專利名稱：三七皂甙治療敗血癥的應(yīng)用的制作方法
三七皂甙治療敗血癥的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域-本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品的新用途，特別涉及三七總皂苷在治療和/或預(yù)防敗血癥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
-三七(Panax notoginseng, PN)是風(fēng)干后的中國傳統(tǒng)中藥三七(Burk) F. H. Chen 的根。三七皂甙(也稱為三七總皂苷，英文名Panax Notoginsenosides， PNS) 是三七的主要有效成份，由30余種不同的皂甙組成，臨床上廣泛用于治療微循 環(huán)障礙相關(guān)性疾病，如心血管疾病和肝功能障礙。三七皂甙已經(jīng)列入國家藥典，有相應(yīng)制劑產(chǎn)品上市，如注射用血塞通。中國專 利CN200410058111.4描述了一種三七皂甙的制備方法三七用水提取，提取液 濃縮，乙醇沉淀，上清液除盡乙醇，水溶解后，行大孔樹脂HPD400柱色譜，水 洗脫除去雜質(zhì)后，再用90%乙醇洗脫，至有效成分洗脫完全為止，回收醇洗脫液， 干燥即得。具體可以采用以下方法獲得取三七藥材粉碎成粗粉，加10倍藥材 重量的70%乙醇，回流提取2次，每次25小時(shí)，濾過，合并二次提取液，70°C 左右減壓回收溶劑，至比重為1.10-1.12的流浸膏。用水稀釋，進(jìn)行大孔樹脂 HPD400吸附柱吸附，用水洗脫，繼以90%乙醇洗脫，90%乙醇洗脫部分70°C左右 減壓回收溶劑。向上述三七總皂苷溶液中，加入Mg02:ALA脫色，過濾，濾液于80°C 減壓真空干燥,粉碎，即得淡黃色三七總皂苷成品。敗血癥是致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)中生長繁殖，產(chǎn)生毒素和其他代謝產(chǎn)物 所引起的急性全身性感染，臨床上以寒戰(zhàn)、高熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛及肝脾腫大為特 征，部分可有感染性休克和遷徙性病灶。引起敗血癥的原因有 一、人體因素① 當(dāng)皮膚粘膜有破損或發(fā)生化膿性炎癥時(shí)，細(xì)菌則容易侵入體內(nèi)。② 人體的免疫反應(yīng)可分為非特異性免疫反應(yīng)及特異性免疫反應(yīng)兩種，后者又可分 為細(xì)胞免疫與體液免疫兩方面。當(dāng)機(jī)體免疫功能下降時(shí)，不能充分發(fā)揮其吞噬殺 滅細(xì)菌的作用，即使入侵的細(xì)菌量較少，致病力不強(qiáng)也能引起敗血癥。③條件致病菌所引起的醫(yī)源性感染也逐漸增多。 二、細(xì)菌因素主要與病原菌的毒力和數(shù)量有關(guān)。毒力強(qiáng)或數(shù)量多的致病菌進(jìn)入機(jī)體，引起敗血癥的可能性較大。敗血癥的主要癥狀是1. 原發(fā)炎癥各種病原菌所引起的原發(fā)炎癥與其在人體的分布部位有關(guān)。 原發(fā)炎癥的特點(diǎn)是局部的紅、腫、熱、痛和功能障礙。2. 毒血癥癥狀起病多急驟。常有寒戰(zhàn)、高熱、發(fā)熱多為弛張熱及或間歇 熱，亦可呈稽留熱、不規(guī)則熱及雙峰熱，后者多系革蘭陰性桿菌敗血癥所致。發(fā) 熱同時(shí)伴有不同程度的毒血癥癥狀，如頭痛、惡心、嘔吐、腹脹、腹痛、周身不 適、肌肉及關(guān)節(jié)疼痛等。3. 皮疹見于部分患者，以瘀點(diǎn)最為多見，多分布于軀干、四肢、眼結(jié)膜、 口腔粘膜等處，為數(shù)不多。4. 關(guān)節(jié)癥狀可出現(xiàn)大關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛和活動(dòng)受限，甚至并發(fā)關(guān)節(jié)腔 積液、積膿，多見于革蘭陽性球菌、腦膜炎球菌、產(chǎn)堿桿菌等敗血癥的病程中。5. 感染性休克約見于1/5 1/3敗血癥患者，表現(xiàn)為煩燥不安，脈搏細(xì)速， 四肢厥冷，皮膚花斑，尿量減少及血壓下降等，且可發(fā)生DIC，系嚴(yán)重毒血癥所 致。6. 肝脾腫大 一般僅輕度腫大。根據(jù)研究，脂多糖(LPS)是革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分之一，造 成了革蘭氏陽性細(xì)菌導(dǎo)致的人敗血癥和感染性休克的多種表現(xiàn)。敗血癥時(shí)發(fā)生的微循環(huán)障是由LPS的過度釋放造成的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)，由許多激活的因子所介 導(dǎo)，這些因子如粘附分子，活性氧成份(ROS)，以及炎癥前體介質(zhì)如腫瘤壞死因 子一o(TNF-a)、白介素一6(IL-6)以及干擾素一7(INF-7)。 LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的微循環(huán) 障礙對(duì)敗血癥時(shí)發(fā)生的器官功能障礙起著關(guān)鍵作用，在這個(gè)過程中白細(xì)胞沿著內(nèi) 皮旋轉(zhuǎn)并粘附于血管內(nèi)皮，血管壁產(chǎn)生過氧化氫和肥大細(xì)胞脫顆粒都是文獻(xiàn)報(bào)道 的關(guān)鍵步驟。當(dāng)前敗血癥的主要臨床治療方法包括容量復(fù)蘇，兒茶酚胺的運(yùn)用和抗生素補(bǔ) 償治療。