專利名稱：：咖啡?？鼘幩岷苌锛捌渲苽浞椒ê推渌幬锝M合物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及咖啡?？鼘幩嵫苌锛捌渲苽浞椒?，以及包含該咖啡?？鼘幩嵫苌锏钠渌幬锝M合物，及其在制備用于治療或預(yù)防病毒疾病藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：病毒是一類嚴(yán)重危害人類健康威脅人類生命的病原體，如流行性感冒病毒、艾滋病病毒、SARS病毒、乙肝病毒等，具有高度的傳染性。對(duì)這些病毒的防治主要是抗病毒疫苗，但由于這些病毒容易發(fā)生變異，常規(guī)疫苗尚不能有效的預(yù)防及阻止其爆發(fā)和流行。大多數(shù)的病毒對(duì)抗生素類化學(xué)藥不敏感，目前已成為醫(yī)學(xué)界的一大難題。醫(yī)用外源性干擾素、白細(xì)胞介素-2等能抑制病毒復(fù)制，提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能，治療前景良好，但費(fèi)用昂貴，且大量使用尚有一定不良反應(yīng)。而中醫(yī)藥臨床防治具有獨(dú)特效果，毒副作用小，藥源豐富，價(jià)格低廉，能調(diào)節(jié)整體免疫功能，抑制病毒復(fù)制，阻止病毒致細(xì)胞病變，改善臨床癥狀，在治療病毒感染性疾病上應(yīng)用廣泛，顯示出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)很多人從不同的角度和方向?qū)χ兴幙共《咀隽瞬煌难芯俊？Х弱？鼘幩犷惢衔飶V泛存在中草藥、水果、蔬菜等植物中。二咖啡?？崴?Dicaffeoylquinicacid，DCQA)，也稱二咖啡酰奎寧酸，是奎尼酸的二咖啡酸酯。二咖啡?？崴嶙鳛橐环N藥理活性成分，其作用范圍較廣泛，具有抗病毒(CN1087608;EP1008344;US6331565;US20020111382)，抗氧化(CN1136434;孫燕榮，董俊興等，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2002，26(1):39)、提高免疫功能(CN1136434)、抗肝損傷(CN1476842;孫燕榮，董俊興等，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2002，26(1):39)、抗誘變(YoshimotoM.，etal.，BiosciBiotechnolBiochem，2002，66(11):2336)等作用，在病毒感染、心血管疾病(CN1136434;CN1381236;CN1462620;KR2002085507)等方面有一定療效，對(duì)于乙肝病毒(CN1087608;EP1008344;US6331565)、艾滋病毒(CN1087608;EP1008344;US6331565)、冠狀病毒感染(CN1449751)，二咖啡酰奎尼酸也有治療作用。也有人將其用于化妝品(EP577516;US5445816)。呼吸道合胞病毒月巿炎(respiratorysyncytialviruspneumonia)簡(jiǎn)稱合胞病毒肺炎，是一種小兒常見(jiàn)的間質(zhì)性肺炎，多發(fā)生于嬰幼兒。由于母?jìng)骺贵w不能預(yù)防感染的發(fā)生，出生不久的小嬰兒即可發(fā)病，但新生兒較少見(jiàn)。國(guó)外偶有院內(nèi)感染導(dǎo)致產(chǎn)科醫(yī)院新生兒病房爆發(fā)流行的報(bào)道。到目前為止，對(duì)RSV感染的研究有一定的進(jìn)展，但還沒(méi)有特異有效的治療和預(yù)防方案。目前唯一允許用于化學(xué)療法的藥物主要是利巴韋林(ribavirin),還有金剛烷胺及鹽酸阿比朵兒。其它的如單抗-人類單克隆抗體palivizumab(Synagis)和靜脈用免疫球蛋白(RSV-IGIV)已經(jīng)注冊(cè)使用，療效雖好，但其治療一個(gè)周期所需的費(fèi)用很高，不能普遍應(yīng)用于臨床。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是為了提供新型的咖啡?？鼘幩嵫苌锛捌渲苽浞椒?，以彌補(bǔ)上述不足。本發(fā)明的另一目的還提供包含治療有效量的上述化合物或其鹽或其水合物，以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。