專利名稱：一種防治炎癥相關(guān)心腦血管疾病的藥物靶標(biāo)及其抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治炎癥相關(guān)心腦血管疾病的新藥物靶標(biāo)及其抑制劑的醫(yī)藥用途，具體 為非肌肉肌球蛋白重鏈9[nonmuscle myosin heavy chain 9 (MyH9)作為防治炎癥相關(guān)心腦血管 疾病的新藥物靶標(biāo)及其抑制劑魯斯可皂苷元及其苷在防治與腫瘤分化轉(zhuǎn)移、青光眼等疾病的 用途。技術(shù)背景藥物創(chuàng)新研究主要包括兩方面內(nèi)容， 一是化合物創(chuàng)新，即根據(jù)現(xiàn)有靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)新結(jié)構(gòu)類型 活性化合物；二是藥物靶標(biāo)創(chuàng)新，即綜合運(yùn)用化學(xué)生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)、生物信息 學(xué)等方法發(fā)現(xiàn)藥物作用新靶標(biāo)和新作用機(jī)制及相關(guān)的一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。從源頭創(chuàng)新上講， 藥物新耙標(biāo)的發(fā)現(xiàn)比化合物創(chuàng)新更具科學(xué)價(jià)值和實(shí)際意義。目前，隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組 學(xué)、生物信息學(xué)的迅速發(fā)展，以現(xiàn)有藥物或活性化合物，特別是中草藥有效成分或活性天然 產(chǎn)物為探針，尋找與其特異結(jié)合的蛋白或其它生物大分子是后基因組時(shí)代發(fā)現(xiàn)藥物靶標(biāo)的另 一途徑，是近年來(lái)新藥研制的發(fā)展方向和熱點(diǎn)。如抗癌天然藥物紫杉醇的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)和 藥理學(xué)研究，導(dǎo)致抗癌藥物新靶標(biāo)微管蛋白的發(fā)現(xiàn)，引起新一輪抗癌藥物篩選高潮；以辣椒 堿為探針，篩選出非成癮性鎮(zhèn)痛藥物靶標(biāo)，為非成癮性鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)開辟了新方向。我國(guó)具有豐富的中草藥資源，中藥作為中醫(yī)用以防病治病的重要手段，蘊(yùn)涵著豐富的中 醫(yī)理論，與中醫(yī)治則有密切聯(lián)系，其作用特點(diǎn)與作用機(jī)理可能有別于基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論的化 學(xué)藥和西方植物藥，中藥活性成分是其賴以發(fā)揮獨(dú)特作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此利用現(xiàn)代多學(xué)科 交叉技術(shù)，尋找發(fā)現(xiàn)其直接作用的特異性靶點(diǎn)，將有望真正闡釋中藥的作用機(jī)制，并為反映 中醫(yī)藥作用特色的創(chuàng)新藥物研制提供新靶標(biāo)。麥冬是常用代表性滋陰中藥，藥性甘、微苦、微寒，歸胃、肺心經(jīng)，具有養(yǎng)陰生津、清心潤(rùn)肺的功效，臨床應(yīng)用十分廣泛，作為著名古方生脈散、炙甘草湯等的主要組成藥物之一，治療心血管疾病療效確切。發(fā)明人通過(guò)長(zhǎng)期大量的前期研究發(fā)現(xiàn)，麥冬皂苷類成分，即主要以魯斯可皂苷元為母核的苷包括C1或C3位連接葡萄糖、鼠李糖、巖藻糖或阿拉伯糖組成的單糖苷、二糖苷、三糖苷，均具有顯著的抗炎和心腦血管保護(hù)活性，其主要的皂苷元——魯斯可皂苷元部分是其活性作用中心母核，具有顯著抗炎抗血栓活性，強(qiáng)度類似于地塞米松、華法令等，但不影響PGE2釋放、COX-2表達(dá)等，無(wú)華法令易致出血等副反應(yīng)，提示其作用