這些方法可以增加敗血癥病人的存活率，但是在臨床上會(huì)導(dǎo)致血糖升高以及血壓和血鈣的下降，并發(fā)生出血。臨床研究建議采用抗TNF-a治療對(duì)敗血 癥的治療有所幫助。然而，最近的研究表明這種方法不能治愈敗血癥且會(huì)增加嚴(yán) 重?cái)⊙Y病人的死亡率。因而，在LPS導(dǎo)致的敗血癥中尋找防止出現(xiàn)嚴(yán)重微循 環(huán)障的方法仍然是個(gè)挑戰(zhàn)。本發(fā)明人在對(duì)三七皂甙進(jìn)行研究過程中，發(fā)現(xiàn)三七皂甙后處理能夠抑制白細(xì)胞粘 附于血管壁、肥大細(xì)胞脫顆粒和細(xì)胞因子的釋放，改善LPS誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙。 對(duì)敗血癥有明顯的治療作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種三七皂甙新的治療用途。所述新的治療用途，是用三七皂甙治療 因微循環(huán)障礙引發(fā)的敗血癥。為此，本發(fā)明提供一種藥物新用途，即用三七皂甙制備一種治療和/或預(yù)防敗血 癥的藥物。本發(fā)明所述三七皂甙是三七總皂武，主要成份是人參皂甙Rb、 Rg，三七皂甙Rl、 R2、 R3。本發(fā)明所述三七皂甙可以從市場上買到，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，符合藥用標(biāo) 準(zhǔn)即可。如云南瑞寶天然色素有限公司供應(yīng)的以下標(biāo)準(zhǔn)的三七皂甙 外觀淡黃色無定型粉末 干燥失重 《5% 灼熱殘?jiān)?《0. 5%人參皂甙Rbl 》30% 人參皂甙Rgl》20% 總皂甙含量 》88%或按國家標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3590-2001(Z)制備的三七皂式。本發(fā)明所述制備的藥物，是用上述三七皂甙作為藥物活性成分制備成的藥物制劑 組合物。本發(fā)明的藥物制劑組合物，根據(jù)需要可以含有藥物可接受的載體，其中三七 皂甙作為藥物活性成分，其在制劑中所占重量百分比可以是0.1-99.9%，其余為 藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物制劑組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆 粒劑每袋，注射劑的每支等。本發(fā)明的藥物制劑組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、 糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、 口含劑、顆粒劑、沖劑、丸齊U、散劑、膏劑、丹齊!J、混懸劑、粉齊IJ、溶液劑、注 射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑。本發(fā)明的中藥制劑，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、 填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時(shí) 可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩 解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤 滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。可通過混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合 可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中。口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或 酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種 液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、 明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑， 例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用 油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐 劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常 規(guī)的香味劑或著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù) 載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì) 溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。 輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高 其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。