專利名稱：基于吲哚滿酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制劑的制作方法
基于吲哚滿酮的M酸衍生物的蛋白激酶抑制劑 發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及蛋白激酶抑制劑及其用于治療異常蛋白激酶活性相 關(guān)的疾病(如癌癥和炎癥)的用途。更具體地講，本發(fā)明涉及可用作蛋 白激酶抑制劑的吡咯基-P引哚滿酮的氨基酸衍生物和其酰胺或酯衍生 物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
背景技術(shù)：
蛋白激酶是催化蛋白質(zhì)的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基的羥基磷 酸化的酶。細(xì)胞生活的很多方面(例如細(xì)胞生長、分化、增殖、細(xì)胞周 期和存活)依賴蛋白激酶活性。此外，異常蛋白激酶活性與疾病(如癌
癥和炎癥)的宿主相關(guān)。因此，相當(dāng)多工作涉及識(shí)別調(diào)節(jié)蛋白激酶活性 的方式。尤其是現(xiàn)已作出很多嘗試，識(shí)別作為蛋白激酶抑制劑的小分 子。
已證明數(shù)種吡咯基-巧l哚滿酮衍生物有作為蛋白激酶的抑制劑的
優(yōu)良活性(Larid等人FASEB J. 16, 681, 2002; Smolich等人Blood， 97， 1413， 2001; Mendel等人Clinical Cancer Res.9, 327， 2003; Sun 等人J. Med. Chem. 46， 1116， 2003)。這些化合物的臨床應(yīng)用前景廣 闊，但由于較差水溶性和/或其他藥物性質(zhì)部分受到削弱。
因此，需要一類同時(shí)具有抑制活性和增強(qiáng)藥物特性的改性吡咯基 -巧l咮滿酮衍生物。
發(fā)明概迷
本發(fā)明 一方面涉及一種具有由式I表示的以下結(jié)構(gòu)的化合物
在式I中，R1選自氫、卣基、(Cl-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(Cl-C6) 鹵代烷基、羥基、(Cl-C6)烷氧基、氨基、(Cl-C6)烷基氨基、酰胺、 磺酰胺、氰基、取代或未取代的(C6-C10)芳基；W選自氫、卣基、(C1-C6) 烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(Cl-C6)卣代烷基、羥基、(Cl-C6)烷氧基、(C2-C8) 烷氧基烷基、氨基、(Cl-C6)烷基氨基、(C6-C10)芳基氨基；R3選自氫、 (Cl-C6)烷基、(C6-C10)芳基、(C5-C10)雜芳基和酰胺；R4選自氫和 (Cl-C6)烷基；并且R5為a或卩氨基酸或通過a或卩氨基連接到式(I) 的羰基以形成酰胺鍵的a或卩氨基酰胺基；或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥，或者它可作為前藥。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Rs由以下結(jié)構(gòu) 表示
在以上結(jié)構(gòu)中，W為天然或非天然產(chǎn)生氨基酸或其相應(yīng)酰胺衍生 物的側(cè)鏈，所述酰胺衍生物具有由NRS^表示的酰胺氮；其中118和 R9獨(dú)立選自氫、(Cl-C6)烷基、(Cl-C6)羥基烷基、(Cl-C6)二羥基烷基、 (Cl-C6)烷氧基、(Cl-C6)烷基羧酸、(Cl-C6)烷基膦酸、(Cl-C6)烷基磺 酸、(Cl-C6)羥基烷基羧酸、(Cl-C6)烷基酰胺、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8) 雜環(huán)烷基、(C6-C8)芳基、(C5-C8)雜芳基、(C3-C8)環(huán)烷基羧酸，或者 RS和119與N—起形成未取代或用一個(gè)或多個(gè)羥基、酮、醚和羧酸取 代的(C5-C8)雜環(huán)；R7選自羥基、(Cl-C6)0-烷基、(C3-C8)0-環(huán)烷基， 和皿8119;并且n為0或l。在第一亞屬中，RS為a氨基酸，其中a 氨基連接到式I的羰基，以形成酰胺鍵。第一亞屬內(nèi)的優(yōu)選種類由以 下結(jié)構(gòu)表示<formula>formula see original document page 10</formula>
