專利名稱：治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于猴頭菌提取物制劑，具體涉及一種治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
硒是人體必需的微量元素，硒具有清除自由基、抗炎、抗腫瘤和抗脂質(zhì)氧化作用，同時還具有延緩衰老，提高機體免疫力等功能。在藥品和食物中直接添加無機硒鹽，生物活性低，不但難以吸收，而且有毒副作用，使用效果不理想。目前人們主要依賴食物獲得硒，生物源有機硒與無機硒相比，具有吸收利用率高，安全無毒等優(yōu)點。我國有72％的地區(qū)屬于缺硒地區(qū)，膳食結(jié)構(gòu)中硒含量偏低，研究和開發(fā)富硒產(chǎn)品，是提高人民體質(zhì)，增強抗病力的重要途徑。
有關(guān)專家指出，硒能夠參與生物體重要的代謝活動，具有保護細胞膜、提高免疫及抗癌的作用。提升血硒濃度能有效地治療腫瘤，有機硒蛋白不僅能快速殺死腫瘤細胞，縮小病灶，還能“靶向”殺滅已經(jīng)擴散到其它臟器、血液以及淋巴中的腫瘤細胞，杜絕腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，無任何毒副作用。
開發(fā)生物源有機硒，特別是生物轉(zhuǎn)化能力強的菌類是給機體提供硒源的有效途徑。不同食用菌對硒的耐受力是不同的。同樣的食用菌，不同的硒含量對菌絲體的生長影響是不同的，硒濃度太大，會抑制生長，使產(chǎn)量急劇下降，使菌絲體處于生長停滯狀態(tài)，甚至死亡；硒濃度太低，又達不到富硒的效果。選擇耐受力強的菌種，提高菌株的富硒率是當(dāng)前科研工作人員深入研究的課題之一。
猴頭菌是一種珍貴的藥食兩用菌，其性平、味甘，利五臟，助消化，具有提高機體耐缺氧能力，提高心血輸出量，加速血液循環(huán)等作用，對慢性胃炎、十二指腸潰瘍、胃潰瘍等多種消化道疾病有較好的療效。由于猴頭菌生長速度較慢，天然資源有限，目前生產(chǎn)單位多采用固體培養(yǎng)和液態(tài)深層培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)猴頭菌菌絲體及培養(yǎng)液，用以滿足臨床需要。
隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和臨床試驗的反復(fù)證明，猴頭菌的藥用價值不斷地被挖掘出新的內(nèi)涵。國外對猴頭菌做過研究的主要是日本，日本已從猴頭菌子實體中提取了有效成分，開發(fā)研制了Cyathane制劑用于醫(yī)藥。國內(nèi)對其在醫(yī)藥和食品工業(yè)方面的開發(fā)應(yīng)用有一些報道，但用液態(tài)深層發(fā)酵這一生物技術(shù)生產(chǎn)猴頭菌菌絲體用于醫(yī)藥、食品工業(yè)的報道還不多見，其實，經(jīng)臨床醫(yī)藥研究證實，菌絲體和子實體的效果完全相同，可借助于液態(tài)發(fā)酵這一生物技術(shù)進行猴頭菌的縱深開發(fā)利用。
現(xiàn)國內(nèi)已有富硒猴頭菌培育的文獻報道，但目前只停留在實驗室的研究試驗階段。經(jīng)國際、國內(nèi)聯(lián)機及光盤數(shù)據(jù)庫檢索，尚無富硒猴頭菌提取物制劑工業(yè)化生產(chǎn)的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以猴頭菌作為富集硒元素的載體，采用液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)，在較短的時間內(nèi)獲得富硒的大量菌絲體和代謝產(chǎn)物，用以生產(chǎn)能夠治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑。
猴頭菌對硒的耐受力和轉(zhuǎn)化率相對于一般菌種是比較高的。本發(fā)明從對硒的生物轉(zhuǎn)化能力分析，選擇富硒率高的猴頭菌(Hericium erinaceus)作為菌種，菌種保藏單位中國普通微生物菌種保藏管理中心。
本發(fā)明以猴頭菌作為富集硒元素的載體，菌株代碼5.580，購于CGMCC，采用液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)，在猴頭菌的菌絲體和代謝產(chǎn)物生長過程中按照體積重量比加入10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，使猴頭菌提取物中硒含量達到400～700μg/100g，按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物制劑。
本發(fā)明治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑的制備方法A、斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA綜合培養(yǎng)基+10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml。
