻至0士5。C的溫度，歷時(shí)至少lh向其中加入環(huán)己基氯化鎂(1.3當(dāng)量，為20w/w。/。的曱苯/THF溶液)。歷時(shí)40分鐘將反應(yīng)混合物加熱至20。C,然后在20。C攪拌至少1h,此時(shí)由HPLC檢測(cè)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化〉96Q/。。將反應(yīng)混合物加到23.1w/w%NH4Cl(3.97L/kg)和水(3.97L/kg)的混合物中。分離各相，水層用乙酸乙酯(7L/kg)萃取。合并的有機(jī)層用水(5.25L/kg)洗滌，然后經(jīng)蒸餾(p^130毫巴，50。C)除去70%體積。向蒸餾殘余物中加入乙腈(7.82L/kg)，然后對(duì)混懸液進(jìn)行加熱直到實(shí)現(xiàn)完全溶解(70。C)。然后歷時(shí)7h將反應(yīng)混合物冷卻至0。C,然后在0。C攪拌至少lh。然后經(jīng)過濾收集反應(yīng)產(chǎn)物(土)-環(huán)己基-(5-二甲基氨基曱基-。惡唑-2-基)-苯基-曱醇，用冷的乙腈(1.65L/kg)洗滌三次。用該操作得到的收率范圍在60-70°/。之間，達(dá)到的純度>97%峰面積(HPLC)和〉97%w/w(NMR)。經(jīng)手性SMB色譜在ChiralpakAD柱(使用乙腈:異丙醇:二乙基曱基胺(90:10:0.1)作為洗脫劑)上從該外消旋混合物中分離(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇。1(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-。惡唑-2-基)-苯基-曱醇的供選制備描述在WO2007/017669(實(shí)施例6)中。2(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮的制備描述在WO2007/017669(中間體4)中。制備fMA2)結(jié)晶形式A的晶種的搡作-搡作l將(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-碌唑-2-基)-苯基-甲醇(1當(dāng)量)and3-苯氧基丙基溴(l.l當(dāng)量)懸浮于異丙醇(4.3L/kg)。將得到的混懸液回流加熱至少20h,或直到經(jīng)HPLC檢測(cè)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化>98%。得到的溶液用異丙醇(2L/kg)稀釋，然后冷卻至50。C。在50。C,加入叔丁基曱基醚(TBME)(9.5L/kg)，然后將溶液在50。C再攪拌2h，此時(shí)發(fā)生自發(fā)結(jié)晶。歷時(shí)3h的一段時(shí)間將混合物逐漸冷卻至0。C,然后在0。C攪拌至少lh。經(jīng)過濾收集結(jié)晶產(chǎn)物，然后用冷的TBME(0.16L/kg)洗滌四次。用該操作得到的產(chǎn)物收率>80%，純度>98。/。峰面積(HPLC)和〉97%w/w(NMR)。制備(MA2)結(jié)晶形式A的晶種的搡作-搡作2將(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-唾-唑-2-基)-苯基-曱醇(1當(dāng)量)和3-苯氧基丙基溴(l.l當(dāng)量)在異丙醇(3.14L/kg)中漿化。將得到的混懸液加熱至回流(100。C)，此時(shí)實(shí)現(xiàn)完全溶解?；亓骷訜?^h后，將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度過夜。經(jīng)HPLC分析顯示完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。提取反應(yīng)混合物樣品(0.043L/kg)，然后滴加TBME(0.14L/kg),此時(shí)發(fā)生沉淀。在環(huán)境溫度將該混懸液加到反應(yīng)混合物中，此時(shí)發(fā)生沉淀。將得到的混懸液冷卻至0。C，然后在此溫度攪拌3h。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物，使用異丙醇(2.14L/kg)輔助將產(chǎn)物從小瓶轉(zhuǎn)移到濾器中。濾餅用異丙醇(lL/kg)洗滌，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥過夜。獲得粗產(chǎn)物，其為白色固體，86%收率。將粗產(chǎn)物加到TBME(相對(duì)于粗產(chǎn)物為10.4L/kg)中，然后在環(huán)境溫度攪拌2h。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物，濾餅用TBME(20ml)洗滌，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上干燥過夜。從粗產(chǎn)物得到的收率為94%，經(jīng)HPLC檢測(cè)的純度為98.3%峰面積。(MA2)結(jié)晶形式A的制備在環(huán)境溫度向(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇(1當(dāng)量)于異丙醇(4.44L/kg)中的溶液中加入3-苯氧基丙基溴(1.1當(dāng)量)。歷時(shí)90分鐘將混合物加熱至回流溫度(83。C)，然后回流攪拌20h。之后歷時(shí)13分鐘將混合物冷卻至57°C。取樣，然后將反應(yīng)混合物再次加熱至回流。經(jīng)HPLC確定反應(yīng)轉(zhuǎn)化為98.4%。將反應(yīng)混合物用異丙醇稀釋(5.55L/kg)，然后冷卻至57°C。將溶液通過在線加熱過濾器(heatedinlinefilter)過濾到攪拌的小瓶中。將反應(yīng)器和濾器線路用溫?zé)岬?55。C)異丙醇(U1L/kg)沖洗。將攪拌的小瓶中的內(nèi)含物轉(zhuǎn)移回反應(yīng)器中，然后用異丙醇(l.llL/kg)沖洗。在47°C-50°C的溫度和200毫巴的壓力餾出異丙醇(5.55L/kg)。殘條物冷卻至52°C。在此溫度歷時(shí)35分鐘加入TBME(10L/kg)。將得到的溶液在50。C攪拌2h。加入晶種(1.18%w/w(相對(duì)于(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇)的投入量)，將混合物在50。C再攪拌2h。歷時(shí)3h將形成的混懸液冷卻至0。C，然后在該溫度攪拌13h。過濾后，濾餅用1。C-8。C冷的TBME(1.48L/kg、1.67L/kg、2.04L/kg和2.04L/kg)沖洗四次。濾餅在氮?dú)饬髦蓄A(yù)干燥4.5小時(shí)，之后將其在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45。C和212毫巴進(jìn)一步干燥得到產(chǎn)物，其為結(jié)晶白色固體。以2.7kg規(guī)模以該方法獲得的收率為90.5%，純度為98.3%峰面積(HPLC)和98.9%w/w(NMR)。干燥失重(Lossondrying)為0.23%w/w(重量分析)。36毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2)結(jié)晶形式A的分析由"制備(MA2)結(jié)晶形式A的晶種的操作-操作2"獲得的結(jié)晶形式A的樣品由XRPD、DSC和TGA分析。由DSC確定的形式A的熔化溫度測(cè)定為150°C(起始)(±2°C)。在由TGA熔化之前所觀測(cè)的重量損失為可忽略的，接近0.0%。GVS測(cè)定在80%RH(±0.2%)時(shí)得出0.8%的重量增加(o/。w/w)。毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2)結(jié)晶形式A的XRPD譜表示在圖1中。毒蕈堿性受體拮抗劑3(MA3):溴化〖2WR)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-魂、唑-5-基甲基l-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨根據(jù)用于制備MA2的方法制備，但是使用[2-(2-溴-乙氧基)-乙基]-苯(中間體IO)代替3-苯氧基丙基溴。收率94%。LC-MS(方法1):Rt8.50分鐘，m/z463[Nf]。'H雨R(CD3OD):51.06-1.39(m，6H),1.55(m，1H),1.65-1.79(m，3H)，2.40(m,1H)，2.90(t，2H)，2.94(s，6H)，3.47(m,2H),3.78(t，2H),3.86(m，2H),4.56(s，2H)，7.12(m,1H),7.19-7.28(m，5H)，7.32-7.37(m,3H),7.55(m,2H)。喜蕈堿性受體拮抗劑4fMA4):溴化〖2-((RV環(huán)己基-羥基-笨基-甲臬)-。惡唑-5-基甲基l-f3-C3,4-二氯-苯氣基V丙基l-二甲基-銨根據(jù)用于制備MA2的方法制備，但是使用4-(3-溴-丙氧基)-1,2-二氯-苯(中間體11)代替3-笨氧基丙基溴。收率'.59%。LC-MS(方法4):Rt8.85分鐘，m/z517[M^。'HNMR(CDC13):51.08-1.40(m,7H),1.60-1.76(m,3H)，2.34(m，3H),3.34(s,6H),3.65(m,2H),3.99(m,3H),5.25(ddAB,2H),6.73(dd，1H)，6.96(d,1H),7.22(t,1H),7.26-7.34(m，3H),7.56(m，3H)ppm。毒蕈堿性受體拮抗劑5HV1A5):溴化2-(OQ-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)—悉唑-5-基甲基W2-a4-二氯-爺基氧基)-乙基l-二甲基-銨根據(jù)用于制備MA2的方法制備，但是使用4-(2-溴-乙氧基曱基)-l,2-二氣_苯(中間體13)代替3-苯氧基丙基溴。收率86°/。。LC-MS(方法1):Rt9,07分鐘，m/z517[M^。'HNMR(CDC13):51.09-1.37(m,7H)，1.60-1.77(m,3H)，2.31(m，1H),3.33(s,6H)，3.91(m，2H),3.98(m,3H),4.55(s,2H),5.20(dc^B,2H)，7.17(dd,1H),7.24(m，1H),7.31(t,2H),7.40(d,1H),7.44,(d,1H)，7.48，(s,1H)，7.56(d，2H)ppm。喜蕈堿性受體拮抗劑6fMA6):溴化2-"-氯-芐基氧基V乙基W2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基甲基卜二甲基-銨根據(jù)用于制備MA2的方法制備，但是使用1-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(中間體15)代替3-苯氧基丙基溴。將(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(0.40g，1.27mmo1)和l-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(中間體15)(0.67g,2.68mmol)于氯仿(4mL)和乙腈(4mL)中的溶液在50。C加熱3天。將反應(yīng)混合物濃縮至干，得到黃色油狀物，將其經(jīng)柱色鐠(用2.5-25。/。MeOH/DCM洗脫)純化，得到產(chǎn)物，其為白色泡沫。得到0.68g,92%。收率92%。LC-MS(方法1):Rt8.72分鐘，m/z483[M""]。'