專利名稱：一種用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的一種藥物，特別是一種治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚創(chuàng)傷是臨床上常見疾病，常伴有并發(fā)癥，往往給患者帶來巨大的痛苦及生活上的不便，嚴(yán)重者可威脅到患者的生命，即使得到有效治療，也免不了留下瘢痕，影響患者的外在美觀。因而，積極促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)對(duì)挽救患者生命，減少并發(fā)癥，減輕患者痛苦，防止瘢痕的形成，提高治療效果等方面都具有重要的意義。通過各種藥物促進(jìn)皮膚損傷修復(fù)，是臨床治療的主要手段之一。目前，國內(nèi)外已相繼開發(fā)了不少治療皮膚創(chuàng)傷的藥物及制劑，某些藥物效果非常確切，為臨床開發(fā)新藥及制劑提供了很好的思路和基礎(chǔ)。伴隨著仿生學(xué)，化工合成技術(shù)的發(fā)展，使臨床上開發(fā)更好的藥劑材料成為可能。當(dāng)前，用于治療創(chuàng)傷的藥物制劑多為油劑、水劑、膏劑、糊精和散劑等，其生物利用度不高，感觀較差，生物相容性不高，保濕及緩釋效果差，多過于油膩，易污染衣物，使用不便等。
6-呋喃氨基腺嘌呤，俗稱激動(dòng)素(kinetin，KT)是1956年，MLiller在加熱滅菌過的鯡魚精子DNA提取物中發(fā)現(xiàn)了一種具有促進(jìn)細(xì)胞分裂活性的小分子化合物。它是一種非天然的細(xì)胞分裂素，分子式為C10H9N5O，分子量為215.2，純品為白色固體，熔點(diǎn)是265～266℃，系兩性化合物，易溶于稀鹽酸或稀堿溶液，難溶于水、乙醇、乙醚和丙酮。6-呋喃氨基腺嘌呤的結(jié)構(gòu)式如下
化合物6-呋喃氨基腺嘌呤是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)具有細(xì)胞分裂素作用的物質(zhì)。除具有促進(jìn)植物創(chuàng)傷組織的愈合，促進(jìn)植物細(xì)胞分裂、分化、和生長(zhǎng)的作用外，還具有延緩器官衰老，誘導(dǎo)芽分化，增加氣孔開度，誘導(dǎo)愈傷組織長(zhǎng)芽，解除頂端優(yōu)勢(shì)，打破側(cè)芽休眠和促進(jìn)種子發(fā)芽，延緩蛋白質(zhì)和葉綠素的降解的作用。主要用于組織培養(yǎng)，促進(jìn)細(xì)胞分裂和調(diào)節(jié)細(xì)胞分化，延緩衰老，果蔬保鮮，調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸，促進(jìn)結(jié)實(shí)等方面。
6-呋喃氨基腺嘌呤在植物方面的促進(jìn)組織愈合、生長(zhǎng)及抗氧化抗衰老的作用是非常明顯的，在動(dòng)物和人體上還沒有嘗試過，申請(qǐng)人以此為基礎(chǔ)，經(jīng)過大量的試驗(yàn)證明6-呋喃氨基腺嘌呤在動(dòng)物和人體上也具有皮膚創(chuàng)傷的作用，并首次發(fā)現(xiàn)了6-呋喃氨基腺嘌呤在植物方面的促進(jìn)損傷組織愈合的作用在動(dòng)物和人體上同樣也具有。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑及其制備方法，該凝膠劑不同于傳統(tǒng)的藥物及制劑，具有加速創(chuàng)面的愈合，提高損傷部位的修復(fù)質(zhì)量。在創(chuàng)傷修復(fù)中能夠很好的促進(jìn)皮膚及其它組織細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，能調(diào)控各種細(xì)胞因子的正常表達(dá)，從而加速創(chuàng)面的愈合，提高創(chuàng)面修復(fù)的質(zhì)量，加速創(chuàng)面的愈合。
為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案一種用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，其特征在于制得的該凝膠劑由下列原料及其質(zhì)量百分比組成6-呋喃氨基腺嘌呤0.1％～0.2％，凝膠基質(zhì)1.5％～3.0％，保濕增溶劑20.0％～25.0％，酸堿調(diào)節(jié)劑0.2％～0.5％，防腐劑0.1％～0.3％，抗氧化劑0.1％～0.3％，余量為蒸餾水，原料的總和為100％。