有別于糖皮質(zhì)激素類藥物和常用口服抗凝血藥。因此，綜合利用多學(xué)科技術(shù)手段，尋找發(fā)現(xiàn) 魯斯可皂苷元在心腦血管疾病相關(guān)組織細(xì)胞中的特異性結(jié)合蛋白，并驗(yàn)證該蛋白功能，有望 發(fā)現(xiàn)與心腦血管疾病等重大疾病相關(guān)的新藥物靶標(biāo)，并發(fā)現(xiàn)魯斯可皂苷元與靶蛋白有關(guān)的新 醫(yī)藥用途。目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。目前尋找藥物靶蛋白的方法主要有親和色譜法、噬菌體展示克隆、酵母三雜交系統(tǒng)、藥 物印跡、DNA芯片技術(shù)、磁性納米探針技術(shù)等，各有優(yōu)缺點(diǎn)。其中親和色譜法是最經(jīng)典的一 種方法。迄今已成功應(yīng)用于秋水仙堿、細(xì)胞松弛素B、 FK506、環(huán)孢菌素、E3330等多種藥物 靶蛋白的搜尋。常見(jiàn)的親和色譜法有固相特異性洗脫法和藥物競(jìng)爭(zhēng)法。但固相特異性洗脫法 易受"親和柱一耙蛋白"復(fù)合體解離速度的影響，而且還須制備無(wú)活性結(jié)構(gòu)類似藥物的對(duì)照柱； 藥物競(jìng)爭(zhēng)法由于蛋白會(huì)隨不溶的藥物沉淀，對(duì)藥物溶解性的要求很高。系列親和色譜法是2006 年報(bào)道的一種新的能克服以上缺點(diǎn)的親和色譜法，至今尚未應(yīng)用于天然化合物的靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明在國(guó)家十一五科技支撐計(jì)劃子課題(2006BAI08BO5)和國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 (30672603)資助下，利用系列親和色譜法發(fā)現(xiàn)了麥冬皂甘類活性成分中心母核魯斯可皂苷 元在心腦血管疾病相關(guān)細(xì)胞、組織中的特異性結(jié)合蛋白，并通過(guò)ESI-MS和 MALDI-TOF-TOF-MS鑒定為非肌肉肌球蛋白重鏈9 (nonmuscle myosin heavy chain 9)(簡(jiǎn) 稱MyH9)。 MyH9又名Nonmuscle myosin heavy chain II A (簡(jiǎn)稱NMHC-IIA)，是由人第22號(hào) 染色體上的MyH9基因編碼的。廣泛分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、T細(xì)胞、 中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞中。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)它在胞內(nèi)能夠與多種蛋白(如Menin、血管緊張素轉(zhuǎn)化 酶、核仁素、p-actin、 NMHC-IIB)結(jié)合。這說(shuō)明非肌肉肌球蛋白重鏈9是一種與生理病理過(guò) 程密切相關(guān)的功能蛋白質(zhì)。目前，研究己證實(shí)MyH9與細(xì)胞黏附和遷移、胞質(zhì)分裂、細(xì)胞器及微粒的轉(zhuǎn)運(yùn)、腫瘤轉(zhuǎn) 移、耳聾等密切相關(guān)，但未見(jiàn)其作為防治心腦血管疾病藥物靶標(biāo)的報(bào)道。Blebbistatin是近年 來(lái)才發(fā)現(xiàn)的一種MyH9的特異性抑制劑，已發(fā)現(xiàn)blebbistatin能可逆地阻斷細(xì)胞起泡，劑量依 賴性地阻斷細(xì)胞移動(dòng)、胞質(zhì)分裂，并能抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移力和侵襲力，降低青光眼的發(fā)生。 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)blebbistatin與魯斯可皂苷元具有類似活性，可顯著抑制腫瘤壞死因子活化的 ECV304細(xì)胞與HL60細(xì)胞黏附和下調(diào)組織因子的活性，并可拮抗魯斯可皂苷元活性的發(fā)揮， 因此可以認(rèn)為MyH9是魯斯可皂苷元及其苷的功能靶蛋白。根據(jù)魯斯可皂苷元對(duì)炎癥相關(guān)心 腦血管疾病的顯著活性，MyH9即可以成為一種新的防治心腦血管疾病的藥物靶標(biāo)；魯斯可 皂苷元及其苷為新結(jié)構(gòu)類型的MyH9抑制劑，提示其將在防治心腦血管與腫瘤轉(zhuǎn)移、青光眼 等與MyH9有關(guān)的疾病具有廣闊應(yīng)用前景。上述所述的炎癥相關(guān)的心腦血管疾病可以是動(dòng)脈粥樣硬化，冠心病、心絞痛、心律失常、 腦梗塞、腦缺血或血栓炎。上述所述的魯斯可皂苷元為母核的苷可以是C1或C3位連接葡萄糖、鼠李糖、巖藻糖或 阿拉伯糖組成的單糖苷、二糖苷或三糖苷。