H固R(CDC13):S1.08-1.40(m,7H)，1.61-1.76(m，3H),2.31(m,1H),3.32(s,6H),3.88(m,2H)，3.94(m,2H),4.03(br.s，1H),4.54(s,2H),5.17(ddAB:2H),7.21-7.26(m,3H),7.28-7.34(m,4H)，7.46(s,1H),7.56(d,2H)ppm。毒蕈堿性受體拮抗劑7(MA7):半-^~1,5-二磺酸2-(限)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基卜二曱基-(3-苯^&-丙基)-銨將溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-銨(MA2)(201mg,0.372mmol)、萘-1，5-二磺酸二鈉鹽(68mg，0.21mmol)、DCM(2.8mL)和水(2.8mL)的混合物在室溫劇烈攪拌過夜。經(jīng)過濾收集固體，用DCM/水混合物洗滌，然后在40°C真空干燥。獲得的MA7樣品在下文中稱為MA7無定形形式。'HNMR顯示對(duì)應(yīng)于半鹽(比例為2:1的陽離子/陰離子)的光譜。收率208mg,94%。LC-MS(方法1):Rt8.35分鐘，m/z449[M+]。'HNMR(CD3OD):S1.04-1.37(m,12H),1.55-1.75(m，8H)，2.22(m，4H),2.40(m，2H),3.01(s，6H)，3.02(s,6H),3.37(m,2H)，3.97(m,4H),4.67(s,4H),6.89(d，4H),6.95(t，2H),7.21(t，2H)，7.28(m,8H)，7.51(m，8H),8.19(d，2H)，9.02(d,2H)ppm。鹽形式1在60。C將MA7無定形形式(如上文所述制備)在曱苯中在攪拌下加熱48小時(shí)，然后在攪拌的同時(shí)使其冷卻至室溫，得到產(chǎn)物，其為小片狀物。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物并在50°C真空干燥3h。形式1的熔化溫度由DSC確定，在測(cè)試過程中形式1進(jìn)行脫水，隨后完全或部分轉(zhuǎn)化為無水形式的脫水形式1,在225。C士2。C(起始)熔化。由TGA確定的水含量為0.7。/。(士0.2。/。)。GVS測(cè)定在80%RH(士0.5°/。)時(shí)得出3.1%的重量增力口(。/oW/w)。結(jié)晶形式l的XRPD譜表示在圖2中。另外量的形式1如下制備使用熱過濾溶液將MA7無定形形式從回流的乙腈中結(jié)晶，并在攪拌的同時(shí)使其冷卻至室溫，得到產(chǎn)物，其為小片狀物。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物并在60。C在曱苯中攪拌19h。通過傾析溶劑收集固體，然后在50。C真空干燥3h。XRPD和DSC分析與形式1一致。鹽形式2將MA7無定形形式在茴香醚中在154。C加熱3小時(shí)，然后^f吏其在室溫靜置48小時(shí)。通過傾析溶劑收集固體，然后在45。C真空干燥。由DSC確定的形式2的熔化溫度測(cè)定為227。C士2。C(起始)。由TGA確定的水含量為0.0%。GVS測(cè)定在80。/oRH(士0.2。/o)時(shí)得出0.7。/o的重量增力口(。/ow/w)。結(jié)晶形式2的XRPD譜表示在圖3中。另外量的形式2如下制備將MA7無定形形式從回流的氯苯中結(jié)晶，使其緩慢冷卻至室溫得到產(chǎn)物，其為微細(xì)的針狀物。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物并在室溫真空干燥過夜。XRPD和DSC分析與形式2—致。另外量的形式2如下制備將MA7無定形形式在曱苯中在80°C攪拌至少60小時(shí)。通過傾析溶劑收集固體，然后在45。C真空干燥。XRPD和DSC分析與形式2—致。鹽形式3.使用熱過濾溶液將MA7無定形形式從回流的丙酮/水混合物中結(jié)晶，然后在攪拌的同時(shí)使其冷卻至室溫，得到產(chǎn)物，其為白色粉末。經(jīng)過濾收集產(chǎn)物并在室溫真空干燥過夜。形式1的熔化溫度由DSC確定，在測(cè)試過程中形式3進(jìn)行脫水，隨后完全或部分轉(zhuǎn)化為無水形式的脫水形式3，在224°C±2°C(起始)熔化。由TGA確定的水含量為2.10/。(士0.2o/。)。GVS測(cè)定在80。/oRH(土0.2o/o)時(shí)得出3.0%的重量增加(。/。w/w)。結(jié)晶形式3的XRPD語表示在圖4中。毒蕈堿性受體拮抗劑8(MA8):半-^~1.5-二磺酸2-"10-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基l-二甲基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨40根據(jù)用于制備MA7的方法制備，但是使用溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨(MA3)代替溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。收率98%。LC-MS(方法1):Rt8.64分鐘，m/z463[M"]。'HNMR(CD3OD):S1.05-1.39(m,12H),1.53(m,2H)，1.68(m,4H)，1.77(m,2H)，2.39(m，2H)，2.85(s，12H),2.87(t，4H),3.36(m,4H),3.72(t,4H),3.76(m，4H)，4.46(s，4H)，7.11(m,2H),7.20(m,8H)，7.22-7.27(m，2H),7,33(t,6H),7.54(m，6H)，8.20(dd，2H),9.02(d，2H)ppm。從回流的乙腈中結(jié)晶，然后使其緩慢冷卻至室溫，得到產(chǎn)物，其為微細(xì)的針狀物。熔點(diǎn)215-216(10。C/分鐘)。喜蕈堿性受體拮抗劑9fMA9):半-^~1.5-二磺酸『2-(0^-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基卜〖3"3,4-二氯-苯IL&)-丙基卜二曱基-銨根據(jù)用于制備MA7的方法制備，但是使用渙化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]-二曱基-銨(MA4)代替溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。收率56%。LC-MS(方法1):Rt9.13分鐘，m/z517[M^。，HNMR(CD3OD):51.05-1.37(m,12H)，1.56-1.75(m，8H),2.23(m,4H),2.40(m,2H),3.03(s，6H),3.04(s，6H)，3.34(m，4H),3.96(m,4H)，4.68(s，4H)，6.85(dd，2H)，7.09(d,2H)，7.21(m，2H)，7.30(t，4H)，7.42(d，2H),7.52(m，8H):8.20(dd,2H)，9.02(dd,2H)ppm。從熱的MeOH中結(jié)晶。熔點(diǎn)225-227°C(1。C/分鐘)。毒蕈堿性受體拮抗劑10(MA10):半-萘-l,5-二磺酸2-(fR)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌唑-5-基甲基1-『2-(3,4-二氯-爺基猛)-乙基l-二曱基-銨根據(jù)用于制備MA7的方法制備，但是使用溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-。惡唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二曱基-銨(MA5)代替溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。收率76%。LC-MS(方法1):Rt9.06分鐘，m/z517[ivr]。'HNMR(CD30D):51.05-1.37(m,12H),1.54(m,2H)，1.63-1.76(m，6H),2.38(m，2H)，3.03(s,12H),3.47(m,4H),3.86(m,4H),4.51(s,4H)，4.71(s,4H),7.22-7.33(m,8H)，7.46(s,2H),7.52(m,10H),8.20(dd,2H),9.02(d,2H)ppm。喜蕈堿性受體拮抗劑11(MA11):半-萘-l,5-二磺酸C-"-氯-芐基氧基)-乙基W2-"R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-魂唑-5-基甲基l-二甲基-銨制備mMAll可根據(jù)用于制備MA7的方法制備，但是使用溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基曱基]-二甲基-銨(MA6)代替溴化[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-。惡唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-銨。示例性制備描述于下文中。將溴化[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨(0.20g,0.36mmol)、萘-1，5-二磺酸二鈉鹽(0.059g,0.18mmol)、DCM(2.8mL)和水(2.8mL)的混合物在室溫劇烈攪拌過夜。加入正庚烷(1.0mL),然后將混合物劇烈攪拌。一旦靜置獲得兩層澄清的層和黃色油狀物。加入DCM(1.0mL)(使油溶劑)，然后將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，得到白色固體的沉淀。經(jīng)過濾收集固體，用DCM/水混合物洗滌，然后在50。C真空干燥。'HNMR顯示對(duì)應(yīng)于半鹽(比例為2:1的陽離子/陰離子)的光語。LC-MS(方法1):Rt8.62分鐘，m/z483pyT]。畫R(CD3OD):51.04-1.37(m，12H),1.53(m,2H)，1.64-1.76(m,6H)，2.38(m,2H)，3,03(s，12H),3.46(m，4H),3.85(m，4H)，4.52(s，4H)，4.70(s,4H)，7.24(m,2H)，7.34(m，12H),7.43(s，2H),7,52(m,6H)，8.20(d，2H)，9.02(d,2H)ppm。半-萘-1,5-二磺酸2-(4-氯-芐基氧基)-乙基142"(R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基l-二甲基-銨的"鹽形式A"在室溫將半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-卡基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基—苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-銨(如上文所述制備)(107mg,0.17mmol)溶于最小量的MeCN(乙腈)中。將溶液加熱，然后使其再次冷卻至室溫。濾出得到的結(jié)晶固體并真空干燥。收率83mg，78%。由這種途徑制備的產(chǎn)物通過XRPD進(jìn)行分析，鑒定產(chǎn)物為"鹽形式A"。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>制備『21制備「21的一般實(shí)驗(yàn)條件除非另有說明，所有反應(yīng)都在惰性氣體氣氛下進(jìn)行。NMR光語在BmkerAVANCE400光語儀上獲得頻率400MHz;2-通道；z-梯度。溫度范圍0-120。C。HPLC條件PhenomenexLunaC18(2)柱(50x4.6mm),3pm粒度。