專利名稱：：作為abc轉(zhuǎn)運蛋白調(diào)控劑的喹啉-4-酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：AF508-CFTR中508殘基的缺失防止初生蛋白正確地折疊。這導(dǎo)致該突變蛋白不能退出ER和運輸至質(zhì)膜。其結(jié)果是，膜中通道數(shù)量遠遠少于表達野生型CFTR的細胞。除了運輸減低以外，突變還導(dǎo)致有缺陷的通道門控?？傊?，膜中通道數(shù)量減少和有缺陷的門控引起跨越上皮的陰離子轉(zhuǎn)運減少，引起有缺陷的離子和體液轉(zhuǎn)運(Quinton，P.M.(1990)，F(xiàn)ASEBJ，4:2709-2727)。不過，研究已經(jīng)顯示，膜中AF508-CFTR的數(shù)量減少是功能性的，盡管少于野生型CFTR(Dalemans等人(1991)，NatureLond.354:526-528;Denning等人，supra;PasykandFoskett(1995)，J.Cell.Biochem.270:12347-50)。除了AF508-CFTR以外，其他導(dǎo)致有缺陷的運輸、合成和/或通道門控的致病性CFTR突變可能被增量或減量調(diào)節(jié)，以改變陰離子分泌和修改疾病進展和/或嚴(yán)重性。。與前一類ER故障有關(guān)的疾病有囊性纖維化(由誤折疊的厶FSOS-CFTR引起，正如上文所討論的)、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶非Piz變體引起)、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、無P脂蛋白血癥、溶酶體貯存疾病(例如I-細胞疾病/假性Hurler)、粘多糖病(由溶酶體加工酶引起)、Sandhof/Tay-Sachs(由(3-己糖胺酶引起)、Crigler-NajjarII型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-轉(zhuǎn)移酶引起)、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病(由胰島素受體引起)、拉倫侏儒癥(由生長激素受體引起)、髓過氧化物酶缺陷、原發(fā)性曱狀旁腺機能減退(由前促甲狀旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。與后一類ER故障有關(guān)的疾病有聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶PiZ變體引起)、先天性甲狀腺機能亢進、成骨不全(由I、II、IV型前膠原引起)、遺傳性低纖維蛋白原血(由纖維蛋白原引起)、ACT缺陷(由al-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩癥(DI)、后葉激素運載蛋白性DI(由加壓素/V2-受體引起)、腎原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-馬-圖三氏綜合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病(由PAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)疾患(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟失調(diào)、脊髄與延髓肌肉萎縮、齒狀核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強直性營養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶體a-半乳糖苷酶A引起)和斯-施二氏綜合征(由Prp加工缺陷引起))。牲畜和寵物、例如牛、豬、馬、綿羊、山羊、貓和狗的腹瀉也稱為家畜腹瀉病，是這些動物死亡的主要原因。腹瀉可以由任何重大轉(zhuǎn)變所致，例如斷奶或身體運動，以及響應(yīng)于多種細菌或病毒感染，一般發(fā)生在動物壽命的前幾個小時內(nèi)。二環(huán)辛基)、橋連三環(huán)基(例如金剛烷基)。術(shù)語"雜原子，，表示一個或多個氧、硫、氮、磷或硅(包括氮、硫、磷或硅的任意氧化形式；任意堿性氮或雜環(huán)可取代氮的季銨化形式，例如N(如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。術(shù)語"亞烷基鏈"表示直鏈或支鏈碳鏈，它可以是完全飽和的或者具有一個或多個不飽和單元，并且具有兩個與分子其余部分連接的點。術(shù)語"亞螺環(huán)烷基"表示這樣一種碳環(huán)的環(huán)，它可以是完全飽和的或者具有一個或多個不飽和單元，并且同一碳原子具有兩個與分子其余部分連接的點。0045]如上所述，在有些實施方式中，兩次獨立出現(xiàn)的R。(或者R+或本文相似定義的任意其他變量)與它們所鍵合的原子一起構(gòu)成3-8元環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)，具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子。兩次獨立出現(xiàn)的R。(或者R+或本文相似定義的任意其他變量)與每個變量所鍵合的原子一起所構(gòu)成的示范性環(huán)包括但不限于下列a)兩個獨立出現(xiàn)的R。(或者R+或本文相似定義的任意其他變量)鍵合于同一原子，并且與該原子一起構(gòu)成一個環(huán)，例如N(R。)2，其中出現(xiàn)的兩個R。與氮原子一起構(gòu)成哌啶-l-基、哌溱-l-基或嗎啉-4-基；和b)兩個獨立出現(xiàn)的R。(或者R+或本文相似定義的任意其他變量)鍵合于不同原子，并且與這些原子一起構(gòu)成一個環(huán)，例如其中苯基被<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>QR°，這兩次出現(xiàn)的R。與它們所鍵合的氧原<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>兩次出現(xiàn)的or取代Y子一起構(gòu)成稠合的6-元含氧環(huán)Y\y\0/。將被領(lǐng)會到，兩次獨立出現(xiàn)的R。(或者R+或本文相似定義的任意其他變量)與每個變量所鍵合的原子一起可以構(gòu)成多種其他環(huán)，上述詳細實例不打算是限制性的。