專利名稱：：鐵代謝改善劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及改善生物體內鐵代謝的鐵代謝改善劑，特另'J涉及使接受了血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者的生物體內鐵代謝得到改善的鐵代謝改善劑。進而，本發(fā)明涉及通過對于4妾受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者給予該鐵代謝改善劑而改善生物體內的鐵代謝的方法，特別涉及通過使用含有該鐵代謝改善劑的透析液和/或透析用補充液而使生物體內的鐵代謝得到改善的方法。進而另外本發(fā)明涉及血液凈化方法，該方法包含對于慢性腎衰竭患者，使用含有該鐵代謝改善劑的透析液進行血液凈化的血液透析和血液過濾透析，進而涉及血液凈化方法，該方法包含對于慢性腎衰竭患者，使用含有該鐵代謝改善劑的透析用補充液進行血液凈化的血液過濾透析和血液過濾。
背景技術：
：接受了以血液透析為代表的血液凈化療法的慢性腎衰竭患者由于大量的并發(fā)癥而使其QOL(生存質量)降低或住院、死亡的危險率增高，作為其因子，存在有慢性炎癥狀態(tài)、營養(yǎng)障礙、動脈硬化、再者是促紅細胞生成素(EPO)抵抗性腎性貧血，通過它們相互作用，而使預后惡化，這是普遍知道的事實。與這些病況有關的一元機理還沒有搞清，猜想其一個原因是伴隨腎衰竭的鐵代謝異常，即鐵在各種臟器.組織中的蓄積以及由以催化鐵的芬頓反應為介導的氧化應力(酸化義卜的增幅所導致的細胞障礙。接受了血液凈化療法的慢性腎衰竭患者所發(fā)生的腎性貧血是由于伴隨腎功能降低而在腎組織內產生的促紅細胞生成素相對生成不足，從而骨髓中的紅細胞生成減少的狀態(tài)，作為對于其的治療，可以使用人基因重組型促紅細胞生成素(rHuEPO)制劑，另外最近，對于透析療法引入前的保存期腎衰竭患者，也使用rHuEPO制劑。但是，即使給予rHuEPO制劑，也散見由于對于EPO的造血反應性降低而不能得到貧血改善的EPO抵抗性腎性貧血。其原因多是因為骨髓中的鐵缺乏，而對于慢性腎衰竭，由rHuEPO治療導致造血亢進，由此鐵的需要增加的緣故。但是，已知有下述的狀態(tài)，即，盡管由血清鐵蛋白濃度可以判斷儲存了足夠的鐵，但進而通過給予鐵，也缺乏改善貧血的功能性鐵。本發(fā)明人們搞清了透析患者的鐵代謝異常的存在和其一部分機制(非專利文獻1)。即，血液透析患者的血清鐵與健常人相比是低的值，但血清鐵蛋白濃度是有統(tǒng)計學意義的高值。另外這些患者的多核白細胞內鐵濃度升高至健常人的3倍左右，同時鐵蛋白濃度也升高至約1.5倍。進而，即使僅對于血清鐵蛋白濃度低的患者進行研究，仍然有同樣的細胞內鐵濃度的升高。即，對于透析患者，與血清鐵蛋白濃度無關，多核白細胞內的鐵濃度升高。在細胞內鐵代謝中有鐵輸送蛋白參與。對于鐵輸送蛋白，在細胞水平，特別是對于十二指腸或網狀內皮系細胞可以得到許多新的發(fā)現(xiàn)。作為向細胞內攝入鐵的蛋白，除了攝入與3價鐵(Fe3+)結合的轉鐵蛋白的轉鐵蛋白受體(TfR)以外，還已知有輸送2價鐵(Fe2+)的二價金屬離子轉運體1(DMT1)，另外作為向細胞外汲出鐵的蛋白，已知有膜鐵轉運蛋白(7工口求一千》)1(FP1)。本發(fā)明人們另外對于多核白細胞的細胞內鐵濃度的升高與鐵輸送蛋白的關聯(lián)性進行闡明(非專利文獻l)。即，確認TfR與鐵向多核白細胞細胞內的攝入有關，F(xiàn)P1與鐵的汲出有關。另外，可知在血液透析患者的多核白細胞中，與健康正常人相比，在mRNA水平和蛋白水平作為鐵攝入蛋白的TfR表達增加，作為鐵汲出蛋白的FP1表達降低。以上暗示了對于血液透析患者，由于這些鐵輸送蛋白的調節(jié)異常，即"鐵的包裹"，導致多核白細胞內的鐵過剩蓄積。在全身的細胞中都發(fā)現(xiàn)有鐵輸送蛋白，因此在透析患者的多核白細胞中確認的同樣的表達變化即使在網狀內皮系中也有發(fā)生的可能性。