專利名稱：：一種毛冬青總苷元口服藥物制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥毛冬青提取物，尤其是一種毛冬青總苷元的提取物，以及該提取物的藥物用途。屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：毛冬青為冬青科植物毛冬青/w6"ceASHook,etArm的干燥根，產(chǎn)于我國廣東、廣西、福建、江西、浙江、臺(tái)灣等地，是我國南方常用的中藥材，具有活血通脈、消腫止痛、清熱解毒的功效，在臨床上廣泛用于治療冠心病、心絞痛及血栓閉塞性脈管炎，中心性視網(wǎng)膜炎、扁桃體炎，咽喉炎，小兒肺炎和凍瘡、燒燙傷等疾病，具有較好的療效，國內(nèi)外學(xué)者非常重視。現(xiàn)代研究表明，毛冬青的主要化學(xué)成分為毛冬青總皂苷和總黃酮苷，毛冬青根中主要成分為三萜皂苷類。到目前為止，從毛冬青根中已分離并鑒定出的皂苷類成分有毛冬青酸(Ilexodicacid)、毛冬青皇苷甲(IlexsaponinA，11)、具棲冬青苷(Pedunculoside，III)、毛冬青皂苷B,(IlexsaponinB，V)、毛冬青皂苷B(IlexsaponinB，VI)以及救必應(yīng)酸(Rotundicacid,VD、長梗冬青苷等，毛冬青還含有酚類、氨基酸、鞣質(zhì)、甾體和還原糖。關(guān)于毛冬青的研究報(bào)道較多，熊友香等在"毛冬青的化學(xué)成分、藥理作用研究進(jìn)展"(《中藥材》，2002年5月，第25巻第5期)中對(duì)毛冬青近10年的藥理研究、臨床應(yīng)用和成分研究進(jìn)行了概括和總結(jié)；楊鑫等在"毛冬青中環(huán)烯醚萜苷類化合物的分離與鑒定"(《中國藥物化學(xué)雜志》，2007年6月，第17巻第3期)和尹文清在"毛冬青總皂苷的提取工藝及純化鑒定研究"(《中藥材》，2007年9月，第30巻第9期)中分別對(duì)毛冬青中的環(huán)烯醚砲苷和總皂苷的提取純化工藝進(jìn)行了研究，得到了簡便易行的提取純化方法；王蘭蘭和張芳林等分別對(duì)毛冬青的抗炎和抗血栓作用進(jìn)行了試驗(yàn)研究；專利CN1049123C、CN1628832A、CN1686251A、和CN1301098C等分別報(bào)道了毛冬青相關(guān)制劑(復(fù)方毛冬青注射液、毛冬青粉針劑、毛冬青軟膠囊和毛冬青滴丸等)的制備方法和主要用途；可見在中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
中，毛冬青是目前國內(nèi)外學(xué)者重點(diǎn)研究的熱點(diǎn)之一。但是，現(xiàn)有的技術(shù)把研究重點(diǎn)放在了毛冬青苷類物質(zhì)上，都忽視了對(duì)毛冬青總苷元的研究，其效果與應(yīng)用情況一直處于空白狀態(tài)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一目的在于提供一種以毛冬青總苷元為活性成分的口服藥物。4第二目的是提供該藥物的制劑形式，特別是一種高效制劑；第三目的是提供該藥物高效制劑的制備方法；最后是提供該藥物在治療冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病、急性心肌梗塞、血栓閉塞性脈管炎、中心性視網(wǎng)膜炎，扁桃體炎、咽喉炎、小兒肺炎、凍瘡、燒燙傷和高血壓癥、高血脂癥及高血糖癥等病癥中的應(yīng)用。本發(fā)明目的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的-發(fā)明人提供一種口服的藥物，該藥物以毛冬青總苷元為活性成分。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，苷類物質(zhì)其實(shí)是在植物體內(nèi)產(chǎn)生的生物活性較低的化合物，如在化合物上添加極性基團(tuán)，把具有生物活性的苷元和糖結(jié)合起來形成生理活性較低的苷類而加以儲(chǔ)存，使之更易排出體外。同樣，這些苷類化合物在人體內(nèi)的生物利用度也較低，口服的苷類化合物在腸道內(nèi)難以吸收、生物利用度低，多數(shù)在體內(nèi)代謝并不完全，有的甚至完全以原型(苷類形式)排除體外，只有少量的苷類化合物經(jīng)腸道細(xì)菌、酶分解為苷元后才發(fā)揮出療效；非口服的苷類化合物，被人體吸收的苷還需經(jīng)血液轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，再通過肝腸循環(huán)，將苷水解為苷元再吸收入血而發(fā)揮療效，但因?yàn)椴襟E較多，故也不能迅速發(fā)揮療效。因而，針對(duì)毛冬青的藥用價(jià)值，發(fā)明人提出一種新的藥用物質(zhì)，即毛冬青總苷元。它是按現(xiàn)有技術(shù)從毛冬青藥材中提取得到毛冬青總苷，對(duì)該有效部位進(jìn)行水解，使其中的苷類物質(zhì)脫去糖基，生成更具生物活性的苷元，即成為本發(fā)明所提供的毛冬青總苷元。發(fā)明人經(jīng)研究證實(shí)，由于苷類物質(zhì)的親脂性強(qiáng)，人體的吸收透過性越好，由于水解的得到的苷元上沒有了糖基，其親脂性增強(qiáng)，因而苷元較苷更易透過腸粘膜被吸收；同時(shí)，藥物的分子越小也越容易被吸收，苷水解掉所帶的糖分子變成苷元后，分子變得更小，也會(huì)更易吸收。另外，以苷元直接作為藥用物質(zhì)，克服了以往苷類物質(zhì)在體內(nèi)運(yùn)行時(shí)間長、轉(zhuǎn)化效率低、轉(zhuǎn)化結(jié)果不確定等因素，大大提高了藥物的生物利用率，節(jié)約了藥物資源。在本發(fā)明提供的藥物中，毛冬青總苷元可以單獨(dú)使用，也可以與其他藥物成分聯(lián)合使用，即在藥物活性成分中，可以只有毛冬青總苷元純品，也可以是毛冬青總苷元粗品，還可以是毛冬青總苷元與其他藥物的混合物。本發(fā)明優(yōu)選使用毛冬青總苷元粗品，即從藥材中提取毛冬青總苷，再以適當(dāng)方式水解，并根據(jù)需要進(jìn)行精制，得到所需純度。上述的水解方法包括了酸水解、酶水解或微生物水解，發(fā)明人經(jīng)過篩選，分別提供如下幾種具體的水解方法酸水解可以用110mol/L的鹽酸、硫酸、醋酸及甲酸等進(jìn)行水解；酶水解可以用苦杏仁酶、麥芽糖酶、轉(zhuǎn)化糖酶、橙皮苷酶等進(jìn)行水解；微生物可以用大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、梭狀芽孢桿菌、畸形菌體、雙岐桿菌及人體腸道正常菌群等進(jìn)行水解。本發(fā)明的第二目的是提供上述毛冬青總苷元的藥物制劑，尤其是一種高效制劑。由于本發(fā)明的第一目的中已解決了藥物的吸收問題，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員可以方便地將本發(fā)明的毛冬青總苷元配合適當(dāng)?shù)妮o料，制備成各種常規(guī)制劑。但是發(fā)明人還注意到另一個(gè)問題，即由于苷元的脂溶性相對(duì)較強(qiáng)，因而其制劑應(yīng)用于人體后，其中的苷元成分不易被潤濕和溶出，如果不能解決這一問題，也會(huì)影響苷元的吸收。所以，針對(duì)這一問題，發(fā)明人提供了一種新技術(shù)方案，可以保證將毛冬青總苷元制成高效制劑，該技術(shù)方案是方案一一種以本發(fā)明所述毛冬青總苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有生物黏附劑和潤濕劑，還可以含有分散劑及其他藥劑學(xué)上的常規(guī)輔料，并被制成的片、膠囊、顆粒、散劑、丸等口服制劑。