專利名稱：：一種丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球，本發(fā)明還公開了其制備方法，及其在預(yù)防和治療制備肝損傷疾病的藥物中醫(yī)療用途，屬于藥物制備領(lǐng)域技術(shù)。
背景技術(shù)：
：罌粟籽油為罌粟科植物罌粟(PapaveiSomniferumL)種仔壓榨的油脂。罌粟籽油無毒、無麻醉作用，它是由少量的飽和脂肪酸和多烯不飽和脂肪酸組成，含有易于人體吸收的亞麻酸和花生酸，能夠降低人體高血脂，抑制體內(nèi)低密度脂蛋白的升高。是人體內(nèi)不能合成而必需的一種脂肪酸。這種脂肪酸通過人體吸收并轉(zhuǎn)化生成，亞麻酸，并最終生成前列腺素，從而參與調(diào)節(jié)人體的各種基本生理過程，包括調(diào)解血壓、膽固醇合成、細胞增生。罌粟籽油含醛類、呋喃酮類、吡嗪類、檸檬烯、異丁酸丁酯等香味物質(zhì)氣味獨特醇香。雖然，罌粟籽油具有很好的營養(yǎng)價值，但是服用這種原油型制劑和服用其他原油型制劑一樣，常常會出現(xiàn)腹瀉導(dǎo)致消化系統(tǒng)紊亂癥。另一方面，由于原油軟膠囊劑普遍存在著滲油、硬化和崩解遲緩等問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球，是將丹參脂溶性化合物和罌粟仔油進行組合，并利用多烯磷脂酰膽堿具有的表面活性特點，制成水包油型脂微球的一種乳化液分散體系。本發(fā)明還公開了上述脂微球的制備工藝，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明進一步公開了丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球在預(yù)防和治療制備肝損傷疾病的藥物中醫(yī)療用途。本發(fā)明涉及丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球，是利用多烯磷脂酰膽堿表面活性劑特點，經(jīng)過專用的乳化設(shè)備制成磷脂膜包封的水包油型微乳乳粒分散體系，其平均粒徑在50500rnn。本發(fā)明提供的丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合脂微球，是由以下各組份原料按總量1000ml制成的罌粟籽油50300g、丹參脂溶性化合物0.55.0g、多烯磷脂酰膽堿1050g、維生素E.100300mg、油酸l6g、木糖醇110g、甘油2025g、氫氧化鈉2540mg、加水至1000ml。制備工藝如下按比例稱取上述原料，在對乳化系統(tǒng)中油罐減壓抽真空以后，注入氮氣恢復(fù)到常壓，在氮氣保護狀態(tài)下，將罌粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰膽堿,加入維生素E,攪拌狀態(tài)下，油溫緩升至70'C,使多烯磷脂酰膽堿溶解，依次加入丹參脂溶性化合物、油酸攪拌均勻至完全溶解，恒溫，氮氣保護，成油相。取無菌水或者注射用水至乳化系統(tǒng)水罐中，水中充氮氣除氧，水溫升至至7(TC，依次加入依地酸二鈉、木糖醇或者甘油、氫氧化鈉攪拌至完全溶解，恒溫，成水相。在氮氣保護狀態(tài)下，啟動油罐高速乳化剪切機，將乳化系統(tǒng)水罐中水相緩注入油罐中，使之成乳化液，根據(jù)需要，測定初乳的pH值，其中對于口服液pH應(yīng)為pH6.5pH7.0，注射液應(yīng)為pH7.5pH8.5為宜。將上述獲得乳化液注入高壓乳化均質(zhì)機，數(shù)次循環(huán)均質(zhì)至脂微球的平均粒徑不大于200nm，90%粒徑累積值不大于400mn，且沒有大于lnm的顆粒。本發(fā)明所述罌粟籽油是經(jīng)過滅活不含有毒性成分，不飽和脂肪酸含量不低于80%，且可供食用或者可供注射用。本發(fā)明所述的丹參脂溶性化合物系從天然植物丹參中提取，或者是丹參酮I單體化合物；或者丹參酮IIA單體化合物；或者隱丹參酮單體化合物；或者二氫丹參酮I單體化合物；或者是丹參脂溶性混合物。.本發(fā)明所述的多烯磷脂酰膽堿是指磷脂含量不低于45%;油酸與亞油酸總含量不低于40%;溶血磷脂酰膽堿不得大于3.0%,或者含不飽和脂肪酸混合物的磷脂酰膽堿。進一步，也可以采用大豆磷脂酰膽堿(大豆卵磷脂)和從蛋黃中提取蛋黃磷脂酰膽堿(蛋黃卵磷脂)作為表面活性劑。本發(fā)明獲得的丹參脂溶性化合物和罌粟籽油組合與多烯磷脂酰膽堿制成的脂微球，通過磷脂酰膽堿膜作用,靶向聚于人體肝臟部位，用于肝損傷疾病病的預(yù)防和治療。本發(fā)明所述的丹參脂溶性化合物與罌粟籽油的組合，不只限于此還可以從植物、動植物中提取、也可以是全化學(xué)合成的脂溶性化合物與罌粟籽油形成的組合。本發(fā)明可以根據(jù)需要加入抗氧化劑、穩(wěn)定劑和螯合劑等。具體可以用維生素E作為抗氧化劑；油酸作為脂微球膜系穩(wěn)定劑；依地酸二鈉作為螯合劑。本發(fā)明所述的丹參脂溶性化合物與罌粟籽油的組合，不只限于此還可以從其他植物、動植物中提取的富含不飽和脂肪酸既可供食用也可以供注射用油。