專利名稱：：通過抑制補體活性延長同種異體移植物的存活的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉^J逸長同種異體移植物在哺乳動物中的存活的方法。具體而言，本公開內(nèi)容涉及通過施用除免疫抑制性的一種或多種藥物或方法之外的補體或末端補體(terminalcomplement)形成抑制劑、尤其是補體C5斷裂抑制劑來延長同種異體移植物的存活。背景對于大多數(shù)慢性器官衰竭的患者，器官移植是優(yōu)選治療。盡管腎、肝、肺和心的移植因受者回歸更正常的生活方式而提供了康復的極好機會，但是它受限于潛在受者的醫(yī)療/手術適應性、供者缺乏增加以及移植的器官功能過早衰竭。細胞、組織和器官的移植已變得十分常見，且經(jīng)常是挽救生命的程序。對于大多數(shù)慢性器官衰竭的患者，器官移植是優(yōu)選的治療。盡管抑制排斥的治療有很大的改進，但是排斥繼續(xù)成為器官移植成功的唯一最大的障礙。排斥不但包括急性排斥，而且包拾隄性排斥。對于移植的腎的一年存活率，對于已死亡供者的腎平均為88.3%，對于接受自活供者的腎為94.4%。移植的腎的相應的5年存活率為63.3%和76.5%(OPTN/SRTR年報，2002)。對于肝，來自已死亡供體和活供體的肝一年存活率分別為80.2%和76.5%。相應的5年肝移植存活率為63.5%和73.0%(OPTN/SRTR年報，2002)。使用免疫抑制藥物、尤其是環(huán)孢菌素A和最近的他克莫司，已特別通過預防急性排斥而顯著提高了器官移植的成功率。但是如上文數(shù)字顯示，仍然需要提高短期以及特別是長期的成功率。從以上腎和肝移植物的數(shù)字可見，這些移植器官的五年衰竭率為25-35%量級。僅在2001年間，超過23,000例患者接受器官移植物，其中約19,000例為腎或肝移植(OPTN/SRTR年報，2002)。僅對這一年的移植物，用現(xiàn)有技術可預期大約5，000-6，000例這些移植的腎和肝將在5年內(nèi)衰竭。這些數(shù)字甚至不包括其他移植的器官或移植組織或細胞，如骨髓。有多種類型的移植物。這些在Abbas等人，2000中描述。從一個個體移植至相同個體的移植物稱為自體移植物或自身移植物。在兩個遺傳上相同或同系(syngeneic)的個體之間移植的移植物稱為同系移植物。在相同種移植物。在不同種類的個體之間移植的移植物稱為異基因移植物或異種移植物。關于同種異體移植物被認為是外源的分子稱為同種抗原(alloantigen)，關于異種移植物的那些分子稱為異種抗原(xenoantigen)。與i種反^i的。、'、；一、5;一目前在美國每年進行超過40,000例腎、心、肺、肝和胰腺移植(Abbas等人，加00)。其他可能的移植物包括但不限于血管組織、眼睛、角膜、晶狀體、皮膚、骨髓、肌肉、結締組織、胃腸組織、神經(jīng)組織、骨、千細胞、胰島、軟骨、肝細胞和造血細胞。不幸的是，需要移植的候補者比供者多得多。為克服這種短缺，所作的主要的努力是研究怎樣利用異種移植物。盡管該領域正不斷取得進步，但是事實是-目前大多數(shù)移植物為同種異體移植物。雖然目前比異種移植物更可能成功，但是同種異體移植物必須克服很多障礙以達到成功。存在受者對抗供體器官而造成的多種類型免疫攻擊，這可導致同種異體移植物的排斥。這些包括超急性排斥、急性血管排斥(包括加速體液排斥和新生急性體液排斥)以及慢性排斥。排斥通常是T細胞介導的或體液的抗體攻擊，但是可包括另外的二級因素，如補體和細胞因子的效應。需要器官移植的患者數(shù)目和可用供者器官數(shù)目之間不斷增長的缺口已成為全世界的主要問題。Park等人，2003。據(jù)說已發(fā)展抗HLA抗體的個體是免疫的或致敏的。Gloor，2005。由于產(chǎn)生嚴重的抗體介導的排斥(ABMR)，所以HLA致敏作用是臨床移植中最佳利用活供者器官的主要障礙(Warren等人，2004)。例如，等待腎移植的所有個體的超過50%是預致敏的患者(Glotz等人，2002)，他們具有升高水平的廣泛活性同種異體抗體，由多次輸注、先前失敗的同種異體移植物或懷孕引起(Kupiec-Weglinski，1996)。因為認識到這種類型排斥可導致同種異體移植物功能的急性或慢性喪失，所以ABMR的作用目前是移植研究最活躍的領域之一。Mehra等人，2003。已報道ABMR的很多例子，包括超急性排斥(HAR)或加速性體液排斥(ACHR)，特征在于對有效的抗T細胞療法耐受的急性同種異體移植物損傷、循環(huán)供者特異性抗體的檢測以及移植物中補體成分的沉積。在20-30%急性排斥例子中發(fā)生的、具有升高的循環(huán)同種異體抗體和補體活化的ABMR，較細胞排斥具有更差的預后。Mauiyyedi等人,2002。顯示高水平同種異體抗體的高度預致敏患者通常遭受直接且攻擊性的HAR。在臨床實踐中，隨著巨大努力以及技術的顯著進步，通過獲得移植前淋巴細胞毒性交叉配型，以識別具有對供者HLA抗原具有特異性抗體的致敏患者，來避免HAR。然而，對抗供者HLA或其他非MHC內(nèi)皮抗原的循環(huán)抗體還可能是延緩形式的急性體液排斥的原因，這與移植物喪失發(fā)生率增加有關。Collins等人，1999。因此，開發(fā)新型預致敏動物模型以模擬臨床環(huán)境的ABMR將有益于機理研究，并有益于控制預致敏宿主同種異體移植物排斥的承待需要的進展。一些高度預致敏患者可得益于介入程序，如免疫吸附(Palmer等人，I989;Ross等人，l"^Kriaa等人，1995)、血漿去除術和靜脈內(nèi)免疫球蛋白(Sonnenday等人，2002;Rocha等人，2003)，這些已經(jīng)設計且實施以短暫消除抗供者抗體。然而，除它們的益處外，前述療法還具有很多缺點，因為一些個體對它們的效應不太敏感(Kriaa等人，1995;Hakim等人，1990;GIotz等人，I"3;Tyan等人，1994);它們極其昂貴、耗時且危險(Salama等人，2001)。此外，這些方案的短暫且可變的效應限制了它們的影響。Glotz等人，2002;Kupin等人，1991;Schweitzer等人，2000。因此，開發(fā)新的策略以減少預防ABMR的危險和成本將有益于接受同種異體移植物的預致敏受者。發(fā)明概述因此，提供了延長移植的細胞、組織或器官存活的方法。具體而言，提供了延長同種異體移植的細胞、組織或器官存活的方法。這些方法涉及使用除補體活性抑制劑之外的一種或多種免疫抑制劑和/或免疫抑制方法。還提供了一種或多種免疫抑制劑和補體活性抑制劑在制備一種或多種藥物或藥物包裝中的用途。這種藥物或藥物包裝可用于延長同種異體移植物在受試者哺乳動物中的存活。同種異體移植物的實例是同種異體移植的細胞、組織或器官，包括但不限于血管組織、目艮、角膜、晶狀體、皮膚、骨髓、肌肉、結締組織、胃腸組織、神經(jīng)組織、骨、干細胞、胰島(islets)、軟骨、肝細胞、造血細胞、心、肝、肺、腎和胰。在某些方面，本發(fā)明提供了延長腎同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，所述方法包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。在某些實施方案中，所述同種異體移植物是MHC錯配的。在某些實施方案中，所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。在某些實施方案中，所述受者對所述同種異體移植物是ABO錯配的。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物長期施用。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。在某些實施方案中，所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的(chimerized)或去免疫的(deimmunized)抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片賴:抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體(domainantibody)和單鏈抗體。在某些實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗(pexelizumab)。在某些實施方案中，所述完整抗體是依庫珠單抗(eculizumab)。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗長期施用。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗每2周施用一次。在某些實施方案中，所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制了T-細胞活性或B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗(daclizumab)、巴利昔單抗(basiliximab)、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰嘌呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布喹那(brequinar)、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、CTLA-4-Ig(belatacept)、美羅華(rituxan)和布雷青霉素。在某些實施方案中，施用多于一種免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)治療方法、例如血漿去除術、脾切除術或免疫吸附與補體活性抑制劑組合使用。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少三個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少六個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少一年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少五年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述人的剩余壽命。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少l年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些方面，本發(fā)明提供了延長腎同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，其包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療，其中所述哺乳動物對所述同種異體移植物預致敏。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。在某些實施方案中，所述同種異體移植物是MHC錯配的。在某些實施方案中，所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。在某些實施方案中，所述受者對所述同種異體移植物是ABO錯配的。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物長期施用。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。在某些實施方案中，所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。在某些實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗。在某些實施方案中，所述完整抗體是依庫珠單抗。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗長期施用。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗每2周施用一次。在某些實施方案中，所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰嘌呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布會那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、CTLA-4-Ig(belatacept)、美羅華和布雷青霉素。在某些實施方案中，施用多于一種免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)治療方法、例如血漿去除術、脾切除術或免疫吸附與補體活性抑制劑組合使用。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方法中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少三個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少六個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少一年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少五年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述人的剩余壽命。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。在某些實施方案中，長期施用所迷抑制補體活性的藥物至少3個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。在某些實施方案中，長期施用所迷抑制補體活性的藥物至少1年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方案中，至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些方面中，本發(fā)明提供了抑制補體活性的藥物和免疫抑制藥物在制備用于延長腎同種異體移植物在哺乳動物中存活的藥物或藥物包裝中的用途。在某些實施方案中，多于一種免疫抑制藥物包括在所述藥物或藥物包裝中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所迷哺乳動物并行(concurrent)施用的制劑中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物連續(xù)施用的一種或多種制劑中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物處于適于對所迷哺乳動物長期施用的制劑中。在某些方面，本發(fā)明提供了延長同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，所述方法包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)包含LF15-0195的至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。在某些實施方案中，所迷同種異體移植物是MHC錯配的。在某些實施方案中，所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。在某些實施方案中，所述受者對所述同種異體移植物是ABO錯配的。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。在某些實施方案中，所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。在某些實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗。在某些實施方案中，所述完整抗體是依庫珠單抗。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗長期施用。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗每2周施用一次。在某些實施方案中，所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰噤呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布會那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、CTLA-4-Ig(bdatacept)、美羅華和布雷青霉素。在某些實施方案中，施用多于一種免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)治療方法、例如血漿去除術、脾切除術或免疫吸附與補體活性抑制劑組合使用。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少三個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少六個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少一年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少五年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所i^A的剩余壽命。