該技術(shù)方案的核心在于將毛冬青總苷元用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證毛冬青總苷元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的毛冬青總苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的毛冬青總苷元利用生物黏附劑和潤濕劑，還可以利用分散劑，進(jìn)行潤濕、分散，以制成口服高效制劑，均應(yīng)在本發(fā)明申請保護(hù)的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術(shù)方案選用生物黏附劑和潤濕劑，還可以用分散劑作為主要輔料，目的在于使毛冬青總苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實(shí)際應(yīng)用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、檸檬酸、碳酸氫鈉、低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂酸鎂等，這些均應(yīng)視為在本發(fā)明技術(shù)的基礎(chǔ)上完成的工作，也應(yīng)受本發(fā)明申請的保護(hù)。在該技術(shù)方案中，生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆、聚乙烯吡咯垸酮或它們之間的混合物；潤濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆或其混合物；分散劑優(yōu)選為微粉硅膠、環(huán)糊精或其混合物。其中，殼聚糖、卡波姆作為生物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長藥物在胃腸道的滯留時(shí)間，顯著提高藥物的生物利用度。卵磷脂、泊洛沙姆等表面活性劑對(duì)毛冬青總苷元有表面潤濕的作用，降低表面張力，增加脂溶性的毛冬青總苷元的溶解度，促進(jìn)其迅速吸收利用，利于迅速發(fā)揮療效。微粉硅膠、環(huán)糊精作為分散劑，其本身具有親水性，利于苷元的潤濕、分散，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。將本發(fā)明的毛冬青總苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強(qiáng)其中毛冬青總苷元的分散性、潤濕性，提高其生物利用度。在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分2060%，生物黏附劑110%，潤濕劑520%，分散劑030%，其他輔料050%。其中的其他輔料是指制劑在成型過程中的一些其他輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、檸檬酸、碳酸氫鈉、低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂酸鎂等。上述技術(shù)方案主要應(yīng)用于口服制劑，最適宜的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑和丸劑。方案二一種以本發(fā)明所述毛冬青總苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有分散劑和潤濕劑，還可以含有生物黏附劑及其他藥劑學(xué)上的常規(guī)輔料，并被制成的軟膠囊、液體硬膠囊、滴丸等口服制劑。該技術(shù)方案的核心在于將毛冬青總苷元用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證毛冬青總苷元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的毛冬青總苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的毛冬青總苷元利用分散劑和潤濕劑，還可以利用生物黏附劑，進(jìn)行潤濕、分散，以制成口服高效制劑，均應(yīng)在本發(fā)明申請保護(hù)的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術(shù)方案選用分散劑和潤濕劑，還可以用生物黏附劑作為主要輔料，目的在于使毛冬青總苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實(shí)際應(yīng)用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金乙酯、蜂蠟等，這些均應(yīng)視為在本發(fā)明技術(shù)的基礎(chǔ)上完成的工作，也應(yīng)受本發(fā)明申請的保護(hù)。在該技術(shù)方案中，分散劑優(yōu)選為植物油或聚乙二醇；潤濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇或它們之間的混合物；生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆或其混合物。其中，卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇等表面活性劑對(duì)毛冬青總苷元有表面潤濕的作用，降低表面張力，增加脂溶性的毛冬青總苷元的溶解度，促進(jìn)其迅速吸收利用，利于迅速發(fā)揮療效。植物油、聚乙二醇作為分散劑，可以將毛冬青總苷元分散均勻。殼聚糖、卡波姆作為生物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長藥物在胃腸道的滯留時(shí)間，顯著提高藥物的生物利用度。將本發(fā)明的毛冬青總苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強(qiáng)其中毛冬青總苷元的分散性、潤濕性，提高其生物利用度。在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分1040%，生物黏附劑010%，潤濕劑520%，分散劑5080%，其他輔料05%。其中的其他輔料是指制劑在成型過程中的一些其他輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金乙酯、蜂蠟等。上述技術(shù)方案主要應(yīng)用于口服制劑，最適宜的劑型為液體硬膠囊、軟膠囊劑和滴丸劑。本發(fā)明的第三目的是提供上述高效制劑的制備方法，其中的核心技術(shù)是將毛冬青總苷元與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加入所需常規(guī)制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。而這里的混合方法優(yōu)選振動(dòng)磨超微粉碎混合的方法。只有通過有效的混合方式，才能保證提取物中所含毛冬青總苷元與特殊輔料充分分散均勻，應(yīng)用于人體時(shí)才能夠迅速潤濕、溶出、吸收，發(fā)揮高效的作用。經(jīng)發(fā)明人驗(yàn)證，熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合等方式，都能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明目的，而其中的超微粉碎方式效果最為突出。雖然超微粉碎技術(shù)早已出現(xiàn)，但在中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的應(yīng)用，一直停留于"粉碎"的概念上，始終沒有突破，因而其范圍很局限。發(fā)明人在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，超微粉碎技術(shù)已不僅僅是粉碎技術(shù)，更是一種高效混合技術(shù)，它可使苷元與輔料一起受到強(qiáng)烈的正向擠壓力和切向剪切力的作用，運(yùn)用高速、高能量進(jìn)行粉碎、混合，所得到的粉末中心粒徑由原來的75um減小到10ym以下，粒度細(xì)膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，使藥物粒子與輔料粒子充分接觸、混合，既提高了藥物粒子的分散度，又保證了其迅速潤濕并溶出，大大提高了藥物的吸收率和生物利用度，其優(yōu)勢是目前常規(guī)混合方法不可比擬的。