專(zhuān)利名稱：鹽膚木內(nèi)酯a,其制備方法和其在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種鹽膚木內(nèi)酯A化合物，其制備方法，和其在制備抗艾滋病藥物中和在制備抑制合胞體形成藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
艾滋病(Acquired Immuno-deficiency Syndrome，AIDS，獲得性免疫缺損綜合癥，簡(jiǎn)稱艾滋病)是當(dāng)今世界主要威脅人類(lèi)健康的不可根治的致死性疾病之一。導(dǎo)致艾滋病的病原體即人類(lèi)免疫缺損病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，1983年獲得分離確證，有兩種亞型HIV-1和HIV-2，若干變異株。HIV繁殖過(guò)程大多已闡明，不同類(lèi)型的化合物被相繼研究和用于抗艾滋病病毒。全世界已對(duì)約20000個(gè)化合物進(jìn)行了抗HIV活性的研究，目前已成功地研制出了一系列抗逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的艾滋病藥物。如逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 (AZT，DDC，DDI，D4T，3TC，Nevirapine，Delavirdine，Efavinavir)和蛋白酶抑制劑藥物(Sequanavir，Ritonavir，Indinavir，Nelfinavir，Amprenavir)，這些藥雖然被批準(zhǔn)用于臨床，客觀上延長(zhǎng)了艾滋病患者的生命，但同時(shí)又有嚴(yán)重的毒副作用如骨髓抑制和健忘等以及導(dǎo)致抗病毒株的出現(xiàn)，患者往往難以忍受這些毒副作用而帶來(lái)的痛苦，而拒絕服用。因而臨床上急需研制出高效低毒的抗艾滋病新藥。從中草藥中發(fā)現(xiàn)天然抗HIV活性化合物或先導(dǎo)物是目前國(guó)內(nèi)外研究的重要方面和非?；钴S的領(lǐng)域。至今發(fā)現(xiàn)100多種天然化合物具有抗HIV活性，分屬于倍半萜、二萜、三萜、甾體、黃酮、香豆素、肽類(lèi)、生物堿，多糖，天花粉蛋白等，其中活性較強(qiáng)的如甘草甜素，金絲桃素，姜黃素，大豆皂甙，喜樹(shù)堿，栗精胺，香菇多糖，天花粉蛋白等。目前約有近百個(gè)品種正在進(jìn)行臨床前研究和臨床試驗(yàn)。從天然生物資源尋找新的抗HIV藥物或先導(dǎo)化合物的研究，是國(guó)內(nèi)外新藥研制中非?；钴S的領(lǐng)域?，F(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有鹽膚木內(nèi)酯A化合物的報(bào)道，也沒(méi)有其具有較強(qiáng)抗HIV活性的報(bào)道，此外，也沒(méi)有該化合物抑制HIV合胞體形成的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有藥用價(jià)值的化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)。
本發(fā)明的另一目的是提供一種從鹽膚木(Rhus chinensis)在植物中提取本發(fā)明化合物的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供本發(fā)明化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用和在制備抑制合胞體形成藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明人由鹽膚木(Rhus chinensis)全株中分離出一種新的化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，該化合物具有有價(jià)值的藥用活性。
本發(fā)明的新的化合物用下述結(jié)構(gòu)式(I)表示； 式(I)
本發(fā)明化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)是由鹽膚木植物中提取而得到的，該方法包括以下步驟取鹽膚木(Rhus chinensis)，曬干，粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并濃縮液，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，石油醚部分直接經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，V/V)梯度洗脫，得到六個(gè)流分Fr.A-F.，F(xiàn)r.E部分反復(fù)硅膠柱層析得鹽膚木內(nèi)酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基) -2， 6， 10， 11-十六四烯基-2(3H)-苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
本發(fā)明的用于抗艾滋病的藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和/或藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的用于抑制合胞體形成的藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和/或藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)可用于制備抗艾滋病的藥物。
本發(fā)明的化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)可用于制備抑制合胞體形成的藥物。