所述的凝膠基質(zhì)為卡波姆和羥丙甲基纖維素的混合物，其比例為1∶1～11∶9；所述的保濕增溶劑為甘油、丙二醇和乙醇的混合物，其比例為1∶1∶1～3∶2∶2；所述的酸堿調(diào)節(jié)劑為三乙醇胺；所述的防腐劑為咪唑烷基脲；所述的抗氧化劑為亞硫酸氫鈉。
上述凝膠劑的制備方法，其特征在于，步驟如下(1)精確稱取6-呋喃氨基腺嘌呤，溶于適量稀鹽酸溶液中，得到一定濃度的6-呋喃氨基腺嘌呤鹽酸溶液；(2)按比例取保濕增溶劑，即甘油、丙二醇和乙醇，于燒杯中混合攪拌均勻，得到保濕增溶劑；(3)按比例稱取凝膠基質(zhì)卡波姆和羥丙甲基纖維素，混合后分散于步驟(2)的保濕增溶劑中，攪拌過夜，待凝膠基質(zhì)充分溶解均勻后，將步驟(1)的6-呋喃氨基腺嘌呤鹽酸溶液加入凝膠基質(zhì)中，攪拌并過夜，得到含有6-呋喃氨基腺嘌呤的混合物；(41)用移液槍向含有6-呋喃氨基腺嘌呤的混合物中滴加三乙醇胺，調(diào)pH值到5.5～7.0，然后依次加入配方量的防腐劑咪唑烷基脲和抗氧化劑亞硫酸氫鈉，攪拌，最后加入蒸餾水即得。
本發(fā)明的用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，具有酶學(xué)清創(chuàng)作用，能保持創(chuàng)面的濕潤(rùn)環(huán)境，并創(chuàng)造低氧環(huán)境，促進(jìn)毛細(xì)血管生成和生長(zhǎng)因子的釋放，不僅能覆蓋創(chuàng)面，減少感染，而且還能主動(dòng)參與創(chuàng)面愈合，從而極大地改善了創(chuàng)傷、燒傷和各種慢性難愈合創(chuàng)面的治療效果。
本發(fā)明以6-呋喃氨基腺嘌呤為有效成分制成的凝膠劑，經(jīng)臨床試驗(yàn)證明，該凝膠劑具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合，減少瘢痕形成，抗脂質(zhì)過氧化，抗細(xì)胞凋亡等多種作用。與同類藥物制劑的油劑、膏劑、糊精相比，具有制備方法簡(jiǎn)單，使用方便，細(xì)膩美觀，穩(wěn)定安全，無毒無刺激，皮膚感覺及生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明還證明了化合物6-呋喃氨基腺嘌呤用于制備治療皮膚創(chuàng)傷藥物的應(yīng)用。


圖1是本發(fā)明制備的凝膠劑圖片；圖2是家兔燒傷皮膚的病理組織切片，其中，圖A是D組第7d切片(HE×100)；圖B是D組14d切片(HE×200)；圖C是A2組14d切片(HE×400)；圖3是家兔燒傷皮膚組織的的透射電鏡照片，其中，圖A是D組第1d照片(TEM×20000)；圖B是D組第7d照片(TEM×12000)；圖C是A2組第21d照片(TEM×8000)。
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式
治療創(chuàng)傷的理想藥物應(yīng)具備以下功能防止水分和體液的過度散失；抵御細(xì)菌的入侵，防止感染；與創(chuàng)面帖合良好，但不應(yīng)與創(chuàng)面粘合以免更換敷料帶來二次損傷，透濕、透氣并使創(chuàng)面處于濕潤(rùn)但又沒有積液的環(huán)境；生物相容性好，并最好具有能促進(jìn)傷口愈合的功能。
經(jīng)申請(qǐng)人的研究表明，本發(fā)明的于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，采用6-呋喃氨基腺嘌呤作為主要成分，對(duì)皮膚創(chuàng)傷具有較好的治理效果。本發(fā)明的用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，在創(chuàng)傷修復(fù)中能夠很好的促進(jìn)皮膚及其它組織細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，能調(diào)控各種細(xì)胞因子的正常表達(dá)，從而加速創(chuàng)面的愈合，提高創(chuàng)面修復(fù)的質(zhì)量。