在這其中，振動(dòng)磨超微粉碎方式是實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的最佳方法。有益效果本發(fā)明的毛冬青總苷元，具有活血通脈，消腫止痛，清熱解毒的功效，可用于治療冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病、急性心肌梗塞、血柱閉塞性脈管炎、中心性視網(wǎng)膜炎，扁桃體炎、咽喉炎、小兒肺炎、凍瘡、燒燙傷和高血壓癥、高血脂癥及高血糖癥等病癥。配合本發(fā)明的高效制劑手段，更可以充分發(fā)揮其功效。發(fā)明人通過以下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，來說明本發(fā)明的突出效果。一、鎮(zhèn)痛作用藥效比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，SPF級(jí)，早，1822g，安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2試驗(yàn)儀器熱板儀自制；電熱恒溫水浴鍋上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。1.3受試藥物供試樣品的制備取毛冬青6kg，粗粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取1/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備毛冬青總苷普通制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以2mol/L硫酸水解5小時(shí)，水解液加氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，1/3干燥物制備毛冬青總苷元普通制劑，另2/3干燥物制備毛冬青總苷元高效制劑。毛冬青總苷普通制劑組取毛冬青總苷干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水8混懸至100ml;毛冬青總苷元普通制劑組取l/3毛冬青總苷元干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;毛冬青總苷元高效制劑組取2/3毛冬青總苷元干燥物，加卡波姆10g、卵磷脂10g、微粉硅膠50g，并加淀粉至200g，超微粉碎混合50分鐘。取其中30g以水混懸至100ml作為苷元高劑量組，另取15g以水混懸至100ml作為苷元低劑量組。2試驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)方法，取早性昆明種小鼠50只，給藥前將小鼠放入熱板上(將恒溫水浴調(diào)節(jié)至55士0.5。C，放入1000ml的薄鐵皮燒杯，底部接觸水面)，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為該鼠的給藥前痛閾值，應(yīng)挑選530s以內(nèi)者為合格。取測痛閾值后篩選出痛閾值符合要求的小鼠45只，按痛閾值和體重隨機(jī)分成5組。分別為空白對(duì)照組、毛冬青總苷普通制劑組、總苷元普通制劑組、總苷元低劑量組和總苷元高劑量組，給藥劑量均為10ml/kg，空白組灌胃給予同體積的生理鹽水。連續(xù)給藥5天，于末次給藥后30min、60min將小鼠放入熱板上，測定痛閾值以及痛閾值提高百分率，并作t檢驗(yàn)，比較組間差異顯著性。3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表l對(duì)小鼠因熱板所致痛閾值的影響結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注經(jīng)t檢驗(yàn)，各組與空白對(duì)照組相比，*P<0.05，林P〈0.Q1，***P<0.001。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，在給藥后30min和60min時(shí)，與空白對(duì)照組比較，毛冬青總苷元高效制劑組可顯著提高因熱板所致小鼠的痛閾值和痛閾值提高百分率，具有顯著性差異(P〈0.01);毛冬青總苷元普通制劑組同樣存在明顯差異(P<0.05)，提示本發(fā)明毛冬青總苷元高效制劑和普通制劑均具有較好的鎮(zhèn)痛作用，且高效制劑組的藥理作用好于普通制劑組，在生藥量減半的情況下藥理作用仍不低于正常劑量的總苷普通制劑組。二、抗炎作用藥效比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，SPF級(jí)，早，1822g，安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2試驗(yàn)儀器JNB型精密扭力天平上海第二天平儀器廠出品。1.3受試藥物二甲苯無錫醫(yī)藥采購供應(yīng)站經(jīng)銷，東湖塘化工廠出品。供試樣品的制備取毛冬青6kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60°C)，加乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置12小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，以水飽和正丁醇提取三次，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)铀芙?，加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取1/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備毛冬青總苷制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以5mol/L鹽酸水解5小時(shí)，水解液加氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，1/3干燥物制備毛冬青總苷元一般制劑，另2/3干燥物制備毛冬青總苷元高效制劑。毛冬青總苷普通制劑組取毛冬青總苷干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;毛冬青總苷元普通制劑組取l/3毛冬青總苷元干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;毛冬青總苷元高效制劑組取2/3毛冬青總苷元干燥物，加殼聚糖5g、卵磷脂20g、微粉硅膠80g，并加淀粉至200g，超微粉碎混合80分鐘。取其中30g以水混懸至100ml作為苷元高劑量組，另取15g以水混懸至100ml作為苷元低劑量組。2試驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)方法，取昆明種小鼠50只，隨機(jī)分成5組，分組及給藥劑量同上，分別灌胃給予0.lml/10g相應(yīng)供試液，連續(xù)7天，末次給完藥后30min時(shí)做試驗(yàn)。末次給藥后30min每鼠用乙醚麻醉，將二甲苯致炎液涂在小鼠左耳前后兩面，每面約0.025ml，共0.05ml/每耳，右耳作對(duì)照，lh后，將小鼠斷頭處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mra直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用扭力天平稱重。每鼠的左耳片重量減去右耳片重量的增加百分率即為腫脹程度。計(jì)算各組腫脹度之均值與標(biāo)準(zhǔn)差，并作t檢驗(yàn)，比較組間差異顯著性。