本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。所述藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1-99％的活性成分即本發(fā)明化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，最優(yōu)選含有重量比為0.5-90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。
本發(fā)明化合物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類(lèi)型和嚴(yán)重程度等變化，其日劑量可以是O.01~1Omg/kg體重，優(yōu)選O.1~5mg/kg體重?？梢砸淮位蚨啻问┯?。


圖1是鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)對(duì)HIV-1誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體的抑制活性數(shù)據(jù)圖；圖2是鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)的細(xì)胞毒性測(cè)定圖。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本專(zhuān)業(yè)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1鹽膚木內(nèi)酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H) -苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]的制備。
取鹽膚木(Rhus chinensis)全株(莖葉23kg)曬干粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液濃縮至小體積，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。石油醚部分(386g)直接經(jīng)硅膠柱層析(1500g，200-300目，7.0×100cm)，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，v/v)梯度洗脫，每500mL收集一份，TLC檢測(cè)合并相同部分，共得到六個(gè)流分，流份1-12為Fr.A，流份13-21為Fr.B，流份22-33為Fr.C，流份34-40為Fr.D，流份41-45為Fr.E，流份46-50為Fr.F。流份Fr.E(12.5g)經(jīng)硅膠柱層析(250g，200-300目，4.5×60cm)，用石油醚-乙酸乙酯(90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，v/v)梯度洗脫，得到四個(gè)流份Fr.E1-Fr.E4，F(xiàn)r.E1(400mg)經(jīng)Sephadex LH-20，用氯仿-甲醇(1∶1)洗脫，得到主要流份150mg，再經(jīng)硅膠柱層析(15g，200-300目，1.5×45cm)，石油醚-丙酮(90∶10)洗脫，得到結(jié)構(gòu)式(I)所示的鹽膚木內(nèi)酯A(ruscholide A)93mg。鹽膚木內(nèi)酯A(ruscholideA)，即5-羥基-3-甲叉基-7- (3，7， 11， 15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H) -苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)紫外光譜(UV)用UV-210A儀測(cè)定，紅外光譜(IR)用Bio-RadFTS-135型分光光度計(jì)測(cè)定，KBr壓片。質(zhì)譜(MS)用Auto SPEC 3000型質(zhì)譜儀測(cè)定。核磁共振譜(1H NMR和13C NMR)用Bruker DRX-500超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定，TMS作內(nèi)標(biāo)，CDCl3作溶劑。柱層析材料和薄層層析用硅膠為青島美高集團(tuán)有限公司的產(chǎn)品。展開(kāi)劑∶石油醚-乙酸乙酯 (70∶30)，Rf＝0.5。
結(jié)構(gòu)式如式(I)所示 式(I)分子式C31H42O3分子量462性狀淡黃色粉末UV(CHCl3)λmax(logε)＝260(4.21)，294(3.87)，352(3.54)。
IR(KBr)vmax＝3447，1735，1620，1488，1457，1384，1358，1305，1290，1280，1170，1130，858，796cm-1。
EI-MS(70ev)m/z＝462(12)，419(10)，393(17)，326(21)，258(29)，204(26)，203(70)，175(22)，81(43)，69(100)；HR-EI-MSm/z＝463.3207[M+H]+(calcd.for C31H43O3463.3212)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δH6.88(1H，d，J＝2.1Hz，H-4)，6.60(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)，5.29(1H，t，J＝7.3Hz，H-2″)，5.11-5.07(3H，m，H-6″，10″，14″)，3.34(2H，d，J＝7.3Hz，H-1″)，2.56(3H，s，H-2′)，2.33(3H，s，H-3′)，2.33-1.96(12H，m，H-4″，5″，8″，9″，12″，13″)，1.70(3H，s，H-18″)，1.67(3H，s，H-16″)，1.58(9H，s，H-17″，19″，20″).