生物體中最重要的鐵代謝是在老化的紅細胞網狀內皮系中貪食、從血紅蛋白將鐵取出并在骨髓中用于造血而使鐵再利用的所謂再生體系。通過該體系，一天有約20~25mg的鐵得到再利用。當在肝臟或脾臟的網狀內皮系和骨髓巨噬細胞中產生"鐵的包裹"時，鐵代謝的再生體系喪失，雖然血清鐵蛋白值為高值，但陷入鐵不足的功能性鐵缺乏的狀態(tài)。另一方面，對于多數慢性腎衰竭患者，認為其作為炎癥反應急性期指標之一的C-反應性蛋白質(CRP)為高值，處于慢性炎癥狀態(tài)。一直以來，對于伴隨慢性炎癥性疾患的慢性病貧血，報道了其機理為在脾臟和肝臟的巨噬細胞中蓄積了鐵，以及由于網狀內皮系中"鐵的包裹"而導致再利用障礙(非專利文獻2)。另外，EPO抵抗性腎性貧血的一部分也表現(xiàn)與慢性炎癥狀態(tài)關聯(lián)(非專利文獻3)。最近，報道了慢性病貧血的病況與炎癥性細胞因子的關聯(lián)性(非專利文獻4)，因此作為透析患者的鐵輸送蛋白調節(jié)障礙的原因物質，炎癥性細胞因子受到人們的矚目。本發(fā)明人們使用來源于人單核細胞的培養(yǎng)細胞，研究了這些炎癥性細胞因子給鐵輸送蛋白所帶來的影響(非專利文獻5)。其結果認為，在mRNA水平和蛋白水平上有T漢、DMT1的表達增加和FP1的表達抑制。另外，即使使鐵處于前負荷的狀態(tài)，利用細胞因子刺激也有同樣的變化。即，在網狀內皮系中，細胞因子與細胞內鐵濃度無關，暗示引起了鐵輸送蛋白調節(jié)障礙。在現(xiàn)有的市售透析劑中，為了穩(wěn)定化而含有少量(8~12mEq/L)的乙酸，也暗示了該乙酸有可能通過刺激單核細胞而助長高細胞因子血癥。另一方面，在作為檸檬酸轉換酶的烏頭酸酶中，其活性中心存在鐵-硫配位化合物，當細胞內鐵濃度低時，鐵-硫配位化合物分解，酶活性降低。另外，報道了細胞質中存在的作為鐵代謝控制蛋白的IRP(鐵調節(jié)蛋白，ironregulatoryprotein)的內IRP1在缺乏鐵的情況下,與在鐵輸送蛋白的mRNA中存在的IRE(鐵應大型要素，ironresponsiveelement)結合，產生TfR和DMT1的mRNA的分解障礙和FP1的mRNA的翻譯引發(fā)障礙(非專利文獻6)。已知IRP1在細胞內鐵濃度高時具有烏頭酸酶活性，因此檸檬酸通過烏頭酸酶活性的升高而減弱IRP1-IRE的結合，有糾正鐵輸送蛋白異常的可能性。綜上所述，源于透析患者呈現(xiàn)的高細胞因子血癥，在網狀內皮系細胞中引起與多核白細胞同樣的鐵輸送蛋白調節(jié)障礙，由網狀內皮系中"鐵的包裹，，導致的鐵利用障害成為EPO抵抗性腎性貧血的主要原因，進而，在影響患者預后的各種并發(fā)癥的發(fā)病、發(fā)展中扮演著中心性的角色。因此，依據以上各點，對于接受了血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，通過防止高細胞因子血癥或者糾正鐵輸送蛋白的調節(jié)異常，網狀內皮系的"鐵的包裹，，可以得到解放，隨之血清鐵濃度升高，鐵的利用性增加，因而由此可以改善EPO抵抗性腎性貧血，回避并發(fā)癥發(fā)生的風險，并有助于患者的QOL增加或預后的改善。但是，現(xiàn)狀是沒有公開在接受了血液凈化療法的慢性腎衰竭患者中產生的鐵代謝異常的改善，即改善鐵向細胞內的過剩攝入和釋放抑制的具體手段，或轉移在網狀內皮系中蓄積的鐵以在造血體系中利用的解決方法。另外，現(xiàn)狀是作為對于呈現(xiàn)EPO抵抗性貧血的慢性腎衰竭患者的治療手段，利用服用鐵劑的EPO制劑療法的輔助療法是有效的，但除了依賴于專業(yè)醫(yī)師的經驗以外，沒有特別的方法。非專利文獻1OtakiY,等Am.J.KidneyDis.:43，1030-1039(2004)非專利文獻2非專利文獻3224-227(2001)非專利文獻4(2003)非專禾寸文獻5NanamiM,等ArteriosclerThromb.Vasc.Biol.:25,2495-2501(2005)非專利文獻6HentzeMW等Cell:117,285-297(2004)
