專利名稱：：鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法及其疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及疫苗
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法及其疫苗。
背景技術(shù)：
：鱘魚(yú)為軟骨硬鱗魚(yú)，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，有"黑色黃金"之稱。隨著其野生資源的減少，人工增養(yǎng)殖相繼出現(xiàn)，與之相關(guān)的商品規(guī)?；B(yǎng)殖相繼開(kāi)展。由于鱘魚(yú)骨板堅(jiān)硬，鰓部分裸露，在人工環(huán)境下進(jìn)行高密度養(yǎng)殖，相互磨傷而容易受到感染，病害也逐漸增加，但有關(guān)其病害病原的分離、鑒定以及防治的研究資料極少。因此，疾病防治的研究是當(dāng)務(wù)之急，這是保證鱘魚(yú)養(yǎng)殖持續(xù)、穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵之一。鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病的發(fā)生目前已成為鱘魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的瓶頸，鱘魚(yú)的細(xì)菌性疾病主要有細(xì)菌性腸炎、細(xì)菌性敗血癥和細(xì)菌性出血病(腫嘴病)，病原主要是氣單胞菌，具有極強(qiáng)的傳染性，患病鱘魚(yú)死亡率高，給生產(chǎn)造成了很大的損失。在鱘魚(yú)疾病防治時(shí)多采用藥物防治，但藥物防治容易污染水質(zhì)，造成藥物殘留現(xiàn)象，藥量過(guò)大還會(huì)對(duì)鱘魚(yú)的生長(zhǎng)產(chǎn)生負(fù)面影響。此外，大多數(shù)藥物的長(zhǎng)期使用還造成了病原性細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，最終給疾病的防治造成了困難。近年來(lái)，免疫防治在水產(chǎn)病害防治中的應(yīng)用已日益廣泛。利用疫苗等，活化或加強(qiáng)動(dòng)物自身的特異性免疫和非特異性免疫功能，提高抗病能力，被公認(rèn)為是目前防治病害最為有效的方法之一。國(guó)內(nèi)外已應(yīng)用的漁用疫苗有20余種。水產(chǎn)病害的疫苗防治是今后的發(fā)展方向，疫苗防治既可克服治療困難影響療效的弊病，又可避免藥物殘留現(xiàn)象。目前關(guān)于鱘魚(yú)細(xì)菌病的疫苗防治尚未見(jiàn)報(bào)道，我國(guó)對(duì)鱘魚(yú)病的預(yù)防治療主要還是依靠藥物手段，因此開(kāi)發(fā)病原菌疫苗將是鱘魚(yú)細(xì)菌病有效的防治方法之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題提供了一種鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法。為此，本發(fā)明公開(kāi)了一種鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法，包括下列步驟a)培養(yǎng)和收集以嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)為出發(fā)菌株，擴(kuò)大培養(yǎng)，收集；b)滅活福爾馬林對(duì)嗜水氣單胞菌菌株滅活，獲得滅活疫苗；c)無(wú)活菌檢驗(yàn)將步驟b制備的滅活疫苗進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果為無(wú)菌生長(zhǎng)，即可判定滅活菌液合格；d)安全性檢測(cè)將步驟C判定合格的滅活疫苗接種于鱘魚(yú)，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，飼養(yǎng)觀察15d，如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組魚(yú)患細(xì)菌性敗血征，而對(duì)照組魚(yú)為陰性，則該批滅活疫苗為不合格產(chǎn)品，反之則該批滅活疫苗合格；e)效力檢驗(yàn)將步驟d判定合格的滅活疫苗接種于鱘魚(yú)，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，飼養(yǎng)30d，在用嗜水氣單胞菌活菌液接種攻毒，飼養(yǎng)觀察15d，記錄各組的死亡魚(yú)數(shù)，計(jì)算免疫保護(hù)率，免疫保護(hù)率在65%以上的滅活疫苗為合格品；f)分裝與保存；g)留樣待檢。在一些實(shí)施方式里，所述嗜水氣單胞菌菌株可為XI(登錄號(hào)EU669667)或嗜水氣單胞菌ATCC35654(登錄號(hào)X74676.1)。