另外，本發(fā)明的用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑可保持創(chuàng)面的濕潤(rùn)環(huán)境，濕性環(huán)境有利于創(chuàng)面的愈合并可減少瘢痕的形成。濕性環(huán)境促進(jìn)傷口愈合的優(yōu)點(diǎn)是可防止結(jié)痂及瘢痕的形成，為創(chuàng)面提供最好的濕潤(rùn)環(huán)境。傷口在清創(chuàng)期有利于組織的水合，加速壞死組織的溶解及吸收。在肉芽組織形成期，可促進(jìn)各種生長(zhǎng)因子的釋放，刺激毛細(xì)血管的再生成。在上皮化期，表皮細(xì)胞在濕性環(huán)境中移行的速度加快，且具有迅速修復(fù)真皮的作用。濕性愈合在傷口愈合進(jìn)程中，加速傷口愈合，縮短傷口的治療時(shí)間，減少換藥次數(shù)，節(jié)省敷料，減輕傷口的疼痛，并且降低了醫(yī)療費(fèi)用，同時(shí)減少護(hù)理工作量。
以下是發(fā)明人給出的具體實(shí)施例。需要指出的是，這些實(shí)施例是一些較優(yōu)的例子，僅用于理解本發(fā)明，按照本發(fā)明的技術(shù)方案，以下實(shí)施例子還可以舉出許多，本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例，根據(jù)申請(qǐng)人大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在本發(fā)明提出的配方范圍，均可以達(dá)到本發(fā)明的目的，本領(lǐng)域的熟練人員根據(jù)以上內(nèi)容對(duì)本發(fā)明做出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
1.制備實(shí)施例實(shí)施例1精確稱取6-呋喃氨基腺嘌呤0.02g溶于鹽酸溶液中備用，稱取甘油10g，丙二醇10g于燒杯中，用量筒量取10mL的乙醇加入到上述燒杯中攪拌。精確稱取卡波姆0.55g和羥丙甲基纖維素0.45g，將二者緩慢分散與上述燒杯中，溶解一段時(shí)間后攪拌過夜，將6-呋喃氨基腺嘌呤的鹽酸溶液加入到過夜的燒杯中攪拌，繼續(xù)添加適量蒸餾水，用移液槍向其中滴加的三乙醇胺，到凝膠慢慢變粘稠且半透亮?xí)r用酸度劑檢測(cè)pH值為6.0左右時(shí)停止滴加三乙醇胺，然后向其中滴加0.3g咪唑烷基脲和0.1g亞硫酸氫鈉，稱重后繼續(xù)滴加蒸餾水至100g即得。
實(shí)施例2精確稱取6-呋喃氨基腺嘌呤0.015g溶于鹽酸溶液中備用，稱取甘油15g，丙二醇10g于燒杯中，用量筒量取10mL的乙醇加入到上述燒杯中攪拌。精確稱取卡波姆0.50g和羥丙甲基纖維素0.50g，將二者緩慢分散與上述燒杯中，溶解一段時(shí)間后攪拌過夜，將6-呋喃氨基腺嘌呤的鹽酸溶液加入到過夜的燒杯中攪拌，繼續(xù)添加適量蒸餾水，用移液槍向其中滴加的三乙醇胺，到凝膠慢慢變粘稠且半透亮?xí)r用酸度劑檢測(cè)pH值為6.5左右時(shí)停止滴加三乙醇胺，然后向其中滴加0.3g咪唑烷基脲和0.2g亞硫酸氫鈉，稱重后繼續(xù)滴加蒸餾水至100g即得。
按照實(shí)例1和2制備的6-呋喃氨基腺嘌呤凝膠劑如圖1所示。
2.皮膚創(chuàng)傷的治療實(shí)驗(yàn)例2.1實(shí)驗(yàn)材料2.2試劑燒傷止痛膏武漢建民集團(tuán)隨州藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)060203；SOD活性檢測(cè)試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060322；CAT活性檢測(cè)試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060325；MDA含量測(cè)定試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060320；GSH-PX活性檢測(cè)試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060523；考馬斯亮藍(lán)蛋白檢測(cè)試