在一種實施方式中，R'是8-12元飽和、部分不飽和或完全不飽和的二環(huán)環(huán)系，具有0-5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；其中IT可選地被至多3個選自卣代基、CN、CF3、CHF2、OCF3、OCHF2或Cl-C6烷基的取代基取代，其中所述Cl-C6烷基的至多兩個亞甲基單元可選地被-CO-、-CONH(Cl-C4烷基)-、-CO廣、-0C0-、-N(C1-C4烷基)C02-、-O-、-N(C1-C4烷基)CON(Cl-C4烷基)-、-OCON(Cl-C4烷基)-、-N(C1-C4烷基)CO-、-S-、-N(C1-C4烷基)-、-S02N(C1-C4烷基)-、N(Cl-C4烷基)SO廣或-N(CI-C4烷基)S02N(Cl-C4烷基)-代替。二環(huán)-辛基、[2.3.I.]二環(huán)-辛基或[3.3.l]二環(huán)-壬基。在某些實施方式中，112是氫，^是C1-C6直鏈或支鏈烷基。在某些實施方式中，！^選自曱基、乙基、丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或正戊基。在一種實施方式中，式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性O(shè)W是g代基、CI-C6直鏈或支鏈烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-0(C1-C4烷基)或囟代基的取代基取代；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及iii)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>其中R8是C1-C3亞烷基；以及每個R4和R5是C1-C4烷基。在一種實施方式中，式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)W是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及iii)R"是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>其中wD是0或1;Wa是0或1;r9是-CH「、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CH廠原子團可選地被0、NH或NMe代替。在另一種實施方式中，114和R5都是C1-C6脂族基?；蛘?，R'和r是Cl-C4烷基?；蛘?，IT和RS都是乙基。在另外一種實施方式中，IT選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>-2，4-二叔丁基-苯氧基]膦酸二節(jié)基酯，為澄清的油(80mg，6ly。)。力-NMR(400MHz，tf"DMS0)513.04(brs，1H)，12.05(s，1H)，8.91(s，1H)，8.35(dd，/=8.1，1.0Hz，1H)，7,88(s，+。-2，卜二叔丁基-苯氧基〗將[5-[(4-氧代-1H-喹啉-3-基)羰基氨基]-2，4-二叔丁基-苯氧基]膦酸二千基酯(65mg，0.1mmol)溶于乙醇(2mL)，用N2(g)沖洗反應(yīng)燒瓶。然后加入Pd-C(5%wt，20mg)，再次用N2(g)沖洗燒瓶。然后用H2(g)沖洗反應(yīng)燒瓶，然后在H2(g，atm)和室溫下攪拌3h。通過硅藻土過濾反應(yīng)，然后再次通過Q.2jim濾片過濾。濃縮溶液，得到[5-[(4-氧代-lH-會啉-3-基)羰基氨基]-2，4-二叔丁基-苯氧基]膦酸，為白色固體(40mg，85%)。'H-賜R(400MHz，cH)MSO)513.37(brs，1H)，11.85(s，1H)，8.93(s，1H)，8.31(d，/=8,0Hz，1H)，7.79-7.74(m，3H)，7,49(m，1H)，7.26(s，1H)，1.37(m，18H);HPLC保留時間3.07min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS473.0m/z[M+H]+。-2，4-二叔丁基-苯氧基]膦酸二鈉鹽向[5-[(4-氧代-lH-喹啉-3-基)羰基氨基]-2，4-二叔丁基-苯氧基]膦酸(300mg，0.635mmol)的去離子水(15mL)懸液加入NaOH溶液(0.1024N，12,4mL，1.27mmo1)。超聲混合物，加入更多的水(15mL)，使固體溶解。水溶液然后冷凍干燥，得到二鈉鹽，為絨毛狀白色固體。'H-NMR(400MHz,fDMSO)513.27(s，1H)，8.95(s，1H)，8.22(d，/=8.0Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.58(d，/=8.1Hz，1H)，7.45(m，1H)，7.20-7.16(m，2H)，1.40(s，9H)，1.38(s，9H);HPLC保留時間3.11min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS473.3m/z[M+H]+。-2-叔丁基-苯氧基]膦酸二千基酯將四唑(O.45MCH3CN溶液，12.4mL，5.6mmol)加入到在水水浴中冷卻的N-[2-(3-乙氧基苯基)-5-羥基-4-叔丁基-苯基]-4-氧代-1H-喹啉-3-酰胺(912mg，2mmol)與二爺基二異丙基氨基亞磷酸酯(1.84mL，5.6mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中。將反應(yīng)攪拌2h，同時升溫至室溫，然后加入更多的二芐基二異丙基氨基亞磷酸酯(1.00mL，3.0mraol)，將反應(yīng)加熱至回流達3h。然后將反應(yīng)在水水浴中冷卻，同時加入叔丁基過氧化氫(5.5M癸烷溶液，1.02mL，5.6mmol),在室溫下攪拌過夜。然后使反應(yīng)混合物在二氯甲烷與飽和NaHC03溶液之間分配。將有機層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO,千燥，濃縮。使殘余物吸附上硅藻土，經(jīng)過反相柱色譜純化(C-18,30-50%乙腈-水洗脫副產(chǎn)物，然后50-95%洗脫產(chǎn)物)，得到磷酸二節(jié)基酯5-叔丁基-3'-乙氧基-2-[(4-氧代-l，4-二氫-喹啉-3-羰基)-氨基]-聯(lián)苯-4-基酯，為白色固體(1.2g，83%)。^-NMR(400MHz，^-DMSO)512.17(s，1H)，8.86(s,1H)，8.68(s，1H)，8.11(dd，/-8.2，1.1Hz，1H)，7.77(m，1H)，7.71(d，/=7.8Hz,1H)，7.49-7,34(m，12H)，7.18(d，/=1.3Hz，1H)，6.99-6.96(m,3H)，5.24(m，4H)，4.10(q，/=7.0Hz，2H)，1.34(s，9H)，1.30(t，/-7.0Hz，3H);HPLC保留時間4.20min，30-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS717.3m/z[M+H]+。