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少l年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些方面，本發(fā)明提供了延長同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，所述方法包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)包含LF15-0195的至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療，其中所述哺乳動物對所迷同種異體移植物預致敏。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。在某些實施方案中，所述同種異體移植物是MHC錯配的。在某些實施方案中，所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。在某些實施方案中，所述受者對所迷同種異體移植物是ABO錯配的。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物長期施用。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。在某些實施方案中，所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。在某些實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗。在某些實施方案中，所述完整抗體是依庫珠單抗。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗長期施用。在某些實施方案中，所述依庫珠單抗每2周施用一次。在某些實施方案中，所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、H)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰嘌呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布會那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、CTLA-4-Ig(belatacept)、美羅華和布雷青霉素。在某些實施方案中，施用多于一種免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)治療方法、例如血漿去除術、脾切除術或免疫吸附與補體活性抑制劑組合使用。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少三個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少六個月。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少一年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活至少五年。在某些實施方案中，所述同種異體移植物存活所述人的剩余壽命。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少1年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。在某些實施方案中，長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在其中哺乳動物對同種異體移植物預致敏的某些實施方案中，至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些實施方案中，至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。在某些方面，本發(fā)明提供了抑制補體活性的藥物和免疫抑制藥物在制備用于延長同種異體移植物在哺乳動物中存活的藥物或藥物包裝中的用途，其中至少一種免疫抑制藥物包含LF15-0195。在某些實施方案中，多于一種免疫抑制藥物包括在所述藥物或藥物包裝中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物并行施用的制劑中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物連續(xù)施用的一種或多種制劑中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。在某些方面，本發(fā)明提供了包含抑制補體活性的藥物和至少一種免疫抑制藥物的藥物包裝，其中所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物配制用于長期施用，其中至少一種免疫抑制藥物包含LF15-0195。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物是在包含抗體和凍千保護劑(lyoprotectant)的凍干制劑中的抗體。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物處于包含該免疫抑制藥物和凍干保護劑的凍干制劑中。在某些實施方案中，所述藥物和所述免疫抑制藥物處于包含所述藥物、所述免疫抑制藥物和凍干保護劑的相同凍干制劑中。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物處于包含含有藥筒(cartridge)的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述藥物。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物處于包含含有藥筒的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于包含含有藥筒的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述藥物和所述免疫抑制藥物。在某些實施方案中，所述抑制補體活性的藥物以單位劑型存在。在某些實施方案中，所述免疫抑制藥物以單位劑型存在。在某些實施方案中，所述抗體抑制末端補體或C5a的形成。在某些實施方案中，該抗體是完整抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。在某些實施方案中，所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，所述抗體片段選自Fab、F(ab，)2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。在某些實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗。在某些實施方案中，所述完整抗體是依庫珠單抗。本申請涵蓋任何上述方面和實施方案的組合。附圖簡述圖1A-1D顯示在不同處理下預致敏相對未致敏受者的抗供者抗體水平。圖2A和2B顯示在預致敏同種異體移植物受者中使用抗C5抗體、CsA和CyP的三重療法和在預致敏同種異體移植物受者中僅使用抗C5抗體和CsA的組合療法之間的比較。圖2A比較了在如所示不同處理下各種受者的心臟-移植物存活。圖2B顯示了例如在不同組受者的心臟同種異體移植物中淋巴細胞浸潤的組織學和免疫組織學。圖3顯示與免疫抑制劑相比被抗C5抗體阻斷的末端補體活性。圖4A-4D比較了在僅用抗C5抗體的單一療法、抗C5抗體和CsA的雙重組合療法和抗C5抗體、CsA和CyP的三重組合療法下，同種異體移植物預致敏受者中的抗供者抗體水平。圖5顯示在未處理或不同處理下的同種異體移植物受者中IgG同種型的比率的變化。圖6顯示與未處理動物的心臟移植物相比，長期存活的心臟移植物中Bcl-2和Bcl-xl蛋白質(zhì)的高水平表達。圖7A-7C顯示來自第一次移植受者的已適應移植物的改善的第二次移植(再移植)。圖8A-8B顯示再移植實驗的結果。圖9A-9B顯示再移植實驗的結果。圖10A-10D顯示不同處理下預致敏受者相對未致敏受者的抗供者抗體水平。圖11A-11C顯示抗C5mAb與CsA和LF組合在預致敏小鼠中實現(xiàn)無限期(indefmite)腎移植物存活。圖12顯示補體溶血活性在預致敏BALB/c小鼠血清中被完全抑制。圖13A-13B顯示在未處理或不同處理下的異體移植物受者中IgG同種型比率的變化。圖14顯示在預致敏受者的長期存活腎移植物中保護性蛋白質(zhì)的表達。發(fā)明詳述綜述移植或移植物的排斥超急性排斥在移植后幾分鐘至幾小時內(nèi)發(fā)生，這是因為預先形成的對所移植組織抗原的抗體。它的特征在于移植物脈管系統(tǒng)的出血和血栓性阻塞?？贵w與內(nèi)皮的結合激活補體，且抗體和補體誘發(fā)移植物內(nèi)皮的許多變化，所述變化促進血管內(nèi)血栓形成以及導致血管阻塞，結果是所移植的器官遭受不可逆轉(zhuǎn)的局部缺血損傷(Abbas等人，2000)。超急性排斥經(jīng)常由預先存在的IgM同種異體抗體介導，例如針對在紅血細胞上表達的ABO血型抗原的那些。由天然抗體介導的這類排斥是異種移植排斥的主要原因。因為通常選擇同種異體移植物以配合供者和受者ABO類型，所以因天然IgM抗體所致的超急性排斥不再是同種異體移植物的主要問題。ABO配合的同種異體移植物的超急性排斥仍可發(fā)生，通常由定向?qū)沟鞍淄N抗原如外來MHC分子或?qū)苟x不太明確的在血管內(nèi)皮細胞上表達的同種抗原的IgG抗體介導。這種抗體可由于因輸血而先前暴露于同種抗原、先前移植或多胎妊娠而出現(xiàn)(這種先前暴露被稱為"預致敏性，，)。Abbas等人，2000。急性排斥是通常始于移植第一周后的、由T細胞、巨噬細胞和抗體介導的血管和實質(zhì)損傷的過程。Abbas等人，2001。T淋巴細胞通過響應于血管內(nèi)皮和實質(zhì)細胞上存在的同種抗原、包括MHC分子而在急性排斥中起重要作用?；罨腡細胞導致移植物細胞的直接溶解，或產(chǎn)生募集和激活炎癥細胞的細胞因子，導致壞死。CD4+和CD8+細胞都可促進急性排斥。移植物的同種異基因細胞的破壞是高度特異性的，是CD8+細胞毒性T淋巴細胞殺死的標志。Abbas等人，2000。CD4+T細胞通過分泌細胞因子和誘導移植物的遲發(fā)型超敏性反應，可能在介導急性移植物排斥中是重要的，一些可用證據(jù)表明CD4+T細胞足以介導急性排斥。Abbas等人，2000。在移植物受者建立對血管壁抗原的體液免疫反應且所產(chǎn)生的抗體與血管壁結合并激活補體后，抗體也可介導急性排斥。Abbas等人，2000。慢性排斥的特征在于在延長的時期內(nèi)發(fā)生的正常器官結構喪失的纖維化。慢性排斥的發(fā)病機理比急性排斥更未充分理解。移植物動脈阻塞可由于內(nèi)膜平滑肌細胞增殖而發(fā)生(Abbas等人，2000)。該過程被稱為加速或移植物動務P更化，可在移植后6個月至1年內(nèi)于任何血管化器官移植中發(fā)展。為了移植成功，必須克服幾種方式的排斥。利用多種方法以預防排斥。這可能需要施用免疫抑制劑，經(jīng)常是幾種類型以預防不同方式的攻擊，例如抑制T-細胞攻擊、抗體和細胞因子和補體效應。預篩選供者使其與受者相配也是預防排斥、特別是預防超急性排斥的主要因素。移植前抗HLA抗體的免疫吸附可減少超急性排斥。在移植之前可對受者或宿主施用抗T細胞試劑，例如單克隆抗體OKT3、抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、環(huán)孢菌素A或他克莫司(FK506)。此外，在移植之前糖皮質(zhì)激素和/或硫唑嘌呤(或其他嘌呤類似物)可施用至宿主。用于輔助預防移植排斥的藥物包括但不限于ATG或ALG、OKT3、達利珠單抗、巴利昔單抗、皮質(zhì)激素、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、環(huán)孢菌素、他克莫司、嘌呤類似物如硫唑嘌呤、甲氨喋呤、霉酚酸酯、6-巰嘌呤、布雷青霉素、布喹那、來氟米特、環(huán)磷酰胺、西羅莫司、抗CD4單克隆抗體、CTLA4-Ig、美羅華、抗CD154單克隆抗體、抗LFA1單克隆抗體、抗LFA-3單克隆抗體、抗CD2單克隆抗體和抗CD45。同種異體移植物部分通過激活T細胞而排斥。移植受者在CD4+T細胞識別同種異體移植物中的外來抗原后實現(xiàn)排斥反應。這些抗原通過主要組織相容性復合物(MHC)編碼。存在I類和II類MHC分子。在人中，I類MHC分子是HLA-A、HLA-B和HLA-C。人的II類MHC分子稱為HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP。在小鼠中，I類MHC分子是H-2K、H-2D和H-2L，而II類MHC分子是I-A和I-E。當CD4+T細胞結合外來MHC抗原時，它們;故激活并經(jīng)受克隆增殖。激活的T細胞分泌輔助激活單核細胞/巨噬細胞、B細胞和細胞毒性CD8+T細胞的細胞因子。激活的單核細胞/巨噬細胞釋放導致組織損傷的活性劑，B細胞產(chǎn)生導致補體介導的組織破壞的同種抗體，CD8+T細胞通過誘導細胞凋亡和細胞溶解以抗原特異性方式殺死移植細胞。免疫抑制劑用來延緩移植排斥(即延長它們的存活)的很多藥物以多種方式作用。免疫抑制劑廣泛使用。參見Stepkowski，2000，幾種免疫抑制藥物作用機理的綜述。環(huán)孢菌素A是最廣泛使用的用于抑制移植排斥的免疫抑制藥物之一。它是白細胞介素-2或IL-2的抑制劑(它預防白細胞介素-2的mRNA轉(zhuǎn)錄)。更直接地，環(huán)孢菌素抑制通常在T細胞受體刺激下發(fā)生的鈣調(diào)磷酸酶激活。鈣調(diào)磷酸酶脫磷酸化NFAT(活化的T細胞的核因子)，使其能夠il^核并與白細胞介素-2啟動子結合。通過阻斷該過程，環(huán)孢菌素A抑制CD4+T細胞的激活以及否則將發(fā)生的所致事件級聯(lián)。他克莫司是另一種免疫抑制劑，通過抑制白細胞介素-2的生成起作用。雷帕霉素(西羅莫司)、SDZRAD和白細胞介素-2受體阻斷劑是抑制白細胞介素-2作用的藥物，因此可預防上述事件級聯(lián)。嘌呤或嘧啶生物合成抑制劑也用于抑制移植排斥。這些預防DNA合成，因而抑制細胞分裂，包括T細胞分裂的能力。結果是通過預防新T細胞的形成而抑制T細胞活性。嘌呤合成抑制劑包括硫唑嘌呤、曱氨喋呤、霉酚酸酯(MMF)和咪唑立賓(布雷青霉素)。嘧咬合成抑制劑包括布嗇那鈉和來氟米特。環(huán)磷酰胺是噤呤和嘧咬合成的抑制劑。抑制T細胞激活的又一種方法是用T細胞的抗體治療受者。OKT3是對抗為T細胞受體的CD3的鼠單克隆抗體。該抗體抑制T細胞受體和抑制T細胞激活。很多其他用于延緩同種異體移植物排斥的藥物和方法為本領域技術人員已知并使用。一種方法是例如通過輻射耗竭T細胞。這已經(jīng)經(jīng)常用于骨髓移植，特別如果主要HLA部分錯配。已經(jīng)使用對受者施用CD40配體-CD40相互作用抑制劑(阻斷劑)和/或CDM-B7相互作用阻斷劑(U.S.專利6，280，957)。公開的PCT專利申請WO01/37860教導了施用抗CD3單克隆抗體和IL-5以抑制Thl免疫反應。公開的PCT專利申請WO00/27421教導了通過施用腫瘤壞死因子-a拮抗劑來預防或治療角膜移植排斥的方法。Glotz等人(2002)顯示施用靜脈內(nèi)免疫球蛋白(IVIg)可誘導抗HLA抗體效價顯著且持續(xù)地減少，因而允許HLA-錯配的器官的移植。類似的方案已經(jīng)包括血漿交換(Taube等人，1984)或與免疫抑制劑偶聯(lián)的免疫吸附技術(Hiesse等人，1992)或這些的組合(Montgomery等人，2000)。Changelian等人(2003)教導了一種模型，其中免疫抑制由口服Janus激酶3(JAK3)抑制劑引起，所述JAK3是使用共同y鏈(YC)的細胞因子受體(白細胞介素-2、-4、-7、-9、-15、-21)的適當信號傳導所必需的酶，結果是抑制T細胞激活。在心臟同種異體移植物移植的研究(Stepkowski，2000)中，對抗ICAM-1的反義核酸已單獨使用或與對白細胞-功能相關抗原l(LFA-l)具有特異性的單克隆抗體組合使用。類似地，抗ICAM-1抗體已用于與抗LFA-1抗體組合以治療心臟同種異體移植物(Stepkowski，2000)。反義寡核苷酸已另外與環(huán)孢菌素聯(lián)合用于大鼠心臟或腎同種異體移植物模型中，導致延長移植物存活的協(xié)同效應(Stepkowski，2000)。慢性移植排斥已通過施用涉及于分化、增殖和凋亡的細胞因子TGF-p的拮抗劑來治療(美國專利申請公開US2003/0180301)。補體和移掛移植排斥補體在移植排斥中的作用是公知的。這在異種移植的情況下尤其正確，但是補體也在同種異體移植排斥中起作用。關于綜述，參見Platt和Saadi，1999。補體作用的一個方面是缺血-再灌注損傷可在器官移植物用受者血液再灌注時發(fā)生。補體也可引起一些同種異體移植物排斥的表現(xiàn)。補體系統(tǒng)在U.S.專利6,355,245中詳細描述。補體系統(tǒng)與身體的其他免疫系統(tǒng)聯(lián)合作用以防范細胞和病毒病原體的侵入。有至少25種補體蛋白質(zhì)，它們以血漿蛋白質(zhì)和膜輔助因子的復合物集合存在。血漿蛋白質(zhì)組成脊推動物血清球蛋白的約10%。補體成分通過在一系列復雜但精確的酶斷裂和膜結合事件中互相作用而實現(xiàn)它們的免疫防御功能。所致補體級聯(lián)反應導致具有調(diào)理、免疫調(diào)節(jié)和溶解功能的產(chǎn)物的產(chǎn)生。補體級聯(lián)反應經(jīng)由經(jīng)典途徑或替代途徑進行。這些途徑共用很多組份，盡管它們起始步驟不同，它們匯聚且共用負責激活和破壞靶細胞的相同的"末端補體"組份(C5至C9)。經(jīng)典補體途徑通常通過抗體識別以及結合于靼細胞上的抗原位點來啟動。替代途徑通常是非抗體依賴性的，并且可通過病原體表面上的某些分子來啟動。