專利名稱：喹啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的喹啉衍生物作為CLK-1抑制劑。更具體地說，本發(fā)明涉及新的喹啉衍生物或其可藥用鹽或前體藥物作為CLK-1抑制劑，包括其的藥物組合物，以及用于預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的方法。

背景技術(shù)：
clk-1和CLK-1的作用 clk-1基因編碼21kDa線粒體蛋白，其在真核生物當(dāng)中是保守的，鼠和人序列之間的序列同一性為85％，秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans)的同源序列為50％。CLK-1參與泛醌生物合成的最后步驟之一并且負(fù)責(zé)脫甲氧泛醌(DMQ)的羥基化作用。其中CLK-1是非活性的突變株不合成可檢測量的泛醌(Q)，而是積聚DMQ(Miyadera等人，2001)。
Q在細(xì)胞中具有許多功能。其牽涉內(nèi)部線粒體膜、質(zhì)膜和溶酶體膜的電子傳遞。其還是若干細(xì)胞酶(例如二氫乳清酸脫氫酶，其是核酸生物合成所必需的)和其它蛋白質(zhì)和復(fù)合物如調(diào)節(jié)代謝性產(chǎn)熱的線粒體解偶蛋白(UCP)和調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡的線粒體滲透性轉(zhuǎn)導(dǎo)孔(MPTP)的輔助因子。
DMQ是可以轉(zhuǎn)運電子的醌類，盡管不如泛醌那么有效。其中已經(jīng)剔除clk-1同系物(mclk-1)的鼠胚胎也積聚DMQ，并且不能存活。(Levavasseur等人，2001)，但是mclk-1的鼠雜合體顯示了增加的生命期表型。在剔除小鼠中CLK-1的轉(zhuǎn)基因表達援救了致命性表型，并允許泛醌的合成(Nakai等人，2004)。有趣地是，在生長遲緩的coq7(酵母clk-1)酵母突變株中秀麗隱桿線蟲CLK-1的異源表達具有作用，并援救酵母生長遲緩表型(Ewbank等人，1997)。總之，這些觀察表明CLK-1是在被研究有機體中的唯一的DMQ羥化酶，并且沒有對于CLK-1活性的功能補償機制。
在秀麗隱桿線蟲中，CLK-1活性的降低也轉(zhuǎn)變?yōu)樯诘脑黾?。生命期是在蠕蟲生理學(xué)中將各種變異整合的積累表型，并且其對環(huán)境信號和基因突變是敏感的。因而，延長生命期的條件通常被認(rèn)為是有益的。例如，有利的修復(fù)對損傷的平衡會通過增加生命期而自身表現(xiàn)(Hekimi等人，2001)。
年齡相關(guān)病癥 年齡相關(guān)疾病是指隨著年齡的增加發(fā)病率和/或患病率增加的疾病。這些疾病包括例如癌，腦血管疾病(卒中)，神經(jīng)變性疾病，肺炎，呼吸系統(tǒng)疾病，關(guān)節(jié)炎，心臟病，糖尿病，聽力障礙，視力障礙和腎病。
CLK-1活性和年齡相關(guān)病癥 CLK-1的抑制在小鼠和線蟲中具有相似的延長生命期的效果。這強烈地顯示了在CLK-1生物活性和生理學(xué)老化過程之間的因果聯(lián)系。普遍接受的是生理學(xué)老化是許多疾病(所謂的年齡依賴性疾病)的危險因素。許多這些疾病是致命的并限制了生命期。已經(jīng)表明當(dāng)小鼠CLK1(mCLK1)蛋白水平在mclk1+/-雜合體中減少一半時(Levavasseur等人，2001)，其在三個不同的實驗中增加了這些動物的平均生命期、中值生命期和最大生命期。每個實驗在不同的遺傳背景下進行(129SV/j，C57BL/6和129SV/j x Balb/c)(Liu等人，2005)。在這些背景下的動物已知死于各種年齡依賴性疾病，其模式在每個背景下是不同的(Blackwell等人，1995；Cosgrove等人，1978；Frith等人，1983；Smith等人，1973)。在所有的三個實驗中，大部分野生型動物和突變動物在相對較短的時段內(nèi)死亡，這是基因型(mclk1+/+或mclk1+/-)的典型表現(xiàn)(Liu等人，2005)。Mclk1減少在不同的遺傳背景下起作用的事實以及最大生命期和中值生命期被增加的事實表明所有的或大部份的致命性原因必定被這一減少所部分地壓制。實際上，當(dāng)單一的生命期的原因受到基因操作如癌影響時，生命期僅僅最低限度地延長或更根本不延長(Matheu等人，2004；Miller，2005)。相比之下，諸如熱量限制和生長激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)降低的操作(其已知使生理學(xué)老化減慢)降低年齡依賴性疾病的發(fā)病率(Bartke，2005；Berrigan等人，2002；Hursting等人，2004)。另外，其中老化過程得以促進的動物顯示了疾病患病率增加和疾病早發(fā)(Fenton等人，2004；Takeda等人，1997)。這些觀察連同clk-1/mclk1對生命期的進化保守性(Liu等人，2005)表明降低mCLK1活性使生理學(xué)老化減慢，因此CLK-1的抑制可以延遲年齡依賴性疾病的發(fā)病和嚴(yán)重性。公知減慢生理學(xué)老化是降低各種疾病的發(fā)病率和嚴(yán)重性的最好的方法(Finkel，2005；Miller，2005)。
因此，通過使用可用作CLK-1抑制劑的化學(xué)品抑制CLK-1導(dǎo)致預(yù)防或降低年齡相關(guān)疾病。
喹啉衍生物 喹啉衍生物類型的化合物公開在CA 2.493.536A1、US2006/0074104A1和WO 2004/087160A1中，用于治療、改善和/或預(yù)防神經(jīng)病學(xué)病況，特別是與氧化應(yīng)激有關(guān)的或被其促進的那些病況?？紤]在內(nèi)的神經(jīng)病學(xué)病癥包括任何導(dǎo)致認(rèn)知損傷如早期或輕度認(rèn)知損傷或記憶喪失的任何病況。
盡管上述的喹啉衍生物已經(jīng)表明是有用的氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)劑，據(jù)稱它們主要通過金屬螯合作用發(fā)揮其療效。目前為止沒有現(xiàn)有技術(shù)文獻表明相似的化合物可用于預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的年齡相關(guān)病癥。
在這方面，本發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了新的一族具有抑制CLK-1活性的化合物。這些化合物對年齡相關(guān)病癥以及缺血再灌注損傷和炎癥病癥具有活性。
發(fā)明概述 因此，本發(fā)明的目的是提供新的式A的喹啉衍生物，其具有CLK-1抑制活性。
更具體地說，本發(fā)明涉及如下定義的式A的化合物，或其可藥用鹽或其前體藥物；
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2的定義如下所述 a)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中 ·R4＝H或C1-C4烷基； ·R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 ·R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1為

且R7為-(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 b)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 限制條件是式A的每個化合物不是附件1中所指出的化合物之一。
本發(fā)明的式A的化合物當(dāng)包括至少一個不對稱中心時，為其旋光異構(gòu)體如對映體之一的形式，或者為包括例如外消旋物的其混合物形式。
本發(fā)明還涉及用于在細(xì)胞中抑制CLK-1活性的方法，該方法包括以下步驟a)提供其中需要抑制CLK-1活性的細(xì)胞，b)使該細(xì)胞接觸如下定義的式(B)的化合物、或其可藥用鹽或前體藥物；
其中X、R1和R2具有與前述相同的定義； 式(B)的化合物當(dāng)包括至少一個不對稱中心時，為其旋光異構(gòu)體之一的形式或其混合物的形式；和 c)測定細(xì)胞中的CLK-1活性。
本發(fā)明還涉及用于在動物中預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的方法，該方法包括以下步驟a)鑒定罹患從CLK-1抑制中受益的病癥的動物；和 b)對所述動物給用式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括本發(fā)明的式A化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以及至少一種可藥用的載體。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括藥學(xué)有效量的如上定義的式A或式B的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以及至少一種可藥用的載體，以有效地降低和/或完全地或部分地抑制CLK-1活性。



圖1顯示用CLK-1抑制劑處理后在醌曲線中DMQ減少的HPLC曲線。小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)用a)非活性化合物或b)活性化合物135(1μM)處理24小時，然后進行細(xì)胞溶解并用己烷/乙醇提取醌。將樣品在帶有UV檢測器的HPLC上用甲醇/乙醇梯度洗脫，從而測定泛醌(Q)及其前體脫甲氧泛醌(DMQ)的水平。
圖2顯示在用a)DMSO或b)10μM的化合物7處理的RAW264.7細(xì)胞中相對的醌峰值的HPLC曲線(Q泛醌，DMQ脫甲氧泛醌)。
圖3顯示在用a)1μM的或b)3μM的化合物23處理的RAW264.7細(xì)胞中相對的醌峰值的HPLC曲線(Q泛醌，DMQ脫甲氧泛醌)。
圖4顯示在用a)5μM的或b)10μM的化合物69處理的RAW264.7細(xì)胞中相對的醌峰值的HPLC曲線(Q泛醌，DMQ脫甲氧泛醌)。
圖5顯示在用a)5μM的或b)10μM的化合物47處理的RAW264.7細(xì)胞中相對的醌峰值的HPLC曲線(Q泛醌，DMQ脫甲氧泛醌)。
圖6顯示在用a)5μM的或b)10μM的化合物53處理的RAW264.7細(xì)胞中相對的醌峰值的HPLC曲線(Q泛醌，DMQ脫甲氧泛醌)。
圖7CLK-1抑制劑的特異性?；衔?對a)小鼠CLK-1(JF496-mclk1供試系統(tǒng))和b)細(xì)菌DMQ羥化酶UbiF(JF496-ubiF供試系統(tǒng))的作用。表達a)小鼠CLK-1和b)細(xì)菌DMQ-羥化酶UbiF的JF496細(xì)菌用化合物7處理5小時。提取醌并使用HPLC進行分析。HPLC曲線表明CLK-1活性被化合物7所抑制，因為泛醌(Q)合成降低并伴隨脫甲氧泛醌(DMQ)的增加。與此相比，UbiF活性不受影響，并且Q是被檢測到的主要的醌物質(zhì)。這表明化合物7具有特異性的CLK-1抑制活性。
圖8CLK-1抑制劑的特異性?；衔?2對a)小鼠CLK-1(JF496-mclk1供試系統(tǒng))和b)細(xì)菌DMQ羥化酶UbiF(JF496-ubiF供試系統(tǒng))的作用。表達a)小鼠CLK-1和b)細(xì)菌DMQ-羥化酶UbiF的JF496細(xì)菌用化合物52處理5小時。提取醌并使用HPLC進行分析。HPLC曲線表明CLK-1活性被化合物52所抑制，因為泛醌(Q)合成降低并伴隨脫甲氧泛醌(DMQ)的增加。與此相比，UbiF活性不受影響，并且Q是被檢測到的主要的醌物質(zhì)。這表明化合物52具有特異性的CLK-特異抑制活性。
圖9CLK-1抑制劑(7和135)的ROS降低作用。(A)表明在小鼠巨噬細(xì)胞中關(guān)于CLK-1抑制劑的醌曲線的表格；(B)與CLK-1抑制劑預(yù)溫育的細(xì)胞用熒光標(biāo)記物DCF處理，其當(dāng)被細(xì)胞ROS氧化時產(chǎn)生綠色熒光。在細(xì)胞中使用H2O2誘導(dǎo)ROS，并且使用CLK-1抑制劑觀察到的降低以相對于對照的百分?jǐn)?shù)表示；和(C)使用從細(xì)胞核漏出的DNA的熒光尾部的COMET試驗測量由ROS誘導(dǎo)的DNA損傷。再次使用H2O2誘導(dǎo)ROS，并且數(shù)據(jù)用具有尾部的細(xì)胞與對照相比較的百分?jǐn)?shù)表示。表明了在CLK-1抑制劑存在的條件下顯示彗星的細(xì)胞的減少(總細(xì)胞的％)。
圖10在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52對血清肌酸酐水平的作用。
圖11在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52對血液尿素氮(BUN)水平的作用。
圖12在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52對肌酸酐清除率的作用。
圖13在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52對尿蛋白濃度(g/L)的作用。
圖14在用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的肺損傷的大鼠中化合物7對脂氧合酶(LPO)水平的作用。
圖15在用LPS誘導(dǎo)肺損傷的大鼠中化合物7對蛋白質(zhì)含量的作用。
圖16在用LPS誘導(dǎo)肺損傷的大鼠中化合物7對總細(xì)胞水平和嗜中性粒細(xì)胞水平的作用。
圖17在用LPS誘導(dǎo)肺損傷的大鼠中化合物7對TNF-α水平的作用。
圖18在TBS級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用多種劑量的化合物138處理對可溶Aβ1-40的作用。
圖19在TBS級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用各種劑量的化合物138處理對可溶Aβ1-42的作用。
圖20在Triton X-100級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用各種劑量的化合物138處理對可溶Aβ1-40的作用。
圖21在Triton X-100級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用各種劑量的化合物138處理對可溶Aβ1-42的作用。
圖22在FA級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用多種劑量的化合物處理對結(jié)合型Aβ1-40的作用。
圖23在FA級分中在hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠中通過ELISA測定的用多種劑量的化合物處理對結(jié)合型Aβ1-42的作用。
發(fā)明詳述 本發(fā)明獲得了意想不到的發(fā)現(xiàn)，即，包括如下定義的式A的喹啉衍生物的新化合物類別，其表現(xiàn)出CLK-1抑制活性。