圖1是RUS-2HS和Rus對(duì)細(xì)胞黏附作用的影響(#V<0.01與對(duì)照組比較；*尸<0.05， **尸<0.01與模型組比較)圖2是RUS-2HS和Ruscogenin對(duì)Lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放NO的影響(##戶<0.01與對(duì)照組比 較，*尸<0.05， **尸<0.01與模型組比較)圖3是RUS-2HS和Ruscogenin對(duì)小鼠急性腦缺氧的影響(*尸<0.05， **P<0.01與對(duì)照組比較) 圖4中A圖是魯斯可皂苷元在正常和炎癥因子活化的ECV304細(xì)胞以及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中 的特異性結(jié)合蛋白的SDS-PAGE-考馬斯亮藍(lán)染色圖譜(M，蛋白分子量標(biāo)記(KD); AI、 Bl、 Cl，第一次作用柱材上的結(jié)合蛋白；A2、 B2、 C2，第二次作用柱材上的結(jié)合蛋白；Al、 A2 為正常ECV304細(xì)胞，Bl、 B2為炎癥狀態(tài)ECV304細(xì)胞，Cl、 C2為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；箭 頭指示MyH9); B圖是用MyH9的抗體對(duì)A圖中相應(yīng)標(biāo)記條帶進(jìn)行Western-Blotting驗(yàn)證 圖5中A圖是魯斯可皂苷元在心腦血管疾病相關(guān)組織中的特異性結(jié)合蛋白(M，蛋白分子量 標(biāo)記(KD); Al、 A2，心臟組織蛋白系列親和色譜結(jié)果；Bl、 B2，腦組織蛋白系列親和色 譜結(jié)果；Cl、 C2，血管組織系列親和色譜結(jié)果；箭頭指示為特異性結(jié)合蛋白)；B圖是用MyH9 的抗體對(duì)A圖中相應(yīng)標(biāo)記條帶進(jìn)行Western-Blotting驗(yàn)證圖6是blebbistatin對(duì)Ruscogenin發(fā)揮抗細(xì)胞黏附作用的影響(##P<0.01與對(duì)照組比較， *尸<0.05，**尸<0.01與模型組比較)圖7是Blebbistatin與Ruscogenin對(duì)ECV304細(xì)胞TF表達(dá)的影響(##尸<0.01與對(duì)照組比較，* 尸<0.05與模型組比較，厶戶<0.05與RUS(0.1pM)組比較圖8是Webbistatin對(duì)Ruscogenin發(fā)揮抗巨噬細(xì)胞釋放NO作用的影響(##P<0.01與對(duì)照組 比較，**P<0.01與模型組比較，AP<0.05與RUS(lpM)組比較，AA尸〈0.01與RUS(lpM) 組比較具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 EAH Sepharose 4B—RUS-2HS親和柱的制備及活性驗(yàn)證1.實(shí)驗(yàn)材料1.1細(xì)胞及細(xì)胞株ECV304細(xì)胞株，HL-60細(xì)胞株，原代巨噬細(xì)胞取自健康小鼠腹腔液。 1.2藥品與試劑魯斯可皂苷元(純度大于98%); 丁二酸酐；EAH Sepharose 4B瓊脂糖凝膠(Amersham Biosciences); 1-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺(EDC, Sigma);地塞米松磷酸鈉注 射液；尼莫同；重組人腫瘤壞死因子-a;氫化可的松；脂多糖；噻唑藍(lán)。 2實(shí)驗(yàn)方法魯斯可皂苷元丁二酸單酯(RUS-2HS)的合成及EAH Sepharose 4B—RUS-2HS親和柱的制備，制備方法見(jiàn)發(fā)明人已發(fā)表文獻(xiàn)以魯斯可皂苷元為配基的親和層析柱的制備及在純化抗體中的應(yīng)用，中國(guó)天然藥物，2006， 4 (5): 363-367。 RUS-2HS衍生物體外抗細(xì)胞黏附、抗 巨噬細(xì)胞NO釋放活性檢測(cè)，體內(nèi)抗小鼠腦缺氧活性測(cè)定分別參照以下文獻(xiàn)進(jìn)行[1〗魯斯可皂苷元對(duì)HL-60與ECV304細(xì)胞黏附的影響，中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006， 22 (6): 706-709;[2]雷公藤甲素對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活性和NO分泌的影響，浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006， 16 (2): 70-72;[3]徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].2版.