專利名稱：一種抗肝炎藥物組合物的制作方法
專利說明一種抗肝炎藥物組合物 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由黃芪或其提取物、靈芝或其提取物和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽制成的用于治療肝炎類疾病的藥物組合物，及其制備方法和制劑。
背景技術(shù)：
肝炎是一種常見病和多發(fā)病，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)肝炎患者和病毒攜帶者占總?cè)丝诘?0％。其中以病毒性肝炎為主，病毒性肝炎又可分為急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和膽型肝炎。慢性肝炎又可分為遷延性肝炎和活動(dòng)性肝炎。肝炎是一種傳染性疾病，由于其流行性廣、危害性大、發(fā)病率高，是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的疑難病癥之一，以乙型肝炎為例，治愈率僅為10％，絕大部分轉(zhuǎn)為慢性肝炎，嚴(yán)重的轉(zhuǎn)化為肝腹水、肝癌。其中肝纖維化的形成和發(fā)展是影響預(yù)后和病情轉(zhuǎn)危的關(guān)鍵病理變化之一，也是臨床慢性肝病治療中最為復(fù)雜的疑難問題。目前治療慢性乙型肝炎的療法主要有抗病毒藥物療法、免疫調(diào)控藥物療法、改善肝微循環(huán)療法、保護(hù)療法、中醫(yī)辨證論治等。國(guó)內(nèi)外近年來治療肝炎的藥物雖然有許多，但大多沒有十分公認(rèn)的療效，并且療效并不理想，另外治療后病情易反復(fù)，且價(jià)格又十分昂貴。至今，市場(chǎng)上仍缺少抗肝炎療效確切又副作用較小的藥物。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌之功效，主要用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白病，糖尿病。主要含有黃芪多糖、黃芪總皂苷、黃酮類、生物堿、葡萄糖醛酸及微量元素硒等成分?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明黃芪多糖有抗病毒、抗菌、增強(qiáng)機(jī)體免疫、促生長(zhǎng)作用；黃芪總皂苷有治療心腦血管疾病、增強(qiáng)免疫、抑制肝癌細(xì)胞繁殖等作用。
靈芝為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganodermasinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實(shí)體。性甘，平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)氣安神，止咳平喘之功效，主要用于眩暈不眠，心悸氣短，虛勞咳嗽。靈芝是家喻戶曉的中藥，俗稱“仙草”。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被認(rèn)為能“益心氣”“安精魂”“補(bǔ)肝益氣”“堅(jiān)筋骨”，列為上品。靈芝的化學(xué)成分復(fù)雜，目前已知含有多糖(肽)類、三萜類、核苷類、生物堿、氨基酸及微量元素等，多糖類化合物是靈芝所含主要化學(xué)成分之一。靈芝的應(yīng)用非常廣泛。其根本原因就在于靈芝具有扶正固本，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體免疫力的巨大作用。在整體上雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)部活力，調(diào)節(jié)人體新陳代謝機(jī)能，提高自身免疫力，促進(jìn)內(nèi)臟或器官機(jī)能正?；?。
甘草酸為豆科植物甘草、光果甘草、脹果甘草的根及根莖的精制提取物。由于甘草精制提取的甘草酸有皮質(zhì)激素樣作用，能提高肝炎病人血清氫化可的松的濃度，降低慢性肝炎患者血清及外周單個(gè)核細(xì)胞中白介素-6和腫瘤壞死因子，減輕免疫病理反應(yīng)，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，清除癥狀，縮小肝脾腫大，降酶快，退黃疸顯著。甘草酸單銨和甘草酸二銨分別為甘草酸的單銨鹽和二銨鹽，甘草酸單銨對(duì)各型急慢性肝炎、肝纖維化，中毒性肝炎、外傷性肝炎以及癌癥有一定的輔助治療作用。甘草酸二銨為20β-羧基-11氧代正齊墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二銨鹽，具有較強(qiáng)的抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用，可阻礙可的松與醛固酮的滅活，從而發(fā)揮類固醇樣作用，但無皮質(zhì)激素的不良反應(yīng)。
目前利用黃芪或其提取物、靈芝或其提取物和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的相互作用，配伍組方，用于制備治療肝炎的藥物還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了滿足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的用于治療肝臟疾病的藥物組合物，并提供了其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物主要由黃芪、靈芝和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽制成，其重量份數(shù)為黃芪500～8000份、靈芝50～2000份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份； 優(yōu)選份數(shù)為黃芪1000～4000份、靈芝200～1000份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份； 最佳份數(shù)為黃芪2000份、靈芝400份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽2～20份(甘草酸單銨2～20份或甘草酸二銨15份)。
上述藥物組合物，甘草酸藥學(xué)上可接受的鹽可以為金屬鹽或有機(jī)氮鹽，金屬鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋅鹽、鋁鹽、鉍鹽；有機(jī)氮鹽優(yōu)選單銨鹽、二銨鹽，優(yōu)選甘草酸單銨和甘草酸二銨。
制成本發(fā)明藥物組合物的原料藥的制備方法為上述藥物組合物中黃芪、靈芝可以用適宜的溶劑單獨(dú)或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，總提取物再與甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。總提取物中所含的主要有效成分為多糖或者多糖和總皂苷，總提取物中有效成分的總含量不低于30％。
上述藥物組合物的制備方法中適宜的溶劑是指中藥提取常用的溶劑，優(yōu)選水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中藥提取的一般方法，如浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。
各原料藥的具體提取方法如下 黃芪的提取制備 因?yàn)辄S芪多糖和黃芪總皂苷均有治療肝臟疾病的作用，所以黃芪因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分別如下 以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物(簡(jiǎn)稱黃芪總皂苷)的制備工藝如下 取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，第二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理二次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，其中黃芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法 方法一取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理二次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理一次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