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060323；羥脯氨酸含量測(cè)定試劑盒購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060320；6-呋喃氨基腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品購于廈門星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20050107；卡波姆940購于太平洋化工貿(mào)易有限公司，批號(hào)20050130；羥丙甲基纖維素購于太平洋化工貿(mào)易有限公司，批號(hào)20040912；甘油購于西安化學(xué)試劑廠批號(hào)0500228；
無水乙醇購于西安化學(xué)試劑廠，批號(hào)050312；丙二醇購于西安化學(xué)試劑廠，批號(hào)050617；三乙醇胺購于中國恒源精細(xì)化工有限公司，批號(hào)20040506；Na2S購于天購于津市化學(xué)試劑六廠，批號(hào)20042260。
2.3儀器TT-6(B)型透皮吸收儀，天津正通科技有限公司制造；SPECORD50型紫外可見光分光光度計(jì)，德國analytikjena公司制造；BX1型光學(xué)顯微鏡，日本OLYMPUS公司制造；H-600型透射電子顯微鏡鏡，日本日立公司制造；AO組織切片機(jī)，美國WARNER-LAMBERT TECH.INC制造；CL-8000型全自動(dòng)生化分析儀，日本島津公司制造。
2.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36只健康家兔，由西北農(nóng)林科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重2.0～2.5kg，雌雄不限，無皮膚疾病；大鼠，體重200g左右，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
2.5實(shí)驗(yàn)方法2.5.1家兔皮膚深I(lǐng)I度燒傷模型制作燒傷前24h用8％的Na2S對(duì)家兔背部?jī)蓚?cè)皮膚脫毛，致傷當(dāng)天用速眠新II注射液(0.3mL/只)肌肉注射麻醉，將2mol/L NaOH注入自治燒傷器后，緊貼于脫毛區(qū)皮膚75s，左右兩側(cè)各燒傷3個(gè)區(qū)域。酒精消毒后，在燒傷部位皮下注射0.5％的溴酚蘭溶液，24h后觀察燒傷部位未見褪色證明為深I(lǐng)I度燒傷。
2.5.2分組與用藥將36只家兔隨機(jī)分為A1、A2、A3、B、C，D共6個(gè)組，每組6只。
其中，A1組為本發(fā)明的含6-呋喃氨基腺嘌呤1mg/g的凝膠治療組，A2組為本發(fā)明的含6-呋喃氨基腺嘌呤1.5mg/g的凝膠治療組，A3組為本發(fā)明的含6-呋喃氨基腺嘌呤2mg/g的凝膠治療組，B組為陰性對(duì)照組，C組為陽性對(duì)照組，D為空白對(duì)照組，每組共36個(gè)創(chuàng)面。A1組，A2組和A3組每次在每個(gè)創(chuàng)面涂抹相應(yīng)凝膠0.5g。B組每次在每個(gè)創(chuàng)面涂抹6-呋喃氨基腺嘌呤濃度為2g/L的鹽酸溶液0.5mL。C組每次在每個(gè)創(chuàng)面涂抹燒傷止痛膏0.5g。D組每次在每個(gè)創(chuàng)面涂抹生理鹽水0.5mL。以上各組藥物在燒傷當(dāng)天開始涂抹，每天早晚各涂抹1次，連續(xù)涂抹14d。
2.5.3家兔燒傷皮膚創(chuàng)面含水量測(cè)定采用干濕比法，在傷后第6、12、24、36、48h和第5d、7d，各組創(chuàng)面取組織約0.5g，置于鋁箔紙上秤重，然后放入烤箱中，于120℃，72小時(shí)烤干后秤干重，按下列公式計(jì)算組織中含水量。
含水量＝(濕重-干重)濕重×100％2.5.4家兔燒傷皮膚創(chuàng)面愈合率測(cè)定于燒傷后第7d、10d、14d和21d分別對(duì)兩組創(chuàng)面(每組各為6個(gè)創(chuàng)面)用0.25cm×0.25cm標(biāo)準(zhǔn)透明方格紙進(jìn)行創(chuàng)面愈合百分率的測(cè)定；并按下列公式計(jì)算創(chuàng)面愈合率。