另外，本發(fā)明再一目的還提供在制備用于治療或預(yù)防病毒疾病的所述化合物或其鹽或其水合物的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，下述通式(I)所述的化合物或其鹽或其水合物為，(I)式中R為NH2;或任意單取代或雙取代的CrC6的直鏈或支鏈的垸胺基；或任意取代的C3-C6的環(huán)垸胺基；或任意取代的C,-C6的芳香胺基；或四氫吡咯基；或哌啶基；Qi，Q2，Q3，Q4為H或如下式(II)所述的基團(tuán)，且Q,，Q2，Q3Q4不同時(shí)為H或Q,，Q2，Q3，Q4不同時(shí)為如下式(II)所述的基團(tuán)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(II)其中，所述R為氨基、甲氨基、二甲氨基、乙氨基、異丙氨基、四氫吡咯基、哌啶基、苯胺基、芐胺基、對(duì)甲苯胺基、環(huán)丙胺基。通式(I)所述的化合物或其鹽或其水合物包括如下化合物當(dāng)R為環(huán)丙胺基時(shí)，包括式(1-1)、(1-2)、(1-3)、(1-4)、(1-5)及(1-6)等6個(gè)化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>當(dāng)R為甲氨基(NHCH3)時(shí)，包括式(3-l)、(3-2)、(3-3)、(3-4)、(3-5)、(3-6)及(3-7)等7個(gè)化合物。根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的至少一種如上所述的化合物或其鹽或其水合物，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。其中，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、植入劑或外用制劑。通常，本發(fā)明的化合物以治療有效量，通過(guò)所接受的起類似效用的藥劑給藥方式中任何一種給藥。適宜的劑量范圍通常為每天10mg1000mg，優(yōu)選每天200mg。這取決于眾多因素，比如，治療疾病的嚴(yán)重性、對(duì)象的年齡及其健康狀況、所使用化合物的效力、給藥途徑和形式、給藥針對(duì)的癥狀以及有關(guān)醫(yī)師的喜好和經(jīng)驗(yàn)。治療這種疾病的領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員將能夠在不經(jīng)過(guò)多的實(shí)驗(yàn)并且依據(jù)個(gè)人知識(shí)和本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的情況下，確定本發(fā)明的化合物對(duì)于給定疾病的治療有效量?？梢詫⒈景l(fā)明的化合物與一種或多種常規(guī)的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑放入藥物組合物或單位劑量形式中。藥物組合物或單位劑量形式可以包括常規(guī)比例的常規(guī)成分，含或不含另外的活性化合物或元素，并且單位劑量形式可以含有或?qū)⒉捎玫念A(yù)定每日劑量范圍相應(yīng)的任何適宜有效量的活性成分。藥物組合物的采用形式可以是片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、植入劑或外用制劑。根據(jù)本發(fā)明，進(jìn)一步提供了制備如上所述的化合物或其鹽或其水合物的方法，其中所述方法包括以下步驟(1)由式4奎寧酸與R反應(yīng)生成式3化合物；(2)再由式3與式II反應(yīng)生成通式I的化合物HOII式中R為NH2;或任意單取代或雙取代的CrC6的直鏈或支鏈的烷胺基；或任意取代的C3-C6的環(huán)垸胺基；或任意取代的d-C6的芳香胺基；或四氫吡咯基；或哌啶基；當(dāng)R為環(huán)丙胺基，四氫吡咯基及甲氨基時(shí)，相關(guān)化合物的按照如下的合成路線(化學(xué)反應(yīng)式一和化學(xué)反應(yīng)式二)和合成工藝進(jìn)行<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>2-3R-{]3-3R-NHCH3化學(xué)反應(yīng)式二上面，除R為環(huán)丙胺基，四氫吡咯基及甲氨基外，當(dāng)R為其它基團(tuán)時(shí)，例如NH2、任意單取代或雙取代的的CrC6的直鏈或支鏈的烷胺基、任意取代的C3-C6的環(huán)垸胺基、任意取代的Ci-C6的芳香胺、哌啶基，其相關(guān)化合物的合成工藝按照如上所述的方法進(jìn)行。