3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X士S)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表2對(duì)小鼠因二甲苯所致耳廓腫脹度的影響結(jié)果表組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(g生藥/kg)耳廓腫脹度(%)空白對(duì)照組10—119.87±29.36總苷元普通制劑組104579.66±50.43*總苷普通制劑組104591.26±65.44總苷元低劑量組1022.573.30±28.94*總苷元高劑量組104558.57±44.69**注經(jīng)t檢驗(yàn)，各組與空白對(duì)照組相比，*P〈0.05，林P〈0.01。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠耳廓給予二甲苯后，可以造成耳廓腫脹炎癥模型。與空白對(duì)照組比較，毛冬青總苷元高效制劑組可顯著減輕小鼠耳廓腫脹炎癥，具有顯著性差異(P〈0.01);毛冬青總苷元普通制劑組同樣存在明顯差異(P〈0.05)，提示本發(fā)明毛冬青總苷元高效制劑和普通制劑均具有較好的抗炎作用，且高效制劑組的藥理作用好于普通制劑組，在生藥量減半的情況下藥理作用仍不低于正常劑量的總苷普通制劑組。三、抗大鼠靜脈血栓形成的比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)動(dòng)物Wister大鼠50只，雌雄各半，體重200士20g。由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2受試藥物供試樣品的制備取毛冬青6kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60°C)，加乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置12小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，以水飽和正丁醇提取三次，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)铀芙?，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取1/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備總苷制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以5mol/L鹽酸水解3小時(shí)，水解液加氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，干燥物(55%苷水解為苷元)備用。毛冬青苷制劑取苷干燥物，加殼聚糖2.5g、泊洛沙姆10g、環(huán)糊精30g，并加羧甲淀粉鈉至100g，超微粉碎混合80分鐘，取其中30g以水混懸至lOOml;毛冬青苷元一般制劑取l/3苷元干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;毛冬青苷元高效制劑取2/3苷元干燥物，加殼聚糖5g、泊洛沙姆20g、環(huán)糊精60g，并11加羧甲淀粉鈉至200g，超微粉碎混合80分鐘。取其中30g以水混懸至100ml作為苷元高劑量組，另取15g以水混懸至100ml作為苷元低劑量組。2試驗(yàn)方法取Wistar大鼠50只雌雄各半，體重200士20g，隨機(jī)分為5組，每組10只苷元低劑量組、苷元高劑量組、苷元一般制劑組、毛冬青總苷制劑組、空白對(duì)照組，灌胃給藥每天1次，給藥劑量分別為10ml/kg，空白對(duì)照組灌胃給予同體積生理鹽水，連續(xù)7天。末次給藥6h后，用內(nèi)徑為lmm的玻璃毛細(xì)管插入鼠內(nèi)眥靜脈叢取血，至毛細(xì)管血柱達(dá)5cm，每隔30s折斷毛細(xì)管一段，檢査有無出現(xiàn)凝血絲，計(jì)算毛細(xì)管采血到出現(xiàn)血凝絲時(shí)間，即為凝血時(shí)間。3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表3對(duì)大鼠靜脈血栓形成的影響結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與模型組比較,樸〈0.05;林P〈0.01;科補(bǔ)<0.01。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，毛冬青總苷元制劑組可明顯延長凝血時(shí)間，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P〈0.01;P<0.001)，同時(shí)毛冬青總苷元高效制劑組較普通制劑組的效果更明顯，提示本發(fā)明總苷元制劑具有較好的抗血栓作用。四、抗髙血壓作用藥效比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)材料SD大鼠，220g土30g，$，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.2受試藥物供試樣品的制備取毛冬青藥材3kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸千，取1/3的干燥物制備毛冬青總苷制劑；其余l(xiāng)/3的干燥物加水溶解，115'C滅菌20min，以乳酸菌菌種發(fā)酵水解72小時(shí)，水解液加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓干燥，干燥物(80%苷水解為苷元)制備總苷元制劑。毛冬青總苷制劑組取毛冬青總苷干燥物，加卡波姆2g、泊洛沙姆3g、環(huán)糊精30g,并加糊精至100g，超微粉碎混合30分鐘，取其中30g以水混懸至100ral;毛冬青總苷元普通制劑組取l/2總苷元干燥物，加糊精至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;毛冬青總苷元高效制劑組取另l/2總苷元千燥物，加卡波姆4g、泊洛沙姆6g、環(huán)糊精40g，并加糊精至100g，超微粉碎混合30分鐘。取其中30g以水混懸至100ml。陽性藥(卡托普利)取卡托普利10g，以水混懸至100ml，即得。2試驗(yàn)方法取健康雄性大鼠60只，體重220g士30g，隨機(jī)分為6組，每組10只毛冬青總苷元高效制劑組、毛冬青總苷元普通制劑組、毛冬青總苷制劑組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組、模型組，采用電擊足底作為單一應(yīng)激源對(duì)大鼠進(jìn)行應(yīng)激刺激，刺激強(qiáng)度為3048.5V，頻率0.5Hz，將大鼠放丁自制分格式電擊鼠箱，并連接應(yīng)激源，除正常對(duì)照組外，其余實(shí)驗(yàn)組大鼠每天上午8:0010:00、下午2:004:OO各接受l次應(yīng)激刺激，共4周，最后一次施以應(yīng)激刺激后25h內(nèi)用尾套法測量尾動(dòng)脈收縮壓(即將大鼠置于軟棉墊上后，尾部加熱，將壓脈套套至大鼠尾部近心端，換能器置于鼠尾中上部1/3處，打開記錄系統(tǒng)，等有規(guī)律脈搏出現(xiàn)以后，利用充氣球使套內(nèi)壓力升高到搏動(dòng)完全消失，然后緩慢放氣，仔細(xì)觀察并讀取脈搏波從無到開始出現(xiàn)時(shí)所對(duì)應(yīng)的壓力值，此即大鼠收縮壓(mmHg),重復(fù)3次，取平均值)。取造模成后的各組高血壓大鼠及正常對(duì)照組的10只健康雄性大鼠，灌胃給予相應(yīng)供試品10ml/kg,正常對(duì)照組和模型組給予等體積的生理鹽水，每天1次，連續(xù)給藥3天后，以1%戊巴比妥腹腔麻醉(5mg/kg)，頸動(dòng)脈插管取血，測定收縮壓。3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表4對(duì)高血壓大鼠收縮壓的影響結(jié)果表組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(g/kg)給藥前收縮壓給藥后收縮壓苷元高效制劑組1030109.78±5.1080.53±3.23林苷元普通制劑組1030109.06±7.2990.08±5.88*總苷制劑組1030110.49±4.9296.50±7.01陽性對(duì)照組105mg/g108.66±7.1685.36±4.18**模型組10一115.51±4.67116.57±3.07空白對(duì)照組10一78.10±4.1680.06±5.5313注與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，模型組與空白對(duì)照組比較，收縮壓增高有顯著性差異，顯示造模成功。