定義 本文使用的可藥用鹽意欲包括本發(fā)明化合物的任何鹽，該鹽適于接觸人和低等動物的組織而無不適當(dāng)?shù)亩拘浴⒋碳ば曰蜃儜B(tài)反應(yīng)并且與合理的風(fēng)險/益處比相稱。可藥用鹽是本領(lǐng)域公知的(PharmaceuticalSalts Properties，Selection，and Use，Stahl，P.Heinrich/Wermuth，CamilleG.(編輯)，2002.Monograph-ISBN 3-906390-26-8-Verlag HelveticaChimica Acta，Zurich)?？伤幱名}可在最后分離和純化本發(fā)明化合物期間原地制備，或者單獨地通過使本發(fā)明化合物的游離堿官能團與適當(dāng)?shù)乃岱磻?yīng)制備或者通過使本發(fā)明化合物的游離酸官能團與適當(dāng)?shù)膲A反應(yīng)制備，包括但不限于可藥用的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽?？伤幱玫乃峒映甥}包括但不限于乙酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，檸檬酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，二葡糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半磺酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，富馬酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，2-萘磺酸鹽，草酸鹽，雙羥萘酸鹽，果膠酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸酯，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，酸式磷酸鹽，谷氨酸，碳酸氫鹽，對甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。另外，包含堿性氮的基團可以被諸如以下物質(zhì)季銨化烷基鹵化物例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸酯；長鏈鹵化物例如癸基、月桂基、十四烷基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；和芳基烷基鹵化物例如芐基和苯基乙基的溴化物?？伤幱名}還包括但不限于基于堿金屬或堿土金屬的陽離子的鹽，如鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉的鹽等。
本文使用的前體藥物是指這樣的化合物，該化合物在體內(nèi)給藥時被代謝或以其它方式轉(zhuǎn)化為母體化合物的生物學(xué)、藥學(xué)或治療學(xué)活性形式的化合物，例如通過在血液內(nèi)水解。為了得到前體藥物，將藥學(xué)活性化合物進行修飾從而活性化合物將通過代謝過程再次被生成。前體藥物可被設(shè)計用于改變藥物的代謝穩(wěn)定性或轉(zhuǎn)運特征(包括改善生物利用度)，掩蔽副作用或毒性，改善藥物的味道或改變藥物的其它特征或性質(zhì)。依靠體內(nèi)藥代動力學(xué)過程和藥物代謝的知識，本領(lǐng)域技術(shù)人員當(dāng)?shù)弥帉W(xué)活性化合物時可以設(shè)計出該化合物的前體藥物。
本發(fā)明還涵蓋了通過式A或B的化合物的體內(nèi)變形形成的代謝物。術(shù)語代謝物是指式A或B的化合物經(jīng)由氧化、還原、水解或結(jié)合進行體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化而形成的化合物。
本文使用的術(shù)語烷基是指飽和的脂族基，包括直鏈烷基、支鏈烷基和環(huán)烷基(脂環(huán)族)基團。
本文使用的術(shù)語芳基包括5和6元單環(huán)芳族基，其可包含0-4個雜原子(S、N、O)，例如為未被取代的或被取代的苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，三唑，吡唑，吡啶，吡嗪，噠嗪和嘧啶等。
本文使用的術(shù)語鹵素是指F，Cl，Br或I。
本文使用的術(shù)語旋光異構(gòu)體是指所要求保護的化合物的任何異構(gòu)形式，諸如但不限于對映體，非對映異構(gòu)體，外消旋物或其混合物。
可藥用的載體是指不干擾組合物的活性成分即式A化合物的生物活性的有效的并且對宿主或患者無毒性的載體介質(zhì)。另外，該載體有利地是具有被治療受試者的免疫系統(tǒng)所排斥的最小可能性的化合物。適當(dāng)?shù)妮d體是本領(lǐng)域技術(shù)人員的常識并且不再另外詳述。
本文使用的術(shù)語治療是指一種方法，通過該方法，從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀被緩解或被完全消除。例如，可以認(rèn)為所述治療可以例如通過以適當(dāng)劑量給用在適當(dāng)制劑形式中的本發(fā)明的化合物至具有疾病的高風(fēng)險/或疾病早期的患者而減輕或完全消除疾病或其相關(guān)癥狀。
本文使用的術(shù)語預(yù)防是指一種方法，通過該方法，病癥或其相關(guān)癥狀，包括但不限于年齡相關(guān)病癥，被阻礙、延遲或預(yù)防。
本文使用的表述從CLK-抑制中受益的病癥是指已知或預(yù)期從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀。更特別地，該表述是指當(dāng)CLK-1被抑制時病癥或其相關(guān)癥狀被減輕或消除。甚至更特別地，該表述是指但不限于炎癥病癥，由氧化應(yīng)激和/或自由基誘導(dǎo)的損傷所引起或加重的病癥，包括ROS介導(dǎo)的疾病如缺氧/富氧損傷和缺血/再灌注損傷。該表述還涵蓋了年齡相關(guān)病癥。
本文使用的表述年齡相關(guān)病癥是指隨著年齡的增加發(fā)病率和/或患病率增加的病癥，包括但不限于心血管疾病，例如動脈粥樣硬化，冠狀動脈病和卒中；周圍性血管疾??；代謝病癥，諸如II型糖尿病，脂質(zhì)異常血癥和高甘油三酯血癥；癌，諸如皮膚癌，乳頭狀瘤和年齡依賴性癌；缺血/再灌注損傷，諸如腎、心臟、腦缺血和放射造影誘導(dǎo)的腎?。谎装Y；神經(jīng)變性病癥和癡呆，諸如阿爾茨海默病，帕金森癥，亨廷頓舞蹈病，記憶障礙和精神?。话螂缀湍I病癥，諸如腎炎，腎病，晚期腎病(ESRD)；糖尿病綜合征，諸如神經(jīng)病變，傷口愈合差和視網(wǎng)膜病；眼病，諸如年齡相關(guān)性黃斑變性，干眼病，青光眼，色素性視網(wǎng)膜炎和白內(nèi)障；肺和呼吸系統(tǒng)病癥，諸如慢性阻塞性肺病(COPD)和特發(fā)性肺纖維化(IPF)；肌與骨的病癥，諸如炎性關(guān)節(jié)炎，痛風(fēng)和骨質(zhì)疏松癥；以及皮膚病況，諸如皮膚癌，和皮膚老化如光老化。
本文使用的術(shù)語炎癥是指由組織的損傷或破壞引起的局部保護性應(yīng)答，其足以破壞、減弱或阻斷有害物質(zhì)和受損組織，特征在于由疼痛、發(fā)熱、發(fā)紅、腫脹和功能喪失的標(biāo)準(zhǔn)續(xù)發(fā)事件表示的急性形式，并在組織學(xué)上牽涉系列復(fù)雜事件，包括小動脈、微血管和小靜脈擴張，滲透性和血流增加，包括血漿蛋白質(zhì)在內(nèi)的流體滲出，以及白細(xì)胞移行進入炎癥性病灶。其特征還在于大量釋放TNF-α。
本文使用的表述缺血/再灌注損傷是指組織或器官當(dāng)失去血流而遭受的病況，最主要地由于營養(yǎng)和氧的不充分所導(dǎo)致。再灌注損傷是指當(dāng)在通常超過約十分鐘的缺血時段后恢復(fù)血流時遭受的組織損傷。缺血和再灌注可導(dǎo)致對經(jīng)歷該過程的組織造成嚴(yán)重的或致命的損傷。
本發(fā)明的喹啉衍生物是具有以下通式(A)結(jié)構(gòu)的化合物，或其可藥用鹽或其前體藥物
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2的定義如下所述 a)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中 R4＝H或C1-C4烷基； R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1為

且R7為-(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 b)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 限制條件是式A的每個化合物不是附件1中所指出的化合物之一。
包括至少一個不對稱中心的本發(fā)明的式(A)的化合物為其對映體之一的形式或其混合物的形式。
更優(yōu)選地，式(A)的化合物是這樣的化合物，其中R4為H或甲基，R6選自甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，苯基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基，環(huán)己基，二苯基甲基，吡啶-2-基和吡啶-3-基，其它取代基具有如上定義的相同含義。
根據(jù)另一個優(yōu)選方案，式(A)的化合物選自以下 N-((3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺2， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)苯甲酰胺3， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N-甲基乙酰胺8， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2，2-二苯基乙酰胺11， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺12， 7-(氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-醇13， N-(1-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)-2-苯基乙基)乙酰胺14， N-((2-丁基-1H-咪唑-4-基)(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺15， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺16， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(喹啉-4-基)甲基)乙酰胺17， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-嗎啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺18， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺19， 4-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯21， 3-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯22， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-氰基苯基)甲基)乙酰胺23， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-吡啶-2-基苯基)甲基)乙酰胺24， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)甲基)乙酰胺25， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-羥基苯基)甲基)乙酰胺26， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3-羥基苯基)甲基)乙酰胺27， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺28， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-2-基)甲基)乙酰胺29， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺30， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺鹽酸鹽31， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺32， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺鹽酸鹽33， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(8-羥基喹啉-2-基)甲基)乙酰胺34， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(6-嗎啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺35， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-3-基)甲基)乙酰胺36， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-4-基)甲基)乙酰胺37， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-7-基)甲基)乙酰胺38， 4-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N，N-二甲基-苯甲酰胺39， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-(嗎啉-4-基羰基)苯基)甲基)-乙酰胺40， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)吡啶-2-甲酰胺41， 4-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N-(3-甲氧基丙基)-苯甲酰胺44， 4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺45， N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N，N-二甲基-甘氨酰胺46， N-(1-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺47， N-((8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺48， N-(2-呋喃基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺53， N-(2-噻吩基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺54， N-(2-甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺55， 