發(fā)明內容本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀，以提供鐵代謝改善劑為課題，所述鐵代謝改善劑特別是使接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者的生物體內的鐵代謝得到改善。另外本發(fā)明提供一種方法，該方法通過對于接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者給予本發(fā)明的鐵代謝改善劑而改善生物體內的鐵代謝，特別是通過使用含有該鐵代謝改善劑的透析液和/或透析用補充液而使生物體內的鐵代謝得到改善。進而，本發(fā)明的課題在于提供一種血液凈化方法，該方法包含對于慢性腎衰竭患者，使用含有該鐵代謝改善劑的透析液進行血液凈化的血液透析和血液過濾透析，進而提供一種血液凈化方法，該方法包含對于慢性腎衰竭患者，使用含有該鐵代謝改善劑的透析用補充液進4亍血液凈化的血液過濾透析和血液過濾。對于解決上述課題的本發(fā)明，其方案包括以下的構成。(1)鐵代謝改善劑，其特征在于，含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽；(2)如上述(1)所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽；(3)如上述(1)或(2)所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質不含有乙酸和/或乙酸鹽、而含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽；，(4)如上述(1)、(2)或(3)所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽作為電解質，進而將其他電解質、葡萄糖單獨或多種組合來含有。更具體地，本發(fā)明是(5)如上述(1)~(4)中任一項所述的鐵代謝改善劑，其是透析液的形式；(6)如上述(1)~(4)中任一項所述的鐵代謝改善劑，其是透析用補充液的形式。另外，本發(fā)明的其他方案有(7)改善生物體內的鐵代謝的方法，其特征在于，對于接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，給予如上述(l)~(4)中任一項所述的鐵代謝改善劑；更具體地，(8)改善生物體內的鐵代謝的方法，其特征在于，對于接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患7者，使用含有如上述(5)或(6)所述的鐵代謝改善劑的透析液和/或透析用補充液。進而，本發(fā)明另外的其他方案是(9)包括血液透析和血液過濾透析的血液凈化方法，其特征在于，對于慢性腎衰竭患者，使用含有如上述(5)所述的鐵代謝改善劑的透析液來進行血液凈化；(10)包括血液過濾透析和血液過濾的血液凈化方法，其特征在于，對于慢性腎衰竭患者，使用含有如上述(6)所述的鐵代謝改善劑的透析用補充液來進行血液凈化。本發(fā)明提供的鐵代謝改善劑是包含含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽、特別含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽作為電解質的鐵代謝改善劑，利用所述鐵代謝改善劑，對于接受血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，具有使由腎衰竭導致降低的鐵利用性提高的效果。