-2-叔丁基-苯氧基]膦酸將[4-(3-乙氧基苯基)-5-[(4-氧代-lH-喹啉-3-基)羰基氨基]-2-叔丁基-苯氧基]膦酸二芐基酯(50mg，0.07mmol)溶于乙醇(2mL)，用N2(g)沖洗反應(yīng)燒瓶。然后加入Pd-C(5%wt，5mg)，再次用N2(g)沖洗燒瓶。然后用H2(g)沖洗反應(yīng)燒瓶，然后在H2(g，atm)和室溫下攪拌2.5h。過濾反應(yīng)，濃縮，得到[4-(3-乙氧基苯基)-5-[(4-氧代-lH-喹啉-3-基)羰基氨基]-2-叔丁基-苯氧基]膦酸，為白色固體(35mg，93%)。力-NMR(400MHz,tf"DMS0)513.21(brs，1H)，11.95(s,1H)，8.87(d，/=6.5Hz，1H)，8.48(s，1H)，8.10(d，/=8.0Hz，1H)，7.75—7.67(m，2H)，7.44(m，1H)，7.32(m，1H)，7.10(s，1H)，6.92-6.90(m，3H)，4.06(q，/=7.0Hz,2H)，1.39(s，9H)，1.28(t，/=7.0Hz，3H);HPLC保留時間3.20min，10-9"。CH3CN，運行5min;ESI-MS537.4m/z[M+H]+。-2-叔丁基-苯氧基]膦酸二鈉鹽向[4-(3-乙氧基苯基)-5-[(4-氧代-lH-喹啉-3-基)羰基氨基]-2-叔丁基-苯氧基]膦酸(28mg，0.052mmol)的去離子水(2mL)懸液加入NaOH溶液(O.1024N,1.02mL，0.104mmol)。將混合物用聲波處理，使固體溶解。水溶液然后冷凍千燥，得到二鈉鹽，為絨毛狀白色固體。^-NMR(400MHz，d-DMS0)513.32(s,1H)，8.91(s,1H)，8.25(s，1H)，8.06(d，/=6.9Hz，1H)，7.53(d，/=8.0Hz，1H)，7.41(m，1H)，7.26(t，/-7.9Hz，1H)，7.13(m，1H)，7.02-7.01(m，2H)，6.96(d，/=7.7Hz，1H)，6.82(dd，/-8.2，2.0Hz，1H)，4.10(q，/-7.0Hz，2H)，1.40(s，9H)，1.26(t，/-7.0Hz，3H);HPLC保留時間3.22min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS537.5m/z[M+H]+。-2，4-二叔丁基-苯基]2-二乙基氨基乙酸酯.HC1向N-(5-羥基-2，4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-酰胺(3.92g，lOmmol)、DMAP(8.54g，70mmol)與二乙基氨基-乙酸(2.62g，20mmol)在二氯甲烷(35mL)中的混合物加入^(3-二甲基氨基丙基)-乙基碳二亞胺(5.75g，30mmo1)。將反應(yīng)在室溫下攪拌3天。將反應(yīng)混合物用水洗滌，經(jīng)MgS04千燥，濃縮。將殘余物溶于DMS0，經(jīng)過反相HPLC純化(10-99%CH3CH-H20，含有0.5%TFA)，得到產(chǎn)物，為TFA鹽。將一部分該產(chǎn)物(130mg)溶于二氯甲烷，用飽和NaHC03溶液萃取，經(jīng)MgS04干燥，濃縮，得到游離堿。'H-NMR(400MHz，^H)MS0)512.93(brs，1H)，12.05(s，1H),8.87(s,1H)，8.33(dd，/=8.2，1.1Hz，1H)，7.82(m，1H)，7.75(d，/=7.8Hz，1H)，7.52(m，1H)，7.42(s，1H)，7.39(s，1H)，3.63(s，2H)，2.66(q，/=7,lHz，4H)，1.45(s，9H)，1.32(s，9H)，1.02(t，/=7.1Hz，6H);HPLC保留時間2.99min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS506.5m/z(MH+)。然后將游離堿溶于二乙醚，加入HC1溶液(2M二乙醚溶液，2當(dāng)量)，濃縮溶液，得到[5-[(4-氧代-1H-喹啉-3-基)羰基氨基]-2，4-二叔丁基-苯基]2-二乙基氨基乙酸酯鹽酸鹽，為淺粉紅色固體。丄H-NMR(400MHz，d-DMS0)513.15(d，/=6.8Hz，1H),12.09(s，1H)，10.13(s，1H),8,83(d，/=6.8Hz，1H)，8.33(d，/=7.6Hz，1H)，7.85-7.78(m，2H)，7.58(s，1H)，7.53(m,1H),7.44(s，1H)，4.66(m，2H)，3.28(m，4H)，1.46(s，9H)，1.34(s,9H),1.27(t，/=7.3Hz，6H);HPLC保留時間3.01min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS506.5m/z[M+H]+。2-二乙基氨基乙酸酯.HCl向N-[2-(3-乙氧基苯基)-5-羥基-4-叔丁基-苯基]-4-氧代-lH-全啉-3-酰胺(228mg，0.5mmol)、DMAP(610mg，5mmol)與二乙基氨基-乙酸(328mg，2.5mmol)在二氯曱烷(2.5mL)中的混合物加入^(3-二甲基氨基丙基)-A^-乙基碳二亞胺(480mg,2.5,ol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。除去溶劑后，殘余物經(jīng)過反相柱色鐠純化(10-50%CH3CN-H20，含有l(wèi).0°/。HC00H)，得到產(chǎn)物，為甲酸鹽。'H-NMR(400MHz，d-DMSO)512.14(bs，1H)，11.68(s，1H)，8.84(s，1H)，8.33(s，1H)，8.26(s，1H)，8.20-8.18(m，1H)，7.48(t，/=7.7Hz，1H)，7.35-7.23(m，4H)，6.93-6.90(m，1H)，6.85-6.83(m，2H)，4,02(q，/-7.0Hz，2H)，3.98(s，2H),3.07(q，/=7.2Hz，4H)，1.37—1.34(m，12H),1.26(t，/-7.2Hz，6H);HPLCEDC,DMAPCH，CI,保留時間3.05min，10-99%CH3CN，運行5min;ESI-MS570.4m/z[M+H]+。將一部分該產(chǎn)物(5mg)溶于氯仿(200juL)，加入HC1溶液(2M二乙醚溶液，12juL)。將溶液濃縮，重新溶于氯仿(200mL)，加入HC1溶液(2M二乙醚溶液，12mU。蒸發(fā)溶液至干，得到[4-(4-乙氧基苯基)-5-[(4-氧代-lH-喹啉-3-基)羰基氨基]-2-叔丁基-苯基]2-二乙基氨基乙酸酯鹽酸鹽。'