本發(fā)明的中藥制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載 體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、 EDTA二鈉、EDTA 鈣鈉， 一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、 磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右 旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、 藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、 表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e —環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、 硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的制劑在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每次 1-20劑，如1-20袋或粒或片，每劑lmg-1000mg。 本發(fā)明所述的治療用途是通過以下實(shí)驗(yàn)證明的1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑贚PS誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙形成之后運(yùn)用三七皂甙考察其對(duì)敗血癥的作用。2. 材料和方法 2.1丄/W層艦層備LPS來源于從Sigma(St Louis， MO)獲得的大腸埃希氏菌屬055:B5血漿型，PNS 由天津士力集團(tuán)(中國，天津)提供。兩者都溶于鹽水溶液。 2.2動(dòng)激劍備雄性sprague-dawley(SD)大鼠，體重在200 250克之間，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部 動(dòng)物中心提供。SD大鼠試驗(yàn)前禁食不禁水12小時(shí)。采用烏拉坦對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行 麻醉(1.25mg/kg, b.w., i.m.)。試驗(yàn)動(dòng)物被分為LPS組(n = 6)和LPS+PNS組(n = 6)。 對(duì)于對(duì)照組，在進(jìn)行10分鐘的基礎(chǔ)觀察之后，施行左頸靜脈和左股靜脈置管然后 注射鹽水60分鐘。對(duì)于LPS組，試驗(yàn)動(dòng)物接受和對(duì)照組一樣的處理，只是不經(jīng)過 10分鐘的基礎(chǔ)觀察，通過左股靜脈的置管持續(xù)注射LPS溶液(2 mg/kg/hr) 60分鐘。 對(duì)TLPS+PNS組，經(jīng)過10分鐘的基礎(chǔ)觀察之后，通過左股靜脈持續(xù)注射LPS溶液 (2 mg/kg/hr)，在注射LPS溶液之后20分鐘開始通過左頸靜脈持續(xù)注射PNS溶液(5 mg/kg/hr)直到觀察結(jié)束。 2.3厲扁微衛(wèi),艦沐觀蔡對(duì)于每一個(gè)動(dòng)物，采用正中切口切開試驗(yàn)腹腔(切口長2-3cm)。小心分離腸 系膜的回盲部(腸系膜尾部10-15 cm的區(qū)域)，然后把腸系膜從腹腔內(nèi)取出并平鋪于透明塑料臺(tái)之上。通過持續(xù)表面灌流37'C生理鹽水來保持腸系膜的溫度和濕 度。采用使用透照器的倒置顯微鏡(德國，Leica， DM-IRB)觀察腸系膜的微循環(huán)。 在顯微鏡上安裝電視照相機(jī)(日本，東芝Jk-TU53H)，圖像被傳輸?shù)揭粋€(gè)彩色顯 示器(韓國，TCL， J2118A),通過DVD錄影帶記錄儀(中國，Malata DVR-R25)記 錄傳輸?shù)挠跋?。開始注射LPS的時(shí)間設(shè)定為電視定時(shí)器的0時(shí)點(diǎn)(電視定時(shí)器 VTG-55B, FOR-A,日本)。 2.4 ,分析選擇單支無分枝且無明顯彎曲的小靜脈進(jìn)行以下的試驗(yàn)測定，小靜脈的直徑 在30^ii到50^n之間，長度200pm左右。 2.4.1 V、薪遊徑腳定對(duì)LPS注射后O分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘，50分鐘和60分鐘記錄的圖像， 使用Image-Pro Plus 5.0 (Media Cybernetic, USA)軟件分別進(jìn)行血管直徑的測定。 在同一位置測定血管直徑三次然后取其平均值。 2.4.2飾應(yīng)遂率層定把監(jiān)視器的CCD轉(zhuǎn)換為高速電視照相系統(tǒng)(FASTCAM-ultima APX, photron, 日本)以2000幀/s的速度記錄小靜脈內(nèi)紅細(xì)胞的速率，之后以25幀/s的速度重 新播放儲(chǔ)存的高速影像。采用Image-Pro Plus 5.0軟件(Media Cybernetic, USA)測 量LPS注射后O分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘，50分鐘和60分鐘時(shí)小靜脈 內(nèi)的紅細(xì)胞的速率(Han et al., 2001)。 2.4.3衡稀定小靜脈血管壁剪切率(SR)的估算基于公式SR-2.12x8x[V/D]進(jìn)行，這里D代表 血管平均直徑，V為紅細(xì)胞平均速率，2.12為經(jīng)驗(yàn)修正因子的中值(Dunneeta1., 2002)。