在第二亞屬中，115為a氨基酰胺，其中a氨基連接到式I的羰基， 以形成酰胺^t。第二亞屬內(nèi)的優(yōu)選種類由以下結(jié)構(gòu)表示 在第三亞屬中，RS為p氨基酸，其中卩氨基連接到式I的羰基,
以形成酰胺4定。第三亞屬內(nèi)的優(yōu)選種類由以下結(jié)構(gòu)表示
在第四亞屬中，W為卩氨基酰胺，其中卩氨基連接到式I的羰基， 以形成酰胺鍵。第四亞屬內(nèi)的優(yōu)選種類由以下結(jié)構(gòu)表示
本發(fā)明的另一方面涉及用式I的化合物或鹽調(diào)節(jié)蛋白激酶催化活 性的方法。在一種優(yōu)選的方法中，蛋白激酶選自由VEGF和PDGF組 成的受體。
效用
本發(fā)明提供能夠控制和/或調(diào)節(jié)不限于VEGFR和/或PDGFR的蛋 白激酶活性的化合物。因此，本發(fā)明提供治療與這些激酶異?；顒?dòng)相 關(guān)的疾病的治療方法。這些疾病包括^旦不限于實(shí)體瘤(如成膠質(zhì)細(xì)胞 瘤、黑素瘤和卡波西肉瘤)及卵巢癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸 癌和鱗狀細(xì);9包癌。此外，VEGFR/PDGFR抑制劑可用于治療再狹窄和 糖尿病性—見網(wǎng)膜病。
本發(fā)明還涉及通過受體調(diào)節(jié)途徑抑制血管發(fā)生和血管生成，包括 包含VEGF受體和/或PDGF受體的途徑。因此，本發(fā)明提供治療癌癥 和包括血管無控形成的其他疾病的治療方法。
合成方案
合成原料HATU酯(1-1)的一般方案顯示于方案1中。
方案1
步驟l:
將5-氟-l,3-二氫吲哚-2-酮(1.62g， 10.2mmol)、 5-曱?；?2，4-二甲 基-lH-吡咯-3-曱酸(1.96g, 10.7mmo1)、吡咯烷(12滴)和無水乙醇的混 合物加熱到回流3小時(shí)。將混合物冷卻到25°C，并通過過濾收集固體。 將固體與乙醇(30mL)在72。C攪拌30分鐘。將混合物冷卻到25。C，再 次通過過濾收集固體，用乙醇(6mL)洗滌，在真空下干燥過夜，得到 橙色固體(Z)-5-((5-氟-2-氧代二氫亞吲哚-3-基)曱基)-2,4-二曱基-lH-吡 咯-3-曱酸(3.094g,96。/o)。LC-ESIMS觀察[M+H]十301(計(jì)算C16H13FN203 300.09).
步驟2:
使(Z)-5-((5-氟-2-氧代二氫亞吲哚-3-基)曱基)-2，4-二甲基-1 H-吡咯 -3-曱酸(3.094g， 10.3mmol)懸浮于DMF(15mL),并攪拌5分鐘。然后 加入DIEA(2.7mL, 15.5mmo1)，并將混合物攪拌10分鐘。加入 HATU(3.91g, 10.28mmo1)，并在25。C攪拌反應(yīng)混合物到反應(yīng)完成。 LC/MS^r測反應(yīng)完成。除去大部分DMF,使殘余物懸浮于ACN，并 攪拌另外40分鐘。由過濾收集固體，用ACN洗滌，并在高真空下千 燥過夜。得到5-((5-氟-2-氧代二氫亞吲哚-3-基)曱基)-2,4-二曱基-111-吡咯-3-曱酸(Z)-3H-[l,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基酯(3.97g， 92%)。 LC隱ESIMS觀察[M+Hf 419(計(jì)算C21H15FN603 418.12).