毛冬青總苷元高效制劑組和陽性對(duì)照組可明顯降低高血壓大鼠的收縮壓，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P〈0.01，P<0.01)，同時(shí)毛冬青總苷元普通制劑組較總苷制劑組具有較好的降壓作用，上述提示本發(fā)明總苷元制劑具有理想的抗高血壓作用。五、對(duì)糖尿病小鼠糖脂代謝的比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料與儀器1.1試驗(yàn)材料昆明種小鼠，雄性，25±2g，安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供；注射用四氧嘧啶為Sigma產(chǎn)品，購于華美生物公司；葡萄糖、果糖胺(FA)、總膽固醇(TC)、血清卨密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)試劑盒均購于上?？菩郎锛夹g(shù)研究所。1.2試驗(yàn)儀器TGL—16B高速臺(tái)式離心機(jī)；天美UV-1100分光光度計(jì)。1.3受試藥物供試樣品的制備取毛冬青藥材2kg，粗粉碎，加60%乙醇冋流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取l/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備毛冬青總苷制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以2mol/L硫酸水解5小時(shí)，水解液加氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，1/3干燥物制備毛冬青總苷元一般制劑，另2/3干燥物制備毛冬青總苷元高效制劑。A組取毛冬青總苷干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;B組取1/3毛冬青總苷元干燥物，加淀粉至100g，混勻，取其中30g以水混懸至100ml;C組取2/3毛冬青總苷元干燥物，加卡波姆2g、卵磷脂4g、微粉硅膠6g,并加淀粉至200g，超微粉碎混合50分鐘。取其中30g以水混懸至100ml作為苷元高劑量組，另取1.5g以水混懸至100ml作為苷元低劑量組。2試驗(yàn)方法取昆明種小鼠，于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)一周后開始實(shí)驗(yàn)。先隨機(jī)挑選10只小鼠作為正常對(duì)照組。其余小鼠禁食18h后，尾靜脈注射四氧嘧啶(45mg/kg)，4天后測空腹血糖值。選擇血糖濃度在25.0030.00mmol/L的小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白組、模型組、毛冬青總苷制劑組(A組)、毛冬青總苷元普通制劑組(B組)和毛冬青總苷元高效制劑組(C14組)。給藥劑量均為10ml/kg，空白組和模型組分別灌胃給予同體積的生理鹽水。定期檢測體重和血糖水平，給藥30天后，對(duì)血清中血糖、FA、TC、TG、HDL-C采用相關(guān)試劑盒進(jìn)行檢3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表5對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響結(jié)果表劑量血糖值(mmoI/L)組別-(g生藥/kg)給藥前給藥10天給藥20天給藥30天空白組7,ll士O.377.90±1.147.97±0.658.24±0.85模型組26.37±1.2柳29.44±2.20共tt34.81±2.03弁#35.14±3.05糊A組9028.32±1.6827.69±1.2224.36±1,17*23.23±1.60*B組9027.80±1.4624.96±2.28*21.46±2.07材19.87±3.12**C組4528.33±1.2926.85±1.6922.93±2.27**20.61±3.08木氺C組9028.52±2.0824.21±2.19*18.53±2.04林16.65±3.07林注與空白組比較ttP<0.05，##P<0.01;與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。試驗(yàn)結(jié)果表明，給藥前模型組與藥物組小鼠血糖無顯著差異，但均與空白組比較差異顯著(P〈0.01)，說明糖尿病模型建立是成功的。給藥后，藥物組隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，血糖在逐漸下降，同時(shí)隨著給藥劑量的升高，血糖下降越來越明顯，高效制劑藥物組的血糖下降最明顯，與模型組相比，差異顯著(P〈0.01)，而模型組小鼠血糖仍維持在較高的水平，提示本發(fā)明苷元制劑具有較理想的降低血糖的作用。表6對(duì)糖尿病小鼠TC、TG和HDL-C的影響結(jié)果表組別劑量TC(總膽固醇)TG(甘油三酯)HDL-C(g生藥/kg)(mmol/U(mmol/U(mmol/U空白組4.35±0.711.26±0.593.33±0.53模型組6.90±0.2謂3.16±0.61郎2.17±0.36ttA組恥6.13±0.722.48±0.312.39±0.61B組905.66±1.06*2.12±0.38*2.55±0,60*C組455.79±0.81*2.20±0，85*2,62±0.40*C組904.79±0.40**1.83±1.05**2.89±0.57**注與空白組比較tff<0.05，,<0.01;與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，動(dòng)物給藥30天后檢測糖尿病小鼠血清TC、TG和HDL-C水平。與空白組15相比，模型組血清TC、TG水平顯著升高(P〈0.01)，而HDL-C明顯下降(P〈0.05)，說明糖尿病小鼠的血脂水平明顯比正常組高，說明糖尿病模型建立是成功的；藥物組與模型組相比TC、TG水平逐漸下降，HDL-C水平逐漸升高，相對(duì)其它藥物組，苷元普通制劑組與苷元高效制劑組具有相似的藥理作用，但高效制劑藥物組的降低血脂的作用最明顯，提示本發(fā)明苷元制劑具有較好的降低血脂的作用。六、對(duì)小鼠心肌細(xì)胞缺血缺氧損傷的比較試驗(yàn)1試驗(yàn)材料與儀器1.1試驗(yàn)材料SD乳鼠，安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；MEM培養(yǎng)基、無糖MEM培養(yǎng)基GIBCO公司產(chǎn)品；輔酶I、胰蛋白酶Sigma公司產(chǎn)品；特級(jí)小牛血清細(xì)胞所實(shí)生公司產(chǎn)品；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。1.2試驗(yàn)儀器恒溫培養(yǎng)箱，無菌凈化操作臺(tái)等。1.3受試藥物供試樣品的制備取毛冬青藥材500g，粉碎，加80%乙醇滲濾提取，滲濾液，[Hl收乙醇，水液加0.5%活性炭脫色，濾過，濾液過DIOI大孔樹脂柱，分別用水、30%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇，取1/3的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備毛冬青總苷普通制劑；其余2/3的回收乙醇的水液用過e-糖苷酶水解24小吋，水解液過濾，過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥，備用。