愈合率(％)＝(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)÷原始創(chuàng)面面積×100％2.5.5家兔燒傷皮膚組織中羥脯氨酸(Hyp)含量的測(cè)定于燒傷后第1、5、7，10、14和21d將各組家兔麻醉，并取燒傷部位皮膚0.2g，加入1.8g的生理鹽水，在冰浴里進(jìn)行組織勻漿，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％的勻漿，之后離心取上清液備用，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)。按照試劑盒說明書對(duì)組織中羥脯氨酸含量進(jìn)行測(cè)定。
2.5.6家兔燒傷皮膚組織中SOD，CAT，GSH-PX活性和MDA含量的測(cè)定于燒傷后第7，14，21d將各組家兔麻醉，取燒傷部位皮膚0.2g，加入1.8g的生理鹽水，在冰浴里進(jìn)行組織勻漿，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的勻漿，之后離心取上清液備用，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)。按照試劑盒說明書對(duì)SOD，CAT，GSH-PX的活性和MDA的含量進(jìn)行測(cè)定。
2.5.7創(chuàng)面組織病理學(xué)及透射電鏡觀察于燒傷后各天觀察創(chuàng)面愈合情況，第1，7，14，21d將各組家兔麻醉，取燒傷部位皮膚組織，用體積分?jǐn)?shù)為10％的中性福爾馬林固定24h后，經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋，作連續(xù)石蠟切片(片厚6μm)，進(jìn)行H.E染色，再經(jīng)梯度酒精脫水后，經(jīng)二甲苯、中性樹膠封片。用普通光學(xué)顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)觀察，記錄；于燒傷后第1，7，14，21d將各組家兔麻醉，取燒傷部位皮膚組織，用體積分?jǐn)?shù)為4％的戊二醛固定24h后，制作超薄切片(片厚70nm)，進(jìn)行透射電鏡觀察。
2.5.86-呋喃氨基腺嘌呤凝膠體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)2.5.8.1鼠皮的制備取健康雄性大鼠(200g左右)，用速眠新II注射液(0.3mL/只)麻醉后，用剪刀仔細(xì)剪去腹部皮膚上的毛，然后用自治的脫毛劑對(duì)腹部皮膚進(jìn)行脫毛，剪下腹部皮膚，將剪下來的皮膚平鋪于放有生理鹽水的培養(yǎng)皿內(nèi)，小心剝離皮下脂肪組織和粘連物，不傷角質(zhì)層，然后用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，剪成適當(dāng)大小，并檢查皮膚的完整性，最后至于密閉的剝離瓶中，加入適量新鮮的生理鹽水，放入冰箱中(-20℃)冷凍保存，于一周內(nèi)用完。每次實(shí)驗(yàn)前，仔細(xì)檢查皮膚的完整性，不得有任何破損。
2.5.8.2 6-呋喃氨基腺嘌呤凝膠經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)采用雙室滲透擴(kuò)散裝置，包括擴(kuò)散池、接受池和恒溫磁力攪拌器，擴(kuò)散池面積為0.785cm2，離體皮膚固定于兩池之間，接受池一側(cè)連有一個(gè)上傾管道，供取樣補(bǔ)充接受液或排氣泡使用，下端置于恒溫水浴池中(37±1)℃。實(shí)驗(yàn)前制備含量為0.1％6-呋喃氨基腺嘌呤凝膠和含量為1mg/mL的6-呋喃氨基腺嘌呤鹽酸溶液。實(shí)驗(yàn)時(shí)將預(yù)處理的離體皮膚固定于滲透擴(kuò)散裝置的擴(kuò)散池和接受池之間，皮膚角質(zhì)層向上使之與藥物接觸，分別在擴(kuò)散池中加入制備的凝膠1.0g，鹽酸溶液1.0mL，使藥物于皮膚完全接觸排出氣泡，接受池中加入5mL的生理鹽水，內(nèi)含磁力攪拌珠，維持在(37±1)℃，于1，2，4，6，8，10，12從接受池斜中取樣5mL，并補(bǔ)充空白生理鹽水，樣品于274nm處測(cè)定吸光度(A)值，將A值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算樣品濃度，并計(jì)算累積滲透量(Q)，結(jié)果見表8。