兩種途徑聚集在一點，在那里補體組份C3通過活性蛋白酶(其在每種途徑中不同)斷裂以生成C3a和C3b。其他激活補體攻擊的途徑可隨后在導致補體功能不同方面的序列事件中起作用。C3a是過敏毒素。C3b結合于細菌和其他細胞以及某些病毒和免疫復合物，并標記它們以從循環(huán)中除去。在這種作用中的C3b已知為調(diào)理素。C3b的調(diào)理功能被認為是補體系統(tǒng)最重要的抗感染作用。具有阻斷C3b功能的遺傳損傷的患者傾向于被多種病原生物感染，而后來在補體級聯(lián)反應序列中具有損傷的患者，即具有阻斷C5功能的損傷的患者，發(fā)現(xiàn)僅更傾向于奈瑟球菌屬(Neisseria)感染，因此僅僅在某種程度上更易感(Fearon，1983)。C3b還與每種途徑特有的其他組份形成復合物，以形成經(jīng)典或替代的C5轉(zhuǎn)化酶，其裂解C5為C5a和C5b。因此C3祐J人為是補體反應序列中的重要蛋白質(zhì)，因為它對替代和經(jīng)典兩種途徑均是必要的(Wurzner等人，1991)。C3b的該特性通過作用于C3b以產(chǎn)生iC3b的血清蛋白酶因子I來調(diào)節(jié)。盡管仍然具有調(diào)理素功能，但iC3b不能形成活性C5轉(zhuǎn)化酶。C5是190kDa卩球蛋白，在正常血清中以約75jig/inL(0.4jiM)存在。C5是糖基化的，其約1.5-3百分比的重量歸因于碳水化合物。成熟C5是999個氨基酸115kDaa鏈與656個氨基酸的75kDa卩鏈二石克鍵連接的異源二聚體。C5作為單拷貝基因的單鏈前體蛋白質(zhì)產(chǎn)物合成(Haviland等人，1991)。該基因轉(zhuǎn)錄的cDNA序列預測了1659個氮基酸的分泌型前-C5前體以及18個氨基酸引導序列。前-C5前體在氨基酸655和659之后斷裂，獲得作為氨基末端片段的P鏈(氨基酸殘基+l至655)和作為g末端片段的a鏈CtJ^酸殘基660至1658)，其中在兩者之間缺失四個氨基酸。C5a通過替代或經(jīng)典C5轉(zhuǎn)化酶從C5的a鏈斷裂，作為包含a鏈前74個氨基酸(即M酸殘基660-733)的M末端片段。C5a的11kDa質(zhì)量的約20%歸因于碳水化合物。轉(zhuǎn)化酶作用的斷裂位點位于氨基酸殘基733處或與其直接相鄰。結合于此斷裂位點或與其相鄰處的化合物具有阻斷C5轉(zhuǎn)化酶^至斷裂位點的潛力，因此作為補體抑制劑起作用。C5還可通過除C5轉(zhuǎn)化酶活性之外的方式激活。有限的胰蛋白酶消化(Minta和Man，1977;WetseI和KoIb，1982)和酸處理(Yamamoto和Gewurz，1978;Vogt等人，1989)也可斷裂C5，產(chǎn)生活性C5b。C5a是另一種過敏毒素。C5b與C6、C7和C8組合以在靶細胞表面形成C5b-8復合物。在結合幾種C9分子后，形成膜攻擊復合物(MAC、C5b-9、末端補體復合物-TCC)。當足夠數(shù)目的MAC插至靶細胞膜時，它們造成的開口(MAC孔)介導靶細胞的快速滲透性溶解。更低的非溶解濃度的MAC可產(chǎn)生其他效應。特別地，小數(shù)目C5b-9復合物膜插入至內(nèi)皮細胞和血小板可導致有害的細胞激活。在一些情況下，激活可先于細胞溶解。如上文所述，C3a和C5a是過敏毒素。這些活化的補體組份可觸發(fā)肥大細胞脫粒作用，其釋放組胺和其他炎癥介質(zhì)，導致平滑肌收縮、血管滲透性增加、白細胞激活以及其他炎性現(xiàn)象，包括導致細胞過多的細胞增殖。C5a也發(fā)揮趨化肽功能，用于吸引促炎癥粒細胞至補體激活位點。對供者同種抗原的補體結合性受者抗體被認識是超急性移植排斥的主要原因。由于移植前交叉配合試驗，這種體液排斥表型目前很少觀察到(Regele等人，2001)。目前數(shù)據(jù)顯示體液免疫機制可能促進其他類型的同種異體移植物排斥(Regele等人，2001)。發(fā)現(xiàn)表明體液預致敏的高水平群體反應性抗體(panelreactiveantibody)與較4氐的腎移植物存活相關(Opelz，1992),已報道在移植后階段同種抗體的出現(xiàn)預示差的移植結果(Jeannet等人，1970;Halloran等人，1992)，通過免疫吸附選擇性去除受者IgG逆轉(zhuǎn)了一些排斥事件，表明體液免疫機制對排斥的貢獻(Persson等人，1995;B6hmig等人，2000)。在移植物內(nèi)的補體激活可能表明抗體介導的移植物損傷。補體斷裂產(chǎn)物C4d是抗體依賴性經(jīng)典途徑激活的標記物。在腎同種異體移植物活組織檢查中的毛細血管C4d沉積物與差的移植結果相關。近來，不斷增加的證據(jù)表明補體激活顯著有助于同種異體移植物受者的致敏和t艮同種異體移植物的組織損傷(Platt等人，1999)?？贵w是研究最徹底的激活經(jīng)典補體途徑的介體。臨床上，已知同種抗體激活補體(Baldwin等人，2001)。Halloran和Collins表明在腎同種異體移植物的腎小管周圍毛細血管中C4d沉積物是急性體液排斥的敏感性和診斷性標記物，其與循環(huán)供者特異性抗體的存在強烈相關(Collins等人，1999;Halloran，2003)。進一步支持性證據(jù)見于補體抑制(Pratt等人，1996;Pruitt等人，1991;Forbes等人，1978)或缺乏(Pratt等人，2000;Baurer等人，1995)的動物中，其顯示炎性損傷顯著減少以及抗供者免疫反應降低。在ABMR中，提出補體通過經(jīng)典途徑激活并在發(fā)病機理中起重要作用(Collard等人,1997)。盡管補體在異種移植后的HAR或急性血管排斥(AVR)中的作用得到很好地證明(Platt等人，1999)，但補體在同種異體移植后ABMR發(fā)病機理中的確切才幾理還不明了。補體的C5組份斷裂以形成具有多種促炎癥效應的產(chǎn)物，從而代表了免疫介導的炎癥反應內(nèi)補體抑制的具吸引力的靶點。如上所述，C5a是強有力的過敏毒素和趨化因子。通過C5a的細胞激活誘導多種其他炎癥介質(zhì)的釋放(Jose等人，1983)。補體激活途徑(經(jīng)典、替代或甘露聚糖-結合的凝集素途徑)最終導致細胞溶解膜攻擊復合物C5b-9的生成(Kirschfunk，2001)，C5b-9可介導通過細胞溶解的直接組織損傷和亞溶解劑量的促炎癥細胞激活(Saadi等人，1995;Papadimitriou等人，1991)。因此，對于移植之后補體介導的炎癥反應的最佳抑制，可能需要同時阻斷C5a和C5b-9的產(chǎn)生。同時，抑制C5的補體級ft^應不損害C3b的產(chǎn)生，保留了C3b-介導的病原孩吏生物調(diào)理作用以及免疫復合物的增溶和清除(Liszewski，1993)。先前已經(jīng)報道抗C5mAb在幾種實驗模型中的有益效應，包括心肌再灌注(Vakeva等人，1998)、系統(tǒng)性紅斑狼疳(Wang等人，1996)和類風濕性關節(jié)炎(Wang等人，1995);以及自身免疫性疾病、心肺動脈分流術和急性心肌梗塞的人臨床試驗(Kirschfink，2001)。此外，通過功能性阻斷抗C5單克隆Ab(mAb)的4H^滅活防止了異種移植模型中的HAR(Kroshus等人，1995;Wang等人，1999)。已經(jīng)測試了通過施用補體抑制劑延緩同種異體移植物排斥的方法。公布的PCT專利申請WO92/10205公開了環(huán)孢菌素和可溶性補體受體(sCRl)的組合抑制預致敏大鼠模型中心臟同種異體移植物排斥的用途。補體受體1結合于補體C3b和C4b。補體受體1的可溶形式自然地發(fā)生或可經(jīng)由重組DNA方法產(chǎn)生。這些可溶性補體受體已經(jīng)在體外抑制補體激活的結果(U.S.專利6,057,131)。在WO92/10205中，對已經(jīng)對它們接受的心臟同種異體移植物預致敏的大鼠以10mg/kg/day肌內(nèi)施用環(huán)孢菌素A，始于移植前兩天，并且繼續(xù)直至移植物排斥時。此外，在移植物再灌注之前，立即以15mg/kg的單次靜脈內(nèi)快速濃注施用可溶性補體受體l(sCRl)。未經(jīng)藥物處理的對照動物在平均第3.8天排斥移植物。那些僅施用環(huán)孢菌素A的動物在平均第57天排斥移植物(這可變性相當大，其中兩只大鼠在第2和4天迅速排斥，而第三只大鼠在第166天排斥)。僅施用sCRl的大鼠在平均第44天排斥移植物。那些施用環(huán)孢菌素A和sCRl的組合的大鼠在平均第147天排斥移植物。觀察到長期環(huán)孢菌素A和單次快速濃注sCRl的組合導致協(xié)同效應，大大延長了直至移植排斥的時間。Pruitt和Bollinger的早期研究(1991)使用了類似的預致敏大鼠同種異體移植物模型，顯示單獨施用sCRl以滅活補體導致移植排斥前的時間增加。Sims等人(U.S.專利5，135，916)提出使用補體抑制劑例如CD59或?qū)笴7或C9的抗體以阻斷C5b-9復合物的形成，從而治療待移植器官和組織的血管內(nèi)皮。這將預防C5b-9引發(fā)的細胞壞死。將C5b-9滅活劑添加至灌注液或貯存培養(yǎng)基以保護血管襯細胞免于在體外貯存期間的補體激活。此外，保護器官或組織免于移植后啟動的補體激活產(chǎn)生的細胞溶解和溶栓效應，從而避免了補體介導的急性排斥。Sims等人(U.S.專利5，573，940和U.S.專利6，100，"3)也教導了在移植組織或器官中表達CD59以保護移植器官免于排斥的方法。這可通過轉(zhuǎn)染所移植細胞而實現(xiàn)。盡管迄今為止開發(fā)的若干藥物與預篩選供者和受者以使供者同種異體移植物與受者相配的方法的聯(lián)合已經(jīng)日益增加了同種異體移植物存活的平均時間長度，但是在受者的壽命期間還是有很多同種異體移植物被排斥。通常而言，現(xiàn)有技術的ii^主要涉及克服急性移植排斥。此外，使用特異性靶向C5蛋白水平補體級聯(lián)反應的抑制劑，還未檢測出激活的末端補體組份在抗體介導的同種異體移植物排斥中的作用。本文所述以及實施例中示例的方法通過抑制同種異體移植物、特別是預致敏受者中同種異體移植物的慢性排斥，推進了同種異體移植技術的發(fā)展。通過使用免疫抑制藥物與長期施用的補體抑制劑的正確組合，提出了用于進一步延長同種異體移植物存活的新方法。方法和用途本文所公開的方法用于延長同種異體移植物存活。該方法通常包括施用補體活性抑制劑與一種或多種免疫抑制劑的組合。適合的補體抑制劑對本領域技術人員是已知的?？梢灾苽浠罨a體個別組份的抗體，例如C5a、C7、C9等的抗體(參見例如U.S.專利6，534，058;公布的U.S.專利申請US2003/0129187;和U.S.專利5,660,825)。抑制補體介導的溶解的蛋白質(zhì)是已知的，包括CD59、CD55、CD46和其他C8和C9的抑制劑(參見例如U.S.專利6,100,443)。U.S.專利6,355,245教導了結合于C5并防止其斷裂成C5a和C5b、從而防止不僅CSa而且CSb-9復合物形成的抗體。稱為補體受體且結合補體的蛋白質(zhì)也是已知的(參見公布的PCT專利申請WO92/10205和U.S.專利6,057,131)。使用補體受體的可溶形式、例如可溶性CR1可抑制補體激活的后果，如嗜中性粒細胞氧化爆發(fā)、補體介導的溶血以及C3a和C5a生成。本領域技術人員認識到上述是一些但不是全部抑制補體及其活化的已知方法。適合的免疫抑制劑包括但不限于ATG或ALG、OKT3、達利珠單抗、巴利昔單抗、皮質(zhì)激素、15-脫氧精胍菌素、LF15-0195、環(huán)孢霉素、他克莫司、硫唑嘌呤、甲氨喋呤、霉酚酸酯、6-巰噤呤、布雷青霉素、布喹那、來氟米特、環(huán)礴酰胺、西羅莫司、抗CD4單克隆抗體、CTLA4-Ig、美羅華、抗CD154單克隆抗體、抗LFA1單克隆抗體、抗LFA-3單克隆抗體、抗CD2單克隆抗體和抗CD45。同種異體移植物可包括移植的器官、器官的部分、組織或細胞。這些包括但不限于心、腎、肺、胰、肝、血管組織、眼、角膜、晶狀體、皮膚、骨髓、肌肉、結締組織、胃腸組織、神經(jīng)組織、骨、干細胞、胰島、軟骨、肝細胞和造血細胞。同種異體移植物衰竭的至少部分原因是同種異體移植物受者的一個反應是補體的激活。這導致C5a和C5b-9的形成，其為強促炎癥分子，有助于引起移植物衰竭。不希望受限于任何建議的理論，申請人建立如下理論抑制C5a和C5b-9的形成或抑制存在的C5a和C5b-9有助于預防移植物衰竭。此外，建立以下理論只要同種異體移植物存在，受者將繼續(xù)嘗試形成對移植物的免疫反應，且這種反應將包括嘗試產(chǎn)生C5a和C5b-9。如果不預防，那么這種補體反應將在短期內(nèi)引起急性血管排斥，并在長期內(nèi)促進慢性移植排斥。使用補體活性抑制劑的現(xiàn)有技術方法受限于僅在移植時施用這些抑制劑。這有助于預防急性排斥，但是如本文公開的結果所示，通過在更長的時期內(nèi)施用這種抑制劑獲得改良的結果。這種長期施用有助于預防同種異體移植物的慢性排斥，這與僅有助于預防急性排斥相反。與比，結果是同種異體移植物存活時間更長。盡管通常期望同種異體移植物存活該受者的剩余壽命，但是也有僅僅短時期需要同種異體移植物的時候，例如橋接器官(bridgeorgan)橋接時間直至受者自身器官能主動恢復，此時該同種異體移植物將不再需要。這種移植物所需的時間長度將變化，但是通常將長于急性排斥發(fā)生的時間，并對于慢性排斥發(fā)生也足夠長。對于橋接移植物，期望的存活期可以是幾個月，例如六個月。為證明長期抑制補體活性將延長同種異體移植物存活，進行了實驗，其中以長期方式而不僅僅在移植時抑制補體活化。長期治療意味著在延長的時期內(nèi)直到同種異體移植物壽命的治療。這可以是每天治療，但不限于每天治療。長期治療將在同種異體移植物受者中維持有效量的藥物。例如，優(yōu)選的方法是在治療中包括抗C5單克隆抗體依庫珠單抗。在對遭受陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)的人的研究中，已經(jīng)以卯0mg/患者的劑量每12-14天施用一次依庫珠單抗。已發(fā)現(xiàn)，這種給藥完全地且持續(xù)地阻斷末端補體活性并且大大抑制了PNH的癥狀(Hillmen等人，2004)。在依庫珠單抗被滅活或從身體去除之前，該施用的劑量能阻斷補體的效應約兩星期。因此，依庫珠單抗長期治療可以是例如對同種異體移植物受者施用900mg、每兩星期一次，持續(xù)患者的剩余壽命。類似地，其他藥物可根據(jù)需要長期遞送，不論這是基于每天還是需要另一種方案以在同種異體移植物受者中維持有效量的藥物。因為熟知移植排斥可不僅僅由補體激活、例如T細胞活性導致，所以實驗包括免疫抑制劑如環(huán)孢菌素以進一步助于預防移植排斥。抑制補體活性的優(yōu)選方法是使用結合于補體C5并防止C5斷裂的單克隆抗體。這預防C5a和C5b-9兩者的形成，同時允許對受者有益的C3a和C3b的形成。這種對人補體特異性的抗體是已知的(U.S.專利6，355，245)。這些在U.S.專利6，355，245中/>開的抗體包括完整抗體或全長抗體(現(xiàn)稱為依庫珠單抗)以及單鏈抗體(現(xiàn)稱為培克珠單抗)。對抗小鼠C5的類似抗體稱為BB5.1(Frei等人，1987)。在下文描述的實驗中利用BB5.1。抑制補體活性的抗體不必須是單克隆抗體。它們可以是例如多克隆抗體。它們又可以是抗體片段?？贵w片段包括但不限于Fab、F(ab')、F(ab')2、單鏈抗體、結構域抗體和Fv。而且，本領于技術人員熟知抗體可以是人源化的(Jones等人，1986)、嵌合的或去免疫的。抗體還可以包括突變型Fc部分以便突變型Fc不會激活補體。用于本發(fā)明的抗體可以是這些的任何一種。當同種異體移植物受者是人時，優(yōu)選使用人源化的抗體。施用和制劑根據(jù)本領域技術人員已知的方法進行補體活性抑制劑的施用。這些抑制劑優(yōu)選在同種異體移植物移植時間前施用，或在移植時以長期方式持續(xù)施用。這些抑制劑又可在排斥事件期間施用，如果這種事件確實發(fā)生。本發(fā)明還提供了抑制補體活性的藥物和免疫抑制劑在制備藥物或藥物包裝中的用途。這種藥物或藥物包裝可用于延長同種異體移植物在受者中的存活，特別是同種異體移植物的長期存活。在優(yōu)選的實施方案中，配制并制備藥物或藥物包裝以使它適于對同種異體移植物的受者長期施用，例如使用穩(wěn)定的制劑。在某些實施方案中，配制并制備藥物或藥物包裝以使它適于對同種異體移植物的受者并行施用抑制補體活性的藥物和免疫抑制藥物。在某些實施方案中，配制并制備藥物或藥物包裝以使它適于對同種異體移植物的受者連續(xù)(以任一次序)施用抑制補體活性的藥物和免疫抑制藥物。本發(fā)明的藥物包裝可包含抑制補體活性的藥物和至少一種免疫抑制劑。藥物包裝可進一步包含用于長期施用的標簽。藥物包裝也可包含用于患者、例如移植物的受者自我施用的標簽或用于移植物受者看護者的說明書。在某些實施方案中，藥物包裝中的藥物和試劑處于適于長期施用和/或自我施用的制劑或單獨制劑中。本發(fā)明也提供了凍干制劑和適于注射的制劑。某些實施方案提供了包含抑制補體活性的抗體和凍干保護劑的凍干抗體制劑。在優(yōu)選的實施方案中，抗體制劑適于長期施用，例如抗體制劑是穩(wěn)定的。替代實施方案提供了包含注射器的注射系統(tǒng)；注射器包含含有抗體的藥筒，所述抗體抑制補體活性且處于適于注射的制劑中。在本發(fā)明各個實施方案中使用的抗體優(yōu)選抑制末端補體或C5a的形成。在某些實施方案中，抑制末端補體或C5a形成的抗體是完整抗體或抗體片段。完整抗體或抗體片段可以是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。在某些實施方案中，完整抗體或抗體片段可抑制補體C5的斷裂。在某些實施方案中，抗體片段是Fab、F(ab，)2、Fv、結構域抗體或單鏈抗體。在優(yōu)選的實施方案中，所述抗體片段是培克珠單抗。在替代優(yōu)選的實施方案中，完整抗體是依庫珠單抗。在某些實施方案中，抑制補體活性的藥物如抗體以單位劑型存在，其可特別適于自我施用。類似地，本發(fā)明的免疫抑制劑也可以以單位劑型存在。本發(fā)明的配制產(chǎn)品可包括在容器內(nèi)，例如通常是管形瓶、藥筒、預填充注射器或一次性使用的(disposable)筆。