具體的可以采用橄欖油或者深海魚油。本發(fā)明可以采用任何有利的堿調(diào)節(jié)劑來調(diào)節(jié)pH值，具體采用氨氧化鈉。本發(fā)明可根據(jù)需要加入甜味劑和等參劑，具體可以加入木糖醇、甘油。以下是實驗本發(fā)明脂微球劑的藥效作用實驗?zāi)康奶接懙⑼芴崛∥锖屠浰谧杏徒M合脂微球劑對于小鼠瘤體生長的抑制作用。實驗動物體重1820g小鼠，雌雄各半。實驗過程-腫瘤細胞的復(fù)蘇H22肝癌細胞株采用快速融化的手段。這樣可以保證細胞外結(jié)晶在短時間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)結(jié)晶對細胞造成的損害。取出凍存管直接投入37'C溫水中，并輕輕搖動令其內(nèi)容盡快融化。從37'C水浴中取出凍存管，用75%乙醇消毒后開啟，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上的培養(yǎng)液，混合后低速離心，除去上清液，再重復(fù)用培養(yǎng)液洗一次。用適量培養(yǎng)液稀釋后，接種培養(yǎng)瓶，放入C02培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。腫瘤細胞的傳代懸浮細胞多采用離心方法傳代，即將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心轉(zhuǎn)數(shù)為8001000r/min;離心時間5mim然后去除上清液，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細胞懸液，然后傳代接種。腫瘤細胞的接種無菌條件下建立荷瘤鼠模型。腹腔接種小鼠7d后，抽取接種小鼠腹水，細胞計數(shù)板計數(shù)后，用無菌生理鹽水稀釋，調(diào)整細胞數(shù)約為2X107ml，分別給90只小鼠腋下接種該稀釋后的瘤細胞懸液0.2ml/只，全部制成荷瘤鼠模型，接種24h后給藥?？鼓[瘤實驗過程將90只小鼠隨機分為3組，鹽水注射對照組，按丹參酮IIA10mg/kg注射組和3ing/kg注射組。經(jīng)小鼠腹腔給藥10天后，停藥后次日，將各組動物稱重并斷髓處死，鈍性剝離瘤組織，稱重，計算各組小鼠的平均瘤重。比較各組陰性對照組與陽性對照組的差異，并計算對腫瘤生長的抑制率。抑制率=(對照組平均瘤重一丹參酮IIA組平均瘤重)/對照組平均瘤重X100M<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>丹參酮IIA與罌粟籽油組合的脂微球劑與鹽水對照組比較:*p<0.001，表明該劑對H22肝癌細胞有抑制作用。以下實驗本發(fā)明丹參酮IIA與罌粟籽油組合的脂微球劑12個月穩(wěn)定性考察結(jié)果-<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>有以上實驗證明本發(fā)明獲得丹參酮IIA脂溶提取物和罌粟仔油組合脂微球劑對H22肝癌細胞具有一定的凋亡和抑制作用，也證明了本發(fā)明獲得的脂微球乳化液分散體系性質(zhì)穩(wěn)定，且丹參酮脂溶提取物和多烯磷脂酰膽堿主要藥學(xué)質(zhì)量指標(biāo)穩(wěn)定。本發(fā)明的積極效果在于將丹參脂溶性化合物和罌粟仔油的組合，利用多烯磷脂酰膽堿表面活性劑特點，經(jīng)過專用的乳化設(shè)備制成磷脂膜包封的水包油型微乳乳粒分散體系，得到脂微球乳化液分散體系，用于預(yù)防和治療制備肝損傷疾病的藥物，并且對肝癌細胞具有一定的凋亡和抑制作用，可以作為肝腫瘤疾病治療藥物使用。具體實施例方式下面通過具體實施方式的詳細描述來進一步闡明本發(fā)明，但并不是對本發(fā)明的限制，僅僅作示例說明。實施例1取罌粟籽油100g、丹參酮IlA2g、多烯磷脂酰膽堿20g、維生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氫氧化鈉35mg、加水至1000ml;首先將乳化系統(tǒng)中油罐減壓抽真空以后，注入氮氣恢復(fù)到常壓，在氮氣保護狀態(tài)下，取罌粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰膽堿,加入維生素E，攪拌狀態(tài)下緩升溫至7(TC，使多烯磷脂酰膽堿溶解，依次加入丹參酮IIA、油酸鈉攪拌均勻至完全溶解，恒溫，氮氣保護，成油相；取無菌水至乳化系統(tǒng)水罐中，水中充氮氣除氧，升溫至70X:,依次加入甘油、氫氧化鈉攪拌至完全溶解，恒溫，成水相。在氮氣保護狀態(tài)下，啟動油罐高速乳化剪切機，將乳化系統(tǒng)水罐中水相緩注入油罐中，使之成乳化液，測定乳液pH值在pH7.58.5范圍內(nèi)，低于此范圍可用適量濃度氫氧化鈉溶液調(diào)整。將上述獲得乳液注入高壓乳化均質(zhì)機，數(shù)次循環(huán)均質(zhì)至脂微球的平均粒徑不大于200nm，90%粒徑累積值不大于400nm，且并且沒有大于lnm的顆粒。