另外，本發(fā)明的鐵代謝改善劑使形成鐵再利用的鐵代謝的再生體系恢復，其結果是可以防止高細胞因子血癥，同時糾正生物體內的鐵輸送蛋白的調節(jié)異常。因此，利用本發(fā)明的鐵代謝改善劑，可以改善慢性腎衰竭患者的EPO抵抗性腎性貧血，回避并發(fā)癥發(fā)生的風險，有助于患者的QOL增加或預后的改善，從這些方面考慮，是特別優(yōu)選的。具體實施例方式本發(fā)明提供的鐵代謝改善劑如上所述，是包含含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽、特別含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽作為電解質的鐵代謝改善劑。更具體地，是一種鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質不含有乙酸和/或乙酸鹽、而含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽，進而將其他電解質、葡萄糖單獨或多種組合來含有。因此，本發(fā)明的鐵代謝改善劑優(yōu)選以透析液的形式或者透析用補充液的形式來給予。這種透析液或者透析用補充液，優(yōu)選是含有碳酸氫離子的碳酸氫鈉作為堿化劑的碳酸氫透析液或者透析用補充液。從上述觀點考慮，本發(fā)明提供的鐵代謝改善劑對于透析液，優(yōu)選制成含有電解質成分、pH調節(jié)劑和/或葡萄糖的所謂"A劑"的形式，在實際給予時，利用稀釋水稀釋，或者優(yōu)選與包含碳酸氫離子的碳酸氫鈉的所謂"B劑"一起稀釋來使用。另外，對于透析用補充液，優(yōu)選制成含有電解質成分、pH調節(jié)劑和/或葡萄糖的所謂"B液"的形式，在實際給予時，與包含電解質成分、pH調節(jié)劑和碳酸氫鈉的所謂"A液"混合使用。在本發(fā)明的鐵代謝改善劑中含有的其他電解質成分除了檸檬酸和/或檸檬酸鈉等的檸檬酸鹽以外，其他還可以列舉例如氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、乳酸鉀、乳酸鈣等。特別優(yōu)選的電解質成分有氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和檸檬酸鈉。除此以外進而含有葡萄糖，在作為透析液和/或透析補充液調制時，含有形成適當pH的pH調節(jié)劑。作為這種pH調節(jié)劑，可以列舉檸檬酸、乳酸、鹽酸、蘋果酸、抗壞血酸、酒石酸、氬氧化鈉等，特別優(yōu)選檸檬酸、鹽酸。因此，對于本發(fā)明提供的鐵代謝改善劑中上述各成分的配合量，在稀釋、混合成適當的濃度時，碳酸氬透析液或者碳酸氫補充液優(yōu)選為下述的濃度。鈉離子120~150mEq/L、鉀離子0~5mEq/L、鈣離子0~5mEq/L、鎂離子0~2mEq/L、氯離子55~135mEq/L、碳酸氫離子20~45mEq/L、檸檬酸離子0.02~5mEq/L、葡萄糖0~3.0g/L當含有鈣離解質成分時，由檸檬酸和/或檸檬酸鹽、例如檸檬酸鈉而生成不溶性化合物，但通過利用檸檬酸將pH調低，可以防止不溶性化合物的生成。進而通過使用檸檬酸，還可以發(fā)揮沉淀抑制效果。即，當將在所謂的透析液用"A劑，，和透析用補充液用"B液"中含有的電解質成分，與在所謂的透析液用"B劑"和透析用補充液用"A液"中含有的碳酸氬離子的碳酸氫鈉混合時，與碳酸氫離子鈣和鎂離子進行反應而生成作為不溶性化合物的碳酸金屬鹽，因此在使用時，作為稀釋、混合后的人工腎臟用透析液來調制，此時，利用檸檬酸的沉淀生成抑制效果，有長期保持穩(wěn)定性的優(yōu)點。在本發(fā)明的鐵代謝改善劑中，檸檬酸和/或檸檬酸鹽的使用量優(yōu)選是作為制劑將pH調節(jié)為2.2~2.9左右的量，通常作為檸檬酸離子，只要含有調節(jié)成上述0.02~5mEq/L的量即可。