2.5.9統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件SPLM 3.0進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以X±S表示。
2.6結(jié)果2.6.1各組燒傷創(chuàng)面含水量測(cè)定各組創(chuàng)面含水量較空白對(duì)照組6h后均有升高，到第7d基本接近正常水平。在燒傷后24、36和48h的含水量要明顯低于燒傷對(duì)照組(P＜0.05)，以傷后24和36h更為明顯。與陽性對(duì)照組相比在傷后48h內(nèi)含水量略低，見表1。
表1創(chuàng)面含水量測(cè)定(％，x±s，n＝6)

注與空白對(duì)照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
2.6.2各組燒傷創(chuàng)面愈合率測(cè)定實(shí)驗(yàn)組比空白對(duì)照組相比同期創(chuàng)面愈合率顯著提高(p＜0.05)，在第14d時(shí)差異最顯著(p＜0.01)。與陽性對(duì)照組效果無明顯差異，見表2。
表2創(chuàng)面愈合率測(cè)定結(jié)果(％，x±S，n＝6)

注與空白對(duì)照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
2.6.3各組燒傷創(chuàng)面羥脯氨酸含量測(cè)定在傷后第7、10和14d，實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面羥脯氨酸含量明顯高于空白對(duì)照組(p＜0.05)，比陽性對(duì)照組略高，差異不顯著，見表3。
表3各組燒傷創(chuàng)面羥脯氨酸的含量(μg·mg-1，x±S，n＝6)

注與空白對(duì)照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
2.6.4家兔燒傷部位皮膚組織中SOD活性的測(cè)定由表4可知，與空白對(duì)照組D組相比，A1，A2和A3三個(gè)治療組在第7d，14d和21d時(shí)燒傷部位皮膚組織中SOD的活性均極顯著提高(P＜0.01)。與陰性對(duì)照組B組相比，A1組在第14d和21d皮膚組織中SOD的活性顯著提高(P＜0.05)；A2組在第7d，14d和21d時(shí)皮膚組織中SOD的活性均顯著提高(P＜0.01)；A3組在第7d，14d皮膚組織中SOD的活性顯著提高(P＜0.05)，在第21d時(shí)SOD的活性提高的極顯著(P＜0.01)。治療組中隨著6-呋喃氨基腺嘌呤濃度的增高，組織中SOD的活性也隨之增高，但差異不顯著。
表4燒傷后不同時(shí)間家兔皮膚組織勻漿中SOD活性測(cè)定

注與空白對(duì)照組相比，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與陰性對(duì)照組相比，△表示差異顯著(P＜0.05)，△△表示差異極顯著(P＜0.01)。
2.6.5家兔燒傷部位皮膚組織中CAT活性的測(cè)定由表5可知，與空白組D組相比，A1，A2和A3三個(gè)治療組在第7d，14d和21d時(shí)燒傷部位皮膚組織中CAT的活性均極顯著提高(P＜0.01)。與陰性對(duì)照組B組相比，A1組在第14d和21d皮膚組織中CAT的活性顯著提高(P＜0.05)；A2組在第7d，14d和21d時(shí)皮膚組織中CAT的活性均顯著提高(P＜0.01)；A3組在第7d，14d皮膚組織中CAT的活性顯著提高(P＜0.05)，在第21d時(shí)CAT的活性提高的極其顯著(P＜0.01)。治療組中隨著6-呋喃氨基腺嘌呤濃度的增高，組織中CAT的活性也隨之增高，但差異不顯著。治療組與C組相比，組織中CAT的活性差異不顯著。
表5燒傷后不同時(shí)間家兔皮膚組織勻漿中CAT活性測(cè)定

注與空白對(duì)照組相比，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與陰性對(duì)照組相比，△表示差異顯著(P＜0.05)，△△表示差異極顯著(P＜0.01)。