H-NMR(400MHz、CD3CN)512.17(bs，1H)，11.31-11.29(m，1H)，8.76(s，1H)，8.38(s，1H)，8.14(d，/=8.0Hz，1H)，7.75-7.70(m，2H)，7.41(t，/=7,8Hz，2H),7.33(s，1H)，7,04-6.99(m，3H)，4.36(s，2H)，4.12(q，/-7.0Hz,2H)，3.42(m，4H)，2.15-1.96(m，18H);HPLC保留時間3.07min，10-99°/。CH3CN，運行5min;ESI-MS570.4m/z[M+H]+。典型的方案采用基底外側(cè)至頂端膜Cl—濃度梯度。為了建立這種梯度，對基底外側(cè)膜使用正常的套環(huán)，用制霉菌素(360ng/ml)可滲透化，而頂端NaCl被等摩爾葡糖酸鈉代替(用NaOH滴定至pH7.4),得到跨越上皮的大幅cr濃度梯度。所有實驗均是在制霉菌素可滲透化后30分鐘進行的。向細胞培養(yǎng)插件兩側(cè)加入福司扣林(1(VM)和所有供試化合物。比較假定△F508-CFTR強化劑與已知強化劑染料木素的功效。溶液基底外側(cè)溶液(mM):NaCl(135)，CaCl2(1.2)，MgCl2(1.2)，K2HP04(2.4)，KHP04(0.6)，N-2-羥基乙基哌溱-N'-2-乙磺酸(HEPES)(10)，葡萄糖(IO)。用NaOH滴定溶液至pH7.4。頂端溶液(mM):與基底外側(cè)溶液相同，NaCl用葡糖酸鈉(135)代替。[00308細胞培養(yǎng)III,全細胞記錄[00311J利用開孔-碎片全細胞記錄，監(jiān)測經(jīng)過溫度和供試化合物糾正的穩(wěn)定表達AF508-CFTR的NIH3T3細胞中的宏觀厶F508-CFTR電流(L簡)。簡而言之，利用Axopatch200B碎片-鉗放大器(AxonInstrumentsInc.,FosterCity,CA)，在室溫下進行IAF5。8的電壓鉗記錄。在10kHz的取樣頻率下獲取所有記錄，在1kHz下低通濾波。吸移管在充滿細胞內(nèi)溶液時具有5-6MQ的電阻。在這些記錄條件下，計算室溫下的Cr反向電位(Eu)為-28mV。所有記錄具有〉20GQ的密封電阻和〈15MQ的串聯(lián)電阻。利用裝有Digidata1320A/D界面連接Clampex8(AxonInstrumentsInc.)的PC進行脈沖發(fā)生、數(shù)據(jù)獲取和分析。浴液含有〈250jaL鹽水，利用重力灌注系統(tǒng)連續(xù)灌注，速率2ml/min。[00312也利用開孔-碎片-記錄技術(shù)研究了AF508-CFTR強化劑增加穩(wěn)定表達厶F508-CFTR的NIH3T3細胞中宏觀△F508-CFTRC1—電流(lA，)的能力。從光學(xué)測定法鑒定的強化劑引起Ia，的刑量-依賴性增加，效力和功效與光學(xué)測定法相似。在所有所檢查的細胞中，強化劑施加之前和期間的反向電位為-30mV左右，它是所計算的EC1(-28mV)。[00313溶液細胞內(nèi)溶液(mM):Cs-天冬氨酸鹽(90)，CsCl(50)，MgCh(1)，HEPES(IO)和240|ug/ml兩性霉素-B(用CsOH調(diào)節(jié)pH至7.35)。細胞外溶液(mM):N-甲基-D-葡糖胺(NMDG)-C1(150)，MgCl2(2)，CaCl2(2)，HEPES(10)(用HC1調(diào)節(jié)pH至7.35)。[003141細胞培養(yǎng)[00315使用穩(wěn)定表達AF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纖維細胞進行全細胞記錄。在175cn^培養(yǎng)燒瓶中，將細胞供養(yǎng)在37。C下、在5%0)2和90%濕度中、和Dulbecco氏改性Eagle氏培養(yǎng)基中，其中補充有2mM谷氨酰胺、10%胎牛血清、IXNEAA,p-ME、IX青霉素/鏈霉素和25mMHEPES。就全細胞記錄而言，將2，500-5，000細胞接種在涂有聚-L-賴氨酸的玻璃蓋片上，在27°C下培養(yǎng)24-48小時，然后用于測試強化劑活性；用或不用糾正化合物在37°C下溫育，用于測量糾正劑的活性。[00316IV.單通道記錄[00317利用所切除的內(nèi)側(cè)外翻膜碎片觀察在NIH3T3細胞中穩(wěn)定表達的經(jīng)過溫度糾正的AF508-CFTR的單通道活動和強化化合物的活性。簡而言之，利用Axopatch200B碎片-鉗放大器(AxonInstrumentsInc.)，在室溫下進行單通道活動的電壓鉗記錄。在10kHz的取樣頻率下獲取所有記錄，在400Hz下低通濾波。將碎片吸移管改造成CorningKovarSealing#7052玻璃(WorldPrecisionInstruments,Inc.,Sarasota,FL)，在充滿細胞夕卜溶液時具有5-8MQ的電阻。在切除后加入ImMMg-ATP和75nMcAMP-依賴性蛋白激酶催化性亞單位(PKA;PromegaCorp.Madison,WI)，活化厶F508-CFTR。通道活動穩(wěn)定后，利用重力微量灌注系統(tǒng)灌注碎片。將流入物置于碎片附近，導(dǎo)致l-2秒內(nèi)溶液交換完全。為了維持迅速灌注期間的AF508-CFTR活性，向浴溶液加入非特異性磷酸酶抑制劑r(10mMNaF)。在這些記錄條件下，通道活動在整個碎片記錄期間(長達60分鐘)保持恒定。由正電荷從細胞內(nèi)溶液向細胞外溶液運動(陰離子向相反方向運動)所產(chǎn)生的電流以正電流顯示。吸移管電位(V》維持在80mV。[00318分析含有《2個活動通道的膜碎片的通道活動。在實驗過程期間同時開放的最大數(shù)量決定了活動通道的數(shù)量。為了測定單通道電流幅度，在100Hz下"離線"過濾從120秒AF508-CFTR活性記錄的數(shù)據(jù)，然后用于構(gòu)建全點幅度直方圖，利用Bio-Patch分析軟件(Bio-LogicC。mp.France)帶入多高斯函數(shù)。從120秒通道活動測定總微觀電流和開放概率(P。)。P。是利用Bio-Patch軟件或者從P。=I/i(N)測定的，其中I=平均電流，i=單通道電流幅度，N=碎片中活動通道的數(shù)量。[003191溶液細胞外溶液(mM):騰G(150)，天冬氨酸(150),CaCl2(5)，MgCl2(2)和HEPES(10)(用Tris堿調(diào)節(jié)pH至7.35)。細胞內(nèi)溶液(mM):腸G-Cl(150)，MgCl2(2)，EGTA(5)，TES(10)和Tris堿(14)(用HC1調(diào)節(jié)pH至7.35)。[00320細胞培養(yǎng)[00321使用穩(wěn)定表達AF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纖維細胞進行切除膜碎片鉗記錄。