例如本發(fā)明的注射系統(tǒng)也可使用給藥器，如在U.S.專利6，302，855中描述的給藥裝置。在某些實施方案中，依庫珠單抗以下列給藥方案遞送起初4周每7士2天經(jīng)由25至45分鐘IV輸注600mg，繼之以隨后7±2天第五劑量卯Omg，此后每14±2天卯Omg。施用可在25至45分鐘內(nèi)經(jīng)由IV輸注。在施用之前，依庫珠單抗可稀釋至5mg/mL的最終濃度。"穩(wěn)定"制劑是其中的藥物(例如抗體)或試劑在貯存下基本上保留其物理和化學穩(wěn)定性和整體性的制劑。測量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的各種分析技術在本領域可利用，且在PeptideandProteinDrugDelivery,247-301，VincentLeeEd.，MarcelDekker，Inc.,紐約，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.DrugDeliveryRev.10:29-90(1993)中綜述。穩(wěn)定性可在所選時段的所選溫度下測量。例如，在凍干和貯存后的聚集程度可用作蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的指示劑。例如，"穩(wěn)定"制劑可以是其中少于約10%且優(yōu)選少于約5%的蛋白質(zhì)以聚集體存在于制劑中的制劑。在其他的實施方案中，在凍干制劑的凍干和貯存后聚集體形成的任何增加可以檢測。例如，"穩(wěn)定"凍干制劑可以是這樣一種制劑其中當凍干制劑在2-8。C貯存至少一年時，其聚集體的增加少于約5%、優(yōu)選少于約3%。在其他實施方案中，蛋白質(zhì)制劑的穩(wěn)定性可^f吏用生物活性測定法測量。"復原"制劑是通過將凍干蛋白質(zhì)制劑溶解于稀釋劑中以使該蛋白質(zhì)^t于復原制劑中來制備的制劑。復原制劑適于對用目標蛋白質(zhì)治療的患者施用(例如胃腸外施用)，在本發(fā)明的某些實施方案中，該制劑可適于皮下施用。在某些實施方案中優(yōu)選等滲的復原制劑。"等滲"是指目標制劑具有基本上與Ajk液相同的滲透壓。等滲制劑通常具有約250至350mOsm的滲透壓。等滲性可例如使用蒸氣壓或冰凍型滲透壓計來測量。"凍干保護劑"是當與目標藥物(例如抗體)組合時顯著地預防或減少藥物(例如抗體)在凍干和隨后貯存下的化學和/或物理不穩(wěn)定性的分子。示例性凍干保護劑包括糖，如蔗糖或海藻糖；氨基酸，如谷氨酸單鈉或組氨酸；甲胺，如甜菜堿；易溶(lyotropic)鹽，如硫酸鎂；多元醇，如三元或更高元糖醇，例如丙三醇、赤蘚糖醇、甘油、阿糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露醇；丙二醇；聚乙二醇；Pluronics;及其組合。優(yōu)選的凍干保護劑是非還原糖，如海藻糖或蔗糖。凍干保護劑以"凍干保護量"添加至預凍干制劑，這意味著在凍干保護劑的凍干保護量存在下凍干藥物(例如抗體)后，藥物(例如抗體)在凍干和貯存下基本上保留其物理和化學穩(wěn)定性和整體性。本文的目標"稀釋劑，，是藥學上可接受的(施用至人是安全和非毒性的)且可用于制備復原制劑。示例性的稀釋劑包括無菌水、抑菌性注射用水(BWFI)、pH緩沖溶液(例如磷酸鹽緩沖鹽水)、無菌鹽水溶液、林格溶液或右旋糖'溶'液。例如，"防腐劑"是可添加至稀釋劑中以基本上減少復原制劑中細菌作用、因而有利于制備多可多次使用復原制劑的化合物?？赡艿姆栏瘎┑膶嵗然送榛谆S基銨、氯己雙銨、^L氯銨(其中烷基是長鏈化合物的氯化烷基千基二曱基銨的混合物)以及氯化芐乙氧銨。其他類型的防腐劑包括芳族醇如苯酚、丁醇和芐醇、對羥基苯甲酸烷基酯如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯、兒茶酚、間苯二酚、環(huán)己醇、3-戊醇和間甲酚。"填充劑"是添加質(zhì)量至凍干混合物且有助于凍干團塊物理結構(例如促進保持開孔結構的基本上均勻的凍干團塊的產(chǎn)生)的化合物。示例性的填充劑包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。因此，穩(wěn)定的凍干抗體制劑可使用凍干保護劑(優(yōu)選糖如蔗糖或海藻糖)來制備，其凍干制劑可復原以產(chǎn)生穩(wěn)定的復原制劑，其具有比預凍干制劑顯著更高(例如約2-40倍更高，優(yōu)選3-10倍更高，且最優(yōu)選3-6倍更高)的抗體濃度。當制劑用于皮下施用時，這種復原制劑的高蛋白濃度被認為特別有用。盡管在復原制劑中蛋白濃度非常高，但是復原制劑可以在2-8°C下至少約30天是穩(wěn)定的(即沒有顯示顯著或不可接受水平的蛋白質(zhì)的化學或物理不穩(wěn)定性)。參見U.S.專利6,821,515。在某些實施方案中，復原制劑是等滲的。當用包含防腐劑(如抑菌性注射用水，BWFI)的稀釋劑復原時，復原制劑可用作多次使用制劑。例如當受治療者患者需要頻繁施用藥物或抗體和/或試劑以治療慢性醫(yī)療病狀時，這種制劑是有用的。多次使用制劑的優(yōu)勢是它方便了患者的簡易使用、通過允許管形瓶內(nèi)含物的充分使用而減少浪費，并導致制造廠商的明顯成本節(jié)約，因為多個劑量,皮包裝在單個管形瓶中(較低的填充和裝載成本)。本發(fā)明也提供了制備制劑的方法，其包括下列步驟(a)凍干抗體和凍干保護劑的混合物；和(b)將步驟(a)的凍干混合物在稀釋劑中復原以使該復原制劑是等滲且穩(wěn)定的。本文也提供了一種制品(article)，其包括(a)容納抗體和凍干保護劑的凍干混合物的容器；和(b)用稀釋劑將凍干混合物復原至在復原制劑中的所需抗體濃度的說明書。該制品可進一步包含容納稀釋劑(例如包含芳香醇的抑菌性注射用水(BWFI))的第二容器。本發(fā)明的注射系統(tǒng)可使用如U，S.專利5，308，341中描述的藥物遞送筆。已開發(fā)藥物遞送筆以方便藥物的自我施用。本發(fā)明的藥物可以是抑制補體活性的藥物、例如對補體C5特異性的抗體和/或免疫抑制劑。一種藥物遞送筆包括管形瓶托座(holder)，其中容納胰島素或其他藥物的管形瓶。所述管形瓶托座是長形、通常管狀的結構，具有近端和遠端。管形瓶托座的遠端包括用于嚙合雙端針狀插管的固定裝置。近端也包括用于嚙合舍有驅(qū)動器和給藥設定裝置的筆身的固定裝置。用于現(xiàn)有技術管形瓶托座的一次性使用的含藥物管形瓶包括具有可刺穿彈性隔膜的遠端，其可被雙端針狀插管的一端刺穿。這種管形瓶的近端包括與管形瓶的圓柱壁銜接、可滑動放置的塞子。這種藥物遞送筆是通過將藥物管形瓶插入至管形瓶托座中來使用。然后筆身連接至管形瓶托座的近端。筆身包括用于指定通過筆遞送的藥物劑量的劑量設定裝置，和用于驅(qū)動管形瓶的塞子向遠端移動相應于所選劑量的距離的驅(qū)動裝置。筆的使用者將雙端針套管安裝至管形瓶托座的遠端以使針套管的近點刺穿管形瓶的隔膜。然后患者選擇劑量并操作筆以向遠端驅(qū)動塞子遞送所選劑量。劑量選擇裝置在所選劑量注射后回到零。然后患者移除并棄去針套管，將現(xiàn)有技術藥物遞送管保持在方便的位置用于隨后的所需藥物施用。在若干次這樣的藥物施用后，管形瓶的藥物逐漸耗盡。然后患者將管形瓶托座和筆身分離?？展苄纹靠梢瞥壢ァ？蓪⑿鹿苄纹坎迦胫凉苄纹客凶苄纹亢凸P身可如上所述重新組合并使用。因此，藥物遞送筆通常具有精確給藥和容易使用的驅(qū)動機構。劑量機構如可旋轉(zhuǎn)的旋鈕允許使用者精確調(diào)節(jié)通過筆從預包裝藥物管形瓶中注射的藥物量。為了注射藥物的劑量，使用者將針插入皮膚下，壓下旋鈕至其壓低的限度。所述筆可以是完全機喊的裝置或它可與電子線路組合以精確設定和/或指示注射至使用者的藥物劑量。參見U.S.專利6，192，891。本發(fā)明也提出了適于長期和/或自我施用藥物的控制釋放或延長釋放制劑。各種制劑可施用于需要藥物(例如本發(fā)明的抗體和至少一種免疫抑制劑)治療的患者(例如同種異體移植物的受者)，通過快速濃注的靜脈內(nèi)施用或通過在段時間內(nèi)連續(xù)輸注、通過肌內(nèi)、,內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、局部或^^途徑。在某些實施方案中，制劑通過皮下(即在皮膚下)施用至患者。為了這種目的，制劑可使用注射器注射。然而，其他施用制劑的裝置是可用的，如注射裝置(例如Inject-ease⑧和Genject⑧裝置)；注射筆(如GenPen);無針裝置(例如MediJector⑧和BioJector⑥)；和皮下貼(subcutaneouspatch)遞送系統(tǒng)。參考下列實施例描述了本方法和用途，這些實施例通過示例的方式來提供并不是用來以任何方式限制本發(fā)明。利用本領域公知的標準技術或下文明確描述的技術。本文使用下列縮寫ABMR,抗體介導的排斥；ACHR，加速性體液排斥；ACR，急性細胞排斥；AVR，急性血管排斥；CsA，環(huán)孢菌素；CyP，環(huán)磷酰胺；HAR，超急性排斥；MCP-1，單核細胞趨化蛋白1;MST，平均存活時間；POD，術后天數(shù)。實施例1方法動物和免疫抑制藥物選擇重量為25-30g的雄性成年C3H(H-2k)小鼠和BALB/c(H-2d)小鼠(JacksonLabs,BarHarbor,Maine)分別作為供者和受者。在接受免疫抑制劑的各組中，對受者注射CsA(15mg/kg/天，皮下(s.c),從第0天至終點排斥或直到第100天的每天)或CyP(40mg/kg/天，靜脈內(nèi)(i.v.),在第0天和第1天)或抗C5mAb(克隆BB5.1，AlexionPharmaceuticalsInc.,40mg/kg/天，腹膜內(nèi)(i.p.)，第0誦2天，然后每周兩次，0-60天)。將動物在常規(guī)條件下飼養(yǎng)于西安大略大學的實驗動物中心，并且依照由CanadianCouncilonAnimalCare建立的指導方針照料。Olfert等人，1993。皮膚預致敏:取自C3H供者的全層皮膚移植物被切成lxlci^的方塊，并在相同供者的心臟移植前一星期移植至BALB/c受者的胸背部。排斥定義為皮膚移植物的完全壞死。腹部和頸心臟移植皮膚預致敏后七天，通過將供者主動脈與受者主動脈、供者肺動脈與受者下腔靜脈吻合，將C3H小鼠心臟移植至預致敏BALB/c受者的腹部。在再移植的各組中，通過將供者主動脈與受者頸動脈、供者肺動脈與受者頸外靜脈(端-至-側)吻合，將從原始(naive)C3H小鼠或長期存活的預致敏BALB/c受者中獲得的第二心臟移植物移植至攜帶長期存活的第一腹部心臟移植物的受者的頸部區(qū)域。每天監(jiān)控心臟移植物直至排斥，除非另有說明，且排斥定義為搏動的完全停止。試驗組隨機將預致敏受者分成八組，每組由八只動物組成組1，未處理的小鼠；組2，用CsA處理的小鼠；組3,用CyP處理的小鼠；組4，用CsA加CyP處理的小鼠；組5，用抗C5mAb處理的小鼠；組6，用抗C5mAb加CsA處理的小鼠；組7，用抗C5mAb加CyP處理的小鼠；組8，用抗C5mAb組合CsA和CyP處理的小鼠。當心搏動不再可觸及或在POD100時，移除移植物用于常規(guī)組織學、免疫組織化學和蛋白印跡分析，收集血清樣品用于流式細胞術分析和補體溶血分析。另外放置五只動物，并于POD3(組1-5、7的MST)時在組6和組8中處死以允許在均一時間點比較。還在組8中于POD11、21、28和60收集血清樣品，用于檢測抗供者抗體水平和補體活性的連續(xù)變化。此外，當三重療法處理的預致敏受者攜帶第一心臟移植物達100天時，對它們再移植第二心臟。原始C3H心臟或來自另一個預致敏BALB/c受者的存活100天的C3H心臟用作第二心臟。每個再移植組中包括八只動物。移植物組織學將組織樣品在10%緩沖甲醛中固定。然后將樣品嵌入石蠟中，然后切片用于H&E染色。由病理學家用盲法檢查顯微切片的排斥嚴重性。移植物排斥的標準包括存在血管炎、血栓形成、出血和淋巴細胞浸潤。這些變化評分為0，沒有變化；1，極小變化；2，輕微變化；3，中度變4t;或4，明顯變化。免疫組織化學從固定于明膠包#的玻璃載玻片上、嵌在Tissue-TekO.C.T凝膠(OptimumCuttingTemperature,SkuraFinetek，Torrance,CA)中的組織樣品切割4微米切片，并使用EliteVectastainABC試劑盒(VectorLaboratoriesInc.,Burlingame，CA)、通過標準間接抗生物素蛋白-生物素免疫過氧化物酶染色法染色。分別用生物素綴合的大鼠抗小鼠CD4mAb(克隆YTS191.1.2,CedarlaneLaboratoriesLtd"Hornby,Ontario,加拿大)和生物素綴合的大鼠抗小鼠CD8mAb(克隆53-6/7，Pharmingen，F(xiàn)ranklinLakes,NJ)染色樣品的CD4+和CD8+細胞。通過用生物素綴合的大鼠抗小鼠Mac-lmAb(CedarlaneLaboratoriesLtd"Hornby,Ontario,加拿大)染色來檢測移植物內(nèi)單核細胞/巨噬細胞浸潤。使用生物素綴合的山羊抗小鼠IgG和山羊抗小鼠IgM(Cedarlane)檢測移植物中的小鼠IgG和IgM沉積。為了鑒定補體沉積，將切片用山羊抗C3或抗C5多克隆Abs(Quidd，SanDiego,CA)、生物素化的兔抗山羊IgG(VectorLaboratories)和HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白(ZymedLaboratories,SouthSanFrancisco,CA)連續(xù)培養(yǎng)。步驟間用磷酸鹽緩沖鹽水沖洗載玻片，在光學顯孩i鏡下檢查。略去初級抗體，進行陰性對照。在每個切片的五倍高倍視野下對免疫染色評分，進行五次獨立的試驗。根據(jù)染色強度，將免疫過氧化酶染色的切片從0至4+分級:0，陰性；l+,不明確(equivocal);2+，弱染色；3+，中等染色；和4+，非常強染色。流式細胞術通過FACScan流式細胞儀在受者血清中評價循環(huán)抗供者特異性IgG和IgM抗體(BectonDickinson,MountainView,CA)。Glotz等人，(1993);Tyan等人(1994)。簡言之，分離C3H小鼠脾細胞，在37°C與原始對照(na'i'vecontrol)和實驗組的血清培養(yǎng)30分鐘。為了對總IgG、IgGl、IgG2a、IgG2b和IgM染色，沖洗細胞，并與以下孵育對小鼠IgG的Fc部分具有特異性的FITC綴合的山羊抗體，或?qū)π∈驣gM的n鏈具有特異性的藻紅蛋白綴合的山羊抗體(JacksonlmmunoResearchLaboratories,WestGrove,PA)，或FITC綴合的山羊抗小鼠IgGl(CALTAGLaboratories,Burlingame，CA)或FITC綴合的山羊抗小鼠IgG2a(CALTAG)或FITC綴合的山羊抗小鼠IgG2b(CALTAG)。在4。C染色1小時后，用PBS沖洗細胞，以5xl0VmL重新懸浮，并通過流式細胞術分析平均通道熒光強度，其代表了抗體結合反應性。補體溶血測定將經(jīng)純化的抗C5mAb在GVB"緩沖液(明膠佛羅那緩沖鹽水0.1%明膠、141mMNaCl、0.5mMMgCl2、0.15mMCaCh和1.8mM巴比妥鈉)中連續(xù)稀釋兩倍(175-0.1嗎/ml)，并一式三份(50^1/孔)加至96孔板。將BALB/c小鼠血清用GVB"緩沖液稀釋至40%v/v并加至(S0nI/ml)相同96孔板的^阡，以使各孔的BALB/c小鼠血清的最終濃度為20%。然后將板在室溫孵育約30分鐘，同時制備雞紅細胞。雞紅細胞用GVB2+緩沖液沖洗5xlml，再懸浮至在GVB"中5xl(T/ml的最終濃度。4毫升雞紅細胞通過添力口抗雞RBC多克隆抗體(IntercellTechnologies,Hopewell,NJ，0.1。/。v/v)致敏，將細胞在4。C孵育15分鐘，伴頻繁渦旋。然后將細胞用GVB"洗滌2xlml，再懸浮至在GVB"中2.4ml最終體積。將雞紅細胞(30^11/孔，2.5xl(^細胞)添加至如上所述含有血清和抗C5mAb的板中，充分混合，在37。C孵育30分鐘。然后將板在1000xg離心2分鐘，將85pl上清液轉(zhuǎn)移至新96孔微量滴定板。使用微板讀數(shù)器在OD415nm對板讀數(shù)，使用下式確定溶血百分比a,(OD樣品)一(ODGVB2+對照)%溶血=100x~~~_________——-_____(OD100。/。溶解的對照)一(ODGVB2+對照)其中添加含有0.1%NP-40的100nlGVB2+至如上述制備的30fig/ml雞紅細胞，獲得100%溶解的對照。蛋白印跡分析于4。C在RIPA溶解緩沖液中以10秒間隔進行冰凍心臟樣品超聲達1分鐘(SantaCruzBiotechnology,Inc.),然后于4°C以13,000rpm^L量離心10分鐘。使用清潔劑相容的蛋白測定試劑盒(BIO-RAD)，立即對澄清的上清液一式三份定量蛋白質(zhì)含量。心臟溶解產(chǎn)物(10pg蛋白質(zhì)/孔)通過NuPAGE、4-12%梯度Bis-Tris凝膠和MES緩沖系統(tǒng)(Invitrogen)分離，使用半干燥轉(zhuǎn)移裝置(BIO-RAD)轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜(0.45nm孔徑；Invitrogen)。以正確的分子量適當?shù)厍懈钅ひ栽试S產(chǎn)生印記，每個印跡具有兩種不同的初級抗體，以使每個印跡暴露于試驗抗體和內(nèi)部對照抗體以確保相等的樣品負載。包括抗Bcl-2(N-19)兔多克隆血清(SantaCruzBiotechnology,Inc.)和抗Bcl-XS/L(M-125)兔多克隆血清(SantaCruzBiotechnology,Inc.)的試驗初級抗體用于檢測移植物內(nèi)Bcl-2和Bcl-xl蛋白質(zhì)的表達。抗集鈣蛋白兔多克隆血清(Calbiochem)用作內(nèi)部對照初級抗體(Kobayashi等人，1999)。