實(shí)施例1-23: —般方案 方案2
原料HATU酯(l-l)的合成顯示于方案1中。為了制備游離羧酸 1-2,將未保護(hù)的氨基酸(l.O當(dāng)量)加入到1-1(1.0當(dāng)量)和DIEA(1.5當(dāng) 量)在DMF中的溶液，如方案2所示。在25。C攪拌溶液過夜后，LC-MS 顯示1-2生成完全，無原料剩余。在下一步直接用此溶液制備酰胺1-3。 這樣，將胺(2當(dāng)量)、HATU(l.Ommol)和DIEA(l當(dāng)量)力口入到溶液中。 在25。C攪拌2小時(shí)后，根據(jù)LC-MS分析發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完全。使反應(yīng)溶液 直接經(jīng)過制備HPLC，以得到純酰胺產(chǎn)物1-3，隨后由LC-MS和NMR 譜表征分析。
實(shí)施例l.制備5-[5-氟-2-氧代-l,2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基甲基-2，4-二甲基-111-吡咯-3-甲酸(2-二甲基M甲?；?丙基)-酰胺
由52mg原料(活性酯l-l)進(jìn)行制備HPLC，得到50mg標(biāo)題化合 物(96%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN403: 413,獲 得值413。
H掘R (DMSO-cfe， 400 MHz), 6
13.68 (s, 1H》，10.89 (s, 1H)， 7.76 (dd, J- 2.4 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.68 (t, J= 5.6 Hz， 1H)， 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd, J-4.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 3.31 (m， 1H), 3.16 (m， 2H), 3.05 (s, 3H), 2.84 (s, 3H)， 2.41 (s, 3H), 2.39 (s， 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
實(shí)施例2. 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基甲基卜2,4-二曱
基-111-吡咯-3-甲酸(2-曱基-3-(嗎啉-4-基)-3-氧代-丙基)-酰胺<formula>formula see original document page 15</formula>
由52mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到56mg標(biāo)題化合物 (98%)。 LC-MS:單峰在254nm, MH+計(jì)算C24H27F2N404: 455,獲得 值455。
13.68 (S, 1H), 10.89 (S, 1H), 7.75 (dd, J = 2.4 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.67 (t, J = 5.6 Hz， 1H), 6.92 (m, 1H), 6.83 (dd, Hz, 8.4 Hz, 1H), 3.55
(m, 7H), 3.41 (m, 1H), 3.35 (m， 1H)， 3.22 (m, 1H》，3.12 (m, 1H), 2.42 (s, 3H)， 2.40 (s, 3H)， 1.04 (d， J = 7.2 Hz, 3H).
實(shí)施例3. 3-({5-[5-氟-2-氧代-1,2-二氫--引哚-(3乙)-亞基甲基1-2，4-二
曱基-lH-吡咯-3-羰基卜絲)-丁酸<formula>formula see original document page 15</formula>
由28mg原料(活性酉旨)進(jìn)行制備HPLC，得到14mg標(biāo)題化合物 (56%)。 LC-MS:單峰在254nm, MH+計(jì)算C2qH2()FN304: 386,獲得 值386。
(s, 1H), 12.21 (s, 1H), 10.89 (s， 1H), 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, J-9.6 Hz, 1H), 7.71 (s, 1 H), 7.57 (d， J = 8.4 Hz, 1 H), 6.92 (m， 1H〉， 6.83 (dd， J = 4.8 Hz, J = 8.4 Hz. 1H), 4.29 (m, 1H)， 4.05 (m, 1H〉， 3.31 (d, J = 9.6 Hz， 2H〉， 2.41 (s, 3H)， 2.38 (s, 3H)， 1.17 (d, J = 6.8 Hz， 3H).
H-NMR (DMSO-ofe, 400 MHz》，5
H掘R (DMSO-cf6, 400 MHz), 5 13.66
實(shí)施例4. 5-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l咮-(3Z)-亞基甲基-2，4-二甲 基-111-吡咯-3-曱酸(2-二曱基氨基甲酰基-l-曱基-乙基)-酰胺<formula>formula see original document page 16</formula>
由58mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到42mg標(biāo)題化合物 (78%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN403: 413，獲得 值413。
(s, 1H), 10.87 (s, 1H)， 7.75 (dd， J = 2.4 Hz, J-9.6 Hz, 1H)， 7.70 (S， 1H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.92 (m， 1 H), 6.82 (dd, J = 4.8 Hz, J 8.4 Hz， 1 H), 4.29 (m, 1H), 3.01 (s， 3H〉， 2.82 (s, 3H), 2.58 (m, 1H), 2.42 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.18 (d, J - 6.8 Hz, 3H).
