專利名稱：：具有基于位阻酯的生物可降解連接基的聚環(huán)氧烷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及改進(jìn)的活化的聚合物如聚環(huán)氧烷。特別地，本發(fā)明涉及含位阻酯(hingeredester)部分的活化的聚合物，該位阻酯部分改善某些生物活性部分(包括寡核苷酸)的遞送。
背景技術(shù)：
：在這幾年中，提出了許多方法用于將治療劑遞送進(jìn)體內(nèi)和改善那些藥物的生物利用率。一種嘗試是包括這種藥物作為可溶性運(yùn)輸體系的一部分。這種運(yùn)4命體系可包括基于固定的綴合物的體系(permanentconjugate-basedsystem)或前藥。特別是，聚合物運(yùn)輸體系可改善藥物的溶解性和穩(wěn)定性。例如，水溶性的聚環(huán)氧烷與治療部分如蛋白質(zhì)和多肽的綴合是已知的。參見，例如，美國(guó)專利4，179，337('337專利),其公開在此引入作為參考。該'337專利公開了由PEG修飾的生理活性的多肽在體內(nèi)循環(huán)延長(zhǎng)，且具有減少的免疫原性和抗原性。也認(rèn)識(shí)到其它改進(jìn)。例如，含千基消除體系(benzyleliminationsystem)、三曱基鎖定體系(trimethyllocksystem)等的基于聚合物的藥物遞送平臺(tái)體系公開于EnzonPharmaceuticals和Zhao等人作為可釋放遞送蛋白質(zhì)、肽和'J、分子的一種方式。也參見Greenwald,等人J.Med.Chem.Vol.42,No.18,3657-3667;Greenwald，等人J.Med.Chem.Vol.47，No.3,726-734;Greenwald,等人，J.Med.Chem.Vol.43，No.3,475-487。上述每一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。最近，提出PEG用于與寡核苷酸綴合，尤其是與特異的靶信使RNA(mRNA)序列互補(bǔ)的寡核苷酸。通常，與基因轉(zhuǎn)錄(例如，mRNA)的產(chǎn)物互補(bǔ)的核酸序列命名為"反義"，且具有與轉(zhuǎn)錄物的序列相同或作為轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)生的核酸序列命名為"有義"。參見例如，Crooke，1992,Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.，32:329-376?？蛇x擇反義寡核苷酸以調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方式與基因的全部或部分雜交。在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子與雙鏈DNA相互作用。也發(fā)現(xiàn)寡核苷酸尤其在診斷測(cè)試、研究試劑中有用，例如，在PCR技術(shù)中的引物和其它實(shí)驗(yàn)室方法中使用?？赏ǔ：铣晒押塑账嵋园瑵M足所需用途的性質(zhì)。已將多種化學(xué)修飾引入寡聚化合物以增加其在診斷中作為研究試劑和作為治療實(shí)體的應(yīng)用。盡管寡核苷酸，尤其是反義寡核苷酸顯示出作為治療劑的希望，但它們對(duì)核酸酶非常敏感且在它們進(jìn)入靶細(xì)胞之前和之后會(huì)快速降解，使得未修飾的反義寡核苷酸不適用于體內(nèi)系統(tǒng)。因?yàn)樨?fù)責(zé)降解的酶存在于在大多數(shù)組織中，已嘗試對(duì)寡核苦酸進(jìn)行修飾以穩(wěn)定化合物并糾正該問(wèn)題。已對(duì)寡核苷酸化合物的骨架部分進(jìn)行最廣泛的試驗(yàn)修飾。通常參見Uhlmann和Peymann,1990,ChemicalReviews90,545-561頁(yè)和本文引用的文獻(xiàn)。在制得的許多不同骨架中，只有硫代磷酸酯(phosphorothioate)顯示明顯的反義活性。參見例如，Padmapriya和Agrawal,1993,Bioorg.&Med.Chem.Lett.3，761。盡管將硫原子引入骨架減緩了酶降解速率，但它同時(shí)也增加了毒性。添加硫原子的另一缺點(diǎn)為其將骨架從非手性改變?yōu)槭中圆?dǎo)致2n個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體。這會(huì)引起進(jìn)一步的副作用。該反義寡核苷酸的其它缺點(diǎn)為它們會(huì)在磷酸基上帶有負(fù)電荷，這抑制其通過(guò)主要為親脂性的細(xì)胞膜的能力。細(xì)胞外剩余的化合物越長(zhǎng)，其降解越多，導(dǎo)致更小活性的化合物到達(dá)靶點(diǎn)。該反義化合物的另一缺點(diǎn)為寡核苷酸易于形成次級(jí)和高級(jí)溶液結(jié)構(gòu)(high-ordersolutionstructures)。一旦形成這些結(jié)構(gòu)，它們變?yōu)楦鞣N酶、蛋白質(zhì)、RNA和DNA的結(jié)合把點(diǎn)。這導(dǎo)致非特異性副作用且活性化合物結(jié)合至mRNA的量減少。其它改進(jìn)寡核苷酸治療的嘗試包括添加連接部分和聚乙二醇。參見例如,Kawaguchi,等人，Stability,SpecificBindingActivity,和PlasmaConcentrationinMiceofanOligodeoxynucleotideModifiedat5'-TerminalwithPoly(ethyleneglycol),Biol.Pharm.Bull.,18(3)474-476(1995),和美國(guó)專利號(hào)4,904,582。在這些實(shí)施例中，所述修飾包括使用性質(zhì)固定的連接部分以嘗試穩(wěn)定寡核苷酸，防止降解和增加細(xì)胞滲透性。然而，這些努力都沒(méi)有提供任何體內(nèi)功效。為將治療劑如小分子和寡核苷酸與聚環(huán)氧烷綴合，聚合物的羥基末端-基團(tuán)必須首先轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性官能團(tuán)。該過(guò)程通常稱為"活化，，且該產(chǎn)物稱為"活化的聚環(huán)氧烷"。其它聚合物類似被活化。盡管上述嘗試和優(yōu)點(diǎn)，但仍在尋求在PEG和聚合物綴合技術(shù)(如活化的聚合物)中進(jìn)一步的改進(jìn)。本發(fā)明解決了這種需求以及其它問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容為了克服上述問(wèn)題并改進(jìn)藥物遞送技術(shù)，提供新的活化的聚合物和由其制備的綴合物。在本發(fā)明一個(gè)方面，提供式(I)的化合物R,為基本上非抗原性的水溶性聚合物；L,和L，,為獨(dú)立選擇的具有孤對(duì)電子的間隔基，該孤對(duì)電子位于距C(二Y,)或C—Y，,)的4至10個(gè)原子處，優(yōu)選距C(二Y,)或Q^Y，,)的4至8個(gè)原子，且最優(yōu)選4至5個(gè)原子處；k和L，2為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；Y,和Y，,獨(dú)立地為O、S或NRs;R2、R，2、R3、R、和Rs獨(dú)立地選自氫、C,-6烷基、C2.6烯基、C2-6炔基、C3.19支鏈烷基、C3—8環(huán)烷基、C卜6取代的烷基、C2—6取代的烯基、C2—6取代的炔基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、d.6雜烷基、取代的d_6雜烷基、d.6烷氧基、芳基氧基、c,.6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2—6烷?；⒎蓟驶?、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2-6烷酰基氧基、芳基羰基氧基、C2_6取代的烷?；⑷〈姆蓟驶?、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2-6取代的烷?；趸腿〈姆计渲蠥為封端基團(tuán)，或R'2基羰基氧基，或R2和R3—起以及R，2和R，3—起獨(dú)立地形成含至少三個(gè)碳的取代的或未取代的非芳香環(huán)烴；R4和R，4獨(dú)立地選自O(shè)H、離去基團(tuán)、把向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分；和(p)和(p，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或約1至約3的整數(shù)，更優(yōu)選0或1,條件是當(dāng)112為H時(shí)，R3為具有至少三個(gè)碳的取代的或未取代的烴，且進(jìn)一步條件是L,不同于C(R2)(R3)。在本發(fā)明該方面某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述基本上非抗原性的(non-antigenic)聚合物為聚環(huán)氧烷且更優(yōu)選為聚乙二醇(下文稱PEG)。在其它方面，所述PEG可以在一個(gè)末端用CH3基團(tuán)封端，即mPEG,而在其它實(shí)施方案中，提供雙-活化的PEGs，如相應(yīng)于下式的那些Y'iR'2R2Y！III」^__^lIIIR'4——C——C——L、~^L'2^——R,——^2~^~L,——C——C——R4、/p'/pR'3R3。本發(fā)明的其它方面包括制備含位阻酯的活化的聚合物的方法，制備含位阻酯的綴合物(包括寡核普酸綴合物)的方法，以及基于向需要的患者(哺乳動(dòng)物)給藥有效量的含生物活性部分的綴合物的治療方法。本文所述的聚合物遞送體系包括新的連接基，該連接基可在聚合物和生物活性部分之間形成可釋放的化學(xué)鍵如酯鍵。該聚合物體系基于位阻酸(hingeredacid)結(jié)構(gòu)，該酸結(jié)構(gòu)構(gòu)建為該聚合物的部分，即PEG骨架，且在聚合物上活化為酸酯如NHS酉旨。該活化的形式可與含羥基或巰基的部分反應(yīng)以形成可釋放的酯鍵。本文所述的基于位阻酯的聚合物運(yùn)輸體系的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為所述聚合物遞送體系具有改進(jìn)的穩(wěn)定性。不受任何理論相的限制，在聚合物和如離去基團(tuán)、生物活性部分和靶向基團(tuán)的部分之間的空間位阻的環(huán)境中的酯鍵可抑制該酯鍵暴露于堿性水性介質(zhì)或酶，從而穩(wěn)定該共價(jià)鍵。該聚合物體系的穩(wěn)定性使得在連接至靶向基團(tuán)或生物活性部分之前可長(zhǎng)期儲(chǔ)存，且使得該含生物活性部分的聚合綴合物儲(chǔ)存壽命更長(zhǎng)。該改善的穩(wěn)定性增加了成本效率。本發(fā)明的其它方面包括制備含位阻酯的活化的聚合物的方法，制備含位阻酯的綴合物(包括寡核苷酸綴合物)的方法，以及基于向需要的患者(哺乳動(dòng)物)給藥有效量的含生物活性部分的綴合物的治療方法。本發(fā)明的活化的聚合物的另一優(yōu)點(diǎn)為其尤其適用于寡核苷酸和相關(guān)反義或短干擾RNA(siRNA)化合物。靠近與之連接的寡核苦酸的位阻酯基的存在提供了改善的穩(wěn)定性和耐核酸酶降解性。其也有助于降低毒性和增加與寡核苷酸化合物的mRNA的結(jié)合親合力。根據(jù)本發(fā)明制備的綴合物提供了防止反義寡核苷酸化合物降解，防止高級(jí)結(jié)構(gòu)(high-orderstructure)的形成的方式。而且，該聚合物綴合物使得技術(shù)人員能將足夠量的活性反義寡核苷酸化合物遞送至耙點(diǎn)。含位阻酯的活化的聚合物的另一優(yōu)點(diǎn)為其使得技術(shù)人員更容易地綴合所選的寡核苷酸。在PEG化(PEGylation)前沒(méi)有必要用位阻酯修飾寡核苷酸或靶部分。使用寡核苷酸本身并用活化的PEG連接基PEG化，該活化的PEG連接基在其上包含所需的位阻酯保護(hù)基。本發(fā)明的活化的聚合物的另一優(yōu)點(diǎn)為其尤其適用于寡核苷酸和相關(guān)反義化合物?？拷c之連接的寡核苷酸的位阻酯基的存在提供了改善的穩(wěn)定性和耐核酸酶降解性。其也有助于降低毒性和增加與寡核苷酸化合物的mRNA的結(jié)合親合力。根據(jù)本發(fā)明制備的綴合物提供了一種方式，以防止反義寡核苷酸化合物降解，防止高級(jí)結(jié)構(gòu)(high-orderstmcture)的形成。