專(zhuān)利名稱(chēng)：：預(yù)防及治療糖尿病的中藥有效部位組合物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥和天然藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種預(yù)防及治療糖尿病的中藥有效部位組合物及其制備和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一組由于遺傳和環(huán)境因素相互作用，胰島素相對(duì)或絕對(duì)缺乏以及靶組織對(duì)胰島素敏感性降低(胰島素抵抗)引起的碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)代謝紊亂的綜合征，是一種以持續(xù)高血糖為特征的、慢性、全身性代謝性疾病。起病后若未得到有效治療，隨著病程的延長(zhǎng)，可出現(xiàn)廣泛的微血管及大血管病變，出現(xiàn)神經(jīng)、泌尿、循環(huán)等多系統(tǒng)的病理改變。糖尿病主要分i型和n型兩種。前者亦稱(chēng)胰島素依賴(lài)型糖尿病，其病理特征為胰島e細(xì)胞被破壞，臨床上通常表現(xiàn)為胰島素的絕對(duì)缺乏，這類(lèi)糖尿病患者必須用胰島素治療；后者則稱(chēng)非胰島素依賴(lài)型糖尿病，臨床上則表現(xiàn)為胰島素抵抗為主伴胰島素相對(duì)缺乏，或胰島素分泌不足為主伴有胰島素抵抗，這類(lèi)患者一般不需用胰島素治療，僅用飲食調(diào)節(jié)加用口服降糖藥物即可控制血糖。在我國(guó)糖尿病患者中，I型僅占糖尿病患者的5.6%，II型則占93.7%。糖尿病屬中醫(yī)"消渴"范疇。目前，全球已診斷為糖尿病患者已達(dá)2億人，其并發(fā)癥引起的死亡率在世界發(fā)達(dá)國(guó)家中居心腦血管病、癌癥之后的第三位，引起了世界各國(guó)的高度重視。近年來(lái)，隨著我國(guó)城市化進(jìn)程的加速，食物結(jié)構(gòu)的改變，生活節(jié)奏的加快，糖尿病發(fā)病率亦呈快速增長(zhǎng)，極大影響了人們的正常生活，嚴(yán)重威脅著人們的身心健康。據(jù)權(quán)威部門(mén)抽査報(bào)道，我國(guó)的糖尿病發(fā)病人群已超過(guò)3800萬(wàn)人，為總?cè)丝诘?%左右。由于其病因尚未闡明，目前仍無(wú)根治藥物?，F(xiàn)市場(chǎng)上雖已有多種治療糖尿病的藥物，如磺酰脲類(lèi)、雙胍類(lèi)藥物和a-葡萄糖苷酶抑制劑等合成藥，消渴丸等中西合用藥，金芪降糖片，降糖舒膠囊等純中藥制劑，但均因?yàn)榇嬖诿黠@的毒副作用或療效有限而未達(dá)到令臨床醫(yī)生和患者都滿(mǎn)意的療效。我們認(rèn)為，糖尿病作為一種內(nèi)分泌代謝紊亂性慢性疾病，更適合按照中醫(yī)的理念，采用中醫(yī)中藥方法進(jìn)行治療。祖國(guó)醫(yī)學(xué)在治療糖尿病方面有著悠久的歷史，在眾多的醫(yī)書(shū)和民間中隱藏著不少療效確切、表本兼治的寶貴處方，雖然受限于當(dāng)時(shí)的科學(xué)技術(shù)水平，其中有不盡完善之處，但隨著現(xiàn)代科學(xué)的高速發(fā)展、研究手段的不斷提高，從中藥或民間草藥中整理、發(fā)掘療效確切、安全性好的防治糖尿病的處方，并在此基礎(chǔ)上將其研發(fā)成為現(xiàn)代藥物制劑己成為可能。所以，研究注重治本、標(biāo)本兼治、或以調(diào)節(jié)機(jī)體整體平衡為特色的預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的中藥驗(yàn)方或民間秘方，并在此基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代技術(shù)和手段，提取其中各個(gè)活性部位進(jìn)行藥效活性篩選和安全性評(píng)估，根據(jù)不同活性部位對(duì)療效的協(xié)同作用進(jìn)行科學(xué)組方，進(jìn)而開(kāi)發(fā)成具有鮮明療效特點(diǎn)、以中藥有效部位群為物質(zhì)基礎(chǔ)的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑，已成為現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑研發(fā)的方向之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展具有明顯的治療和預(yù)防作用的中藥有效部位組合物及其制備和應(yīng)用。本發(fā)明針對(duì)影響糖尿病發(fā)生、發(fā)展以及誘導(dǎo)其并發(fā)癥產(chǎn)生的諸多因素，以顯示有確切療效的中醫(yī)專(zhuān)家的臨床核心處方(該處方并未公開(kāi))為對(duì)象，用現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)藥理為手段進(jìn)行主要藥效學(xué)驗(yàn)證，在此基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)組方成分分析，活性組分提取，同時(shí)對(duì)各組分的藥效活性、配伍特點(diǎn)進(jìn)行多輪次的實(shí)驗(yàn)分析和綜合評(píng)估，篩選出一組符合中醫(yī)臨床實(shí)際、顯示有顯著療效的由中藥有效部位群按一定比例組合的組合物。本發(fā)明一方面提供了一種中藥有效部位組合物，該組合物包括葛根總黃酮與黃柏總生物堿，以組合物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的實(shí)際含量之和的重量百分比為30%99%，其中，葛根素占組合物重量的544%，小檗堿占組合物重量的350%。優(yōu)選，以組合物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的實(shí)際含量之和的重量百分比為33%80%，其中，葛根素占組合物重量的6%25%，小檗堿占組合物重量的3%26%。該組合物對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展具有明顯的治療和預(yù)防作用。相對(duì)單用葛根總黃酮或黃柏總生物堿而言，其活性作用更強(qiáng)。較佳的，上述組合物中，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:0.110。在一優(yōu)選例中，總黃酮與總生物堿的重量比例為1:0.14，更佳的為l:0.32.7，最佳的為l:0.31。上述中藥有效部位組合物即可僅由葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物組成，也可包括其它具有預(yù)防或治療II型糖尿病或其并發(fā)癥效果的活性物質(zhì)，活性物質(zhì)包括從其它中藥和天然植物中提取得到的具有預(yù)防或治療II型糖尿病或其并發(fā)癥效果的有效部位和/或有效成分，如鬼箭羽提取物，匙羹藤提取物，苦瓜提取物，南瓜提取物，魔芋提取物，黃芪提取物，石斛提取物，或者還包括具有預(yù)防或治療II型糖尿病或其并發(fā)癥效果的化學(xué)合成品、半合成品以及稀有元素，如有機(jī)鉻。在另一優(yōu)選例中，組合物中還含有鬼箭羽水溶性提取物，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量之和與鬼箭羽水溶性提取物的重量比為1:0.15，更佳的1:0.21，最佳的1:0.30.5。