5-氯-7-(3-羥基苯基)喹啉-8-醇57， 5-氯-7-(4-羥基苯基)喹啉-8-醇58， N-(2-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)苯基)乙酰胺59， 5-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇61， 5-氯-7-吡啶-4-基喹啉-8-醇鹽酸鹽62， N-(3，4-二甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺63， N-(3-甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺64， N-(3-甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺65， N-(3，4-二甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺66， N-(2-甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺67， N-(吡啶-3-基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺68， N-(8-羥基喹啉-2-基)吡啶-2-基甲酰胺69， N-(8-羥基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺70， 2-(3-羥基苯基)-N-(8-羥基喹啉-2-基)乙酰胺71， 2-(4-羥基苯基)-N-(8-羥基喹啉-2-基)乙酰胺72， N-(8-羥基喹啉-2-基)-2-(2-噻吩基)乙酰胺73， 2-(((3-甲氧基芐基)氨基)甲基)喹啉-8-醇74， 2-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇75， 2-(((2-噻吩基甲基)氨基)甲基)喹啉-8-醇76， 2-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇77， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]乙酰胺78， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]乙酰胺79， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]乙酰胺80， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]丁酰胺81， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]丁酰胺82， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺92， N-[(2-氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺93， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺94， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(苯基)甲基]-3-甲基丁酰胺110， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺111， N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺112， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]-3-甲基丁酰胺113， N-[(4-氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺121， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]丙酰胺122， N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺124， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺125， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]戊酰胺126， N-[[4-(二乙基氨基)苯基](8-羥基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺127， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺128， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]丁酰胺129， N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺130，和 N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺131。
根據(jù)優(yōu)選方案，本發(fā)明的式(A)的化合物的前體藥物相當(dāng)于其中在喹啉部分的8位上的羥基被以下基團之一取代的化合物
其中M選自Li、Na、Ca和K。
根據(jù)另一個優(yōu)選方案，上面定義的二氫磷酸酯前體藥物為其鹽酸鹽或二鹽酸鹽的形式。
本發(fā)明的優(yōu)選的前體藥物如下 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯5， ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉6， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯136， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉137， ((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯二鹽酸鹽138，和 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯鹽酸鹽139。
如上所述，本發(fā)明的化合物可存在不對稱中心或手性中心。本發(fā)明涵蓋了式(A)的化合物的多種旋光異構(gòu)體及其混合物。例如，本發(fā)明化合物的單獨的對映體從市售的包含不對稱中心或手性中心的起始材料合成制得或者通過制備對映體化合物的混合物然后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的拆分方法制得。這些拆分方法的例子為a)將對映體的外消旋混合物結(jié)合到手性助劑上，通過重結(jié)晶或色譜法分離所得的非對映異構(gòu)體，并將旋光純產(chǎn)物從助劑上分離出來或b)在手性色譜柱上直接分離光學(xué)對映體的混合物。
本發(fā)明還涉及用于在細(xì)胞中抑制CLK-1活性的方法，該方法包括以下步驟 a)提供其中需要抑制CLK-1活性的細(xì)胞， b)使該細(xì)胞接觸式(B)的化合物
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2如下定義 i)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中 ·R4＝H或C1-C4烷基； ·R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 ·R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1為

且R7為(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 ii)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 式(B)的化合物當(dāng)包含至少一個不對稱中心時，為其對映體之一的形式或其混合物的形式；和 c)測定細(xì)胞中的CLK-1活性。
有利地是，用于在細(xì)胞中抑制CLK-1活性的式(B)的化合物選自表1中所指出的化合物。
甚至更有利地是，用于在細(xì)胞中抑制CLK-1活性的式(B)的化合物選自以下 N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7， 5-氯-7-碘喹啉-8-醇52， 5-氯-7-(2-羥基苯基)喹啉-8-醇56， 5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60，和 N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135。
本發(fā)明還涉及用于在動物中預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的方法，該方法包括以下步驟 a)鑒定罹患從CLK-1抑制中受益的病癥的動物；和b)對所述動物給用如上定義的式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物。
有利地是，用于在動物中預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的式(B)的化合物、其鹽或其前體藥物或旋光異構(gòu)體選自表1中所指出的化合物。
甚至更有利地是，用于在動物中預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的式(B)的化合物、其鹽或其前體藥物選自 ((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯5， ((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉6， N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7， N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135， ((7-((乙?；被?(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯136， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉137， ((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯二鹽酸鹽138，和 ((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯鹽酸鹽139。
根據(jù)優(yōu)選方案，從CLK-1抑制中受益的病癥為缺血/再灌注損傷，炎癥或神經(jīng)變性疾病或癡呆。
更優(yōu)選地，但不限于，缺血/再灌注損傷是腎、心臟、心肌、肺、腦或脊髓的缺血/再灌注損傷。
根據(jù)優(yōu)選方案，炎癥是肺炎癥，肝臟炎癥或任何其它器官的炎癥以及任何的其中該炎癥被促進的臨床適應(yīng)癥。
根據(jù)另一個實施方案，神經(jīng)變性病癥是阿爾茨海默病。
因為先前已經(jīng)表明在小鼠中抑制CLK-1活性使生理學(xué)老化減慢(Liu等人，2005)，這證明了在動物中抑制CLK-1活性可以延遲年齡依賴性疾病的發(fā)病和嚴(yán)重性。
在這方面，本發(fā)明人現(xiàn)在公開了本發(fā)明的式(B)的化合物也可有效用于治療或預(yù)防年齡相關(guān)病癥或其相關(guān)癥狀。因此，更優(yōu)選地，本發(fā)明涉及用于在動物中預(yù)防和/或治療年齡相關(guān)病癥或其相關(guān)癥狀的方法，該方法包括以下步驟a)鑒定罹患年齡相關(guān)病癥的動物；和 b)對所述動物給用式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物； 限制條件是所述的式(B)的化合物不是以下化合物之一、其可藥用鹽或前體藥物 5-氯-7-碘喹啉-8-醇52， 5-氯-7-(2-羥基苯基)喹啉-8-醇56，或 5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60。
根據(jù)優(yōu)選方案，以上所述的方法用于預(yù)防和/或治療選自以下的年齡相關(guān)病癥或其相關(guān)癥狀心血管疾病，諸如動脈粥樣硬化，冠狀動脈病和卒中；周圍性血管疾病；代謝病癥，諸如II型糖尿病，脂質(zhì)異常血癥和高甘油三酯血癥；癌，諸如皮膚癌，乳頭狀瘤和年齡依賴性癌；缺血/再灌注損傷，諸如腎、心臟、腦缺血和放射造影誘導(dǎo)的腎??；炎癥；神經(jīng)變性病癥和癡呆例如阿爾茨海默病，帕金森癥，亨廷頓舞蹈病，記憶障礙和精神病；膀胱和腎病癥，諸如腎炎，腎病，晚期腎病(ESRD)；糖尿病并發(fā)癥，諸如神經(jīng)病變，傷口愈合差和視網(wǎng)膜??；眼病，諸如相關(guān)黃斑變性，干眼病，青光眼，色素性視網(wǎng)膜炎和白內(nèi)障；肺和呼吸系統(tǒng)病癥，諸如慢性阻塞性肺病(COPD)和特發(fā)性肺纖維化(IPF)；肌與骨病癥例如炎性關(guān)節(jié)炎，痛風(fēng)和骨質(zhì)疏松癥；和皮膚病況，諸如美容學(xué)和皮膚病學(xué)病況，包括皮膚老化，如光老化和皮膚癌。
用本發(fā)明的式(B)化合物治療的動物可以是人或任何市售的或國內(nèi)價值的動物，包括但不限于牛、馬、豬、豚鼠、倉鼠、羊、兔、雞、狗、貓和禽類。更優(yōu)選被治療的動物是人。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括如上定義的式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，或如上定義的前體藥物5、6、136、137、138和139中的任一種，其與一種或多種無毒的可藥用載體進行配制。
本發(fā)明人還表明本發(fā)明的式(A)或(B)的化合物具有CLK-1抑制活性。
因此，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括藥學(xué)有效量的如上定義的式(A)或式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括藥學(xué)可接受量的前體藥物5、6、136、137、138和139中的任一種以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
根據(jù)優(yōu)選方案，本發(fā)明的化合物可以與其它的已知具有治療年齡相關(guān)病癥或其相關(guān)癥狀的活性的藥物聯(lián)合使用，諸如例如與用于治療脂質(zhì)異常血癥的他汀類藥物聯(lián)合使用。
本發(fā)明的藥物組合物可以被特別地配制成固體或液體形式用于經(jīng)口給藥，用于非腸道注射，用于直腸給藥或局部給藥。本發(fā)明的藥物組合物可以通過經(jīng)口、直腸、非腸道、池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(如粉劑、霜劑、膏劑或滴劑)、經(jīng)頰、或作為口或鼻噴霧劑形式被給藥至人和其它動物。這些組合物還可包含助劑，諸如防腐劑，潤濕劑，乳化劑和分散劑。通過引入多種抗細(xì)菌藥和抗真菌藥例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、山梨酸等可確保預(yù)防微生物的作用?？赏ㄟ^引入延遲吸收的試劑如單硬脂酸鋁和白明膠實現(xiàn)可注射藥物形式的延長吸收。