而且，該聚合物綴合物使得技術(shù)人員能將足夠量的活性反義寡核苷酸化合物遞送至靶點(diǎn)。盡管對(duì)于寡核苷酸的連接本發(fā)明描述了幾個(gè)方面，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解在其上含一個(gè)或多個(gè)"位阻"基團(tuán)的活化的聚合物在聚合物綴合領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用?；罨问降木酆衔锟捎糜诳舍尫诺睾凸潭ǖ貙⒕酆衔锶鏟EG連接至蛋白質(zhì)、肽、酶、小分子等。對(duì)于本發(fā)明而言，術(shù)語(yǔ)"生物活性部分"和"生物活性部分的殘基"應(yīng)理解為生物活性化合物的部分，指在該生物活性化合物進(jìn)行取代反應(yīng)(其中運(yùn)輸載體部分被連接)后保留的部分。除非另有限定，為本發(fā)明目的術(shù)語(yǔ)"烷基，，應(yīng)理解為包括直鏈、支鏈、取代的(例如，被卣素-、烷氧基-和硝基_取代的)(^.12烷基、C3—8環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基等；術(shù)語(yǔ)"取代的"應(yīng)理解為包括加入一個(gè)或多個(gè)原子，或用一個(gè)或多個(gè)不同原子替換官能團(tuán)或化合物中含有的一個(gè)或多個(gè)原子；術(shù)語(yǔ)"取代的烷基"包括羧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基、羥基烷基和巰基坑基；術(shù)語(yǔ)"取代的環(huán)烷基"包括如4-氯環(huán)己基的部分；芳基包括如萘基的部分；取代的芳基包括如3-溴苯基的部分；芳烷基包括如曱基苯曱?；?toluyl)的部分；雜烷基包括如乙基噻吩的部分；術(shù)語(yǔ)"取代的雜烷基"包括如3-曱氧基-噻吩的部分；烷氧基包括如曱氧基的部分；且苯氧基包括如3-硝基苯氧基的部分；術(shù)語(yǔ)"卣素，，應(yīng)理解為包括氟、氯、碘和溴；且術(shù)語(yǔ)"足夠量"和"有效量"在本發(fā)明中是指達(dá)到治療效果的量，該效果為本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。附圖簡(jiǎn)述圖1圖示性闡述實(shí)施例l-2所述的合成方法。圖2圖示性闡述實(shí)施例3-11所述的合成方法。圖3圖示性闡述實(shí)施例12所述的合成方法。圖4圖示性闡述實(shí)施例13-15所述的合成方法。圖5圖示性闡述實(shí)施例16所述的合成方法。發(fā)明詳述A.概述在本發(fā)明最多的方面，本文包括的聚合物通常描述為基本上非抗原性的聚合物。在該聚合物種類中，優(yōu)選聚環(huán)氧烷且最優(yōu)選聚乙二醇(PEG's)。出于方便描述而不是限制的目的，本發(fā)明有時(shí)使用PEG作為原型聚合物來(lái)描述。然而，應(yīng)理解本發(fā)明范圍適用于很多種聚合物，其可為直鏈、基本直鏈、支鏈的等。僅有的一個(gè)要求是該聚合物包含共價(jià)連接本文所述的所需位阻酯基團(tuán)的手段(means)，且其可經(jīng)受將所得中間體轉(zhuǎn)化為含活化的連接基的聚合物所需的加工過(guò)程，并在本文所述條件下形成綴合物。根據(jù)上文，提供式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>其中A為封端基團(tuán)，或Y'iR'2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>為基本上非抗原性的水溶性聚合物；L,和L，,為獨(dú)立選擇的具有孤對(duì)電子的間隔基，該孤對(duì)電子位于距C(=Y,)或C^Y，,)的4至10個(gè)原子處，優(yōu)選距Q^Y、)或C(-Y，O的約4至約8個(gè)原子處，且最優(yōu)選距Q^Y,)或C^Y、)的約4至約5個(gè)原子處；"和L，2為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；Y,和Y',獨(dú)立地為O、S或NRs;R2、R，2、R3、R、和Rs獨(dú)立地選自氫、Cw烷基、C2.6烯基、C2.6炔基、C3.19支鏈烷基、(33.8環(huán)烷基、CL6取代的烷基、C2—6取代的烯基、C2，6取代的炔基、C^取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C,.6雜烷基、取代的C6雜烷基、C,，6烷氧基、芳基氧基、C"6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2.6烷酰基、芳基羰基、c2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2—6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2.6取代的烷?；?、取代的芳基羰基、C2.6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2.6取代的烷酰基氧基和取代的芳基羰基氧基，或R2和R3—起以及R，2和R，3—起獨(dú)立地形成含至少三個(gè)碳的取代的或未取代的非芳香環(huán)烴；R4和R，4獨(dú)立地選自O(shè)H、離去基團(tuán)、耙向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分；和(p)和(p，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或約1至約3的整數(shù)，更優(yōu)選0或1;條件是當(dāng)R2為H時(shí)，R3為具有至少三個(gè)碳的取代的或未取代的烴，且進(jìn)一步條件是L,不同于C(R2)(R3)。在本發(fā)明該方面某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述基本上非抗原性的聚合物為聚環(huán)氧烷且更優(yōu)選是聚乙二醇(下文稱PEG)。在其它方面，所述PEG可以在一個(gè)末端用CH3基團(tuán)封端，即mPEG。其它任選封端基團(tuán)包括H、NH2、OH、C02H、6烷氧基和d—6烷基。優(yōu)選的封端基團(tuán)包括曱氧基和曱基。在其它實(shí)施方案中，提供雙-活化的PEGs，如相應(yīng)于式(II)的那些Y')R'2R2Y,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>在本發(fā)明那些方面，進(jìn)行取代用的取代基(其中相應(yīng)于R2、R'2、R3、R'3和R5的這些部分表示為可取代的)可包括例如，?；?、氨基、酰胺基、脒、芳烷基、芳基、疊氮基、烷基疏基、芳基巰基、羰基、羧酸基(carboxylate)、氰基、酯、醚、甲?；⒇账?、雜芳基、雜環(huán)烷基、羥基、亞胺基、硝基、硫代羰基、硫酯、硫代乙酸酯、硫代曱酸酯、烷氧基、磷?；?、膦酸基(phosphonate)、亞膦酸基(phosphinate)、曱珪烷基、巰基、硫酸基(sulfate)、磺酸基(sulfonate)、氨磺?；?、磺酰胺和磺?；?yōu)選地，"和L、為獨(dú)立選擇的具有孤對(duì)電子的間隔基，該孤對(duì)電子位于距C(^Y!)或C(-Y，0的4至8個(gè)原子處；更優(yōu)選4至6個(gè)原子處；Y和Y',均為O。在本發(fā)明另一方面，所述生物部分包括含-OH的部分和含-SH的部分。在另一方面，A可選自H、NH2、OH、C02H、d-6烷氧基和C,.6烷基。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，A可為曱基、乙基、曱氧基、乙氧基、H和OH。A更優(yōu)選為曱基或曱氧基.B.基本上非抗原性的水溶性聚合物本文所述的聚合物遞送體系中使用的聚合物優(yōu)選為水溶性聚合物，且基本上為非抗原性的，如聚環(huán)氧烷(PAO，s)。在本發(fā)明一個(gè)方面，本文所述的化合物包括直鏈的、末端支鏈的或多臂的聚環(huán)氧烷。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇和聚丙二醇。所述聚環(huán)氧烷的平均分子量為約2,000至約100,000道爾頓，優(yōu)選約5,000至約60,000道爾頓。在一些方面，當(dāng)連接蛋白質(zhì)或寡核苷酸時(shí)所述聚環(huán)氧烷可為約5,000至約25,000,且優(yōu)選約12,000至約20,000道爾頓，或當(dāng)在本文所述的化合物中使用藥學(xué)活性化合物(小分子)時(shí)所述聚環(huán)氧烷可為約20,000至約45,000道爾頓，且優(yōu)選約30,000至約40,000道爾頓。所述聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇和聚丙二醇。更優(yōu)選地，所述聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇(PEG)。PEG通常由以下結(jié)構(gòu)所表示-0-(CH2CH20)n-其中(n)為約10至約2,300的整數(shù)，且當(dāng)使用多臂聚合物時(shí)取決于聚合物臂的數(shù)量?；蛘?，本發(fā)明的聚乙二醇(PEG)殘基部分可選自-Y71-(CH2CH20)n-CH2CH2Y71-，-Y71-(CH2CH20)n-CH2C(=Y72)-Y71-,-Y71-C(=Y72;KCH2;)a71-Y73《CH2CH2C0n-CH2CH2-Y73-(CH2:)a71-CX=Y72:)-Y71-,和-Y71-(CR71R72)a72-Y73-(CH2)b71-CKCH2CH20)n-(CH2)b71-Y73-(CR71R72)a72-Y71-,其中Y^和Y"獨(dú)立地為O、S、SO、S02、NR3或化學(xué)鍵；Y"為O、S或NR74;1171.74獨(dú)立地為與可用于R2的部分相同的部分；(a71)、(a72)和(b71)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0-6,且更優(yōu)選1;和(n)為約10至約2300的整數(shù)。支鏈的或U-PEG衍生物描述于美國(guó)專利5,643,575,5,919,455,6,113,906和6,566,506中，且每一個(gè)的公開在此引入作為參考。這種聚合物的非限制性實(shí)例相應(yīng)于具有以下結(jié)構(gòu)的聚合物體系(i)-(vii):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>(v),和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>其中丫61.62獨(dú)立地為O、S或NR^;Y63為0、NR62、S、SO或S02'(w62)、(w63)和(w64)獨(dú)立地為0或正整數(shù);(w61)為0或1;mPEG為曱氧基PEG其中PEG如上定義且聚合物部分的總分子量為約2,000至約100,000道爾頓；和R61和R62獨(dú)立地選自氫、C,—6烷基、C2_6烯基、C2-6炔基、C3.19支鏈烷基、C3—8環(huán)烷基、Cw取代的烷基、C2—6取代的烯基、(^2.6取代的炔基、C3—8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C,.6雜烷基、取代的C,—6雜烷基、CL6烷氧基、芳基氧基、C,，6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷?；?、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2.6烷酰基氧基、芳基羰基氧基、C2.6取代的烷酰基、取代的芳基羰基、C2.6取代的烷酰基氧基、取代的芳基氧基羰基、C2.6取代的烷酰基氧基、和取代的芳基羰基氧基。在另一方面，所述聚合物包括多臂PEG-OH或"星-PEG"(star-PEG)產(chǎn)物，如描述于NOFCorp.DrugDeliverySystemcatalog,Ver,8,2006年4月中的那些，其公開在此引入作為參考。所述多臂聚合物綴合物包含4個(gè)或更多個(gè)聚合物臂，且優(yōu)選4或8個(gè)聚合物臂。為了解釋而不是限制的目的，所述多臂聚乙二醇(PEG)殘基可為H2C-0—(CH2CH20)nHHC——O—(CH2CH2〇)nHCH2ICH2HC——O—(CH2CH20)nHCH201CH2HC——O—(CH2CH20)nHH2C——O—(CH2CH2〇)nH其中(x)為0和正整數(shù)，即約0至約28;和(n)為聚合度。