本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了一種上述中藥有效部位組合物的制備方法，包括如下步驟:取藥材葛根和黃柏，將藥材破碎或切成塊狀或絲狀并按葛根和黃柏的重量比為h0.24混合，用2095%乙醇液提取13次，提取液分別上大孔樹(shù)脂，以2095%的乙醇水溶液洗脫，收集、合并洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品葛根總黃酮與黃柏總生物堿的組合物本發(fā)明的第三方面，提供了另一種上述中藥有效部位組合物的制備方法，包括如下步驟a)將藥材葛根破碎或切成塊狀或絲狀，分別用2095%乙醇液提取13次。b)將步驟a所得的葛根提取液濃縮，濃縮液上大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附12小時(shí)，用38倍柱體積的水洗脫，棄去，再用47倍柱體積的2095%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品葛根總黃酮，以葛根提取物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮的重量百分比為50%99%，其中葛根素的重量百分比為7%70%。c)將藥材黃柏破碎或切成塊狀或絲狀，用酸水浸泡820小時(shí)，或用20%或40%或70%乙醇液分次提取。d)將步驟c所得的黃柏提取液濃縮，選用dl、d2、d3、d4方法中的一種進(jìn)行純化。以黃柏提取物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，所得的黃柏總生物堿的重量百分比為50%99%，其中小檗堿的重量百分比為4%60%。dl)鹽析純化法在黃柏提取液濃縮液中加入Ca(OH)2使其pH至811，靜置，過(guò)濾后濾液調(diào)pH至12(可用HC1調(diào)節(jié))，加入NaCl，放置，抽濾，沉淀用水洗至pH為5，重結(jié)晶，干燥得成品黃柏總生物堿。較佳的，本步驟開(kāi)始時(shí)將黃柏提取液濃縮至相當(dāng)于生藥量的1020X時(shí)再加入Ca(OH)2。d2)大孔樹(shù)脂吸附純化法將黃柏提取液濃縮液上大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附12小時(shí)，用38倍柱體積水洗脫，棄去，再用57倍柱體積2095%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品黃柏總生物堿。d3)乙醇沉淀純化法將黃柏提取液濃縮至膏狀，膏體相對(duì)密度為1.051.25，再加入乙醇沉淀，過(guò)濾，干燥得成品黃柏總生物堿。d4)離子交換樹(shù)脂純化法在黃柏提取液濃縮液內(nèi)加入鹽酸，使其pH至l3，過(guò)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，用水洗至流出液近無(wú)色，棄水洗液，用1.52.5ml/l氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品黃柏總生物堿；e)將步驟b獲得的葛根總黃酮與步驟d獲得的黃柏總生物堿重量比l:0.14混合均勻，即獲得由葛根總黃酮與黃柏總生物堿組成的組合物。上述步驟中，酸水即指用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸調(diào)配制成的酸性水溶液，如0.2%1%硫酸水或鹽酸水，或0.5%1.5%酒石酸水或檸檬酸水。本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供了上述中藥有效部位組合物的用途，即該組合物可用于制備預(yù)防和治療II型糖尿病的藥用制劑或功能食品添加劑。本發(fā)明的組合物可以通過(guò)常規(guī)方法制成任何常規(guī)的制劑形式，包括口服制劑，也包括胃腸外給藥制劑。優(yōu)選的是片劑，膠囊劑，顆粒劑，糖漿劑，透皮吸收劑以及噴霧劑。本發(fā)明的第五方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的前述中藥有效部位組合物及藥學(xué)上可接受載體，所述中藥有效部位組合物與藥學(xué)上可接受載體的總重量比例為l:0.110。藥學(xué)上可接受的載體為各種藥學(xué)上常用的輔料和/或賦形劑，包括(但不限于)糖類(lèi)，如乳糖、葡萄糖和蔗糖，淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉，纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和甲基纖維素，黃蓍膠粉末，麥芽，明膠，滑石，固體潤(rùn)滑劑，如硬脂酸和硬脂酸鎂，硫酸鈣，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可油，多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇，海藻酸，乳化劑，如Tween;潤(rùn)濕劑，如月桂基硫酸鈉，著色劑，調(diào)味劑，壓片劑、穩(wěn)定劑，抗氧化劑，防腐劑，無(wú)熱原水，等滲鹽溶液和磷酸鹽緩沖液等，這些物質(zhì)根據(jù)需要用于幫助配方的穩(wěn)定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情況下產(chǎn)生可接受的口感或氣味。除另有說(shuō)明外，本發(fā)明的部分術(shù)語(yǔ)的定義如下葛根葛根或其原藥材，是指豆科多年生落葉藤本植物葛根Puerarialobata(Willd.)Ohwi.或甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根，或由豆科植物葛根的干燥樹(shù)皮制作的中藥飲片。葛根亦名干葛(《閻氏小兒方論》)、甘葛(《滇南本草》)、粉葛(《草木便方》)等。葛根味甘、辛，性平。入脾、胃經(jīng)。具有發(fā)表解肌、升陽(yáng)透疹、解熱生津、除煩止渴等功能，主治溫?zé)?、煩熱消渴、泄瀉、痢疾、高血壓、心絞痛等癥。本發(fā)明在使用時(shí)可以將其破碎或切成塊狀或絲狀，以便于提取。黃柏黃柏或其原藥材，是指蕓香科落葉喬木植物黃皮樹(shù)(川黃柏)PhellodendronchinenseSchneid.或黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹(shù)皮，或由蕓香科植物黃皮樹(shù)或黃檗的干燥樹(shù)皮制作的中藥飲片。前者習(xí)稱(chēng)"川黃柏"，后者習(xí)稱(chēng)"關(guān)黃柏"。黃柏亦名檗木(《本經(jīng)》)、檗皮(《傷寒論》)、黃檗(《本草經(jīng)集注》)等。黃柏味苦，性寒。入腎、膀胱經(jīng)。具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱等功能，主治熱痢、泄瀉、消渴、黃疸等癥。本發(fā)明在使用時(shí)可以將其破碎或切成塊狀或絲狀，以便于提取。葛根總黃酮即指從葛根原藥材中提取純化而獲得的黃酮類(lèi)物質(zhì)的總和。葛根中的黃酮類(lèi)物質(zhì)包括葛根素(puerarin)、大豆甙(daidin)、大豆甙元(daidzein)、葛根素木糖甙(Puerarin-xyloside)、大豆黃酮(Daidzein)、大豆黃酮武(Daidzin)及尿囊素(Allantoin)、6-谷甾醇(e-Sitosterol)、胡蘿卜武(Daucosterol)、6，7-二甲氧基香豆素(6,7-Dime-thoxycoumarin)、5-甲基海因(5-Methylhydan-toin)、花生酸(Arachidicacid)、葛根醇(Puerarol)、葛根藤素(Kakkouein)及異黃酮甙等多種，葛根總黃酮中各種黃酮類(lèi)成分的組成比例因藥材產(chǎn)地及提取或純化條件參數(shù)的選擇差異略有不同。