實(shí)施例5. 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-P引哚-(3Z)-亞基曱基-2，4-二甲 基-111-吡咯-3-曱酸(l-甲基-3-(嗎啉-4-基)-3-氧代-丙基)-酰胺<formula>formula see original document page 16</formula>
由48mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到43mg標(biāo)題化合物 (73%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C24H27FN404: 455，獲得 值455。
(s, 1 H)， 10.79 (s, 1 H), 7.67 (dd, J = 2.4 Hz， J = 9.6 Hz， 1 H)， 7.63 (s, 1 H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (dd, J = 4.8 Hz, J=8,4 Hz, 1H)， 4.23 (m, 1H)， 3.60-3.30 (m, 10H), 2.35 (s, 3H), 2.32 (s, 3H〉， 1.11 (d, J= 6.8 Hz, 3H).
實(shí)施例6. 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基甲基-2,4-二甲 基-111-吡咯-3-曱酸((S)-l-二甲基氨基曱酰基-2-羥基-乙基)-酰胺<formula>formula see original document page 16</formula>
由50mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到42mg標(biāo)題化合物 (84%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C21H23FN404: 415,獲得 值415。
(s, 1H), 10.91 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, J=9.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H)' 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.92 (m, 1 H)， 6.84 (s, 1 H)， 6.83 (dd, J = 4.8 Hz, J = 8.4 Hz， 1H), 4.97 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3.11 (s, 3H). 2.87 (s， 3H), 2.45 (s, 3H)， 2.43 (s, 3H).
實(shí)施例7. 5-[5-氟-2-氧代-l,2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基曱基l-2，4-二曱 基-lH-吡咯-3-曱酸((S)-l-羥甲基-2-(嗎啉-4-基)-2-氧代-乙基)-酰胺
<formula>formula see original document page 17</formula>
由50mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC,得到51mg標(biāo)題化合物 (93%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C23H25FN405: 457，獲得 值457。
(s, 1H), 10.90 (s, 1H),7.77 (dd, J-2.4 Hz'J-9.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H)， 7.63 (d, J - 8.0 Hz, 1 H), 6.94 (m, 1 H)' 6.83 (dd, J = 4.8 Hz' J = 8.4 Hz, 1 H), 4.97 (m, 1H)， 3.80-3.40 (m, "H), 2.45 (s, 3H), 2.43 (s, 3H).
實(shí)施例8: 5-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l咪-(3Z)-亞基甲基-2,4-二曱 基-111-吡咯-3-曱酸((R)-l-二曱基絲曱?；?2-羥基-乙基)-酰胺
<formula>formula see original document page 17</formula>
由63mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC,得到40mg標(biāo)題化合物 (64%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C21H23FN404: 415，獲得 值415。
1H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.71 (s, 1H), 10.91 (s, 1H)， 7.77 (dd, J = 2.4 Hz, J-9.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H)， 7.55 (d， J - 7.6 Hz, 1H), 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd， J = 4.8 Hz, J = 8.4 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 6.0 Hz, J = 14.0 Hz， 1H), 3.67 (dd, J= 6.4 Hz, J = 14.8 Hz, 1H), 3.58 (dd， J - 6.4 Hz, J = 14.4 Hz, 1H)' 3.11 (s, 3H)， 2.87 <s， 3H)， 2.46 (s, 3H), 2.44 (S, 3H).
實(shí)施例9: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-P引咮-(3Z)-亞基甲基-2，4-二曱 基-111-吡咯-3-曱酸((R)-l-羥甲基-2-(嗎啉-4-基)-2-氧代-乙基)-酰胺
由63mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到32mg標(biāo)題化合物 (47%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C23H25FN405: 457，獲得 值457。
1H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.71 (s, 1H), 10.90 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (m, 1H), 6.83 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.96 (dd' J = 6.4 Hz, J = 14.4 Hz, 1H), 3.74 (dd, 7 - 6.4 Hz, v/= 14.4 Hz, 1H), 3.65 - 3.30 (m, 9H)， 2.46《s, 3H), 2.43 (s， 3H).