在本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述多臂PEG具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>其中n為正整數(shù)。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述聚合物的總》子量為約5,000Da至約60,000Da，且優(yōu)選12,000Da至40,000Da。在另一具體實(shí)施方案中，所述多臂PEG具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>其中(u，)為約4至約455的整數(shù)；且該殘基的最多3個(gè)末端部分被甲基或其它低級(jí)烷基封端。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所有四個(gè)PEG臂可轉(zhuǎn)化為合適的活化基團(tuán)，以促進(jìn)與芳香基團(tuán)的連接。轉(zhuǎn)化之前的這些化合物包括H3C、(och2ch2)u,\■O.-(och2ch2)l/"CH2CH20)u.、o、(CH2CH20)u、GHH3C(OCH2CH2)u,、、0H3C、(OCH2CH2)u<O'(CH2CH20)u、O、(CH2CH20)u,.CH2CH2、、OHH3C、(och2CH2)u,\■aHO、CH2CH2、(och2ch2)u<0.(CH2CH20)u,、o、.、、OHHO--CH2CH2、(OCH2cH2)u,、、0HO--CHzCH^ocHzCH^'O'"CH2CH20)u、O、'(CH2CH20)u,.—CH2CH2、OHH3C-(OCH2CH2)u.—0H3C-(OCH200—(CH2CH20)u'-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u'—CH3H3C-(OCH2CH2)u.—0H3C-(OCH2CH2)u.0—(CH2CH20)u'-CH3(CH2CH20)u'_CH2CH2_OHH3C-(OCH2CH2)u.—0.H3C-(OCH2CH2)u,0—(CH2CH20)u'-CH2CH2—OH、(CH2CH20〉u'—CH2CH2—OHHO_CH2CH2-(OCH2CH2)u._QH3C-(OCH2CH2)u^0—(CH2CH20)u'-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u,—CH3H3C-(OCH2CH2)u,—OHO-CH2CH2-(OCH2CH2)uz0H3C-(OCH2CH2)u'—0HO-CH2CH2-(OCH2CH2)u.z0HO-CH2CH2-(OCH2CH2)u.—0.H3C-(OCH2CH2)u.z0HO-CH2CH2-(OCH2CH2)u'—0.HO-CH2CH2-(OCH2CH2)u.z0本文包括的聚合物優(yōu)選在室溫為水溶性的。這些聚合物的非限制性實(shí)例包括聚環(huán)氧烷均聚物，如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇(polyoxyethylenatedpolyols)、其共聚物和其嵌段共聚物，條件是保持嵌段共聚物的水溶性。在另一實(shí)施方案中，作為基于PAO的聚合物的替代物，可使用一種或多種實(shí)際上非抗原性物質(zhì)，如葡聚糖、聚乙烯醇、基于碳水化物的聚合物、羥丙基曱基丙烯酰胺(HPMA)、聚環(huán)氧烷、和/或其共聚物。還參見共同轉(zhuǎn)讓(commonly-assigned)的美國(guó)專利6,153,655，其內(nèi)容在此引入作為參考。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解采用與對(duì)在此所述的PAO's如PEG相同的活化類型。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到上述實(shí)例僅是示例性的，所有具有本文所述性質(zhì)的聚合物質(zhì)都在考慮范圍內(nèi)。對(duì)于本發(fā)明而言，"基本上或?qū)嶋H上非抗原性的"在本領(lǐng)域是指無(wú)毒的且在哺乳動(dòng)物中不引發(fā)可觀察到的免疫原應(yīng)0_(CH2CH20)u-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u'—CH30—(CH2CH20)u.-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u,—CH2CH2—OHO—(CH2CH20〉u.-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u,—CH2CH2_OH和O—(CH2CH20)u'-CH2CH2—OH、(CH2CH20)u.—CH2CH2—OH答的所有材料。在一些方面，可使用具有末端氨基的聚合物以制備本文所述的化合物。以高純度制備含末端胺的聚合物的方法描述于美國(guó)專利申請(qǐng)11/508,507和11/537,172中，其每一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。例如，具有疊氮基(azides)的聚合物與基于膦的還原劑如三苯基膦或堿金屬硼氫化物還原劑如NaBH4反應(yīng)。或者，包括離去基團(tuán)的聚合物與保護(hù)的胺鹽如甲基-叔丁基亞氨基二碳酸酯的鉀鹽(KNMeBoc)或二-叔丁基亞氨基二碳酸酯(di-tert-butylimidodicarbonate)的鉀鹽(KNBoc2)反應(yīng)，然后將該保護(hù)的胺基脫保護(hù)。由這些方法形成的含末端胺的聚合物的純度大于約95%且優(yōu)選大于99%。在其它方面，具有末端羧酸基的聚合物可在本文所述的聚合物遞送體系中使用。以高純度制備具有末端羧酸的聚合物的方法公開于美國(guó)專利申請(qǐng)11/328,662中，其內(nèi)容在此引入作為參考。該方法包括首先制備聚環(huán)氧烷的叔烷基酯，然后轉(zhuǎn)化為其羧酸衍生物。制備PAO羧酸的方法的第一步驟包括形成中間體如聚環(huán)氧烷羧酸的叔丁基酯。該中間體通過(guò)PAO與卣代乙酸叔丁基酯在堿如叔丁醇鉀的存在下反應(yīng)而形成。一旦形成叔丁基酯中間體，就容易以超過(guò)92%,優(yōu)選超過(guò)97%,更優(yōu)選超過(guò)99%且最優(yōu)選超過(guò)99.5%的純度得到該聚環(huán)氧烷的羧酸衍生物。C.位阻酯對(duì)于本發(fā)明而言，"位阻"應(yīng)理解為意指或包括在C^Y,)周圍的空間擁擠的環(huán)境。這種環(huán)境通?？赏ㄟ^(guò)包括大取代基(如環(huán)狀或支鏈的部分)而產(chǎn)生。根據(jù)式(I)相鄰于C^Y,)和C^Y，,)的012113和CR，2R，3部分的每一個(gè)形成位阻酯。所述R2、R'2、R3、R，3和Rs可選自氫、d-6烷基、C2-6烯基、(:2.6炔基、Cw9支鏈烷基、C3，8環(huán)烷基、C,-6取代的烷基、C2，6取代的烯基、Cw取代的炔基、(33.8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、Cw雜烷基、取代的d.6雜烷基、C,.6烷氧基、芳基氧基、C,.6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷酰基、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2.6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2.6取代的烷?；⑷〈姆蓟驶?、C2.6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2.6取代的烷?；趸腿〈姆蓟驶趸?。對(duì)于R2和R3(R，2和R，3)可使用本文所述的任何可能基團(tuán)，只要R2和R3(R，2和R，3)不同時(shí)為H。當(dāng)R2和R3(R，2和R、)之一為H時(shí)，另一個(gè)包含至少3個(gè)烴。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2、R，2、R3和R，3包括曱基、乙基和異丙基。在另一實(shí)施方案，R2和R3—起以及R，2和R，3—起可形成含至少3個(gè)碳的取代的或未取代的非芳香環(huán)烴。D.間隔基L,和L、在本發(fā)明另一方面，連接至CR2R3和CR，2R，3部分的L,和L，,間隔基的孤對(duì)電子提供鄰位幫助作用(enchimericeffects)。不受任何理論的限制，位于距C(-Y,)和C(二Y，,)的4至IO個(gè)原子處的孤對(duì)電子促進(jìn)(修飾)生物活性部分、耙基團(tuán)和診斷劑從本文所述的聚合物遞送體系的釋放速率。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，L!和L，J司隔基可選自-NRu(CR^3)s-,-S(CRi2Ri3)s-,-0(CR12R13)S-，-[C(=0)]r(CR12R13)s-,-NR^CR^^CRmR^-,-NR,"CRuR^sNR^CRmRJs'-,-NRn(CR12R130)s(CR14R15》-,-0(CR12R13)sO(CR14R15》-，-0(CR12R13)sS(CR14R15)s'-，-0(CR12R13)sNR16(CR14R15)s'-，-0(CR12R130)s(CRl4R15)s'-，其中Rn-Rw獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、曱硅烷基醚、磺?；€基、C,-6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基琉基、取代的d—6烷硫基、Cb6烷基、C2_6烯基、C2-6炔基、Cw9支鏈烷基、C3，8環(huán)烷基、Cw取代的烷基、C2—6取代的烯基、C2-6取代的炔基、C3—8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、CN6雜烷基、取代的C,-6雜烷基、C,-6烷氧基、芳基氧基、C,—6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2_6烷?；?、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2—6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2.6取代的烷?；?、取代的芳基羰基、C2.6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2.6取代的烷?；趸?、取代的芳基羰基氧基；(s)和(s，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選約1至約4;和(r)為0或1?；蛘週^和L、基團(tuán)可選自-NH-(CH2-CH2-0)P-CHr,-C(=0)-(CH2)n-，-NH-(CH2)n-，-S-(CH2)P-,-NH-(CH2)P-0-CH2-和-NH-C(=0)-(CH2)p-NH-C(=0)-(CH2)q-其中(p)為1至12的整數(shù)；和(n)和q獨(dú)立地為正整數(shù)，優(yōu)選約1至8,且更優(yōu)選約1至4。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，Lw和L，w間隔基的孤對(duì)電子位于距C(=Y,)和C^Y，!)的4至8個(gè)原子處。更優(yōu)選地，所述電子對(duì)位于距C(^Y,)和C(=Y、)的4至5個(gè)原子處。根據(jù)優(yōu)選方面的優(yōu)選的實(shí)施方案為-Li-QRzXR^-C^YO-和-LYCXR^XR^-C^Y',),包括/\,Z\和在另一方面，本文所述的聚合物遞送體系包括當(dāng)R2為H時(shí)R3為具有至少3個(gè)碳的取代的或未取代的烴，且L,不同于C(R2)(R3)。E.雙官能連接基本文所述的化合物可包括雙官能連接基。所述雙官能連接基包括氨基酸、氨基酸衍生物或肽。所述氨基酸可為天然存在的和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸的衍生物和類似物，以及各種現(xiàn)有技術(shù)已知的非天然存在的氨基酸(D或L)、疏水的或非疏水的，也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。