另外，在現(xiàn)有的所謂透析液用"A劑"和透析用補充液用"B液"中含有乙酸，相對于此，對于本發(fā)明的鐵代謝改善劑，特征在于完全不含有乙酸。因此，在作為含有本發(fā)明的鐵代謝改善劑的透析液和/或透析用補充液進行調制時，僅使用碳酸氫鈉作為堿化劑，從而可以說是更為生理性的處方。本發(fā)明提供的鐵代謝改善劑可以利用在其中含有的檸檬酸和/或檸檬酸鹽的功能，通過烏頭酸酶活性的升高而減弱IRP1-IRE的結合，糾正鐵輸送蛋白的調節(jié)異常。另外，本發(fā)明的鐵代謝改善劑通過在其中完全不含有乙酸，防止透析患者的高細胞因子血癥，糾正鐵輸送蛋白的調節(jié)異常。其結果是可以解放網狀內皮系中的"鐵的包裹，，，隨之血清鐵濃度升高，鐵代謝異常得到改善，鐵利用性提高，由此對于EPO抵抗性腎性貧血的改善作出很大的貢獻。在這一點上，本發(fā)明的鐵代謝改善劑可以說具有極其特異的作用。本發(fā)明的鐵代謝改善劑除了透析液的形式或者透析用補充液的形式以外，還可以與醫(yī)藥上允許的載體、賦形劑、稀釋劑等一起混合，而以液劑、酏劑、膠嚢劑、顆粒劑、丸劑、透皮吸收型制劑、懸浮劑-乳劑、栓劑、散劑、酒精劑、片劑、糖漿劑、注射劑、貼劑、檸檬水劑(卩乇大一七、劑)等的形式給予?；蛘咭材芤允褂昧诉m當賦形劑的經口攝取(攝食)的形式來給予，這種形式可以列舉例如粉末、顆粒、片、液體(飲料、膠狀飲料等)、糖等。實施例以下通過具體的試驗例和實施例來說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限定于此。實施例1:對于腎衰竭狗，透析制劑帶給鐵代謝的作用使用腎衰竭狗，實際進行透析，研究此時對于鐵代謝的作用。[試-險方法]對于絕食約18小時的雄性比格犬，通過橈側皮靜脈內給予戊巴比妥鈉(30mg/kg)進行麻醉后，從正中線剖腹，完全結扎兩側的尿管。手術后第2天進行透析實驗。作為導入麻醉，從橈側皮靜脈內給予戊巴比妥鈉(30mg/kg),即使在透析中也可以為了維持麻醉而使用輸液泵從靜脈內持續(xù)地給予戊巴比妥鈉。在大腿動靜脈中插入固定充滿加入肝素的生理鹽水(10單位/mL)的8Fr導管，制作血液出入口(7'、，'7卜、、7夕七只)。為了管理吸呼，進行氣管插管，給動物裝配人工呼吸器。血液透析使用單獨用血液透析過濾裝置DBG-01(日機裝(抹)制)進行。透析膜和血液回路分別使用PS-0.6UW和小兒用血液回路。作為試驗組，使用包含下表1所述處方的本發(fā)明的透析液和市售透析液[AK-乂"j夕(注冊商標)DL],分別各自實驗3例。血液透析在下述條件下進行，即，血液流量為100mL/min,透析液流量為300mL/min,不進行除水，透析時間為4小時。為了防止血液凝固，在透析開始前將100單位/kg體重的肝素從靜脈內給予，以后以每1小時50單位/kg體重的量從靜脈內追加給予。血液在兩側尿管結扎手術前、透析開始前、透析開始2和4小時后采取。采取的血液在冷卻下離心分離，除了測定血清中的鐵和不飽和鐵結合能(UIBC)以外，還測定血漿中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、檸檬酸和乙酸?？傝F結合能(TIBC)由血清鐵+UIBC算出。透析結束后，從血液出入口部位用生理鹽水進行脫血、灌流后，解剖動物，從脾臟采取組織。對于采取的組織，進行鐵藍染色，通過圖像解析而將鐵染色的比例作為％求得。進而，進行組織中鐵蛋白的免疫組織染色，用肉眼進行組織觀察。對于組織研究，將本發(fā)明透析液和市售透析液的試驗組2組與沒有經過處置的正常組(3例)和未實施透析的腎衰竭組(3例)進行比較。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>[試驗結果和考察]檸檬酸濃度、血清鐵濃度、UIBC、TIBC的結果分別示于圖1~4。另外，透析開始2小時后的乙酸濃度的結果示于下表2。