將奎寧酸(4)和環(huán)己酮在酸(如TSOH，硫酸等)催化下和用甲苯回流分水反應(yīng)使得奎寧酸的3a，4a-羥基形成縮酮保護(hù)，同時(shí)lp位的羧基和5p位的羥基形成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)得到化合物(5)?？鼘幩岬?a位，4a位羥基除了可以用環(huán)己酮形成縮酮保護(hù)外，還可以用丙酮形成縮酮的形成加以保護(hù)；用有機(jī)胺類，如環(huán)丙胺、甲胺等對(duì)化合物(5)的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)進(jìn)行開(kāi)環(huán)，從而使得la位的羧基轉(zhuǎn)化為酰胺結(jié)構(gòu)得到化合物(6)，化合物(7)及化合物(8)等，所用溶劑可為THF、MeOH、EtoAc等，反應(yīng)溫度408(TC;在酸性條件下，去除化合物(6)、(7)、(8)的3a，4a縮酮保護(hù)基，得到化合物(9)、(10)及(11)等，反應(yīng)溫度為室溫6(TC;接下來(lái)的反應(yīng)是化合物(9)、(10)及(11)等和O-烯丙基咖啡酰氯的成酯反應(yīng)，所用溶劑可以為THF、EtOAc、CH2Cl2，CHCb等，所用堿可以為Et3N，吡啶，K2C03等，反應(yīng)溫度為-5°C5°C;可制得化合物(12)化合物(20)等；最后一步是去烯丙基保護(hù)，由于烯丙基醚對(duì)一般的酸堿都是很穩(wěn)定的，因此，不能在這些條件下去除烯丙基保護(hù)基。但用Rh(PPh3)3Cl/DABCO/EtOH和Pd(PPh3)4/Morpholine/THF等脫烯丙基的條件可以很容易的脫去化合物(12)(20)等的烯丙基結(jié)構(gòu)得到各目標(biāo)化合物。根據(jù)本發(fā)明，還提供一種在制備用于治療或預(yù)防病毒疾病如上所述的化合物或其鹽或其水合物的藥物中的應(yīng)用。其中，所述病毒為呼吸道合胞病毒、艾滋病病毒、乙肝病毒。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果提供咖啡酰奎寧酸的新衍生物，用于治療或預(yù)防病毒疾病，尤其在呼吸道合胞病毒及乙肝病毒，具有安全高效低毒的特性。其中，化合物(2-1)的體外抗呼吸道合胞病毒檢測(cè)IC50=1.37(xg/ml具體實(shí)施例方式以下將結(jié)合實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明。實(shí)施例1、化合物(5)的合成將化合物(4)奎寧酸(lOOg)，甲苯(2L)，環(huán)己酮(167ml)，TsOH(lg)回流分水反應(yīng)15h，冷卻到室溫，過(guò)濾，干燥，得類白色固體粉未132g化合物(5)。^-NMR(d-DMSO):U481.702(m,10H)，1.848(dd,J=3.2,17.6，lH)，2.173(m,2H),2.326(d，J=9，lH)，3.28(s，lH)，4.234(d,J=6.4,lH),4.433(m，lH)，4.475(q，lH),6.013(s,lH);[M+l]+:255。實(shí)施例2、化合物(6)的合成上述化合物(5)(5g)、環(huán)丙胺(6ml)及DME(75mi)回流反應(yīng)5.5h，蒸去溶劑。用柱層析分離，洗脫劑為氯仿和甲醇，蒸去溶劑，干燥，得類白色固體粉末4.7g化合物(6)。[M+l]+:312實(shí)施例3、化合物(7)的合成化合物(5)(5g)，四氫吡咯(2ml)，THF(50ml)回流反應(yīng)6.5h，蒸去溶劑，用柱層析分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和丙酮，蒸去溶劑，干燥，得淡黃色固體5.3g化合物(7)。[M+l]+:326。實(shí)施例4、化合物(8)的合成將化合物(5)溶于THFU00ml)中，在回流溫度下，通甲胺氣體4h，蒸去溶劑，得油狀物(9.4g)化合物(8)。此油狀物可以直接進(jìn)行接下的反應(yīng)。'H-畫R(d-DMSO):1.335(d,風(fēng)8，2H),1.4421.760(m,固),2.011(dd,J=19.2,5.2,1H),2.595(d，J=4.4,3H),3.762(m,2H)，4.301(m，lH),4.937(dd,J=15.2,3.8,lh),5.152(s,lH),7.705(q,J=13.6,4.4,1H);[M+l]:286。