在一些實(shí)施方式里，所述滅活步驟中，福爾馬林的重量百分比濃度為0.1%0.8%，處理?xiàng)l件為4°C3°C，312h;其中優(yōu)選O.1%福爾馬林，3°C，3h。在一些實(shí)施方式里，所述無(wú)活菌檢驗(yàn)為在無(wú)菌條件下，取10ml滅活疫苗，用生理鹽水將待檢疫苗稀釋10倍，吸取0.2ml分別接種到肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基、厭氣肉肝湯培養(yǎng)基上各一管，在3t:條件下培養(yǎng)48h，均應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如有菌體生長(zhǎng)，則為滅活不徹底，為不合格產(chǎn)品；在一些實(shí)施方式里，所述安全性檢測(cè)步驟中，滅活疫苗接種量5.OX108CFU;在一些實(shí)施方式里，所述效力檢驗(yàn)中，滅活疫苗接種量3.0X1()8CFU，活菌液接種量3.0X108CFU;在一些實(shí)施方式里，所述保存條件為4t:環(huán)境下冷藏備用，有效期為90d。在一些實(shí)施方式里，本發(fā)明所述鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病可為鱘魚(yú)細(xì)菌性腸炎、鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血癥或鱘魚(yú)細(xì)菌性出血病，最優(yōu)為鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血癥。另一方面，本發(fā)明還公開(kāi)了上面任一項(xiàng)所述制備方法所制備的鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病全菌滅活疫苗。本發(fā)明首次公開(kāi)了鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病全菌滅活疫苗的制備方法，所制得疫苗安全有效，為鱘魚(yú)細(xì)菌性病害的有效防治提供可靠的基礎(chǔ)。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。比例和百分比基于重量，除非特別說(shuō)明。實(shí)施例1:1.致病菌的分離與鑒定1.1致病菌的分離選取具有典型自然發(fā)病癥狀的瀕死西伯利亞鱘，用75%的酒精棉反復(fù)擦拭病魚(yú)體表后，無(wú)菌操作取病魚(yú)的肝、腎等病灶組織以及少量腹水，分別于胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)培養(yǎng)基平板上劃線分離，于2『C下培養(yǎng)24h后，挑取優(yōu)勢(shì)單菌落劃線純化，并接種于TSA培養(yǎng)基斜面上，于4t:冰箱保存。1.2致病菌的人工回歸感染試驗(yàn)用無(wú)菌生理鹽水分別刮下斜面保藏的各分離菌株的菌苔，并將其菌懸液濃度稀釋為2.2Xl(fcfu/mL，然后分別對(duì)健康的西伯利亞鱘進(jìn)行胸鰭基部注射感染，每尾注射劑量為0.2mL。以注射等量無(wú)菌生理鹽水的健康西伯利亞鱘作為對(duì)照。每注射組實(shí)驗(yàn)魚(yú)各8尾，水溫為19°C22°C。連續(xù)7d觀察并記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的病癥及死亡數(shù)目，同時(shí)對(duì)人工回歸感染發(fā)病瀕死的實(shí)驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行病原菌再分離，觀察再分離的菌株與原分離菌株在形態(tài)與理化特性等方面是否一致。1.3致病菌株毒力測(cè)定將分離的致病菌株菌懸液分別稀釋成2.2X104cfu/mL、2.2X105cfu/mL、2.2X106cfu/mL、2.2X107cfu/mL，然后分別對(duì)健康的西伯利亞鱘進(jìn)行胸鰭基部注射感染，每尾注射劑量為0.2mL。以注射等量無(wú)菌生理鹽水的健康的西伯利亞鱘作為對(duì)照。每注射組實(shí)驗(yàn)魚(yú)各8尾，水溫為19°C22°C。連續(xù)7d觀察并記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡數(shù)目，并用概率單位圖解法計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC5。)。1.4病原菌的鑒定方法將分離的致病菌株接種在兔血瓊脂平板上，于2『C下培養(yǎng)24h，觀察有無(wú)溶血圈產(chǎn)生；同時(shí)將新鮮培養(yǎng)的致病菌株進(jìn)行革蘭氏染色，并用透射電鏡對(duì)其形態(tài)進(jìn)行觀察。