本發(fā)明中葛根總黃酮提取物包含葛根總黃酮，葛根總黃酮含量以重量百分比表示不低于總提取物的30%。黃柏總生物堿即指從黃柏原藥材中提取純化而獲得的生物堿類(lèi)物質(zhì)的總和。黃柏中的生物堿類(lèi)物質(zhì)包括小檗堿(berberine)、藥根堿(jatrorrhizine)、黃柏堿(phellodedrine)、木蘭花堿(Magnoflorine)、掌葉防己堿(巴馬亭，Palmatine)、N-甲基大麥芽堿(Candicine)、蝙蝠葛堿(Menisperine)等多種，黃柏總生物堿中各種生物堿類(lèi)成分的組成比例因藥材產(chǎn)地及提取或純化條件參數(shù)的選擇差異略有不同。本發(fā)明中黃柏總生物堿提取物包括黃柏總生物堿，黃柏總生物堿含量以重量百分比表示不低于總提取物的30%。本發(fā)明中，乙醇的百分含量均為體積百分含量(V/V)。本發(fā)明的組合物可以按常規(guī)方法在臨床上使用，例如口服。在使用組合物時(shí)，按黃柏總生物堿與葛根總黃酮的總重量計(jì)，通常每人每天給藥量至少0.8g，而且在大多數(shù)情況下不超過(guò)20g，較佳的該劑量約L210g，最佳的是1.87.2g。當(dāng)然，具體劑量還得考慮給藥途徑、病人個(gè)體狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。藥效和毒理研究結(jié)果表明，本發(fā)明的組合物具有明顯的降糖作用，其藥效活性明顯優(yōu)于組合物中各單味藥材提取物使用者，且安全無(wú)明顯毒副反應(yīng)。根據(jù)該組合物的作用機(jī)理及其活性強(qiáng)度，有望將其研發(fā)成新型的II型糖尿病的防治藥。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。本發(fā)明各測(cè)定方法如下小檗堿的高效液相色譜含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-O.1%磷酸溶液(50:50)(每100ml加十二烷基磺酸鈉0.lg)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在IO(TC干燥5小時(shí)的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每ml含O.lmg的溶液，即得。供試品溶液的制備取待測(cè)樣品適量，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相80ml，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)40分鐘，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液5ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得?？偵飰A含量測(cè)定_酸堿滴定法測(cè)定方法精密稱(chēng)取樣品3mg，加lmo1/1氫氧化鈉溶液0.5ml，置分液漏斗中，用氯仿10ml、10ml、5ml、5ml提取4次，合并氯仿液，置具塞錐形瓶中，精密加0.01mol/l硫酸滴定液10ml及新沸過(guò)的冷水10ml，充分振搖，加茜素磺酸鈉指示液12滴，用0.02mol/l氫氧化鈉滴定液滴定至淡黃色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。葛根素的高效液相色譜含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(25:75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。理論塔板數(shù)按葛根素計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品10mg，置25ml量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，即得(每lml中含葛根素80ug)。供試品溶液的制備取待測(cè)樣品適量，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得?？傸S酮含量測(cè)定一分光光度法對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在12(TC減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml容暈瓶中，加70。/。乙醇70ml，于水浴上微熱使溶解，放冷,加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每lral含無(wú)水蘆丁0.2mg)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別置于10ml量瓶中，各加水至3ml，加pH4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液2ml，0.lmol/L三氯化鋁溶液2ml，搖勻，力口70%乙醇至刻度，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，在270nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定方法取組合物250mg，于5(TC減壓干燥2小時(shí)，精密稱(chēng)定，置50ml容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取0.5ml，置10ml容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自"加水至3ml"起依法測(cè)定吸收度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中相當(dāng)于盧丁的總黃酮重量(mg)，計(jì)算，即得。實(shí)施例l:葛根提取物的制備提取將藥材葛根100kg粉碎或切成塊狀后置于提取罐中，用79倍量的40%乙醇液分別提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，并行濃縮；純化加熱水(8(TC以上)將葛根濃縮液溶解，離心，取澄清液上已處理符合要求的大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附2小時(shí)，用5倍柱體積量的水洗脫，棄洗脫液，用6.5倍柱體積量的50%乙醇洗脫，再用4倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集、合并兩次洗脫液。濃縮與干燥減壓回收乙醇，減壓濃縮、真空干燥、粉碎得干浸膏粉6.3kg，其中，葛根總黃酮的重量占提取物干浸膏粉重量的94.3%，葛根素的重量占提取物干浸膏粉重量的27.8%。實(shí)施例2:黃柏提取物1的制備提取將藥材黃柏100kg切絲，加10倍藥材體積量的70%乙醇提取1.5小時(shí)，藥渣加8倍藥材體積量的70%乙醇再提取1小時(shí)，合并提取液。純化采用大孔樹(shù)脂吸附純化法。減壓回收乙醇，提取液濃縮至150升，離心，上清液上大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附2小時(shí)，先用5倍柱體積量水洗脫，棄洗脫液，再用6.5倍柱體積量的50%乙醇洗脫，再用4倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集、合并兩次洗脫液。濃縮與干燥將洗脫液減壓回收乙醇，減壓濃縮、真空干燥、粉碎得干浸膏粉5.8kg，其中，黃柏總生物堿的重量占提取物干浸膏粉重量的90.7%，小檗堿的重量占提取物干浸膏粉重量的32.9%。