如先前描述(Arp等人，1996)，通過將經(jīng)洗滌、孵育的印跡暴露于與辣根過氧化物酶綴合的多克隆山羊抗兔IgG部分(HRP;RocheLaboratories),然后通過暴露適當顯色以增強HRP綴合的抗體(RocheLaboratories)的化學發(fā)光，進行初級抗體結合的檢測。統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)以平均士SD報道。使用rank-log檢驗，比較試驗組間同種異體移植物的存活。使用Mann-WhitneyU試驗分析組織學和免疫組織學發(fā)現(xiàn)。使用單向ANOVA分析流式細胞術數(shù)據(jù)和蛋白印跡數(shù)據(jù)。p值少于0.05的差異視為顯著。實施例2用C3H供者皮膚移植物預致敏在BALB/c受者的心臟同種異體移植物中誘導抗體介導的ACHR為了開發(fā)適合的模擬臨床預致敏患者并研究ABMR的小動物模型，通過預致敏小鼠受者，已經(jīng)開發(fā)了一種新的、完全MHC錯配的小鼠ABMR模型。在這種模型中，在相同供者的心臟移植之前一星期，將BALB/c受者用C3H供者皮膚移植物預致敏。供者皮膚預致敏后七天，在預致敏BALB/c受者中，抗供者IgG但不是IgM抗體的血清水平顯著提高且達到峰水平(圖IA)。然后在這些高致敏的受者中進行相同供者的心臟移植。未經(jīng)免疫抑制，C3H心臟移植物通過ACHR在第3.1±0.4天迅速排斥，特征是嚴重的血栓形成、出血和梗塞(圖1B-a)。相比之下，在未致敏BALB/c受者中的相同心臟移植物(平均存活時間MST為8.2±0.8天)在術后天數(shù)(POD)3時顯示正常組織學(圖1B-b)。當與同一天未致敏BALB/c受者比較時，預致敏動物的心臟移植物揭示了大量的IgG抗體和補體(C3和C5)沉積，但是極小的CD4+和CD8+細胞浸潤(表1)。此外，在POD3時預致敏受者的循環(huán)抗供者IgG水平顯著高于接受心臟移植物的未致敏相同受者(PO.Ol，圖1C)。然而，抗供者IgM在循環(huán)(圖1C)和心臟移植物(表1)中均維持非常低的水平，它顯示未致敏和致敏受者之間沒有顯著差異。而且，在未經(jīng)處理的預致敏和未致敏心臟受者中顯示正常水平的補體溶血活性(圖1D)。這些數(shù)據(jù)表明這是研究補體在發(fā)病機理中起重要作用的預致敏受者中的ABMR的理想移植;f莫型。POD3時未致敏和預致敏BALB/c受者中C3H心臟同種異體移植物的免疫<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>免疫過氧化物酶染色的分級0，陰性；l+，不明確；2+,弱；3+，中等；4+，強?？笴5mAb與CsA和CyP的組合在預致敏小鼠受者中預防ABMR并實現(xiàn)無限期同種異體移植物存活已經(jīng)顯示補體在ABMR中起重要作用。然而，在高致敏受者中在C5水平功能性阻斷末端補體級聯(lián)反應的抑制效應是未知的。在本文提出的研究中，預致敏模型用于研究抗C5mAb單獨或與CsA和/或CyP組合在預防ABMR中的功效。如圖2A所示，用CsA或CyP或兩種藥物組合的處理并未預防ABMR，移植物分別在3.0±0.0天、3.3±0.5天和3.5±0.6天排斥，伴有ACHR的典型病理學特征，包括血管內(nèi)血栓形成和間質(zhì)出血(圖2B-b、c、d)，這與未處理預致敏BALB/c受者的心臟移植物難以分辨(圖2B-a)?？笴5單一療法或與CyP組合不能提高移植物存活，心臟移植物分別在3.5±0.6天和3.2±0.4天被ACHR(圖2B-e、f)排斥(圖2A)。盡管抗C5mAb和CsA的組合療法，即能誘導未致敏動物長期心臟同種異體移植物存活的方案，在一定限度內(nèi)延長了移植物在這種預致敏模型中的存活，但是心臟移植物在11.9±1.8天被嚴重體液排斥所排斥(圖2A)，伴有血管炎、血栓形成、出血和輕微細胞浸潤(圖2B-g)。相比之下，抗C5mAb與CsA和CyP組合的三重療法在預致敏動物中實現(xiàn)超過100天的無限期心臟移植物存活(圖2A)(P<0.01，相對于未處理動物或用任一單一療法或兩種藥物組合處理的動物)，而沒有排斥跡象(圖2B-h)。在這種預致敏小鼠模型中，如表2所示，在3天內(nèi)排斥其心臟移植物的受者中觀察到只有少量移植物內(nèi)CD4+和CD8+細胞浸潤。然而，如果心臟移植物在抗C5mAb加CsA處理受者排斥時存活得更長(PODll)以及在三重療法處理受者移植物存活早期(例如PODll)，那么這些T細胞的數(shù)目略微增加。此外，在三重療法組中用CsA連續(xù)處理，POD60和100時在長期存活心臟移植物中CD4+和CD8+細胞浸潤得到抑制。此外，在未處理和CsA、CyP或CsA加CyP處理的動物中，發(fā)現(xiàn)中度的移植物內(nèi)Mac-l+細胞浸潤，包括單核細胞和巨噬細胞，而這些細胞的浸潤在抗C5mAb處理的動物中顯著減少(表2)。這些結果表明功能性阻斷抗C5mAb使得免疫抑制劑能夠發(fā)揮用途和功效，從而在預致敏受者中預防ABMR并實現(xiàn)無限期心臟移植物存活。<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>分級0，陰性；l+，不明確；2+，弱；3+,中等；4+，強?？笴5mAb在接受心臟同種異體移植物的預致敏受者中完全抑制總補體溶血活性和局部C5沉積之前顯示抗C5mAb阻斷補體蛋白質(zhì)C5斷裂成促炎癥分子C5a和C5b-9(Kxoshus等人，1995)，并完全且始終阻斷小鼠的末端補體活性(Wang等人，19")。在目前研究中，末端補體活性通過評價受者小鼠血清溶解抗體預致敏的雞紅細胞的能力來測量，并在相同時間點比較(POD3)。用CsA或CyP或兩種藥物組合處理小鼠對末端補體活性沒有影響，而用單獨的抗C5mAb或其與CsA或/和CyP的組合處理則完全抑制這種活性(圖3;P<0.01，相對于原始和未處理動物，以及CsA、CyP或CsA加CyP處理的動物)。此外，在幾個早期時間點從抗C5mAb處理的動物獲得的血清顯示類似降低的溶血活性，這表明血清末端補體在整個治療期,皮抑制。而且，在抗C5mAb處理的預致敏受者中而非在未處理或CsA、CyP和CsA加CyP處理的預致敏動物中，心臟移植物中的局部C5沉積凈皮完全防止(表2)。如所預測，抗C5mAb處理沒有防止在移植物中的C3沉積(表2)。這些結果表明抗C5療法完全阻斷了高致敏受者心臟同種異體移植后的總補體活性。預致敏動物中長期存活的心臟移植物耐受低水平抗供者抗體和補體存在下的體液損傷—一適應狀態(tài)為了進一步研究抗C5mAb在體液排斥中的作用，在不同組中通過流式細胞術測量了受者血清中抗供者抗體水平，使用免疫染色技術測定移植物內(nèi)的抗體沉積。圖4A顯示在POD3時未處理預致敏BALB/c受者具有高水平的循環(huán)抗供者IgG抗體。當接受單一療法或CsA和/或CyP兩種藥物組合的預致敏受者部分下調(diào)循環(huán)抗供者IgG水平時，用單獨的抗C5mAb或其與CsA或CyP組合處理沒有進一步影響同一天的抗供者抗體水平。相比之下，使用抗C5mAb、CsA和CyP的三重療法，高水平的循環(huán)抗供者IgG逐漸,皮下調(diào)并在POD60時達到低水平，此后保持這種水平直至第100天(圖4B)。與不同處理組中循環(huán)抗體的水平類似，表2顯示強烈的抗小鼠IgG沉積存在于未處理或用單一療法或兩種藥物組合療法處理的預致敏動物的快速排斥的心臟移植物中。有趣的是，在三重療法下，POD100時IgG抗體沉積在長期存活心臟移植物中逐漸減弱至輕微水平(圖4C-a，表2)。在這種模型中，IgM在處理或為處理預致敏受者的循環(huán)中(圖4A，B)或移植的心臟移植物中(圖4C-b，表2)保持非常低的水平。此外，抗C5mAb處理將補體活性消除至不可檢測水平直至第60天，接著在接受三重療法的預致敏小鼠受者中中斷抗C5療法后，于POD100時漸進恢復至預消耗水平(圖4D)。此外，在100天存活的預致敏動物中也檢測到移植物內(nèi)C5沉積(表2)。這些數(shù)據(jù)證明盡管存在抗移植物抗體和補體激活，進行中的移植適應在三重療法處理的預致敏受者中發(fā)生?？笴5mAb與CsA和CyP的組合在具有已適應移植物的受者中減少了IgGl/IgG2a比率并導致IgG亞類至IgG2b的轉(zhuǎn)換為了檢測是否基于抗C5mAb的三重療法可誘導可與適應相關的IgG亞類的轉(zhuǎn)換，在未處理受者和具有已適應心臟移植物受者之間比較了抗供者IgG亞類IgGl、IgG2a和IgG2b的血清水平。未處理受者的血清包含占優(yōu)勢的IgGl同種型，這通過IgGl/IgG2a的高比率所示(圖5A)。相比之下，在攜帶已適應移植物的受者中觀察到IgGl/IgG2a比率顯著下降(圖5A，PO.Ol)。此外，與具有排斥移植物的相同受者比較，具有已適應心臟移植物的預致敏受者顯示抗供者IgG2b水平增加(圖5B，P<0.01)。此外，在用單一療法或兩種藥物組合處理的受者中，IgG同種型的才莫式與未處理動物難以分辨。這些數(shù)據(jù)表明抗供者IgGl同種型可與移植物排斥相關，而抗供者IgG2b亞類的產(chǎn)生可作為保護性抗體起作用，并且在誘導適應中起重要作用?？笴5mAb與CsA和CyP的組合誘導移植物內(nèi)Bcl-2和Bcl-xl在高致敏小鼠受者中的表達為了確定在該模型中保護性蛋白的移植物內(nèi)表達和對體液損傷的移植物抵抗之間是否存在因果關系，使用蛋白印跡分析來檢測高致敏小鼠受者的心臟移植物組織中的目標蛋白質(zhì)。于POD100時發(fā)現(xiàn)長期存活心臟移植物表達高水平的Bcl-2和Bcl-xl蛋白質(zhì)，并且早在心臟移植后l2天，在接受基于抗C5mAb的三重療法的高致敏受者中檢測到這些蛋白質(zhì)(圖6)。相比之下，在未處理動物或用單一療法或兩種藥物組合療法處理的動物的心臟移植物上沒有Bd-2和Bcl-xl蛋白表達(圖6)。該結果提示在無限期存活動物中對體液損傷的移植物抵抗與該預致敏模型中Bcl-2和Bcl-xl蛋白提供的保護相關。具有適應中的第一心臟移植物的預致敏受者接受第二已適應的心臟移植物，但是排斥相同供者的第二原始心臟移植物已適應移植物抵抗排斥的能力還沒有在其中原始移植物在同種異體移植后經(jīng)歷排斥的病理生理學條件下測定。在這種模型中，為了確定是否具有適應中的第一心臟移植物的預致敏受者將接受第二已適應的移植物但排斥第二原始移植物，進行了再移植試驗。在已適應的C3H心臟移植物已存活至100天后，在所述時間點在用基于抗C5mAb的三重療法處理的預致敏BALB/c受者中檢測到低水平的同種抗體(圖4B)且補體活性已回到預處理水平(圖4D)，使這些受者接受第二心臟移植物。具體而言，將原始的(圖7A)或來自另一個預致敏BALB/c受者的已適應100天的C3H心臟(圖7B)移植至攜帶適應中的第一C3H心臟的預致敏受者的頸部中。這些受者在6.6±1.1天以嚴重AVR(圖8B-a)排斥第二原始心臟(圖8A)，而第一個心臟繼續(xù)存活。相比之下，當已經(jīng)在不同預致敏小鼠中存活100天的已適應的心臟用作第二移植物時，這些移植物被攜帶適應中的第一心臟移植物的預致敏受者接受(圖8A)。在第二次移植后90天，在那些已適應的第二心臟移植物中沒有排斥征兆(圖8B-b)。這些數(shù)據(jù)表明已適應的移植物對通常介導這些預致敏受者的同種異體移植物排斥的抗供者抗體和補體的效應變得有耐受性。此外，已適應移植物的宿主排斥新移植物的事實表明適應包括對移植物的改變。用CsA處理的預致敏受者排斥已適應的心臟移植物進行另一再移植以確定是否在該預致敏模型中的適應是由移植物和/或受者的改變引起。具體而言，在C3H心臟移植物已在預致敏BALB/c小鼠中適應100天后，然后將已適應的心臟移植物再移植至用單獨CsA處理的第二個預致敏BALB/c受者中(圖7C)，這是能預防細胞排斥但不能預防新鮮C3H心臟在預致敏受者中加速性體液排斥的療法。已適應的C3H心臟移植物在CsA處理的預致敏BALB/c受者中被迅速排斥。再移植后，已適應的心臟移植物的病理學從正常(圖9A)改變至具有大量間質(zhì)出血但很少細胞浸潤的嚴重ACHR(圖9B)。此外，在這些接受已適應的C3H心的受者中，高水平的抗供者IgG和正常水平的補體溶血活性與接受原始C3H心臟的CsA處理的預致敏受者的那些類似。該結果進一步表明由基于抗C5mAb的三重療法誘導的適應可起源于涉及不僅移植物而且受者的改變的才幾理。實施例3心臟移植模型中的急性血管排斥進行了試驗來確定是否包括末端補體形成抑制劑將減弱急性血管排斥存活。在這組試驗中，抗C5單克隆抗體與環(huán)孢菌素組合使用。所用模型是從C3H小鼠至BALB/c小鼠的同種異體移植物異位心臟移植。該才莫型是嚴格的急性血管排斥模型，其中C3H和BALB/c小鼠是強MHC錯配的。如Wang等人(2003)所述進行移植和其他方法。異位心臟移植如先前Wang等人(2003)所述進行腹部內(nèi)異位心臟移植。簡言之，對供者進行正中胸骨切開術，通過下腔靜脈和主動脈用l.Oml冷肝素化林格乳酸鹽溶液緩慢地原位灌注心臟移植物，然后結扎并分開上腔靜脈和肺靜脈。橫切升主動脈和肺動脈，從供者中移除移植物。然后使用11-0尼龍縫線以端-至-側吻合在供者肺動脈與受者下腔靜脈以及供者主動脈和受者腹主動脈之間進行移植物的血管再通。通過直接腹部觸診，每天監(jiān)控移植心臟的跳動。脈動的程度評分為A，搏動強烈；B，脈動強度顯著下降；或C，心臟搏動完全停止。當心臟搏動不再可觸知時，除去移植物用于常規(guī)組織學檢查。在某些情況中，將其中移植物仍起作用的小鼠處死以進行組織學檢查。結果將小鼠(重量25-30g的雄性8-12周齡小鼠)分成六個試驗組，每組六至八只小鼠。在第0天時進行移植。在終點(終點是移植物衰竭)或在移植物衰竭前處死小鼠的一些情況下檢查組織學改變。從先前研究已知所施用BB5.1劑量(40mg/kg體重，每周三次)，以完全抑制末端補體活性。組l'(對照)-小鼠在第-l、0、l和2天腹膜內(nèi)施用0.75mL鹽水。隨后這些小鼠用0.75mL鹽水腹膜內(nèi)處理，每周三次(星期一、星期三、星期五)直至終點。組2'(單獨環(huán)孢菌素A)-小鼠每天皮下施用15mg/kg體重的環(huán)孢菌素A，從第O天開始(移植當天)直至終點。組3'(單獨抗補體抗體)-小鼠在第-1、0、1和2天以40mg/kg體重腹膜內(nèi)施用抗小鼠C5抗體BB5.1(Frei等人，1987)，然后以40mg/kg體重每周三次施用(星期一、星期三、星期五)直至終點。組4，(抗補體抗體直至移植后第14天+環(huán)孢菌素A)-小鼠在第-1天至第14天以40mg/kg體重靜脈內(nèi)施用抗小鼠C5抗體BB5.1,同時每天以15mg/kg體重施用環(huán)孢菌素A，從第0天開始直至終點。注意這與其他組不同，因為BB5.1是靜脈內(nèi)且每天施用。組5，(抗補體抗體直至移植后第28天+環(huán)孢菌素A)-小鼠在第-1、0、1和2天以40mg/kg體重腹膜內(nèi)施用抗小鼠C5抗體BB5.1，然后以40mg/kg體重每周三次施用(星期一、星期三、星期五)直至第28天，同時每天以15mg/kg體重施用環(huán)孢菌素A，從第0天開始直至終點。組6'(抗補體抗體長期直至第100天+環(huán)孢菌素)-小鼠在第-1、0、1和2天以40mg/kg體重腹膜內(nèi)施用抗小鼠C5抗體BB5.1，然后以40mg/kg體重每周三次施用(星期一、星期三、星期五)直至第100天，同時每天以15mg/kg體重施用環(huán)孢菌素A，從第0天開始直至第100天。該試驗的結果在表3和4中所示。表3顯示移植物的存活時間。表4列出組織學評分。<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>顯。N/A-不可得到。*Vasc-血管炎；Infar-梗塞；Lymph-淋巴細胞浸潤；Throm-血栓形成；Hemo-出血；Fibrin-纖維蛋白沉積；PMN-多形核細胞浸潤結果顯示了除免疫抑制劑外使用補體抑制藥物的協(xié)同效應。在未處理小鼠中，移植物在約8天排斥。長期每天使用單獨的免疫抑制劑環(huán)孢菌素A導致移植物存活增加直至約移植后15天。使用抗C5抗體BB5.1抑制末端補體生成對其本身沒有任何影響，如在對照組中移植物排斥在移植后第8天發(fā)生(組l')。BB5.1通過移植后第28天加環(huán)孢菌素A的組合顯示了協(xié)同效應，移植物存活延長直至約第80天。更令人驚奇的結果是組5'的結果，其中移植后BB5，1和環(huán)孢菌素A各自長期施用。在這種情況下，移植物存活超過100天(目前可用的盡可能多的數(shù)據(jù))。此外，表4中所示的組織學結果表明同時施用BB5.1和環(huán)孢菌素A保護了移植物不改變，比單獨BB5.1或環(huán)孢菌素A更成功，且長期施用BB5.1和環(huán)孢菌素A保護移植物以使其甚至在移植后第100天在植入的心臟中沒有觀察到組織學改變。在這些模型中100天的存活時間被視為是最佳標準。在這種模型中存活100天凈皮認為表明了同種異體移植物將無限期存活。當BB5.1施用在第28天后停止時，移植物受到保護，但是大約第80天時，它們確實開始顯示一些極小至輕微的組織學變化，此時移植物衰竭發(fā)生。組4'小鼠的處理不同，因為它們每天靜脈內(nèi)施用BB5.1。這些動物變得患病，顯示體重減輕和尿潴留，并在移植的心臟仍跳動但它們的功能已經(jīng)下降時處死。這是研究的第一組小鼠，但為何觀察到這些不良作用并不清楚。當以每周三次的方案內(nèi)施用BB5.1時，未觀察到這些不良作用。如以下實施例4中所述，經(jīng)由腹膜內(nèi)途徑每天施用BB5.1不會導致不良作用。而且，靜脈內(nèi)施用并不必然是這些動物患病的原因。在PNH的研究中，已經(jīng)成功地靜脈內(nèi)施用依庫珠單抗(BB5.1的人等效抗體，因為其結合于人C5)，而對人沒有不良作用(Hillmen等人，2004)。補體抑制劑可通過除靜脈內(nèi)和腹膜內(nèi)之外的其他途徑施用，其中所有這些途徑為本領域技術人員公知。實施例4在預致敏心臟移植模型中的加速排斥進行類似于實施例3的第二組試驗,但是受者小鼠對供者器官預致敏。在這些試驗中，通過預先移植皮膚移植物引起預致敏。