北京人民衛(wèi)生出版社，1991: 948. 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1成功制備了 EAH Sepharose 4B—RUS-2HS親和柱，親和柱的偶聯(lián)量為7.11 mg/mL、偶聯(lián) 率為7U %。3.2 RUS-2HS衍生物與Ruscogenin的活性比較附圖1和附圖2結(jié)果顯示，0.1 、 1.0 ^unol'L"的Ruscogenin 、RUS-2HS體外預(yù)處理ECV304 細(xì)胞后均顯著或非常顯著降低TNF-a活化的ECV304與HL-60細(xì)胞黏附，顯著抑制Lps誘導(dǎo) 的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的NO釋放。濃度為lpM、 O.lpM時(shí)，RUS-2HS與Ruscogenin抑制作用 均無(wú)沒(méi)有顯著差異，顯示衍生物RUS-2HS的抗炎活性與Ruscogenin相當(dāng)；另外附圖3結(jié)果 顯示，Ruscogenin 、 RUS-2HS 8、 24 pmol/kg體內(nèi)給藥均可顯著延長(zhǎng)小鼠斷頭呼吸時(shí)間，提 示二者抗腦缺氧作用相當(dāng)，表明其活性位點(diǎn)并未被衍生基團(tuán)封閉。實(shí)施例2用系列親和色譜法尋找Ruscogenin在心腦血管疾病相關(guān)細(xì)胞、組織中的特異性結(jié)合蛋白1. 實(shí)驗(yàn)材料1.1細(xì)胞及細(xì)胞株ECV304細(xì)胞株，原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。 1.2動(dòng)物雄性SD大鼠，250-340g。 1.3藥品與試劑細(xì)胞裂解液和組織蛋白裂解液為通用型非變性蛋白裂解液，用前加入PMSF、亮肽素、 抑肽酶、胰蛋白酶抑制劑；BeadBuffer; BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(碧云天)。2. 實(shí)驗(yàn)方法2.1細(xì)胞、組織蛋白液的制備 2丄1細(xì)胞蛋白液的制備棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS (含0.05 mmol丄-1 PMSF)洗兩次。用刮板將細(xì)胞刮下，收集 于適當(dāng)體積離心管，用少量PBS沖洗平皿，吸入離心管(冰上操作)，4°C 1000 rpm離心5 min， 使細(xì)胞沉淀。棄上清，將沉淀的細(xì)胞用含PMSF的PBS懸起,1000 rpm再離心，重復(fù)兩次， 洗去全部細(xì)胞培養(yǎng)液及血清成分。棄上清，加入適量預(yù)冷的細(xì)胞裂解液，用力吹打細(xì)胞沉淀， 冰浴震蕩10min， 12000g離心15 min，上清為細(xì)胞總蛋白液。 2丄2組織蛋白液的制備大鼠斷頭處死，取其臟器于預(yù)冷的生理鹽水中洗凈。加入1:4 (w/v)組織蛋白裂解液， 冰浴勻漿，9500rpm離心10min，上清液再以12,000 rpm離心30 min，用組織蛋白裂解液稀 釋所得上清蛋白液至7mg/ml，貯于一70'C待用。 2.2系列親和色譜法方、法參照、文獻(xiàn)A versatile method of identifying specific binding proteins on affinity resins, Analytical Biochemistry ， 2006 (352) :15—23。取0.5 lml蛋白液(約含1.5 3mg總蛋白)于1.5ml離心管中，用Bead buffer補(bǔ)至lml， 加入15pl親和柱材(Al)， 4°C共孵緩慢攪動(dòng)40~60 min ， 8000 rpm瞬時(shí)離心，將上清液轉(zhuǎn) 移至另一離心管，再另加入15 ^同樣的親和柱材(A2)， 4。C共孵緩慢攪動(dòng)過(guò)夜，8000 rpm 瞬時(shí)離心，棄上清，Bead Buffer小心洗滌3次，向兩次作用后的柱材中加入30 ^ Loading Buffer,沸水中煮5min , 8000卬m離心lmin，將上清液用SDS-PAGE電泳檢測(cè)，考馬斯亮 藍(lán)染色。第一次作用的柱材上結(jié)合的比第二次作用的柱材上多的條帶即為配基的特異性結(jié)合 蛋白。同一試驗(yàn)重復(fù)3次。