實(shí)施例3:黃柏提取物2的制備提取將藥材黃柏100kg切絲，加10倍藥材體積量的70%乙醇提取1.5小時(shí)，藥渣加8倍藥材體積量的70%乙醇再提取1小時(shí)，合并提取液。純化采用鹽析純化法，減壓回收乙醇，在提取濃縮液中加入Ca(0H)2使其pH至911，靜置，過(guò)濾后濾液用HC1調(diào)pH至2，加入NaCl，放置24h，抽濾、收集析出部分(總生物堿)。干燥析出部分(濾餅)真空干燥，粉碎，得干浸膏粉2.7kg，其中，黃柏總生物堿的重量占提取物干浸膏粉重量的91.3%，小檗堿的重量占提取物干浸膏粉重量的34.9%。實(shí)施例4:黃柏提取物3的制備提取將藥材黃柏100kg切絲，加10倍藥材體積量的70%乙醇提取1.5小時(shí)，藥渣加8倍藥材體積量的70%乙醇再提取1小時(shí)，合并提取液。純化采用乙醇沉淀純化法。減壓回收乙醇，濃縮提取液至膏狀，加入95%乙醇，使得乙醇含量達(dá)到80%。攪拌，沉淀，過(guò)濾，濃縮與干燥將過(guò)濾液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉2.7kg，其中，黃柏總生物堿的重量占提取物干浸膏粉重量的84.1%，小檗堿的重量占提取物干浸膏粉重量的23.3%。實(shí)施例5:葛根和黃柏合提提取物1的制備提取將藥材葛根20kg和黃柏80kg破碎或切成絲狀，用10倍藥材體積量的70%乙醇液分三次提取，每次1小時(shí)，合并提取液。純化減壓回收乙醇，減壓濃縮提取液至150升，離心，上清液上大孔樹(shù)脂。預(yù)吸附2小時(shí)，先用5倍柱體積量水洗脫，棄洗脫液，再用6.5倍柱體積量的50%乙醇洗脫，再用4倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集、合并兩次洗脫液。濃縮與千燥將洗脫液減壓濃縮，真空千燥，粉碎，得干浸膏粉4.3kg，其中，葛根總黃酮的重量占提取物干浸膏粉重量的21.8%，黃柏總生物堿的重量占提取物干浸膏粉重量的58.8%，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:2.7。實(shí)施例6:葛根和黃柏合提提取物2的制備提取將藥材葛根56kg和黃柏44kg破碎或切成絲狀，用10倍藥材體積量的40%乙醇液分三次提取，每次1.5小時(shí)，合并提取液。純化減壓回收乙醇，減壓濃縮提取液至150升，離心，上清液上大孔樹(shù)脂。預(yù)吸附2小時(shí)，先用5倍柱體積量水洗脫，棄洗脫液，再用6.5倍柱體積量的50%乙醇洗脫，再用4倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集、合并兩次洗脫液。濃縮與干燥將洗脫液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉14.5kg，其中，葛根總黃酮重量占提取物干浸膏粉重量的29.5%，黃柏總生物堿重量占提取物干浸膏粉重量的21.6%，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:0.73。實(shí)施例7:葛根和黃柏合提提取物3的制備提取將藥材葛根80kg和黃柏20kg破碎或切成絲狀，用10倍藥材體積量的20%乙醇液分三次提取，每次1.5小時(shí)，合并提取液。濃縮與干燥將提取液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉21.2kg，其中，葛根總黃酮重量占提取物干浸膏粉重量的26.0%，黃柏總生物堿重量占提取物干浸膏粉重量的6.5%,葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:0.25。實(shí)施例8:鬼箭羽提取物的制備將藥材鬼箭羽100kg破碎或切成塊狀，先后用10倍、8倍藥材體積量的水煎煮兩次，首次1.5小時(shí)，再次1小時(shí)，合并兩次煎出液，減壓濃縮、真空干燥、粉碎，得干浸膏粉6.6kg。實(shí)施例9:藥物組合物片劑的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>按照通常片劑的操作，提取物與其他輔料采用等量遞加混合法混合均勻，采用濕法制粒，烘干后整粒，加入硬脂酸鎂混合均勻后，壓片，包衣，制成250mg/片。實(shí)施例10:藥物組合物膠囊的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>按照通常膠囊的操作，以等量遞加混合法將提取物與玉米淀粉和糊精等輔料混合均勻，制粒，以硬脂酸鎂作為潤(rùn)滑劑，選用1號(hào)膠囊，將藥物填充、封口即得。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>按照通常氣霧劑的操作進(jìn)行。首先用乙醇和蒸餾水將提取物制成溶液，分裝于氣霧劑容器，安裝閥們，軋緊封帽后，沖裝拋射劑Fu，搖勻，即得。實(shí)施例14:葛根或黃柏有效部位提取物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響1.受試物提取物1:實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物；提取物2:實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物。將實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物和實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物分別置研缽中研細(xì)研勻，加0.5MCMC(羧甲基纖維素鈉)溶液配制成所需濃度的藥液，備用。陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸苯乙雙胍片(降糖靈)白色片劑，100片/瓶，25mg/片，山東省莒南制藥廠產(chǎn)品，批號(hào):030405。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重2425g,由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠詞養(yǎng)。飼養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。3.測(cè)試儀器MediSenseOptiuni"安妥"血糖/血酮儀美國(guó)雅培制藥有限公司產(chǎn)品；檢測(cè)試紙同公司產(chǎn)品，批號(hào)52949。4.試驗(yàn)方法ICR小鼠，腹腔注射鏈脲酶素150mg/kg制備高血糖模型，72小時(shí)后，于眼眶靜脈處取血，測(cè)定血糖，然后從模型構(gòu)建成功的小鼠中選取64只，按血糖值及體重將其均勻分成8組，每組8只。其中，受試物用藥組分別以低、中、高三種劑量灌服提取物1或提取物2，陽(yáng)性對(duì)照組灌服鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，模型對(duì)照組灌服同容積蒸餾水20ml/kg。給藥后1、3hr時(shí)，同前法取血，檢測(cè)并比較各組模型動(dòng)物的血糖值。5.試驗(yàn)結(jié)果灌胃給小鼠葛根總黃酮提取物4000mg/kg、黃柏總生物堿提取物400mg/kg、鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，對(duì)模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表l。6.試驗(yàn)小結(jié)給小鼠灌服葛根總黃酮提取物4000mg/kg或黃柏總生物堿提取物400mg/kg，結(jié)果對(duì)鏈尿霉素模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用。7.