2.4.4粘附白細(xì)胞的測定為了觀察粘附于血管壁的白細(xì)胞，通過重播記錄到的圖像來回顧白細(xì)胞的動(dòng) 力學(xué)行為。在本研究中，把粘附白細(xì)胞定義為粘附于同側(cè)血管壁時(shí)間超過10s的 白細(xì)胞。通過隨機(jī)選擇記錄圖像計(jì)數(shù)一定的小靜脈片斷(直徑30~50 pm，長度 為200 nm內(nèi)粘附白細(xì)胞的數(shù)目，粘附白細(xì)胞的數(shù)目表示為粘附細(xì)胞數(shù)目/200/mi 小靜脈[23]。".J V、薪厥壁"朋潘度腳定局部添加11202敏感的熒光探針二氫諾丹明123 (DHR,分子探針)到腸系膜表面來觀察小靜脈壁的氧化能力。使用貢燈(100 W)照射激發(fā)產(chǎn)生波長為455mm 的熒光到倒置熒光顯微鏡(DM-IRB, Leica， Germany)觀察熒光。然后使用CD記 錄器在LPS注射后的O分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘，50分鐘和60分鐘記錄熒 光影像，采用Image-Pro Plus 5.0軟件測定小靜脈壁和小靜脈外間質(zhì)的熒光強(qiáng)度。 將O分鐘時(shí)的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)的熒光強(qiáng)度的差值作為基線值，通過計(jì)算各 個(gè)時(shí)間點(diǎn)的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)熒光強(qiáng)度的差值與基線值的比值來獲得DHR 熒光強(qiáng)度比率。2.4.6從腸系膜小靜脈滲漏的白蛋白的測定在另一個(gè)大鼠試驗(yàn)組，通過左頸靜脈緩慢注射FITC標(biāo)記的牛血漿白蛋白(50 mg/kg)。經(jīng)過10分鐘的基線觀察之后，貢燈(IOO W)激發(fā)產(chǎn)生熒光(波長為455mm) 到倒置熒光顯微鏡(DM-IRB, Leica, Germany)來進(jìn)行熒光觀察，使用CD記錄器 在LPS注射之后O分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘，50分鐘和60分鐘記錄熒光影 像，采用Image-Pro Plus 5.0軟件測定小靜脈壁和小靜脈外間質(zhì)的熒光強(qiáng)度。把0 分鐘時(shí)的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)的熒光強(qiáng)度的比值作為基線值，通過每一個(gè)時(shí)間 點(diǎn)的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)的熒光強(qiáng)度的比值除以基線值來計(jì)算FITC熒光強(qiáng)度 比值[24]，計(jì)算公式為Rt二Pt/Po，在這里 Rt， t時(shí)刻的FITC熒光強(qiáng)度比值；P， t時(shí)刻的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)的熒光強(qiáng)度的比值；P O時(shí)刻的小靜脈壁和小靜脈間質(zhì)的熒光強(qiáng)度的比值,即基線值； o，".7 ,犬細(xì)應(yīng)頗激定注射LPS之后60分鐘，用0.1%的甲苯胺藍(lán)進(jìn)行組織染色1分鐘,然后用鹽 水漂白。脫顆粒的肥大細(xì)胞被鑒定為存在釋放細(xì)胞內(nèi)顆粒到周圍組織的細(xì)胞，計(jì) 數(shù)20x物鏡顯微鏡圓形視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目來確定這類細(xì)胞的個(gè)數(shù)。每個(gè)腸系膜窗 評(píng)估沿微血管系統(tǒng)的5個(gè)視野。記錄脫顆粒和非脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目，然后計(jì) 算脫顆粒肥大細(xì)胞的比例。 2.4.8 O)爐C爐表這游,定觀察完腸系膜微循環(huán)后，從每個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物的腹主動(dòng)脈采集血液后用肝素抗凝 (20單位/每ml血液)，然后和l /tg FITC標(biāo)記的抗CDllb及抗CD18抗體(BD Biosciences Pharmingen,美國)在室溫下共孵化20分鐘。用溶血素(BD Biosciences Immunocytometer Systems,美國)溶解細(xì)胞后PBS洗滌兩次。使用流式細(xì)胞儀 (FACS Calibur， B.D.Co，美國)測定平均的熒光強(qiáng)度。采用FSC-SSC散點(diǎn)圖選擇中 性粒細(xì)胞。每份樣品需要5千中性粒細(xì)胞，然后計(jì)算每組的平均的熒光強(qiáng)度。 2.4.9逾,雄鮮顏定觀察完腸系膜微循環(huán)之后，經(jīng)過腹主動(dòng)脈途徑采集試驗(yàn)動(dòng)物的血液標(biāo)本進(jìn)行 肝素抗凝(20unit/ml blood)。然后離心分離血漿。在室溫下，50/il血漿和標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)與50 jul capture beads共孵化1小時(shí)，然后與50 PE標(biāo)記的TNF-a和IL-6 檢測抗體混合，在室溫之下共孵化2小時(shí)形成三明治復(fù)合物。