培養(yǎng)條件25℃±1℃恒溫條件下培養(yǎng)8-10天。
B、液體搖瓶種子培養(yǎng)
培養(yǎng)基麩皮4～6％、葡萄糖0.8～1.5％、蛋白胨0.05～0.3％、KH2PO40.1～0.3％、MgSO40.05～0.15％、VB1100μg/ml和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml；其中麩皮煮沸30分鐘后去渣取濾液。
培養(yǎng)條件750ml搖瓶裝量200ml，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，溫度25℃±1℃，在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)5～7天。
C、種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基葡萄糖1～3％、黃豆粉0.5～1.5％、蛋白胨0.05～0.3％、KH2PO40.1～0.3％、MgSO40.05～0.15％、消沫油0.1～0.3％、VB1100μg/ml和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml。
培養(yǎng)條件150升種子罐投料100升，通氣量1∶0.4～0.6V/V/分，溫度26～28℃，培養(yǎng)5-7天。
D、發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基蔗糖2～4％、黃豆粉1～3％、蛋白胨0.1～0.5％、KH2PO40.1-0.3％、MgSO40.05-0.2％、消沫油0.1～0.3％和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml。
培養(yǎng)條件1500升或12000升發(fā)酵罐投料60～70％，通氣量1∶0.6-0.8V/V/分，溫度26-28℃，培養(yǎng)5-7天。
E、發(fā)酵液提取過程提取過程采用板框分離、雙效濃縮、噴霧干燥，干燥后的富硒猴頭菌提取物中硒含量達到400-700μg/100g；超微粉碎后按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物制劑。
采用本發(fā)明的制備方法，猴頭菌的富硒率可提高到7.86％，較現(xiàn)有資料中報道的猴頭菌的富硒率有顯著提高。本發(fā)明采用先進的生產(chǎn)工藝，使產(chǎn)品中含有的有效成份多糖、多肽及微量元素硒、鋅、鎂能較完整地保存下來，有效保護胃粘膜，改善胃腸道營養(yǎng)狀態(tài)，調(diào)節(jié)機體免疫功能，抑制細胞增生、DNA復(fù)制及蛋白質(zhì)合成而直接影響腫瘤細胞的生長，起到抗癌作用。本發(fā)明用富硒猴頭菌提取物作為治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的制劑療效顯著，與同類藥物相比，具有治愈率高，無副作用等特點。其生產(chǎn)工藝簡單，操作方便，富硒效果顯著，具有潛在的應(yīng)用和開發(fā)價值。
具體實施例方式
本發(fā)明選用的猴頭菌，菌株編號5.580，從中國普通微生物菌種保藏管理中心引進。采用三級深層發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵過程采用無菌操作，提取過程采用板框分離、雙效濃縮、噴霧干燥，按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物顆粒。
富硒猴頭菌提取物的制備方法為A、斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA綜合培養(yǎng)基+33.3mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，使培養(yǎng)基中的硒含量達到100μg/ml。
培養(yǎng)條件25℃±1℃恒溫條件下培養(yǎng)8-10天。
B、液體搖瓶培養(yǎng)培養(yǎng)基麩皮5％、葡萄糖1％、蛋白胨0.1％、KH2PO40.15％、MgSO40.075％、VB1100μg/ml和33.3mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到100μg/ml。其中麩皮煮沸30分鐘后去渣取濾液。
培養(yǎng)條件750ml搖瓶裝量200ml，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，溫度25℃±1℃，在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)6天。
C、種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基葡萄糖2％、黃豆粉1％、蛋白胨0.1％、KH2PO40.15％、MgSO40.075％、消沫油0.2％、VB1100μg/ml和33.3mg//100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到100μg/ml。