合適的非天然存在的氨基酸的非限制性實(shí)例包括，2-氨基已二酸、3-氨基已二酸、卩-丙氨酸、(3-氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、旅咬S吏(piperidinicacid)、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2,4-氨基丁酸、鎖鏈素、2,2-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異鎖鏈素、另U-異亮氨酸、N-曱基甘氨酸、肌氨酸、N-曱基-異亮氨酸、6-N-曱基-賴氨酸、N-曱基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸和鳥氨酸。一些優(yōu)選的氨基酸殘基選自甘氨酸、丙氨酸、曱硫氨酸和肌氨酸，且更優(yōu)選為甘氨酸?；蛘週2和L，2可選自-[C(=0)]v(CR22R23)t[C(=0)]v,-,-[C(=0)]v(CR22R23)t-0[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23)t-NR26[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23)t[C(=0)]v，-，-[C(=0)]vO(CR22R23)tO[C(=0)]v,-，-[C(=0)]vO(CR22R23)tNR26[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR2l(CR22R23)t[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)tO[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)tNR26[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23)tO-(CR28R29)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23)tS-(CR28R29)r[C(=0)]v，-,-[C(=0)]vO(CR22R23)tO-(CR28R29)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23)tNR26-(CR28R29MC(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23)tS-(CR28R29)t《C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)tO-(CR28R29)r[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR2,(CR22R23)tS-(CR28R29)t，[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v，-,-[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v,-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v-,-[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t'0[C(=0)]v'-，-[C(=0)]v(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t，[C(=0)]v，-,-[C(=0)]v(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t,NR26[C(=0)]v,-，-[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t，0[C(=0)]v,-，-[C(=0)]vO(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t,[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vO(CR22R23)t(CR24CR25CR28R290)t，NR26[C(=0)]v--[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)tO[C(=0)]v,-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t'[C(=0)]v'-，-[C(=0)]vNR21(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t，NR26[C(=0)]\o\義Q、N-[C(=0)]vO(CR22R23)tR27(CR24R25)t,NR26[C(=0)]v,-.[C(,]vO(CR22R23)r"^^>~(CR24R25)t,0[C(=0)]v,-R27-[C(=0)]vNR21(CR22R23),(CR24R25)t,NR26[C(=0)]v,-和R-27vNR2|(CR22R23)t1^~(CR24R25)t,0[C(=0)]v,-RNH其中1121.29獨(dú)立地選自氫、Cw烷基、C3.12支鏈烷基、(33.8環(huán)烷基、C,—6取代的烷基、<:3.8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、Cw雜烷基、取代的d，6雜烷基、Cw烷氧基、苯氧基和Cl6雜烷氧基；(t)和(t，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或約1至約12的整數(shù)，更優(yōu)選約1至約8的整數(shù)，且最優(yōu)選1或2;和(v)和(v，)獨(dú)立地為0或1。在--個(gè),f尤選的實(shí)施方案中，L2和L，2可選自-[c(=0)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2-,-[c(=0)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=0)]r-[c(=o)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=0)]r'-,-[c(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s'[C(=0)]r-,-[c(=o)]rNH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s'[C(=0)]r'-,-[c(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=0)]r，，-[c(=0)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s，[C(=0)]r，-,-[c(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=0)]r-，-[c(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r，-,-[c(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s,[C(=0)]r，-,-[c(=o)]rNHCH2CH2NH[C(=0)]r-,-[c(=0)]rNH(CH2CH2)20[C(=0)]r，-，-[c(=0)]rNH(CH2CH20)[C(=0)]r-,-[c(=o)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r-,-[c(=o)]rNH(CH2)3[C(=0)〗r'-,-[c(=0)]rO(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r，-，-[c(=o)]r0(CH2)2NH(CH2)2[C(O)]r，-，-[c(=o)]rO(CH2CH20)2NH[C(=0)]f-,-[c(=0)]rO(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r,-，-[c(=0)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r，-,-[c(=0)]rO(CH2CH2)NH[C(=0)]r，，-[c(=o)]rO(CH2CH2)0[C(=0)]r-,-[c(=0)]rO(CH2)3NH[C(=0)]r-，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>-Val-Cit-C(=0)-CH2OCH2-C(=0)-，-Val-Cit-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-,和-NHCH(CH3)-C(=0)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=0)_其中，Yu—,9獨(dú)立地為O、S或NR48;R31.48、Rs。-5,和As,獨(dú)立地選自氫、C"烷基、C3-12支鏈烷基、C3-8環(huán)垸基、C"取代的烷基、C3—8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、C,-6雜烷基、取代的C,-6雜烷基、Cw烷氧基、苯氧基和C,.6雜烷氧基；Ar為芳基或雜芳基部分；Ln—,5為獨(dú)立選擇的雙官能間隔基；J和J，獨(dú)立地選自主動(dòng)運(yùn)輸至靶細(xì)胞的部分、疏水的部分、雙官能連4妄部分及其組合；(cll)、(hll)、(kll)、(111)、(mll)和(nll)為獨(dú)立選擇的正整數(shù)，優(yōu)選1;(all)、(ell)、(gll)、(jll)、(oll)和(qll)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選1;和(bll)、(xll)、(x，ll)、(fll)、(ill)和(pll)獨(dú)立地為0或1。F.R4和R，4基團(tuán)1.離去基團(tuán)對(duì)于本發(fā)明而言，離去基團(tuán)是指能與在所需靶點(diǎn)(即生物活性部分、診斷劑、靶向部分、雙官能間隔基、中間體等)上的親核物(nucleophile)反應(yīng)的基團(tuán)。因此所述靶點(diǎn)包含用于置換的基團(tuán)，例如在蛋白質(zhì)、肽、酶、天然或化學(xué)合成的治療分子(如多柔比星)上的OH或SH基團(tuán)，和間隔基如單保護(hù)的二胺。連接至位阻酯的離去基團(tuán)能與所選的生物活性部分，即藥物活性化合物(小分子量化合物)、寡核苷酸等共價(jià)反應(yīng)。合適的離去基團(tuán)包括，但不限于，卣素(Br、Cl)、活化的酯(activatedesters)、環(huán)酰亞胺硫酮、N-羥基琥珀酰亞胺基、N-羥基鄰苯二曱酰亞胺基、N-羥基苯并三唑基、咪唑、曱苯磺酸基(tosylate)、曱磺酸基(mesylate)、三氟乙基磺酸基(tesylate)、硝基苯磺酸基(nosylate)、d-Q^烷基氧基、d-Q烷酰基氧基、芳基羰基氧基、鄰硝基苯氧基、對(duì)硝基苯氧基、五氟苯氧基、1,3,5-三氯苯氧基和1,3，5-三氟笨氧基或其它本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的合適離去基團(tuán)。特別地，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述離去基團(tuán)可選自O(shè)H、曱氧基、叔丁氧基、對(duì)硝基苯氧基和N-羥基琥珀酰亞胺基。2.生物活性部分很多種生物活性部分可連接至本文所述的活化的聚合物。所述生物活性部分包括藥學(xué)活性化合物、酶、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽。所述生物活性部分可包括心血管劑、抗瘤劑、抗感染藥、抗真菌藥如制霉菌素和兩性霉素B、抗焦慮劑、腸胃病藥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)活化劑、止痛劑、致育藥(fertilityagent)、避孕劑，抗炎劑、甾體類藥、anti-urecemicagents、血管擴(kuò)張劑和血管收縮劑等。