此外，用ATB細(xì)菌鑒定儀對(duì)分離的致病菌株進(jìn)行生理生化鑒定，并測(cè)定其16SrDNA序列，在NCBI中利用BLASTN軟件與GenBank+EMBL+DDBJ+PDB基因庫(kù)中已知的16SrDNA序列進(jìn)行同源性比較，選取同源性較高的序列并利用BioEdit7.0和Mega4.0軟件進(jìn)行多重比較后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。2.致病菌的分離與結(jié)果2.1致病菌的分離從自然發(fā)病的西伯利亞鱘體內(nèi)分離到4株優(yōu)勢(shì)菌株，分別暫命名為XI、X2、X3、X4，經(jīng)過(guò)人工回歸感染試驗(yàn)，僅菌株XI對(duì)西伯利亞鱘具有致病性，人工注射感染西伯利亞鱘后7天，西伯利亞鱘的死亡率高達(dá)100%(表l)，實(shí)驗(yàn)病魚(yú)也表現(xiàn)出肛門(mén)紅腫，腹部充滿血水，腸道充血、出血等病癥，而且從人工回歸感染瀕死的病魚(yú)體內(nèi)又可分離到與菌株X1形態(tài)特征及理化特性一致的菌株。根據(jù)建立的實(shí)驗(yàn)魚(yú)死亡率(％)與菌液濃度對(duì)數(shù)(log(rfu/mU)的關(guān)系曲線y=36.25x-158.58，菌株X1對(duì)西伯利亞鱘的半數(shù)致死濃度(LC5。)為5.62X105cfu/mL，根據(jù)Devesa對(duì)魚(yú)類致病菌毒力的劃分標(biāo)準(zhǔn)，可判定菌株XI對(duì)西伯利亞鱘具有較強(qiáng)的毒力。表1人工回歸感染結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2.2病原菌的鑒定結(jié)果菌株X1為革蘭氏陰性桿菌，大小約為1.0iim1.2iimX2.1iim2.4iim，周生側(cè)鞭毛，在兔血瓊脂平板上可產(chǎn)生明顯的P-溶血圈。ATB細(xì)菌鑒定儀對(duì)菌株X1的生理生化鑒定結(jié)果表明(表2)，菌株X1為嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)，鑒定結(jié)果的可信度為99%。通過(guò)NCBI網(wǎng)站搜索與菌株X1的16SrDNA序列同源性高的各種菌的16SrDNA序列，結(jié)果表明(表3)，菌株X1的16SrDNA序列與GenBank基因庫(kù)中細(xì)菌菌株的同源性比較最為接近的菌株均為氣單胞菌屬(Aeromonas)，構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果進(jìn)一步表明，菌株X1(登錄號(hào)EU669667)與嗜水氣單胞菌ATCC35654(登錄號(hào)X74676.1)的親緣關(guān)系最近，其同源性為99%。綜合形態(tài)與生理生化特性鑒定以及16SrDNA序列分析結(jié)果，菌株X1可鑒定為嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)。表2ATB細(xì)菌鑒定儀對(duì)菌株XI的鑒定結(jié)果測(cè)定項(xiàng)目結(jié)果測(cè)定項(xiàng)目結(jié)果測(cè)定項(xiàng)目結(jié)果氧化酶OX+檸檬酸鹽CIT一蔗糖SAC+D-葡萄糖+組氨酸HIS+麥芽糖MAL+水楊素SAL+2-酮葡萄糖酸鹽2KG—衣康酸ITA一D-蜜二糖—3-羥基-丁酸鹽30BU_辛二酸鹽—L-巖藻糖一5-酮基-葡萄糖酸鹽_丙二酸鹽—D-山梨醇一3-羥基-苯甲酸鹽—乙酸鹽ACE一L-阿拉伯糖+鼠李糖RHA+DL-乳酸鹽+丙酸鹽PROP_N-乙酰葡萄糖胺+L-丙氨酸+癸酸鹽CAP—L-脯氨酸PRO+糖原GLYG+戊酸鹽+肌醇INO—甘露醇MAN+L-絲氨酸SER+注"+"表示陽(yáng)性，"_"表示陰性Note:"+，，denotespositivity，"_，，denotesnegativity表3菌株XI的16SrDNA序列同基因庫(kù)中細(xì)菌菌株同源性的比較6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例2:致病菌株全菌滅活疫苗制備——滅活條件的研究不同濃度福爾馬林在不同溫度下對(duì)菌株X1的滅活效果結(jié)果表明(表4)，在4。C和3(TC條件下，0.1%福爾馬林在3h即可滅活菌株XI的菌細(xì)胞。表4不同濃度福爾馬林在不同溫度下對(duì)菌株XI的滅活效果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注"_"表示無(wú)菌生長(zhǎng)；"+"表示有菌生長(zhǎng)，下同實(shí)施例3:無(wú)活菌檢驗(yàn)在無(wú)菌條件下，取10ml滅活后的疫苗，用生理鹽水將待檢疫苗稀釋IO倍，吸取0.2ml分別接種到肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基、厭氣肉肝湯培養(yǎng)基上各一管，在37t:條件下培養(yǎng)48h，均應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如有菌體生長(zhǎng)，則為滅活不徹底，為不合格產(chǎn)品。