以多糖為主要有效成分的黃芪提取物(簡(jiǎn)稱黃芪多糖)的制備工藝如下 取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物得率為0.5～2％，黃芪多糖的含量不低于50％。
除采用上述方法外，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法 方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過，收集沉淀，真空干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，提取液合并，過濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
靈芝的提取制備 以多糖為主要有效成分的靈芝提取物(簡(jiǎn)稱靈芝多糖)的制備工藝如下 取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水4倍量潤(rùn)濕過夜，靜置24小時(shí)，煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小時(shí)，第二次加10倍量水煎煮2小時(shí)，第三次加10倍量水煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇至含醇量為60％，攪勻，冷藏靜置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇至含醇量為85％，攪勻，冷藏靜置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，超濾，收集分子量大于50000道爾頓的部分，濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為0.5～3％，靈芝多糖中多糖的含量不低于80％。
除采用上述方法外，靈芝還可通過以下方法制備，但不僅限于下述方法 方法一取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤(rùn)濕過夜，靜置24小時(shí)，加水煎煮三次，第一次加12倍量水提取3小時(shí)，第二、三次加10倍量水提取2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03～1.08，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇使含醇量為70％，攪勻，冷藏放置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇使含醇量為85％，攪勻，冷藏放置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，冷藏放置24小時(shí)，濾過收集濾液，濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為2～4％，靈芝多糖的含量不低于60％。
方法二取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤(rùn)濕過夜，靜置24小時(shí)，煎煮二次，第一次3小時(shí)加水12倍量，第二次2小時(shí)加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.02～1.06，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇使含醇量為65％，攪勻，冷藏放置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，濾過，濾液加乙醇使含醇量為80％，攪勻，冷藏放置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，冷藏放置48小時(shí)，濾過，濾液濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為3～5％，靈芝多糖的含量不低于50％。
上述藥物組合物的原料藥中，可用黃芪提取物和靈芝提取物分別代替黃芪和靈芝投料制得，按照黃芪多糖相對(duì)于藥材的得率1.51％，黃芪總皂苷相對(duì)于藥材的得率1.19％，靈芝多糖相對(duì)于藥材的得率1.67％計(jì)算，可以有以下兩種不同配比，其重量份數(shù)分別為 配比1黃芪多糖5～120份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份；優(yōu)選份數(shù)為黃芪多糖15～60份、靈芝多糖4～16份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份；最佳份數(shù)為黃芪多糖30份、靈芝多糖8份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽2～20份(甘草酸單銨2～20份或甘草酸二銨15份)。
配比2黃芪總皂苷5～95份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份；優(yōu)選份數(shù)為黃芪總皂苷10～50份、靈芝多糖4～16份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份；最佳份數(shù)為黃芪總皂苷25份、靈芝多糖8份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽2～20份(甘草酸單銨2～20份或甘草酸二銨15份)。
上述配比中，黃芪多糖中多糖的含量不低于35％，最好不低于50％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中的黃芪甲苷含量不低于1％，最好不低于2％；靈芝多糖中多糖的含量不低于50％，最好不低于80％。黃芪總皂苷、黃芪多糖和靈芝多糖均可參照前述方法自制。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成10～1000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成10～1000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成10～1000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)本發(fā)明藥物組合物在制備治療肝臟疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明藥物組合物具有保肝、抗乙肝病毒、治療慢性肝炎和活動(dòng)性肝硬化、防治肝纖維化、提高免疫力、抗炎等作用。藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明藥物組合物對(duì)小鼠免疫性肝損傷、化學(xué)性肝損傷具有顯著保護(hù)作用，可顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；對(duì)鴨乙肝病毒具有顯著抑制作用，且停藥后無明顯反跳，效果穩(wěn)定；可抗CCl4所致大鼠肝纖維化，使血清TGFβ1水平極顯著減少，肝組織膠原面積明顯減少，Smad3表達(dá)陽性率明顯減少；還可抗大鼠免疫性肝纖維化，顯著降低透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)的含量，降低丙二醛(MDA)活性、升高超氧化物歧化酶(SOD)活性；可保護(hù)大鼠肝臟缺血—再灌注損傷，顯著降低肝組織髓過氧化物酶(M PO)活性。
本發(fā)明藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的制劑，優(yōu)選口服制劑或注射劑，以口服或腸胃外給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射劑，注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，包括注射液、注射用無菌粉末和注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，其標(biāo)示裝量可以為0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供靜脈滴注用的大體積注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，無菌粉末可以用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