在一些情況下，為了延長藥物的作用，希望減慢藥物從皮下和肌肉內(nèi)注射的吸收。這可通過采用具有較差水溶性的結(jié)晶或無定形物質(zhì)的液體懸浮液來實現(xiàn)。因此藥物的吸收速率根據(jù)其溶出速度的不同而異，而溶出速度又根據(jù)晶體大小和晶形的不同而異。作為替代，非腸道給藥的藥物形式的延遲吸收可通過將藥物溶解或懸浮在油媒介物中來實現(xiàn)。
用于經(jīng)口給藥的固體劑型包括膠囊，片劑，丸劑，粉劑和顆粒劑。在該固體劑型中，活性化合物與至少一種惰性的可藥用賦形劑或載體諸如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣和/或填充劑或增量劑如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇混合。
用于經(jīng)口給藥的液體劑型包括可藥用的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物之外，液體劑型可包含本領(lǐng)域通常使用的惰性的稀釋劑，諸如例如水或其他溶劑，增溶劑和乳化劑例如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸抑制，芐醇，丙二醇，甘油，四氫呋喃醇，聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，及其混合物。
本發(fā)明的化合物還可以從磷脂或其他的脂類物質(zhì)獲得的脂質(zhì)體形式進行給藥。脂質(zhì)體由分散在含水介質(zhì)中的單片或多片狀的水合液體結(jié)晶形成?？梢允褂萌魏螣o毒的、生理學(xué)可接受的和可代謝的能形成脂質(zhì)體的液體。優(yōu)選的脂質(zhì)是磷脂和磷脂酰膽堿，二者都是天然的或人造的。
用于本發(fā)明化合物局部給藥的劑型包括粉劑、噴霧劑、膏劑和吸入劑?；钚曰衔镌跓o菌條件下與可藥用的載體和任何所需的防腐劑、緩沖劑和可需要的發(fā)射劑混合。
本發(fā)明的藥物組合物中的活性成分的實際劑量水平可改變，從而獲得對特定的患者、組合物和給藥方式而言有效實現(xiàn)所需治療應(yīng)答的量的活性化合物。所選劑量水平將根據(jù)特定化合物的活性、給藥途徑、被治療病況的嚴(yán)重性和被治療患者的病況和早先病歷的不同而異。然而，其處在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的范疇內(nèi)，從低于實現(xiàn)所需療效的水平的起始劑量的化合物開始并逐漸增加該劑量直到實現(xiàn)所需療效。
本發(fā)明將根據(jù)以下實施例并參考附圖進行容易地理解。這些實施例示例性說明本發(fā)明的廣泛的適用性范圍，并不意欲限制本發(fā)明的范圍?？蛇M行改變和變化而不脫離本發(fā)明的精神和范圍。盡管可以使用與本文所述那些相似的或等價的方法和材料用于實踐本發(fā)明，但是描述了優(yōu)選的方法和材料。
實施例 實施例1CLK-1抑制劑的特異性 在真核類中通過CLK-1進行脫甲氧泛醌(DMQ)羥基化和在真細(xì)菌類中通過UbiF進行脫甲氧泛醌(DMQ)羥基化。在被修飾的JF496大腸埃希氏桿菌菌株中試驗了CLK-1抑制劑分子，該菌株在ubiF基因中有突變并且缺乏DMQ羥基化活性。該菌株被補充有小鼠clk-1基因或大腸埃希氏桿菌ubiF基因。該補充是起作用的并且恢復(fù)了DMQ羥基化。因此，被援救的菌株能夠合成泛醌(Q)而不是積聚DMQ。使用兩種經(jīng)過修飾的菌株評價了供試分子對Q合成抑制的特異性。
材料和方法 菌株和培養(yǎng)基 大腸埃希氏桿菌菌株JF496(ubiF-)用包含小鼠clk-1基因或大腸埃希氏桿菌ubiF基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。對于一般生長，每個菌株的無性繁殖系在37℃下在5ml補充有氨芐西林(50μg/ml)的LB中生長過夜。培養(yǎng)物以1/10被稀釋并測量OD600。將培養(yǎng)物稀釋到在M9-LB(0.5/0.5v/v)中OD600為0.03。該混合物油補充有(1mM MgSO4，20μM CaCl2，0.5μg/mL硫胺，0.12％酸水解酪素，40μg/mL D-L-蛋氨酸，100μg/mL L-天冬酰胺，痕量金屬，0，5％的葡萄糖)的M9培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基組成。包含氨芐西林(50μg/mL)的培養(yǎng)基用于質(zhì)粒選擇。對于醌的HPLC分析，將JF496-ubiF和JF496-mclk-1菌株從過夜的預(yù)培養(yǎng)物稀釋到M9-LB(0.5/0.5v/v)中達OD600為0.03。750μl體積的細(xì)菌被轉(zhuǎn)移到15毫升試管中，將細(xì)菌培養(yǎng)物在37℃和振搖下溫育5小時。
醌的提取 通過離心作用收獲細(xì)胞，用蒸餾水洗滌并再次離心。顆粒在-80℃下冷凍過夜。然后將細(xì)胞解凍并再懸浮在1毫升磷酸鈉緩沖液(0,1M，pH 7.0)中，加入50ng的Q6作為醌的提取對照。為了提取醌，加入1毫升乙醇并將細(xì)胞渦流30秒。隨后加入1毫升己烷，然后將細(xì)胞渦流2分鐘并進行離心處理。收集上面的相(己烷)，下面的相再次進行提取并進行離心處理。然后收集上面的相并將其加入到先前的提取物中。將上面的相冷凍干燥大約1小時，并將顆粒保持在-80℃下。將顆粒再懸浮在300μl的流動相中，然后進行HPLC分析。
HPLC方法 使用帶有光電二極管陣列檢測器和Beckman UltrasphereODSS(4.6mm×25cm)柱的Beckman System Gold HPLC分析樣品。使用32Karat軟件(Beckman)對數(shù)據(jù)進行分析。使用甲醇-乙醇(開始為70％甲醇-30％乙醇，6分鐘后，為30％甲醇-70％乙醇)，以1毫升/分鐘的流速進行流動相洗脫達20分鐘來分離醌。在275納米下檢測脫甲氧泛醌(DMQ)和泛醌(Q)的峰。
關(guān)于藥物特異性試驗的結(jié)果和簡短討論 表示小鼠CLK-1和細(xì)菌DMQ-羥化酶UbiF的JF496細(xì)菌用化合物7處理(圖1)和用化合物52處理(圖2)。由這些處理得到的醌分布使用HPLC進行分析。似乎化合物7和52可以抑制CLK-1DMQ羥化酶活性，這得到DMQ前體的積聚的支持。與此相比，UbiF活性不受到任何化合物的攻擊，因為DMQ不在被處理的細(xì)胞中積聚。這一差別效果表征了與UbiF相比對CLK-1作用的特異性，即使這兩種酶傳送相同的功能DMQ羥基化。在大腸埃希氏桿菌中觀察到的對CLK-1的效果不是由于化合物的一些非特異性活性所導(dǎo)致，因為CLK-1和UbiF二者都在相同的細(xì)菌遺傳背景下被表達。
實施例2測量CLK-1抑制 為了證實在細(xì)菌篩選中被確定為是陽性的化合物是CLK-1的真正抑制劑，本發(fā)明人采用基于HPLC的二次實驗來測量哺乳動物細(xì)胞中的醌含量。CLK-1是脫甲氧醌(DMQ)羥化酶，其催化Q生物合成中的倒數(shù)第二步。CLK-1的抑制導(dǎo)致反應(yīng)前體DMQ的積聚。該試驗測量了Q及其前體DMQ的內(nèi)源細(xì)胞水平。在供試的全部細(xì)胞中，DMQ的存在水平通常是微不足道的，因此對CLK-1的強烈抑制導(dǎo)致被處理細(xì)胞的HPLC醌曲線的深入改變。
材料和方法 將從細(xì)菌篩選中鑒定的化合物的新鮮的稀釋物以10mM的濃度溶解在二甲基亞砜(DMSO)中過夜。化合物的稀釋物(在DMSO中)被加入到RAW264.7細(xì)胞的孔中，該細(xì)胞是Abelson鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化的鼠巨噬細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)。在化合物處理的前一天，將細(xì)胞鋪板(每孔1×105個細(xì)胞)在Dulbecco氏改性伊格爾培養(yǎng)基(補充有10％胎牛血清，1％青霉素/鏈霉素，100μM丙酮酸鈉)，并置于濕潤的CO2保溫箱(5％CO2，37℃)中過夜。加入化合物后，將板在濕潤的CO2(5％CO2，37℃)下溫育24小時。
24小時后，從孔中吸出培養(yǎng)基；細(xì)胞用PBS洗滌，然后向每孔中加入500μl RIPA緩沖液(15分鐘，室溫)并溫和地振搖。之后，將樣品移入到1.5毫升微量離心管中。向每個管中加入500μl的HPLC級乙醇，然后加入500μl的HPLC級己烷，然后將離心管劇烈渦流1分鐘，然后離心(3000×g，15分鐘，室溫)。離心后，每個管中可見兩個明顯的層。將上層小心地移入新的微量離心管中，用針狀油孔蓋蓋住，然后進行冷凍干燥。當(dāng)樣品干燥后，向每個管中加入320μl的70％HPLC級甲醇30％乙醇(v/v)。然后將管劇烈渦流20秒，離心10秒(14000xg)，然后將樣品轉(zhuǎn)移到被蓋住的HPLC小瓶中。然后對每個樣品進行HPLC分析。通過使樣品流過250mm C18 ODS柱，使用乙醇∶甲醇梯度，并使用光二極管矩陣檢測器在275納米下檢測醌來進行分析。使用色譜的肉眼檢查來確定多個劑量的每個感興趣的化合物的活性。
表1顯示了經(jīng)過測定作為具有活性的CLK-1抑制劑的化合物列表。
在哺乳動物細(xì)胞中CLK-1抑制的結(jié)果和簡短討論 圖3顯示了從RAW 264.7小鼠巨噬細(xì)胞的樣品的醌提取物中獲得的典型的HPLC曲線。上圖代表從未經(jīng)處理的巨噬細(xì)胞中提取的醌，其中明顯的主要物質(zhì)是泛醌-9或Q。當(dāng)用CLK-1抑制劑處理細(xì)胞時，觀察到出現(xiàn)第二個奎寧峰，其表示Q前體的積聚。這一曲線表示用化合物135處理的細(xì)胞。因此，通過用肉眼清楚和簡單地分析用假定的候選抑制劑處理的細(xì)胞的HPLC曲線可容易地識別CLK-1抑制劑。檢測了多種人和鼠的細(xì)胞系，在它們之間除了內(nèi)源泛醌水平不同之外沒有主要差別。
這意味著可以檢測細(xì)胞中Q損失的唯一想得到的方式是CLK-1的抑制。該二次試驗因此極其有用并且在其迅速鑒定CLK-1抑制劑的能力方面非常強大。圖4-8顯示了用不同濃度的化合物7、23、69、47或53處理的鼠巨噬細(xì)胞的HPLC曲線。觀察到增加化合物濃度對被處理細(xì)胞中的DMQ9和Qg的分布的效果。
實施例3測量CLK-1抑制的效果 CLK-1活性可通過調(diào)節(jié)Q的細(xì)胞含量來影響細(xì)胞ROS水平，Q通過電子傳遞鏈和ROS清除對ROS生成有貢獻。因此，預(yù)期CLK-1的抑制將導(dǎo)致細(xì)胞ROS水平的改變。另外，細(xì)胞內(nèi)作為ROS的靶標(biāo)的大分子之一是DNA，導(dǎo)致DNA損傷?？深A(yù)期DNA損傷也可由于CLK-1抑制而被降低。因此本發(fā)明人使用兩個試驗來測量活細(xì)胞中的這些因子，如下所示。
材料和方法 ROS試驗 使用DCF-DA(2，7-二氯熒光素二乙酸酯)來評價細(xì)胞的ROS水平。親脂性的DCF-DA被運輸通過細(xì)胞膜到達細(xì)胞質(zhì)，并通過細(xì)胞質(zhì)酯酶被酶促轉(zhuǎn)化為親水性的2，7-二氯熒光素(DCFH)。細(xì)胞的ROS將DCFH氧化成DCF，其是發(fā)熒光的分子。為了評價CLK-1抑制對ROS生成的效果，首先，將接種(每孔1×105個)在96孔板中的鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)用CLK-1抑制劑處理24小時。然后將細(xì)胞與20μM的DCF-DA在Hanks平衡鹽液(HBSS)中在37℃下溫育30分鐘。然后使用熒光讀板器(激發(fā)波長488納米和發(fā)射波長520納米)來監(jiān)控得自細(xì)胞DCF的熒光。在供試孔中的蛋白質(zhì)的量使用市售的BCA蛋白測試試劑盒進行測定。隨后將細(xì)胞的ROS水平表示為得自3個重復(fù)實驗的熒光/mg蛋白的平均DCF。
COMET試驗 在存在/缺乏CLK-1抑制性化合物的條件下在12孔板中接種(每孔2.5×106個細(xì)胞)RAW264.7細(xì)胞。24小時后，細(xì)胞用1mM H2O2處理1小時，以誘導(dǎo)ROS介導(dǎo)的DNA損傷。然后將細(xì)胞在冰冷的PBS中洗滌兩次，然后刮入575μl的冰冷的PBS中。將75μl的該混合物取出并加入到750μl的冰冷的PBS中。取出10μl小份并與90μl的熔融的低熔點瓊脂糖混合。將75μl的該細(xì)胞-瓊脂糖混合物用移液管移出到載玻片上，載玻片平放于4℃下并避光達15分鐘。
之后，將載玻片浸入預(yù)先冷卻的裂解液中并在4℃下放置1小時，避光。然后，取出載玻片并在除去過量的裂解液后，將其浸沒在新制備的堿性溶液(pH 13)中。然后在室溫下放置載玻片1小時，避光。
除去過量的堿性溶液，然后將載玻片在室溫下浸沒在1XTris-Borate/EDTA緩沖液(TBE)中達5分鐘。再次避光，將載玻片置于充滿1x TBE的電泳裝置中并施加電壓20分鐘。20分鐘后取出載玻片并避光浸沒在70％乙醇中達5分鐘，然后在37℃下空氣干燥直到瓊脂糖在載玻片上形成薄層。
在該37℃溫育后，在暗處向每個干燥的瓊脂糖碟形物中加入50μl的稀釋的SYBR綠達10分鐘，然后通過浸沒在蒸餾水中而洗調(diào)染料。吸干過量的水，然后將載玻片在暗處再次進行空氣干燥。當(dāng)完全干燥后，在熒光顯微鏡下觀察載玻片并檢測顯示細(xì)胞核蹤跡的DNA尾部(彗星)的存在。數(shù)據(jù)通常用包含彗星的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)表示，計數(shù)了10個視野。
CLK-1抑制劑對細(xì)胞ROS水平的效果的結(jié)果和簡短討論 在醌曲線，細(xì)胞ROS水平和DNA損傷方面顯示顯示原型CLK-1抑制劑即化合物7和135的三個圖如圖9所示。這些分子被發(fā)現(xiàn)降低巨噬細(xì)胞中H2O2對ROS的誘導(dǎo)，化合物7的效力更強(圖B)。這些分子在巨噬細(xì)胞中對由H2O2誘導(dǎo)的DNA損傷具有相當(dāng)?shù)膶剐Ч?圖C)，化合物7極其有效。這些數(shù)據(jù)強調(diào)了本發(fā)明人降低了ROS的細(xì)胞水平以及隨后所產(chǎn)生的損傷。
實施例4在大鼠中CLK-1抑制劑可用于治療腎的缺血-再灌注損傷。
以下研究評價了CLK-1抑制劑的給藥在腎缺血模型中用于預(yù)防和/或減少再灌注損傷的實用性。
簡要說明和實驗方法 成年(9到11周大)雄性Sprague-Dawley大鼠被麻醉并通過中線剖腹術(shù)進行右側(cè)腎切除術(shù)。通過阻塞左腎動脈和靜脈達60分鐘實現(xiàn)左腎動脈的暫時性缺血。在外科手術(shù)之前第三天開始每天一次腹膜內(nèi)(Lp.)給用15個連續(xù)日對所有組進行治療(假無缺血，接受鹽水(0.9％NaCI)，首次用于實驗缺血加媒介物，治療缺血加化合物7或52)。治療組接受2.5mg/kg/天Lp.(1mg/ml)的化合物7或20mg/kg/天(4mg/ml)的化合物52。在第0、3、7、11和14天通過測定血清中的肌酸酐和血脲氮(BUN)和尿中的肌酸酐和蛋白質(zhì)含量評價腎功能。使用公式CrCI＝(uCr*uV)/(sCr x 1440x重量)計算肌酸酐清除率(ml/min/100g)。使用Coomassi方法測定尿樣中在24小時內(nèi)的尿蛋白濃度。通過光學(xué)顯微術(shù)分析腎組織的組織病理改變(蘇木紫和曙紅；H&E著色載玻片)，根據(jù)Racusen(2)的建議觀察血管上皮細(xì)胞壞死，血管擴張，蛋白質(zhì)管形，和髓充血。使用單因素方差分析然后當(dāng)指出時使用Turkey post-hoc試驗對收集的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。p＜0.05的結(jié)果被認(rèn)為在統(tǒng)計上有顯著意義。