通常，預致敏不僅可因為已接受早期同種異體移植物發(fā)生，而且可因已接受多次血液輸注或在已妊娠的婦女中引起。除這類預致敏方法之外，ABO錯配的同種異體移植物將由于預先形成的ABO抗原的抗體而被迅速攻擊并排斥，除非采取步驟來預防這種攻擊。對這些研究中的一些小鼠除BB5.1和/或環(huán)孢菌素A之外施用環(huán)磷酰胺。對于這些試驗，在從相同供者心臟移植之前一周，用C3H皮膚移植物使BALB/c受者小鼠預致敏(使用Pruitt和Bollinger,1991的方法)。該模型設計用于模擬尤其是與加速性體液排斥相關的人預致敏移植。將受者小鼠分成八組，每組六至八只小鼠。處理如下。組l"(對照)-小鼠(重量25-30g的雄性8-12周齡小鼠)每天腹膜內(nèi)施用0.75mL鹽水，從第-1天開始并持續(xù)直至終點(移植排斥)。組2"(單獨環(huán)孢菌素A)-小鼠以15mg/kg體重的劑量皮下施用環(huán)孢菌素A，從第0天開始(移植當天)直至終點。組3"(單獨BB5.1)-小鼠每天以40mg/kg體重的劑量^M內(nèi)遞送施用抗小鼠補體單克隆抗體BB5.1，從第-1天開始并持續(xù)直至終點。組4"(單獨環(huán)磷酰胺)-小鼠在第0天和1天以40mg/kg體重的劑量靜脈內(nèi)施用環(huán)磷酰胺。組5"(BB5.1加環(huán)孢菌素A)-小鼠每天以40mg/kg體重的劑量M^內(nèi)施用BB5.1,從第-1天開始并持續(xù)直至終點。這些小鼠每天以15mg/kg體重的劑量皮下另外施用環(huán)孢菌素A，從第0天開始并持續(xù)直至終點。組6"(BB5.1加環(huán)磷酰胺)一小鼠每天以40mg/kg體重的劑量腹膜內(nèi)施用BB5.1，從第-1天開始并持續(xù)直至終點。這些小鼠另外在第0天和1天以40mg/kg體重的劑量靜脈內(nèi)施用環(huán)礴酰胺。組7"(環(huán)孢菌素A加環(huán)磷酰胺)-小鼠每天以15mg/kg體重的劑量皮下施用環(huán)孢菌素A，從第0天直至終點。這些小鼠另外在第0天和1天以40mg/kg體重的劑量靜脈內(nèi)額外施用環(huán)磷酰胺。組8"(BB5.1加環(huán)孢菌素A加環(huán)磷酰胺)-小鼠每天以40mg/kg體重的劑量腹膜內(nèi)施用BB5.1,從第-1天開始并持續(xù)直至第100天。同時這些小鼠每天以l5mg/kg體重的劑量皮下施用環(huán)孢菌素A，從第0天直至第100天。這些小鼠另外在第0天和1天以40mg/kg體重的劑量靜脈內(nèi)施用環(huán)磷酰胺。該組的兩只小鼠在第60天處死用于組織學研究(還未發(fā)生排斥)，直至第100天四只剩余的小鼠還未排斥它們的移植物。另外，測試了對照組小鼠，其未經(jīng)預致敏且僅如組l"接受鹽水處理。這些試驗的結果如表5和表6所示。表5列出移植物的存活時間，表6總結組織學結果。同種異體移植物存活<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>中值評分0-正常；1-變化極??；2-變化輕微；3-變化中度；4-變化明顯。N/A-不可得到。AVasc-血管炎；Infar-梗塞；Lymph-淋巴細胞浸潤；Throm-血栓形成；Hemo-出血；Fibrin-纖維蛋白沉積；PMN-多形核細胞浸潤表5所示的結果表明了預致敏小鼠模型與如實施例3所用的未預致敏小鼠模型之間的差異。該結果表明不存在預致敏時，在沒有用任何藥物處理時移植物在約8天內(nèi)排斥。將動物預致敏則引起更快速的排斥，在沒有任何藥物處理時，預致敏動物的移植物在約3天內(nèi)排斥。用單獨的BB5.1、環(huán)孢菌素A或環(huán)磷酰胺處理對移植物存活沒有效應，在每一這些動物組中移植物在約3-4天內(nèi)排斥。BB5.1和環(huán)孢菌素A的組合顯示了一些效應，排斥在約第12天發(fā)生。BB5.1和環(huán)磷酰胺的組合顯示沒有保護性效應，排斥在約第3天發(fā)生。類似地，環(huán)孢菌素A和環(huán)磷酰胺的組合基本上沒有保護性效應，排斥在第3-4天發(fā)生。非常令人驚奇的是，所有三種藥物的組合(長期施用BB5.1和環(huán)孢菌素加上在移植時施用環(huán)磷酰胺)顯示了高度協(xié)同效應，所有小鼠存活超過100天。同樣，在該模型中存活100天被認為是最佳標準且假設是無限期存活。這些結果以;^表6中所示的組織學結果表明補體抑制劑和免疫抑制劑如環(huán)孢菌素A的長期組合處理在治療預致敏小鼠中導致加速性排斥的少許減弱。另外用環(huán)磷酰胺在移植時及移植后第l天處理這些動物導致存活更長的時間，至少在第100天沒有觀察到排斥。實施例5預致敏BALB/c受者中C3H腎同種異體移植屈服于ABMR開發(fā)了一種新的小鼠ABMR模型，其具有準確^=莫擬高預致敏患者中腎同種異體移植臨床環(huán)境的特征。受者BALB/c小鼠用完全同種異體的C3H供者皮膚移植物進行預致敏。預致敏后，循環(huán)抗供者IgG水平顯著提高，在皮膚移植后七天達到峰水平(圖IOA)。此時，將來自相同供者系(C3H)的腎同種異體移植物移植至預致敏受者；這些移植物在所有動物中于第8.5±1.3天快速排斥(圖IIA)。被排斥的移植物顯示與加速性體液排斥一致的組織學特征，包括l)間質(zhì)中血管炎、出血和水腫以及腎小球和腎小管壞死的跡象(圖10B-a);2)廣泛的移植物內(nèi)IgG(圖10B-c)、C3(圖10B-e)和C5(圖10B-g)沉積；3)術后同一天評價時，循環(huán)抗供者IgG水平比未預致敏受者中觀察到的顯著更高(pO.01;圖10C);4)補體活性的正常水平(圖IOD)和5)大量的Mac-l+細胞、包括單核細胞和巨噬細胞的移植物內(nèi)浸潤(圖10B-i)。相比之下，在第55.2士5.6天內(nèi)未預致敏BALB/c小鼠排斥C3H腎移植物，在POD8時顯示正常移植物組織學(圖10B-b)，沒有可檢測的IgG沉積(圖10B-d)、很少或沒有Mac-l+細胞浸潤(圖10B-j)以及僅有輕微的C3(圖10B-f)和C5(圖10B-h)沉積。用供者皮膚預致敏并未增加循環(huán)抗供者IgM水平(圖IOC)或血清補體活性(圖IOD)。這些數(shù)據(jù)提示這種新型腎同種異體移植物模型提供了研究補體在高預致敏受者的抗體介導的腎同種異體移植物排斥中的潛在作用的極好工具?？笴5mAb與CsA和LF的組合在預致敏小鼠受者中預防ABMR并且實現(xiàn)無限期腎同種異體移植物存活在開發(fā)該模型期間進行的初始試驗評價了CsA和環(huán)砩酰胺(CyP)在延長腎移植物存活中的免疫抑制效應。然而，CyP處理與明顯的腎毒性相關，阻止了進一步評價(數(shù)據(jù)未顯示)。用LF簡短處理與腎毒性不相關，進一步的模型構建使用這種試劑作為試驗性免疫抑制方案的一部分。對于是否單獨或與CsA和短期LF處理組合的抗C5mAb能夠防止接受腎同種異體移植物的預致敏小鼠受者的ABMR進行了評價。如圖11A所示，在用CsA或LF單一療法或用兩種藥物組合處理的預致敏受者中的移植物分別在第9.3士2.5天、6.0±1.0天和11.7±2.1天被排斥。此外，抗C5mAb單一療法或抗C5與CsA或LF的組合不能提高移植物存活，排斥分別在第7.0±1.0天、7.0±1.0天和8.3±3.2天發(fā)生(圖IIA)。這些被排斥的腎移植物也產(chǎn)生了典型的抗體介導的體液排斥的病理學特征(數(shù)據(jù)未顯示)，排斥模式事實上與在未處理預致敏BALB/c受者中觀察到的相同(圖10B-a)。相比之下，由抗C5mAb、CsA和短期LF處理組成的三重療法有效地防止了移植物排斥，并實現(xiàn)了預致敏動物中>100天的無限期腎同種異體移植物存活(圖11A)。進一步，長期存活的腎移植物驗證了正常腎功能，如血清肌酸酐水平在正常范圍內(nèi)所示(圖11B;p<0.01，相對于與未處理小鼠或用CsA或LF單一療法或兩種藥物組合處理的那些小鼠)。在POD100時，在三重療法處理的預致敏受者中的腎同種異體移植物具有正常的組織學(圖llC-a),沒有可檢測的CD4+、CD8+或Mac-l+細胞浸潤(圖11C-b、c、d)。此外，大量的移植物內(nèi)Mac-l+細胞浸潤在未處理和CsA、LF或CsA加LF處理的動物中發(fā)現(xiàn)，而這些細胞的浸潤在抗C5mAb處理的動物中顯著減少(表7)。這些結果表明用功能性阻斷抗C5mAb以及CsA和短期LF處理可防止高致敏受者中的ABMR并允許無限期腎同種異體移植物存活?？笴5mAb處理完全抑制了接受腎同種異體移植物的預致敏受者中的末端補體活性和局部C5沉積為了確定抗C5mAb處理在該模型中的全身和局部效力，如通過體外血清溶血測定法測量，評價了在相同時間點時(POD7)不同治療組的小鼠中的補體活性。用CsA或LF或兩種藥物組合處理小鼠，對末端補體活性沒有抑制效應，然而用單獨抗C5mAb或其與CsA和/或LF的組合處理則完全抑制了血清補體活性(pO.Ol，相對于原始小鼠、未處理預致敏小鼠或CsA、LF或CsA加LF處理的動物)(圖12)。在POD60停止處理后，到POD100時補體溶血活性恢復至正常水平(圖12)。此外，局部(移植物內(nèi))C5沉積在抗C5mAb處理的預致敏受者中被完全阻止，但是在未處理或CsA、LF以及CsA加LF處理的預致敏動物中明顯(表7)。如所預測，抗C5mAb療法并未阻止移植物內(nèi)C3沉積(表7)。這些結果表明抗C5mAb療法完全阻斷了末端補體活性，但是保存預致敏受者同種異體腎移植后的早期補體組份。長期存活的腎移植物通過適應抵抗預致敏受者中的體液損傷為了研究是否這些腎移植物的長期存活與適應的M相關，測量了排斥時不同處理組小鼠的循環(huán)抗供者抗體水平、血清補體活性和移植物內(nèi)抗體與補體沉積。未處理的、預致敏的BALB/c受者產(chǎn)生高水平的循環(huán)抗供者IgG抗體(圖13A),其在用單獨CsA或LF或其組合處理后部分降低。將抗C5添加至CsA或LF單一療法并沒有進一步減弱抗供者抗體水平。在抗C5mAb、CsA和LF的三重療法下，循環(huán)抗供者IgG水平被顯著抑制，并且在PODIOO時保持低水平(Ap〈0.01，相對于未處理預致敏動物或用單一療法或兩種藥物組合處理的那些動物)。然而，這種低抗體水平仍高于原始動物0^pO.05，相對于用三重療法處理的預致敏動物)。與處理對循環(huán)抗供者抗體水平的效應一致，在未處理預致敏受者或接受CsA或LF單一療法或兩種藥物組合的那些受者中觀察到顯著的移植物內(nèi)IgG沉積(表7)。有趣的是，在POD100時，三重療法處理動物的長期存活腎移植物也驗證了輕微的IgG沉積(圖11C-e，表7)。此外，在預致敏動物的存活100天的腎移植物中檢測到C3和C5的輕微至中等沉積(圖11C-f、g，表7)。無論是否處理，在所有預致敏受者中循環(huán)(圖13A)或移植的腎移植物(表7)中的抗供者IgM保持低水平?？傊@些數(shù)據(jù)證明基于抗C5mAb的三重療法預防ABMR，盡管存在可驗證的移植物內(nèi)IgG和補體沉積，提示通過適應過程已實現(xiàn)長期移植物存活。在攜帶已適應腎移植物的長期存活預致敏受者中IgG亞類轉(zhuǎn)換至IgG2b為了確定是否基于抗C5mAb的三重療法與IgG亞類的轉(zhuǎn)換相關，在未處理預致敏受者與攜帶已適應腎移植物的受者的抗供者IgG亞類的血清水平之間進行比較。未處理預致敏受者的血清包含占優(yōu)勢的IgGl、IgG2a和lgG3抗供者抗體(圖13B)。在用CsA、LF或兩種藥物組合處理的預致敏受者中觀察到相同的模式(數(shù)據(jù)未顯示)。相比之下，在攜帶已適應移植物的預致敏受者中(POD100)，主要的抗供者IgG亞類是IgG2b(圖13B,p<0.01)。這些數(shù)據(jù)提示抗供者IgG2b抗體的產(chǎn)生可能與移植物適應的誘導相關。保護性蛋白質(zhì)Bcl-2和Bcl-xl在已適應的腎移植物上表達假設已適應的移植物對低水平同種抗體和補體的耐受性可能與保護性蛋白質(zhì)如Bcl-xl和Bcl-2的移植物內(nèi)表W目關，先前報道所述蛋白質(zhì)在異種移植模型的已適應移植物的脈管系統(tǒng)中上調(diào)(Bach等人，1997)。在接受基于抗C5mAb的三重療法的預致敏受者中評價了這些蛋白質(zhì)的表達。在POD100時，來自用基于抗C5mAb的三重療法處理的預致敏受者的已適應的腎移植物表達高水平的Bcl-2和Bcl-xl蛋白質(zhì)(圖14)。相比之下，這些蛋白質(zhì)的表達在未處理預致敏動物(圖14)或用CsA或LF單一療法或兩到:這些結果提示已適應的移植物對這些預致敏動物的體液損傷的耐^性可能與Bd-2和Bcl-xl蛋白質(zhì)提供的保護相關。尸檢時在預致敏小鼠受者的腎同種異體移植物的免疫過氧化物酶染色*<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>*移植物在排斥時或移植后POD100時(對于三重療法組)收集。染色強度評分如下0，陰性；l+，不明確；2+，弱；3+，中等；4+,強。實施例6實施例5的方法動物選擇重量25-30g的雄性成年C3H(H-2k)小鼠和BALB/c(H-2d)小鼠(JacksonLabs，BarHarbor,Maine)分別作為供者和受者。將動物在常規(guī)條件下飼養(yǎng)于西安大略大學的實驗動物中心，并且依照由CanadianCouncilonAnimalCare建立的指導方4十照料。皮膚預致敏:取自C3H供者的全層皮膚移植物被切成lxlcn^的方塊，并移植至BALB/c受者的背部。排斥定義為皮膚移植物的完全壞死。同位腎移植皮膚預致敏后七天，使用ll-O尼龍縫線、通過將供者與受者主動脈、供者腎動脈與受者下腔靜脈吻合，將C3H小鼠腎移植至預致敏BALB/c受者的腹部。使用10-0縫線還將供者輸尿管縫合至受者膀胱。移植后立即摘除原始腎臟。導致宿主死亡的移植排斥用作腎移植物排斥的終點。試驗組將預致敏受者隨機分成八組，每組由五只動物組成組1，未處理小鼠；組2,用CsA處理的小鼠(15mg/kg/天，s.c，從第0天至研究終點(移植物排斥或術后天數(shù)(POD)100);組3，用抗C5mAb處理的小鼠(克隆BB5.1,AlexionPharmaceuticals,Inc.,40mg/kg/天，i.p.，第0-14天每天，然后每周兩次直至第60天)；組4，用LF15-0195處理的小鼠(LF，2mg/kg/天，s.c，第0-14天)；組5，用抗C5mAb加CsA處理的小鼠；組6，用抗C5mAb加LF處理的小鼠；組7，用CsA加LF處理的小鼠；組8,用抗C5mAb、CsA和LF組成的三重療法處理的小鼠。在排斥時，移除移植物用于常規(guī)組織學、免疫組織化學和蛋白印跡分析，并收集血清樣品用于評價抗供者抗體水平和補體活性。測量血清肌酸酐腎移植后，在研究終點時(排斥時間或POD100)獲得血清樣品。使用SigmaDiagnosties(Sigma，St.Louis，MO)程序在10fiL樣品中定量血清肌酸酐水平，所述程序通過Jaffe反應的動態(tài)修正測量肌酸酐(Junge等人，2004)。移植物組織學尸檢時，處理組織樣品用于蘇木精和曙紅(H&E)染色(Wang等人，JI2003)，并評價血管炎、血栓形成、出血和'淋巴細胞浸潤；改變評分為0，沒有；1,極??；2，輕微；3，中度或4，與正常組織比較明顯。免疫組織化學將嵌在OptimumCuttingTemperature(O.C.T.)凝膠(SkuraFinetek，Torrance,CA)中的組織樣品切片，并4吏用EliteVectastainABC試劑盒(VectorLaboratoriesInc.,Burlingame，CA)用于CD4+、CD8+和Mac-l+浸潤細胞以及用于IgG、IgM、C3和C5沉積染色。初級生物素化抗體包括抗CD4(YTS191.1.2，CedarlaneLaboratoriesLtd.,Hornby,Ontario,加拿大)、抗CD8(53-6,7，BDBiosciences,FranklinLakes,NJ)和抗Mac-l(Cedarlane)。移植物內(nèi)IgG和IgM沉積使用生物素化的山羊抗小鼠IgG和山羊抗小鼠IgM(Cedarlane)檢測。在用山羊抗小鼠C3或抗小鼠C5多克隆Abs(Quidel，SanDiego,CA)、生物素化兔抗山羊IgG(VectorLaboratories)和HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白(ZymedLaboratories,SouthSanFrancisco,CA)系列孵育后，檢測補體沉積。通過略去初級抗體進行陰性對照。使用每一試驗組五只動物的組織樣品，在每個切片的五倍高倍視野下對免疫染色評分。根據(jù)染色強度將免疫反應性從0至4+分級0，陰性；l+，不明確；2+,弱；3+,中度；和4+，非常強染色。流式細胞術通過流式細胞術評價受者血清中的循環(huán)抗供者特異性IgG和IgM抗體。簡言之，分離C3H小鼠脾細胞并在37。C與在指定時間點從各處理組小鼠中獲得的血清樣品孵育30分鐘。為染色總IgG或特異性抗體亞類，將洗滌的細胞在4。C與對小鼠IgG、小鼠IgGl、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b或小鼠IgG3的Fc部分有特異性的FITC綴合的山羊抗小鼠抗體(所有來自(CALTAGLaboratories,Burlingame，CA))或?qū)π∈驣gM有特異性的藻紅蛋白綴合的山羊抗體(JacksonImmunoResearchLaboratories,WestGrove，PA)孵育1小時，洗滌，在FACScan流式細胞計數(shù)器上分析(BectonDickinson,MountainView,CA)(Collins等人，1999;Pratt等人，1996)。結果表示為平均通道熒光強度，其作為樣品中每一抗供者同種型的水平的量度。補體溶血測定如先前描述，通過標準方法確定受者小鼠血清的末端補體活性，以評價血清溶解用紅細胞特異性抗體預致敏的雞紅細胞的能力(Wang等人，1999)。蛋白印跡分析對冷凍的腎樣品超聲，通過電泳法分離，并轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF;Invitrogen)膜。