3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)3.1魯斯可皂苷元在內(nèi)皮細(xì)胞中的結(jié)合蛋白(見(jiàn)圖4) 實(shí)驗(yàn)表明，魯斯可皂苷元在正常和炎癥因子活化的ECV304細(xì)胞和正常原代人臍靜脈內(nèi) 皮細(xì)胞中能特異性結(jié)合分子量為210 KD的蛋白。切取膠內(nèi)蛋白，酶解消化，ESI-MS (LCQ-DECA-XPplus， Fi皿igan)或MALDI-TOF-TOF陽(yáng)MS (AutoFkx MALDI-TOF-TOF-MS ， Bruker)測(cè)序，肽段序列經(jīng)IPI human蛋白庫(kù)中比對(duì)分別鑒定為210 KD的蛋白為加nmuscle myosin heavy chain 9 (MyH9)， 一種表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞的肌球蛋白，并利用該蛋白抗體進(jìn)行 western blot實(shí)驗(yàn)確證。3.2魯斯可皂苷元在心腦血管疾病相關(guān)組織中的結(jié)合蛋白(見(jiàn)圖5) 利用系列親和色譜法尋找魯斯可皂苷元在大鼠心臟、腦等組織中的特異性結(jié)合蛋白。結(jié)果 表明，在心臟、腦、血管組織中均有特異性結(jié)合蛋白，其中分子量為210 KD左右的蛋白亞 基為MyH9，并利用該蛋白抗體進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)確證。實(shí)施例3Ruscogenin特異性結(jié)合蛋白MyH9的功能驗(yàn)證大量研究表明Ruscogenin具有顯著的抗炎抗血栓活性。本發(fā)明通過(guò)* TNF-a活化的 ECV304細(xì)胞對(duì)HL-60細(xì)胞的黏附；2> TNF-a活化的ECV304細(xì)胞表達(dá)與心腦血管疾病密切 相關(guān)的組織因子(TF)測(cè)定；S)脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放NO實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證MyH9是否是 Ruscogenin發(fā)揮活性的靶標(biāo)蛋白。1. 實(shí)驗(yàn)材料人凝血酶原復(fù)合物(華蘭生物工程股份公司)、Factor Xa Chromogenicsubstrate(Sigma)，其 它同實(shí)施例1。2. 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1 MyH9的特異性抑制齊iJblebbistatin及Ruscogenin對(duì)TNF-a活化的ECV304與HL-60細(xì)胞黏 附作用的影響。藥物作用ECV304細(xì)胞后對(duì)TNF-oc誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞與ECV304細(xì)胞黏附作用影響的實(shí) 驗(yàn)方法同實(shí)施例1。結(jié)果由圖6可見(jiàn)，0.1、 1.0 nmoH;1的Ruscogenin預(yù)處理ECV304細(xì)胞后， 均能著降低TNF-a活化的ECV304與HL-60細(xì)胞黏附。0.2(aM、 2pM的blebbistatin也能顯 著和極顯著的降低TNF-ot活化的ECV304與HL-60細(xì)胞黏附。說(shuō)明Ruscogenin和blebbistatin 可能有類似的作用，Ruscogenin的抗細(xì)胞黏附活性可能與blebbistatin的靶蛋白——MyH9有 關(guān)。同時(shí)，關(guān)于MyH9抑制劑blebbistatin具有抑制白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附作用，為發(fā)明人首 次公開。2.2 blebbistatin對(duì)Ruscogenin發(fā)揮抗TNF-a誘導(dǎo)的ECV304細(xì)胞表達(dá)組織因子(TF)的影響。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、模型組、藥物組，給藥后共孵5小時(shí)后裂解各組細(xì)胞。 細(xì)胞裂解液與凝血酶原復(fù)合物溶液在37°C下共同孵育15min，每孔加入F X a Chromogenic substrate (含25mmol/L EDTA)， 37'C溫育3 min，測(cè)定405 nm吸光度，以反映TF促凝活性。 