缺血-再灌注損傷結(jié)果的簡要說明 腎功能血清肌酸酐 初始結(jié)果顯示每組中血清肌酸酐水平在第0天沒有統(tǒng)計學(xué)差別。在用化合物7或處理的組中，在第3-14天的血清肌酸酐顯著低于首次用于實驗的組(圖10)。
腎功能血脲氮(BUN) 初始結(jié)果顯示每組在第0天BUN沒有統(tǒng)計學(xué)差別。在用化合物7和52處理的組中，在第3、7、11和14天，BUN顯著低于首次用于實驗的組(圖11)。
腎功能肌酐清除率 每組中，在第0天的肌酐清除率沒有統(tǒng)計學(xué)差別。在用化合物7或化合物52處理的組中，在第3和7天肌酐清除率顯著高于首次用于實驗的組。在用化合物7或52處理的組中，在第11和14天，肌酐清除率與首次用于試驗的組沒有統(tǒng)計學(xué)差別，然而，在第14天公寓首次用于試驗的組(圖12)。
腎功能尿蛋白 每組中，在第0天，24小時尿蛋白沒有統(tǒng)計學(xué)差別。在用化合物7或52處理的組中，在第3天，24小時尿蛋白顯著低于首次用于實驗的組。在用化合物7或52處理的組中，在第7和4天，24小時尿蛋白與首次用于實驗的組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差別。在用化合物7和52處理的組中，在第11天，24小時尿蛋白顯著低于首次用于實驗的組(P＝0.033)(圖13)。
CLK-1抑制劑對腎缺血-再灌注損傷的作用的簡要討論 腎功能數(shù)據(jù)(血清肌酸酐。血脲氮(BUN)。肌酐清除率和尿蛋白)表明再缺血事件前三天開始一天一次用化合物7(2.5mg/kg)和化合物52(20mg/kg)治療并持續(xù)11個連續(xù)日，與用首次用于實驗的對照組相比，在60分鐘缺血后的一個腎大鼠模型以類似程度有效地預(yù)防腎缺血/再灌注損傷。在所有情況下，假組中的腎功能不受影響。在缺血/再灌注后第3和7天，對腎功能的一些參數(shù)的保護效果特別顯著。
實施例5CLK-1抑制劑對脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷的效果。
以下研究評價了CLK-1抑制劑在通過系統(tǒng)給藥脂多糖(LPS)誘發(fā)的急性肺炎癥的體內(nèi)相關(guān)大鼠模型中的應(yīng)用。
實驗方法的簡要說明 將重225到250克(n＝5到10只/組)的雄性Sprague-Dawley大鼠用脂多糖(LPS)處理以誘導(dǎo)肺損傷。用藥物治療的大鼠腹膜內(nèi)(i.p.)接受化合物7或作為參考物的N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)?；衔镌诎珼MA/PG/Tween 80和水的媒介物中被i.p.給藥。一天給用一次劑量，持續(xù)3個連續(xù)日，最后一次劑量給藥在接觸LPS前1小時。對照大鼠接受所示的藥物媒介物。新制備的藥物以5或10ml/kg或5ml/kg的體積給用。在i.p.LPS或鹽水給藥后的24小時，通過過量服用烏拉坦處死小鼠，并收集血液肺泡流體(BALF)用于總細(xì)胞計數(shù)和差別細(xì)胞計數(shù)，LPO和TNF-α測定和蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量。
LPS誘導(dǎo)的肺損傷結(jié)果的簡要說明和討論 顯示在LPS(6mg/kg，Lp.)之前三天一天一次Lp.給藥化合物7(5mg/kg or 10mg/kg)對得自暴露于saline(對照)或LPS下的大鼠的總細(xì)胞計數(shù)和嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)、蛋白質(zhì)和TNF-α含量，BALF中LPO水平的效果如圖14-17所示。N-乙酰基半胱氨酸(NAC；0.5g/kg，Lp.，LPS前三天一天一次)作為參考化合物被給藥。簡短地說，化合物7有效地降低BALF總細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的增加到可與在用NAC治療的大鼠中的觀察水平相比的水平。這一化合當(dāng)單獨給用時不對BALF總細(xì)胞計數(shù)產(chǎn)生任何作用。類似地，化合物7有效地降低BALF中LPO的增加到可與在用NAC治療的大鼠中的觀察水平相比的水平?；衔?不降低BALF蛋白質(zhì)的增加。化合物7(10mg/kg)有效用于顯著降低BALFTNF-α水平。另外，組織學(xué)分析(未顯示)顯示了5mg/kg，Lp的化合物7有效用于降低間隙圖形的強度(在被治療的肺中肺泡壁厚度較薄)和炎性應(yīng)答(炎性細(xì)胞的數(shù)目較少)。
總而言之，這些實驗顯示了化合物7在用LPS攻擊的大鼠中降低BALF總細(xì)胞計數(shù)和嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)、脂質(zhì)氫過氧化物、和組織學(xué)肺病變(未顯示)的應(yīng)用。TNF-α水平降低也在i.p.劑量給藥10mg/kg的化合物7時被觀察到。
因為嗜中性粒細(xì)胞流入和LPO是受到CLK-1抑制劑保護的公知的炎癥標(biāo)記物，新型的喹啉衍生物用于這種炎癥得以促進的臨床適應(yīng)癥的應(yīng)用代表了特別有用的實施方案。
實施例6用化合物138進行治療對hAPP751SL轉(zhuǎn)基因小鼠的腦β-淀粉樣蛋白1-40和β-淀粉樣蛋白1-42水平的作用。
動物在研究的起始日雄性的hAPPSL轉(zhuǎn)基因(tg)小鼠(C57BL/6background)達5月齡(±2周)。轉(zhuǎn)基因hAPP751SL動物構(gòu)成性外部表達人APP751，在神經(jīng)元組織特異性鼠-Thy-1促進劑的調(diào)控下具有London(V717I)和Swedish(K670M/N671L)突變。由于London突變，在整個腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白1-42以高水平表達，但是主要發(fā)生在皮層和海馬中。高水平的β-淀粉樣蛋白1-42與從3個月開始的早得多的年齡下在CNS中的淀粉狀蛋白斑塊形成有關(guān)。在該小鼠模型中觀察到的腦Aβ1-42水平的增強與較早的斑塊形成有關(guān)。Aβ1-42促進淀粉狀蛋白沉積并促進致密沉積物的形成；盡管Aβ1-40也許具有相反的效果。因此，影響這一致命性淀粉狀蛋白肽的產(chǎn)生可以是有利的，特別是關(guān)于可能的對阿爾茨海默病患者的治療方面。
治療將化合物138配制在羧甲基纖維素(CMC)中并分別一天一次和一天兩次(最高劑量)口服(p.o.)給藥至動物，達60個連續(xù)日。治療劑量分別為5、20、50和2×50mg/kg b.w./天，或使用媒介物(CMC)。
組織制備將轉(zhuǎn)基因小鼠心臟內(nèi)灌注生理(0.9％)鹽水直到全血流盡；然后迅速地取出腦并將右半球浸漬固定在新鮮的4％多聚甲醛中1小時。然后，將半球轉(zhuǎn)移到15％蔗糖溶液中用于cryprotection。第二天，將腦在干冰上冷凍并在-80℃下保存。將左腦半球在干冰上立刻快速冷凍以測定在4個腦勻漿級分中的β-淀粉樣蛋白1-40和β-淀粉樣蛋白1-42， 測量使用每只動物的一個腦半球(包括嗅球但是沒有小腦)用來評價4個腦級分(其是TBS、Triton X-100和FA)中的腦Aβ1-40和Aβ1-42。Aβ1-40和Aβ1-42使用由瑞士的The GENETICS Company制造的高靈敏度ELISA試劑盒(TK40HSTM；TK42HSTM)。
結(jié)果 可溶性Aβ1-40和Aβ1-42的水平 TBS提取物級分保安腦組織的水溶性Aβ1-40和Aβ1-42級分，盡管在Triton x-100級分中，類似原纖維的更小聚合物被溶解。甲酸(FA)級分包含不溶性聚合Aβ。結(jié)果如圖18-23所示?；衔?38顯著降低TBS(5和20mg/kg；圖19)和Triton X-100級分(5、20和50mg/k；圖21)中的Aβ1-42水平。在TBS級分(圖18和19)中，但是不在Triton級分(圖20和21)中，類似的但不顯著的效果可以在測定Aβ1-40中被觀察到，其中在兩個化合物138的組中所有單個的數(shù)據(jù)點非常密集。
在FA級分中，所有劑量的平均Aβ1-42值都低于媒介物對照的值，從而在5和20mg/kg濃度下的效果是顯著的(圖23)。
因此，化合物138對APP加工和Aβ肽的生成具有顯著效果，盡管該效果對Aβ1-42更顯著。明顯的Aβ1-42降低效果在多種腦級分中都被觀察到，其達標(biāo)了β-淀粉狀蛋白的不同的聚合狀態(tài)(單體，低聚物，原纖維)。
結(jié)論 在腦中，可觀察到化合物138的明顯的Aβ-淀粉狀蛋白1-42降低效果。最驚人的和獨特的結(jié)果是化合物138能透過腦級分(單體，低聚物，原纖維)以降低Aβ1-42水平。結(jié)果的重要性通過該模型被強調(diào)，Aβ1-42水平極高，甚至與其它的轉(zhuǎn)基因模型諸如Tg2576小鼠相比。因此，即使在這一攻擊性的模型中，化合物138降低整個腦級分中的Aβ1-42水平。盡管關(guān)于Aβ1-42的效果最清楚，化合物138還在某種程度上降低腦級分中的Aβ1-40。化合物138對毒性Aβ1-42肽的更顯著的效果導(dǎo)致Aβ1-42/Aβ1-40的比降低，這具有治療益處。
實施例7從順序A合成化合物。
在順序A中的化合物可以通過采用以下所述的策略制得。除了5-Cl之外的基團，如F或Me，在該化學(xué)中同樣被允許。

實施例7.1N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺(化合物7){方法A_1}
5-氯-8-羥基喹啉(1.5g，8.7mmol)、3，4-二甲氧基苯甲醛(2.85g，17.4mmol)和乙酰胺(1.03g，17.4mmol)的密切混合物被密封在微波反應(yīng)容器中，將容器置于微波反應(yīng)器(Biotage Initiator)中并加熱到180℃達1小時，將冷卻的反應(yīng)混合物與乙酸乙酯研磨，濾出所得的固體。該固體進一步與乙醇研磨，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(2.2g，65％)。MS387(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.28(bs，1H)，8.93-8.97(m，1H)，8.74(d，1H)，8.47(d，1H)，7.69-7.75(m，2H)，6.91-6.94(m，1H)，6.87(d，1H)，6.74(d，1H)，6.62(d，1H)，3.70(s，3H)，3.71(s，3H)，1.94(s，3H)。
實施例7.2N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺(化合物19){方法A_1}
5-氯-8-羥基喹啉(0.25g，1.4mmol)、喹啉-3-甲醛(0.44g，2.8mmol)和乙酰胺(0.165g，2.8mmol)的密切混合物被密封在微波反應(yīng)容器中，將該容器置于微波反應(yīng)器(Biotage Initiator)中并加熱到180℃達0.5小時，將冷卻的反應(yīng)混合物與乙酸乙酯研磨并濾出所得的固體，該固體進一步與乙醇研磨得到標(biāo)題化合物，為白色固體(0.236g，44％)。MS 377(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.52(bs，1H)，8.96-9.01(m，2H)，8.85(s，1H)，8.51(d，1H)，8.11(s，1H)，7.95-8.01(dd，2H)，7.71-7.79(m，4H)，7.58(t，1H)，6.87(d，1H)，2.01(s，3H)。
實施例7.3N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺(化合物32){方法A_1}
5-氯-8-羥基喹啉(0.25g，1.4mmol)、3-吡啶甲醛(0.299g，2.8mmol)和乙酰胺(0.165g，2.8mmol)的密切混合物被密封在微波反應(yīng)容器中，將該容器置于微波反應(yīng)器(Biotage Initiator)中并加熱到180℃達0.5小時，將冷卻的反應(yīng)混合物與乙酸乙酯研磨并濾出所得的固體，該固體進一步與乙醇研磨得到標(biāo)題化合物，為白色固體(0.123g，27％)。MS 327(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.49(bs，1H)，8.97(s，1H)，8.90(d，1H)，8.47-8.51(m，3H)，7.72-7.77(m，2H)，7.64(d，1H)17.33-7.36(dd，1H)，6.70(d，1H)，1.97(s，3H)。
實施例8從序列B1合成化合物 在序列B1中的化合物可以采用以下描述的策略制得。其是對由序列A化合物所采用的合成的補充并且特別適于其中R1是烷基或芳基的化合物。除了5-C1之外的基團，如F或Me，在該化學(xué)中同樣被允許。

方法B1_1中間體2-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮的合成
將2-(羥基甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(14.8g，83mmol)滴加到充分?jǐn)嚢璨⒈焕鋮s到0℃的5-氯-8-羥基喹啉(15g，83mmol)在濃硫酸(150ml)中的溶液中，加料完畢后，將反應(yīng)加熱到100℃過夜，使混合物回溫到室溫，然后傾入到碎冰(1000ml)上，過濾所得的黃色沉淀物，用水洗滌并真空干燥過夜，該固體與乙醇和己烷研磨，得到灰白色固體(16.7g，59％)。MS 338(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.24(bs，1H)，8.95(d，1H)，8.48(d，1H)，7.41-7.92(m，4H)，7.72(dd，1H)，7.57(s，1H)，4.96(s，2H)。
方法B1_2中間體2-((8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮的合成
將2-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(16.68g，49mmol)、溴芐(12.63g，73.5mmol)和碳酸鉀(13.61g，98mmol)溶解/懸浮在二甲基甲酰胺(250ml)中并加熱到60℃達1.5小時，將反應(yīng)傾入到冷水(1000ml)中并過濾灰白色沉淀物，用水充分洗滌。該固體真空干燥，得到純的化合物(20.8g，98％)。MS 446([M+H2O]+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.09(d，1H)，8.55(d，1H)，7.83-7.91(m，4H)，7.75(dd，1H)，7.64(s，1H)，7.55-7.61(m，2H)，7.347.44(m，3H)，5.53(s，2H)，4.96(s，2H)。
