專利名稱：：因卡膦酸二鈉用于制備預防及治療骨質疏松癥的藥物的制作方法因卡膦酸二鈉用于制備預防及治療骨質疏松癥的藥物
技術領域：
骨質疏松癥是以骨組織顯微結構受損，骨礦成分和骨基質等比例不斷減少，骨質變薄，骨小梁數(shù)量減少，骨脆性增加和骨折危險度升高的一種全身骨代謝障礙的疾病。骨質疏松是老年人最常見的疾病。本發(fā)明涉及因卡膦酸二鈉在防治骨質疏松癥的應用。雙膦酸鹽是一種內(nèi)源性焦膦酸鹽類似物，附著在骨骼羥磷灰石表面，取代了骨基質的焦膦酸鹽，抑制破骨細胞的過量骨吸收，因此能有效治療骨轉移性疼痛。本課題組研究發(fā)現(xiàn)口服因卡膦酸二鈉對骨質疏松具有較好的預防及治療作用。當今社會與年齡和絕經(jīng)有關的骨質疏松癥的發(fā)病率已位居全球常見病的第7位,近20年來，雙膦酸鹽類藥物已發(fā)展成為最有效的骨吸收抑制劑，由于它能減少各種原因引起的骨吸收，因此被用來預防和治療原發(fā)性骨質疏松癥等骨代謝疾病。二膦酸(鹽)，即二膦酸或其藥學上可接受的鹽，是天然焦磷酸的合成類似物。由于它們對固相磷酸鈣的顯著親合力，二膦酸(鹽)能牢固地結合到骨礦物質上。因卡膦酸二鈉抑制骨吸收作用是第二代雙膦酸鹽阿侖膦酸鈉的io倍，在日本進行的m期臨床研究中顯示了很好的藥效。國外研究資料表明，因卡膦酸二鈉性能優(yōu)良，抑制骨吸收能力強，其治療惡性腫瘤引起的高鈣血癥的作用比帕米膦酸二鈉強50倍，是一種高效骨吸收抑制劑。骨吸收抑制作用維持時間長。毒副反應小，臨床上治療惡性腫瘤引起的高鈣血癥和溶骨性疼痛安全有效。本課題組研究發(fā)現(xiàn)口服因卡膦酸二鈉對骨質疏松具有較好的預防及治療作用。本發(fā)明的目的是提供了口服因卡膦酸二鈉在治療骨質疏松癥中的預防及治療作用。因卡膦酸二鈉，化學名環(huán)庚胺基甲撐二膦酸二鈉一水合物；分子式C8H17NNa206P2'H20;英文名IncadronateDisodium;分子量349.17;化學結構式
背景技術：

發(fā)明內(nèi)容具體實施方式實例h口服因卡膦酸二鈉對維甲酸造成骨質疏松癥的大鼠的防治1.1動物模型的制備大鼠(250-320g)，雌雄各半，共50只。隨機分為5組正常對照組，模型對照組，因卡膦酸二鈉0.5639mg/kg、3.6712mg/kg、10.6418mg/kg(低、中、高)三個劑量組。除正常對照組外，其他各組均灌服維甲酸65mg/kg，每日一次，連續(xù)2周。造模同時各給藥組依所設劑量灌胃給藥0.15ml/kg，每日一次，對照組給予等量溶媒，模型對照組正常飼養(yǎng)，連續(xù)4周。1.2因卡膦酸二鈉對維甲酸造成骨質疏松的大鼠骨密度、抗彎力的影響最后一次給藥后次日，以10%水合氯醛(350mg/kg,i.p.)麻醉大鼠，置于雙能線骨密度測定儀探頭下，仰位固定于檢測臺上，頭與身體呈直線，線球管對準身體縱軸中點，選擇大鼠骨質疏松敏感區(qū)域單側(左側)股骨中點的皮質骨和第三腰椎骨測定骨密度。應用萬能材料試驗機進行抗彎力測定。置標本于跨距為20mm的支架上，以2mm/min速度作三點完全試驗，記錄股骨斷裂載荷，單位為牛頓(N)。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表l。表1因卡膦酸二鈉對骨質疏松大鼠骨密度、抗彎力的影響(11=10，x土SD)組別抗彎力(N)股骨密度(g/cm2)椎骨密度(g/cm2)正<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>模型組與正常組比較P<0.05，"PO.Ol樣品組與模型組比較:Ap〈0.05，AAP<0.01由表1可見，與正常組相比模型組大鼠股骨密度、椎骨密度和抗彎力顯著下降，因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠股骨密度、椎骨密度和抗彎力，并且中、高劑量組效果顯著(PO.01)。1.3因卡膦酸二鈉對維甲酸造成骨質疏松的大鼠股骨長度、直徑和體積的影響取大鼠左右兩側股骨并去掉附著的軟組織，右股骨用游標卡尺測量長度與直徑，根據(jù)阿基米德原理測量其體積。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表2。表2因卡膦酸二鈉對骨質疏松大鼠股骨長度、直徑和體積的影響(n=10，x±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>模型組與正常組比較><0.05，"P<0.01樣品組與模型組比較:AP0.05，AAP<0.01由表2可見，與正常組相比模型組大鼠骨長度、直徑和體積均有下降，骨體積下降顯著(P<0.01)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠骨長度、直徑和體積。中、高劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠骨體積(PO.01)，并且高劑量組還能顯著提高骨質疏松大鼠骨長度和骨直徑(PO.Ol)。