在175ci^培養(yǎng)燒瓶中，將細胞供養(yǎng)在37°C下、在5%C02和90°/。濕度中、和Dulbecco氏改性Eagle培養(yǎng)基中，其中補充有2mM谷氨酰胺、10%胎牛血清、IXNEAA，|3-ME、IX青霉素/鏈霉素和25mMHEPES。就單通道記錄而言，將2，500-5，000細胞接種在涂有聚-L-賴氨酸的玻璃蓋片上，在27。C下培養(yǎng)24-48小時備用。'[00322利用一種或多種上述測定法，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物強化CFTR的活性。不言而喻，盡管已經(jīng)結(jié)合詳細的說明描述了發(fā)明，不過上述說明僅供舉例說明，并不限制發(fā)明的范圍，發(fā)明范圍受到權(quán)利要求范圍的限定。其他方面、優(yōu)點和修改也在下列權(quán)利要求的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.式I化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽；X是價鍵或者是可選被取代的C1-C6亞烷基鏈，其中X的至多兩個亞甲基單元可選地和獨立地被-CO-、-CS-、-COCO-、-CONR′-、-CONR′NR′-、-CO2-、-OCO-、-NR′CO2-、-O-、-NR′CONR′-、-OCONR′-、-NR′NR′、-NR′NR′CO-、-NR′CO-、-S-、-SO、-SO2-、-NR′-、-SO2NR′-、NR′SO2-或-NR′SO2NR′-代替；RX獨立地是R′、鹵代基、NO2、CN、CF3或OCF3；y是0-4；每個R1和R2獨立地選自氫、CN、CF3、鹵代基、C1-C6直鏈或支鏈烷基、3-12元環(huán)脂族基、苯基、C5-C10雜芳基或C3-C7雜環(huán)基，其中所述雜芳基或雜環(huán)基具有至多3個選自O(shè)、S或N的雜原子，其中所述R1和R2獨立地和可選地被至多三個選自如下的取代基取代:-OR′、-CF3、-OCF3、SR′、S(O)R′、SO2R′、-SCF3、鹵代基、CN、-COOR′、-OC(O)R′、-COR′、-O(CH2)2N(R′)(R′)、-O(CH2)N(R′)(R′)、-CON(R′)(R′)、-(CH2)2OR′、-(CH2)3OR′、CH2CN、可選被取代的苯基或苯氧基、-N(R′)(R′)、-NR′C(O)OR′、-NR′C(O)R′、-(CH2)2N(R′)(R′)或-(CH2)N(R′)(R′)；R3是氫；RXY是選自如下的基團:或或其中在基團(A)和基團(B)中:每個wA、wB、wC和wD獨立地是0或1；每個M獨立地選自氫、Li、Na、K、Mg、Ca、Ba、-N(R7)4、C1-C12-烷基、C2-C12-鏈烯基或-R6；其中該烷基或鏈烯基的1至4個-CH2原子團、除了與Z鍵合的-CH2以外，可選地被選自O(shè)、S、S(O)、S(O)2或N(R7)的雜原子基團代替；其中所述烷基、鏈烯基或R6中的任意氫可選地被選自如下的取代基取代:氧代基、OR7、R7、N(R7)2、N(R7)3、(C1-C4亞烷基)-OH、CN、CO2R7、C(O)N(R7)2、S(O)2-N(R7)2、N(R7)-C(O)-R7、C(O)R7、-S(O)n-R7、OCF3、-S(O)n-R6、N(R7)-S(O)2(R7)、鹵代基、-CF3或-NO2；n是0-2；M′是H、C1-C12-烷基、C2-C12-鏈烯基或-R6；其中該烷基或鏈烯基的1至4個-CH2原子團可選地被選自O(shè)、S、S(O)、S(O)2或N(R7)的雜原子基團代替；其中所述烷基、鏈烯基或R6中的任意氫可選地被選自如下的取代基取代:氧代基、-OR7、-R7、-N(R7)2、N(R7)3、-R7OH、-CN、-CO2R7、-C(O)-N(R7)2、-S(O)2-N(R7)2、-N(R7)-C(O)-R7、-C(O)R7、-S(O)n-R7、-OCF3、-S(O)n-R6、-N(R7)-S(O)2(R7)、鹵代基、-CF3或-NO2；Z是-CH2-、-O-、-S-、-N(R7)2-；或者，若M不存在，則Z是氫、＝O或＝S；Y是P或S，其中若Y是S，則Z不是S；X是O或S；每個R7獨立地選自氫或C1-C4脂族基，可選地被至多兩個Q1取代；每個Q1獨立地選自3-7元飽和、部分飽和或不飽和的碳環(huán)環(huán)系；或者4-7元飽和、部分飽和或不飽和的雜環(huán)的環(huán)，含有一個或多個選自O(shè)、N、NH、S、SO或SO2的雜原子或雜原子基團；其中Q1可選地被至多三個選自如下的取代基取代:氧代基、-OH、-O(C1-C4脂族基)、-C1-C4脂族基、-NH2、NH(C1-C4脂族基)、-N(C1-C4脂族基)2、-N(C1-C4脂族基)-C(O)-C1-C4脂族基、-(C1-C4脂族基)-OH、-CN、-CO2H、-CO2(C1-C4脂族基)、-OCO(C1-C4脂族基)、-C(O)-NH2、-C(O)-NH(C1-C4脂族基)、-C(O)-N(C1-C4脂族基)2、鹵代基或-CF3；R6是4-6元飽和、部分飽和或不飽和的碳環(huán)或雜環(huán)環(huán)系，或者8-10元飽和、部分飽和或不飽和的二環(huán)環(huán)系；其中任意所述雜環(huán)環(huán)系含有一個或多個選自O(shè)、N、S、S(O)n或N(R7)的雜原子；其中任意所述環(huán)系可選地含有1至4個獨立選自O(shè)H、C1-C4烷基、O-(C1-C4烷基)或O-C(O)-(C1-C4烷基)的取代基；R9是C(R7)2、O或N(R7)；其中在基團(C)中:R8選自C1-C6烷基；每個R4和R5選自可選被Q1取代的C1-C6脂族基；R′獨立地選自氫或者可選被取代的基團，選自C1-C8脂族基團，3-8元飽和、部分不飽和或完全不飽和的單環(huán)，具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，或者8-12元飽和、部分不飽和或完全不飽和的二環(huán)環(huán)系，具有0-5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；或者兩次出現(xiàn)的R′與它們所鍵合的原子一起構(gòu)成可選被取代的3-12元飽和、部分不飽和或完全不飽和的單環(huán)或二環(huán)，具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；每個RU獨立地是氫或者可選被至多四個鹵素取代基取代的C1-C6烷基。2.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，y是0-2。3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中y是O。