毛冬青總苷普通制劑組(A組)毛冬青總苷制劑為取毛冬青總苷干燥物，加淀粉至10g即得；毛冬青總苷元普通制劑組(B組)毛冬青總苷元一般制劑為取1/2毛冬青總苷元干燥物，加淀粉至10g，混勻，即得；毛冬青總苷元高效制劑組(C組)毛冬青總苷元高效制劑為取1/2毛冬青總苷元干燥物，加殼聚糖0.5g、卵磷脂0.5g、環(huán)糊精1.5g，并加淀粉至10g，超微粉碎混合60分鐘，即得。2試驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)方法，取新生3天的SD乳鼠(雌雄均可)50只，在無菌條件下取其心室肌剪碎，經(jīng)O.ly。胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液，離心收集后，用含20%小牛血清的MEM培養(yǎng)基制成濃度為5X107mL細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)瓶中，置于37'C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。參照文獻(xiàn)方法，給心肌細(xì)胞造成缺血缺氧損傷，即將培養(yǎng)3d同歩搏動(dòng)的心肌細(xì)胞換用高純氮?dú)怙柡偷臒o糖MEM培養(yǎng)基，并于培養(yǎng)瓶內(nèi)充氮?dú)?0s，將瓶內(nèi)空氣置換出。37'C恒溫培養(yǎng)箱密閉培養(yǎng)，造成心肌細(xì)胞缺血缺氧損傷，觀察損傷6、12h后的細(xì)胞形態(tài)，并進(jìn)行各生化指標(biāo)測定。將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為六組正常組、缺血缺氧組、缺血缺氧+A組(lmg/g)、缺血缺氧+B組(lmg/g)、缺血缺氧+C低劑量組(0.5mg/g)、缺血缺氧+C高劑量組(lmg/g)。每組10瓶細(xì)胞，損傷6h和12h后各組分別取出5瓶細(xì)胞按照試劑盒方法測SOD和MDA含量。3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表7不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間各組細(xì)胞MDA含量的測定結(jié)果表組別試驗(yàn)細(xì)胞數(shù)(瓶)6h后MM(nmol/106cells)12h后MDA(nmol/106cells)正常組50.312±0.140.307±0.07缺血缺氧組50,589±0.08*0.597±0.12*缺血缺氧+A組50.516±0.010.528±0.03缺血缺氧+B組50.479±0.11*0.491±0.04缺血缺氧+C低劑量組50.466士O.32*0.443±0.07**缺血缺氧+C高劑量組50.367±0.06**0.386±0.04**注與對(duì)照組比較，*P<0.001;與缺血缺氧組比較，**P<0.01。上述結(jié)果表明，不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間缺血缺氧組的MDA(脂質(zhì)過氧化物)含量也明顯高于相應(yīng)正常組，差異非常顯著(P〈0.001)。本發(fā)明苷元制劑不僅降低了MDA含量，而且其效果與制劑濃度成正相關(guān)，同時(shí)苷元高效制劑組的效果明顯好于苷元普通制劑組，提示本發(fā)明苷元制劑具有保護(hù)細(xì)胞防止脂質(zhì)過氧化和氧自由基損傷的作用。表8不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間各組細(xì)胞SOD活性的測定結(jié)果表組別試驗(yàn)細(xì)胞數(shù)(瓶)6h后SOD(U/mg蛋白)12h后SOD(U/mg蛋白)正常組52.04±0.102.13±0.17缺血缺氧組51.ll土O.06*1.18±0.14*缺血缺氧+A組51.39±0.121.44±0.07缺血缺氧+B組51.55±0.101.64±0.16*缺血缺氧+C低劑量組51.69±0.07*1.76±0.13*缺血缺氧+C高劑量組51.92±0.12*林2.03±0.17***17注與對(duì)照組比較，*P<0.001;與缺血缺氧組比較，**P<0.01，***P<0.001。上述結(jié)果表明，不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間缺血缺氧組的SOD活性明顯比相應(yīng)的正常組低，差異非常顯著(P〈0.001)。本發(fā)明苷元制劑能在不同程度上提高細(xì)胞SOD的活性，同時(shí)苷元高效制劑組的效果明顯好于苷元普通制劑組，提示本發(fā)明苷元制劑具有提高心肌細(xì)胞內(nèi)SOD活性的能力，能起到保護(hù)細(xì)胞防止脂質(zhì)過氧化的作用。具體實(shí)施例方式下面列舉實(shí)施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明，各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明實(shí)施例1取毛冬青總苷元50g，加入殼聚糖20g、聚乙烯吡咯烷酮20g、卡波姆10g、泊洛沙姆50g、卵磷脂50g、微粉硅膠50g、倍他環(huán)糊精100g、淀粉150g，振動(dòng)磨超微粉碎混合30分鐘，分裝，制成散劑。實(shí)施例2取毛冬青總苷元50g、葛根總黃酮苷元10g，加入殼聚糖5g、卡波姆5g、泊洛沙姆14g、卵磷脂10g、微粉硅膠10g、倍他環(huán)糊精20g、羧甲淀粉鈉6g，微晶纖維素70g，重壓式研磨超微機(jī)超微粉碎30分鐘，加70%乙醇合坨10分鐘，制丸條、分粒與搓圓，干燥，打光，分裝，制成丸劑。實(shí)施例3取毛冬青總苷元50g，加入殼聚糖lg、卵磷脂5g，再加糊精43g、阿斯帕坦lg，攪拌均勻，干壓制粒，分裝，制成顆粒劑。實(shí)施例4取毛冬青總苷元40g，加入殼聚糖10g、聚乙烯吡咯烷酮10g、泊洛沙姆8g、卵磷脂12g、倍他環(huán)糊精20g、淀粉100g，過篩混合均勻，制粒，裝腸溶膠囊，制成膠囊劑。實(shí)施例5取毛冬青總苷元30g，加入殼聚糖3.6g、聚乙烯吡咯垸酮1.5g、泊洛沙姆1.8g、卵磷脂1.5g、微粉硅膠5g、倍他環(huán)糊精10g、加羧甲淀粉鈉3g、淀粉145g，振動(dòng)磨超微粉碎混合50分鐘，制粒，壓片，包衣，制成片劑。實(shí)施例6取毛冬青總苷元40g、銀杏葉總黃酮苷元20g，加入聚乙烯吡咯垸酮3.6g、卡波姆0.3g、泊洛沙姆1.7g、大豆磷脂lg、微粉硅膠6g、低取代羥丙甲纖維素46g、微晶纖維素120g，氣流式超微機(jī)超微粉碎60分鐘，制粒，壓片，制成分散片。18實(shí)施例7取毛冬青總苷元20g，加入殼聚糖2g、卡波姆0.2g、泊洛沙姆lg、微粉硅膠4g、倍他環(huán)糊精12g、再加入檸檬酸50g、碳酸氫鈉55g，振動(dòng)磨超微粉碎混合70分鐘，使其高度混勻分散，干壓制粒，壓片，制成泡騰片。實(shí)施例8取毛冬青總苷元80g，紅霉素3g，慶大霉素5g，加入丙二醇8g、泊洛沙姆2g、尼泊金乙酯lg，并加入300g聚乙二醇400攪拌，過篩混勻，壓制成軟膠囊，即得。實(shí)施例9取毛冬青總苷元100g，加入丙二醇10g、泊洛沙姆10g、卵磷脂10g、蜂蠟15g，并加入大豆油200g，振動(dòng)磨超微20分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊，即得。實(shí)施例10取250g聚乙二醇4000加熱熔融，加入毛冬青總苷元100g、殼聚糖lg、卵磷脂8g，振動(dòng)磨超微40分鐘，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。實(shí)施例11取毛冬青藥材2kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60°C)的清膏，加入乙醇，使含醇量達(dá)70%，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，水液加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、20%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，余水液加硫酸使含酸量達(dá)2mol/L，加熱水解3小時(shí)，放冷，濾過，殘?jiān)运礈熘两行?