用于口服給藥時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑和口服溶液劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑；片劑以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑；膠囊劑依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑；顆粒劑可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當(dāng)方法制成的球狀或類球狀固體制劑；丸劑包括滴丸、糖丸、小丸等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。
本發(fā)明藥物組合物的制劑可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明藥物組合物在制成注射劑時(shí)，所用溶劑可以是水性溶劑和非水性溶劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。水性溶劑最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；非水性溶劑常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸+醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸+枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉+碳酸鈉等；常用的增容劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的抗氧劑包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑包括苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇等。
本發(fā)明藥物組合物在制成口服制劑時(shí)，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等。填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于 1、本發(fā)明提供了一種新的治療肝臟疾病的中西復(fù)方，滿足了臨床急需。
2、通過本發(fā)明藥物組合物不同配比對(duì)小鼠免疫性肝損傷、化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的研究，篩選出了具有具有顯著療效的重量份范圍。
3、對(duì)本發(fā)明藥物組合物進(jìn)行了藥效學(xué)研究，結(jié)果表明本發(fā)明藥物組合物對(duì)小鼠免疫性、化學(xué)性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，可以抑制鴨乙肝病毒的繁殖，可抗大鼠四氯化碳所致肝纖維化和免疫性肝纖維化，并且對(duì)大鼠肝臟缺血—再灌注損傷具有顯著的保護(hù)作用，且其效果極明顯優(yōu)于黃芪、靈芝和甘草酸二銨或單銨單獨(dú)給藥，提示三者有協(xié)同增效的作用，其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意想不到的。
4、本發(fā)明組合物既可由原料藥投料制得，也可由提取物直接投料，并提供了其制備方法，滿足了大生產(chǎn)的需要。
5、本發(fā)明藥物組合物合并用藥療效確切，毒性小，安全范圍大，穩(wěn)定性好，制備簡(jiǎn)單且質(zhì)量可控，合并用藥后用藥劑量相對(duì)減少，具有廣闊的應(yīng)用前景。
通過以下實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。以下實(shí)驗(yàn)例中的黃芪多糖取自實(shí)施例1，黃芪總皂苷取自實(shí)施例2，靈芝多糖取自實(shí)施例3。黃芪多糖、靈芝多糖和甘草酸單銨或甘草酸二銨的組合物簡(jiǎn)稱HLG1組，黃芪總皂苷、靈芝多糖和甘草酸單銨或甘草酸二銨的組合物簡(jiǎn)稱HLG2組。
實(shí)驗(yàn)例1 組合物對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用 受試動(dòng)物 昆明種雄性小鼠240只，體重16～20g，每組10只。
試劑 卡介苗(BCG)，衛(wèi)生部制品研究所；脂多糖(LPS)，Sigma公司。
供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制；靈芝多糖組靈芝多糖注射液，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨注射液10ml∶150mg，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5)。組合物HLG2組(黃芪總皂苷+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5)。
表1 組合物對(duì)免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響(

，n＝10) 注與生理鹽水對(duì)照組比，ΔΔp＜0.01；與模型組比，**p＜0.01；與黃芪多糖組比，ap＜0.05；與黃芪總皂苷組比，bp＜0.05；與靈芝多糖組比，cp＜0.05；與甘草酸二銨組比，dp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)方法 將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、模型組、黃芪總皂苷組、黃芪多糖組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組、組合物18個(gè)劑量組，每組10只。除對(duì)照組小鼠尾靜脈注射生理鹽水0.2ml外，其余各組小鼠尾靜脈注射0.2ml卡介苗(含5×107活菌)。次日起開始治療，對(duì)照組每鼠每天腹腔注射生理鹽水0.5ml，黃芪總皂苷組、黃芪多糖組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組、組合物組按照表1劑量給藥。12天后，除對(duì)照組尾靜脈注射生理鹽水0.2ml/只外，其余各鼠均由尾靜脈注射脂多糖0.2ml/7.5μg/只。12小時(shí)后，眼眶取血，常規(guī)分離血清，應(yīng)用IFCC推薦法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由表1結(jié)果可以看出，與生理鹽水對(duì)照組相比模型組小鼠血清ALT和AST活性顯著增高(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組相比，各給藥組均能顯著降低免疫性肝損傷小鼠血清的ALT和AST活性(p＜0.01)；HLG1各劑量組與黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組相比，效果顯著(p＜0.05)；HLG2各劑量組與黃芪總皂苷組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組相比，效果顯著(p＜0.05)。說明黃芪、靈芝與甘草酸二銨三藥配伍有協(xié)同增效的作用。當(dāng)黃芪為1000～4000份、靈芝為200～1000份、甘草酸二銨為1～40份時(shí)組合物效果顯著，當(dāng)黃芪為2000份、靈芝為400g份、甘草酸二銨為15份時(shí)效果最好。
實(shí)驗(yàn)例2 組合物對(duì)小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用 受試動(dòng)物 昆明種雄性小鼠320只，體重16～20g，每組10只。