在本發(fā)明一個(gè)方面，所述生物活性化合物適于醫(yī)藥或診斷用途以治療動(dòng)物，例如，哺乳動(dòng)物，包括人，用于需要這種治療的癥狀。在另一方面，含輕基或巰基的生物活性部分在本發(fā)明范圍內(nèi)。對(duì)適用于本文的生物活性部分的種類的唯一限制為存在至少一個(gè)可用的羥基或巰基，其可與載體部分反應(yīng)和連接，且在為綴合至本文所述的聚合物運(yùn)輸體系的形式時(shí)生物活性沒(méi)有實(shí)質(zhì)損失。或者，適于摻入本發(fā)明的聚合運(yùn)輸綴合物化合物的母體化合物可在從連接的化合物水解釋放后有活性，或水解釋放后沒(méi)有活性但在經(jīng)歷進(jìn)一步化學(xué)過(guò)程/反應(yīng)后變得有活性。例如，由聚合運(yùn)輸體系遞送至血流的抗癌藥，可保持無(wú)活性直到進(jìn)入癌細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞，然后其被癌細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞化學(xué)作用活化，例如，被該細(xì)胞獨(dú)有的酶反應(yīng)活化。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本文所述的聚合物運(yùn)輸體系包括藥學(xué)活性化合物。對(duì)于本發(fā)明而言，應(yīng)理解藥學(xué)活性化合物包括小分子量分子。通常，所述藥學(xué)活性化合物的分子量小于約1,500道爾頓。這種化合物的非限制性實(shí)例包括喜樹堿和類似物如SN38或伊立替康，羥基-或巰基-拓樸異構(gòu)酶I抑制劑，紫杉烷和紫杉醇衍生物，包括AZT和阿昔洛韋的核苷，包括柔紅霉素和多柔比星的蒽環(huán)類抗生素化合物；包括Ara-C(阿糖胞苷)和吉西他濱的相關(guān)抗代謝物化合物等。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇用于綴合的物質(zhì)為寡核苷酸，且綴合后，所述耙指的是寡核苷酸的殘基。所述寡核苦酸可選自任何已知的具有磷酸二酯骨架或硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸和寡脫氧核苷酸、鎖核酸(LNA)、具有肽骨架的核酸(PNA)、三環(huán)-DNA、雙鏈寡核苷酸(誘捕性(decoy)ODN)、催化性RNA序列(RNAi)、核酶、鏡相異構(gòu)物(spiegelmer)和CpG寡聚物。上述化合物基團(tuán)的"多核芬酸"(或"寡核苷酸")包括寡核苷酸和寡脫氧核49芬酸，包括例如，具有與Genasense(a/k/a奧利默森鈉(oblimersensodium),由GentaInc.,BerkeleyHeights,NJ制備)相同或基本類似核苷酸序列的寡核苷酸。Genasense為18-體聚硫代磷酸酯反義寡核苦酸，TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQIDNO:1)，其與人bcl-2mRNA的起始序列的最初六個(gè)密碼子互補(bǔ)(人bcl-2mRNA為本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的，且例如以SEQIDNO:19描述于美國(guó)專利6,414,134，在此引入作為參考)。美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)在2000年8月給予Genasense罕用藥狀態(tài)(OrphanDrugstatus)。而且，根據(jù)本發(fā)明使用的寡核苷酸和寡脫氧核苷酸包括，但不限于，以下具有天然磷酸二酉旨(phosphorodiester)骨架或硫代磷酸酯(phosphorothioate)骨架或任何其它修飾的骨架類似物的寡核苷酸和寡脫氧核苷酸；LNA(鎖核酸)；PNA(具有肽骨架的核酸)；三環(huán)-DNA;誘捕性O(shè)DN(雙鏈寡核苷酸)；催化性RNA序列；核酶；鏡相異構(gòu)物(L-構(gòu)象的寡核苷酸)；CpG寡聚物等，如公開于以下文獻(xiàn)的那些Tides2002,OligonucleotideandPeptideTechnologyConferences,2002年5月6-8日，LasVegas,NV和Oligonucleotide&PeptideTechnologies,18th&19th2003年11月，Hamburg,德國(guó)，其內(nèi)容在此引入作為參考。根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸還可任選包括任何合適的本領(lǐng)域已知的核苦酸類似物和衍生物，包括列于下表l中的那些表1代表性的核苷酸類似物和衍生物4-乙?；?-曱氧基氨基曱基-2-硫尿苷50<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>盡管反義寡核苷酸和相關(guān)化合物被提及作為含位阻酯的聚合物連接的優(yōu)選的耙，但預(yù)期R4或R，4包括已知受益于PEG或聚合物連接的所有合適的生物活性蛋白質(zhì)、肽、酶、小分子等。本發(fā)明預(yù)期的對(duì)寡核苷酸的修飾包括，例如，用官能團(tuán)或部分來(lái)加成至所選的核苷酸或取代所選的核苦酸，使得寡核苷酸與所需的聚合物共價(jià)連接，和/或加成或取代官能部分(flmctionalmoieties)(其引入另外的電荷、極化性、氫鍵、靜電相互作用和功能性(functionality》至寡核苷酸。這些修飾包括，但不限于，2'-位糖修飾、5-位嘧咬修飾、8-位噤呤修飾、在環(huán)外胺(exocyclicamine)的修飾、4-硫尿苷的取代、5-溴或5-碘尿嘧啶的取代、骨架修飾、曱基化、堿基配對(duì)組合如異堿基(isobases)異胞苷(isocytidine)和異胍(isoguanidine),及類似組合。寡核苷酸修飾還可包括3'和5'修飾如加帽。示例性核苷類似物的結(jié)構(gòu)如下提供。核苷類似物的更多實(shí)例描述于Freier&Altmann;AW.勿.dM,1997,25,4429-4443和Uhlmann;C群,C^"/W2Z>wgDeve/o;we《2000,3(2),293-213，其每一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。3.靶向基團(tuán)可綴合至本發(fā)明的化合物包括靶向基團(tuán)。所述靶向基團(tuán)包括受體配體、抗體或抗體片段、單鏈抗體、靶向肽、靶向碳水化合物分子或凝集素(lectin)。耙向基團(tuán)增強(qiáng)耙組織和細(xì)胞群對(duì)本文所述的化合物的結(jié)合或攝取。例如，耙向基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、FGF2、促生長(zhǎng)素抑制素和促生長(zhǎng)素抑制素類似物、轉(zhuǎn)鐵蛋白、促黑素、ApoE和ApoE肽、馮維勒布蘭德氏因子(vonWillebrand'sFactor)和馮維勒布蘭德氏因子肽、腺病毒纖維蛋白和腺病毒纖維蛋白肽、PD1和PD1肽、EGF和EGF肽、RGD肽、葉<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>硫代磷酸酯2'-0-甲基o《2'-:MOE—o一2'-F-ANA2'-(3-羥基)丙基OH3'-氨基磷酸酯(■3'-Phosphoramidate)硼A磷酸酯oo—，o氟2CDoo馬酸等。4.i貪斷劑本發(fā)明另一方面提供任選用連接至本文所述聚合物遞送體系的診斷標(biāo)記制備的綴合化合物，其中該標(biāo)記根據(jù)診斷或成像目的選擇。因此，合適的標(biāo)記通過(guò)將任何合適部分(例如，氨基酸殘基)連接至任何本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的放射同位素、射線不透性標(biāo)記、磁共振標(biāo)記或其它適用于磁共振成像的非放射性同位素標(biāo)記、熒光型標(biāo)記、顯示可見顏色的標(biāo)記和/或能在紫外線、紅外線或電化學(xué)刺激下發(fā)熒光的標(biāo)記而制備，以使在手術(shù)過(guò)程中成像腫瘤組織，等等。任選地，將診斷標(biāo)記摻入和/或連接至綴合的治療部分，以使得監(jiān)測(cè)治療性生物活性物質(zhì)在動(dòng)物或人患者中的分布。在本發(fā)明另一方面，本發(fā)明的標(biāo)記的綴合物可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法使用任何合適的標(biāo)記(包括，例如、放射性同位素標(biāo)記)而容易的制備。僅僅作為實(shí)例，這些包括"碘、'"碘、"m锝和/或'"銦以制備放射免疫-閃爍劑以用于在體內(nèi)腫瘤細(xì)胞中的選擇性攝取。例如，存在許多本領(lǐng)域已知的方法以將肽連接至Tc-99m，包括，僅僅作為實(shí)例，公開于美國(guó)專利5,328,679;5,888,474;5,997,844;和5,997,845中的那些，在此引入作為參考。G.相應(yīng)于式的優(yōu)選實(shí)施方案本文所述方法制備的一些具體實(shí)施方案包括ocoIIc<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>PEG'R4選自O(shè)H、離去基團(tuán)、靶向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分;(z)為約1至約10的正整數(shù)；(z，)為0或約1至約4的正整數(shù)；mPEG具有式CHrO(CH2CH20)n-;PEG具有式-0(CH2CH20)n-;和(n)為約10至約2,300的正整數(shù).根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選聚合物包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage67</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>藥物-o'、Q-藥物其中藥物為藥學(xué)活性化合物、酶、蛋白質(zhì)、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽；和所有變量如上定義。G.制備活化的聚合物和由其制備的綴合物的方法在本發(fā)明一個(gè)方面，具有位阻酯的聚合物可通過(guò)將在末端具有OH或離去基團(tuán)的聚合物與在遠(yuǎn)端具有受保護(hù)的位阻酯或位阻酸的親核物綴合而制備。進(jìn)一步脫保護(hù)和活化所得聚合物將提供本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的末端基團(tuán)可為羧酸形式，其易于與含OH或SH的部分偶合，或?yàn)榛罨男问剑湓谂c含OH或SH的部分綴合后可被替換。或者，含OH或SH的化合物可綴合以形成位阻酯中間體，然后與活化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>的聚合物反應(yīng)以形成具有位阻酯和生物活性部分的聚合綴合物。出于例示性目的，制備含位阻?；蛭蛔桴ゲ糠值木酆暇Y合物的方法包括應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula>(V)其中A!為封端基團(tuán)或M,八2為封端基團(tuán)或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula>M,為離去基團(tuán)如卣素、活化的碳酸酯(activatedcarbonate)、異氰酸基(isocyanate)、N-羥基琥珀酰亞胺基、甲苯磺酸基、甲磺酸基、三氟乙基磺酸基、硝基苯磺酸基、鄰硝基苯氧基、咪唑和其它本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的離去基團(tuán)；M2為—OH、—SH或-NHR101;R腦為OH或OR101;其中，R，選自氫、C^烷基、C2-6烯基、C2—6炔基、C3—19支鏈烷基、C3-8環(huán)烷基、Cw取代的烷基、C2-6取代的烯基、Cw取代的炔基、C3—8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C,-6雜烷基、取代的C,.6雜烷基、CN6烷氧基、芳基氧基、Cw雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷?；⒎蓟驶?、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2.6烷?；趸⒎蓟驶趸?、C2_6取代的烷?；?、取代的芳基羰基、C2.6取代的烷?；趸⑷〈姆蓟趸驶?、C2.6取代的烷酰基氧基和取代的芳基羰基氧基；和所有其它變量如上定義。根據(jù)式(IV)的位阻酯部分與PEG或其它聚合物的連接可使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)合成技術(shù)進(jìn)行?；罨木酆衔锊糠秩鏢C-PEG、PEG-胺、PEG酸等可從商業(yè)源獲得或由技術(shù)人員合成而沒(méi)有過(guò)多實(shí)驗(yàn)。對(duì)于本發(fā)明而言，這種位阻酯部分的非限制性實(shí)例包括oo式(V)化合物可進(jìn)一步在足以形成式(Ia)化合物的條件下在堿和偶聯(lián)劑的存在下與含-OH或-SH的部分反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>其中八3為封端基團(tuán)或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula>R103選自靶向劑，診斷劑和生物活性部分；且所有其它變量如上定義。對(duì)于本發(fā)明而言，R朋應(yīng)理解為含OH或SH的部分，其在經(jīng)歷與式(V)化合物反應(yīng)后保留?；蛘弑疚乃龅幕衔锟赏ㄟ^(guò)下述方法制備，包括:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula>(VIII)其中A4為封端基團(tuán)或M4;As為封端基團(tuán)或Y！R2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula>M3為—OH、SH或—NHRu)5;M4為離去基團(tuán)如鹵素、活化的碳酸酯、異氰酸基、N-羥基琥珀酰亞胺基、曱笨磺酸基、曱磺酸基、三氟乙基磺酸基、硝基苯磺酸基、鄰硝基苯氧基、咪唑和其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的離去基團(tuán)；R,04選自生物活性部分、靶向基團(tuán)和診斷劑R鵬選自氫、C,-6烷基、C2.6烯基、C2-6炔基、C3-19支鏈烷基、C3-s環(huán)烷基、C!-6取代的烷基、C2，6取代的烯基、C2，6取代的炔基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、Q.6雜烷基、取代的C,—6雜烷基、Cw烷氧基、芳基氧基、d.s雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷?；?、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2—6烷酰基氧基、芳基羰基氧基、C2.6取代的烷酰基、取代的芳基羰基、C2.6取代的烷?；趸⑷〈姆蓟趸驶?、C2.6取代的烷?；趸腿〈姆蓟驶趸缓退衅渌兞咳缟隙x。含位阻酯的基團(tuán)與聚合物部分的連接優(yōu)選在偶聯(lián)劑的存在下進(jìn)行。合適的偶聯(lián)劑的非限制性實(shí)例包括1，3-二異丙基碳二亞胺(DIPC)、任何合適的二烷基碳二亞胺、2-卣代-1-烷基-"比啶錯(cuò)卣化物、(Mukaiyama試劑)、l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)、丙烷膦酸環(huán)酐(PPACA)和苯基二氯磷酸酯等，其例如從商業(yè)源如Sigma-AldrichChemical獲得或使用已知方法合成。優(yōu)選地，所述反應(yīng)在惰性溶劑如二氯曱烷、氯仿、DMF或其混合物中進(jìn)行。所述反應(yīng)可優(yōu)選在堿(如二曱基氨基吡啶(DMAP)、二異丙基乙基胺、吡咬、三乙胺等)的存在下進(jìn)行，以中和任何產(chǎn)生的酸。所述反應(yīng)可在約0。C至約22°C(室溫)的溫度下進(jìn)行。H.治療方法本發(fā)明另一方面，提供治療哺乳動(dòng)物多種醫(yī)學(xué)病況的方法。該方法包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物給藥有效量的本文所述化合物(與生物活性部分綴合)。該聚合綴合物化合物尤其用于治療哺乳動(dòng)物中與用母體化合物治療的疾病類似的疾病，例如，酶替代療法、腫瘤性疾病、減少腫瘤負(fù)荷、防止贅生物(neoplastic)轉(zhuǎn)移和防止肺瘤/贅生物生長(zhǎng)。給藥的聚合綴合物的量，將取決于其中包含的母體分子的量。通常，治療方法中使用的聚合綴合物的量是在哺乳動(dòng)物中有效達(dá)到所需治療結(jié)果的量。通常，不同聚合綴合物化合物的劑量將依據(jù)母體化合物、聚合物分子量、體內(nèi)水解速率等而稍有改變。本領(lǐng)域技術(shù)人員將基于臨床實(shí)驗(yàn)和治療適應(yīng)癥確定所選的聚合運(yùn)輸綴合物的最佳劑量。實(shí)際劑量將對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是明顯的，而不用過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的化合物可包含于一種或多種合適的藥物組合物以向哺乳動(dòng)物給藥。所述藥物組合物可為根據(jù)本領(lǐng)域已知方法制備的溶液、混懸液、片齊'J、膠嚢等形式。也預(yù)期這些組合物的給藥可通過(guò)口服和/或腸胃外途徑，這取決于技術(shù)人員的需要。例如，可使用組合物的溶液和/或混懸液作為載體溶媒以通過(guò)<壬<可本4頁(yè)^戈已知的方法注射或滲透該組合物，例如，通過(guò)靜力永注射、肌j肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射等。這種給藥也可通過(guò)輸注進(jìn)入體間隙或體腔，以及通過(guò)吸入和/或鼻內(nèi)途徑。然而，在本發(fā)明的優(yōu)選方面，所述聚合綴合物通過(guò)腸胃外向需要的哺乳動(dòng)物給藥。實(shí)施例提供以下實(shí)施例以進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中的黑體數(shù)字相應(yīng)于圖1-4中所示的那些。整個(gè)實(shí)施例中使用縮寫，例如DCM(二氯曱烷)、DIPEA(二異丙基乙基胺)、DMAP(4-二曱基氨基吡啶)、DMF(N,N，-二曱基曱酰胺)、EDC(l-(3-二曱基氨基-丙基)-3-乙基碳二亞胺)、IPA(異丙醇)、Mmt(4-曱氧基三苯基曱基)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)、PEG(聚乙二醇)、SCA-SH(單鏈抗體)、SC-PEG(琥珀酰亞胺基碳酸西旨聚乙二醇(succinimidylcarbonatepolyethyleneglycol))、TEAA(四乙基乙酸銨)、TFA(三氟乙酸)和THF(四氬呋喃)。一般方法.所有反應(yīng)在千燥氮?dú)夥栈驓鍤夥罩羞M(jìn)行。使用商業(yè)試劑沒(méi)有進(jìn)一步純化。所有PEG化合物在使用前真空干燥或通過(guò)從曱苯共沸蒸餾。除非另有所述，使用VarianMercury300NMR光譜儀，且使用氘代氯仿和吡啶作為溶劑，以75.46MHz獲得13CNMR譜?；瘜W(xué)位移(5)以距低場(chǎng)四曱基硅烷(TMS)的百萬(wàn)分率(ppm)記錄。HPLC方法.反應(yīng)混合物和中間體和最終產(chǎn)物的純度通過(guò)BeckmanCoulterSystemGoldHPLC儀器監(jiān)測(cè)。其使用ZORBAX300SBC8反相柱(150x4.6mm)或PhenomenexJupiter300AC18反相柱(150x4.6mm),并具有168DiodeArrayUVDetector,使用梯度為5-80%的乙腈在0.05M四乙基乙酸銨(TFAA)中的溶液，流速為1mL/分鐘。)實(shí)施例1.制備PEG-HE-酸，化合物(3)在室溫將SC-PEG(化合物1，Mw.40kDa，1.5g,0.0375mmol)溶于DCMP0mL)中。向該溶液中添加4-氨基-2，2-二曱基丁酸鹽酸鹽(化合物2，26.4mg,0.158mmol)、二異丙基乙基胺(40pL,0.225mmol)和DMF(lmL)。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)且在真空中部分去除溶劑。通過(guò)加入乙醚(40mL)沉淀殘余物以得到白色固體，且將該白色固體從乙腈-IPA重結(jié)晶以得到1.35g產(chǎn)物13CNMRS178.5，156.5,70.6,63.9，40.3，40.2,25.6。實(shí)施例2.制備PEG-HE-紫杉醇，化合物(5)將化合物3(1.3g，0.0322mmol)溶于氯仿(20mL)和DMF(6mL)的混合物中。在室溫向該攪拌的溶液中添加紫杉醇(化合物4,0.165g,0.1932mmol)，然后添加DMAP(5lmg,0.420mmol)。然后在-8。C冷卻反應(yīng)混合物,并添加EDC(50mg,0.258mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?0小時(shí)。含DMF的溶劑用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除，水浴溫度不超過(guò)37。C。向剩余殘余物中添加乙醚以得到固體，將該固體從乙腈-IPA重結(jié)晶13CNMRS204,177,174,172，171,170,167,127-134(7個(gè)信號(hào))，63.8，58.5，55.0，36-46(6個(gè)信號(hào))，9.5-28(8個(gè)信號(hào))。實(shí)施例3.制備Br-HE-OEt，化合物(8)在-78°C將丁基鋰(1.6M在t-BuOH中的溶液，200mL)添加至異丁酸乙酯(化合物6,35g)在THF(500mL)中的溶液中，且將該溶液在相同溫度攪拌1小時(shí)。添加1，5-二溴戊烷(l,5-Dibrom叩etane)(化合物7,100g)且將混合物溫?zé)嶂潦覝?。將該混合物在室溫?cái)嚢鑜小時(shí)并倒入碳酸氫鈉水溶液(500mL)中。蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用10%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以得到液體狀的所需產(chǎn)物(29.2g,產(chǎn)率36.7%)。實(shí)施例4.制備N3-HE-OEt,化合物(9)將7-溴-2,2-二曱基庚酸乙酯(化合物8,26.5g)與疊氮化鈉(13g)在DMF(500mL)中在100。C加熱2小時(shí)。濃縮混合物且殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用10%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以得到液體狀的所需產(chǎn)物(20.5g，產(chǎn)率90.3%)。實(shí)施例5.制備N3-HE-OH，化合物(10)將7-疊氮基-2,2-二曱基庚酸乙酯(化合物9，20.5g)與氬氧化鈉(10g,85。/0)在乙醇(500mL)中加熱回流2小時(shí)。濃縮混合物且添加水(400mL)。用濃鹽酸將混合物酸化至pH2且用乙酸乙酯(500mL)萃取。濃縮有機(jī)層且殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用50%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以得到液體狀的所需產(chǎn)物(n.ig,產(chǎn)率95%)。實(shí)施例6.制備N3-HE-T，化合物(12)將7-疊氮基-2,2-二曱基庚酸(化合物10，8g)溶于二氯曱烷(200mL)中。添加草酰氯(6.4g)且將混合物回流2小時(shí)并蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯曱烷(100mL)中并添加至3，-乙?；剀?化合物11，5.85g)的吡啶(100mL)溶液中。將溶液在室溫?cái)嚢?4小時(shí)并倒入碳酸氫鈉水溶液(500mL)中。該混合物用二氯曱烷(500mL)萃取并濃縮有機(jī)層。殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用5%曱醇的DCM溶液洗脫以得到無(wú)色固體的所需產(chǎn)物(5.6g,產(chǎn)率61%)。實(shí)施例7.制備NHrHE-T，化合物(13)將5，-(7-疊氮基-2，2-二曱基庚?；?3，-乙?；剀?化合物12，4.65g)在曱醇(200mL)中在30psi下在Pd/C(10%，0.5g)的存在下氫化1小時(shí)。過(guò)濾混合物且蒸發(fā)濾液以得到固體(4.4g，產(chǎn)率100%)。實(shí)施例8.制備MmtNH-HE-T，化合物(14)將5，-(7-氨基-2,2-二曱基庚?；?3，-乙?；剀?化合物U4.4g)、三乙胺(4ml)和4-曱氧基三苯曱基氯(7.5g)在吡啶(100mL)中攪拌10小時(shí)。添加曱基胺(40%,10mL)且將溶液攪拌2小時(shí)。將混合物倒入碳酸氫鈉水溶液(500mL)中并用二氯曱烷(500mL)萃取。濃縮有才幾層。殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用5%曱醇的二氯曱烷溶液洗脫以得到無(wú)色固體狀的所需產(chǎn)物(4.9g，產(chǎn)率71%)。實(shí)施例9.制備MmtNH-HE-T-氨基亞膦酸酯(phosphoroamidite)，化合物(15)將5，-(7-[(MMT-氨基)-2,2-二曱基庚酰基]胸苷(化合物14,4.9g)、N，N-四異丙基-氰基乙基氨基亞膦酸酯(3g)和四唑(0.5g)在乙腈(50ml)中攪拌過(guò)夜。將混合物倒入碳酸氫鈉水溶液(500ml)中并用二氯曱烷(500ml)萃取。濃縮有機(jī)層。殘余物通過(guò)硅膠柱純化，用50%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以得到無(wú)色固體狀的所需產(chǎn)物(4.5g,產(chǎn)率71%)。實(shí)施例10.制備NH2-HE-寡聚物，化合物(16)將化合物15轉(zhuǎn)移至TrilinkBiotechnologies,CA以用作寡聚物合成中的最終單體。合成后將Mmt基團(tuán)脫保護(hù)且將該寡聚物通過(guò)RP-HPLC純化，且獲得作為游離胺的化合物16用于PEG綴合。寡核苷酸的序列為TCTCCCAGCGTGCGCCAT。實(shí)施例11.制備PEG-HE-寡聚物，化合物(17)向化合物16(10mg,1.7lamol)在PBS緩沖液(5mL，pH7.8)中的溶液中添加SC-PEG(化合物1，Mw30kDa,520mg，17pmol)并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋至50mL并負(fù)載在PorosHQ、強(qiáng)陰離子交換柱上(10mmx1.5mm，柱床體積16mL)，該柱用20mMTris-HCl緩沖液，pH7.4(緩沖液A)預(yù)平衡。該柱用3-4倍柱體積的緩沖液A洗滌以去除過(guò)量的PEG連接體。然后該產(chǎn)物以流速10mL/分鐘，用梯度為0至100%的1MNaCl在20mMTris-HCl緩沖液，pH7.4(緩沖液B)中的溶液洗脫10分鐘，然后以100%緩沖液B洗脫10分鐘。洗脫的產(chǎn)物用HiPrep除鹽柱(50mL)除去鹽分并凍干以得到6mg產(chǎn)物。寡核苷酸在綴合物中的等價(jià)物通過(guò)UV測(cè)量為60%,wt/wt。實(shí)施例12.制備PEG-連接基-HE-寡聚物，化合物(19)向化合物16(10mg，1.7pmol)在PBS緩沖液(5mL，pH7.8)中的溶液中添加PEG-連接基-NHS(化合物18,Mw30kDa，520mg,17iamol)并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋至50mL并負(fù)載在PorosHQ、強(qiáng)陰離子交換柱上(10mmx1.5mm,柱床體積16mL),該柱用20mMTris-HCl緩沖液，pH7.4(緩沖液A)預(yù)平衡。該柱用3-4倍柱體積的緩沖液A洗滌以去除過(guò)量的PEG連4妄體。然后該產(chǎn)物以流速10mL/分鐘用梯度為0至100%的1MNaCl在20mMTris-HCl緩沖液，pH7.4(緩沖液B)中的溶液洗脫1077分鐘，然后以100%緩沖液B洗脫10分鐘。洗脫的產(chǎn)物用HiPrep除鹽柱(50mL)除去鹽分并凍干至固體以得到5mg所需產(chǎn)物。寡核苷酸在綴合物中的等價(jià)物通過(guò)UV測(cè)量為50%,wt/wt。實(shí)施例13.制備BocNH-HE-T，化合物(22)將4-Boc-氨基-2，2-二甲基丁酸(化合物20,0.50g,2.16mmol)溶于氯仿(10mL)和DMF(5mL)的混合物中,并添加胸苷(化合物21，0.79g,3.25mmol)。反應(yīng)混合物在水浴中冷卻，并添加EDC(0.62g,3.25mmol),然后添加DMAP(0.40g,3.25mmol)。攪拌下將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝乇３?0小時(shí)。真空去除溶劑且將殘余物懸浮于乙酸乙酯，用O.lNHCl和鹽水洗滌。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉千燥并真空去除溶劑以得到粗油狀物。通過(guò)快速柱色譜法在硅膠上使用DCM/EtOAc(40:60，v/v)得到0.28g所需產(chǎn)物13CNMRS177.21，164.08,156.41,150.80，135.46，111.49,85.43,84.30，80.21,71.28，63.77,41.67,41.08,40.00，37.69，36.99，28.87,26.14,25.55,13.06。實(shí)施例14.制備NHrHE-T，化合物(23)將化合物22(0.25g,0.55mmol)溶于DCM(5mL)中，且在室溫將TFA(0.25mL)通過(guò)吸量管添加至該溶液。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。通過(guò)與DCM共蒸發(fā)真空去除溶劑和TFA,以完全去除TFA并得到0.32g玻璃狀固體的產(chǎn)物13CNMR(CD3CN)5176.61，164.22，150.81，136.41,136.18，110.82，85.14，85.07,84.14,83.97，70.99，64.56,41.32,39.35，37.13,36.92,25.10，24.92,24.75,12.08,11.98。實(shí)施例15.制備PEG-HE-T，化合物(25)將mPEG-連接基-NHS(化合物24,Mw.20k,0.50g,0.0246mmol)和化合物23(26mg，0.0738mmol)溶于DCM(5mL)和DMF(1mL)的混合物中，且將DMAP(15mg，0.0123mmol)添加至該溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。真空去除溶劑，且粗產(chǎn)物通過(guò)添加乙醚而沉淀。過(guò)濾收集固體且從乙腈/IPA重結(jié)晶以得到0.43g純白色固體狀的產(chǎn)物13CNMR5177.9，168.0,164.0，150.9，134.9,133.1,129.8，128.1,110.2,84.4，83.9，70.4，67.8,64.5,63.2,60.0，58.7,40.1，39.4,37.2,25.2，24.7,16.1,12.2。實(shí)施例16.制備PEG-HE-T，化合物(27)將mPEG-NHS(化合物26，Mw.20k,lg，0.0492mmol)和化合物23(26mg，0.1476mmol)溶于DCM(10mL)和DMF(2mL)的混合物中，且將DMAP(30mg，0.246mmol)添加至該溶液中。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。真空去除溶劑，且粗產(chǎn)物通過(guò)添加乙醚而沉淀。過(guò)濾收集固體并從乙腈/IPA重結(jié)晶以得到0.90g白色固體狀的產(chǎn)物13CNMRS178.2,162.9,156.0，149.5,134.6,110.3,84.4,83.4,70.1，69.1,64.4,63.5,62.6,61.2,58.6,40.6,40.0,39.4,37.1，12.2。實(shí)施例17.測(cè)定PEG綴合物在緩沖液和大鼠血漿中的穩(wěn)定性通過(guò)使用C8反相柱(ZorbaxSB-C8)使用由(a)0.1M乙酸三乙銨緩沖液和(b)乙腈組成的梯度流動(dòng)相獲得水解速率。使用1mL/分鐘的流速，且使用UV檢測(cè)器對(duì)于紫杉醇在227nm和對(duì)于寡核苷酸在260nm監(jiān)測(cè)色譜圖。對(duì)于在緩沖液中水解，將PEG衍生物以濃度5mg/mL溶于0.1MpH7.4PBS或水，而對(duì)于在血漿中水解，將衍生物以濃度為20mg/100溶于蒸餾水且將900pL大鼠血漿添加至該溶液中。將該混合物渦旋2分鐘并分配于2mL玻璃小瓶中，且每個(gè)小瓶100^L等分。該溶液在37。C孵育不同的時(shí)間。以合適間隔將曱醇-乙腈(l:l,v/v,400pL)混合物添加至小瓶且混合物渦旋1分鐘，然后通過(guò)0.45mm濾膜過(guò)濾(任選然后通過(guò)0.2mm濾膜二次過(guò)濾)。將20nL濾液的等分試樣注入HPLC?；诜迕娣e，估算出天然化合物和PEG衍生物的量，且不同介質(zhì)中每種化合物的半衰期使用線性回歸分析根據(jù)PEG衍生物的消失計(jì)算。實(shí)施例中化合物的穩(wěn)定性研究結(jié)果示于下表。表.PEG綴合物穩(wěn)定性研究結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>權(quán)利要求1.式(I)的化合物其中A為封端基團(tuán)，或R1為基本上非抗原性的水溶性聚合物；L1和L’1為獨(dú)立選擇的具有孤對(duì)電子的間隔基，該孤對(duì)電子位于距C(＝Y(jié)1)或C(＝Y(jié)’1)的4至10個(gè)原子處，優(yōu)選距C(＝Y(jié)1)或C(＝Y(jié)’1)的4至8個(gè)原子處且最優(yōu)選4至5個(gè)原子處；L2和L’2為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；Y1和Y’1獨(dú)立地為O、S或NR5；R2、R’2、R3、R’3和R5獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-19支鏈烷基、C3-8環(huán)烷基、C1-6取代的烷基、C2-6取代的烯基、C2-6取代的炔基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C1-6雜烷基、取代的C1-6雜烷基、C1-6烷氧基、芳基氧基、C1-6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2-6烷?；⒎蓟驶?、C2-6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2-6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2-6取代的烷酰基、取代的芳基羰基、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2-6取代的烷?；趸腿〈姆蓟驶趸?，或R2和R3一起以及R’2和R’3一起獨(dú)立地形成含至少三個(gè)碳的取代的或未取代的非芳香環(huán)烴；R4和R’4獨(dú)立地選自O(shè)H、離去基團(tuán)、靶向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分；和(p)和(p’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或約1至約3的整數(shù)，更優(yōu)選0或1；條件是當(dāng)R2為H時(shí)，R3為具有至少三個(gè)碳的取代的或未取代的烴，且進(jìn)一步條件是L1不同于C(R2)(R3)。2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述離去基團(tuán)選自O(shè)H、鹵素、活化的酯、環(huán)酰亞胺硫酮、N-羥基琥珀酰亞胺基、對(duì)-硝基苯氧基、N-羥基鄰苯二曱酰亞胺、N-羥基苯并三唑基、咪唑、曱苯磺酸基、甲磺酸基、三氟乙基磺酸基、硝基苯磺酸基、C,.e烷基氧基、d一6烷?；趸⒎蓟驶趸?