實(shí)施例5、化合物(9)的合成將化合物(6)(3g)、甲醇(30ml)及1MHC1(10ml)室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，減壓蒸去溶劑，用異丙醇重結(jié)晶，干燥，得淡黃色固體1.48g化合物(9)。[M+l]+:232。實(shí)施例6、化合物(10)的合成將化合物(7)(3g)，甲醇(30ml)及l(fā)MHCl(10ml)室溫?cái)嚢瑁瑴p壓蒸去溶劑，用柱層析純化，洗脫劑為CHCl3和NaOH，得白色固體2g化合物(10)。[M+l]+:246。實(shí)施例7、化合物(11)的合成將化合物(8)(8.5g)、甲醇(85ml)、1MHC1(25ml)室溫?cái)嚢?h，蒸去溶劑，用乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾、干燥、得白色粒狀固體5.5g化合物(11)。iH-NMR(d-DMSO):1.681(m,4H),2.594(d,J=5.2，3H),3.228(t，J=8.1H)，3.727(m,lH)，3.953(s,lH)，4,608(d,J=4.4,lH),4.837(d，J=5.2，lH)，5.109(d，J=3.2，lH)，5.419(s，lH),7.727(d,J=4.4,lH);[M+l]+:206。實(shí)施例8、化合物(1-1)的合成將化合物(9)(2.53g)、吡啶(35ml)和CH2C12(48ml)加入三口瓶中液中。在氬氣保住下，并將溫度控制在05"C，滴加O-二烯丙基咖啡酰氯(由7.4g咖啡酸制得，制法參考文獻(xiàn)Can丄Chem，75,1997,1783陽(yáng)94)的CH2C12(52ml)溶液，滴加后再反應(yīng)20min，用lmHCl水溶液調(diào)pH至34。再用飽和NaCl水溶液將CH2Cl2層洗至中性，無(wú)水MgS04干燥。過(guò)濾，蒸去溶劑，得油狀物，此油狀物用柱層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚。蒸去溶劑，得油狀物U7g將此油狀物用THF(82ml)溶解，加嗎啉(5.7ml)及催化量的Pd(PPh3)4，回流下反應(yīng)lh，將反應(yīng)液冷卻到室溫。將反應(yīng)液用含1MHC1的飽和NaCl溶液洗pH34。再用飽和NaCl將THF層洗至中性，無(wú)水MgS04干燥、過(guò)濾，將THF蒸去，得油狀物，用柱層析純化，洗脫劑為氯仿、甲醇及甲酸，將溶劑蒸去，干燥，得淡黃色固體粉末0.38g化合物(1-1)。^-NMR(d-DMSO):L158(t^l4.4,lH),1.69(K2.055(mJH),2246^2.330(nUH),3.309(d,J=6.8，2H)，3.710(d,J=6,2H),4,075(m,2H),4.831(dd,J=10.8，2.8,lH),5.323(q,lH),6.178(dd,J=20.8,5.2,2H)，6.715(t,J=16.8，2H),6.883(q，2H)，7.013(s,2H),7.394(dd,J=21.6,4.8,2H);[m+l]+:556。實(shí)施例9、化合物(14)、(17)、(20)的合成將化合物(11)溶于吡啶(6ml)及二氯甲垸(10ml)，溫度控制在05'C滴加O-二烯丙基咖啡酰氯的CH2Cl2(10ml)溶液，滴加完畢后反應(yīng)20min，加lmlHCl中止。CH2C12用lmlHCl洗至pH為4，再用飽和NaCl洗至pH為7，無(wú)水MgS04干燥過(guò)濾，濃縮，得油狀物，用柱層析純化。洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚。共收集3個(gè)組分。化合物(14):0,2g,'H-NMR(d-DMSO):U59(m,lH)，1.841(d,J=13.6,lH):2.022(m3H),2.584(cU=<4,3H),4.333(s,lH),4.407(m，9H),4.966(dcU:122,lH),5.213(t,J=19.6,4H),5.369(d,J=17.6,4H),5.601(s，2H)，5.890(d,J=5.2,lH)，5.983(m,4H)，6.484(t,J=25.5，2H),6.946(t，J=14，2H)，7.153(d,J=8,2H),7.320(s,2H),7.519(t,J=31.6,2H)，7.790(d,J=12,lH);[M+l]+:690,[M+Na〗+:712?