試劑 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)試試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
供試品 生理鹽水對(duì)照組生理鹽水，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷片劑，自制；黃芪多糖組黃芪多糖片劑，自制；靈芝多糖組靈芝多糖片劑，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨片劑，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例8)。組合物HLG2組(黃芪總皂苷+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例8)。
實(shí)驗(yàn)方法 將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、模型組、黃芪總皂苷組、黃芪多糖組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組、組合物13個(gè)劑量組，每組10只。生理鹽水對(duì)照組灌胃相同劑量的生理鹽水，模型組不給藥，其余各組分別灌胃受試藥物30天后，用1％CC14(植物油配制并用超聲波處理均勻)造模，劑量為5ml/kg。造模前禁食16h，造模后繼續(xù)禁食4h，然后添加飼料，處死前再繼續(xù)禁食12h左右。AST、ALT測(cè)定均按照試劑盒中說明的比色法進(jìn)行操作。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。與生理鹽水對(duì)照組相比模型組小鼠血清ALT和AST活性顯著增高(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組相比，各給藥組均能顯著降低化學(xué)性肝損傷小鼠血清的ALT和AST活性(p＜0.01)；HLG1各劑量組與黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組相比，效果顯著(p＜0.05)；HLG2各劑量組與黃芪總皂苷組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組相比，效果顯著(p＜0.05)。說明黃芪、靈芝與甘草酸二銨三藥配伍有協(xié)同增效的作用。當(dāng)黃芪為1000～4000份、靈芝為200～1000份、甘草酸二銨為1～40份時(shí)組合物效果顯著。
表2 組合物合并用藥對(duì)化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響(

，n＝10) 注與生理鹽水對(duì)照組比，ΔΔp＜0.01；與模型組比，**p＜0.01；與黃芪多糖組比，ap＜0.05；與黃芪總皂苷組比，bp＜0.05；與靈芝多糖組比，cp＜0.05；與甘草酸二銨組比，dp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)例3 組合物抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)研究 受試動(dòng)物 一日齡麻鴨，常規(guī)飼養(yǎng)。
供試品 空白對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)；陽性對(duì)照組拉米夫定(3TC)；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制；靈芝多糖組靈芝多糖注射液，自制；甘草酸單銨組甘草酸單銨注射液20ml∶20mg，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸單銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5，處方1)，分為低、中、高三個(gè)劑量組；組合物HLG2組(黃芪總皂苷+靈芝多糖+甘草酸單銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5，處方6)，分為低、中、高三個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)方法 一日齡麻鴨購(gòu)回當(dāng)天于脛靜脈取血，分離血清后，用斑點(diǎn)雜交的方法檢測(cè)DHBV，選出先天感染的鴨子進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。給藥劑量見表3，每天一次；另設(shè)空白對(duì)照組，靜脈注射生理鹽水；陽性藥選用拉米夫定(3TC)20mg/kg，口服1ml/只，每天1次；均為10天一療程。于給藥當(dāng)天(T0)、用藥第5天(T5)、第10天(T10)及停藥后第3天(P3)，自鴨脛靜脈取血，分離血清，-70℃凍存待檢。
DHBV-DNA檢測(cè)方法取上述鴨血清，每批同時(shí)點(diǎn)膜，測(cè)定鴨血清中DHBV-DNA水平的變化，按缺口翻譯試劑盒說明方法，用32P標(biāo)記DHBV-DNA探針，并作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射白顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)檢測(cè)儀上測(cè)定OD值(濾光片波長(zhǎng)約490nm)，計(jì)算血清DHBV-DNA密度。
表3 組合物對(duì)鴨體內(nèi)DHBV-DNA的抑制作用(X±SD) 注與空白對(duì)照組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性對(duì)照組比，#p＜0.05；與黃芪總皂苷組比，ap＜0.05；與黃芪多糖組比，bp＜0.05；與靈芝多糖組比，cp＜0.05；與甘草酸單銨組比，dp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。與空白對(duì)照組相比較，各給藥組10天療程內(nèi)對(duì)鴨乙肝性肝炎病毒均有明顯的抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)。與陽性對(duì)照組相比，各組的抗鴨乙肝性肝炎病毒效果均不如拉米夫定的效果好，差異顯著(p＜0.05)。HLG1各劑量組與黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸單銨組相比效果好，差異顯著(p＜0.05)；HLG2各劑量組與黃芪總皂苷組、靈芝多糖組、甘草酸單銨組相比效果好，差異顯著(p＜0.05)。說明黃芪、靈芝和甘草酸單銨合并用藥后抗鴨乙肝性肝炎病毒的作用比單用黃芪、靈芝和甘草酸單銨效果好，且與給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)作用最好。
實(shí)驗(yàn)例4 組合物抗大鼠肝纖維化作用 受試動(dòng)物 健康雄性SD大鼠，120只，體重140～160g，隨機(jī)分為12組，每組10只。
供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)；模型組CCl4注射液，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制；靈芝多糖組靈芝多糖注射液，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨注射液10ml∶150mg，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5，處方2)，分為低、中、高三個(gè)劑量組；組合物HLG2組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例5，處方4)，分為低、中、高三個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)方法 120只大鼠隨機(jī)分為12組，每組10只。用CCl4皮下注射法誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，即用300ml/LCCl4石蠟油溶液，以3ml/kg做皮下注射，每周2次，共8周。黃芪總皂苷組、黃芪多糖組、靈芝多糖組、甘草酸二銨組與HLG1、HLG2組合物組在造模的同時(shí)腹腔注射給藥，給藥劑量見表4，CCl4模型組造模同時(shí)給予生理鹽水腹腔注射，空白對(duì)照組給予等量石蠟油皮下注射和生理鹽水腹腔注射處理。各組動(dòng)物在最后一次CCl4注射后48h處死，取血清和肝組織標(biāo)本待驗(yàn)。