、鄰-硝基苯氧基、對(duì)-硝基苯氧基、五氟苯氧基、1,3，5-三氯苯氧基和1,3,5-三氟笨氧基。3.權(quán)利要求1的化合物，其中R4和R，4獨(dú)立地選自O(shè)H、甲氧基、叔丁氧基、對(duì)-硝基苯氧基和N-羥基琥珀酰亞胺基。4.權(quán)利要求1的化合物，其中所述生物活性部分選自含-OH的部分和含-SH的部分。5.權(quán)利要求1的化合物，其中所述生物活性部分選自藥學(xué)活性化合物、酶、蛋白質(zhì)、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽。6.權(quán)利要求1的化合物，其中L,和L',獨(dú)立地選自-NR"CR,2Rb)s-，-S(CR2Rl3)s-，-0(CR12R13)s-,-[C(=0)]r(CR12R13)s-,-NR(CR12R13)sO(CR14R15》-,-NR(CR12R13)sS(CRl4R15)s'-，-NR(CR12R13)sNR16(CR14R15)s'-，-NRn(CR函30)s(CR^5)s'-,-0(CR12R13)sO(CR14R15》-,-0(CRi2Rl3)sS(CRi4Ri5)s'_,-0(CR12R13)sNR16(CR14R15》-，-0(CR12R'30)s(CR14R15)s，-,其中Ru-Rw獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、曱硅烷基醚、磺?；?、巰基、cl6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的C,，6烷硫基、d.s烷基、C2.6烯基、C2-6炔基、C3-19支鏈烷基、q.s環(huán)烷基、Cw取代的烷基、C2-6取代的烯基、C2—6取代的炔基、C^取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C,.6雜烷基、取代的C,—6雜烷基、d—6烷氧基、芳基氧基、C"6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷?；?、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2—6烷?；趸⒎蓟驶趸?、C2-6取代的烷酰基、取代的芳基羰基、C2-6取代的烷?；趸⑷〈姆蓟趸驶?、C2.6取代的烷?；趸⒑腿〈姆蓟驶趸?；(s)和(s，)獨(dú)立地為0或正整^:;和(r)為0或1。7.權(quán)利要求1的化合物，其中L2和L，2獨(dú)立地選自-[C(=0)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2-,-[C(=0)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s'[C(=0)]r-,-[C(=0)]rNH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s，[C(=0)]r-,-[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s'[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r-，-[C(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s，[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rNHCH2CH2NH[C(=0)]r，-,-[C(=0)]rNH(CH2CH2)20[C(=0)]r，-,-[C(=0)]rNH(CH2CH20)[C(=0)]r-,-[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r'_,-[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=0)]r'_,_[C(=0)]rO(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r'-,-[C(=0)]rO(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r,-，-[C(=0)]rO(CH2CH20)2NH[C(=0)]r-，-[C(=0)]rO(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r'-，-[C(=0)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r,-，-[C(=0)]rO(CH2CH2)NH[C(=0)]r-，-[C(=0)]rO(CH2CH2)0[C(=0)]r-，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中(r)和(r，)獨(dú)立地為0或1。,和8.權(quán)利要求1的化合物，其中L2和L，2獨(dú)立地選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>烷基、Cw取代的烷基、(]3.8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、C,_6雜烷基、取代的C^雜烷基、Cw烷氧基、苯氧基和C,_6雜烷氧基；Ar為芳基或雜芳基部分；L山,5為獨(dú)立選擇的雙官能間隔基；J和J，獨(dú)立地選自主動(dòng)運(yùn)輸至靶細(xì)胞部分、疏水部分、雙官能連接部分及其組合；(cll)、(hll)、(kll)、(111)、(mll)和(nll)為獨(dú)立選擇的正整數(shù)；(all)、(ell)、(gll)、(jll)、(oll)和(qll)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；和(bll)、(xll)、(x，ll)、(fll)、(ill)和(pll)獨(dú)立地為0或1。9.權(quán)利要求1的化合物，其中L2和L，2獨(dú)立地選自氨基酸、氨基酸衍生物和肽。10.權(quán)利要求1的化合物，其中-LrCXR^RO-C^Y,)-和-L，廣C(R，2)(R，3)-C(二Y，,)獨(dú)立地選自11.權(quán)利要求1的化合物，其具有下式(II)Y',R、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>12.權(quán)利要求1的化合物，其中A選自H、NH2、0H、C02H、d-6烷氧基和d—6烷基。13.權(quán)利要求1的化合物，其中R,包括直鏈、末端支鏈的或多臂的聚環(huán)氧烷。14.權(quán)利要求13的化合物，其中所述聚環(huán)氧烷選自聚乙二醇和聚丙二醇。15.權(quán)利要求13的化合物，其中所述聚環(huán)氧烷選自-Y7!-(CH2CH20)n-CH2CH2Y7,陽(yáng)，-Y71-(CH2CH20)n-CH2C(=Y72)-Y71-，-Y71-C(=Y72)-(CH2)a71-Y73-(CH2CH20)n-CH2CH2-Y7r(CH2)a71-C(=Y72)-Y71-,和-Y71-(CR71R72)a72-Y7r(CH2)b71-0-(CH2CH20)n-(CH2)b71-Y73-(CR7lR72)a72-Y71-，其中Y"和Y"獨(dú)立地為O、S、SO、S02、NR73或化學(xué)鍵；YM為O、S或NR^;1171_74獨(dú)立地為可用于R2的相同的部分；(a71)、(a72)和(b71)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；和(n)為約10至約2300的整數(shù)。16.權(quán)利要求13的化合物，其中所述聚環(huán)氧烷為式-0-(CH2CH20)n-的聚乙二醇，其中(n)為約10至約2,300的整數(shù)。17.權(quán)利要求1的化合物，其中R,的平均分子量為約2,000至約100,000道爾頓。18.權(quán)利要求1的化合物，其中R,的平均分子量為約5,000至約60,000道爾頓。19.權(quán)利要求1的化合物，其中R,的平均分子量為約5,000至約25,000道爾頓或約20,000至約45,000道爾頓。20.權(quán)利要求1的化合物，其中R2、R，2、R3和R，3獨(dú)立地選自甲基、乙基和異丙基。21.權(quán)利要求1的化合物，其選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>R4選自O(shè)H、離去基團(tuán)、靶向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分(z)為約1至約10的正整數(shù)；(z，)為0或約1至約4的正整數(shù)；mPEG具有式CH3-0(CH2CH20)n-;PEG具有式-0(CH2CH20V;和(n)為約10至約2,300的正整數(shù)。22.權(quán)利要求1的化合物，其選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>藥物為藥學(xué)活性化合物、酶、蛋白質(zhì)、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體(z)為約1至約10的正整數(shù)；(z，)為0或約1至約4的正整數(shù)；mPEG具有式CHrO(CH2CH20)n-;PEG具有式-0(CH2CH20)n-;和(n)為約10至約2,300的正整數(shù)。23.制備含位阻酰基或位阻酯部分的聚合綴合物的方法，包括:應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中A,為封端基團(tuán)或八2為封端基團(tuán)或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>為基本上非抗原性的水溶性聚合物；M,為離去基團(tuán)；M2為—OH、SH或-NHR101;R100選自O(shè)H或OR101;L,和L2為獨(dú)立選擇的具有孤對(duì)電子的間隔基，該孤對(duì)電子位于距C(二Y,)或C^Y、)的4至10個(gè)原子處；Y,和Y，,獨(dú)立地為O、S或NRs;和R2、R3、Rs和R!。。獨(dú)立地選自氫、Cw烷基、C2.6烯基、C2-6炔基、C3.19支鏈烷基、(:3.8環(huán)烷基、Ck取代的烷基、C2，6取代的烯基、C2-6取代的炔基、C^取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C,—6雜烷基、取代的d.6雜烷基、C,.6烷氧基、芳基氧基、C"雜烷氧基、雜芳基氧基、C2.6烷?；?、芳基羰基、C2.6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2-6化與化III將件，tjYR:c烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2—6取代的烷?；?、取代的芳基羰基、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2_6取代的烷?；趸腿〈姆蓟驶趸騌2和R3—起以及R，2和R，3—起獨(dú)立地形成含至少三個(gè)碳的取代的或未取代的非芳香環(huán)烴；(p)為0或正整數(shù)；條件是當(dāng)112為H時(shí)，R3為具有至少三個(gè)碳的取代的或未取代的烴，且進(jìn)一步條件是不同于C(R2)(R3)。24.權(quán)利要求23的方法，進(jìn)一步包括或-SH的部分反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>(V)其中八3為封端基團(tuán)或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>(Ia)R103選自靶向劑、診斷劑和生物活性部分；和所有其它變量與權(quán)利要求24中定義相同。25.治療哺乳動(dòng)物的方法，包括向需要的患者給藥有效量的與生物活性部分綴合的式(I)化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>全文摘要本發(fā)明提供包含位阻酯部分的聚合物遞送體系。也公開了制備該聚合物遞送體系的方法和使用其治療哺乳動(dòng)物的方法。文檔編號(hào)A61K39/395GK101534861SQ200780042529公開日2009年9月16日申請(qǐng)日期2007年9月15日優(yōu)先權(quán)日2006年9月15日發(fā)明者洪趙申請(qǐng)人:安佐制藥股份有限公司