4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中每個Ri和W獨立地選自氬、CN、CF3、卣代基、Cl-C6直鏈或支鏈烷基、3-12元環(huán)脂族基或苯基，其中所述R1和R2獨立地和可選地被至多三個選自如下的取代基取代-0IT、-CF3、-0CF3、-SCF3、卣代基、-C00R'、-0匿、-COR'、-0(CH2)2N(R')(RO、-0(CH2)N(R')(R')、-CON(R')(R')、-(CH2)2OR'、-(CHJ0IT、可選被取代的苯基、-N(R')(RO、-NC(O)OFT、-NC(0)FT、-(CH2)2N(R')(R')或-(CH2)N(R')(R')。5.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中Ri是苯基環(huán)，可選地被至多三個選自如下的取代基取代-OR'、-CF3、-OCF"SR'、S(0)R'、SO,、-SCF"囟代基、CN、-C00IT、-0C0R'、-COIT、-0(CH2)2N(IT)(RO、-0(CH2)N(RO(R')、-CON(『)(RO、-(CH^OR,、-(CH2)3OR'、CH2CN、可選被取代的苯基或苯氧基、-N(IT)(RO、-NR'C(0)OR'、-NR'C(0)IT、-(CH2)2N(R')(R')或-(CH2)N(R')(R');R2是C1-C6直鏈或支鏈烷基。6.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中每個W和R2獨立地選自CF3或鹵代基。7.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中每個R'和R2獨立地選自氫或者可選被取代的Cl-C6直鏈或支鏈烷基。8.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中每個r和R2獨立地選自可選被取代的正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、l，l-二甲基-2-羥基乙基、l,l-二曱基-2-(乙氧基羰基)-乙基、1，1-二曱基-3-(叔丁氧基羰基-氨基)丙基或正戊基。9.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中Rt是氫，R2是C1-C6直鏈或支鏈烷基。10.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R2是氫，W是C1-C6直鏈或支鏈烷基。11.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物,或支鏈烷基。12.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，13.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，支鏈烷基，R2是CF"14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物,15.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，可選地被至多4個卣素取代基取代。其中每個R'和R2是C1-C6直鏈其中兩個W和112都是叔丁基。其中！^是氫或者Cl-C6直鏈或其中兩個RU都是氫。其中兩個Ru都是Cl-C6烷基，根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，根據(jù)權(quán)利要求1的化合物,16.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中一個R"是氫，另一個R"是Cl-C6烷基，可選地被至多4個卣代基取代。17.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、多種、優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)R2是C6-C10環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(CI-C4烷基)的取代基取代；以及iii)m<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R8是C1-C3亞烷基；以及每個R4和R5是C1-C4烷基。18.才艮據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)!^是氫；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自C1-C4烷基或-0(CI-C4烷基)的取代基取代；以及m)RXY是其中RS是C1-C3亞烷基；每個R4和R5是C1-C4烷基。19.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)R2是CF3;以及iii)n其中R8是C1-C3亞烷基；以及每個R4和R5是C1-C4烷基。20.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性Ri是卣代基、Cl-C6直鏈或支鏈烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-0(C1-C4烷基)或卣代基的取代基取代；ii)R2是CF3、卣代基、Cl-C6烷基或C6-C10環(huán)脂族基；以及iU)^是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中RS是C1-C3亞烷基;每個R4和R5是C1-C4烷基。21.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)Ri是卣代基、Cl-C6直鏈或支鏈烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-0(Cl-C4烷基)或囟代基的取代基取代；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-O(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R8是C1-C3亞烷基；以及每個R4和R5是C1-C4烷基。22.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)^是氫；ii)R2是C1-C6直鏈或支鏈烷基或者C6-C10環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(Cl-C4垸基)的取代基取代；以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>Wb是0;wc是0或1;M獨立地選自Na、K或Ca。