實(shí)施例10: (S)-2-((5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-(3Z)-亞基曱 基-2，4-二曱基-111-吡咯-3-羰基}-氨基)-]^*1*^*1*^*4*，^[*4*-四甲基 -琥詢酰胺
由42mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到30mg標(biāo)題化合物 (73%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C24H28FN504: 470，獲得 值470。
，H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.69 (s, 1H), 10.89 (s， 1H), 7.95 (d，J-8.8 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 2.0 Hz， 9.2 Hz， 1H), 7.70 (s, 1H), 6.93 (m, 1H〉， 6.83 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz， 1H》，5.26 (m' 1H), 3.08 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.84'(s, 3H), 2.80 (s, 3H)， 2.55 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (s, 3H).
實(shí)施例11: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基甲基-2，4-二曱
基-lH-吡咯-3-曱酸[(S)-l-(嗎啉-4-羰基)-3-(嗎啉-4-基)-3-氧代-丙基-酰
胺
由56mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到70mg標(biāo)題化合物 (97%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C28H32FN506: 554，獲得 值554。
1H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13朋 (S, 1H)， 10.91 (S, 1H)， 8.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, 9.2 "z, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.93(m, 1H), 6.83 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.28 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.70-2.50 (m, 16H), 2.41 (S, 3H), 2.38 (S， 3H).
實(shí)施例12: (S)-2-((5-5-氟-L氧代-l，:2-二氫-吲哚-(3Z)-亞基曱
基-2，4-二甲基-lH-吡咯-3-羰基卜絲)-戊二酸雙(二甲基酰胺)
由75mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到60mg標(biāo)題化合物 (78%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C25H3。FN504: 484，獲得 值484。
1H-NMR (DMSO-de, 400 MHz〉， 5 13.69 (s, 1H), 10.88 (s, 1H), 7.75 (dd， J = 2.4 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.71 (s， 1H), 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.93 (m, 1 H), 6.84 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1 H)， 4.88 (m， 1 H), 3-13 (s, 3H), 2.94 (s, 3H〉， 2.86 (s， 3H), 2.82 (s, 3H), 2.44 (s, 3H>, 2.42 (s, 3H), 2-34 (m, 2H), 1.95 (m, 1H), 1.74 (m, 1H).
實(shí)施例13: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l咪-(3Z)-亞基曱基-2，4-二曱 基-111-吡咯-3-甲酸(S)-l-(嗎啉-4-羰基)-4-(嗎啉-4-基)-4-氧代-丁基-酰 胺
由75mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到82mg標(biāo)題化合物 (94%)。 LC-MS:單峰在254nm, MH+計(jì)算C29H34FN506: 568,獲得 值568。
1H-NMR (DMSO-of6, 400 MHz), 5 13.70 (s, 1H), 10,91 (s， 1H), 8.30 (m, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.92 (m, 1H), 6.84 (m' 1H)， 4.90 (m, 1H》，3.80 — 3.35 (m, 9H), 3.13 (m, 7H), 2.45 (s， 3H), 2.43 (s, 3H), 2.56-2.35 (m, 2H)， 1.97 (m, 1H), 1.76 (m, 1H).
實(shí)施例14: (8)-4-二甲基>^曱?；?2-({5-15-氟-2-氧代-1，2-二氫-
吲哚-(3Z)-亞基曱基-2，4-二曱基-lH-吡咯-3-絲卜絲)-丁酸
由50mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到44mg標(biāo)題化合物 (81%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C23H25FN405: 457，獲得 值457。
實(shí)施例15: (S)-2-((5-[5-氟-2-氧代-l,2-二氫-吲哚-(3Z)-亞基曱 基-2,4-二甲基-lH-吡咯-3-羰基卜絲)-5-嗎啉-4-基-5-氧代-戊酸
由50mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到40mg標(biāo)題化合物 (67%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C25H27FN406: 499，獲得 值499。 H-NMR (DMSO-cfe， 400 MHz), 5 13.69
(s, 1H), 12.55 (s, 1H), 10.89 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.0 Hz,化).7.75 (dd， J - 2.4 Hz， J = 9.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.36 (m， 1H), 3.53 (m, 4H), 3.42 (m, 4H), 3.31 (m, 2H), 2.44 (s; 3H). 2.42 (s, 3h), 2.08 (m, 1h), ;1.93 (m, 4h).