方法B1_3中間體1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲胺的合成
將一水合肼(2.28ml，46.6mmol)加入到2-((8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(2.0g，4.7mmol)在甲醇(50ml)中的懸浮液中，將混合物回流1小時，然后真空除去溶劑，將殘余物與熱乙醇(～10ml)研磨并熱過濾，濃縮乙醇得到淺棕色固體(1.1g，79％)，其無需任何進一步的純化可用于隨后的反應(yīng)。MS 299(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHz δ9.02(d，1H)，8.54(d，1H)，7.59(s，1H)，7.51(dd，1H)，7.41-7.44(m，2H)，7.31-7.39(m，3H)，5.50(s，2H)，3.87(s，2H)。
方法B1_4中間體1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亞甲基)甲胺的合成
將1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲胺(407mg，1.36mmol)和二苯甲酮亞胺(247mg，1.36mmol)的混合物一起在60℃下加熱，1小時后，將所得的固體與甲醇研磨并過濾，得到標(biāo)題化合物，為淺褐色固體(480mg，76％)。MS 463(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.06(d，1H)，8.57(d，1H)，7.96(s，1H)，7.73(dd，1H)，7.54-7.62(m，5H)，7.39-7.48(m，3H)，7.20-7.31(m，7H)，5.29(s，2H)，4.61(s，2H)。
方法B1_5中間體1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亞甲基)乙胺的合成
將碘甲烷(147mg，1.03mmol)和1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亞甲基)甲胺(480mg，1.03mmol)溶解在無水四氫呋喃(0.5ml)中并冷卻到0℃，向該混合物中滴加叔丁醇鉀(128mg，1.16mmol)在四氫呋喃(0.13ml)中的溶液，將混合物回溫到室溫并在1小時后濃縮反應(yīng)物。將殘余物溶解在乙酸乙酯中并用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥有機提取物并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(480mg，97％)。MS 477(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.89(d，1H)，8.47(d，1H)，8.15(s，1H)，7.60(d，2H)，7.42(dd，1H)，7.15-7.38(m，10H)，7.03-7.09(m，3H)，5.20(d，1H)，5.18(q，1H)，4.81(d，1H)，1.23(d，3H))。
方法B1_6中間體1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙胺的合成
向1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亞甲基)乙胺(550mg，1.15mmol)在甲醇(5ml)中的溶液中加入鹽酸羥胺(144mg，2.07mmol)并將混合物在室溫下攪拌過夜，濃縮反應(yīng)物并將剩余物用鹽酸(5ml，5％水溶液)處理，并用乙酸乙酯提取以除去二苯甲酮，水層用氫氧化鈉溶液(5M)堿化并用乙酸乙酯提取(3×5ml)，合并的有機提取物用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(230mg，64％)。MS313(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ9.00(d，1H)18.49(d，1H)，7.68(s，1H)，7.51(dd，1H)，7.31-7.44(m，5H)，5.50(q，2H)，4.59(q，1H)，1.46(bs，2H)，1.26(d，3H))。
方法B1_7中間體N-(1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙基)乙酰胺的合成
向用冰冷卻的1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙胺(220mg，0.7mmol)和三乙胺(0.12ml，0.84mmol)在二氯甲烷(2.5ml)中的攪拌的溶液中滴加乙酰氯(66mg，0.84mmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液，反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，然后用二氯甲烷(5ml)稀釋，混合物連續(xù)地用飽和碳酸鈉溶液、水和鹽水洗滌，并用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(240mg，96％)。MS 354(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.90(d，1H)，8.44(d，1H)，7.54(d，2H)，7.40-7.45(m，2H)，7.26-7.37(m，3H)，6.22(bd，1H)，5.61(d，1H)，5.46(d，1H)，5.36(q，1H)，1.77(s，3H)，1.36(d，3H)。
實施例8.1N-(1-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺(化合物47)的合成
向冰冷卻的N-(1-(8-(芐基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙基)乙酰胺(0.7g，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的攪拌的溶液中在氮氣氛下加入三氯化硼(1M，在二氯甲烷中，4ml，4mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。混合物然后在室溫下攪拌3小時，然后將反應(yīng)物小心地傾入到用冰冷卻的水(100ml)中并用二氯甲烷提取，合并的有機提取物用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，粗物質(zhì)通過硅膠色譜法純化(0-10％MeOH100-90％EtOAc)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(0.45g，86％)。MS265(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.17(bs，1H)，8.95(d，1H)，8.47(d，1H)，8.39(d，1H)，7.70(dd，1H)，7.64(s，1H)，5.41(q，1H)，1.88(s，3H)，1.35(d，3H)。
實施例9從序列B2合成化合物 序列B2中的化合物可通過以下描述的任一方法制得
方法B2_1
方法B2_2 實施例9.1N-(8-羥基喹啉-2-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物69){方法B2_2}
向處在0℃下的氯化甲基吡啶鹽酸鹽(89mg，0.5mmol)在四氫呋喃中的懸浮液中加入三乙胺(0.42ml，3mmol)和2-氨基-8-羥基喹啉(160mg，1.0mmol)，將混合物回溫到室溫并攪拌過夜，真空除去溶劑，粗物質(zhì)通過HPLC純化，得到所需產(chǎn)物(15mg，11％)。MS 265(M+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.79(bs，1H)，9.70(bs，1H)，8.81(d，1H)，8.53(d，1H)，8.43(d，1H)，8.28(d，1H)，8.16(t，1H)，7.75-7.80(m，1H)，7.36-7.41(m，2H)，7.08(d，1H)。
實施例9.2N-(8-羥基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺(化合物70){方法B2_1}
將4-吡啶基乙酸鹽酸鹽(87mg，0.5mmol)溶解在二甲基甲酰胺(4ml)中，向該溶液中加入羥基苯并三唑(68mg，0.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(96mg，0.5mmol)和三乙胺(0.28ml，2.0mmol)，將混合物在室溫下攪拌30分鐘，向反應(yīng)中加入2-氨基-8-羥基喹啉(80mg，0.5mmol)并攪拌過夜，真空除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷(2ml)中并用水洗滌，真空濃縮有機相，粗物質(zhì)通過HPLC純化，得到所需產(chǎn)物(11mg，8％)。MS 280(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ11.00(bs，1H)，9.48(bs，1H)，8.52(d，2H)，8.27(d，1H)，8.21(d，1H)，7.39(d，2H)，7.28-7.34(m，2H)，7.07(d，1H)，3.88(s，2H).(10mg，7％)。MS280(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHz δ10.92(bs，1H)，9.35-9.55(bs，1H)，8.53(d，1H)，8.17-8.29(m，2H)，7.78(t，1H)，7.44(d，1H)，7.26-7.35(m，3H)，7.08(d，1H)，4.04(bs，2H)。
實施例9.32-(3-羥基苯基)-N-(8-羥基喹啉-2-基)乙酰胺(化合物71){方法B2_1}
根據(jù)以上實施例9.2中所述方法B21類似地制備標(biāo)題化合物。收率＝12mg(9％)。MS 295(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHz δ10.84(bs，1H)，9.43(bs，1H)，9.34(bs，1H)，8.21-8.28(dd，2H)，7.27-7.35(m，2H)，7.11(t，1H)，7.07(d，1H)，6.81(s，1H)，6.79(d，1H)，6.64(d，1H)，3.70(s，2H)。
實施例10從序列B3合成化合物 序列B3中的化合物可以采用如下描述的方案制得
方法B3_1中間體5-氯-7-碘-8-異丙氧基喹啉的合成
向5-氯-7-碘-8-羥基喹啉(18g，58.9mmol)在二甲基亞砜的懸浮液中滴加碳酸鉀(32.57g，235.6mmol)和2-溴丙烷(10.87g，88.4mmol)，將混合物在室溫下攪拌過夜然后將其傾入到飽和氯化銨溶液中，該混合物用二氯甲烷提取(3×300ml)，合并的有機提取物先后地用氫氧化鈉(2M)、水和鹽水洗滌，并用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑并用乙酸乙酯∶己烷的混合物進行硅膠色譜洗脫，得到所需化合物(11.0g，55％)。MS347(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.92(d，1H)，8.50(d，1H)，7.97(s，1H)，7.51(dd，1H)，5.38(sept，1H)，1.42(d，6H)。
方法B3_2中間體3-(5-氯-8-異丙氧基喹啉-7-基)苯酚的合成
將5-氯-7-碘-8-異丙氧基喹啉(500mg，1.7mmol)、(3-羥基苯基)硼酸(238mg，1.7mmol)和PdPCy3(18mg，0.028mmol)溶解/懸浮在乙腈/水(分別為4ml∶1ml)的混合物中，并加入碳酸鈉溶液(2M，5ml)，然后將混合物在氮氣下加熱到80℃并同時攪拌1小時，TLC表明起始的磺化合物完全耗盡，真空除去溶劑，將殘余物溶解/懸浮在乙酸乙酯中，用水和鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到大體上純的產(chǎn)物(TLC和NMR)(350mg，77％)。MS 314(MH+)；1H NMR(CDCl3)，400MHz δ9.01(bs，1H)，8.92(d，1H)，8.51(d，1H)，7.55(s，1H)，7.47(dd，1H)，7.35(t，1H)，7.32(s，1H)，6.97-7.02(m，2H)，4.36(sept，1H)，1.12(d，6H)。
實施例10.15-氯-7-(3-羥基苯基)喹啉-8-醇(化合物57){方法B3_3}
將3-(5-氯-8-異丙氧基喹啉-7-基)苯酚(475mg，1.52mmol)溶解在二氯甲烷(4ml)中并在氮氣下冷卻到-78℃，滴加三氯化硼二甲基硫醚的復(fù)合物在二氯甲烷(2M，3.04ml，6.08mmol)中的溶液，并將混合物在-78℃攪拌2小時，小心地加入甲醇(20ml)并將反應(yīng)物回溫到室溫，真空除去溶劑并加入另外一份甲醇(20ml)，再次真空濃縮，該過程再重復(fù)進行兩次以得到粗產(chǎn)物，其通過HPLC純化得到標(biāo)題化合物(315mg，76％)。MS 272(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.5-10.5(vbs，1H)，9.02(d，1H)，8.56(d，1H)，7.78(dd，1H)，7.72(s，1H)，7.29(t，1H)，7.17(bs，1H)，7.11(d，1H)，6.80(d，1H)。
方法B3_2中間體5-氯-8-異丙氧基-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉的合成
根據(jù)上述方法B3_2相似地制備標(biāo)題化合物。MS 329(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHzδ8.96(d，1H)，8.54(d，1H)，8.21(d，1H)，7.77(d，1H)，7.63(s，1H)，7.48-7.53(dd，1H)，6.99-7.02(dd，1H)，4.57(sept，1H)，3.97(s，3H)，1.06(d，6H)。
實施例10.25-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇(化合物61.){方法B3_3}
根據(jù)上述實施例10.1中的方法B3_3從5-氯-8-異丙氧基-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉相似地制備標(biāo)題化合物。MS 288(MH+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.15(bs，1H)，9.00(d，1H)，8.54(d，1H)，8.23(d，1H)，7.76-7.81(m，2H)，7.64(s，1H)，7.12(dd，1H)，3.86(s，3H)。