在210nm進(jìn)行UV檢測(cè)。用A:水+0.05%三氟乙酸；B:乙腈+0.05%三氟乙酸洗脫。梯度為梯度時(shí)間流速mL/min%Ao/oB0,001.090108.001,010909.001.010909.501.0卯1012.001.09010LC-MS方法LC-方法在上文給出。MS:HP-1100MSD。檢測(cè)-API-ES，正模式。制備「21將(R)-環(huán)己基-(5-二甲基氨基曱基鳴唑-2-基)-苯基-曱醇(1當(dāng)量)和1-(2-溴-乙氧基甲基)-4-氯-苯(2當(dāng)量)于2-丙醇(5體積)中的混合物在52。C加熱64h。HPLC顯示轉(zhuǎn)化了98%。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，得到溴化[2-(4-氯-節(jié)基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-碌-唑-5-基曱基]-二曱基-銨。將溴化[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((尺)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨的粗樣品溶于二氯曱烷(4.98體積)中，然后在室溫歷時(shí)10分鐘的一段時(shí)間加入I,5-萘二磺酸二鈉鹽(1當(dāng)量)于水(10體積)中的溶液。將混合物用二氯曱烷(4.98體積)稀釋，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)。關(guān)閉攪拌器，使乳液沉降，然后進(jìn)行分離。在室溫歷時(shí)72分鐘的一段時(shí)間向有機(jī)層中加入叔丁基曱基醚(tBME)(10體積)和2-丙醇(1.6體積)的混合物。將得到的混懸液過濾，濾餅用tBME(2.15體積)沖洗。干燥(在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40-50°C的浴溫度在5-10毫巴干燥)，得到半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-銨。使用130g(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇由該制備方法獲得的收率為216g,83%。111>^顯示對(duì)應(yīng)于半鹽(比例為2:1的陽離子/陰離子)的光譜。轉(zhuǎn)化為"鹽形式A"通過以下方式實(shí)現(xiàn)將如上所述制備的粗制的一批半-萘-l,5-二磺酸[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基H2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨懸浮于乙腈(13.8體積)中。將混懸液加熱至回流并回流攪拌l小時(shí)。然后將混懸液冷卻至70°C，并在此溫度攪拌過夜。將混懸液冷卻至室溫，過濾固體，然后用乙腈(1.4體積)洗滌并干燥(在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40-50。C的浴溫度在5-10毫巴干燥)，得到"鹽形式A"。使用216g粗制的半-萘-1，5-二磺酸[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((11)-環(huán)己基-羥基-笨基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-銨作為原料由該轉(zhuǎn)化獲得的收率為203.5g,94%。制備m制備[3]的一般實(shí)驗(yàn)條件與制備[2]的相同。使(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基。惡唑-2-基)-苯基-曱醇(1當(dāng)量)和1-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(2當(dāng)量)于2-丙醇(5體積)中的混合物接受以下溫度程序歷時(shí)1小時(shí)加熱至70。C(內(nèi)部溫度)，在70。C攪拌26小時(shí)，然后歷時(shí)30分鐘冷卻至20°C。由HPLC枱r驗(yàn)轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干(在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40-50°C的浴溫度在10-15毫巴干燥)，殘余物溶于二氯曱烷(8.9體積)中。歷時(shí)至少10分鐘向溶液中加入1,5-萘二磺酸二鈉鹽(1當(dāng)量)于水(17.7體積)中的溶液。得到的混合物用二氯曱烷(8.9體積)稀釋，然后在室溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)。關(guān)閉攪拌器，使乳液沉降，然后進(jìn)行分離。在室溫歷時(shí)60分鐘的一段時(shí)間向有機(jī)層中加入叔丁基曱基醚(tBME)(17.7體積)和2-丙醇(2.86體積)的混合物。將形成的混懸液在室溫?cái)嚢?0至60分鐘，然后過濾。濾餅用tBME(2x3.46體積)洗滌并干燥(在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40-50°C的浴溫度在5-10毫巴干燥)，直到獲得的干燥失重(L0D)S2w/w%。將該物質(zhì)懸浮于22.9體積乙腈中，然后使混懸液接受以下的溫度程序歷時(shí)至少30分鐘的一段時(shí)間加熱至回流?；亓鲾嚢?0至70分鐘，然后冷卻至70。C(內(nèi)部溫度)并在70。C攪拌16至24小時(shí)，最后歷時(shí)1小時(shí)冷卻至20。C。將混懸液過濾，濾餅用乙腈(4.61體積)洗滌。將該物質(zhì)干燥(在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40-50°C的浴溫度在5-10毫巴干燥)，直到獲得的LOD<145w/w%。使用25.0g(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基甲基噁唑-2-基)-苯基-曱醇由該制備方法獲得的收率為38.7g，78%。使用129.9g(R)-環(huán)己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-甲醇由該制備方法獲得的收率為203.6g，79%。HPLC和NMR顯示對(duì)應(yīng)于半鹽(比例為2:1的陽離子/陰離子)的光譜。半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-芐基氣基V乙基W2-(TR)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基l-二曱基-銨的MA11鹽形式A的固態(tài)分析由DSC確定的形式A的熔化溫度測(cè)定為233°C(起始)(士3。C)。在由TGA熔化之前所觀測(cè)的重量損失非常低(0.0。/。-0.5。/。)。GVS測(cè)定在80%RH(±0.3%)時(shí)得出0.5。/o的重量增力口(。/ow/w)。"MA11鹽形式A"的XRPD謙表示在圖5中。將"鹽形式A，，在50mm氣流粉碎機(jī)(jetmill)中以5巴的噴射壓力和1.5-2巴的粉〃碎壓力進(jìn)行微粒化，得到90%的收率。由配有干粉給料機(jī)(drypowderfeeder)Malvern激光衍射確定的孩t?；镔|(zhì)的粒度為d(O,l)0，77pm:d(0,5),1，45h:d(0，9):2,65nm。對(duì)微?；?鹽形式A"的解聚集性質(zhì)進(jìn)行的調(diào)查研究評(píng)價(jià)顯示了在橫跨一定范圍的相對(duì)濕度(0-75。/。RH)時(shí)優(yōu)良的細(xì)顆粒部分(FineParticleFraction)(FPF>60%)。喜菜堿性受體拮抗劑的生物活性毒蕈堿性受體拮抗劑化合物的抑制性作用由毒蕈堿性受體放射配體結(jié)合測(cè)定來確定。放射配體結(jié)合研究利用了卩H]-N-曱基東莨菪堿tfH]-NMS)和表達(dá)人毒蕈堿性受體(M2或M3)的市售細(xì)胞膜，該研究用于評(píng)價(jià)毒蕈堿性受體拮抗劑對(duì)M2和M3受體的親和力。將于TRIS緩沖液中的膜在96孔板中卩H]-NMS和用各種濃度的M3拮抗劑孵育3小時(shí)。然后經(jīng)過濾收集膜和已結(jié)合的放射配體，并使其千燥過夜。然后加入閃爍液，4吏用CanberraPackardTopcount閃爍計(jì)數(shù)器對(duì)已結(jié)合的放射配體進(jìn)行計(jì)數(shù)。每種毒蕈堿性受體拮抗劑的半衰期使用供選的放射配體[3司-QNB和上述親和力測(cè)定的適應(yīng)性方法進(jìn)行測(cè)量。將拮抗劑以高于其KiIO倍的濃度(用[3H]-QNB配體確定)與表達(dá)人毒蕈堿性受體的膜一起孵育3小時(shí)。在孵育時(shí)間后期，將卩H]-QNB加至高于所研究的受體的Kd25倍的濃度，然后繼續(xù)孵育不同的時(shí)間段，從15分鐘至多180分鐘。然后經(jīng)過濾收集膜和已結(jié)合的放射配體，并使其干燥過夜。然后加入閃爍液，使用CanberraPackardTopcount閃爍計(jì)數(shù)器對(duì)已結(jié)合的放射配體進(jìn)行計(jì)數(shù)。所檢測(cè)的卩H]-QNB與毒蕈堿性受體結(jié)合的速率與拮抗劑與受體解離的速率相關(guān)，即與拮抗劑在受體上的半衰期相關(guān)。在受體結(jié)合測(cè)定中測(cè)試了以下化合物毒覃堿性受體拮抗劑M3結(jié)合Ki，nMMA19.4MA20.2MA30.6MA40.9MA52.1MA60.6l腎上腺素受體激動(dòng)劑的制備可在本發(fā)明的組合中使用的以下P2腎上腺素受體激動(dòng)劑可如下制備。制備^腎上腺素受體激動(dòng)劑的一般實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在Varian/"ova400MHz或VarianMwcm^v-VX300MHz設(shè)備上記錄NMR光譜。使用氯仿-d(sh7.27ppm)、二曱基亞砜-c^(5H2.50ppm)、乙腈-4(6H1.95ppm)或曱醇-力(SH3.31ppm)的中心峰作為內(nèi)標(biāo)。柱色譜使用硅膠(0.040-0.063mm,Merck)進(jìn)行。除非另有說明，起始原料是市售的。所有溶劑和市售試劑都是實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的并且原樣使用。以下方法用于LC/MS分析設(shè)備Agilent1100;柱WatersSymmetry2.1x30mm;質(zhì)量APCI;流速0.7ml/min;波長(zhǎng)254nm;溶劑A:水+0.1。/。TFA;溶劑B:乙腈+0.1。/。TFA;梯度15-95%/B8分鐘，95%B1分鐘。分析性色譜在粒度為3.5)im的Symmetryds-柱2.1x30mm上運(yùn)行，乙腈/水/0.1%三氟乙酸作為流動(dòng)相，歷時(shí)8分鐘梯度從5%至95%乙腈，流速為0.7ml/min。在實(shí)施例中使用的縮寫和術(shù)語具有以下含義SCX:帶有磺酸吸附劑的固相萃取HPLC:高效液相色鐠DMF:A/",;V-二甲基曱酰胺p2腎上腺素受體激動(dòng)劑和在其制備中使用的中間體在本申請(qǐng)中基于所描述的結(jié)構(gòu)，使用IUPACNAME,ACDLabs8版本命名軟件包命名。