實(shí)施例16: (R)-2-((5-[5-氟-:2-氧代-l，:2-二氫-吲哚-(3Z)-亞基曱 基-2，4-二曱基-lH-吡咯-3-羰基卜Jl^)-5-嗎啉-4-基-5-氧代-戊酸
由37mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC,得到37mg標(biāo)題化合物 (84%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C25H27FN406: 499，獲得 值499。
(s, 1H〉， 12.57 (s, 1H)， 10.90 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.76 (dd， J= 2.8 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.92 (m， 1H), 6.84 (dd, J = 4.8 Hz， 8.4 Hz, 1H), 4.37 (m' 1H)， 3.53 (m, 3H), 3.43 (m, 4H), 3.31 (m, 3H), 2.45 (s, 3H》，2,42 (s， 3H), 2.08 (m, 1H), 1.93 (m. 1H〉.
實(shí)施例17: (R)-2-((5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-(3Z)-亞基曱 基-2,4-二曱基-lH-吡咯-3-羰基卜絲)-戊二酸雙(二曱基酰胺)
由60mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到28mg標(biāo)題化合物 (41%)。 LC-MS:單峰在254nm, MH+計(jì)算C25H3QFN504: 484，獲得 值484。
H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.69 H-NMR (DMSO-de, 400 MHz), 5 13.69
(s， 1H), 10.90 (s, 1H), 7.76 (dd, J - 2.4 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.73 (d， J - 8.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.93 (m' 1H), 6.84 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.88 (m， 1H), 3.13 (s, 3H)' 2.93 (S, 3H), 2.86 (s, 3H), 2.82 (s， 3H), 2.44 (s, 3H), 2.42 (s， 3H), 2.50 - 2.30 (m, 2H), 1.95 (m, 1H), 1.74 (m， 1H).
實(shí)施例18: 5-15-氟-2-氧代-l,2-二氫-丐l哚-(3Z)-亞基甲基-2，4-二甲 基-111-吡咯-3-曱酸(R)-l-(嗎淋-4-羰基)-4-(嗎啉-4-基)-4-氧代-丁基卜 醜胺
由60mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到30mg標(biāo)題化合物 (38%)。 LC-MS:單峰在254nm, MH+計(jì)算C29H34FN506: 568，獲得 值568。
(s， 1H)' 10.91 (S, 1H), 7.77 (m, 2H), 7.72 (S, 1H), 6.93 (m, 1H)， 6.83 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 3.90 - 3.35 (m, 16H)' 2.45 (s, 3H), 2.42 (s, 3H)， 2.50 — 2.30 (m, 2H), 1鄰(m, 1H), 1.77 (m, 1H),
實(shí)施例19: 5-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-巧l哚-(3Z)-亞基甲基-:2，^二曱
基-lH-吡咯-3-曱酸((lS，2S)-l-二曱基絲曱酰基-2-羥基-丙基)-酰胺
由122mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到84mg標(biāo)題化合物 (67%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN404: 429,獲得 值429。
H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.70
1H-NMR (DMSO-of6, 400 MHz), 6 13.69 (s, 1H)， 10.89 (s, 1H)， 7.75 (m, 1H), 7.70 (s, 1H)， 7.61 (d, /= 8.8 Hz, 1H), 6.92 (m， 1H〉， 6.83 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.81 (t, J = 4.4 Hz, 1H》，3.90 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.86 (s, 3H), 2.42 (s， 3H), 2.39 (s, 3H)， 1.12 (d, J - 4.8 Hz, 3H).
實(shí)施例20: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-p引哚-(3Z)-亞基甲基I-2，4-二曱 基-111-吡咯-3-甲酸((1R,2R)小二曱基M曱?；?2-羥基-丙基)-酰胺
由122mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到78mg標(biāo)題化合物 (62%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN404: 429,獲得 值429。
(S, 1H), 10.90 (s， 1H), 7.77 (m， 1H), 7.71 (s' 1H), 7.62 (d, J- 8.4 Hz, 1H), 6.93 (m, 1 H), 6.84 (dd, J = 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1 H), 4.82 (t, J = 8.0 Hz, 1 H)， 3.92 (m, 1H), 3.13 (s, 3H)， 2.87 (s, 3H〉， 2.43 (s, 3H), 2.40 (S, 3H), 1.15 (d, J = 2.8 Hz, 3H).