；衔?17):O.lg，'H-NMR(d-DMSO),1158(m，lH),1.891(m,3H),2.144(d,J=l1.6,1H),2.631(d，J=4.4,3H),4.196(m，2H),4.567(m，8H)，4.865(dd，J=11.6，3.2,lH),5.255(t,J=4.4,4H)，5.354(m,6H),5.970(m，4H),6.462(d,J=16，2H),6.950(q,2H),7.162(q，2H)，7.311(t,J=4.4,2H),7.528(dd,J=19.6,3.6,2H),7.912(d，J=4.8,2H);[M+l]+:690，[M+Na]+:712。化合物(20):50mg，〗H-NMR(d-DMSO):1.764(q，lH),1.870(q，3H)，2.619(d，J=4,3H),4.022(q,lH),4.154(s,lH),4.615(m,6H)，5.255(d,J=11.4，2H),5.395(d，J=17.6，2H),6.005(m，lH),6.518(d,J=16,lH),7.007(d,J=8.4,lH)，7.233(d,J=8,lH),7.357(s,lH),7.591(d，J二16.1H),7.809(d,J=4.8，lH);[M+l]+:447。實(shí)施例IO、化合物(3-1)的合成將化合物(14)(9.3g)，THF(150ml)，嗎啉(45ml)及催化量的Pd(pph3)4在氬氣保護(hù)下回流lh，冷卻到室溫。用1mHCl的飽和NaCl溶液洗THF層，直到pH值34，再用飽和NaCl洗THF層至中性；無(wú)水MgS04干燥，過(guò)濾，蒸去溶劑，得油狀物。此油狀物用柱層析純化，洗脫劑為CH3C1、甲醇及甲酸。蒸去溶劑，干燥，得泡沫狀固體粉末化合物(3-1)。iH-畫R(d-DMSO):1.1621.242(m,lH),1.18462.131(m,5H),2.629(d,J=4，3H),4,015(q,lH),4.330(s,lH)，4.959(d,J=9.2,lH)，5.3835.634(m,lH),6.161(t,J=14.4,29.2，2H)，6.731(q,3H),7.060(t,J=34.4,2H)，7細(xì)(d,風(fēng)8,lH);[m+l〗+:530實(shí)施例ll、化合物(3-4)的合成將化合物(17)(1.34g)，THF(21ml)，嗎啉(7ml)及催化量的Pd(pph3)4在氬氣保護(hù)下回流lh，冷卻到室溫。用lmHCl的飽和NaCl溶液洗THF層，直到pH值34，再用飽和NaCl洗THF層至中性；無(wú)水MgS04干燥，過(guò)濾，蒸去溶劑，得油狀物。此油狀物用柱層析純化，洗脫劑為CH3C1、甲醇及甲酸。蒸去溶劑，干燥，得泡沫狀固體粉末化合物(3-4)。^-NMR(d隱DMSO):1.756^1.967(m,4H),2.621(d,J4.4，3H),3.276(d3，6H):4.141^4.199(m^H)，4.816(dJ=12,lH),5.346~5.468(m，3H)，6.178(ddJ:22,6.42H),6.628~6.785(m,2H),6.925(t,J=15.6,2H),7.020(s,2H),7.879(d，J=4.8，lH);[m+l]+:530實(shí)施例12、化合物(3-5)的合成將化合物(20)(0.5g)，THF(56ml)，嗎啉(2ml)及催化量的Pd(pph3)4回流0.5h，冷卻到室溫。用lmHCl的飽和NaCl溶液洗THF層，直到pH值34，再用飽和NaCl洗至中性；無(wú)水MgS04干燥，過(guò)濾，將溶液蒸去，得油狀物。用柱層析純化，洗脫劑為CH3C1、甲醇及甲酸。得淡黃色固體粉末化合物(3-5)。'H-畫R(d-DMSO)丄7851.983(m,4H),.69(d,J=4,3H),4,066(q,lH)4.177(s,lH),4.626(t，J=9.6,lH),6.317(d,J=16,lH),6.807(d,J=4,lH)，7.005(d，J=8,lH),7.088(s,lH),7.521(d,J=8,lH),7.879(d,J=4.4，lH),8.216(s,lH);[M+l]+:367實(shí)施例13、化合物(1-3)的合成將化合物(6)(0.4g),DMAP(0.1g)，用CH2Cl2(10ml)溶解，加吡啶(6ml),室溫下滴加0-二烯丙基溴咖啡酰氯的CH2Cl2(16ml)溶液，滴加定后再反應(yīng)lh，用2MHCl將pH調(diào)到3左右，室溫再攪拌2h，濾去不溶物，分液，CH2Cl2層用飽和NaCl水溶液洗至中性，無(wú)水MgS04干燥、過(guò)濾，蒸去CH2Cl2得油狀物，此油狀物用柱層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，得固體0.56g化合物(1-3)。[M+l]+:529。