結(jié)果由圖7可見(jiàn)，TNF-ot作用ECV304細(xì)胞5小時(shí)后能使TF的活性顯著升高，而O.l |aM的 Ruscogenin、 0.2pM和2pM的blebbistatin單獨(dú)作用細(xì)胞時(shí)均能顯著降低其TF的升高。但 Ruscogenin和blebbistatin共同作用細(xì)胞時(shí)，TF的表達(dá)量不但沒(méi)有降低，反而比單獨(dú)用藥時(shí) 升高，提示Ruscogenin與blebbistatin在影響TF活性方面不是協(xié)同作用，而是拮抗作用， blebbistatin 2jaM能顯著對(duì)抗Ruscogenin 0.1 對(duì)TF表達(dá)的抑制作用，顯示Ruscogenin通過(guò) 抑制MyH9發(fā)揮活性，MyH9為其作用靶蛋白。同時(shí)，關(guān)于MyH9抑制劑blebbistatin具有抑 制心腦血管疾病的重要藥物靶點(diǎn)TF的作用，為發(fā)明人首次證實(shí)并公開。2.3 MyH9的特異性抑制劑blebbistatin對(duì)Ruscogenin發(fā)揮抗巨噬細(xì)胞釋放NO作用的影響實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例l。結(jié)果由圖8可見(jiàn)，LPS作用巨噬細(xì)胞48小時(shí)后能非常顯著促進(jìn)NO釋放，Ruscogeninl)aM 單獨(dú)給藥可極顯著的抑制LPS誘導(dǎo)的NO釋放，blebbistatinl、 5、 10、 20pM的單獨(dú)給藥則無(wú) 明顯抑制作用；但Blebbistatin和Ruscogenin共同作用細(xì)胞時(shí)，blebbistatin能劑量依賴性的拮 抗Ruscogenin對(duì)NO釋放的抑制作用，進(jìn)一步證實(shí)Ruscogenin通過(guò)其特異性結(jié)合蛋白MyH9 發(fā)揮作用，其活性與MyH9的特異性抑制劑blebbistatin有一定差異。綜上所述，發(fā)明人利用不影響中藥麥冬活性成分Ruscogenin活性位點(diǎn)的親和層析柱，通 過(guò)系列親和色譜法分離Ruscogenin在心腦血管疾病相關(guān)的細(xì)胞、組織中的特異性結(jié)合蛋白， 并通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)MyH9為其功能靶蛋白，實(shí)現(xiàn)以具有顯著抗炎、心腦血管保護(hù)活性 的中藥有效成分為探針，發(fā)現(xiàn)防治心腦血管疾病的新藥物靶標(biāo)，并提供該靶標(biāo)新結(jié)構(gòu)類型的 抑制劑，從而完成本發(fā)明。
權(quán)利要求
1、非肌肉肌球蛋白重鏈9作為防治炎癥相關(guān)的心腦血管疾病的藥物的靶標(biāo)的用途。
2、 權(quán)利要求1的用途，其中防治炎癥相關(guān)的心腦血管疾病的藥物是魯斯可皂苷元或以其為母 核的苷。
3、 權(quán)利要求2的用途，其中魯斯可皂苷元或以其為母核的苷是C1或C3位連接葡萄糖、鼠李 糖、巖藻糖或阿拉伯糖組成的單糖苷、二糖苷或三糖苷。
4、 權(quán)利要求l的用途，其中炎癥相關(guān)的心腦血管疾病是動(dòng)脈粥樣硬化，冠心病、心絞痛、心 律失常、腦梗塞、腦缺血或血栓炎。
5、 Blebbistatin用作非肌肉肌球蛋白重鏈9抑制劑的用途。
6、 權(quán)利要求5的用途，其中非肌肉肌球蛋白重鏈9抑制劑是防治炎癥相關(guān)心腦血管疾病的藥 物。
7、 魯斯可皂苷元及其苷用作非肌肉肌球蛋白重鏈9抑制劑的用途。
8、 權(quán)利要求7的用途，其中非肌肉肌球蛋白重鏈9抑制劑是防治細(xì)胞移動(dòng)、腫瘤分化、轉(zhuǎn)移 或青光眼的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治炎癥相關(guān)心腦血管疾病的新藥物靶標(biāo)及其抑制劑的醫(yī)藥用途，具體為非肌肉肌球蛋白重鏈9[nonmuscle myosin heavy chain 9(MyH9)作為防治炎癥相關(guān)心腦血管疾病的新藥物靶標(biāo)及其抑制劑魯斯可皂苷元及其苷在防治與腫瘤分化轉(zhuǎn)移、青光眼等疾病的用途。
文檔編號(hào)A61P27/06GK101125146SQ200710024810
公開日2008年2月20日 申請(qǐng)日期2007年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月2日
發(fā)明者余伯陽(yáng), 劉吉華, 寇俊萍, 蔣文雯, 黃婭琳 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)