培養(yǎng)條件150升種子罐投料100升，通氣量1∶0.4-0.6V/V/分，溫度27℃±1℃，培養(yǎng)4-5天。
D、發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基蔗糖3％、黃豆粉1.5％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.15％、MgSO40.075％、消沫油0.3％和33.3mg//100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到100μg/ml。
培養(yǎng)條件1500升發(fā)酵罐投料1000升或12000升發(fā)酵罐投料8000升，通氣量1∶0.6-0.8V/V/分，溫度26-28℃，培養(yǎng)6天。
E、發(fā)酵液提取過程提取過程采用板框分離、雙效濃縮、噴霧干燥，干燥后的富硒猴頭菌提取物中硒含量達到400-700μg/100g；經(jīng)超微粉碎，細度在200目以上，按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物顆粒。
按照本發(fā)明的制備方法，富硒猴頭菌提取物還可以制成片劑、膠囊、口服液等多種劑型。
本發(fā)明用富硒猴頭菌提取物顆粒治療潰瘍性結(jié)腸炎。經(jīng)廣東省惠州市中心人民醫(yī)院臨床療效觀察300例，治療組服用富硒猴頭菌提取物顆粒(山西康欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，對照組服用虎地膠囊(安徽古井集團九方制藥有限公司生產(chǎn))，見“富硒猴頭菌提取物顆?！敝委煗冃越Y(jié)腸炎的臨床觀察實驗報告(附件一)。
臨床療效比較治療組150例，治愈130例(86.67％)，好轉(zhuǎn)17例(11.33％)，無效3例(2.00％)，總有效率98.00％。對照組150例，治愈99例(66.00％)，好轉(zhuǎn)20例(13.33％)，無效31例(20.67％)，總有效率79.33％。
服用“富硒猴頭菌提取物顆?！敝委熃Y(jié)腸炎，臨床痊愈率及總有效率均顯著高于對照組。統(tǒng)計分析顯示P＜0.01，治療組優(yōu)于對照組。
經(jīng)過對150例潰瘍性結(jié)腸炎患者進行了為期一年的治療觀察與隨訪，總有效率達90％以上，愈后效果良好。結(jié)果表明“富硒猴頭菌提取物顆粒”治療結(jié)腸炎較用虎地膠囊治療潰瘍性結(jié)腸炎療效更好。其服用方便、復(fù)發(fā)率低，尚未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，更適宜長期服用，是目前治療潰瘍性結(jié)腸炎的理想藥物。
本發(fā)明用富硒猴頭菌提取物顆粒治療慢性萎縮性胃炎。經(jīng)湖北省人民醫(yī)院對慢性萎縮性胃炎臨床觀察300例，治療組服用富硒猴頭菌提取物顆粒(山西康欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，對照組服用胃復(fù)春(杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，見“富硒猴頭菌提取物顆?！敝委熉晕s性胃炎的的臨床觀察實驗報告(附件二)。
臨床療效采用胃鏡檢查結(jié)果比較治療組150例，顯效72例，有效67例，無效11例，顯效率48％，總有效率為92.67％；對照組150例，顯效39例，有效53例，無效58例，顯效率26％，總有效率為61.33％。
服用“富硒猴頭菌提取物顆?！敝委熉晕s性胃炎顯效率、總有效率均顯著高于對照組，統(tǒng)計分析顯示P＜0.01，有顯著性差異。
對150例慢性萎縮性胃炎患者進行了為期一年的治療觀察與隨訪，總有效率達90％以上，愈后效果良好。結(jié)果表明“富硒猴頭菌提取物顆?！敝委熉晕s性胃炎方面較對照組胃復(fù)春療效更好，并且服用方便、口感好，目前尚未發(fā)現(xiàn)有不良反應(yīng)，適宜長期服用，是治療慢性萎縮性胃炎的理想藥物。
本發(fā)明用富硒猴頭菌提取物顆粒治療早期胃癌。經(jīng)武漢大學(xué)中南醫(yī)院對早期胃癌臨床觀察300例，治療組服用富硒猴頭菌提取物顆粒(山西康欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，對照組服用猴頭菌片(山西康欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，見“富硒猴頭菌提取物顆粒”治療早期胃癌300例近期療效觀察(附件三)。
臨床療效比較治療組150例，有效117例，無效33例，有效率為78％；對照組150例，有效55例，無效95例，有效率36.67％。經(jīng)卡方經(jīng)驗，X2＝46.07，P＜0.01，治療組與對照組療效差異有顯著性，治療組優(yōu)于對照組。