23.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)f是囟代基、Cl-C6烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-O(Cl-C4烷基)或囟代基的取代基取代；ii)f是CF3、卣代基、Cl-C6烷基或C6-C10環(huán)脂族基；以及OMWb是0;wc是0或1;M獨立地選自Na、K或Ca。24.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及iu)r是OM其中Wb是0;wc是0或1;M獨立地選自Na、K或Ca。25.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性ii)R2是CF〗;以及iii)11"是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>Wb是0;wc是0或1;M獨立地選自Na、K或Ca,26.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)R'是鹵代基、Cl-C6烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、""0(C1-C4烷基)或卣代基的取代基取代；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及iii)ir是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>Wb是0;Wc是0或1;M獨立地選自Na、K或Ca。27.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)R2是C1-C6直鏈或支鏈烷基或者C6-C1Q環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自CI-(M烷基或-0(Cl-C4烷基)的取代基取代；以及iii)n<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中wD是0或1;wA是0或1;R9是-CH廣、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CH廣原子團可選地被0、NH或NMe代替。28.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)^是囟代基、Cl-C6烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-0((:1-04烷基)或卣代基的取代基取代；H)R2是CFs、卣代基、C1-C6烷基或C6-C10環(huán)脂族基；以及Ui)r是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(R9)WaM,w。a其中wD是0或1;Wa是0或1;R9是-CH廣、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CH廣原子團可選地被0、NH或NMe代替。29.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性0!^是氫；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自C1-C4烷基或-0(CI-C4烷基)的取代基取代；以及iii)R"是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中w。是0或1;Wa是0或1;R9是-CHf、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CH「原子團可選地被0、NH或NMe代替。30.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)f是氫；ii)R2是CFr，以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中wD是0或1;Wa是0或1;R9是-CH廣、O或NH;NT是C1-C8烷基，其中至多3個-CH廠原子團可選地被0、NH或NMe代替。31.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性iv)W是卣代基、Cl-C6烷基、CF3、CN或苯基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基、-0(C1-C4烷基)或卣代基的取代基取代；v)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(C1-C4烷基)的取代基取代；以及vi)Rxy是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中wD是0或1;Wa是0或1;R9是-CH廣、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CH廣原子團可選地被0、NH或NMe代替。32.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性i)W是氫；ii)R2是C3-C5環(huán)脂族基，可選地被至多3個選自Cl-C4烷基或-0(CI-C4烷基)的取代基取代；以及m)r是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中Wd是0或1;Wa是0或1;R9是-CH廣、0或NH;M'是C1-C8烷基，其中至多3個-CHr"原子團可選地被0、NH或NMe代替。33.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述式I化合物具有一種、優(yōu)選多種、或者更優(yōu)選全部下列特性iv)R'是氫；v)R2是CF3;以及vi)R"是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中wD是0或1;Wa是O或1;R9是-CHf、0或NH;NT是C1-C8烷基，其中至多3個-CH2-原子團可選地被0、NH或衡代替。34.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中RXX位于喹啉基環(huán)的6-位。35.根據(jù)權(quán)利要求33的化合物，其中RXX—起是Cl-C6烷基、-0-(C1-C6烷基)或卣代基。36.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中RXX位于喹啉基環(huán)的5-位。