B^腎上腺素受體激動(dòng)劑1:(BA1〗制備17V-f2-f二乙基氨基〗乙基l-7V"2-H2-"-羥基-2-氧代-2,3-二氫-1.3-苯并噻哇-7-基)乙基1氨基}乙基V3-『2-(萘-l-基)乙氧基l丙酰胺二氫溴酸鹽a)3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酸叔丁酯將萘_1_乙醇(IOg)用千基三曱基氫氧化銨(TritonB;0.9mL40%的曱醇溶液)處理，將得到的混合物真空攪拌30分鐘。然后將混合物冷卻至0°C,然后用丙烯酸叔丁酯(8.19g)處理。將得到的混合物緩慢溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。隨后將粗混合物吸附到氧化鋁(30g)上，然后用乙醚(200mL)洗脫。將有機(jī)物濃縮，得到粗物質(zhì)(16.6g),將其經(jīng)快速硅膠色譜(用1:8乙醚:己烷洗脫)純化，得到副標(biāo)題化合物(12.83g)。HNMR(CDC13)S8.05(dd，1H),7.84(dd，1H)，7.72(dd,1H)，7.54-7.34(m，4H),3.81-3.69(m,4H)，3.35(t，2H),2.52-2.47(m,2H)，1.45(s，9H)。b)3-[2-(萘-l-基)乙氧基I丙酸將3-P-(萘-l-基)乙氧基]丙酸叔丁酯(6.19g)吸收在二氯曱烷(30mL)中，然后用三氟乙酸(5mL)處理。將得到的溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入額外的1mL三氟乙酸，然后將溶液攪拌過夜。將混合物濃縮，吸收在2M氫氧化鈉溶液(30mL)中，然后用乙醚(2x20mL)洗滌。隨后將水層酸化(使用1M鹽酸)，然后用乙醚萃取(2x30mL)。合并的有機(jī)物用鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到副標(biāo)題化合物(5.66g),其為澄清油狀物。NMR(CDC13)58.05(bs,1H)，7.85(bs，1H),7.74(bs，1H),7.50-7.38(m:4H),3.84-3.75(bm,4H),3.39(bs，2H)，2.65(bs，2H)。c)7V-(2-二乙基^J^乙基)-7V-(2-羥基乙基)-3-2-dl-基)乙氧基丙酰胺將草酰氯(0.33g)滴加到3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酸(0.53g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液中，加入二甲基曱酰胺(1滴)，然后繼續(xù)在室溫?cái)嚢鑜小時(shí)。隨后將混合物濃縮，再溶于二氯曱烷(10mL)中，然后滴加2-(2-二乙基氨基乙基氨基)乙醇(0.35g)和二異丙基乙胺(0.56g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液。將得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，稀釋(二氯甲烷,50mL),用水(2x20mL)、鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物(0.91g),將其經(jīng)快速柱色譜(用5-7%曱醇/二氯甲烷洗脫)純化，得到0.63g副標(biāo)題化合物。'HNMR(CDC13)58.05(d,1H),7.85(d，1H),7.73(d,1H)，7.52-7.47(m,2H),7.42-7.35(m，2H)，3.84-3.78(m,6H)，3.72-3.70(m，1/2H),3.45-3.35(m,6H)，2.79-2.77(m,l+l/2H),2.62-2.58(m,2H),2.54-2.49(m,4H),1.04-1.01(m，6H)。d)iV-[2-(二乙基氨基)乙基-7V-(2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并噢唑-7-基)乙基氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙M]丙酰胺在-78。C將二曱基亞砜(0.097g)于二氯曱烷(lmL)中的溶液加到草酰氯(0.079g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，然后加入AM7-二乙基氨基乙基)-A"-P-羥基乙基)-3-[^(萘-l-基)乙氧基]丙酰胺(0.22g)于二氯甲烷(lmL+lmL洗滌物)中的溶液，將反應(yīng)混合物再攪拌15分鐘。加入三乙胺(0.29g),然后歷時(shí)1小時(shí)^f吏反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀S后將混合物稀釋(二氯曱烷30mL)，將有機(jī)物用碳酸氫鈉、鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥、過濾并真空濃縮，得到副標(biāo)題化合物(0.21g)。將粗產(chǎn)物溶于曱醇(10mL)中，然后加入7-(2-氨基乙基)-4-羥基-l，3-苯并p塞唑-2(3H)-酮鹽酸鹽(才艮據(jù)OrganicProcessResearch&Development2004，8(4)，628-642中概述的操作制備；0.131g)以及乙酸(0.1mL)和水(O.lmL)。在室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入氰基硼氫化鈉(0.020g),然后將反應(yīng)混合物攪拌過夜。加入氨(7N的曱醇溶液，lmL),然后將混合物濃縮。粗殘余物經(jīng)快速柱色譜(用1%氨；5%-7%曱醇/二氯曱烷洗脫)純化。粗產(chǎn)物直接用于下一步。e)AL[2-(二乙基氨基)乙基l-AK2-U2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基)J-2-dl-基)乙氧基丙酰胺二氫溴酸鹽49將iV-[2-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-([2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.052g)溶于乙醇(1.5mL)中，然后用48%氫溴酸(21W)處理。經(jīng)過濾收集白色固體二氫溴酸鹽(0.058g)。MS:APCI(+ve)579(M+l)'H麗RS(DMSO)11.78-11.71(m，1H),10.11-10.06(m，1H),9.51-9.43(m，0.33H)，9.21-9.13(m,0.66H)，8.75-8.66(m，1H)，8.59-8.51(m,1H),8.06(d，1H),7.95-7.90(m,1H),7.79(d，1H)，7.60-7.48(m,2H)，7.47-7.39(m,2H)，6.87(t，1H),6.76(dd,1H),3.78-3.53(m,10H),3.25-3.09(m，IOH)，2.91-2.80(m,2H)，2.73-2.61(m,2H)，1.26-1.15(m，6H)。NMR指示在298K時(shí)約2:1的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物。B^腎上腺素受體激動(dòng)劑1:(BA1、制備2iV-〖2-f二乙基氨基)乙基l-7V-(22-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基)-342-f萘小基)乙氧基l丙酰胺二氫溴酸鹽在10-15。C將N，N-二乙基乙二胺(150g)于曱醇(500mL)中的溶液用乙二醛二曱基縮醛(60wt。/。的水溶液，225g)快速逐滴處理。加入結(jié)束后將溶液溫?zé)嶂?5°C，然后溫?zé)嶂?2。C，并在此溫度靜置16小時(shí)。反應(yīng)混合物用5。/。鈀/碳(Johnson-Matthey類型38H糊劑，15g)處理，然后在6巴氫化，直到經(jīng)GC/MS判斷反應(yīng)結(jié)束。經(jīng)過濾除去催化劑，將濾液蒸發(fā)至干(曱苯共沸，2.5L)，得到196.2g副標(biāo)題化合物。NMR(CDC13):4.48(t，1H)，3.39(s，6H),2.75(d，2H),2.69(t，2H)，2.57-2.48(m,6H),1.01(ts,6H)。b)7V-[2-(二乙基氨基)乙基I-7V-(2，2-二曱氧基乙基)-3-2-dl-基)乙氧基丙酰胺a)7V-(2，2-二曱lL基乙基)-AyV-二乙基-乙-l，2-二胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>歷時(shí)45分鐘將草酰氯(151mL)滴加到3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸。89g)(實(shí)施例7步驟b))于二氯曱烷(2.1L)和DMF(0.5mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物再攪拌16小時(shí)。隨后將混合物濃縮，再溶于DCM(二氯曱烷)(1.7L)中，然后歷時(shí)1.75小時(shí)在0°C滴加到iV-(2,2-二曱氧基乙基)-AgV-二乙基乙-1,2-二胺(325g)和異丙基二乙胺(551mL)于DCM(1.7L)中的溶液中。將得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(5xlL)、水(1.5L)洗滌，然后經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到650g副標(biāo)題化合物。m/e431(M+tf，100%)。c)7V-P-(二乙基氨基)乙基-3-2-(萘-1-基)乙氧基-AT-p-氧代乙基)丙酰胺.在0。C歷時(shí)1.5小時(shí)將Aq2-(二乙基氨基)乙基]-AK2,2-二曱氧基乙基)_3_[2_(萘_1_基)乙氧基]丙酰胺(Wg)于DCM(270mL)中的溶液用三氟乙酸(270mL)逐滴處理。加入后^f吏反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，然后再攪?小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(1800mL，小心倒入)中。將含水混合物用DCM(4x400mL)萃取，合并的萃取物用硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物直接用于隨后的反應(yīng)。d)iV-2-(二乙基氨基)乙基l-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并蓉唑-7-基)乙基氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙氧基丙酰胺二氫溴酸鹽將7-(2-氨基-乙基)-4-羥基-3H-苯并噻唑-2-酮鹽酸鹽(53g)于無水NMP(N-曱基吡啶)(216mL)中的混懸液加熱至60。C,然后用NaOH(8.2g)于曱醇(102mL)中的溶液一次性處理。將明亮的橙色混懸液冷卻至室溫，然后歷時(shí)20分鐘用從[2-(二乙基氨基)乙基]-3_[2-(萘-1-基)乙氧基]-^-(2-氧代乙基)丙酰胺于二氯曱烷(475mL)中的溶液逐滴處理。將反應(yīng)混合物攪拌25分鐘。然后歷時(shí)20分鐘分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(91.5g)，將混合物再攪拌50分鐘。將反應(yīng)混合物倒入水(1.8L)中，然后將酸性溶液(pH5)用叔丁基曱基醚(TBME)(3x500mL)處理。