1.4因卡膦酸二鈉對維甲酸造成骨質疏松的大鼠骨重的影響取左側股骨，去除附著的肌肉和結締組織，在股骨上端和骨干骺端分別穿孔，雙蒸水沖洗骨髓。以2份三氯甲烷加1份甲醇混合液，脫脂72小時，置120。C烘箱6時，立即置干燥器內(nèi)冷卻后稱干重(g)，然后標本置瓷坩堝中，置80CTC馬福爐內(nèi)灰化6小時，干燥器內(nèi)冷卻后稱灰重(g)。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表3。表3因卡膦酸二鈉對骨質疏松大鼠骨重的影響(11=10，x士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>模型組與正常組比較P<0.05，"PO.01樣品組與模型組比較:AP0.05，AAP<0.01由表3可見，與正常組相比模型組大鼠骨濕重、干重和灰重均有下降，骨濕重、干重下降顯著(P<0.01)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠骨濕重、干重和灰重(P<0.01)。1.5因卡膦酸二鈉對維甲酸造成骨質疏松的大鼠骨鈣含量的影響依據(jù)國家標準GB12398—90進行測定。稱取樣品于小三角燒瓶中，加5mlHN03;HCL04(4:1)，加上漏斗，置于電熱板上加熱消化，如消化不完全，補加硝酸繼續(xù)加熱至無色透明為止，加2ml去離子水，加熱以除去多余的硝酸。取下冷卻，用2%氧化鑭溶液定容至100ml容量瓶中。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表4。表4因卡膦酸二鈉對骨質疏松大鼠骨鈣含量的影響01=10，x土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表4可見，與正常組相比模型組大鼠骨鈣含量下降顯著(PO.01)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠骨鈣含量，中、高劑量組效果顯著(P<0.01)。實例2:因卡膦酸二鈉對卵巢切除大鼠的骨質疏松的防治絕經(jīng)伴隨骨質疏松的發(fā)生已為許多流行病學研究所證實。絕經(jīng)可引起糖代謝紊亂，產(chǎn)生胰島素抵抗，而糖代謝紊亂是引起晚期糖化終末產(chǎn)物增加的主要原因。高水平的晚期糖化終末產(chǎn)物可導致成骨細胞數(shù)量減少，活性降低，骨形成降低，最終造成骨質疏松癥。目前，對絕經(jīng)后骨質疏松的治療主要采用激素替代療法，雖然對骨質疏松有一定的療效，但可引起乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。本發(fā)明采用卵巢切除方法制作大鼠骨質疏松模型，證明因卡膦酸二鈉對絕經(jīng)后骨質疏松的防治作用。1.6動物模型的制備大鼠(250-320g)，雌雄各半，共50只。隨機分為5組假手術組，模型對照組，樣品高、中、低三個劑量組。在無菌條件下，將大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉溶液，模型對照組和樣品組麻醉后進行經(jīng)背部切口，切除雙側卵巢。假手術組打開腹腔后切除少量脂防。手術后一周，將高、中、低三個劑量的因卡膦酸二鈉樣品稀釋后供大鼠每R飲用。其它組飲用自來水，常規(guī)喂養(yǎng)3個月。1.7因卡膦酸二鈉對大鼠骨密度、抗彎力的影響最后一次給藥后次日，以10%水合氯醛(350mg/kg,i.p.)麻醉大鼠，置于雙能線骨密度測定儀探頭下，仰位固定于檢測臺上，頭與身體呈直線，線球管對準身體縱軸中點，選擇大鼠骨質疏松敏感區(qū)域單側(左側)股骨中點的皮質骨和第三腰椎骨測定骨密度。應用萬能材料試驗機進行抗彎力測定。置標本于跨距為20mm的支架上，以2mm/min速度作三點完全試驗，記錄股骨斷裂載荷，單位為牛頓(N)。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表5。'表5因卡膦酸:二鈉對大鼠骨密度、抗彎力的影響(11=10，x士SD)組別抗彎力(N)股骨密度(g/cm2)椎骨密度(g/cm2)假手術組117.52±11.360.65±0.040.70±0.01模型組91.32±5.67**0.47士0.01".承氺0.48±0.01低劑量組98.44±13,21A0.53±0,01A0,54±0.05A中劑量組104.81±9.76AA0,59±0.09AA0.62±0.05AA高劑量組118.43±10.56AA0.66土0.05厶a0.69±0.04AA模型組與正常組比較::><0.05，"PO.01樣品組與模型組比較:AP<0,05，AAP<0,01由表5可見，與假手術組相比模型組大鼠股骨密度、椎骨密度和抗彎力顯著下降，因卡膦酸二鈉高、中劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨密度、椎骨密度和抗彎力(P<0.01)。