兩側尿管結扎后第2天，透析前的腎衰竭狗的血漿中Cre和BUN濃度顯著升高，可以確認引起腎衰竭。由腎衰竭導致升高的血漿中Cre和BUN濃度通過本發(fā)明的透析液組和市售的透析液組任一者的透析而迅速降低。在本發(fā)明的透析液組中，以與透析前值相同程度的值推移，但對于市售的透析液組，通過透析，血漿中檸檬酸濃度降低(圖1)。當進行組間比較時，在透析2和4小時后，本發(fā)明的透析液組與市售的透析液組相比，是有統(tǒng)計學意義的高值。對于發(fā)明的透析液組，血漿中乙酸濃度在透析中沒有檢測到，但對于市售的透析液組，血漿中乙酸濃度通過透析而有統(tǒng)計學意義的升高(p<0.05,表2)。對于鐵，由腎衰竭導致降低的血清鐵在利用本發(fā)明的透析液進行的透析中，相對于透析前值有統(tǒng)計學意義地升高(圖2)。另一方面，在利用市售的透析液進行的透析中，沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的變化。在二元配置分散分析中，不僅根據透析時間，即使根據透析液的種類，鐵值也有統(tǒng)計學意義的差異(從透析前至4小時后時間，F(xiàn)(2，12)=4.46,p<0.05;透析液，F(xiàn)(l,12)=9.71，p<0.01;時間x透析液，F(xiàn)(2,12)=1.09,p>0.05)。UIBC通過透析，相對于本發(fā)明的透析液組和市售的透析液組任一者的透析前值有統(tǒng)計學意義地降低，在二元配置分散分析中，對于透析時間和透析液的種類，UIBC值有統(tǒng)計學意義的差異(從透析前至4小時后時間，F(xiàn)(2,12"9.91,pO.01;透析液，F(xiàn)(l,12)=7.82,p<0.05;時間x透析液，f(2，12)=0.53，p>0.05,圖3)。另外，TIBC通過透析幾乎沒有發(fā)現(xiàn)變化，另外也沒有透析液間的有統(tǒng)計學意義的差異(圖4),因此UIBC的變化反映在鐵的變化中。對于脾臟組織的鐵染色，腎衰竭組與沒有經過處置的組相比，鐵染色的比例升高，由透析導致升高的鐵染色的比例降低，本發(fā)明的透析液與市售的透析液相比，鐵染色的程度弱(圖5)。進行統(tǒng)計解析后，發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的透析液組與市售的透析液組之間脾臟的鐵染色％有統(tǒng)計學意義的差異(p<0.05)。對于脾臟組織的鐵蛋白染色，利用本發(fā)明透析液進行的透析，與市售透析液相比，鐵蛋白染色的程度減弱，染色的細胞數也少。這些組織研究的結果暗示產生了在腎衰竭狀態(tài)下鐵向臟器內的包裹，和由透析行為本身導致的鐵的包裹的解放，對于鐵的包裹的解放，本發(fā)明的透析液與市售的透析液相比表現(xiàn)得更強。由以上可知，通過使用了本發(fā)明透析液的透析，有可能表現(xiàn)出由腎衰竭導致降低的鐵利用性的增加效果。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例2:通過對于兩腎摘出大鼠給予檸檬酸而產生的鐵代謝改善效果的研究使用全部摘出腎臟的大鼠，對于給予檸檬酸時鐵代謝的作用進行研咒。使用8周齡的雄性CD(SD)大鼠(體重約300g)，利用下表3的試驗組進行試驗。將大鼠通過腹腔內給予戊巴比妥鈉(50mg/kg)進行麻醉后，從大鼠背中側全部摘出腎臟(表3的第l組沒有經過處置)，實施中心靜脈導管(CVC)留置手術。在手術實施約24小時后，利用CVC采血lmL,對于表3的第2組和第3組，在其之后立即通過CVC分別將生理鹽水或者4.5w/v%的檸檬酸鈉液以各0.25mL/小時的給予速度持續(xù)給予4小時，給予結束后立即通過CVC采血lmL。采取的血液在冷卻下離心分離，測定血漿中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、鐵和檸檬酸。