試驗(yàn)結(jié)論葛根總黃酮提取物或黃柏總生物堿提取物均具有一定的治療高血糖的作用。表1口服不同劑量葛根或黃柏有效部位提取物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響(Mean士SD，N=8)組別劑量血糖值(ramo1/1)(mg/kg)0hlh3h100018.8±3.118.0±2.417.6±1.8提取物l200018.8±3.116.6±2.516.7±2.3400018.8±2.916.2±1.9*15.3±2.2*10018.8±3.317.6±2.416.9±2.1提取物220018.8±2.616.0土3.915.5±4.240018.8±2.915.4±2.5*15.0±2.6*降糖靈7518.8±2.613.6±3.0**11.9±3.6**模型對(duì)照18.8±3.018.6±2.417.9±2.4*P<0.05，**P<0.01，與模型對(duì)照比實(shí)施例15:葛根和黃柏有效部位提取物組合物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響1.受試物組合物1:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為1:4。組合物2:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為3:2。組合物3:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為4:1。組合物4:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為9:1。組合物5:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為19:1。將實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物和實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物按上述比例混合，置研缽中研細(xì)研勻，加0.5y。CMC溶液配制成所需濃度的藥液，備用。陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸苯乙雙胍片(降糖靈)白色片劑，100片/瓶，25mg/片，山東省莒南制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)030405。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重2328g，由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。3.測(cè)試儀器MediSense0ptium"安妥"血糖/血酮儀美國(guó)雅培制藥有限公司產(chǎn)品；檢測(cè)試紙同公司產(chǎn)品，批號(hào)52949。4.試驗(yàn)方法ICR小鼠，腹腔注射鏈脲酶素150mg/kg制備高血糖模型，72小時(shí)后，于眼眶靜脈處取血，測(cè)定血糖，然后從模型構(gòu)建成功的小鼠中選取56只，按血糖值及體重將其均勻分成7組，每組8只。其中，受試物用藥組分別按表1灌服組合物藥方，陽(yáng)性對(duì)照組灌服鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，模型對(duì)照組灌服同容積蒸餾水20ml/kg。給藥后1、3hr時(shí)，同前法取血，檢測(cè)并比較各組模型動(dòng)物的血糖值。5.試驗(yàn)結(jié)果灌胃給小鼠組合物l、2、3、4方1000mg/kg、鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，對(duì)模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用(P〈0.05或P<0.01)。見(jiàn)表2。6.試驗(yàn)小結(jié)給小鼠灌服葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物的組合物，兩者的重量比為1:4-0.05，結(jié)果表明，在相同劑量范圍內(nèi)，葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物兩者的重量比在1:4-0.1范圍內(nèi)時(shí)，其各劑量配比的組合物對(duì)鏈尿霉素模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用。7.試驗(yàn)結(jié)論葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物的組合物具有一定的治療高血糖的作用，與單一的葛根總黃酮提取物或黃柏總生物堿提取物相比，兩者的組合物在降血糖上表現(xiàn)出協(xié)同作用，在相同劑量范圍內(nèi)，葛根總黃酮與黃柏總生物堿合適的重量比約為1:0.14。表2口服葛根與黃柏有效部位提取物不同配比之組合物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響(Mean士SD，N=8)組別劑量血糖值(mmo1/1)(mg/kg)0hlh3h組合物l100018.0±2.113.3±4.4*13.7±2.6*組合物2100018.0±3.014.0±2.8*12.1±5.0*組合物3100018.1±3.013.8±3.6*12.9±3.8*組合物4100018.1±2.014.3±2.5*11.9±5.3*組合物5100018.0±2.514.9±6.113.6±7.3降糖靈7518.0±1.914.2±2.9*11.7±4.2*模型對(duì)照18.0±2.717.7±2.216.2±1.6*P<0.05，**P<0.01，與模型對(duì)照比實(shí)驗(yàn)例16:葛根、黃柏合提提取物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響1.受試物受試物l:實(shí)施例5的葛根與黃柏合提提取物，其得率為4.3%，即lg提取物相當(dāng)生藥葛根4.7g，黃柏18.6g(葛根與黃柏的比例為l:4)。在該提取物中，葛根總黃酮為21.8%，黃柏總生物堿為58.8%，兩者比例為l:2.7。受試物2:實(shí)施例6的葛根與黃柏提取物，其得率為14.5V即lg提取物相當(dāng)生藥葛根3.9g，黃柏3.0g(葛根與黃柏的比例為l:0.79)。在該提取物中，葛根總黃酮為29.5°/。，黃柏總生物堿為21.6%，兩者比例為l:0.73。受試物3:實(shí)施例7的葛根與黃柏提取物，其得率為21.2%，即lg提取物相當(dāng)生藥葛根3.77g，黃柏0.94g(葛根與黃柏的比例為l:0.25)。在該提取物中，葛根總黃酮為26.0%，黃柏總生物堿為6.5%，兩者比例為l:0.25。陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸苯乙雙胍片(降糖靈)白色片劑，100片/瓶，25mg/片，山東省莒南制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)030405。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重2227g，由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。詞養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。3.測(cè)試儀器MediSense0ptium"安妥"血糖/血酮儀美國(guó)雅培制藥有限公司產(chǎn)品；檢測(cè)試紙同公司產(chǎn)品，批號(hào)52949。4.