實(shí)施例14、化合物(3-7)的合成將化合物(11)溶于吡啶(6ml)及二氯甲垸(10ml)，溫度控制在05"C滴加O-二烯丙基咖啡酰氯的CH2Cl2(10ml)溶液，滴加完畢后反應(yīng)20min，力[UmlHCl中止。CH2C12用lmlHCl洗至pH為4，再用飽和NaCl洗至pH為7，無(wú)水MgS04干燥過(guò)濾，濃縮，得油狀物，用柱層析純化。洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚。將上述化合物(9.3g)，THF(150ml)，嗎啉(45ml)及催化量的Pd(pph3)4在氬氣保護(hù)下回流lh，冷卻到室溫。用lmHCl的飽和NaCl溶液洗THF層，直到pH值34，再用飽和NaCl洗THF層至中性；無(wú)水MgS04干燥，過(guò)濾，蒸去溶劑，得油狀物。此油狀物用柱層析純化，洗脫劑為CH3C1、甲醇及甲酸。蒸去溶劑，干燥，得泡沫狀固體粉末化合物(3-7)。!H匪畫R(d-DMSO):1.959(d，lH,J=12)，2.089(t，2H,J=10)，2.310(m,lH)，2.673(s,3H)，5.151(m,1H)，5.515(m，2H)，5.635(m,lH),6.101(m，2H)，6.302(d,lH,J=4),6.666(m,9H),7.377(m,3H),7.822(d，lH，J=5.2)，7.846(s，lH)，8.220(s，lH)，9.411(s，6H);[M+l]+:706.實(shí)施例15、對(duì)體外抗呼吸道合孢病毒(RSV)抑制作用對(duì)以上制備得到的部分化合物進(jìn)行了體外抗呼吸道合孢病毒(RSV)實(shí)驗(yàn)，以Hep-2細(xì)胞(人喉癌細(xì)胞)為病毒宿主，測(cè)定樣品抑制呼吸道合孢病毒(RSV)引起Hep-2細(xì)胞病變程度，72小時(shí)觀察細(xì)胞病變程度，用Reed-Mnench法分別計(jì)算樣品對(duì)呼吸道合孢病毒(RSV)的半數(shù)抑制濃度(IC5。)以及樣品對(duì)Hep-2細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TC。)和半數(shù)有毒濃度(TC50)。測(cè)試材料和方法病毒株RSV，Long株樣品處理樣品臨用前溶于DMSO配成適當(dāng)濃度，用培養(yǎng)液作3倍稀釋，共8個(gè)稀釋度。陽(yáng)性對(duì)照藥利巴韋林(RBV)測(cè)試方法Hep-2細(xì)胞種96孔培養(yǎng)孔，24小時(shí)后分別感染呼吸道合孢病毒(RSV)(200TCID50感染量)吸附4小時(shí)，棄病毒液，按以上稀釋度加入樣品，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性藥細(xì)胞對(duì)照孔，正常細(xì)胞對(duì)照孔和病毒對(duì)照孔，72小時(shí)觀察細(xì)胞病變程度(CPE)，用Reed-Muench法分別計(jì)算樣品對(duì)呼吸道合孢病毒(RSV)半數(shù)抑制濃度(IC5())以及樣品對(duì)Hep-2細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TCo)和半數(shù)有毒濃度(TC50)。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。表l:體外抗呼吸道合孢病毒(RSV)抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注RBV為對(duì)照品，利巴韋林實(shí)施例16、對(duì)體外抗HIV-1IIIB/H9病毒抑制作用對(duì)以上制備得到的部分化合物進(jìn)行了體外抗HIV-1IIIB/H9實(shí)驗(yàn)，用MT-4細(xì)胞培養(yǎng)，采用CPE法測(cè)定對(duì)細(xì)胞的毒性，采用測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清P24抗原方法測(cè)定化合物對(duì)HIV-1IIIB的抑制作用，分別得到樣品的半數(shù)抑制濃度(IC5())以及樣品的半數(shù)有毒濃度(TC50)。測(cè)試材料和方法病毒株HIV-1IIIB病毒株細(xì)胞T淋巴細(xì)胞MT-4樣品處理樣品臨用前溶于DMSO配成適當(dāng)濃度，細(xì)胞培養(yǎng)液配制。陽(yáng)性對(duì)照藥齊多夫定(AZT)HIV-1P24抗原檢測(cè)試劑盒用荷蘭BioMerieux公司產(chǎn)品。