檢測(cè)方法 血清按照試劑說明書以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)監(jiān)測(cè)TGFβ1水平，肝組織標(biāo)本以中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，以多聚賴氨酸涂布的載玻片制作5μm組織切片，進(jìn)行HE染色和Massion三重膠原染色作組織病理學(xué)檢查；免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IH)方法檢測(cè)Smad 3蛋白表達(dá)水平，光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。
表4組合物大鼠肝組織檢查結(jié)果(

，n＝10) 注與空白對(duì)照組比，**p＜0.01；與模型組比，ap＜0.05，bp＜0.01；與黃芪總皂苷組比，dp＜0.05；與黃芪多糖組比，ep＜0.05；與靈芝多糖組比，fp＜0.05；與甘草酸二銨組比，gp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。
(1)ELISA檢測(cè)表明，四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠血清TGFβ1水平顯著升高，由正常組織的14.91±6.35mg/ml增加至96.38±16.54mg/ml(p＜0.01)，說明肝纖維化的形成過程伴隨有TGFβ1合成的顯著增加，從而促進(jìn)肝臟膠原纖維的合成與沉積；與空白對(duì)照組相比，HE染色光鏡下可見模型組大鼠肝細(xì)胞廣泛脂肪變性、壞死(p＜0.01)，Masson染色見藍(lán)色膠原纖維明顯增加(p＜0.01)；免疫組織化檢測(cè)表明，空白對(duì)照組大鼠肝臟僅有少數(shù)間質(zhì)細(xì)胞顯示Smad3蛋白陽性，四氯化碳皮下注射使大鼠肝組織Smad3蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(p＜0.01)；說明以上結(jié)構(gòu)均造模成功。
(2)與模型組相比，經(jīng)各給藥組預(yù)防性治療的大鼠血清TGFβ1水平顯著減少(p＜0.05，p＜0.01)，大鼠肝組織膠原面積明顯減少(p＜0.05，p＜0.01)，Smad3表達(dá)陽性率明顯減少(p＜0.05，p＜0.01)；HLG1各劑量組與黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸單銨組相比效果好，差異顯著(p＜0.05)；HLG2各劑量組與黃芪總皂苷組、靈芝多糖組、甘草酸單銨組相比效果好，差異顯著(p＜0.05)。且與組合物的給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)作用最好。
實(shí)驗(yàn)例5 組合物抗大鼠免疫性肝纖維化作用研究 動(dòng)物 SD雌性大鼠，140～160g，共120只，每組10只。
試劑 小牛血清，購(gòu)于北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒購(gòu)于南京建成生物研究工程所。透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)放射免疫試劑盒由上海生物技術(shù)有限公司提供。
供試品 對(duì)照組生理鹽水，自制；模型組CCl4注射液，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷膠囊，自制；黃芪多糖組黃芪多糖膠囊，自制；靈芝多糖組靈芝多糖膠囊，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨膠囊，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例9，處方3)，分為低、中、高三個(gè)劑量組；組合物HLG2組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸二銨)自制(制備方法參見實(shí)施例9，處方5)，分為低、中、高三個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)方法 大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、黃芪總皂苷組、黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組與HLG1、HLG2組，每組10只。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠均腹腔注射小牛血清，0.5mL/次/只，每周2次，共12周，復(fù)制大鼠免疫性肝纖維化模型。各給藥組在造模的同時(shí)灌胃給藥，給藥劑量見表5，每日1次，連續(xù)12周。正常對(duì)照組每日灌等量生理鹽水，同時(shí)腹腔注射生理鹽水，0.5mL/次/只，每周2次，共12周。給藥12周末，所有動(dòng)物禁食，不禁水，24h后以水合氯醛1ml腹腔注射麻醉，自前正中線暴露腹腔及胸腔，先用無菌注射器自心臟每只采血4ml，8000r/min離心收取血清，按照試劑盒說明書操作檢測(cè)透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)。
表5 組合物對(duì)大鼠血清肝纖維化指標(biāo)的影響(

，n＝10) 注與空白對(duì)照組比，##p＜0.01；與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與黃芪總皂苷組比，&p＜0.05，與黃芪多糖組比，$p＜0.05；與靈芝多糖組比，ap＜0.05；與甘草酸二銨組比，bp＜0.05。
表6 組合物對(duì)大鼠脂質(zhì)氧化的影響(

，n＝10) 注與空白對(duì)照組比，##p＜0.01；與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與黃芪總皂苷組比，&p＜0.05，與黃芪多糖組比，$p＜0.05；與靈芝多糖組比，ap＜0.05；與甘草酸二銨組比，bp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 結(jié)果見表6。
(1)對(duì)血清肝纖維化指標(biāo)的影響模型組的HA、LN含量均較空白對(duì)照組顯著升高(p＜0.01)，說明造模成功。各給藥組的HA、LN含量均較模型組顯著降低(p＜0.05，p＜0.01)，說明各組藥物均能降低血清肝纖維化指標(biāo)，有抗大鼠免疫性肝纖維化作用。HLG1各組的HA、LN均較黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組顯著降低(p＜0.05)，HLG2各組的HA、LN均較黃芪總皂苷組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組顯著降低(p＜0.05)，說明HLG1、HLG2各組的抗大鼠免疫性肝纖維化作用較好。
(2)對(duì)脂質(zhì)氧化的影響與空白對(duì)照組比較，模型組的MDA顯著升高(p＜0.01)，SOD顯著降低，說明造模成功。各給藥組較模型的MDA顯著降低，SOD顯著升高(p＜0.05，p＜0.01)，說明各組藥物都具有抗脂質(zhì)氧化的作用。HLG1各組較黃芪多糖組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組的MDA顯著降低，SOD顯著升高(p＜0.05)；HLG2各組較黃芪總皂苷組、靈芝多糖組和甘草酸二銨組的MDA顯著降低，SOD顯著升高(p＜0.05)，說明HLG1、HLG2各組的抗大鼠免疫性肝纖維化脂質(zhì)氧化的作用較好。
結(jié)果表明，黃芪多糖或黃芪總皂苷與靈芝多糖、甘草酸二銨合并用藥具有協(xié)同抗大鼠免疫性肝纖維化的作用，且高劑量組作用顯著。
實(shí)驗(yàn)例6 組合物對(duì)大鼠肝臟缺血—再灌注損傷的保護(hù)作用 動(dòng)物 SD雌性大鼠，140～160g，共180只，每組10只。