試驗(yàn)方法ICR小鼠，腹腔注射鏈脲酶素150mg/kg制備高血糖模型，72hr后，于眼眶靜脈處取血，測(cè)定血糖，然后從模型構(gòu)建成功的小鼠中選取64只，按血糖值及體重將其均勻分成8組，每組8只。其中，受試物用藥組分別灌服受試物1方1000、300mg/kg、受試物2方1000、300mg/kg、受試物3方6000、2000mg/kg、陽(yáng)性對(duì)照組灌服鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，模型對(duì)照組灌服同容積蒸餾水20ml/kg。給藥后l、3hr時(shí)，同前法取血，檢測(cè)并比較各組模型動(dòng)物的血糖值。5.試驗(yàn)結(jié)果灌胃給小鼠受試物1、2方1000mg/kg、受試物3方6000mg/kg、鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，對(duì)模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用(P〈0.05或P<0.01)。見(jiàn)表3。6.試驗(yàn)小結(jié)給小鼠灌服葛根與黃柏以生藥材l:0.254配比合提的提取物，該提取物中總黃酮與總生物堿含量比為1:0.252.7，結(jié)果對(duì)鏈尿霉素模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用。'7.試驗(yàn)結(jié)論葛根與黃柏合提提取物在其總黃酮與總生物堿含量比為1:0.252.7時(shí)具有一定的對(duì)抗高血糖的作用。表3口服葛根與黃柏合提提取物對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響(Mean土SD，N=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>降糖靈7520.4±2.413.1±3.2**11.0±3.1**模型對(duì)照20.3±1.817.5±2.218.0±3.2*P<0.05，**P<0.01，與模型對(duì)照比實(shí)驗(yàn)例17:葛根、黃柏、鬼箭羽提取物的混合物(組合物)對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響1.受試物混合物由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物、實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物、實(shí)施例8的鬼箭羽提取物組合而成，三者的重量比為5:4:3。陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸苯乙雙胍片(降糖靈)白色片劑，100片/瓶，25mg/片，山東省莒南制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)030405。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重2226g，由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。3.測(cè)試儀器MediSense0ptium"安妥"血糖/血酮儀美國(guó)雅培制藥有限公司產(chǎn)品；檢測(cè)試紙同公司產(chǎn)品，批號(hào)52949。4.試驗(yàn)方法ICR小鼠，腹腔注射鏈脲酶素150mg/kg制備高血糖模型，72hr后，于眼睚靜脈處取血，測(cè)定血糖，然后從模型復(fù)制成功的小鼠中選取40只，按血糖值及體重將其均勻分成5組，每組8只。其中，受試物用藥組分別灌服混合物600、300、150mg/kg、陽(yáng)性對(duì)照組灌服鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，模型對(duì)照組灌服同容積蒸餾水20ml/kg。給藥后1、3hr時(shí)，同前法取血，檢測(cè)并比較各組模型動(dòng)物的血糖值。5.試驗(yàn)結(jié)果灌胃給小鼠混合物600、300mg/kg鹽酸苯乙雙胍片75mg/kg，對(duì)模型動(dòng)物的高血糖均具有明顯的降低作用(P〈0.05或P<0.01)。見(jiàn)表4。6.試驗(yàn)小結(jié)葛根總黃酮提取物、黃柏總生物堿提取物與鬼箭羽提取物按一定比例配制而成的混合物(組合物)具有一定的治療高血糖的作用，三者合適的重量比為5:4:3。表4口服葛根、黃柏、鬼箭羽提取物混合物(組合物)對(duì)糖尿病模型動(dòng)物血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>*P<0.05，**P<0.01，與模型對(duì)照比實(shí)驗(yàn)例18:葛根、黃柏合提提取物、或葛根、黃柏、鬼箭羽提取物的混合物(組合物)對(duì)正常動(dòng)物空腹淀粉耐量的影響1.受試物受試物l:實(shí)施例5的葛根與黃柏合提提取物，其得率為4.3%，即lg提取物相當(dāng)生藥葛根4.7g，黃柏18.6g(葛根與黃柏的比例為1:4)。在該提取物中，葛根總黃酮為21.8%，黃柏總生物堿為58.8%，兩者比例為l:2.7?；旌衔镉蓪?shí)施例1的葛根總黃酮提取物、實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物、實(shí)施例8的鬼箭羽提取物組合而成，三者的重量比為5:4:3。陽(yáng)性對(duì)照藥阿卡波糖片(拜糖蘋(píng))鋁塑水泡眼包裝，15片/板，2板/盒，內(nèi)容物為白色或淡黃色片劑，50mg/片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司產(chǎn)品，批號(hào).'104732。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重140150g，由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。3.測(cè)試儀器MediSense0ptium"安妥"血糖/血酮儀美國(guó)雅培制藥有限公司產(chǎn)品；檢測(cè)試紙同公司產(chǎn)品，批號(hào)52949。4.試驗(yàn)方法SD大鼠，空腹12hr，于眼眶靜脈處取血，測(cè)定血糖，然后從符合標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物中選取48只，按血糖值及體重將其均勻分成6組，每組8只。受試物用藥組分別灌服受試物1或混合物400、1200mg/kg、陽(yáng)性對(duì)照組灌服阿卡波糖片200mg/kg，空白對(duì)照組灌服同容積0.5呢CMC蒸餾水溶液10ml/kg。在灌胃給藥的同時(shí)，每只動(dòng)物分別灌服可溶性淀粉2g/kg。在灌服可溶性淀粉后0.5、1、2、6hr時(shí)，同前法取血，檢測(cè)并比較各組模型動(dòng)物的血糖值。5.試驗(yàn)結(jié)果灌胃給SD大鼠受試物1或混合物1200mg/kg、阿卡波糖片200mg/kg，對(duì)空腹灌服淀粉的動(dòng)物血糖升高均具有明顯的抑制作用(P〈0.05或P<0.01)。見(jiàn)表5。6.試驗(yàn)小結(jié)葛根、黃柏合提提取物、或葛根、黃柏、鬼箭羽提取物按一定比例配制而成的混合物對(duì)正常動(dòng)物空腹淀粉負(fù)荷后的血糖均具有一定的降低作用。