實(shí)施例4:安全性檢測(cè)4.1試驗(yàn)容器4.1.1選用容積為(12)m3的水泥池或水簇箱等容器。容器需配有控溫和通氣增氧裝置。4.1.2容器在使用前用萬(wàn)分之一的漂白粉水溶液消毒24h，消毒后用自來(lái)水沖洗干凈，并放入適量經(jīng)活性碳處理的自來(lái)水曝氣24h后待用。4.2試驗(yàn)魚(yú)種選用體重為100g左右，體質(zhì)健壯，游動(dòng)活潑，無(wú)任何損傷和疾病的鱘魚(yú)，在試驗(yàn)前用2%的食鹽水浸浴(510)min，將魚(yú)種放入符合5.l條規(guī)定的容器中，于(2830)t:水溫下飼養(yǎng)，觀察15d，所有魚(yú)均應(yīng)活動(dòng)正常。如發(fā)現(xiàn)有魚(yú)種出現(xiàn)有細(xì)菌性敗血征癥狀，則該批魚(yú)種不得使用。4.3安全性試驗(yàn)取符合5.2條規(guī)定的鱘魚(yú)60尾，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各30尾魚(yú)。將疫苗用無(wú)菌注射器對(duì)實(shí)驗(yàn)組魚(yú)種作胸腔注射，注射劑量為0.5ml/尾(疫苗濃度1.OX109CFU/ml)。對(duì)照組注射等量生理鹽水。將魚(yú)種在(2528)t:水體中飼養(yǎng)，觀察15d，如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組魚(yú)患細(xì)菌性敗血征，而對(duì)照組魚(yú)為陰性，則該批疫苗為不合格產(chǎn)品。實(shí)施例5:效力檢驗(yàn)5.1魚(yú)種免疫5.1.1按5.1條規(guī)定準(zhǔn)備試驗(yàn)容器，按4.2條規(guī)定選擇試驗(yàn)魚(yú)種。5.1.2將符合安全試驗(yàn)的待檢樣品用無(wú)菌生理鹽水稀釋成含菌量為1.OX109CFU/ml，用無(wú)菌注射器對(duì)魚(yú)種進(jìn)行免疫注射，每尾腹腔注射劑量為0.3ml，試驗(yàn)魚(yú)種不少于30尾。第三天再用同劑量疫苗強(qiáng)化免疫，注射后的魚(yú)種在(2528)t:的水溫下飼養(yǎng)30d，該批魚(yú)種即為免疫魚(yú)種。5.2免疫魚(yú)攻毒在無(wú)菌條件下將試管斜面嗜水氣單胞菌苔刮下制成菌懸浮液，含菌量為1.0X108CFU/ml。以0.3mL/尾的劑量，分別注射經(jīng)免疫的試驗(yàn)組魚(yú)種和未經(jīng)免疫的對(duì)照組魚(yú)種(試驗(yàn)組和對(duì)照組的魚(yú)種數(shù)量相同，每組數(shù)量不少于30尾)。攻毒后的魚(yú)種在(2528)°C的水體中觀察15d，記錄各組的死亡魚(yú)數(shù)，計(jì)算死亡率。5.3免疫保護(hù)率的計(jì)算根據(jù)5.2條的試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算其免疫保護(hù)率。注免疫保護(hù)率在65%以上的制品為合格品實(shí)施例6:產(chǎn)品分裝與保存將滅活、安全性和效力檢測(cè)合格的疫苗在無(wú)菌條件下，分裝于50ml或100ml經(jīng)消毒處理的玻璃瓶或塑料瓶中，加貼標(biāo)簽，包裝產(chǎn)品。產(chǎn)品包裝按GB6388的要求執(zhí)行。疫苗產(chǎn)品置于4t:環(huán)境下冷藏備用，有效期為90d。在疫苗保存期間，應(yīng)不定期進(jìn)行無(wú)活菌檢驗(yàn)，以保障疫苗的安全性。本發(fā)明的范圍不受所述具體實(shí)施方案的限制，所述實(shí)施方案只欲作為闡明本發(fā)明各個(gè)方面的單個(gè)例子，本發(fā)明范圍內(nèi)還包括功能等同的方法和組分。實(shí)際上，除了本文所述的內(nèi)容外，本領(lǐng)域技術(shù)人員參照上文的描述和附圖可以容易地掌握對(duì)本發(fā)明的多種改進(jìn)。所述改進(jìn)也落入所附權(quán)利要求書(shū)的范圍之內(nèi)。上文提及的每篇參考文獻(xiàn)皆全文列入本文作為參考。