2.6.6家兔燒傷部位皮膚組織中GSH-PX活性的測(cè)定由表6可知，與空白對(duì)照組D組相比，A1，A2和A3三個(gè)治療組在第7d，14d和21d時(shí)燒傷部位皮膚組織中SOD的活性均極顯著提高(P＜0.01)。與陰性對(duì)照組B組相比，A1組在第14d和21d皮膚組織中SOD的活性顯著提高(P＜0.05)；A2組在第7d，14d和21d時(shí)皮膚組織中SOD的活性均顯著提高(P＜0.01)；A3組在第7d，14d皮膚組織中SOD的活性顯著提高(P＜0.05)，在第21d時(shí)SOD的活性提高的極其顯著(P＜0.01)。治療組中隨著6-呋喃氨基腺嘌呤濃度的增高，組織中SOD的活性也隨之增高，但差異不顯著。
表6燒傷后不同時(shí)間家兔皮膚組織勻漿中GSH-PX活性測(cè)定

注與空白對(duì)照組相比，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與陰性對(duì)照組相.比，△表示差異顯著(P＜0.05)，△△表示差異極顯著(P＜0.01)。
2.6.7家兔燒傷部位皮膚組織中MDA含量的測(cè)定由表7可知，與空白組D組相比，在第14d時(shí)A1組和A2組皮膚組織中MDA的含量降低極顯著(P＜0.01)；A3組在第7d，14d和21d皮膚組織中MDA的含量降低極顯著(P＜0.01)。與B組相比，A1組在第7d，14d和21d皮膚組織中MDA的含量降低不顯著；在第14d時(shí)A2組和A3組皮膚組織中MDA的含量降低極顯著(P＜0.01)；治療組中隨著6-呋喃氨基腺嘌呤濃度的增高，組織中MDA的含量也隨之降低，但差異不顯著。
表7燒傷后不同時(shí)間家兔皮膚組織勻漿中MDA含量測(cè)定

注與空白對(duì)照組相比，*表示差異顯著(P＜0.05)，**表示差異極顯著(P＜0.01)；與陰性對(duì)照組相比，△表示差異顯著(P＜0.05)，△△表示差異極顯著(P＜0.01)。
2.6.8家兔燒傷皮膚組織的病理學(xué)觀察和透射電子顯微鏡觀察組織病理學(xué)觀察表明，D組在傷后7d時(shí)，皮膚表皮破壞，乳頭突起消失，膠原纖維斷裂，嗜堿性，真皮細(xì)胞核固縮，毛囊鞘細(xì)胞凝固性壞死，大量PMN浸潤(rùn)(圖2-A)；14d時(shí)，表皮壞死，膠原纖維疏松紊亂，呈輕度嗜堿性，溶解腫脹，真皮組織PMN浸潤(rùn)增加(圖2-B)；21d時(shí)，上皮細(xì)胞與皮下組織結(jié)合疏松，棘細(xì)胞層變薄，膠原過渡表達(dá)，成纖維細(xì)胞過度增殖，排列紊亂，仍見PMN浸潤(rùn)。B組在7d時(shí)表皮結(jié)構(gòu)大部分破壞，膠原纖維收縮，排列紊亂，皮脂腺上皮細(xì)胞部份破壞，大量PMN浸潤(rùn)；14d時(shí)，表皮萎縮部份脫落，真皮內(nèi)膠原纖維灶狀變性，纖維排列紊亂；21d時(shí)，表皮變薄，膠原增多，成纖維細(xì)胞排列稍不規(guī)則，有少量PMN浸潤(rùn)。治療組和C組在第7d時(shí)，表皮萎縮，保留少許乳頭層結(jié)構(gòu)，真皮膠原纖維部分變性，毛囊外根鞘細(xì)胞萎縮，淺筋膜小血管充血，淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；14d時(shí)，表皮大部分結(jié)構(gòu)修復(fù)完整，個(gè)別區(qū)域輕度萎縮，膠原纖維正常排列，毛囊皮脂腺細(xì)胞完好(圖2-C)；21d時(shí)皮膚組織結(jié)構(gòu)完整清晰，膠原和成纖維細(xì)胞排列整齊，致密，未見PMN浸潤(rùn)。
透射電子顯微鏡觀察表明，燒傷后1d，家兔皮膚細(xì)胞內(nèi)溶酶體增多，吞噬異物增加(圖3-A)，核濃縮，出現(xiàn)大量的空泡變性。燒傷后7d，D組中真皮細(xì)胞微絨毛減少，染色質(zhì)邊集，線粒體嵴減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，大量空泡變性(圖3-B)。B組中真皮細(xì)胞線粒體嵴數(shù)量減少，有中度空泡變性。治療組和C組有輕度空泡變性。傷后14d，D組細(xì)胞微絨毛減少，染色質(zhì)邊集，但核仁存在，細(xì)胞變圓。B組細(xì)胞微絨毛減少，呈空泡化。治療組和C組細(xì)胞空泡變性減輕。燒傷后21d，治療組中細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整清晰，核仁明顯，染色質(zhì)均質(zhì)(圖3-C)。其他各組細(xì)胞仍有輕度空泡變性，染色質(zhì)呈輕度邊集。