13C-NMR(CDCl3，125MHz)δc167.8(s，C-2)，119.4(s，C-3)，108.1(d，C-4)，152.0(s，C-5)，115.4(d，C-6)，125.2(s，C-7)，124.5(s，C-3a)，144.4(s，C-7a)，159.1(s，C-1′)，24.8(q，C-2′)，23.5(q，C-3′).27.4(t，C-1″)，120.7(d，C-2″)，137.5(s，C-3″)，39.7(t，C-4″)，26.7(t，C-5″)，124.4(d，C-6″)，135.1(s，C-7″)，39.7(t，C-8″)，26.6(t，C-9″)，124.2(d，C-10″)，135.0(s，C-11″)，39.7(t，C-12″)，26.5(t，C-13″)，124.0(d，C-14″)，131.2(s，C-15″)，25.6(q，C-16″)，17.6(q，C-17″)，16.2(q，C-18″)，16.0×2(q，C-19″，20″).
實(shí)施例2按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
實(shí)施例3按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，將其溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于2安瓿中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。
實(shí)施例4將所分離得到的鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)與賦形劑重量比為9∶1的比例加入賦形劑，制成粉劑。
實(shí)施例5按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例6按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
實(shí)施例7按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
實(shí)施例8按實(shí)施例1的方法先制得鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為3∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
實(shí)施例9本發(fā)明化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)及其與藥用載體或賦形劑組成的藥物組合物的藥理作用。
1.鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)對(duì)HIV-1誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體的抑制實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法將6×105/ml C8166細(xì)胞50μl與100μl不同濃度的化合物溶液混合，加入50μl HIV-1稀釋?zhuān)琈.O.I.為0.0089，同時(shí)設(shè)置不含化合物的對(duì)照孔和陽(yáng)性藥物AZT對(duì)照孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)三天，倒置顯微鏡下(100×)計(jì)數(shù)合胞體(五個(gè)視野)。計(jì)算化合物的EC50(50％Effective Concentration)，即化合物抑制50％合胞體形成的濃度。
(2)結(jié)果(見(jiàn)表1和說(shuō)明書(shū)附圖1)表1 鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)對(duì)HIV-1誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體的抑制活性數(shù)據(jù)

2.鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法3×105/ml C8166細(xì)胞懸液100μl與100μl不同濃度的化合物溶液混合，同時(shí)設(shè)置不含化合物的對(duì)照孔和陽(yáng)性藥物AZT對(duì)照孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)三天，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。595 nm/630nm ELx800 ELISAReader測(cè)定OD值。計(jì)算化合物對(duì)細(xì)胞的CC50(50％CytotoxicConcentration)，即引起50％細(xì)胞死亡的化合物濃度。
(2)結(jié)果(見(jiàn)表2和說(shuō)明書(shū)附圖2)
表2 鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)的細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果

3、鹽膚木內(nèi)酯A(Ruscholide A)抗HIV的治療指數(shù)(SelectiveIndex，SI)SI＝CC50÷EC50＝31.73μg/ml÷0.75μg/ml＝42從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以證實(shí)本發(fā)明的鹽膚木內(nèi)酯A對(duì)HIV-1誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體具有明顯抑制作用，它可用于制備抗艾滋病的藥物，也可用于制備抑制HIV合胞體形成的藥物。
權(quán)利要求
1.下述結(jié)構(gòu)式(I)化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Rhuscholide A) 式(I)。
2.制備權(quán)利要求1化合物的方法，取鹽膚木(Rhus chinensis)，曬干，粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并濃縮液，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，石油醚部分直接經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，V/V)梯度洗脫，得到六個(gè)流分Fr.A-F.，F(xiàn)r.E部分反復(fù)硅膠柱層析得鹽膚木內(nèi)酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H)-苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
3.用于抗艾滋病的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和/或藥學(xué)上可接受的載體。
4.用于抑制合胞體形成的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和/或藥學(xué)上可接受的載體。
5.權(quán)利要求1化合物鹽膚木內(nèi)酯A在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1化合物鹽膚木內(nèi)酯A在制備抑制合胞體形成藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
下述結(jié)構(gòu)式(I)化合物鹽膚木內(nèi)酯A(Rhuscholide A)，其制備方法，其在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用和在制備抑制合胞體形成藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K36/22GK1995028SQ20061004871
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月10日
發(fā)明者陳紀(jì)軍, 顧瓊, 鄭永唐, 王睿睿, 張雪梅, 周俊 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所, 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所