專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種從化橘紅中提取的抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物的制作方法一種從化橘紅中提取的抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥材藥物活性成分提取與臨床應(yīng)用的領(lǐng)域，尤其是使用特定的提取劑從中藥化橘紅中獲得具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：化橘紅ExocarpiumcitrlGrandis,別名柚皮橘紅、化州橘紅，來(lái)源于蕓香科植物柚。味辛、苦，溫。歸肺、脾經(jīng)。主治散寒，燥濕，利氣，消痰。多用于風(fēng)寒咳嗽，喉癢痰多，食積傷酒，嘔惡痞悶。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是運(yùn)用現(xiàn)代中藥提取技術(shù)，使用特定的提取劑，從中藥化橘紅中提取具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，該組合物可以與藥學(xué)上所有可接受的劑型輔料混和后進(jìn)一步加工成相應(yīng)藥物。為解決以上問(wèn)題，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案在中藥化橘紅的各部位如果、花、葉中分別加入0.1°/。-100%乙醇、乙酸乙酯、水、曱醇、石油醚、二氯曱烷、正丁醇其中之一作為提取劑進(jìn)行單獨(dú)提取，提取結(jié)束后將所得提取液經(jīng)濃縮后得含藥物活性成分的組合物。在該組合物中通過(guò)加入不同的劑型輔料即可制成片劑、膠嚢劑、滴丸劑、溶液劑、緩控釋劑和注射劑等常見(jiàn)藥物劑型。從中藥化橘紅中提取出具有抑制乙酰膽堿酯酶藥物活性成分并制得對(duì)應(yīng)常見(jiàn)藥物劑型尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。藥理學(xué)試驗(yàn)表明本發(fā)明獲得的組合物具有明顯的抑制乙酰膽堿酯酶療效，不僅提取方法容易操作，而且非常適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施方式<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>乙酰膽堿酯酶測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080828),考馬斯亮藍(lán)法蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080425)，其他試劑均為市售級(jí)分析純。1.2動(dòng)物SD大鼠，由南京青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。1.3儀器酶標(biāo)4義(ThermoElectronCo.),電熱恒溫水浴鍋(江蘇國(guó)華實(shí)-瞼4義器廠)，離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠)，電子天平。2、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1乙酰膽堿酯酶(AChE)的制備方法SD大鼠，體重200~250g,斷頭處死后冰臺(tái)快速取大腦，放入玻璃亞中，玻璃i加入少量水冷的生理鹽水漂洗，用干凈的濾紙吸去大腦組織表面的水分和血液，精密稱(chēng)重后置于燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃勻漿器中，再用少許冰冷生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿器中進(jìn)行冰浴勻漿，以組織生理鹽水1:9的比例制成腦勻漿，3000rpm離心10min，取上清待用。2.2總蛋白含量測(cè)定以考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定腦勻漿上清中總蛋白含量為2.392g/L。2.3大鼠腦勻漿中酶活力的測(cè)定取腦勻漿200ul，加不同濃度藥物50ul，置37。C水浴中反應(yīng)lh,同時(shí)設(shè)不加藥組，及陽(yáng)性藥石杉?jí)A曱組。反應(yīng)結(jié)束后取反應(yīng)液50ul,按試劑盒方法測(cè)定酶活力，以下列公式計(jì)算酶活力及樣品對(duì)酶的抑制率。組織勻漿中TChE活力=，!QlM^j^Dffx標(biāo)準(zhǔn)管濃度+蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值樣品對(duì)酶的抑制率(％):不加樣品組酶活力-加樣品組酶活力xlOO%不加樣品組酶活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表表lG樣品(化橘紅果)對(duì)大鼠腦勻漿乙酰膽堿酯酶活性的影響(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2G樣品(化橘紅果)對(duì)大鼠腦勻漿乙酰膽堿酯酶抑制率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>乙酰膽堿酯酶測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080828)，考馬斯亮藍(lán)法蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080425)，其他試劑均為市售級(jí)分析純。1.2動(dòng)物SD大鼠，由南京青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。1.3儀器酶標(biāo)儀(ThermoElectronCo.),電熱恒溫水浴鍋(江蘇國(guó)華實(shí)—瞼4義器廠)，離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠)，電子天平。2、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1乙酰膽堿酯酶(AChE)的制備方法SD大鼠，體重200~250g，斷頭處死后水臺(tái)快速取大腦，力支入玻璃亞中，玻璃皿加入少量冰冷的生理鹽水漂洗，用干凈的濾紙吸去大腦組織表面的水分和血液，精密稱(chēng)重后置于燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃勻漿器中，再用少許冰冷生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿器中進(jìn)行水浴勻漿，以組織生理鹽水1:9的比例制成腦勻漿，3000rpm離心10min,取上清待用。