實(shí)施例21: 5-l5-氟-2-氧代-l，2-二氫J引哚-(3Z)-亞基甲基l-2,4-二甲 基-111-吡咯-3-曱酸((1R，2S)小二甲基絲甲?；?2-羥基-丙基)-酰胺
由122mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC，得到90 mg標(biāo)題化合物 (72%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN404: 429，獲得 值429。
(s, 1H), 10.91 (s, 1H〉， 7.77 (dd, J = 2.4 Hz, 6.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.29 (d, Hz, 1H)， 6.93 (m, 1H), 6.84 (^d, Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H),
3.97 (m, 1H), 3.12 (s， 3H), 2.87 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.10 (d, J = 5.6 Hz' 3H).
H-剛R (DMSO-cfe, 400 MHz), 5 13.70
H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz)， 5 13.73
實(shí)施例22: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l咪-(3Z)-亞基曱基l-2,4-二曱 基誦lH-吡咯-3畫甲酸((1S，2R)-1畫二甲基^甲?；?2-羥基畫丙基)誦酰胺
由122mg原料(活性酯)進(jìn)行制備HPLC,得到90mg標(biāo)題化合物 (72%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C22H25FN404: 429，獲得 值429。
(s, 1H), 10.91 (S, 1H), 7.76 (dd, J = 2.8 Hz' 6.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.30 (d， J - 8.0 Hz， 1H), 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd, J - 4.8 Hz, 8.4 Hz, 1H〉， 4.85 (m, 1H), 3.98 (m， 1H), 3.12 (s, 3H〉， 2.86 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.45 (s， 3H), 1.10 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
實(shí)施例23: 5-[5-氟-2-氧代-l，2-二氫-丐l咮-(3Z)-亞基曱基-2，4-二曱 基-111-吡咯-3-甲酸二甲基氨基甲?；谆?酰胺
由66mg原料(活性S旨)進(jìn)行制備HPLC，得到27mg標(biāo)題化合物 (46%)。 LC-MS:單峰在254nm， MH+計(jì)算C2。H21FN403: 385，獲得 值385。
(s,1H), 10.90 (s， 1H〉' 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, J=9.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H),7.55 (t, Hz, 1H)， 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd, J-4.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.08 (d, J-
5.6 Hz, 2H), 3.00 (s， 3H), 2.87 (s, 3H), 2.49 (s, 3H》，2.46 (s, 3H).
VEGFR生化測定
化合物的生化活性由Upstate Ltd, Dundee, United Kingdom沖艮據(jù) 以下步驟測定。以25pl最終反應(yīng)體積，用8mM MOPS pH 7.0、 0.2mM EDTA、 0.33mg/ml髓鞘堿性蛋白、10mM乙酸鎂和[，"P-ATP](比活度 約500cpm/pmol，濃度根據(jù)需要)培育KDR(h)(5-10mU)。反應(yīng)通過加
H-NMR (DMSO-cfe, 400 MHz), 6 13.73
H掘R (DMSO-c/6, 400 MHz), 6 13.71
入MgATP混合物引發(fā)。在室溫培育40分鐘后，通過加入5jal 3%磷酸 溶液停止反應(yīng)。然后將lO)il反應(yīng)物點(diǎn)到P30濾墊上，在75mM磷酸 中洗滌5分鐘，洗滌三次，并在干燥和閃爍計(jì)數(shù)前在曱醇中洗滌一次。
細(xì)胞測定HUVEC: VEGF誘導(dǎo)的增殖
在HUVEC細(xì)胞的VEGF誘導(dǎo)增殖中測定化合物的細(xì)胞活性。在 37。C和5%C02下將HUVEC細(xì)胞(Cambrex, CC-2517)保持在 EGM(Cambrex, CC-3124)中。將HUVEC細(xì)胞在EGM中以密度5000 個(gè)細(xì)胞/孔(96孔板)平板接種。在細(xì)胞附著后(1小時(shí))，由 EBM(Cambrex， CC-3129) + 0.1Q/0 FBS(ATTC, 30畫2020)置換EGM培 養(yǎng)基，并將細(xì)胞在37。C培養(yǎng)20小時(shí)。由EBM+1。/。FBS置換培養(yǎng)基， 將化合物按序列在DMSO中稀釋，并加到細(xì)胞，達(dá)到0-5,000nM和 1%DMS0最終濃度。在37。C預(yù)培育1小時(shí)后，用10ng/ml VEGF(Sigma， V7259)刺激細(xì)胞，并在37。C培育45小時(shí)。通過BrdU DNA結(jié)合4小 時(shí)測定細(xì)胞增殖，用1MH2S04停止反應(yīng)，由ELISA (Roche試劑盒， 16472229)定量測定BrdU標(biāo)簽。用690nm參比波長在450nm測定吸 光度。
權(quán)利要求