1.8因卡膦酸二鈉對大鼠股骨長度、直徑和體積的影響取大鼠左右兩側股骨并去掉附著的軟組織，右股骨用游標卡尺測量長度與直徑，根據(jù)阿基米德原理測量其體積。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表6。表6因卡膦酸二鈉對大鼠股骨長度、直徑和體積的影響(n=10，x±SD)組別骨長度(cm)骨直徑(cm)骨體積(cm3)假手術組3.498±0.0440.334±0.0150.705±0.025模型組3.407±0.042*0.296±0.021'0.618土0.011"低劑量組3.423±0.010A0,317±0.005A0.627±0.012A中劑量組3.463±0.037AA0.326i0.017AA0.656±0.018AA高劑量組3.489±0.035AA0.335±0.015AA0.696±0.024AA模型組與正常組比較P<0.05，P<0.01樣品組與模型組比較:Ap〈0.05，AAP<0.01由表6可見，與假手術組相比模型組大鼠骨長度、直徑和體積均有下降，骨體積下降顯著(PO.Ol)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠骨長度、直徑和體積，中、高劑量組效果顯著(PO.01)。1.9因卡膦酸二鈉對大鼠骨重的影響取左側股骨，去除附著的肌肉和結締組織，在股骨上端和骨干骺端分別穿孔，雙蒸水沖洗骨髓。以2份三氯甲烷加1份甲醇混合液，脫脂72小時，置120'C烘箱6小時，立即置干燥器內(nèi)冷卻后稱干重(g)，然后標本置瓷坩堝中，置80O'C馬福爐內(nèi)灰化6小時，干燥器內(nèi)冷卻后稱灰重(g)。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表7。表7因卡膦酸—鈉對大鼠骨重的影響(n=10，^士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>模型組與正常組比較》<0.05，P<0.01樣品組與模型組比較:AP<0.05，AAP<0.01由表7可見，與假手術組相比模型組大鼠骨濕重、干重和灰重均有下降(P<0.05)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠骨濕重、干重和灰重，中、高劑量組對骨質疏松大鼠骨濕重、干重效果顯著(P<0.01)。1.10因卡膦酸二鈉對大鼠骨鈣含量的影響依據(jù)國家標準GB12398—90進行測定。稱取樣品于小三角燒瓶中，加5mlHN03;HCL04(4:1)，加上漏斗，置于電熱板上加熱消化，如消化不完全，補加硝酸繼續(xù)加熱至無色透明為止，加2ml去離子水，加熱以除去多余的硝酸。取下冷卻，用2%氧化鑭溶液定容至100ml容量瓶中。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學處理，作t檢驗判斷顯著性，結果見表8。表8因卡膦酸二鈉對大鼠骨鈣含量的影響(11=10，i±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>模型組與正常組比較》<0.05，"PO.Ol樣品組與模型組比較AP0.05，AAP<0.01由表8可見，與假手術組相比模型組大鼠骨鈣含量下降顯著(P<0.01)。因卡膦酸二鈉低、中、高劑量組均能提高骨質疏松大鼠骨鈣含量，中、高劑量組效果顯著(P<0.01)。權利要求1.因卡膦酸二鈉用于制備預防和治療骨質疏松癥藥物，其特征在于因卡膦酸二鈉可以制備成臨床上治療骨質疏松癥的藥物制劑。2、根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于因卡膦酸二鈉的使用劑量范圍為O.lmg100mg。3、根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于包括含有因卡膦酸二鈉的用于治療或預防骨質疏松的藥物組合物。4、根據(jù)權利要求l所述的因卡膦酸二鈉作為預防和治療骨質疏松癥藥物的應用，其特征是因卡膦酸二鈉與臨床上接受的藥物載體或輔料配合制成治療骨質疏松的片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、干混懸劑、口服液等口服制劑形式。全文摘要本發(fā)明公開了因卡膦酸二鈉用于制備防治骨質疏松癥藥物的用途，動物實驗研究發(fā)現(xiàn)因卡膦酸二鈉不僅對卵巢切除大鼠的骨質疏松癥具有較好的預防及治療作用，并且對維甲酸造成骨質疏松的大鼠的骨密度、骨鈣含量有明顯提高。因卡膦酸二鈉可制成臨床可接受的片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、干混懸劑、口服液等口服制劑中的任何一種，供臨床原發(fā)性及繼發(fā)性骨質疏松癥及由骨質疏松癥引起的骨折癥的應用。文檔編號A61P19/00GK101254195SQ20081001078公開日2008年9月3日申請日期2008年3月28日優(yōu)先權日2008年3月28日發(fā)明者洪王,靜韓申請人:王洪;韓靜