毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及 其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法以及它在治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 毛訶子肉為使君子科植物毛訶子（AeBirica /?〇#)的干燥果實，毛 訶子為落葉喬木，高12-15 m，胸徑可達I m，枝灰色，具縱紋，小枝幼葉及葉柄基部常具銹色 絨毛。葉螺旋狀集生枝頂，葉柄長3-9 cm，無毛，穗狀花序腋生。秋冬季果實成熟時采摘，曬 干。我國生產(chǎn)于云南南部、新疆，國外分布于越南、老撾、泰國等。
[0003] 毛訶子果實生干生寒、純化異常血液質(zhì)和清除燒焦體液，止瀉固澀，補腦，明目、滋 補腸胃，散氣消痣。主治濕熱性或血液質(zhì)疾病，如胃腸原性腹瀉，腸內(nèi)燒焦體液增多，腦虛視 弱，迎風流淚，腸胃虛弱，氣結痔瘡等。現(xiàn)代藥理研究表明，毛訶子果實能促進膽汁分泌，使 膽汁內(nèi)總固體含量有明顯的增加，且小鼠口服醇提取對的LD 5tl為4. 25 mg/kg。
[0004] 在高通量篩選的過程中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)大葉毛訶子肉具有很好的抑制丁酰膽 堿酯酶的活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī) 藥用途。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明所解決的技術問題是提供一種毛訶子肉提取物。
[0006] 本發(fā)明還提供了以毛訶子肉提取物為主要活性成分的組合物。
[0007] 本發(fā)明同時提供了毛訶子肉提取物及其組合物的制備和應用。
[0008] 本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的： 維吾爾藥毛訶子肉經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 用石氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫(氯仿-甲醇，比例見表1)，各氯仿-甲醇比例混合溶劑 洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用 氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿：甲醇，100:1，體積比)洗脫，繼用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿：甲 醇，100:6,體積比)洗脫得到的氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿 ：甲醇，100:6,體積比)洗脫液經(jīng)回 收有機溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有丁酰 膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地，優(yōu)選為先用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100: 1， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:6,體積比）洗脫20 倍柱體積，洗脫液干燥后即為本發(fā)明丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制 活性的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該毛訶子肉丁 酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層色譜（TLC)分析結果見圖1，TLC分析 條件：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0009] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下： 1、毛訶子肉經(jīng)甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥毛訶子肉20 g，經(jīng)100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取 物SN0047樣品7. 0540 g，留樣4. 2032 g，上柱2. 8508 g，拌樣硅膠3 g，空白硅膠10g，氯 仿-甲醇系統(tǒng)。
[0010] 2、氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果 取維吾爾藥毛訶子肉20 g，經(jīng)100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0047樣品7. 0540 g，留樣4. 2032 g，上柱2. 8508 g，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅膠 柱色譜，拌樣硅膠3 g，空白硅膠10 g，玻璃柱內(nèi)徑1.6cm，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫(條件 見表1 )，柱體積22 mL，每個梯度洗脫200mL，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶 劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2,圖3, TLC分析條件：GF254硅膠 板，展開系統(tǒng)：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)，氯仿：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1)，顯色方法：香 草醛-硫酸顯色。
[0011] 表 1
【主權項】
1. 一種毛訶子肉提取物，其特征為毛訶子肉經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:1的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比為 100:6的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，用100:6的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫的洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，干燥，即為該提取物。
2. 如權利要求1所述毛訶子肉提取物，其特征其中，提取溶劑可以為甲醇、石油醚、水、 丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。
3. 如權利要求1所述毛訶子肉提取物，其特征為毛訶子肉經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿：甲醇，100:1，體積 t匕）洗脫，繼用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿：甲醇，100:6,體積比）洗脫，用氯仿-甲醇混合溶 劑(氯仿：甲醇，1〇〇:6,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。
4. 如權利要求1所述提取物的制備方法，如權利要求1-3任何一項所述的一種維吾爾 藥毛訶子肉提取物，其特征為，用于洗脫的氯仿-甲醇的洗脫體積為2-50倍柱體積。
5. 權利要求1所述提取物的制備方法，其特征為：毛訶子肉經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100:1，體積 t匕）洗脫2-50倍柱體積，繼用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100:6,體積比）洗脫2-50 倍柱體積，用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100:6,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶 劑，干燥，即為該提取物；以上條件最優(yōu)為先用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100:1，體 積比）洗脫25倍柱體積，繼用氯仿-甲醇混合溶劑(氯仿-甲醇，100:6,體積比）洗脫20倍 柱體積。
6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的提取物和藥學上 可接受的載體。
7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1-5任何一項所述的提取物或權利要求6 所述的藥物組合物。
8. 權利要求1-5任何一項所述的毛訶子肉提取物或權利要求6所述的組合物或權利要 求7所述的藥物制劑在制備丁酰膽堿酯酶活性藥物中的應用。
9. 如權利要求8所述維吾爾藥毛訶子肉提取物，其特征為，所述丁酰膽堿酯酶活性，可 用于治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
10. 權利要求1-5任何一項所述的一種維吾爾藥毛訶子肉提取物，其特征在于，用TLC 法檢測；色譜條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)顯色方法：香草 醛-硫酸顯色。
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種毛訶子肉丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫(yī)藥用途。所述的提取物通過如下方法獲得：先用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:1，體積比）洗脫，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:6，體積比）洗脫，用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿：甲醇，100:6，體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該丁酰膽堿酯酶抑制提取物。
【IPC分類】G01N30-90, A61P25-28, A61K36-185
【公開號】CN104644704
【申請?zhí)枴緾N201510058730
【發(fā)明人】王金輝, 熱娜·卡斯木, 黃健, 李國玉, 吳文熙, 王新玲, 馬慶東, 張珂
【申請人】新疆醫(yī)科大學
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月4日