方法B3_2中間體4-(5-氯-8-異丙氧基喹啉-7-基)-N，N-二甲基苯胺的合成
根據(jù)上述方法B3_2相似地制備標(biāo)題化合物。MS 341(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHzδ8.95(d，1H)，8.49(d，1H)，7.69(s，1H)，7.63(d，2H)，7.43-7.46(dd，1H)，6.80(d，2H)，4.51(sept，1H)，3.02(s，6H)，1.11(d，6H)。
實施例10.35-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇(化合物60){方法B3_3}
根據(jù)上述實施例10.1中的方法B3_3從4-(5-氯-8-異丙氧基喹啉-7-基)-N，N-二甲基苯胺相似地制備標(biāo)題化合物。MS 300(MH+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.02(d，1H)，8.57(d，1H)，7.77-7.86(m，4H)，7.55-7.68(bs，2H)，3.13(s，6H)。
實施例11從序列B4合成化合物 序列B4中的化合物可以采用如下描述的方案制得
方法B4_1 實施例11.12-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇(化合物77){方法B4_1}
向8-羥基喹啉-2-甲醛(87mg，0.5mmol)在1，2-二氯乙烷(2ml)的溶液中加入2-甲氧基苯胺(62mg，0.5mmol)，并將混合物攪拌30分鐘，然后加入三乙氧基硼氫化鈉(95mg，45mmol)，然后將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，然后真空蒸干，將殘余物溶解在二氯甲烷中并用水洗滌，水相用二氯甲烷反提取，合并的有機提取物經(jīng)過干燥和真空濃縮，得到粗產(chǎn)物，其通過HPLC純化(74mg，53％)。MS 281(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.51(bs，1H)，8.22(d，1H)，7.52(d，1H)，7.32-7.43(q，2H)，7.09(d，1H)，6.83(d，1H)，6.67(t，1H)，6.48-6.56(dd，2H)，5.96(t，1H)，4.59(d，2H)，3.84(s，3H)。
實施例11.22-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇(化合物75){方法B4_1}
根據(jù)上述實施例11.1中的方法B41相似地制備標(biāo)題化合物。收率＝71mg(51％)。MS 281(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.74(bs，1H)，8.27(d，1H)，7.53(d，1H)，7.36-7.45(q，2H)，7.11(d，1H)，7.08(t，1H)，6.70(t，1H)，6.36(d，1H)，6.32(s，1H)，6.16(d，1H)，4.54(d，2H)，3.69(s，3H)。
實施例12磷酸酯前體藥物的合成 磷酸酯前體藥物(化合物5) 本節(jié)中討論的方案和規(guī)程可同樣被應(yīng)用于該序列中的其他的化合物。
合成路線
a)NaHCO3，n-Bu4NHSO4，H2O-CH2Cl2，0℃～RT.； b)K2CO3，DMF，25℃； c)1，4-環(huán)己二烯，10％Pd/C，EtOH， 芐基氯甲基磷酸酯A的合成
將磷酸二芐酯(2.64g，9.48mmol)、碳酸氫鈉(3.18mL，11.97mmol)和四正丁基硫酸氫銨(3.2g，9.48mmol)溶解在水(80ml)中，加入二氯甲烷(DCM，90mL)，將混合物在0℃劇烈攪拌10分鐘，然后加入在DCM(15mL)中的氯代硫酸氯甲酯(1.17mL，11.37mmol)同時在室溫下連續(xù)地劇烈攪拌過夜，分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，將殘余物通過使用乙酸乙酯/己烷(1∶1)作為洗脫液的閃硅膠柱色譜純化，得到1.39g(44.8％)的純物質(zhì)。MS 327(MH+)；H NMR(CDCl3)，400MHz δ5.09(d，2H，J＝8Hz)，5.62(d，2H，J＝16Hz)，7.41-7.28(m，10Hz)。
前體藥物衍生物的合成 化合物5的合成
規(guī)程將化合物7(0.5g，1.29mmol)、碳酸鉀固體(0.36g，2.58mmol)懸浮在無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF，5mL)中，然后加入溶解在DMF(2mL)中的芐基氯甲基磷酸酯(A，0.42g，1.29mmol)，并在氮氣氛下在0℃攪拌，將反應(yīng)混合物在室溫下在氮氣氛下攪拌16小時，將反應(yīng)混合物傾入到水(50mL)中，用EtOAc提取(3×25mL)，合并的提取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸干。粗殘余物的LC-MS小時油狀殘余物在254nm下是97％純的。因此此時不用另外進行純化，該油狀殘余物可用在后面步驟中，MS 677(MH+)和同位素模式是符合的；1HNMR(DMSO)，400MHzδ1.99(s，3H)，3.64(s，3H)，3.68(s，3H)，4.72(d，1H，J＝4Hz)，4.74(d，1H，J＝3.5Hz)，4.89(d，2H1J＝7.8Hz)，5.96-6.05(m，2H)，6.47(d，1H，J＝8.08Hz)，6.58(d，1H，J＝8.33Hz)，6.64(dd，1H，J＝8.58&2.02Hz)，6.80(d，1H，J＝2.02Hz)，7.10-7.23(m，10H)，7.43(dd，1H，J＝8.58&8.58Hz)，7.54(s，1H)，7.55(d，1H，J＝8.33Hz)，8.45(dd，1H，J＝6.82&1.76Hz)，8.80(dd，1H1J＝4.04&1.76Hz)。
化合物5的合成
規(guī)程在氮氣氛下向10％Pd/C在EtOH中的懸浮液中滴加B在EtOH(3mL)中的溶液，然后滴加環(huán)己二烯(0.25mL；10eq，2.58mmol)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時，在硅藻土上濾出催化劑，并將濾液蒸發(fā)幾乎至干(蒸發(fā)后仍保留～10％的EtOH)，然后將粗殘余物與無水乙醚研磨，濾出沉淀的固體，并用乙醚漂洗，得到0.065g(60％)的純物質(zhì)。MS 497(MH+)和同位素模式是符合的；1H NMR(DMSO)，400MHzδ1.52(s，3H)，3.3(s，3H)，3.49(s，3H)，5.63(m，2H)，6.40(d，1H，J＝9.8Hz)，6.61(m，2H)，6.88(s，1H)，7.46(m，2H)，8.29(d，1H，J＝8.58Hz)，8.74(d，1H，J＝3.2Hz)，8.83(d，1H，7.7Hz)。
磷酸酯前體藥物(化合物138) 步驟1P(OBut)2(＝O)(OCH2Cl)I的合成 根據(jù)以下路線合成I
步驟2138的合成 I(8.8g)與化合物7(如實施例7.1中合成)在K2CO3存在的條件下在二甲基甲酰胺(DMF)中反應(yīng)，形成((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二叔丁基磷酸酯II(9.6g，HPLC收率為96％)，然后II(5.0g)與HCl在EtOAc/Et2O的混合物中反應(yīng)，形成138，收率85％。
表1




參考文獻
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權(quán)利要求
1.式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2的定義如下所述
a)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1為
且R7為-(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
b)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
限制條件是所述式(A)的化合物不是附件1中所指出的化合物之一；
所述式(A)的化合物當(dāng)包括至少一個不對稱中心時，為其旋光異構(gòu)體之一的形式或其混合物的形式。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R4為H或甲基，且R6選自甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，苯基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基，環(huán)己基，二苯基甲基，吡啶-2-基和吡啶-3-基。
3.權(quán)利要求2的化合物，選自以下
N-((3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺2，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)苯甲酰胺3，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N-甲基乙酰胺8，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2，2-二苯基乙酰胺11，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺12，
7-(氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-醇13，
N-(1-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)-2-苯基乙基)乙酰胺14，
N-((2-丁基-1H-咪唑-4-基)(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺15，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺16，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(喹啉-4-基)甲基)乙酰胺17，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-嗎啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺18，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺19，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯21，
3-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯22，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-氰基苯基)甲基)乙酰胺23，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-吡啶-2-基苯基)甲基)乙酰胺24，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)甲基)乙酰胺25，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-羥基苯基)甲基)乙酰胺26，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3-羥基苯基)甲基)乙酰胺27，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺28，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-2-基)甲基)乙酰胺29，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺30，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺鹽酸鹽31，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺32，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺鹽酸鹽33，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(8-羥基喹啉-2-基)甲基)乙酰胺34，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(6-嗎啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺35，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-3-基)甲基)乙酰胺36，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-4-基)甲基)乙酰胺37，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(1H-吲哚-7-基)甲基)乙酰胺38，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N，N-二甲基-苯甲酰胺39，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(4-(嗎啉-4-基羰基)苯基)甲基)-乙酰胺40，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)吡啶-2-甲酰胺41，
4-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N-(3-甲氧基丙基)-苯甲酰胺44，
4-((乙?；被?(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺45，
N-((5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N，N-二甲基-甘氨酰胺46，
N-(1-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺47，
N-((8-羥基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺48，
N-(2-呋喃基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺53，
N-(2-噻吩基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺54，
N-(2-甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺55，
5-氯-7-(3-羥基苯基)喹啉-8-醇57，