權(quán)利要求一種鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法，包括下列步驟a)培養(yǎng)和收集以嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)菌株(編號(hào)BYKAH-X1或簡(jiǎn)稱為X1)為原始菌種，擴(kuò)大培養(yǎng)，收集；b)滅活福爾馬林對(duì)嗜水氣單胞菌菌株X1滅活，獲得滅活疫苗；c)無(wú)活菌檢驗(yàn)將步驟b制備的滅活疫苗進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果為無(wú)菌生長(zhǎng)，即可判定滅活菌液合格；d)安全性檢測(cè)將步驟c判定合格的滅活疫苗接種于鱘魚(yú)，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，飼養(yǎng)觀察15d，如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組魚(yú)患細(xì)菌性敗血征，而對(duì)照組魚(yú)為陰性，則該批滅活疫苗為不合格產(chǎn)品，反之則該批滅活疫苗合格；e)效力檢驗(yàn)將步驟d判定合格的滅活疫苗接種于鱘魚(yú)，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，飼養(yǎng)30d，在用嗜水氣單胞菌菌株X1活菌液接種攻毒，飼養(yǎng)觀察15d，記錄各組的死亡魚(yú)數(shù)，計(jì)算免疫保護(hù)率，免疫保護(hù)率在65％以上的滅活疫苗為合格品；f)分裝與保存；g)留樣待檢。2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述嗜水氣單胞菌菌株可為上海海洋大學(xué)國(guó)家水生動(dòng)植物病原庫(kù)編號(hào)為XI的嗜水氣單胞菌或編號(hào)為ATCC35654的嗜水氣單胞菌。3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在所述滅活步驟中，處理?xiàng)l件為重量百分比濃度為0.1%0.8%福爾馬林，4"3°C，312h。4.如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于所述滅活步驟中，處理?xiàng)l件為O.1%福爾馬林，3。C，3h。5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述無(wú)活菌檢驗(yàn)為在無(wú)菌條件下，取10ml滅活疫苗，用生理鹽水將待檢疫苗稀釋10倍，吸取0.2ml分別接種到肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基、厭氣肉肝湯培養(yǎng)基上各一管，在3t:條件下培養(yǎng)48h，均應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如有菌體生長(zhǎng)，則為滅活不徹底，為不合格產(chǎn)品。6如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述安全性檢測(cè)步驟中，滅活疫苗接種量5.0X108CFU。7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述效力檢驗(yàn)中，滅活疫苗接種量3.0X108CFU，活菌液接種量3.0X108CFU。8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述保存條件為4t:環(huán)境下冷藏備用，有效期為90d。19.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病可為鱘魚(yú)細(xì)菌性腸炎、鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血癥或鱘魚(yú)細(xì)菌性出血病。10.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病為鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血癥。11.如權(quán)利要求i-io任一項(xiàng)所述制備方法所制備的鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病全菌滅活疫苗。全文摘要本發(fā)明涉及疫苗
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，具體涉及鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法。本發(fā)明公開(kāi)了一種鱘魚(yú)細(xì)菌性敗血綜合征全菌滅活疫苗的制備方法，包括下列步驟嗜水氣單胞菌培養(yǎng)和收集；滅活；無(wú)活菌檢驗(yàn)；安全性檢測(cè)；效力檢驗(yàn)；分裝與保存；留樣待檢。本發(fā)明首次公開(kāi)了鱘魚(yú)細(xì)菌性疾病全菌滅活疫苗的制備方法，所制得疫苗安全有效，為鱘魚(yú)細(xì)菌性病害的有效防治提供可靠的基礎(chǔ)。文檔編號(hào)A61P31/04GK101732702SQ20081020281公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2008年11月17日優(yōu)先權(quán)日2008年11月17日發(fā)明者姜有聲,曹海鵬,李圓圓,楊先樂(lè),邱軍強(qiáng)申請(qǐng)人:上海海洋大學(xué)