1. 一種由以下式I表示的化合物其中R1選自氫、鹵基、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C1-C6)鹵代烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、酰胺、磺酰胺、氰基、取代或未取代的(C6-C10)芳基；R2選自氫、鹵基、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C1-C6)鹵代烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、(C2-C8)烷氧基烷基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C6-C10)芳基氨基；R3選自氫、(C1-C6)烷基、(C6-C10)芳基、(C5-C10)雜芳基和酰胺；R4選自氫和(C1-C6)烷基；并且R5為α或β氨基酸或通過α或β氨基連接到式(I)的羰基以形成酰胺鍵的α或β氨基酰胺基；或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，或者它可作為前藥。
2.權(quán)利要求l的化合物，其中RS由以下結(jié)構(gòu)表示R6為天然或非天然產(chǎn)生氨基酸或其相應(yīng)酰胺衍生物的側(cè)鏈，所述 酰衍生物具有由>1118119表示的酰胺氮；其中RS和R、蟲立選自氪、 (Cl-C6)烷基、(Cl-C6)羥基烷基、(Cl-C6)二羥基烷基、(Cl-C6)烷氧基、 (Cl-C6)烷基羧酸、(Cl-C6)烷基膦酸、(Cl-C6)烷基磺酸、(Cl-C6)羥基 烷基羧酸、(Cl-C6)烷基酰胺、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)雜環(huán)烷基、其中:(C6-C8)芳基、(C5-C8)雜芳基、(C3-C8)環(huán)烷基羧酸，或者118和119與 N—起形成未取代或用一個(gè)或多個(gè)羥基、酮、醚和羧酸取代的(C5-C8) 雜環(huán)；R7選自羥基、(Cl-C6)0-烷基、(C3-C8)0-環(huán)烷基，和NR8R9;并且n為0或1。
3. 權(quán)利要求2的化合物，其中115為a氨基酸，其中a氨基連接 到式I的羰基，以形成酰胺鍵。
4. 權(quán)利要求2的化合物，其中W為a氨基酰胺，其中a氨基連 接到式I的羰基，以形成酰胺鍵。
5. 權(quán)利要求2的化合物，其中115為卩氨基酸，其中卩氨基連接 到式I的羰基，以形成酰胺鍵。
6. 權(quán)利要求2的化合物，其中W為p氨基酰胺，其中卩氨基連 接到式I的羰基，以形成酰胺4建。
7. 權(quán)利要求3的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
8.權(quán)利要求3的化合物,所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
9.權(quán)利要求3的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
10.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
11.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
12.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
13.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
14.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
15.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 4</formula>
16.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
17.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
18.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
19.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
20.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):
21.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
22.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
23.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
24.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
25.權(quán)利要求5的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
26.權(quán)利要求6的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 6</formula>
27.權(quán)利要求6的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 7</formula>.
28.權(quán)利要求6的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 7</formula>.
29.權(quán)利要求6的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 7</formula>.
30. —種用權(quán)利要求1-29中任一項(xiàng)的化合物或鹽調(diào)節(jié)蛋白激酶催化活性的方法。
31. 權(quán)利要求30的方法，其中所述蛋白激酶選自由VEGFR和PDGFR組成的受體。
全文摘要
吡咯基-吲哚滿酮的氨基酸衍生物及其酰胺或酯衍生物具有作為蛋白激酶抑制劑的增強(qiáng)的和意外的藥物特性，并用于治療異常蛋白激酶活性相關(guān)的疾病，如癌癥。
文檔編號A61K31/404GK101389331SQ200680053395
公開日2009年3月18日 申請日期2006年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月29日
發(fā)明者C·梁, Y·馮 申請人:斯克里普斯研究學(xué)院