表5口服葛根、黃柏合提提取物、或葛根、黃柏、鬼箭羽提取物的混合物對(duì)正常動(dòng)物空腹淀粉負(fù)荷糖耐量的影響(Mean士SD，N=8)組別mg/kg血糖含量(,1/1)受試物l混合物拜糖平空白對(duì)照120040012004002000h0.5hl.Oh2.0h6.0h4.70±0.276.29±0.55**6.48±0.62**6.70±0.55*5.84±0.284.71±0.238.14±0.958.00±0.616.90±0.32*5.61±0.464.73±0.255.60±0.62**5.78±0.54**6.75±0.47*5.96±0.764.70±0.317.65±0.46**8.16±0.347.16±0.806.14±0.444.70±0.185.94±1.10**5.65±0.39**6.49±0.60**5.20±1.244.70±0.328.59±0.348.40±0.437.35±0.375.65±0.58*P<0.05，**P<0.01，與空白對(duì)照比實(shí)驗(yàn)例19:葛根總黃酮提取物、黃柏總生物堿提取物及其不同配比組合物的動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)材料1.1受試物提取物1:實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物。提取物2:實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物。組合物1:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為1:4。組合物2:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為3:2。組合物3:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為4:1。組合物4:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為9:1。組合物5:由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物與實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物組合而成，兩者的重量比為19:1。將上述葛根總黃酮提取物、黃柏總生物堿提取物、或二者按一定的比例混合，置研缽中研細(xì)研勻，加0.5%CMC溶液配制成濃度為25%(25g/100ml)的藥液，備用。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雌雄兼用，體重1822g，由中外合資上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。詞養(yǎng)溫度為22±2°C，濕度為6070%，試驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水。2試驗(yàn)方法2.1預(yù)試驗(yàn)以25%的藥液10、20、40ml/kg劑量分別灌服小鼠各10只，雌雄各半，結(jié)果未見(jiàn)動(dòng)物死亡。2.2最大給藥量試驗(yàn)取小鼠20只，雌雄各半，禁食12小時(shí)后先后灌胃給25。/。的^藥液40ml/kg，給藥后自由飲食，即時(shí)及以后每天上、下午各觀察l次，連續(xù)7天，第8天后，每天觀察1次，記錄14天內(nèi)動(dòng)物的死亡狀況及毒性反應(yīng)。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果25%的提取物1、2或25%組合物1、2、3、4、5藥液以40ml/kg劑量給小鼠灌服，在觀察的14天內(nèi)，受試動(dòng)物無(wú)一死亡，且毛色、體重、行為活動(dòng)、食耗量、糞便性狀及分泌物等，均未發(fā)現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)。4試驗(yàn)結(jié)論葛根總黃酮提取物、黃柏總生物堿提取物、以及兩者以重量比l:0.05、1:0.1、1:0.25、1:0.67、1:4配制而成的組合物灌胃對(duì)小鼠的最大給藥量均為10000mg/kg。實(shí)驗(yàn)例20:葛根與黃柏合提提取物對(duì)動(dòng)物急性毒性的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1受試物受試物l:實(shí)施例5的葛根與黃柏合提提取物，其得率為4.3%，即lg提取鉤相當(dāng)生藥葛根4.7g，黃柏18.6g(葛根與黃柏的比例為l:4)。在該提取物中，葛根總黃酮為21.8%，黃柏總生物堿為58.8%，兩者比例為l:2.7。受試物2:實(shí)施例6的葛根與黃柏合提提取物，其得率為14.5%，即lg提取物相當(dāng)生藥葛根3.9g，黃柏3.0g(葛根與黃柏的比例為1:0.8)。在該提取物中，葛根總黃酮為29.5%，黃柏總生物堿為21.6%，兩者比例為l:0.73。受試物3:實(shí)施例7的葛根與黃柏提取物，其得率為21.2%，即lg提取物相當(dāng)生藥葛根3.8g，黃柏0.9g(葛根與黃柏的比例為l:0.25)。在該提取物中，葛根總黃酮為26.0%，黃柏總生物堿為6.5%，兩者比例為1:0.25。將受試物l、2、3置研缽中研細(xì)研勻，加0.5%CMC溶液配制成濃度為25%(25g/100ml)的藥液，備用。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同實(shí)施例19的1.2。2試驗(yàn)方法同實(shí)施例19的2。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果25%的受試物1、2、3藥液以40ml/kg劑量給小鼠灌服，在觀察的14d內(nèi)，受試動(dòng)物無(wú)一死亡，且毛色、體重、行為活動(dòng)、食耗量、糞便性狀及分泌物等，均未發(fā)現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)。4試驗(yàn)結(jié)論葛根與黃柏合提提取物在其總黃酮與總生物堿含量比為1:0.25、1:0.73、1:2.7時(shí)灌胃對(duì)小鼠的最大給藥量均為10000mg/kg。實(shí)驗(yàn)例21:葛根、黃柏、鬼箭羽提取物的混合物(組合物)灌服給藥對(duì)動(dòng)物急性毒性的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1受試物混合物由實(shí)施例1的葛根總黃酮提取物、實(shí)施例2的黃柏總生物堿提取物、實(shí)施例S8的鬼箭羽提取物組合而成，三者的重量比為5:4:3。實(shí)驗(yàn)前，將該混合物置研缽中研細(xì)研勻，加0.5%CMC溶液配制成濃度為25%(25g/100ml)的藥液，備用。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同實(shí)施例19的1.2。2試驗(yàn)方法同實(shí)施例19的2。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果25y。的混合物藥液以40ml/kg劑量給小鼠灌服，在觀察的14d內(nèi)，受試動(dòng)物無(wú)一死亡，且毛色、體重、行為活動(dòng)、食耗量、糞便性狀及分泌物等，均未發(fā)現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)。4試驗(yàn)結(jié)論葛根、黃柏、鬼箭羽提取物以重量比5:4:3配制而成的混合物(組合物)灌胃對(duì)小鼠的最大給藥量為10000mg/kg。權(quán)利要求1.一種中藥有效部位組合物，其特征在于，組合物包括葛根總黃酮與黃柏總生物堿，以組合物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的實(shí)際含量之和的重量百分比為30％～99％，其中，葛根素占組合物重量的5～44％，小檗堿占組合物重量的3～50％。