試劑 髓過氧化物酶測(cè)試盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。
供試品 正常對(duì)照組生理鹽水，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷膠囊，自制；黃芪多糖組黃芪多糖膠囊，自制；組合物HLG1組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸單銨)自制(制備方法參見實(shí)施例9，處方1)，分為低、中、高三個(gè)劑量組；組合物HLG2組(黃芪多糖+靈芝多糖+甘草酸單銨)自制(制備方法參見實(shí)施例9，處方4)，分為低、中、高三個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)方法大鼠術(shù)前夜禁食，飲水不限。3％戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉。取上腹部正中切口入腹顯露肝左葉肝蒂。解剖左肝門分離左肝管，以無損傷血管夾阻斷供應(yīng)大鼠肝左葉的門靜脈和肝動(dòng)脈分支30min后松夾恢復(fù)左肝灌流。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成10大組，每大組又按照再灌注時(shí)間點(diǎn)分為3小組，每小組6只。10大組分別為正常對(duì)照組、模型組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、HLG1和HLG2高、中、低劑量組，各組又分為3小組，每小組6只。正常對(duì)照組術(shù)中只分離肝周圍韌帶，分離左肝管，不做肝血流阻斷及再灌注。斷流前30min給藥組灌胃給藥，正常對(duì)照組給予等量生理鹽水，模型組不給藥。按時(shí)間點(diǎn)分為再灌注30min、60min、120min 3個(gè)時(shí)點(diǎn)，每個(gè)時(shí)點(diǎn)6只大鼠，麻醉后開腹取材。按照時(shí)點(diǎn)取下腔靜脈血，測(cè)定肝組織髓過氧化物酶(MPO)活性測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論結(jié)果見表7。與正常對(duì)照組比較，模型組的肝組織MPO活性顯著增強(qiáng)(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組比較，各給藥組的MPO活性顯著降低(p＜0.05，p＜0.01)。HLG1各組與黃芪多糖組、靈芝多糖組、甘草酸單銨組比較MPO活性顯著降低(p＜0.05)，HLG2各組與黃芪總皂苷組、靈芝多糖組、甘草酸單銨組比較MPO活性顯著降低(p＜0.05，p＜0.01)。說明HLG1和HLG2各劑量組對(duì)大鼠肝臟缺血—再灌注損傷肝組織MPO活性的抑制作用優(yōu)于單用黃芪多糖、靈芝多糖、甘草酸單銨或黃芪總皂苷、靈芝多糖、甘草酸單銨。且與劑量有關(guān)，高劑量組作用最好。
表7 組合物對(duì)大鼠肝臟缺血—再灌注損傷肝組織MPO活性的影響(

，n＝6) 注與正常對(duì)照組比，**p＜0.01；與模型組比，#p＜0.05，##p＜0.01；與黃芪總皂苷組比，&p＜0.05；與黃芪多糖組比，$p＜0.05，與靈芝多糖組比，ap＜0.05；與甘草酸單銨組比，bp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)例7 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn) (1)實(shí)驗(yàn)方法 供試品HLG1、HLG2注射液，來源于實(shí)施例5水針劑處方1、處方2、處方3、處方4的制備，規(guī)格5ml。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各60只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察專案死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行日最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.1ml/10g，腹腔注射0.1ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測(cè)量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論 實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)HLG1、HLG2注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.2ml/10g，相當(dāng)于60kg體重人日最大用量10ml的120倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例8 組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 供試品HLG1、HLG2注射液，來源于實(shí)施例5水針劑處方1、處方2、處方3、處方4、的制備，規(guī)格5ml。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度。
長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。以下實(shí)施例4～10中的黃芪多糖取自實(shí)施例1，黃芪總皂苷取自實(shí)施例2，靈芝多糖取自實(shí)施例3。
實(shí)施例1 以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖的制備 黃芪多糖制備工藝 取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
黃芪多糖的含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對(duì)照，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測(cè)定方法 取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測(cè)定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別 (1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％a-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，提取物含量和得率見表8。
表8 黃芪多糖的含量和得率 實(shí)施例 2以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷的制備 黃芪總皂苷制備工藝 取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
黃芪總皂苷鑒別實(shí)驗(yàn) 鑒別實(shí)驗(yàn)一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別實(shí)驗(yàn)二取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
黃芪總皂苷含量測(cè)定 總皂苷的含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測(cè)定 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛—水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，提取物含量和得率見表9。
表9 黃芪總皂苷和黃芪甲苷的含量及得率 實(shí)施例3 以多糖為主要有效成分的靈芝提取物即靈芝多糖的制備 靈芝多糖制備工藝 取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水4倍量潤(rùn)濕過夜，次日煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小時(shí)，第二次加10倍量水煎煮2小時(shí)，第三次加10倍量水煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇至含醇量為60％，攪勻，冷藏靜置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇至含醇量為85％，攪勻，冷藏靜置24小時(shí)，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，超濾，收集分子量大于50000道爾頓的部分，濃縮，真空干燥，即得。