5-氯-7-(4-羥基苯基)喹啉-8-醇58，
N-(2-(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)苯基)乙酰胺59，
5-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇61，
5-氯-7-吡啶-4-基喹啉-8-醇鹽酸鹽62，
N-(3，4-二甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺63，
N-(3-甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺64，
N-(3-甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺65，
N-(3，4-二甲氧基芐基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺66，
N-(2-甲氧基苯基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺67，
N-(吡啶-3-基甲基)-8-羥基喹啉-7-基甲酰胺68，
N-(8-羥基喹啉-2-基)吡啶-2-基甲酰胺69，
N-(8-羥基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺70，
2-(3-羥基苯基)-N-(8-羥基喹啉-2-基)乙酰胺71，
2-(4-羥基苯基)-N-(8-羥基喹啉-2-基)乙酰胺72，
N-(8-羥基喹啉-2-基)-2-(2-噻吩基)乙酰胺73，
2-(((3-甲氧基芐基)氨基)甲基)喹啉-8-醇74，
2-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇75，
2-(((2-噻吩基甲基)氨基)甲基)喹啉-8-醇76，
2-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇77，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]乙酰胺78，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]乙酰胺79，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]乙酰胺80，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]丁酰胺81，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]丁酰胺82，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺92，
N-[(2-氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺93，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺94，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(苯基)甲基]-3-甲基丁酰胺110，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺111，
N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺112，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]-3-甲基丁酰胺113，
N-[(4-氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺121，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]丙酰胺122，
N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺124，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺125，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-異丙基苯基)甲基]戊酰胺126，
N-[[4-(二乙基氨基)苯基](8-羥基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺127，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺128，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羥基喹啉-7-基)甲基]丁酰胺129，
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺130，和
N-[(8-羥基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]環(huán)己烷甲酰胺131。
4.選自以下的前體藥物
((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯5，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉6，
((7-((乙?；被?(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯136，
((7-((乙?；被?(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉137，
((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯二鹽酸鹽138，和
((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯鹽酸鹽139。
5.用于在細(xì)胞中抑制CLK-1活性的方法，該方法包括以下步驟
a)提供其中需要抑制CLK-1活性的細(xì)胞，
b)使該細(xì)胞接觸式(B)的化合物
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2如下定義
i)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1為
且R7為(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
ii)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
式(B)的化合物當(dāng)包含至少一個不對稱中心時，為其對映體之一的形式或其混合物的形式；和
c)測定細(xì)胞中的CLK-1活性。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述式(B)的化合物選自表1中所指出的化合物。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述式(B)的化合物選自
N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7
5-氯-7-碘喹啉-8-醇52，
5-氯-7-(2-羥基苯基)喹啉-8-醇56，
5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60，和
N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135。
8.用于在動物中預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的病癥或其相關(guān)癥狀的方法，該方法包括以下步驟
a)鑒定罹患從CLK-1抑制中受益的病癥的動物；和
b)對所述動物給用式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，
其中X＝H，甲基或鹵素，并且取代基R1和R2如下定義
i)當(dāng)R2為氫時，則R1為H或鹵素，或者R1選自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羥基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1為-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6選自C1-C6烷基，C5-C6芳基，芐基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3選自H，甲基，苯基，芐基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-異丙基苯基，3-羥基苯基，4-羥基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(嗎啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(嗎啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羥基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1為
且R7為(CH2)n-R8，其中R8為任選地被1或2個甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
ii)當(dāng)X和R1都表示氫原子時，則R2選自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羥基苯基乙酰胺基，4-羥基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基芐基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
式(B)的化合物當(dāng)包含至少一個不對稱中心時，為其對映體之一的形式或其混合物的形式。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述式(B)的化合物選自表1中所指出的化合物。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述式(B)的化合物選自
((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯5，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉6，
N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7，
N-[(5-氯-8-羥基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135，
((7-((乙?；被?(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯136，
((7-((乙?；被?(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二鈉137，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯二鹽酸鹽138，和
((7-((乙?；被?(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氫磷酸酯鹽酸鹽139。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述病癥是缺血/再灌注損傷或炎癥。
12.用于在動物中預(yù)防和/或治療年齡相關(guān)病癥或其相關(guān)癥狀的方法，該方法包括以下步驟
a)鑒定罹患年齡相關(guān)病癥的動物；和
b)對所述動物給用權(quán)利要求8中的式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物；
限制條件是所述式(B)的化合物不是以下化合物之一、其可藥用鹽或前體藥物
5-氯-7-碘喹啉-8-醇52，
5-氯-7-(2-羥基苯基)喹啉-8-醇56，或
5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述年齡相關(guān)病癥選自心血管疾病，周圍性血管疾病，代謝病癥，癌，神經(jīng)變性病癥，癡呆，膀胱和腎病癥，糖尿病并發(fā)癥，眼病，肺和呼吸系統(tǒng)病癥，肌與骨病癥和皮膚病況。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述神經(jīng)變性病癥是阿爾茨海默病。
15.權(quán)利要求11的方法，其中所述缺血/再灌注損傷是腎、心臟、心肌、肺、腦或脊髓的缺血/再灌注損傷。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述炎癥是肺炎癥或任何其它器官的炎癥。
17.權(quán)利要求8的方法，其中所述動物是人。
18.權(quán)利要求12的方法，其中所述動物是人。
19.藥物組合物，其包括權(quán)利要求1的式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以及至少一種可藥用載體。
20.藥物組合物，其包括權(quán)利要求2的式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以及至少一種可藥用載體。
21.藥物組合物，其包括權(quán)利要求3的式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物，以及至少一種可藥用載體。
22.藥物組合物，其包括權(quán)利要求4的前體藥物以及至少一種可藥用載體。
23.藥物組合物，其包括藥學(xué)有效量的權(quán)利要求1的式(A)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
24.藥物組合物，其包括藥學(xué)有效量的權(quán)利要求8的式(B)的化合物、其可藥用鹽或前體藥物以有效地降低和/或抑制CLK-8活性。
25.權(quán)利要求22的藥物組合物，其包括藥學(xué)有效量的前體藥物以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
附件全文摘要
本發(fā)明涉及新的喹啉衍生物作為具有活性的CLK-1抑制劑。更具體地說，本發(fā)明的CLK-1抑制劑是式(A)的化合物。本發(fā)明還涉及包括該化合物的藥物以及用于預(yù)防和/或治療從CLK-1抑制中受益的疾病或其其相關(guān)癥狀的方法。
文檔編號A61K31/5377GK101611009SQ200780034613
公開日2009年12月23日 申請日期2007年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月25日
發(fā)明者瑟格弗雷德·赫吉米, 凱文·邁克波里德, 阿布德爾瑪?shù)禄隆·熙熙, 一蘭納耶·卡尼可卡, 穎 王, 斯蒂芬·李奧納多·海耶斯, 瑪麗-皮爾勒·谷曼德, 蓋伊·思維格尼, 丹尼爾·杜馬斯, 朱莉安·史密斯 申請人:伊維沃制藥股份有限公司