氮氣壓力過濾2阿和0.45^m膜至灌裝線液位罐，分裝，12rC/15min滅菌。實施例2取罌粟籽油50g、丹參酮I0.5g、多烯磷脂酰膽堿10g、維生素E100mg、油酸lg、氫氧化鈉25mg、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備。分裝，10(TC/30fflin滅菌。實施例3取罌粟籽油100g、二氫丹參酮l0.5g、多烯磷脂酰膽堿20g、維生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氫氧化鈉35mg、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。121'C/15min滅菌。實施例4罌粟籽油100g、隱丹參酮lg、多烯磷脂酰膽堿20g、維生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氫氧化鈉35mg、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。12rC/15min滅菌。實施例5取罌粟籽油200g、丹參酮脂溶混合物5g、不飽和脂肪酸混合物磷脂酰膽堿20g、維生素E150mg、油酸4g、氫氧化鈉25mg、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。100'C/30min滅菌。實施例6稱取罌粟籽油300g、丹參酮脂溶混合物5g、大豆磷脂酰膽堿20g、維生素E150mg、油酸6g、氫氧化鈉25mg、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。100°C/30min滅菌。實施例7罌粟籽油200g、丹參酮脂溶混合物2g、蛋黃磷脂酰膽堿20g、維生素E150rag、油酸4g、氫氧化鈉25mg、加水至1000ml:按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。100°C/30oiin滅菌。實施例8橄欖油100g、丹參酮脂溶混合物2g、多烯磷脂酰膽堿20g、維生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氫氧化鈉35rag、加水至1000ml;按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。12rC/15min滅菌。實施例9深海魚油100g、丹參酮脂溶混合物2g、多烯磷脂酰膽堿20g、維生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氫氧化鈉35mg、加水至1000ml:按與實施例1相同的制備過程進行制備，分裝。12rC/15min滅菌。權(quán)利要求1、一種丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合脂微球，是由以下各組份原料按總量1000ml制成的罌粟籽油50～300g、丹參脂溶性化合物0.5～5.0g、多烯磷脂酰膽堿10～50g、維生素E.100～300mg、油酸1～6g、木糖醇1～10g、甘油20～25g、氫氧化鈉25～40mg、余量為水。2、權(quán)利要求1所述脂微球的制備工藝，包括以下步驟按比例稱取上述原料，在對乳化系統(tǒng)中油罐減壓抽真空以后，注入氮氣恢復(fù)到常壓，在氮氣保護狀態(tài)下，將罌粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰膽堿,加入維生素E，攪拌狀態(tài)下，油溫緩升至7(TC，使多烯磷脂酰膽堿溶解，依次加入丹參脂溶性化合物、.油酸攪拌均勻至完全溶解，恒溫，氮氣保護，成油相；取無菌水或者注射用水至乳化系統(tǒng)水罐中，水中充氮氣除氧，水溫升至至7(TC，依次加入依地酸二鈉、木糖醇或者甘油、氫氧化鈉攪拌至完全溶解，恒溫，成水相；在氮氣保護狀態(tài)下，啟動油罐高速乳化剪切機，將乳化系統(tǒng)水罐中水相緩注入油罐中，使之成乳化液，乳液pH6.5pH8.5;進一步，將上述獲得乳液注入高壓乳化均質(zhì)機，數(shù)次循環(huán)均質(zhì)至脂微球的平均粒徑不大于200nm，90%粒徑累積值不大于400nm，且沒有大于lpm的顆粒。3、權(quán)利要求1所述的脂微球在預(yù)防和治療制備肝損傷疾病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種丹參脂溶提取物和罌粟仔油組合的脂微球，是將丹參脂溶性化合物和罌粟仔油進行組合，并利用多烯磷脂酰膽堿具有的表面活性特點，制成水包油型脂微球乳化液分散體系，用于預(yù)防和治療制備肝損傷疾病的藥物，對H22肝癌細胞具有一定的凋亡和抑制作用。文檔編號A61K9/16GK101336968SQ20081005100公開日2009年1月7日申請日期2008年7月22日優(yōu)先權(quán)日2008年7月22日發(fā)明者侯文閣,曦陳申請人:侯文閣