分別使用多克隆血清N-19和M-125(SantaCruzBiotechnology,Inc.)檢測Bcl-2和Bcl-Xs/L的移植物內(nèi)表達。多克隆抗集鉤蛋白(Calbiochem)用作樣品載荷對照(Kobayashi等人，1999)?？贵w結合通過辣^f艮過氧化物酶綴合的山羊抗兔IgG和增強的化學發(fā)光顯傳教測(RocheLaboratories)(Arp等人,1996)。統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)以平均士標準偏差(SD)報道。使用時序檢驗(log-ranktest)比較試驗組間的同種異體移植物存活。使用秩ANOVA分析組織學和免疫組織學發(fā)現(xiàn)。使用單向ANOVA分析流式細胞術數(shù)據(jù)和蛋白印跡數(shù)據(jù)。p值少于0.05的差異視為顯著。應理解，本發(fā)明的方法和組合物可以以多種實施方案的形式并入，僅其中一些實施方案在本文公開。對本領域技術人員明顯的是存在其他實施方案并且不偏離本發(fā)明的精神。因此，所描述的實施方案為示例性的，不應該解釋為限制性的。參考文獻列表本文說明發(fā)明背景所用的出版物和其他材料以及特別是提供關于實施的附加細節(jié)的實例的全部內(nèi)容并入本文作為參考；為了方便在文中引用作者和日期，并分別總結在下述參考文獻的列表中。AbbasAK等人(2000)."細胞和分子免疫學"(第4版)，363-383頁(W.B.SaundersCompany,紐約)。Arp等人(1996).丄K/^/.2^:7349-7359。Baldwin等人(2001)./畫《鄉(xiāng)li:369-376。B6hmigGA等人(2000).j附.//T,V/"^^:667隱673。Brauer等人(1995).7>謹//朋她'卵^2:288-293。ChangdianPS等人(2003).5Wewce302:875-878。Collard等人(1997).Circulation2^:326-333。Collins等人(1999)./爿附.iV印/^0/.]^:2208-2214。Fearon(1983).InIntensiveReviewofInternalMedicine.第2版,Fanta和Minaker編輯，BrighamandWomen'sandBethIsraelHospitals。Forbes等人(1978).l威^￡:463-470。FreiY等人(1987).編.CW/，i:141-149。Gloor(2005).CV幽'6.to/.，11-21。Glotz等人(1993).7V"附/;/awtoftVmf^:335-337。GlotzD等人(2002).爿附./.7>"附/;/""/.2:758-760。Hakim等人(1990).爿附./1^:423-431。HalloranPF等人(1992).7>"附//朋似^"550-555。Halloran(2003).爿附./7>"印/"#^.》:639-640。HavilandDL等人(1991).//附附wm/.146:362-368。HiesseC等人(1992).A^p/iro/.rnww//做,.2:944-951。HillmenP等人(2004).7Vew五"g/./3/^/.350:552-559。JeannetM等人(1970).A^w￡>ig/./3/^/.282:111-117。JonesPT等人(1986).TV",""321:522-525。Jose等人(1983).158:2177-2182。Junge等人(2004).C7/"CA/附344(1-2):137。Kirschfmk(2001)./m附wwo/.及ev.180:177-189。Kobayashi等人(1999)./C7^抓274:28660-28668。Kriaa等人(1995).7V印/f/^/."/fl/1r謂一wtMS卿/.f:108-110。Kroshus等人(1995).r簡5pto/i似ft柳1194-1202。K叩iec-Weglinski(1996).爿肌7>"s/7/"w,.i:34-40。Kupin等人(1991).7>附/7/做她卵^1:324-329。Liszewski(1993).FundamentalImmunology917-939頁。Mauiyycdi等人(2002).CWr.O/wVi.U:609-618。Mehra等人(2003).0盧>1.C"n/^/.1^:153-158。MintaJO和ManDP(1977)./附附mwo/.119:1597-1602。MontgomeryRA等人(2000).7>附/;/"似&》"2^:887-895。Olfert等人(1993)"實驗動物管理和使用指南"(Vol.l).渥太華加拿大大學聯(lián)盟1。OpelzG(1992).!T謂spto.^:2342畫2355。OPTN/SRTR年才艮(2002)，由器官移植受者科學登記系統(tǒng)(SRTR)聯(lián)合器官獲取和移植網(wǎng)絡(OPTN)提出的年報第一章，參見http:〃www.unos,org/data/ar2002/ar02chapterone.htm。Palmer等人(1989).1fl"Wi:10-12。Papadimitriou等人(1991)./147:212-217。ParkWD等人(2003).爿附./rm附;/aMQ:952-960。PerssonNH等人(1995).7>朋印/"^.^2:3466。Piatt等人(1999).Afo/./附附w朋/.^:965-971。Pratt等人(1996).爿附/尸"幼o/149:2055-2066。Pratt等人(2000).爿附./尸a^"157:825-831。Pruitt等人(1991)./S"/"g.及"^:350-355。RegeleH等人(2001).A^p/ifW.7>"附//"/^.J^:2058-2066。Rocha等人(2003).7>fl"s/i/<mtori<m21:1490-1495。Ross等人(1993).7Wmsp/朋紐ftWiff:785-789。Saadi等人(1995)./AfM.182:1807-1814。Salama等人(2001).爿附./7>""印/"加i:260-269。Schweitzer等人(2000).rnm5p/fl"似tfow2^:1531-1536。Son畫day等人(2002).r簡一wf.iW.1614-1616。StepkowskiSM(2000).及ev.Afo/.M^/.6月21日，http:〃www畫ermm.cbcu,cam.ac.uk/00001769h.htm。TaubeDH等人(1984).Iflwc"j_:824-828。Tyan等人(1994).r腦一rt她'朋^2:553-562。Vakeva等人(1998).C7rc"/a"朋￡2:2259-2267。VogtW等人(1989).Mo/ec/畫廳/.2^:1133-1142。Wang等人(1995).尸r。cTV",/,/^/wiU.S.A.22:8955-8959。Wang等人(1996).A^/lS"U.S.A.^1:8563-8568。Wang等人(1999).rnm印/flw似ftV"1643-1651。WangH等人(2003).//附附朋C171:3823-3836。Warren等人(2004).^肌/7V做5p/做A4:561-568。WetselRA和KolbWP(1982).丄/附m"wo/.128:2209-2216。WurznerR等人(1991).0附//e附e",/w/"w附.g:328畫340。YamamotoKI和GewurzG(1978).//附附wwo/.120:2008-2015。PCT專利申請公布WO92/10205PCT專利申請^>布WO00/27421PCT專利申請公布WO01/37860U.S.專利申請公布US2003/0129187U.S.專利申請^>布US2003/0180301U.S.專利5,133,916U.S.專利5,573,940U.S.專利5,660,825U.S.專利6,057,131U.S.專利6,100,443U.S.專利6,192,891U.S.專利6,280,957U.S.專利6,302,855U.S.專利6,355,245U.S.專利6,534,058U.S.專利6,821,515本文引用的所有參考文獻的內(nèi)容全部引入作為參考。權利要求1.一種延長腎同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，所述方法包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療。2.權利要求l的方法，其中所述哺乳動物是人。3.權利要求l的方法，其中所述同種異體移植物是MHC錯配的。4.權利要求3的方法，其中所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。5.權利要求1的方法，其中所述受者對所述同種異體移植物是ABO錯配的。6.權利要求l的方法，其中所述抑制補體活性的藥物長期施用。7.權利要求1的方法，其中所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。8.權利要求7的方法，其中所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。9.權利要求8的方法，其中所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。10.權利要求8的方法，其中所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。11.權利要求8的方法，其中所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。12.權利要求8的方法，其中所述抗體片段是培克珠單抗。13.權利要求8的方法，其中所述完整抗體是依庫珠單抗。14.權利要求13的方法，其中所述依庫珠單抗長期施用。15.權利要求13的方法，其中所述依庫珠單抗每2周施用一次。16.權利要求l的方法，其中所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。17.權利要求1的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。18.權利要求1的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活'性。19.權利要求1的方法，其中所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑噤呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰噤呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布喹那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、嘌呤類似物、美羅華、CTLA-4-Ig(belatacept)、IVIg、LF15-0195和布雷青霉素。20.權利要求l的方法，其中施用多于一種免疫抑制藥物。21.權利要求1的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。22.權利要求1的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。23.權利要求1的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。24.權利要求23的方法，其中所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。25.權利要求1的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。26.權利要求1的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。27.權利要求1的方法，其中所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。28.權利要求2的方法，其中所述同種異體移植物存活至少三個月。29.權利要求2的方法，其中所述同種異體移植物存活至少六個月。30.權利要求2的方法，其中所述同種異體移植物存活至少一年。31.權利要求2的方法，其中所述同種異體移植物存活至少五年。32.權利要求2的方法，其中所述同種異體移植物存活所itA的剩余壽命。33.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。34.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。35.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。36.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。37.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少1年。38.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。39.權利要求6的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。40.權利要求1的方法，其中至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。41.權利要求40的方法，其中至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。42.權利要求40的方法，其中至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。43.權利要求1的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)治療是血漿去除術、脾切除術或免疫吸附。44.一種延長腎同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療，其中所述哺乳動物對所述同種異體移植物預致敏。45.權利要求44的方法，其中所述哺乳動物是人。46.權利要求44的方法，其中所述抑制補體活性的藥物長期施用。47.權利要求44的方法，其中所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。48，權利要求47的方法，其中所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。49.權利要求48的方法，其中所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。50.權利要求48的方法，其中所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。51.權利要求48的方法，其中所述抗體片段選自Fab、F(ab，)2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。52.權利要求48的方法，其中所述抗體片段是培克珠單抗。53.權利要求48的方法，其中所述完整抗體是依庫珠單抗。54.權利要求53的方法，其中所述依庫珠單抗每2周施用一次。55.權利要求44的方法，其中所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。56.權利要求44的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。57.權利要求44的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。58.權利要求44的方法，其中所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰嘌呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布喹那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、嘌呤類似物、美羅華、CTLA-4-Ig(belatacept)、IVIg、LF15-0195和布雷青霉素。59.權利要求44的方法，其中施用多于一種免疫抑制藥物。60.權利要求44的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)環(huán)孢菌素A。61.權利要求44的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物和ii)LF15-0195。62.權利要求44的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。63.權利要求62的方法，其中所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。64.權利要求44的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。65.權利要求44的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所迷方法長至少40%。66.權利要求44的方法，其中所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。67.權利要求45的方法，其中所述同種異體移植物存活至少三個月。68.權利要求45的方法，其中所述同種異體移植物存活至少六個月。69.權利要求45的方法，其中所述同種異體移植物存活至少一年。70.權利要求45的方法，其中所述同種異體移植物存活至少五年。71.