2.6.96-呋喃氨基腺嘌呤凝膠累計(jì)透皮滲透量表8不同EMP凝膠累積透皮滲透量(μg，x±s，n＝3)

由表8可知，在12h內(nèi)6-呋喃氨基腺嘌呤凝膠的體外經(jīng)皮滲透累積量較6-呋喃氨基腺嘌呤的鹽酸溶液少，凝膠的釋放量為8.6％左右，鹽酸溶液累積滲透量為28％左右，說明6-呋喃氨基腺嘌呤的凝膠劑較難透過皮膚，皮膚是6-呋喃氨基腺嘌呤凝膠滲透的主要屏障，其凝膠劑可在創(chuàng)面保持較高的藥物濃度，符合皮膚局部用藥要求，而6-呋喃氨基腺嘌呤的鹽酸溶液較易透過皮膚，不能保證創(chuàng)面藥物濃度。
權(quán)利要求
1.一種用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，其特征在于制得的該凝膠劑由下列原料及其質(zhì)量百分比組成6-呋喃氨基腺嘌呤0.1％～0.2％，凝膠基質(zhì)1.5％～3.0％，保濕增溶劑20.0％～25.0％，酸堿調(diào)節(jié)劑0.2％～0.5％，防腐劑0.1％～0.3％，抗氧化劑0.1％～0.3％，余量為蒸餾水，原料的總和為100％。
2.如權(quán)利要求書1所述的用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑，其特征在于，所述的凝膠基質(zhì)為卡波姆和羥丙甲基纖維素的混合物，其比例為1∶1～11∶9；所述的保濕增溶劑為甘油、丙二醇和乙醇的混合物，其比例為1∶1∶1～3∶2∶2；所述的酸堿調(diào)節(jié)劑為三乙醇胺；所述的防腐劑為咪唑烷基脲；所述的抗氧化劑為亞硫酸氫鈉。
3.權(quán)利要求1或2所述的用于治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠劑的制備方法，其特征在于，步驟如下(1)精確稱取6-呋喃氨基腺嘌呤，溶于適量稀鹽酸溶液中，得到一定濃度的6-呋喃氨基腺嘌呤鹽酸溶液；(2)按比例取保濕增溶劑，即甘油、丙二醇和乙醇，于燒杯中混合攪拌均勻，得到保濕增溶劑；(3)按比例稱取凝膠基質(zhì)卡波姆和羥丙甲基纖維素，混合后分散于步驟(2)的保濕增溶劑中，攪拌過夜，待凝膠基質(zhì)充分溶解均勻后，將步驟(1)的6-呋喃氨基腺嘌呤鹽酸溶液加入凝膠基質(zhì)中，攪拌并過夜，得到含有6-呋喃氨基腺嘌呤的混合物；(4)用移液槍向含有6-呋喃氨基腺嘌呤的混合物中滴加三乙醇胺，調(diào)pH值到5.5～7.0，然后依次加入配方量的防腐劑咪唑烷基脲和抗氧化劑亞硫酸氫鈉，攪拌，最后加入蒸餾水即得。
4.化合物6-呋喃氨基腺嘌呤用于制備治療皮膚創(chuàng)傷藥物及制劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠制劑及其制備方法，制得的該凝膠劑由下列原料及其質(zhì)量百分比組成6－呋喃氨基腺嘌呤0.1％～0.2％，凝膠基質(zhì)1.5％～3.0％，保濕增溶劑20.0％～25.0％，酸堿調(diào)節(jié)劑0.2％～0.5％，防腐劑0.1％～0.3％，抗氧化劑0.1％～0.3％，余量為蒸餾水，原料的總和為100％。與同類藥物制劑的油劑、膏劑、糊精相比，具有制備方法簡(jiǎn)單，使用方便，細(xì)膩美觀，穩(wěn)定安全，無毒無刺激，保濕緩釋效果好，皮膚感覺及生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的治療皮膚創(chuàng)傷的凝膠制劑具有顯著促進(jìn)創(chuàng)面愈合、減少瘢痕形成、抗脂質(zhì)過氧化、抗細(xì)胞凋亡等作用，是治療皮膚創(chuàng)傷的良藥。
文檔編號(hào)A61P17/02GK101066277SQ20071001790
公開日2007年11月7日 申請(qǐng)日期2007年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日
發(fā)明者歐陽五慶, 王俊, 安紅麗 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)