測(cè)試方法用CPE法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞的毒性(TC5Q和TCq)，將2X105細(xì)胞/ml100ul接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，同時(shí)分別加3倍稀釋的樣品或陽(yáng)性藥齊多夫定的8個(gè)濃度的藥液100ul，每個(gè)稀釋度重復(fù)3孔，設(shè)細(xì)胞對(duì)照組。置37。C、5XC02飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，加藥后第4天(96小時(shí))觀察細(xì)胞CPE，記錄細(xì)胞病變情況，計(jì)算TC50禾口TC0。用ELISA方法測(cè)定HIV-1P24抗原，MT-4細(xì)胞計(jì)數(shù)后以100TCID50病毒量感染細(xì)胞，37°C、5%C02飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)吸附1.5小時(shí)。以2X10Vml濃度接種96孔培養(yǎng)板，100ul/孔。加入稀釋藥物100ul/孔。37°C、5%(:02飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4天(96小時(shí))。取細(xì)胞上清液，進(jìn)行l(wèi):3000稀釋。按HIV-1P24抗原試劑盒提供的操作步驟測(cè)定HIV-1P24滴度，加藥組與病毒對(duì)照組比較，計(jì)算樣品的半數(shù)有效濃度(IC50)。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。表2:體外抗HIV-1IIIB/H9病毒抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>注AZT為對(duì)照品，齊多夫定實(shí)施例17、對(duì)體外抗乙型肝炎病毒(HBV)DNA病毒抑制作用對(duì)以上制備得到的部分化合物進(jìn)行了體外抗乙型肝炎病毒(HBV)DNA實(shí)驗(yàn)，在乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞(HepG2)的2.2.15細(xì)胞系中，研究對(duì)細(xì)胞毒性和對(duì)HBVDNA分泌的抑制效果。分別得到樣品的半數(shù)抑制濃度(IC5。)以及樣品的半數(shù)有母濃/爻、iL50yi，it厶厶i:)^ffl/M丄百開(kāi)rj力、jnr>v1>丄、/\口、jj屮市ij傘。測(cè)試材料和方法-病毒株乙肝炎病毒(HBV)DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞(HepG2)的2.2.15細(xì)胞系。樣品處理樣品臨用前溶于DMSO配成適當(dāng)濃度，4"保存，使用時(shí)用2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液配成所需濃度。陽(yáng)性對(duì)照藥拉米夫定(3TC)測(cè)試方法樣品配成20mg/ml母液，用2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液配成所需的濃度，然后用培養(yǎng)液從200ug/ml開(kāi)始5倍稀釋共8個(gè)濃度，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每濃度3孔，每4天換同濃度藥液，設(shè)無(wú)藥物細(xì)胞對(duì)照組，以觀察細(xì)胞病變?yōu)橹笜?biāo)，8天顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，完全破壞為4;75%為3;50%為2;25%為1;無(wú)病變?yōu)镺。計(jì)算每濃度藥液平均細(xì)胞病變程度和抑制率。按用Reed-Muench法分別計(jì)算半數(shù)有毒濃度(IC5Q)，最大無(wú)毒濃度(TCo)。各濃度組藥液的及細(xì)胞對(duì)照組的2.2.15細(xì)胞按分子克隆實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法提取HBVDNA、各樣品斑點(diǎn)雜交、放射自顯影、測(cè)量各雜交點(diǎn)的IOD值或OD值后，計(jì)算抑制率。