用富硒猴頭菌提取物顆粒對150例早期胃癌患者進行了為期半年的治療觀察與隨訪，與使用普通猴頭菌片比較療效顯著?！案晃镱^菌提取物顆粒”采用液體深層發(fā)酵技術(shù)，提取猴頭菌中有效成分猴頭多糖、多肽，通過有效調(diào)節(jié)機體免疫和局部胃腸道免疫功能，改善胃腸道營養(yǎng)狀態(tài)，對胃腸道腫瘤的治療具有明顯的效果；微量元素硒則通過提高機體的抗氧自由基的能力，調(diào)節(jié)機體免疫功能，抑制細胞增生、DNA復(fù)制及蛋白質(zhì)合成而直接影響腫瘤細胞的生長，從而增強機體的抗癌作用。實驗表明，“富硒猴頭菌提取物顆粒”服用方便，療效好、安全性高、適宜長期服用，值得臨床推廣使用。
權(quán)利要求
1.一種治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑，其特征是以猴頭菌作為富集硒元素的載體，菌株代碼5.580，購于CGMCC，采用液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)，在猴頭菌的菌絲體和代謝產(chǎn)物生長過程中按照體積重量比加入10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，使猴頭菌提取物中硒含量達到400～700μg/100g，按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物制劑。
2.一種治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑的制備方法，其特征是以猴頭菌作為富集硒元素的載體，菌株代碼5.580，購于CGMCC；A、斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA綜合培養(yǎng)基+10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml；培養(yǎng)條件25℃±1℃恒溫條件下培養(yǎng)8-10天；B、液體搖瓶種子培養(yǎng)培養(yǎng)基麩皮4～6％、葡萄糖0.8～1.5％、蛋白胨0.05～0.3％、KH2PO40.1～0.3％、MgSO40.05～0.1％、VB1100μg/ml和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml；其中麩皮煮沸30分鐘后去渣取濾液；培養(yǎng)條件750ml搖瓶裝量200ml，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，溫度25℃±1℃，在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)5～7天；C、種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基葡萄糖1～3％、黃豆粉0.5～1.5％、蛋白胨0.05～0.3％、KH2PO40.1～0.3％、MgSO40.05～0.15％、消沫油0.1～0.3％、VB1100μg/ml和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml；培養(yǎng)條件150升種子罐投料100升，通氣量1∶0.4～0.6V/V/分，溫度26～28℃，培養(yǎng)5-7天；D、發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基蔗糖2～4％、黃豆粉1～3％、蛋白胨0.1～0.5％、KH2PO40.1-0.3％、MgSO40.05-0.2％、消沫油0.1～0.3％和10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na2SeO3·5H2O)，補水到定體積，使培養(yǎng)基中的硒含量達到30-150μg/ml；培養(yǎng)條件1500升或12000升發(fā)酵罐投料60～70％，通氣量1∶0.6-0.8V/V/分，溫度26-28℃，培養(yǎng)5-7天；E、發(fā)酵液提取過程提取過程采用板框分離、雙效濃縮、噴霧干燥，干燥后的富硒猴頭菌提取物中硒含量達到400-700μg/100g；經(jīng)超微粉碎后按照常規(guī)工藝加入賦形劑，制成富硒猴頭菌提取物制劑。
全文摘要
一種治療結(jié)腸炎、胃炎、胃癌的富硒猴頭菌提取物制劑，是以猴頭菌作為富集硒元素的載體，采用液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)，在猴頭菌的菌絲體和代謝產(chǎn)物生長過程中按照體積重量比加入10～50mg/100ml的亞硒酸鈉(Na
文檔編號A61P35/00GK1857332SQ20061007135
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日
發(fā)明者郭戰(zhàn)平, 趙金芬, 張經(jīng)國, 張巧香, 李良中, 郭秉其 申請人:山西康欣藥業(yè)有限公司, 廣東信東醫(yī)藥有限責(zé)任公司