權利要求45的方法，其中所迷同種異體移植物存活所述人的剩余壽命。72.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。73.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。74.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。75.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。76.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少l年。77.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。78.權利要求46的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。79.權利要求46的方法，其中至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。80.權利要求79的方法，其中至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。81.權利要求79的方法，其中至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。82.權利要求44的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)治療是血漿去除術、脾切除術或免疫吸附。83.抑制補體活性的藥物和免疫抑制藥物在制備用于延長腎同種異體移植物在哺乳動物中存活的藥物或藥物包裝中的用途。84.權利要求83的用途，其中多于一種的免疫抑制藥物包括在藥物或藥物包裝中。85.權利要求83的用途，其中所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物并行施用的制劑中。86.權利要求83的用途，其中所迷抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所迷哺乳動物連續(xù)施用的一種或多種制劑中。87.權利要求83的用途，其中所述抑制補體活性的藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。88.權利要求83的用途，其中所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。89.—種延長同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，所述方法包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所迷療法選自i)包含LF15-0195的至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療。90.權利要求89的方法，其中所述哺乳動物是人。91.權利要求89的方法，其中所述同種異體移植物是MHC錯配的。92.權利要求91的方法，其中所述MHC錯配的同種異體移植物是HLA錯配的同種異體移植物。93.權利要求89的方法，其中所述受者對所述同種異體移植物是ABO錯配的。94.權利要求89的方法，其中所述同種異體移植物選自下組i)心、ii)腎、iii)肺、iv)胰、v)肝、vi)血管組織、vii)眼、viii)角膜、ix)晶狀體、x)皮膚、xi)骨髓、xii)肌肉、xiii)結締組織、xiv)胃腸組織、xv)神經(jīng)組織、xvi)骨、xvii)干細胞、xviii)胰島、xix)軟骨、xx)肝細胞和xxi)造血細胞。95.權利要求89的方法，其中所述抑制補體活性的藥物長期施用。96.權利要求89的方法，其中所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。97.權利要求96的方法，其中所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或抗體片段。98.權利要求97的方法，其中所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。99.權利要求97的方法，其中所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。100.權利要求97的方法，其中所述抗體片段選自Fab、F(ab')2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。101.權利要求97的方法，其中所述抗體片段是培克珠單抗。102.權利要求97的方法，其中所述完整抗體是依庫珠單抗。103.權利要求102的方法，其中所述依庫珠單抗長期施用。104.權利要求102的方法，其中所述依庫珠單抗每2周施用一次。105.權利要求89的方法，其中所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。106.權利要求89的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。107.權利要求89的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。108.權利要求89的方法，其中所述免疫抑制藥物進一步包括選自下組的藥物環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰嘌呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布會那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、嘌呤類似物、美羅華、CTLA-4-Ig(belatacept)、IVIg和布雷青霉素。109.權利要求89的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。110.權利要求109的方法，其中所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。111.權利要求89的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所迷方法長至少20%。112.權利要求89的方法，其中所迷同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所迷方法長至少40%。113.權利要求89的方法，其中所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。114.權利要求卯的方法，其中所述同種異體移植物存活至少三個月。115.權利要求卯的方法，其中所述同種異體移植物存活至少六個月。116.權利要求90的方法，其中所述同種異體移植物存活至少一年。117.權利要求卯的方法，其中所述同種異體移植物存活至少五年。118.權利要求卯的方法，其中所述同種異體移植物存活所述人的剩余壽命。119.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。120.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。121.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。122.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。123.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少l年。124.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。125.權利要求95的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。126.權利要求89的方法，其中至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。127.權利要求126的方法，其中至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。128.坤又利要求126的方法，其中至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。129.權利要求89的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)治療是血漿去除術、脾切除術或免疫吸附。130.—種延長同種異體移植物在受者哺乳動物中存活的方法，包括對所述哺乳動物施用a)抑制補體活性的藥物和b)至少一種免疫抑制療法，其中所述療法選自i)包含LF15-0195的至少一種免疫抑制藥物或ii)免疫調(diào)節(jié)治療，其中所述哺乳動物對所述同種異體移植物預致敏。131.權利要求130的方法，其中所述哺乳動物是人。132.權利要求130的方法，其中所迷同種異體移植物選自下組i)心、ii)腎、iii)肺、iv)胰、v)肝、vi)血管組織、vii)眼、viii)角膜、ix)晶狀體、x)皮膚、xi)骨髓、xii)肌肉、xiii)結締組織、xiv)胃腸組織、xv)神經(jīng)組織、xvi)骨、xvii)干細胞、xviii)胰島、xix)軟骨、xx)肝細胞和xxi)造血細胞。133.權利要求130的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物。134.權利要求130的方法，其中所述抑制補體活性的藥物抑制C5b或C5a的形成。135.權利要求134的方法，其中所述抑制C5b或C5a形成的藥物是完整抗體或或抗體片段，136.權利要求135的方法，其中所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。137.權利要求135的方法，其中所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。138.權利要求135的方法，其中所述抗體片段選自Fab、F(ab，)2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。139.權利要求135的方法，其中所述抗體片段是培克珠單抗。140.權利要求135的方法，其中所迷完整抗體是依庫珠單抗。141.權利要求140的方法，其中所述依庫珠單抗每2周施用一次。142.權利要求130的方法，其中所述補體活性抑制劑選自下組i)可溶性補體受體、ii)CD59、iii)CD55、iv)CD46和v)C5、C6、C7、C8或C9的抗體。143.權利要求130的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性或B-細胞活性。144.權利要求130的方法，其中所述免疫抑制藥物抑制T-細胞活性和B-細胞活性。145.權利要求130的方法，其中所述免疫抑制藥物選自下組環(huán)孢菌素A、他克莫司、西羅莫司、OKT3、皮質(zhì)類固醇、達利珠單抗、巴利昔單抗、硫唑噪呤、霉酚酸酯、甲氨喋呤、6-巰噤呤、抗T細胞抗體、環(huán)磷酰胺、來氟米特、布喹那、ATG、ALG、15-脫氧精胍菌素、嘌呤類似物、美羅華、CTLA-4-Ig(belatacept)、IVIg和布雷青霉素。146.權利要求130的方法，其中所述方法包括施用i)抑制補體活性的藥物、ii)環(huán)孢菌素A和iii)LF15-0195。147.權利要求146的方法，其中所述抑制補體活性的藥物是抑制補體C5斷裂的抗體。148.權利要求130的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少20%。149.權利要求130的方法，其中所述同種異體移植物存活的時間比在沒有所述抑制補體活性藥物的情況下進行所述方法長至少40%。150.權利要求130的方法，其中所述同種異體移植物存活所述哺乳動物的剩余壽命。151.權利要求131的方法，其中所述同種異體移植物存活至少三個月。152.權利要求131的方法，其中所述同種異體移植物存活至少六個月153.權利要求131的方法，其中所述同種異體移植物存活至少一年。154.權利要求131的方法，其中所述同種異體移植物存活至少五年。155.權利要求131的方法，其中所述同種異體移植物存活所^A的剩余壽命。156.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少14天。157.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少28天。158.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少3個月。159.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少6個月。160.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少l年。161.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物至少5年。162.權利要求133的方法，其中長期施用所述抑制補體活性的藥物持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。163.權利要求133的方法，其中至少一種免疫抑制藥物長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。164.權利要求163的方法，其中至少環(huán)孢菌素A長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。165.權利要求163的方法，其中至少LF15-0195長期施用持續(xù)所述哺乳動物的剩余壽命。166.權利要求130的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)治療是血漿去除術、脾切除術或免疫吸附。167.抑制補體活性的藥物和至少一種免疫抑制藥物在制備用于延長同種異體移植物在哺乳動物中存活的藥物或藥物包裝中的用途，其中至少一種免疫抑制藥物包含LF15-0195。168.權利要求167的用途，其中多于一種免疫抑制藥物包括在所述藥物或藥物包裝中。169.權利要求167的用途，其中所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物并行施用的制劑中。170.權利要求167的用途，其中所迷抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物連續(xù)施用的一種或多種制劑中。171.權利要求167的用途，其中所迷抑制補體活性的藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。172.權利要求167的用途，其中所述免疫抑制藥物處于適于對所述哺乳動物長期施用的制劑中。173.—種藥物包裝，其包含抑制補體活性的藥物和至少一種免疫抑制藥物，其中所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物配制用于長期施用，其中至少一種免疫抑制藥物包含LF15-0195。174.權利要求173的藥物包裝，其中所述抑制補體活性的藥物是在包含抗體和凍干保護劑的凍干制劑中的抗體。175.權利要求173的藥物包裝，其中所述免疫抑制藥物處于包含免疫抑制藥物和凍干保護劑的凍干制劑中。176.權利要求173的藥物包裝，其中所述藥物和所述免疫抑制藥物處于包含所述藥物、所述免疫抑制藥物和凍干保護劑的相同凍干制劑中。177.權利要求173的藥物包裝，其中所述抑制補體活性的藥物處于包含含有藥筒的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述藥物。178.權利要求173的藥物包裝，其中所述免疫抑制藥物處于包含含有藥筒的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述免疫抑制藥物。179.權利要求173的藥物包裝，其中所述抑制補體活性的藥物和所述免疫抑制藥物處于包含含有藥筒的注射器的注射系統(tǒng)中，其中所述藥筒包含在適于注射的制劑中的所述藥物和所述免疫抑制藥物。180.權利要求173的藥物包裝，其中所述抑制補體活性的藥物以單位劑型存在。181.權利要求173的藥物包裝，其中所述免疫抑制藥物以單位劑型存在。182.權利要求174的藥物包裝，其中所述抗體抑制末端補體或C5a的形成。183.權利要求174的藥物包裝，其中所述抗體是完整抗體或抗體片段。184.權利要求174的藥物包裝，其中所述完整抗體或抗體片段是人、人源化的、嵌合的或去免疫的抗體或抗體片段。185.權利要求174的藥物包裝，其中所述完整抗體或抗體片段抑制補體C5的斷裂。186.權利要求174的藥物包裝，其中所述抗體片段選自Fab、F(ab，)2、Fv、結構域抗體和單鏈抗體。187.權利要求174的藥物包裝，其中所述抗體片段是培克珠單抗。188.權利要求174的藥物包裝，其中所迷完整抗體是依庫珠單抗。全文摘要本發(fā)明提出了延長同種異體移植的細胞、組織或器官存活的方法。這些方法涉及對同種異體移植物受者施用補體活性抑制劑以及一種或多種免疫抑制劑和/或免疫抑制方法。補體活性抑制劑長期施用。已經(jīng)確定這些方法有助于預防同種異體移植物的慢性排斥。這些方法另外可用于其中受者已對同種異體移植物預致敏或其中在同種異體移植物和受者之間存在ABO錯配的情況。文檔編號A61K45/06GK101437501SQ200780015830公開日2009年5月20日申請日期2007年3月2日優(yōu)先權日2006年3月2日發(fā)明者R·P·羅特爾,浩王,震鐘申請人:阿萊克申藥物公司