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。表3:體外抗乙型肝炎病毒(HBV)DNA病毒抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>注3TC為對(duì)照品，拉米夫定。本發(fā)明通過(guò)上面的實(shí)施例進(jìn)行舉例說(shuō)明，但是，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并不限于這里所描述的特殊實(shí)例和實(shí)施方案。在這里包含這些特殊實(shí)例和實(shí)施方案的目的在于幫助本領(lǐng)域中的技術(shù)人員實(shí)踐本發(fā)明。任何本領(lǐng)域中的技術(shù)人員很容易在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下進(jìn)行進(jìn)一步的改進(jìn)和完善，因此本發(fā)明只受到本發(fā)明權(quán)利要求的內(nèi)容和范圍的限制，其意圖涵蓋所有包括在由所附權(quán)利要求所限定的本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的備選方案和等同方案。權(quán)利要求1、下述通式(I)所述的化合物或其鹽或其水合物為式中R為NH2，或任意單取代或雙取代的C1-C6的直鏈或支鏈的烷胺基，或任意取代的C3-C6的環(huán)烷胺基，或任意取代的C1-C6的芳香胺基，或四氫吡咯基，或哌啶基；Q1，Q2，Q3，Q4為H或如下式(II)所述的基團(tuán)，且Q1，Q2，Q3，Q4不同時(shí)為H或Q1，Q2，Q3，Q4不同時(shí)為如下式(II)所述的基團(tuán)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽或其水合物，其特征在于，所述R為氨基、甲氨基、二甲氨基、乙氨基、異丙氨基、四氫吡咯基、哌啶基、苯胺基、芐胺基、對(duì)甲苯胺基、環(huán)丙胺基。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽或其水合物，其特征在于，所述化合物為下列式(1-1)、(1-2)、(1-3)、(1-4)、(1-5)、(l畫6)、(2-1)、(2-2)、(2誦3)、(2-4)、(2-5)、(2-6)、(3-1)、(3-2)、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4、一種藥物組合物，其包含治療有效量的至少一種如權(quán)利要求1~3所述的化合物或其鹽或其水合物，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、植入劑或外用制劑。6、一種制備如權(quán)利要求1~3中任一所述的化合物或其鹽或其水合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟.-(1)由式4奎寧酸與R反應(yīng)生成式3化合物;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(2)再由式3與式II反應(yīng)生成通式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中R為NH2;或任意單取代或雙取代的CVC6的直鏈或支鏈的烷胺基；或任意取代的CVC6的環(huán)垸胺基；或任意取代的d-C6的芳香胺基；或四氫吡咯基；或哌啶基。7、權(quán)利要求13中任一所述的化合物或其鹽或其水合物在制備用于治療或預(yù)防病毒疾病的藥物中的應(yīng)用。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述病毒為呼吸道合胞病毒、艾滋病病毒、乙肝病毒。全文摘要本發(fā)明提供了咖啡?？鼘幩嵫苌锛捌渲苽浞椒?，并提供了包含該咖啡?？鼘幩嵫苌锏乃幬锝M合物，以及咖啡?？鼘幩嵫苌镌谥苽溆糜谥委熁蝾A(yù)防病毒疾病藥物的應(yīng)用，尤其在呼吸道合胞病毒及乙肝病毒中的應(yīng)用，具有安全高效低毒的特性。文檔編號(hào)A61P31/12GK101284799SQ20081008439公開(kāi)日2008年10月15日申請(qǐng)日期2008年3月20日優(yōu)先權(quán)日2007年3月23日發(fā)明者吳章桂,蔚魏申請(qǐng)人:浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠;吳章桂