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>檸檬酸濃度和鐵濃度的結果分別示于圖6和7。兩腎摘出約24小時后的大鼠的血漿中Cre和BUN濃度顯著升高，可以確認引起腎衰竭。在第1組中為5.27±1.23mg/dL，但在兩腎摘出的第2組中升高至16.38±9.49mg/dL，第3組中升高至17.11±18.64mg/dL(圖6)。第3組中血漿檸檬酸濃度在給予前后的差異為21.08±13.18mg/dL,可以確認由于給予檸檬酸而導致血漿中檸檬酸濃度升高。另一方面，對于第2組，該差異為-0.92土2.20mg/dL，略樣l有些降低。血漿中的鐵在第1組中為112±14jag/dL，在第2組中為61±17Hg/dL,由于腎衰竭狀態(tài)而明顯降低(圖7),在本模型中，推測產生鐵代謝異常。在第3組的檸檬酸給予組中，給予前后的血漿中鐵濃度的差與第2組(厶5±17lag/dL)相比表現(xiàn)為高的值(14~18|ag/dL)(圖7)，暗示了由于給予檸檬酸而導致鐵的包裹改善，由此有血漿中鐵濃度升高的可能性。實施例3:通過對于兩腎摘出大鼠在透析時給予檸檬酸而產生的鐵代謝改善效果的研究使用全部摘出腎臟后第2天的大鼠，研究在透析實施中給予檸檬酸時給鐵代謝帶來的作用。[試驗方法]使用雄性CD(SD)大鼠，通過下表4的試驗組進行試驗。將大鼠通過腹腔內給予戊巴比妥鈉(50mg/kg)進行麻醉后，由大鼠背中側全部摘出腎臟。手術實施2天后，將大鼠通過腹腔內給予戊巴比妥鈉(50mg/kg)進行麻醉后，在左大腿動脈和左大腿靜脈留置導管，制作血液出入口，同時為了給予檸檬酸以及采血用而實施中心靜脈導管(CVC)留置手術。利用CVC進行l(wèi)mL的采血后，使用市售的透析液(AK-V'J夕-DL)在麻醉下進行4小時的透析，對于表4的第2組和第3組，在透析中通過CVC分別將生理鹽水或者4.5w/v%的檸檬酸鈉液以各1.0mL/小時的給予速度持續(xù)給予，透析結束后立即通過CVC采血lmL。采取的血液在冷卻下進行離心分離，測定血漿中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、鐵和檸檬酸。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>檸檬酸濃度和鐵濃度的結果分別示于圖8和9。兩腎摘出后第2天透析前的大鼠血漿中的Cre和BUN濃度顯著升高，可以確認引起了腎衰竭。由腎衰竭導致升高的血漿中的Cre和BUN濃度通過透析迅速降低。血漿中的檸檬酸由于兩腎摘出而在第1組中為5.33mg/dL，但在第2組中升高至19.87mg/dL，另一方面在第3組中為5.33mg/dL，與第1組沒有差異(圖8)。對于在透析實施中給予檸檬酸的第3組，血漿檸檬酸濃度在給予前后的差異由于給予檸檬酸而升高，為26.49mg/dL。另一方面，對于在透析實施中給予生理鹽水的第2組，該差異為降低為-13.05mg/dL。血漿中的鐵由于兩腎摘出而在第1組中為59jug/dL,在第2組中為113Mg/dL，另外在第3組中為83|ag/dL，雖然有波動，但由于腎衰竭狀態(tài)而降低(圖9)。對于在透析實施中給予檸檬酸的第3組，給予前后的血漿中鐵濃度的差異與第2組(A19.5iug/dL)相比表現(xiàn)為約高4倍的值(81jug/dL)(圖9)，暗示由于給予檸檬酸而導致鐵的包裹改善，由此有使血漿中鐵濃度升高的可能性。