共孵化之后，每管 加入lml洗脫緩沖液(BD Biosciences Pharmingen，美國)，運(yùn)用流式細(xì)胞儀(FACS Calibur, B.D.Co，美國)檢測平均熒光強(qiáng)度。采用BD Cytometric Bead Array分析軟 件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(Wong et al., 2004)。 2.5統(tǒng)^分析所有數(shù)值以平均值土S.E(N-6)表示。采用方差分析和F—檢驗(yàn)計(jì)算統(tǒng)計(jì)顯著 性。設(shè)定P值小于0.05具有顯著意義。 3.結(jié)果J」V、^^^"壁力-智應(yīng)^^數(shù)^對(duì)照組在整個(gè)60分鐘的觀察期只發(fā)現(xiàn)了少量的粘附的白細(xì)胞(A, B, C)。經(jīng)過 10分鐘的基線觀察，在LPS和LPS+PNS組都沒有觀察到粘附的白細(xì)胞(D， G)。在 LPS組，注射LPS20分鐘(E)和LPS60分鐘(F)導(dǎo)致了大量白細(xì)胞對(duì)血管壁的粘附。 在LPS+PNS組，注射LPS之后20分鐘導(dǎo)致了粘附于小靜脈壁的白細(xì)胞數(shù)目顯著增 加(H)，然后開始PNS后處理，導(dǎo)致了粘附白細(xì)胞數(shù)目的明顯降低(I)。對(duì)照組60分鐘的觀察期只發(fā)現(xiàn)了少量粘附的白細(xì)胞。相反，LPS組粘附于小 靜脈壁的白細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行性增加并和時(shí)間呈現(xiàn)線性關(guān)系，LPS注射后20分鐘為5.0 ± 0.8 cells/200 jitm，而在60分鐘時(shí)高達(dá)12.7 ± 1.4 cells/200/mi。 PNS后處理30分 鐘顯著改善了 LPS誘導(dǎo)的白細(xì)胞對(duì)血管壁的粘附。 ",丈欲層微對(duì)照組脫顆粒的肥大細(xì)胞的百分比為23.91±5.21%，代表本試驗(yàn)中自發(fā)發(fā)生脫 顆粒的肥大細(xì)胞。注射LPS60分鐘之后脫顆粒的肥大細(xì)胞增加到51.20士 5.86%。 PNS后處理顯著地抑制了LPS誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒，其值達(dá)到了23.96 ± 6.12 %。3.S^絲教潘應(yīng)搭厥分f CD/乃浙CD7S游表這對(duì)照組CDllb和CD18的值分別是27.36士2.33禾B 44.31 ±4.09。 LPS刺激之后 CDllb和CD18的熒光強(qiáng)度被明顯提高，其值分別達(dá)到和54.98 ± 4.14和65.83 ± 4.12。 PNS后處理抑制了CDllb的熒光強(qiáng)度，但是對(duì)于LPS誘導(dǎo)的CD18表達(dá)沒有影響。3.P應(yīng),雄鮮濃度對(duì)照組，TNF-a IL-6 and INF々的濃度分別是17.68 ± 2.64， 22.01 ± 4.60和 1.91 ± 0.1 ng/L。 LPS刺激之后所有測定的細(xì)胞因子都迅速升高了，分別達(dá)到了 252.22 ± 64.10, 647.83 ± 182.80和2.63 ± 0.11 ng/L。 PNS后處理顯著的抑制IL-6 和INF々的產(chǎn)生，在一定程度上改善了TNF-a的釋放，但沒有達(dá)到顯著水平。本試驗(yàn)的結(jié)果顯示在LPS注射之后20分鐘運(yùn)用PNS后處理對(duì)于以上提到的每 一個(gè)LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生改變的效果是，能夠顯著的減少粘附于小靜脈壁白細(xì)胞的數(shù) 目、脫顆粒的肥大細(xì)胞的數(shù)目以及中性粒細(xì)胞CDllb的表達(dá)以及LPS誘導(dǎo)的血漿 IL-6, INF-7濃度，這些結(jié)果顯示運(yùn)用PNS后處理能夠改善PNS誘導(dǎo)的白細(xì)胞的粘 附，能夠改善在本試驗(yàn)條伴之下LPS誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙。這個(gè)發(fā)現(xiàn)提示，在敗血 癥或感染性休克發(fā)生之后使用本發(fā)明的藥物治療將會(huì)有作用?？傊?，我們的試驗(yàn)顯示PNS后處理能夠通過抑制白細(xì)胞粘附于血管壁、肥 大細(xì)胞脫顆粒和細(xì)胞因子的釋放來改善LPS誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙。這些結(jié)果為LPS 誘導(dǎo)的敗血癥的臨床治療提供了一個(gè)新的可供選擇的方法。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1片劑處方三七皂苷100g 硫酸鈣150g 微晶纖維素50g 微粉硅膠3g 硬脂酸鎂1.5g制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷、硫酸鈣、微晶纖維素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，6(TC干燥， 取出，過30目篩整粒，加入微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成1000片，即得。