37.根據(jù)權(quán)利要求33或35的化合物，其中RXX—起是-OH。38.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中Rxy是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>或其藥學(xué)上可接受的鹽。39.根據(jù)權(quán)利要求37的化合物，其中W是Cl-C3亞烷基。40.根據(jù)權(quán)利要求37的化合物，其中R4和R5都是Cl-C6脂族基。41.根據(jù)權(quán)利要求39的化合物，其中R4和R5都是C1-C4烷基。42.根據(jù)權(quán)利要求40的化合物，其中114和115都是甲基或乙基。43.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Rxy逸自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>44.根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中Wb是0。45.根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中每個M獨立地選自Na、K或Ca,46.根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中Wb是0;wc是l;以及每個M是Na。47.根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中Wb是0;Wc是0;以及M是Ca。48.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Rxy逸自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>?；?酸、—(L)—纈氨酸、-(L)-谷氨酸、-(L)-天冬氨(L)T叔丁基-天冬氨酸、義0》、-(L)-3-處啶基丙氨酸、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>P0廣精胺、P0廣(精脒)2或P03-(葡甲胺)49.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Rxy逸自<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>50.式ii化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中X、y、Rx、R1、R2、R3、R4、R5和118是如權(quán)利要求1所定義的；以Y是藥學(xué)上可接受的陰離子。51.根據(jù)權(quán)利要求49的化合物，其中所述Y選自閨離子、羧酸根、硫酸根、甲磺酸根或甲苯磺酸根。52.根據(jù)權(quán)利要求50的化合物，其中所述Y是氯離子或溴離子53.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中所述化合物選自表l。54.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的栽體、助劑或賦形劑。55.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中所述組合物包含附加成分，選自粘液溶解劑、支氣管擴張劑、抗生素、抗感染劑、抗炎劑、CFTR調(diào)控劑或營養(yǎng)劑。56.治療患者疾病或者減輕其嚴(yán)重性的方法，其中所述疾病選自嚢性纖維化、遺傳性肺氣胂、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、無P脂蛋白血癥、溶酶體貯存疾病(例如I-細胞疾病/假性Hurler)、粘多糖病、Sandhof/Tay-Sachs、Crigler-NajjarII型、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病、拉倫侏儒癥、髓過氧化物酶缺陷、原發(fā)性甲狀旁腺機能減退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、先天性甲狀腺機能亢進、成骨不全、遺傳性低纖維蛋白原血、ACT缺陷、尿崩癥(DI)、后葉激素運載蛋白性DI、腎原性DI、夏-馬-圖三氏綜合征、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進行性核上性麻瘠、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟失調(diào)、脊髓與延髓肌肉萎縮、齒狀核紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強直性營養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病和斯-施二氏綜合征)、C0PD、干眼病或斯耶格倫氏病，所述方法包含對所述患者給予有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物的步驟。57.用于體外或體內(nèi)測量生物樣品中CFTR或其片段活性的藥盒，包含(i)包含根據(jù)權(quán)利要求l的式(l)化合物的組合物；(ii)關(guān)于如下內(nèi)容的說明書a)使該組合物與該生物樣品接觸；b)測量所述CFTR或其片段的活性。58.根據(jù)權(quán)利要求56的藥盒，進一步包含關(guān)于如下內(nèi)容的說明書a)使附加組合物與該生物樣品接觸；b)在所述附加化合物的存在下測量所述CFTR或其片段的活性；和c)比較在該附加化合物存在下的CFTR或其片段的活性與在式(I)組合物存在下的CFTR密度。全文摘要本發(fā)明涉及ABC轉(zhuǎn)運蛋白、特別是CFTR的調(diào)控劑的前體藥物、其組合物和相關(guān)方法。本發(fā)明也涉及使用這類調(diào)控劑治療ABC轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)疾病的方法。文檔編號A61K31/661GK101374849SQ200680053001公開日2009年2月25日申請日期2006年12月21日優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日發(fā)明者A·哈茲爾伍德,C·古鐵雷茲,H·賓奇,P·D·J·格魯滕休斯,S·哈迪達魯阿,V·阿魯姆加姆,周競蘭申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司