2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥有效部位組合物，其特征在于，以組合物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，所述葛根總黃酮與黃柏總生物堿的實(shí)際含量之和的重量百分比為33%80%，其中，葛根素占組合物重量的625%，小檗堿占組合物重量的326%。3.如權(quán)利要求1所述中藥有效部位組合物，其特征在于，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:0.110。4.如權(quán)利要求3所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量比為1:0.14。5.如權(quán)利要求14中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述組合物由葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物組成。6.如權(quán)利要求14中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述組合物除包括葛根總黃酮提取物與黃柏總生物堿提取物外，還包括從其它中藥和天然植物中提取得到的具有預(yù)防或治療II型糖尿病或其并發(fā)癥效果的有效部位和/或有效成分，或者還包括具有預(yù)防或治療II型糖尿病或其并發(fā)癥效果的化學(xué)合成品、半合成品或稀有元素。7.如權(quán)利要求6所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述其它中藥和天然植物中提取得到的具有預(yù)防或治療n型糖尿病或其并發(fā)癥效果的有效部位和/或有效成分選自鬼箭羽提取物、匙羹藤提取物、苦瓜提取物、南瓜提取物、魔芋提取物、黃芪提取物、石斛提取物中的一種或多種。8.如權(quán)利要求6所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述組合物由葛根總黃酮提取物、黃柏總生物堿提取物和鬼箭羽水溶性提取物組成，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量之和與鬼箭羽水溶性提取物的重量比為1:0.15。9.如權(quán)利要求8所述中藥有效部位組合物，其特征在于，所述葛根總黃酮與黃柏總生物堿的重量之和與鬼箭羽水溶性提取物的重量比為1:0.22。10.—種制備權(quán)利要求19中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物的制備方法，包括如下步驟取藥材葛根和黃柏，將藥材破碎或切成塊狀或絲狀并按葛根和黃柏的重量比為h0.25混合，用2095%乙醇液提取13次，提取液分別上大孔樹(shù)脂，以2095%的乙醇水溶液洗脫，收集、合并洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品葛根總黃酮與黃柏總生物堿的組合物。11.一種制備權(quán)利要求19中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物的制備方法，包括如下步驟a)將藥材葛根破碎或切成塊狀或絲狀，分別用2095%乙醇液提取13次；b)將步驟a所得的葛根提取液濃縮，濃縮液上大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附12小時(shí)，用38倍柱體積的水洗脫，棄去，再用47倍柱體積的2095%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品葛根總黃酮，以葛根提取物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮的重量百分比為50%99%，其中葛根素的重量百分比為7°/。70%;c)將藥材黃柏破碎或切成塊狀或絲狀，用酸水浸泡820小時(shí)，或者用20%或40%或70%乙醇液分次提??；d)將步驟c所得的黃柏提取液濃縮，選用dl、d2、d3、d4方法中的一種進(jìn)行純化。以黃柏提取物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，所得的黃柏總生物堿的重量百分比為50%99%，其中小檗堿的重量百分比為4%60%;dl)鹽析純化法在黃柏提取液濃縮液中加入Ca(OH)2使其pH至811，靜置，過(guò)濾后濾液調(diào)pH至12，加入NaCl，放置，抽濾，沉淀用水洗至pH為5，重結(jié)晶，干燥得成品黃柏總生物堿；d2)大孔樹(shù)'脂吸附純化法將黃柏提取液濃縮液上大孔樹(shù)脂，預(yù)吸附12小時(shí)，用38倍柱體積水洗脫，棄去，再用57倍柱體積2095°/。乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品黃柏總生物堿；d3)乙醇沉淀純化法將黃柏提取液濃縮至膏狀，膏體相對(duì)密度為1.051.25，再加入乙醇沉淀，過(guò)濾，干燥得成品黃柏總生物堿；d4)離子交換樹(shù)脂純化法在黃柏提取液濃縮液內(nèi)加入鹽酸，使其pH至l3，過(guò)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，用水洗至流出液近無(wú)色，棄水洗液，用1.52.5ml/1氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得成品黃柏總生物堿；e)將步驟b獲得的葛根總黃酮與步驟d獲得的黃柏總生物堿按重量比l:0.14混合均勻，即獲得由葛根總黃酮與黃柏總生物堿組成的組合物。12.將權(quán)利要求19中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物用于制備預(yù)防和治療II型糖尿病的藥用制劑或功能食品添加劑。13.如權(quán)利要求12所述中藥有效部位組合物的用途，其特征在于，所述藥用制劑選自口服制劑或胃腸外給藥制劑。14.如權(quán)利要求12所述中藥有效部位組合物的用途，其特征在于，所述藥用制劑選自片劑、膠囊劑、顆粒劑、糖槳?jiǎng)?、透皮吸收劑或噴霧劑。15.—種預(yù)防及治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，藥物組合物含有安全有效量的權(quán)利要求19中任一權(quán)利要求所述中藥有效部位組合物及藥學(xué)上可接受的載體，其中，中藥有效部位組合物與藥學(xué)上可接受載體的總重量比例為1:0.110。全文摘要本發(fā)明涉及中藥和天然藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
。公開(kāi)了一種中藥有效部位組合物，包括葛根總黃酮與黃柏總生物堿，以組合物的總重量為基礎(chǔ)計(jì)，葛根總黃酮與黃柏總生物堿的實(shí)際含量之和的重量百分比為30％～99％，其中，葛根素占組合物重量的5～44％，小檗堿占組合物重量的3～50％。此外，還公開(kāi)了上述中藥有效部位組合物的制備和應(yīng)用。藥效和毒理研究結(jié)果表明，本發(fā)明的組合物具有明顯的降糖作用，其藥效活性明顯優(yōu)于組合物中各單味藥材提取物，且安全無(wú)明顯毒副反應(yīng)。文檔編號(hào)A61K36/756GK101156915SQ20071004660公開(kāi)日2008年4月9日申請(qǐng)日期2007年9月28日優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日發(fā)明者喬正東,崎宋,英宋,張國(guó)明,苗成,朱國(guó)琴,謝家駿申請(qǐng)人:上海雷允上科技發(fā)展有限公司;上海市中藥研究所