制劑例(1)透析液A劑(10L中的成分/分量)氯化鈉氯化鉀氯化鈣氯化鎂葡萄糖檸檬酸2，148.0g52.0g77.0g36.0g525.0g34.3g10.3g檸檬酸鈉B劑(12.6L中的成分/分量)碳酸氫鈉1,030.0g(2)透析用補充液A液(l，OlOmL中的成分/分量)氯化鈉12.34g氯化鉀0.30g碳酸氫鈉5.94gB液(l,OlOmL中的成分/分量)氯化鈣氯化鎂葡萄糖杵檬酸519.8nig205.4mg2.02g198.0mg59.4mg檸檬酸鈉產業(yè)可利用性如以上所述，本發(fā)明對于接受了血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，使用包括不含乙酸和/或乙酸鹽而含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽的鐵代謝改善劑，可防止高細胞因子血癥，或者糾正鐵輸送蛋白的調節(jié)異常，解放網狀內皮系中的"鐵的包裹"，與之相伴升高血清鐵濃度并增加鐵的利用性，其結果是可以改善EPO抵抗性腎性貧血，回避并發(fā)癥發(fā)生的風險，隨之有助于患者QOL的增加或預后的改善，從這一點考慮，其醫(yī)療上的效果很大。附圖簡單說明圖1表示實施例1的血漿中檸檬酸濃度的結果。圖2表示實施例1的血清中鐵濃度的結果。圖3表示實施例1的UIBC的結果。圖4表示實施例1的TIBC的結果。圖5表示實施例1的脾臟組織的鐵染色的結果。圖6表示實施例2的血漿中檸檬酸濃度的結果。圖7表示實施例2的血漿中鐵濃度的結果。圖8表示實施例3的血漿中檸檬酸濃度的結果。圖9表示實施例3的血漿中鐵濃度的結果。權利要求1.鐵代謝改善劑，其特征在于，含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽。2.如權利要求1所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽。3.如權利要求1或2所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質不含有乙酸和/或乙酸鹽、而含有檸檬酸和/或杵檬酸鹽。4.如權利要求l、2或3所述的鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質含有檸檬酸和/或種檬酸鹽，進而將其他電解質、葡萄糖單獨或多種組合來含有。5.如權利要求1~4中任一項所述的鐵代謝改善劑，其是透析液的形式。6.如權利要求1~4中任一項所述的鐵代謝改善劑，其是透析用補充液的形式。7.改善生物體內的鐵代謝的方法，其特征在于，對于接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，給予如權利要求1~4中任一項所述的鐵代謝改善劑。8.改善生物體內的鐵代謝的方法，其特征在于，對于接受血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者，使用含有如權利要求5或6所述的鐵代謝改善劑的透析液和/或透析用補充液。9.包括血液透析和血液過濾透析的血液凈化方法，其特征在于，對于慢性腎衰竭患者，使用含有如權利要求5所述的鐵代謝改善劑的透析液來進行血液凈化。10.包括血液過濾透析和血液過濾的血液凈化方法，其特征在于，對于慢性腎衰竭患者，使用含有如權利要求6所述的鐵代謝改善劑的透析用補充液來進行血液凈化。全文摘要本發(fā)明提供一種使接受了血液透析、血液過濾和血液過濾透析等血液凈化療法的慢性腎衰竭患者的生物體內的鐵代謝得到改善的鐵代謝改善劑，提供一種鐵代謝改善劑，其特征在于，作為電解質不含乙酸和/或乙酸鹽而含有檸檬酸和/或檸檬酸鹽，進而將其他電解質、葡萄糖單獨或者多種組合來含有，提供一種鐵代謝改善劑，其是透析液和/或透析用補充液的形式。另外，提供通過使用該透析液和/或透析用補充液而使生物體內的鐵代謝得到改善的方法，以及含有對于慢性腎衰竭患者進行的血液透析和血液過濾透析的血液凈化方法。文檔編號A61K31/185GK101568334SQ200780045678公開日2009年10月28日申請日期2007年12月10日優(yōu)先權日2006年12月12日發(fā)明者中西健,中西敬,倉賀野隆裕,赤池信英申請人:味之素株式會社