靈芝多糖的鑒別 取本品50mg，加乙醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚(60～90℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
靈芝多糖的含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞試管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密稱取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，搖勻)6ml，搖勻，置水浴中加熱15分鐘，取出，放入水浴中冷卻15分鐘，以相應(yīng)的溶劑為空白，在625nm下測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備 取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度，搖勻即得。
測(cè)定法 精密吸取供試品溶液2ml，10ml具試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線下測(cè)定方法，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液的葡萄糖的重量，計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得靈芝提取物三批樣品，提取物得率和含量見表10。
表10 靈芝提取物得率和含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)施例4 本發(fā)明藥物組合物粉針劑的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 200g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 處方3 黃芪多糖151g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸單銨 400g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 處方5 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 處方6 黃芪總皂苷 119g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖165g(相當(dāng)于原藥材10kg) 甘草酸單銨 20g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 甘露醇 400g 無菌注射用水加至3000ml 共制備 1000支 制備工藝原輔料用無菌注射用水配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌裝、凍干、壓塞、軋蓋、包裝制成成品。
實(shí)施例5 本發(fā)明藥物組合物水針劑的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 150g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 處方3 黃芪多糖151g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 200g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 處方5 黃芪總皂苷 119g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖165g(相當(dāng)于原藥材10kg) 甘草酸二銨 10g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 處方6 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 150g 聚山梨酯80 50g 注射用水加至5000ml 共制備 1000支 制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例6 本發(fā)明藥物組合物氯化鈉輸液的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 氯化鈉 900g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 200g 聚山梨酯80 20g 氯化鈉 900g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方3 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 氯化鈉 900g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 10g 聚山梨酯80 20g 氯化鈉 900g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 制備工藝制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例7 本發(fā)明藥物組合物葡萄糖輸液的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 聚山梨酯80 20g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方3 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸單銨 200g 甘氨酸 400g 鹽酸半胱氨酸20g 聚山梨酯80 20g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 聚山梨酯80 20g 葡萄糖 5000g 注射用水加至100000ml 共制備 1000瓶 制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌裝、加塞、軋蓋、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例8 本發(fā)明藥物組合物片劑的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 200g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 淀粉40g 微晶纖維素 40g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 淀粉40g 微晶纖維素 40g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 處方3 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸二銨 200g 淀粉40g 微晶纖維素 40g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 淀粉40.0g 微晶纖維素 40.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 處方5 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸二銨 20g 淀粉40.0g 微晶纖維素 40.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 處方6 黃芪總皂苷 119g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖165g(相當(dāng)于原藥材10kg) 甘草酸二銨 150g 淀粉40.0g 微晶纖維素 40.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 羧甲淀粉鈉 10.0g 共制備 1000片 制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉整粒，半產(chǎn)品檢驗(yàn)后確定片重，壓片、包裝得成品。