通過加入固體碳酸鉀將水相堿化至pH8，然后用二氯曱烷(3x750mL)萃取；合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并濃縮，得到深色油狀物。將其溶于乙醇(200mL)中，然后加入48%氫溴酸水溶液(73mL)。將溶液老化30分鐘，然后蒸發(fā)至干。將殘余物用乙醇(560mL)研磨；經(jīng)過濾收集得到的固體，然后在50。C真空干燥。將粘稠的固體懸浮于沸騰的乙醇(100mL)中，然后趁熱過濾。將收集的固體在50。C真空干燥。將該物質(zhì)從乙醇/水(3:l，500mL)重結(jié)晶。靜置過夜后，經(jīng)過濾收集得到的固體，然后用冰冷的乙醇(75mL)洗滌。在50。C真空干燥24小時(shí)，得到57g標(biāo)題化合物。B^腎上腺素受體激動(dòng)劑2:fBA2):AM2-f二乙基氨基)乙基l-JV-(2-H2-f4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基lM)乙基)-3J2-f3-氯苯基)乙氧基l丙酰胺二氫溴酸鹽a)3-2-(3-氯苯基)乙氧基l丙酸叔丁酯將2-(3-氯苯基)乙醇(20g)用芐基三甲基氫氧化銨(TritonB)(2.67mL)處理，將得到的混合物真空攪拌30分鐘。然后將混合物冷卻至0。C,然后用丙烯酸叔丁酯(17.40g)處理。將得到的混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?6小時(shí)。隨后將混合物吸附到氧化鋁(15g)上，用乙醚(75mL)洗脫。將收集的濾液濃縮，得到副標(biāo)題化合物(34.40g),其為油狀物。畫R(CDC13)^7.26-7.07(m,4H)，3.69-3.59(m，4H)，2.86-2.81(t,2H):2.50-2.45(t,2H),1.43(s，9H)。b)3-[2-(3-氯苯基)乙氧基l丙酸將3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酸叔丁酯(實(shí)施例la)，3《々0g)溶于二氯曱烷(150mL)中，然后用三氟乙酸(50mL)處理。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后真空濃縮并與二氯曱烷(2x10mL)共沸。殘余物吸收在二氯甲烷(300mL)中，然后用飽和碳酸氬鈉(200mL)萃取。堿層用二氯曱烷洗滌(20mL),然后用2M鹽酸酸化。酸層用二氯曱烷(2x200mL)萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到副標(biāo)題化合物(24.50g)，其為油;)犬物。m/e227[M-H]。c)iV-[2-(二乙基氨基)乙基l-iV-(2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>歷時(shí)45分鐘將草酰氯(9.50mL)滴加到3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酸(22.50g)(實(shí)施例lb)于二氯曱烷(120ml)和DMF(0.5mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物再攪拌16小時(shí)。隨后將混合物濃縮，再溶于DCM(1.7L)中，然后在0。C歷時(shí)1.75小時(shí)滴加到A^(2，2-二曱氧基乙基)-A^V-二乙胺-l，2-二胺(20.20g)(實(shí)施例16a)和異丙基二乙胺(34.43mL)于DCM(200mL)中的溶液中。將得到的混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(3xlL)、水(1.5L)洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到39.50g副標(biāo)題化合物。m/e415(M+H",83%)。d)7V-2-(二乙基氨基)乙基l-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基卜7V-(2-氧代乙基)丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>在0°C歷時(shí)30分鐘將A42-(二乙基氨基)乙基]-AH2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺(實(shí)施例lc)(20g)于DCM(500mL)中的溶液中用三氟乙酸(50mL)逐滴處理。加入后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，然后再攪?小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(1800mL，小心倒入)中。將含水混合物用DCM(3x400mL)萃取，合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物直接用于隨后的反應(yīng)。e)iV-2-(二乙基氨基)乙基-7V-(2-U2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l，3-苯并瘞哇-7-基)乙基絲}乙基)-3-l2-(3-氯苯基)乙緣丙酰胺二氫溴酸鹽將7-(2-氨基-乙基)-4-羥基-3H-苯并噻唑-2-酮鹽酸鹽(11.77g)于無水NMP(N-曱基吡啶(50mL)中的混懸液加熱至65°C，然后用NaOH(1.83g)于曱醇(23mL)中的溶液一次性處理。將明亮的橙色混懸液冷卻至室溫，然后歷時(shí)30分鐘用iV-卩-(二乙基氨基)乙基]-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]-叢(2-氧代乙基)丙酰胺(實(shí)施例ld)于二氯曱烷(50mL)中的溶液逐滴處理。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘。然后歷時(shí)20分鐘分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(20.33g),將混合物再攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水(1.8L)中，通過加入固體碳酸鉀堿化至pH8，然后用二氯甲烷(2x500mL)萃取；合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并濃縮，得到深色油狀物。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(用10。/。(0.1。/。aqNH3/MeOH)/DCM作為洗脫劑)，得到副標(biāo)題化合物，其為棕色油狀物。收率(6.58g)。將其溶于乙醇(150mL)中，然后加入48%氫溴酸水溶液(10mL)。將溶液老化30分鐘，然后蒸發(fā)至干。將殘余物用乙醇(100mL)研磨；經(jīng)過濾收集得到的固體，然后在50°C真空干燥。將該物質(zhì)從乙醇/水(6:1,500mL)重結(jié)晶;'靜置過夜后，經(jīng)過濾收集得到的固體，然后用水冷的乙醇(75mL)洗滌。在50°C真空干燥24小時(shí)，得到4.96g標(biāo)題化合物。MS:APCI(+ve):563(M+l)99.3%purity(T9505M)。1HNMR(DMSO,90oC),511.75-11.73(m,1H),10.08-10.06(d,1H)，8.65(bs,1H),7.33-7.19(m,4H),6.89-6.84(t,1H),6.77-6.74(m，1H),3.68-3.58(m，8H)，3.17-3.16(m，10H),2.86-2.80(m，4H),2.67-2.62(m，2H),1.23-1.19(t，6H).元素分析CHNSC:46.54%(46.39);H:5.75%(5,70);N:7.94%(7.73);S:4.46%(4.42)。B^腎上腺素受體激動(dòng)劑3:fBA3):7-『a/)-2-G2-K3"2"2-氯苯基)乙基1氨基！丙基)硫基l乙基)氨基)-l-羥基乙基卜4-羥基-l,3-苯并噻唑-2a^)-酮二氫溴酸鹽將2-氯苯曱醛(exAldrich)(10.0g)與硝基曱烷(26.05g)和乙酸銨(21.92g)在乙酸(200mL)中混合，然后將混合物回流加熱40分鐘。使混合物冷卻至室溫，真空除去大部分乙酸。殘余物溶于二氯曱烷中，先后用水、碳酸鉀溶液(x2)和水洗滌。有機(jī)物經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，得到期望的物質(zhì)，其為橙色油狀物(12.83g)。'H觀R5(CDC13)8.41(d,1H),7.62-7.57(m，2H),7.52-7.48(m,1H),7.43(dt，1H),7.34(ddd，1H)。b)2-(2-氯苯基)l^胺氫化鋁如下制備在0-10。C在氮?dú)鈿夥障聦⒘蛩?8.40mL)于無水THF(60mL)中的溶液滴加到攪拌的l.OM氬化鋁鋰于THF(314mL)中的溶液中。在5。C攪拌30分鐘后，滴加1-氯-2-[(￡)-2-硝基乙烯基]苯(12,83g)于無水THF(160mL)中的溶液中，同時(shí)維持內(nèi)部溫度在0°C和10°C之間。當(dāng)加入結(jié)束時(shí)將反應(yīng)混合物回流加熱5分鐘。使混合物冷卻至室溫，然后冷卻至0°C，小心滴加異丙醇(22mL),同時(shí)維持溫度低于20。C。小心滴加2M氫氧化鈉(35mL),同時(shí)維持溫度低于20°C。混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后經(jīng)過一層硅藻土過濾，然后將其用THF(x3)洗滌。濾液蒸發(fā)至干。殘余物使用硅膠柱色譜(使用乙酸乙酯負(fù)載物質(zhì)，然后先后用10%三乙胺/乙酸乙酯、10%三乙胺/45°/。乙醇45%乙酸乙酯作為洗脫劑)純化，得到期望的物質(zhì)(4.66g)。l-氯-2-(^)-2-硝基乙烯基苯'HNMRS(CDC13)7.36(dd,1H),7.25-7.13(m,3H),2.98(dt,2H):2.91-2.87(m,2H)c)[2-(2-氯苯基)乙基I氨基甲酸叔丁酯歷時(shí)10分鐘在環(huán)境溫度在氮?dú)鈿夥障孪驍嚢璧?-(2-氯苯基)乙胺(25.57g)和三乙胺(22.87mL)于水THF(300mL)中的溶液中加入一縮二碳酸二叔丁酯(35.85g)于無水THF(50mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，得到期望的物質(zhì)，其為黃色油狀物(42.0g)。'HNMR5(CDCL3)7.35(d，1H)，7.25-7.14(m,3H),4.57(s，1H)，3.43-3.35(m,2H),2.95(t,2H)，1.43(d,9H)。d)烯丙基[2-(2-氯苯基)乙基l氨基曱酸叔丁酯厄時(shí)15分鐘的一段時(shí)間在35°C在氮?dú)鈿夥障孪蛞呀?jīng)用乙醚洗滌(x3)懸液中加入[2-(2-氯苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(42,0g)于無水DMF(50mL)中的溶液。當(dāng)加入結(jié)束時(shí)，混合物在50。C攪拌90分鐘。使混合物冷卻至室溫，然后緩慢加入烯丙基溴(15.63mL)，使用外部冷卻保持溫度在25。C。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用水稀釋并用乙酸乙酯萃取(x3)。有機(jī)物合并，用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物使用硅膠柱色諳(用1%乙酸乙酉旨/異己烷負(fù)載，然后使用含有乙酸乙酯(0%、1%、2%、％5)的異己烷作為洗脫劑)純化，得到期望的物質(zhì)(27.0g)。