2.2總蛋白含量測(cè)定以考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定腦勻漿上清中總蛋白含量為2.392g/L。2.3大鼠腦勻漿中酶活力的測(cè)定取腦勻漿200ul，加不同濃度藥物50ul，置37。C水浴中反應(yīng)lh,同時(shí)設(shè)不加藥組，及陽(yáng)性藥石杉i咸甲組。反應(yīng)結(jié)束后取反應(yīng)液50ul，按試劑盒方法測(cè)定酶活力，以下列公式計(jì)算酶活力及樣品對(duì)酶的抑制率。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表表3H樣品(化橘紅花)對(duì)大鼠腦勻漿乙酰膽堿酯酶活性的影響(n=2)縣救酶活力(U/mgprot)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>乙酰膽堿酯酶測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080828)，考馬斯亮藍(lán)法蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080425)，其他試劑均為市售級(jí)分析純。1.2動(dòng)物SD大鼠，由南京青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。1.3儀器酶標(biāo)儀(ThermoElectronCo.),電熱恒溫水浴鍋(江蘇國(guó)華實(shí)驗(yàn)儀器廠)，離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠)，電子天平。2、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1乙酰膽石成酯酶(AChE)的制備方法SD大鼠，體重200~250g，斷頭處死后水臺(tái)快速取大腦，》文入玻璃亞中，JE皮璃亞加入少量冰冷的生理鹽水漂洗，用干凈的濾紙吸去大腦組織表面的水分和血液，精密稱(chēng)重后置于燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃勻漿器中，再用少許冰冷生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿器中進(jìn)行水浴勻漿，以組織生理鹽水1:9的比例制成腦勻漿，3000rpm離心10min,取上清待用。2.2總蛋白含量測(cè)定以考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定腦勻漿上清中總蛋白含量為2.392g/L。2.3大鼠腦勻漿中酶活力的測(cè)定取腦勻漿200ul，加不同濃度藥物50ul,置37。C水浴中反應(yīng)lh,同時(shí)設(shè)不加藥組，及陽(yáng)性藥石杉?jí)A甲組。反應(yīng)結(jié)束后耳又反應(yīng)液50ul,:接試劑盒方法測(cè)定酶活力，以下列公式計(jì)算酶活力及樣品對(duì)酶的抑制率。組織勻漿中TChE活力-測(cè)定管OD值-對(duì)照管OD值，標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值'標(biāo)準(zhǔn)管濃度+蛋白含量樣品對(duì)酶的抑制率(％》不加樣品組酶活力-加樣品組酶活力xl00%不加樣品組酶活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表表5Y樣品(化橘紅葉)對(duì)大鼠腦勻漿乙酰膽堿酯酶活性的影響(n=2)酶活力(U/mgprot)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6Y樣品(化橘紅葉)對(duì)大鼠腦勻漿乙酰膽堿酯酶抑制率的影響樣品濃度抑制率(％><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種從中藥化橘紅中提取的具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為采用以下步驟制得a、提取劑采用濃度為0.1％-100％乙醇；b、藥物原材料采用化橘紅果；c、使用步驟a中的提取劑對(duì)步驟b中的藥物原材料進(jìn)行提??；d、將步驟c中獲得的提取液經(jīng)濃縮后得含藥物活性成分的組合物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為提取劑采用濃度為0.1%乙醇。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為提取劑釆用濃度為75%乙醇。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為提取劑采用濃度為100%乙醇。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為提取劑釆用乙酸乙酯、水、甲醇、石油醚、二氯曱烷、正丁醇其中之一。6、根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的任一種具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為藥物原材料采用化橘紅花。7、根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的任一種具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為藥物原材料采用化橘紅葉。8、根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的任一種具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，其特征為可將該組合物與藥學(xué)上所有可接受的劑型輔料混和后進(jìn)一步加工成藥物。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種具有抑制乙酰膽堿酯活性的組合物，其特征為制成的藥物劑型包括片劑、膠嚢劑、滴丸劑、溶液劑、緩控釋劑、注射劑。全文摘要一種從中藥化橘紅果、花或葉中提取的抑制乙酰膽堿酯酶活性的組合物，從乙醇、乙酸乙酯、水、甲醇、石油醚、二氯甲烷、正丁醇中任選一種作為提取劑進(jìn)行提取，提取結(jié)束后將所得提取液經(jīng)濃縮后即可得含藥物活性成分的組合物。經(jīng)藥理學(xué)試驗(yàn)表明，該組合物具有抑制腦組織乙酰膽堿酯酶活性的獨(dú)特藥理效果，并可通過(guò)加入不同的劑型輔料制成片劑、膠囊劑、滴丸劑、溶液劑、緩控釋劑和注射劑等常見(jiàn)藥物劑型。文檔編號(hào)A61P25/28GK101390978SQ200810195509公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2008年11月3日優(yōu)先權(quán)日2008年11月3日發(fā)明者萬(wàn)建義,劉法錦,李向明,勵(lì)林,段金廒,謝培山,錢(qián)大瑋,韓克勤,芳黃申請(qǐng)人:廣州綠色生命藥業(yè)有限公司