，減壓干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元60%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆15g、殼聚糖5g、卵磷脂10g、泊洛沙姆10g、甘油30g，并加入450g聚乙二醇600，振動(dòng)磨超微80分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊，即得。實(shí)施例12取毛冬青藥材4kg，粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，余水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，余水液加鹽酸使含酸量達(dá)2mol/L，加熱水解4小時(shí)，加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別用水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元65%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入丙二醇2g、甘油30g、尼泊金乙酯lg，并加入200g聚乙二醇400，攪拌混勻，壓制成軟膠囊，即得。實(shí)施例1319取毛冬青藥材3kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60°C)的清膏，加入乙醇，使含醇量達(dá)60%，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，干燥物加水溶解，115'C滅菌20min，以雙岐桿菌菌種發(fā)酵水解72小時(shí)，減壓濃縮，減壓干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元80%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入100g聚乙二醇6000、250g聚乙二醇4000、三七總苷元20g，卡波姆5g、丙二醇40g、卵磷脂5g、泊洛沙姆5g，振動(dòng)磨超微35分鐘，加熱熔融，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。實(shí)施例14取毛冬青藥材2.5kg，粉碎，加10倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，70%乙醇沉淀，回收乙醇，水液用正丁醇萃取3次，回收正丁醇液，余水液115。C滅菌15-20min，大腸桿菌菌種用無菌水配制成每毫升含]08個(gè)分生孢子的懸浮液，以孢子懸液的形式按V/W為3-10%的比例接入培養(yǎng)基，于26-30。C，搖床轉(zhuǎn)速140-220rpm的條件下震蕩，培養(yǎng)時(shí)間72-96h;終止發(fā)酵后，過濾，濾餅用5倍量80%乙醇回流提取2次，每次30分鐘，合并濾液，減壓回收乙醇，剩余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元73%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆7g、泊洛沙姆5g、大豆磷脂10g、倍他環(huán)糊精28g，振動(dòng)磨超微粉碎混合20分鐘，制粒，裝膠囊，制成膠囊劑。實(shí)施例15取毛冬青藥材6kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，剩余水液以正丁醇萃取三次，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)运芙?，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，先以水、30%乙醇洗脫，棄去洗脫液，再以70%乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，余液加入鹽酸使含酸量達(dá)lmol/L，回流水解3小時(shí)，放冷，以氫氧化鈉中和剩余的酸，干燥，干燥物用乙醇回流提取，所得乙醇液回收乙醇，干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元55%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖25g、泊洛沙姆25g、卵磷脂20g、微粉硅膠30g、倍他環(huán)糊精150g、羧甲淀粉鈉10g，振動(dòng)磨超微粉碎混合80分鐘，制粒，壓片，包衣，制成片劑(0.35g/片)。實(shí)施例16取毛冬青藥材6kg,粉碎，加60%乙醇回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，水液加鹽酸300ml，加熱水解4小時(shí)，水解液加氫氧化鈉中和，過AB-8大孔樹脂柱，分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元90%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖15g、卡波姆15g、泊洛沙姆5g、大豆磷脂10g，振動(dòng)磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，裝腸溶膠囊，制成腸溶膠囊劑。實(shí)施例17取毛冬青藥材3.5kg,粉碎，加70%乙醇滲濾提取，滲濾液，回收乙醇，水液加0.5%活性炭脫色，濾過，濾液過DIOI大孔樹脂柱，分別用水、20%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇，用麥芽糖苷酶、苦杏仁苷酶水解24小時(shí)，水解液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元50%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖7g、聚乙烯吡咯烷酮10g、卡波姆5g、泊洛沙姆5g、大豆磷脂10g、羧甲淀粉鈉5g，振動(dòng)磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，壓片，包腸溶衣，制成片劑。實(shí)施例18取毛冬青藥材5kg，粉碎，加60%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，水液115'C滅菌15-20min，乳酸菌菌種用無菌水配制成每毫升含l(f個(gè)分生孢子的懸浮液，以孢子懸液的形式按V/W為3-10%的比例接入培養(yǎng)基，于26-30'C，搖床轉(zhuǎn)速140-220rpm的條件下震蕩，培養(yǎng)時(shí)間72-96h;終止發(fā)酵后，取發(fā)酵后的發(fā)酵液過濾，濾液過聚酰胺柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得到毛冬青總苷元提取物(除了含有毛冬青總苷元外，還含有未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖15g、聚乙烯吡咯垸酮50g、大豆磷脂10g、低取代羥丙甲纖維素70g、微晶纖維素100g，振動(dòng)磨超微粉碎30分鐘，制粒，壓片，制成分散片(0.5g/片)。實(shí)施例19取毛冬青藥材6kg，粉碎，加8倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，60%乙醇沉淀，回收乙醇，水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、20%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，水液用麥芽糖苷酶、苦杏仁苷酶水解48小時(shí)，水解液過濾，過氧化鋁柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到毛冬青總苷元提取物(除了含有毛冬青總苷元外，還含有未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入聚乙烯吡咯烷酮10g、卡波姆15g、泊洛沙姆30g、大豆磷脂15g、再加入檸檬酸150g、碳酸氫鈉180g，振動(dòng)磨超微粉碎混合50分鐘，使其高度混勻分散，干壓制粒，壓片，制成泡騰片(0.5g/片)。