存在幾種混合的級(jí)份，將這些級(jí)份合并，然后使用如上所述的硅膠柱色語再次純化，又得到4g期望的物質(zhì)。將兩次收集的產(chǎn)物合并，共得到31.0g。'HNMRS(CDC13)7.36-7.31(m,1H),7.21-7.12(m，3H)，5.83-5.68(m,1H)，5.17-5.05(m，2H)，3.86-3.66(m，2H)，3.41(t,2H)，3.03-2.90(m,2H)，1.43(s，9H)。HPLC:95.90%@220nm[M+H陽Boc]十=196.1(計(jì)算值=295.1339)(多模的氫式+)。e)[2-(2-氯苯基)乙基{3-[(2-幾基乙基)硫基丙基}氨基甲酸叔丁酯將烯丙基[2-(2-氯苯基)乙基]氨基曱酸叔丁酯(31.0g)與2-巰基乙醇(7.37mL)和AIBN(偶氮二異丁腈)(U5g)混合，然后在65。C攪拌45分鐘。將混合物冷卻，然后加入更多的巰基乙醇(lmL)和AIBN(200mg)。然后將混合物在65。C再加熱30分鐘。該物質(zhì)經(jīng)硅膠柱色鐠(將物質(zhì)負(fù)載在20%乙酸乙S旨/異己烷中，然后先后用20%乙酸乙酯/異己烷和50%乙酸乙酯/異己烷洗脫)純化，得到期望的物質(zhì)(31.94g)。'HNMRS(CDC13)7.38-7.32(m,1H),7.22-7.13(m,3H)，3.75-3.68(m,2H),3.41(t,2H)，3.32-3.14(m，2H),3.03-2.91(m,2H),2.72(t,2H),2.54-2.36(m，2H),1.85-1.71(m，2H),1.42(s，9H)。HPLC:92.3l%@220nm[M+H-Boc]+=274.1(計(jì)算值=373.1478)(多模式+)。&2-(2-氯苯基)乙碁l(3-(2-氧代乙基)疏基l丙基}^甲酸叔丁酯將三氧化硫:吡咬復(fù)合物(30.52g)溶于DMSO(200mL)中，然后在室溫在氮?dú)鈿夥障聰嚢?5分鐘。加入DCM(100mL),接著一次性加入[2-(2-氯苯基)乙基]{3-[(2-羥基乙基)硫基]丙基}氨基曱酸叔丁酯(23.9g)和許尼系堿(Hunigsbase)(63.5mL)于DCM(160mL)中的溶液(放熱)。將得到的混合物在環(huán)境溫度攪拌15分鐘。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，先后用水、INHC1和飽和碳酸氪鈉溶液洗滌，經(jīng)無水疏酸鎂干燥，過濾，真空除去溶劑。該物質(zhì)經(jīng)硅膠柱色語(用20%乙酸乙酯/異己烷洗脫)純化，得到期望的物質(zhì)(12.43g)。'HNMR5(CDC13)9-46(t,1H)，7.36-7.32(m，1H)，7.21漏7.13(m,3H)，3.40(t,2H)，3.29-3.13(m，4H)，3.02-2.90(m,2H),2.45-2.34(m,2H),1.82-1.69(m,2H)，1.49-1.36Cm,9H)。g)[2-(2-氯苯基)乙基{3-[(2-{[(2/)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫,3-苯并噻唑-7-基)乙基氨基}乙基)硫基I丙基}氨基曱酸叔丁酯將[2-(2-氯苯基)乙基]{3-[(2-氧代乙基)硫基]丙基}氨基曱酸叔丁酯(11.32g)溶于曱醇(200mL)和乙酸(1.74ml)的混合物中。將7-[(LR)-2-氨基-1-羥基乙基]-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2(3/7)-酮鹽酸鹽(8.0g)加到溶液中，然后在室溫在氮?dú)鈿夥障聦⒒旌衔飻嚢鑜小時(shí)。加入氰基硼氫化鈉(1.92g),然后將混合物再攪拌2小時(shí)。真空除去溶劑，殘余物用水稀釋，用0.880氨水堿化，用乙酸乙酯萃取(x3)(在萃取過程中通過硅藻土過濾)。合并有機(jī)物，用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，得到棕色殘余物(15.5g)。該物質(zhì)使用硅膠柱色譜(使用含有MeOH(2。/。、5%、10%、20°/。和30%)并且都含有1。/。0.880aqNH3的DCM作為洗脫劑)純化，得到期望的物質(zhì)(6.67g)(38%收率)。'HNMRS(DMSO)7.43-7.38(m,1H)，7.30-7.21(m,3H),6.86(d,1H),6.69(d,1H)，4.56(dd，1H),3,23-3.10(m,2H),2.88(t,2H),2.71-2.48(m,8H)，2.46-2.39(m，2H),1.72-1.62(m,2H),1.40-1.22(m,9H)。HPLC:97.46%@220nm[M+H]+=582.1(計(jì)算值=582.1863)(多模式+)。h)7-(1及)-2-({2-[(3-{2-(2-氯苯基)乙基氨基}丙基)硫基乙基}氨基)-1畫羥基乙基-4-羥基-l，3-苯并噻唑-2(3^)-酮二氫溴酸鹽在0°C向攪拌的Boc化合物(來自g)部分)(5.93g)于DCM(20mL)中的混懸液中加入三氟乙酸(20mL)，將得到的混合物在氮?dú)庀聰嚢?0分鐘?；旌衔镉脮醣较♂?，除去溶劑，然后與曱苯(x2)共沸。將殘余物溶于乙腈中，用48%aqHBr酸化，并真空濃縮(并非濃縮至干)?；旌衔镞M(jìn)一步用乙腈稀釋，經(jīng)過濾收集沉淀的固體，用乙腈洗滌并真空干燥，得到6.35g。存在3.8%的雜質(zhì)(e)部分的異構(gòu)體)，因此將該物質(zhì)再溶于1:1乙腈:水混合物中，然后使用制備性HPLC(Sunfire30x80mmC8柱；NH4OAc緩沖液;歷時(shí)10分鐘乙腈5-50%)純化。將得到的物質(zhì)在水提取器中在10毫巴在KOH和H2SO4上干燥過夜。將得到的二乙酸鹽溶于水中，然后用0.880氨水堿化。形成白色膠狀物，因此將水層傾析出，膠狀物真空干燥，得到游離堿(4.11g)。將其溶于熱乙醇中，對(duì)溶液進(jìn)行過濾，然后使其冷卻至室溫。將溶液用48%aq.HB酸化并靜置結(jié)晶。經(jīng)過濾收集白色固體，用乙醇洗滌并真空干燥，得到3.81g收集物l。'HNMR5(DMSO)11.67(s,1H)，10.15(s,1H),8.70(s,4H),7.50-7.30(m,4H),6.94(d，1H),6.78(d,1H),6.45(s，1H),4.96-4.90(m，1H)，3.22-3.02(m,10H)，2.86-2,76(m,2H),2.66(t,2H),1.91(五重峰，2H)。HPLC:99.63%@220nm[M+H]+=482(計(jì)算值=482.1339)(多模式+)元素分析CHNS計(jì)算值41,044.706.539.96觀測(cè)值1:41.074.696.679.722:41.084.686.749.673:40.964.686.759.67將母液蒸發(fā)至干，然后用乙腈研磨。經(jīng)過濾收集固體，得到719mg收集物2(共4.53g)。'HNMR5(DMSO)11.67(s，1H),10.15(s，1H)，8.80-8.60(m,4H),7.50-7.29(m,4H),6.94(d，1H),6.78(d，1H)，6.45(s,1H),4.96-4.89(m,1H),3.22-3.00(m,10H),2.85-2.76(m,2H)，2.66(t，2H),1.90(五重峰，2H)。HPLC:99.20%@220nm[M+H]+=482(計(jì)算值=482.1339)(多模式+)元素分析:CHNS計(jì)算值41.044.706.539.96觀測(cè)值1::40.904.696.789.602:41.014.706.839.603:40.974.696.769.63^腎上腺素受體激動(dòng)劑的生物活性腎上腺素能B2介導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生細(xì)胞制備將H292細(xì)胞在孵育器中的225cn^燒瓶中在37°C，5%<:02在RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基含有10%(v/v)FBS(胎牛血清)和2mML-谷氨酰胺。實(shí)驗(yàn)方法通過用AccutaseTM細(xì)胞脫離溶液處理15分鐘從組織培養(yǎng)瓶中除去粘附的H292細(xì)胞。將燒瓶在加濕孵育器中在37。C，5。/。C02孵育15分鐘。將脫離的細(xì)胞以0.05x1(^細(xì)胞/mL再懸浮于RPMI培養(yǎng)基(含有10%(v/v)FBS和2mML-谷氨酰胺)中。將100中的5000個(gè)細(xì)胞加到組織培養(yǎng)物處理的96孔板的每孔中，然后將細(xì)胞在加濕孵育器中在37。C,5%C02將育過夜。除去培養(yǎng)基，將細(xì)胞用100^iL測(cè)定緩沖液洗滌，并用50piL測(cè)定緩沖液(含有10mMHEPESpH7.4和5mM葡萄糖的HBSS溶液)代替。將細(xì)胞在室溫靜置20分鐘，之后加入25咯利普蘭(1.2mM，在含有2.4%(v/v)二甲基亞砜的測(cè)定緩沖液中制成)。將細(xì)胞用咯利普蘭孵育IO分鐘，之后加入化合物A,然后將細(xì)胞在室溫孵育60分鐘。測(cè)定中最終咯利普蘭的濃度為300pM且最終媒介物濃度為1.6。/。(v/v)二甲基亞砜。通過除去上清液停止反應(yīng)，用100iliL測(cè)定緩沖液洗滌一次并用50溶解緩沖液(lysisbuffer)代替。將細(xì)胞單層在-80。C冷凍30分鐘(或過夜)。AlphaScreencAMP檢測(cè)使用AlphaScreen方法學(xué)確定細(xì)胞溶解產(chǎn)物中cAMP(環(huán)磷腺苷)的濃度。將經(jīng)冷凍的細(xì)胞板在板搖動(dòng)器上解凍20分鐘，然后將10pL細(xì)胞溶解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到96孔白色板中。將40pL用生物素化的cAMP預(yù)孵育的混合AlphaScreen檢測(cè)珠加到每孔中，然后將板避光室溫孵育10小時(shí)。AlphaScreen信號(hào)使用EnVision分光光度計(jì)(Perkin-ElmerInc.)測(cè)量，使用推薦的制造商設(shè)置。cAMP濃度如下確定使用標(biāo)準(zhǔn)cAMP濃度參考在相同實(shí)驗(yàn)中確定的校準(zhǔn)曲線。構(gòu)建針對(duì)化合物A的濃度響應(yīng)曲線，將數(shù)據(jù)擬合成四參凄t凄t理邏輯方牙呈(fourparameterlogisticequation)以確定pECs。和固有活性。固有活性表達(dá)為相對(duì)于在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中針對(duì)福莫特羅確定的最大活性60的分?jǐn)?shù)。結(jié)果在表1中列出。選擇性測(cè)定腎上腺素能alD膜制備從表達(dá)重組人類alo受體的人胚腎293(HEK293)細(xì)胞制備膜。將這些膜在測(cè)定緩沖液(50mMHEPES,lmMEDTA,0.1%凝膠，pH7.4)中稀釋，從而提供在最大特異結(jié)合和最小特異結(jié)合之間得到清楚區(qū)域(clearwindow)的膜的最終濃度。實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定在U形底96孔聚丙烯板中進(jìn)行。將10卩H]-哌唑n秦(0.3nM最終濃度)和10化合物A(10x最終濃度)力。到每個(gè)測(cè)試孔中。針對(duì)每種測(cè)定板在10pL媒介物(10%(v/v)DMSO于測(cè)定緩沖液中的溶液；定義最大結(jié)合)或lOpLBMY7378(10pM最終濃度；定義非特異性結(jié)合(NSB))的存在下針對(duì)[3司-哌唑溱結(jié)合進(jìn)行一式八份。