實(shí)施例9 本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 150g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸二銨 20g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 處方3 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 處方4 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 150g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 處方5 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 150g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 處方6 黃芪總皂苷 119g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖33g(相當(dāng)于原藥材2kg) 甘草酸二銨 400g 淀粉20.0g 微晶纖維素 60.0g 2％HPMC水溶液 適量 硬脂酸鎂5.0g 共制備 1000粒 制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂整粒，半產(chǎn)品檢驗(yàn)后確定裝量，裝膠囊、包裝得成品。
實(shí)施例10 本發(fā)明藥物組合物顆粒劑的制備 處方 處方1 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸單銨 20g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 糖粉2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液 適量 共制備 1000包 處方2 黃芪多糖302g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖165g(相當(dāng)于原藥材10kg) 甘草酸二銨 10g 糖粉2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液 適量 共制備 1000包 處方3 黃芪多糖75.5g(相當(dāng)于原藥材5kg) 靈芝多糖330g(相當(dāng)于原藥材20kg) 甘草酸二銨 4g 糖粉2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液 適量 共制備 1000包 處方4 黃芪總皂苷 476g(相當(dāng)于原藥材40kg) 靈芝多糖8.25g(相當(dāng)于原藥材0.5kg) 甘草酸單銨 10g 蛋氨酸 40g 甘氨酸 40g 糖粉2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液 適量 共制備 1000包 處方5 黃芪總皂苷 238g(相當(dāng)于原藥材20kg) 靈芝多糖66g(相當(dāng)于原藥材4kg) 甘草酸二銨 20g 糖粉 2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液適量 共制備 1000包 處方6 黃芪總皂苷 119g(相當(dāng)于原藥材10kg) 靈芝多糖 165g(相當(dāng)于原藥材10kg) 甘草酸二銨 200g 糖粉 2000.0g 2％HPMC50％乙醇溶液適量 共制備 1000包 制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
權(quán)利要求
1.一種用于肝炎的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成它所含藥效組份的原料藥的組成為黃芪500～8000份、靈芝50～2000份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成它所含藥效組份的原料藥的組成為黃芪1000～4000份、靈芝200～1000份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成它所含藥效組份的原料藥的組成為黃芪2000份、靈芝400份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽2～20份(甘草酸單銨2～20份或甘草酸二銨15份)。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述黃芪、靈芝可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，總提取物再和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥用輔料混合加工制成各種制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為多糖或多糖與總皂苷，總提取物中有效成分的總含量不低于30％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以為黃芪多糖5～120份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份；或者為黃芪總皂苷5～95份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以為黃芪多糖15～60份、靈芝多糖4～16份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份；或者為黃芪總皂苷10～50份、靈芝多糖4～16份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽1～40份。
8.如權(quán)利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，靈芝多糖中多糖的含量不低于50％；黃芪多糖中多糖的含量不低于35％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，其中的黃芪甲苷含量不低于1％。
9.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，其中的甘草酸藥學(xué)上可接受的鹽為甘草酸單銨或甘草酸二銨。
10.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種藥物組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑。組成該藥物組合物的原料藥的重量配比為黃芪500～8000份、靈芝50～2000份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份。該藥物組合物還可以黃芪多糖或黃芪總皂苷、靈芝多糖和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽制成，其重量配比為黃芪多糖5～120份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份；或者為黃芪總皂苷5～95份、靈芝多糖1～32份、甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽0.4～100份。該藥物組合物可制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。該藥物組合物可用于制備治療乙肝、慢性肝炎和活動(dòng)性肝硬化、肝纖維化等各種類型的肝炎的藥物。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1977885SQ20061016345
公開日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2006年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月5日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華