實(shí)施例20取毛冬青藥材4kg，粉碎，加70%乙醇滲濾提取，滲濾液，回收乙醇，水液加0.5%活性21炭脫色，濾過，濾液過D101大孔樹脂柱，分別用水、20%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇，加濃硫酸250ml，加熱水解60分鐘，水解液加氫氧化鈣中和，過濾，濾餅用5倍量80%乙醇回流提取2次，每次30分鐘，合并濾液，減壓回收乙醇，干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元40%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆20g、泊洛沙姆32g，并加淀粉至總量1000g，振動(dòng)磨超微粉碎混合30分鐘，分裝，制成散劑。實(shí)施例21取毛冬青藥材5kg，粉碎，加60°/。乙醇回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，水液115'C滅菌15-20min，雙歧桿菌菌種用無菌水配制成每亳升含108個(gè)分生孢子的懸浮液，以孢子懸液的形式按V/W為3-10%的比例接入培養(yǎng)基，于26-3(TC，搖床轉(zhuǎn)速140-220rpm的條件下震蕩，培養(yǎng)時(shí)間72-96h;終止發(fā)酵后，過濾，濾液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得到毛冬青總苷元提取物(含毛冬青總苷元65%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，噴十粉加入聚乙烯吡咯烷酮2g、泊洛沙姆33g、卵磷脂13g、羧甲淀粉鈉10g，并加微晶纖維素至總量1000g，振動(dòng)磨超微粉碎混合30分鐘，制粒，填充膠囊，制成膠囊劑。實(shí)施例22取實(shí)施例13所制滴丸治療54例冠心病心絞痛患者。治療方案每日3次，每次6粒，使用10天后，顯效率為40.8%，總有效率為90.4%。實(shí)施例23取實(shí)施例15所制片劑治療血栓閉塞性脈管炎患者66例。治療方案每日3次，每次2片，15天為一個(gè)療程，3個(gè)療程后統(tǒng)計(jì)結(jié)果，治愈48例，好轉(zhuǎn)5例，總有效率為80.3%。實(shí)施例24取實(shí)施例18所制分散片劑治療患有扁桃體炎和咽喉炎的患者134例。治療方案每天3次，每次2片，2周為一個(gè)療程，2個(gè)療程后統(tǒng)計(jì)治療結(jié)果，顯效率為44.8%，總有效率為88.7%。實(shí)施例25取實(shí)施例19所制泡騰片劑輔助治療58例高血壓患者。治療方案每日2次，每次3片；同時(shí)使用服用硝苯地平緩釋片，每日3次，每次1片。15天后，顯效率為74.6%，總有效率為88.3%。2權(quán)利要求1、一種以毛冬青總苷元為活性成分的口服藥物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所述毛冬青總苷元可以單獨(dú)使用，也可以與其他藥物成分聯(lián)合使用。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于所述毛冬青總苷元是通過水解毛冬青總苷而得到的。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于水解方法為酸水解、酶水解或微生物水解。5、根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于藥物活性成分與藥劑學(xué)上可接受的輔料配合使用。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有生物黏附劑和潤濕劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有分散劑。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于輔料中的生物黏附劑是指殼聚糖、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮中的任一種或二種以上的組合物；潤濕劑是指卵磷脂和/或泊洛沙姆；分散劑是指微粉硅膠和/或環(huán)糊精。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為活性成分2060%，生物黏附劑110%，潤濕劑520%，分散劑030%，其他輔料050%。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于被制成片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑。11、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有潤濕劑和分散劑。12、根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有生物黏附劑。13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物，其特征在于輔料中的潤濕劑是指丙二醇、卵磷脂、泊洛沙姆中的任一種或二種以上的組合物；分散劑是指聚乙二醇或植物油；生物黏附劑是指殼聚糖和/或卡波姆。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為活性成分1040%，生物黏附劑010%，潤濕劑520%，分散劑5080%，其他輔料05。％。15、根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物，其特征在于被制成軟膠囊劑、液體硬膠囊劑或滴丸劑。16、制備權(quán)利要求6至15中任一項(xiàng)所述藥物的方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加入所需常規(guī)制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。17、根據(jù)權(quán)利要求16所述的制備方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料通過振動(dòng)磨超微粉碎方法混合。18、權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述藥物在制備用于治療冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病、急性心肌梗塞、血栓閉塞性脈管炎、中心性視網(wǎng)膜炎、扁桃體炎、咽喉炎、小兒肺炎、凍瘡、燒燙傷、高血壓癥、高血脂癥或高血糖癥等病癥的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種毛冬青總苷元口服藥物制劑及其制備方法和用途，屬中藥領(lǐng)域。該發(fā)明是將從毛冬青中提取的總苷進(jìn)行水解，得到總苷元，并將總苷元配合特殊的輔料制成高效制劑，可以大大提高毛冬青總苷元的生物利用度。該制劑在治療冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病、急性心肌梗塞、血栓閉塞性脈管炎、中心性視網(wǎng)膜炎，扁桃體炎、咽喉炎、小兒肺炎、凍瘡、燒燙傷和高血壓癥、高血脂癥及高血糖癥等病癥有明顯的療效。文檔編號(hào)A61P9/12GK101518554SQ20081010102公開日2009年9月2日申請日期2008年2月27日優(yōu)先權(quán)日2008年2月27日發(fā)明者周小明,魏永利申請人:北京凱瑞創(chuàng)新醫(yī)藥科技有限公司