然后加入膜以達(dá)到最終體積為100iaL。將板在室溫孵育2小時(shí)，然后過濾到PEI涂覆的GF/B濾板上，在測(cè)定緩沖液中使用96孔板Tomtec細(xì)胞收集器預(yù)浸漬1小時(shí)。在4°C用250洗滌緩沖液(50mMHEPES,lmMEDTA，pH7.4)進(jìn)行五次洗滌以除去非結(jié)合放射性。將板干燥，然后使用Packard板密封器從底下密封，將MicroScint-O(50pL)加到每孔中。將板密封(TopSealA)，然后用閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount,PackardBioScience)使用3分鐘計(jì)數(shù)方案測(cè)量與濾器結(jié)合的放射性。通過從平均最大結(jié)合中減去平均NSB確定總特異性結(jié)合(B。)。也從來自其它孔的值中減去NSB值。這些數(shù)據(jù)表達(dá)為Bo的百分?jǐn)?shù)。使用通常在O.InM至lO(iM范圍的連續(xù)稀釋確定化合物濃度-效應(yīng)曲線(對(duì)[3司-哌唑溱結(jié)合的抑制)。將數(shù)據(jù)擬合成四參數(shù)數(shù)理邏輯方程以確定化合物效能，其表達(dá)為pIC50(引起對(duì)卩H]-哌唑。秦結(jié)合的50%抑制的摩爾濃度的負(fù)對(duì)數(shù))。結(jié)果顯示于下表l中。腎上腺素能B1膜制備含有重組人類腎上腺素能P1受體的膜獲自Euroscreen。將這些膜在測(cè)定緩沖液(50mMHEPES,lmMEDTA，120mMNaCl,0.1%凝膠，pH7.4)中稀釋，從而提供在最大特異結(jié)合和最小特異結(jié)合之間得到清楚區(qū)域的膜的最終濃度。實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定在U形底96孔聚丙烯板中進(jìn)行。將10^[1251]-碘氰叼|咪洛爾(Iodocyanopindolol)(0.036nM最終濃度)和10化合物A(10x最終濃度)加到每個(gè)測(cè)試孔中。針對(duì)每種測(cè)定板在10pL媒介物(10。/。(v/v)DMSO于測(cè)定緩沖液中的溶液；定義最大結(jié)合)或10pL普萘洛爾(10pM最終濃度；定義非特異性結(jié)合(NSB))的存在下針對(duì)[^I]-碘氰吲哚洛爾結(jié)合進(jìn)行一式八份。然后加入膜以達(dá)到最終體積為100^L。將板在室溫孵育2小時(shí)，然后過濾到PEI涂覆的GF/B濾板上，在測(cè)定緩沖液中使用96孔板Tomtec細(xì)胞收集器預(yù)浸漬1小時(shí)。在4°C用250nL洗滌緩沖液(50mMHEPES，lmMEDTA，120mMNaCl，pH7.4)進(jìn)行五次洗滌以除去非結(jié)合放射性。將板干燥，然后使用Packard板密封器從底下密封，將MicroScint-0(50(iL)加到每孔中。將板密封(TopSealA)，然后用閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount,PackardBioScience)使用3分鐘計(jì)數(shù)方案測(cè)量與濾器結(jié)合的放射性。通過從平均最大結(jié)合中減去平均NSB確定總特異性結(jié)合(Bo)。也從來自其它孔的值中減去NSB值。這些數(shù)據(jù)表達(dá)為Bo的百分?jǐn)?shù)。使用通常在0.1nM至10pM范圍的連續(xù)稀釋確定化合物濃度-效應(yīng)曲線(對(duì)[^I]-碘氰p引哚洛爾結(jié)合的抑制)。將數(shù)據(jù)擬合成四參數(shù)數(shù)理邏輯方程以確定化合物效能，其表達(dá)為pIC50(引起對(duì)[1251]-碘氰吲哚洛爾結(jié)合的50%抑制的摩爾濃度的負(fù)對(duì)數(shù))。結(jié)果顯示于下表1中。多巴胺D2膜制備含有重組人類多巴胺亞型D2受體的膜獲自PerkinElmer。將這些膜在測(cè)定緩沖液(50mMHEPES,lmMEDTA,120mMNaCl，0.1%凝膠，pH7.4)中稀釋，從而提供在最大特異結(jié)合和最小特異結(jié)合之間得到清楚區(qū)域的膜的最終濃度。實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定在U形底96孔聚丙烯板中進(jìn)行。將30^L^H]-螺派隆(0.16nM最終濃度)和30pL化合物A(10x最終濃度)加到每個(gè)測(cè)試孔中。針對(duì)每種測(cè)定板在30jiL媒介物(10%(v/v)DMSO于測(cè)定緩沖液中的溶液；定義最大結(jié)合)或30|iL氟哌啶醇(IOpM最終濃度；定義非特異性結(jié)合(NSB))的存在下針對(duì)[3H]-螺派隆結(jié)合進(jìn)行一式八份。然后加入膜以達(dá)到最終體積為300pL。將板在室溫孵育2小時(shí)，然后過濾到PEI涂覆的GF/B濾板上，在測(cè)定緩沖液中使用96孔板Tomtec細(xì)胞收集器預(yù)浸漬1小時(shí)。在4。C用250洗滌緩沖液(50mMHEPES，lmMEDTA，120mMNaCl，pH7.4)進(jìn)行五次洗滌以除去非結(jié)合放射性。將板干燥，然后使用Packard板密封器從底下密封，將MicroScint-O(50(iL)力a到每孔中。將板密封(TopSealA)，然后用閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount,PackardBioScience)使用3分鐘計(jì)數(shù)方案測(cè)量與濾器結(jié)合的放射性。通過從平均最大結(jié)合中減去平均NSB確定總特異性結(jié)合(Bo)。也從來自其它孔的值中減去NSB值。這些數(shù)據(jù)表達(dá)為Bo的百分?jǐn)?shù)。使用通常在0.1nM至10pM范圍的連續(xù)稀釋確定化合物濃度-效應(yīng)曲線(對(duì)[3司-螺派隆結(jié)合的抑制)。將數(shù)據(jù)擬合成四參數(shù)數(shù)理邏輯方程以確定化合物效能，其表達(dá)為pIC50(引起對(duì)fH]-螺派隆結(jié)合的50%抑制的摩爾濃度的負(fù)對(duì)數(shù))。結(jié)果顯示于下表l中。化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>體外組合數(shù)據(jù)對(duì)化合物對(duì)來自用乙酰甲膽堿預(yù)收縮的豚鼠的離體氣管環(huán)的活性的評(píng)處加入P2腎上腺素受體激動(dòng)劑和/或毒蕈堿M3受體拮抗劑引起用毒蕈堿激動(dòng)劑乙酰曱膽堿預(yù)收縮的豚鼠的離體氣管環(huán)的舒張。通過頸脫位法除氣管。除去粘附的結(jié)^組織，然后將氣管切成環(huán)片i(2-3mm寬)。、;這些片段懸浮于lOmL器官浴槽中，該浴槽中含有改良的克雷布斯液(modifiedKrebs，solution),組成為(mM):NaCl117.56、KCI5.36、NaH2P041.15、MgS041.18、葡萄糖11.10、NaHC0325.00和CaCl22.55。將其維持在37°C，然后用5。/。C02/02不斷通氣。將吲哚美辛(2.8pM)、皮質(zhì)酮(10pM)、抗壞血酸(lmM)、CGP20712A(1(iM)和酚妥拉明(3pM)加到克雷布斯液中叼l咪美辛用于阻止由于環(huán)氧合酶產(chǎn)物合成導(dǎo)致的平滑肌緊張的發(fā)展，皮質(zhì)酮用于抑制攝取2過程(uptake2process),抗壞血酸用于阻止兒茶酚胺氧化，CGP20712A和酚妥拉明分別用于避免卩l(xiāng)-和a-腎上腺素受體活化的任何合并作用。將氣管環(huán)懸掛在兩個(gè)不銹鋼鉤(stainlesssteelhook)之間，一個(gè)鉤與等長(zhǎng)力傳感器連接，另一個(gè)鉤與氣管浴槽中的固定支撐物連接。記錄等長(zhǎng)力的變化。乙?；?(3-甲基氯化膽堿(乙酰曱膽堿)、吲咮美辛、皮質(zhì)酮-21-乙酸酯、酚妥拉明鹽酸鹽、抗壞血酸、CGP20712A曱磺酸酯獲自SigmaChemicalCompany。將吲咪美辛溶于10%w/vNa2C03中，皮質(zhì)酮21-乙酸酯溶于乙醇中，其它化合物溶于DMSO中。將毒蕈堿性受體拮抗劑(MA2)、(MA11)和福莫特羅稀釋在克雷布斯液中，然后加到組織中，浴槽中DMSO的水平<0.1%。毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2):溴化f2-(m)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基V噁唑-5-基曱基l-二甲基-(l-苯氧基-丙基)-銨和福莫特羅在每個(gè)實(shí)驗(yàn)的開始，將1.0g重量的力施加到組織上，然后歷時(shí)30分鐘的平衡時(shí)間使其復(fù)原，直到其保持穩(wěn)定。然后將組織暴露于l幽毒蕈堿激動(dòng)劑乙酰曱膽堿中，以評(píng)價(jià)組織生存力。通過交換浴槽的克雷布斯液三次來洗滌組織。30分鐘后，將組織再次用l(xM乙酰甲膽堿預(yù)收縮。當(dāng)收縮達(dá)到平臺(tái)時(shí)，將lnM福莫特羅、10nM毒蕈堿性受體拮抗劑(MA2)(結(jié)晶形式A)或兩者的組合加到浴槽培養(yǎng)基中，然后靜置60分鐘。使用用于Windows軟件的ADInstrumentsChart5收集數(shù)據(jù)，在加入乙酰曱膽堿前及其響應(yīng)到達(dá)平臺(tái)后測(cè)量所產(chǎn)生的張力。對(duì)化合物MA2和/或福莫特羅的響應(yīng)在它們加入后以10分鐘間隔測(cè)量。所有響應(yīng)都表達(dá)為對(duì)乙酰甲膽堿誘發(fā)的收縮的抑制百分?jǐn)?shù)。結(jié)果描述于圖6和2中，其中化合物A為(MA2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>表2.福莫特羅(lnM)、化合物A(10nM)和化合物A(10nM)(在福莫特羅(lnM)存在下)在體外豚鼠氣管中對(duì)l|aM乙酰曱膽堿誘發(fā)的緊張的％抑制毒蕈堿性受體拮抗劑1UMA11):半-萘-1,5-二磺酸「2-(4-氯-芐基氧基)-乙基l-「2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基V。惡唑-5-基曱基l-二曱基-銨和福莫特罝在每個(gè)實(shí)驗(yàn)的開始，將1.0g重量的力施加到組織上，然后歷時(shí)30分鐘的平衡時(shí)間使其復(fù)原，直到其保持穩(wěn)定。然后將組織暴露于lpM毒蕈堿激動(dòng)劑乙酰曱膽堿中，以評(píng)價(jià)組織生存力。通過交換浴槽的克雷布斯液三次來洗滌組織。30分鐘后，將組織再次用l|iM乙酰曱膽堿預(yù)收縮。當(dāng)收縮達(dá)到平臺(tái)時(shí)，將lnM福莫特羅、10nM毒蕈堿性受體拮抗劑MA11或兩者的組合加到浴槽培養(yǎng)基中，然后靜置60分鐘。使用用于Windows軟件的ADInstrumentsChart5收集數(shù)據(jù)，在加入乙酰曱膽堿前及其響應(yīng)到達(dá)平臺(tái)后測(cè)量所產(chǎn)生的張力。對(duì)化合物(MA11)和/或福莫特羅的響應(yīng)在它們加入后以IO分鐘間隔測(cè)量。所有響應(yīng)都表達(dá)為對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的收縮的抑制百分?jǐn)?shù)。結(jié)果描述于圖7和3中，其中化合物B為(MAll)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>表3.