實(shí)施例處方三七皂苷75g 硫酸鈣112g 微晶纖維素37g 微粉硅膠2.3g 硬脂酸鎂l.lg制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷、硫酸鈣、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，6(TC干燥， 取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制 成1000片，即得。實(shí)施例處方三七皂苷133g 硫酸鈣200g 微晶纖維素66g 微粉硅膠4g 硬脂酸鎂2g制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷、硫酸鈣、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，6(TC干燥， 取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制 成1000片，即得。 實(shí)施例4 膠囊取三七皂甙50g，加入適量淀粉，硬脂酸鎂等輔料，制粒，整粒，裝入1號(hào)膠囊，即得。實(shí)施例5口服液取三七皂甙5g，加入適量蔗糖，防腐劑，加水到1000ml，分裝成10ml—支，即得口服液。實(shí)施例6顆粒劑取三七皂甙50g,加入適量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分裝，即得。實(shí)施例7 注射劑三七皂甙50g加水溶解，另氯化鈉、對(duì)羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻，調(diào) pH值。注射用水稀釋至1000ml,用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。 實(shí)施例8應(yīng)用實(shí)例，敗血癥的治療 典型病例患者王XX，男性，45歲，公務(wù)員，有頭痛、惡心、嘔吐、腹脹、腹痛、周 身不適、肌肉及關(guān)節(jié)疼痛等，經(jīng)診斷為敗血癥開始注射三七皂甙注射液，規(guī)格0.1g/支，每日三次每次3支。半月后自覺 癥狀有明顯好轉(zhuǎn)。用藥期間無任何不良反應(yīng)。
權(quán)利要求
1、三七皂甙在制備一種治療敗血癥的藥物中的應(yīng)用。
2、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述敗血癥是致病菌或條件致病菌侵入血 循環(huán)中生長繁殖，產(chǎn)生毒素和其他代謝產(chǎn)物所引起的急性全身性感染。
3、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述敗血癥引發(fā)微循環(huán)障礙，該微循環(huán)障 礙是由LPS的過度釋放造成的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。
4、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述治療敗血癥是通過使用三七皂甙抑制 LPS誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞的脫顆粒。
5、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述治療敗血癥是通過使用三七皂甙后抑 制LPS誘導(dǎo)的血漿IL-6和INF- Y濃度的升高。
6、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述治療敗血癥是通過使用三七皂甙抑制 LPS導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞CDllb表達(dá)的提高。
7、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述三七皂甙是三七總皂甙。
8、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述三七總皂甙符合以下標(biāo)準(zhǔn) 干燥失重 《5%灼熱殘?jiān)?《0.5%人參皂甙Rbl 》30% 人參皂甙Rgl >20% 總皂甙含量 》88%。
9、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述三七皂甙是含有三七皂甙的藥物制劑 組合物。
10、 權(quán)利要求9的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物制劑組合物，以三七皂甙作為藥 物活性成分，同時(shí)含有藥物可接受的載體，其中三七皂甙在制劑中所占重量百分 比是0. 1-99. 9%，其余為藥物可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及三七皂甙治療敗血癥的應(yīng)用，特別涉及三七總皂苷在治療和/或預(yù)防敗血癥的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/704GK101327235SQ20071011127
公開日2008年12月24日 申請(qǐng)日期2007年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月21日
發(fā)明者劉育英, 凱 孫, 楊繼英, 王傳社, 韓晶巖 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司