福莫特羅(lnM)、化合物B(10nM)和化合物B(10nM)(在福莫特羅(lnM)存在下)在體外豚鼠氣管中對(duì)lpM乙酰曱膽堿誘發(fā)的緊張的％抑制體內(nèi)組合數(shù)據(jù)經(jīng)麻醉的豚鼠中肺功能的評(píng)價(jià)對(duì)雄性Dunkin-Hartley豚鼠(300-600g)進(jìn)行稱重并在可恢復(fù)的氣體(5。/0氟烷/氧氣)麻醉下經(jīng)由氣管內(nèi)途徑給藥媒介物(0.05M磷酸鹽，0.1%吐溫80,0.6。/。生理鹽水，pH6)或化合物。在給藥乙酰曱膽堿兩小時(shí)前將動(dòng)物給藥化合物或媒介物。在第一次給藥支氣管收縮劑約30分鐘前將豚鼠用戊巴比妥麻醉(1mL/kg60mg/mL溶液，腹膜內(nèi)注射)。將氣管進(jìn)行插管，使用恒定體積呼吸泵(HarvardRodentVentilator型號(hào)683)以60呼吸/min的速率和5ml/kg的潮氣量對(duì)動(dòng)物進(jìn)行通風(fēng)換氣。進(jìn)行頸靜脈插管用于給藥乙酰曱膽堿或維持麻醉(O.lmL戊巴比妥溶液，60mg/mL,^見需要)。將動(dòng)物轉(zhuǎn)移至Flexivent系統(tǒng)(SCIREQ,Montreal,Canada)中以便測(cè)量氣道阻力。以60呼吸/min的速率和5ml/kg的潮氣量對(duì)動(dòng)物進(jìn)行通風(fēng)換氣(半正弦曲線通氣型式)。應(yīng)用2-3cmH20的呼吸末正壓(positiveendexpiratorypressure)。使用Flexivent"快照，，裝置(持續(xù)1秒，1Hz頻率)測(cè)量氣道阻力。一旦獲得穩(wěn)定的基線阻力值，以上升的劑量(0.5、1、2、3和5嗎/kg，靜脈注射)以約4分鐘間隔通過頸靜脈導(dǎo)管將動(dòng)物給藥乙酰曱膽堿。每次給藥支氣管收縮劑后記錄峰阻力值。在完成肺功能測(cè)量后通過靜脈注射約l.OmL戊巴比妥鈉(Euthatal)對(duì)豚鼠施行安樂死。在每次給藥支氣管收縮劑時(shí)由化合物產(chǎn)生的支氣管保護(hù)百分?jǐn)?shù)如下計(jì)算0/o變化R媒介扭一0/o變化R化會(huì)浙%支氣管保護(hù)=-%變4匕R媒介浙其中。/。變化Rveh為媒介物處理組中氣道阻力的最大變化百分?jǐn)?shù)的均值。所報(bào)道的結(jié)果在給藥5嗎/kg乙酰曱膽堿之后測(cè)量，并表達(dá)為支氣管保護(hù)百分?jǐn)?shù)(均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差)。(^腎上腺素受體激動(dòng)劑1:(BAl):JV-「2-(二乙基氨基)乙基l-JV-(2-n2-(4-羥基-2-氣代-2,3-二氫-U-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基1乙基V3-r2-(萘-l-基)乙氣基l丙酰胺二氫溴酸鹽和毒蕈堿性受體拮抗劑2(MA2)溴化「2-(OQ-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基l-二曱基-(3-苯氧基-丙基V銨經(jīng)由氣管內(nèi)途徑將豚鼠給藥媒介物、1和27pg/kg化合物(BA1)，0.2(ig/kg化合物(MA2)(結(jié)晶形式A)或3pg/kg化合物(BA1)和0.2pg/kg化合物(MA2)的組合。給藥增加的靜脈內(nèi)劑量的乙酰曱膽堿(0.5、1、2、3和5嗎/kg)在媒介物處理的動(dòng)物中誘發(fā)了劑量相關(guān)的支氣管收縮，收縮程度為給藥媒介物兩小時(shí)后13±2.6%/0.5嗎/kg至2530士2800/。/5pg/kg(n=9)。將化合物(MA2)以0.2嗎/kg進(jìn)行氣管內(nèi)給藥產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的13%抑制(阻力增加2210±268%，n=8)。在給藥乙酰甲膽石成2小時(shí)前對(duì)化合物(BA1)(3和27i!g/kg)進(jìn)行氣管內(nèi)給藥產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的17和81%抑制(阻力分別增加2090±239和470±221%;n分別為8和6)?；衔?MA2)(0.2嗎/kg)和化合物(BAl)(3(ig/kg)的組合產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的55%抑制(阻力增加1140±151%;n=8)(參見圖8-其中化合物A為(BA1),化合物Z為(MA2))。B，腎上腺素受體激動(dòng)劑1:(BA1):7V-『2-(二乙基氨基)乙基l-A^24^2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-U-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基V3-「2-(萘-l-基)乙氧基l丙酰胺二氫溴酸鹽和毒蕈堿性受體拮抗劑1UMA11):半-萘-l,5-二磺酸r2-〖4-氯-芐基氧基〗-乙基l-「2-(TR)-環(huán)己基-羥基-苯基-曱基V噁唑-5-基曱基l-二曱基-銨經(jīng)由氣管內(nèi)途徑將豚鼠給藥媒介物、1和27jng/kg化合物(BA1),0.2pg/kg化合物(MA11)或lpg/kg化合物(BA1)和0.01嗎/kg化合物(MA11)的組合。給藥增加的靜脈內(nèi)劑量的乙酰曱膽堿(0.5、1、2、3和5pg/kg)在媒介物處理的動(dòng)物中誘發(fā)了劑量相關(guān)的支氣管收縮，收縮程度為給藥媒介物兩小時(shí)后14±2.6%/0.5嗎/kg至2240±269%/5pg/kg(n=10)。將化合物(MAll)以0.2iig/kg進(jìn)行氣管內(nèi)給藥產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的16%抑制(阻力增加1880±272%，n=6)。在給藥乙酰曱膽堿2小時(shí)前對(duì)化合物(BA1)(1和27昭/kg)進(jìn)行氣管內(nèi)給藥產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的38和89%抑制(阻力分別增力口1380±333和242±69%;n分別為8和6)?；衔?MAll)(0.2pg/kg)和化合物(BAl)(3嗎/kg)的組合產(chǎn)生了對(duì)乙酰曱膽堿誘發(fā)的支氣管收縮的43%抑制(阻力增加1273±260%;n=7)(參見圖9-其中化合物A為(BA1),化合物Y為(MAll))。權(quán)利要求1.一種藥物產(chǎn)品，其包含第一活性成分和第二活性成分的組合，其中所述第一活性成分為選自以下的毒蕈堿性受體拮抗劑[2-((S)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-銨鹽，[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(2-苯乙基氧基-乙基)-銨鹽，[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二甲基-銨鹽，[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-[2-(3，4-二氯-芐基氧基)-乙基]-二甲基-銨鹽，以及[2-(4-氯-芐基氧基)-乙基]-[2-((R)-環(huán)己基-羥基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-銨鹽；所述第二活性成分為β2腎上腺素受體激動(dòng)劑。2.權(quán)利要求1的產(chǎn)品，其中所述第一活性成分為毒蕈堿性受體拮抗劑，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴鹽或1，5-萘二磺酸鹽。3.權(quán)利要求1的產(chǎn)品，其中所述第一活性成分為毒蕈堿性受體拮抗劑，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為溴鹽。4.權(quán)利要求1的產(chǎn)品，其中所述第一活性成分為毒蕈堿性受體拮抗劑，所述毒蕈堿性受體拮抗劑為1,5-萘二磺酸鹽。5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的產(chǎn)品，其中所述P2腎上腺素受體激動(dòng)劑為福莫特羅。6.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的產(chǎn)品，其中所述(32腎上腺素受體激動(dòng)劑選自以下化合物或其藥用鹽A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺，A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羥基-2-氧代-2,3-二氫-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺，以及7-[(1/)-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羥基乙基]-4-羥基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-酮。7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的產(chǎn)品在制備用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的用途。8.權(quán)利要求7的用途，其中所述呼吸系統(tǒng)疾病為慢性阻塞性肺病。9.治療呼吸系統(tǒng)疾病的方法，包括對(duì)有此需要的患者同時(shí)、依次或分并給予(a)(治療有效)劑量的第一活性成分，其是如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)定義的毒蕈堿性受體拮抗劑；和(b)(治療有效)劑量的第二活性成分，其是P2腎上腺素受體激動(dòng)劑。10.—種試劑盒，其包含第一活性成分的制劑和第二活性成分的制劑和任選的說明書，所述第一活性成分是如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)定義的毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分是{32腎上腺素受體激動(dòng)劑，所述說明書指導(dǎo)對(duì)有所述需要的患者同時(shí)、依次或分開給予所述制劑。11.一種藥物組合物，其包含呈混合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)定義的毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分是(32腎上腺素受體激動(dòng)劑。全文摘要本發(fā)明提供了包含第一活性成分和第二活性成分的藥物產(chǎn)品、試劑盒或組合物在治療呼吸系統(tǒng)疾病如慢性阻塞性肺病和哮喘中的用途，所述第一活性成分為選擇性毒蕈堿性受體拮抗劑，第二活性成分為β₂腎上腺素受體激動(dòng)劑。文檔編號(hào)A61K31/167GK101678005SQ200880010661公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年2月6日優(yōu)先權(quán)日2007年2月7日發(fā)明者凱瑟琳·威利,哈里·芬奇,約翰·狄克遜申請(qǐng)人:阿金塔探索有限公司;阿斯利康(瑞典)有限公司