一種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，步驟包括：取野外多年生優(yōu)良鹽膚木地表根進(jìn)行壓根繁殖，經(jīng)25-40d培養(yǎng)長(zhǎng)出完整植株；取完整植株的幼苗的葉片，經(jīng)表面消毒后，切取葉脈接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)28-35d光照培養(yǎng)后葉脈兩端長(zhǎng)出不定芽叢；再將不定芽叢接種在叢生芽增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的擴(kuò)繁和伸長(zhǎng)；待芽長(zhǎng)至2-3cm，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根，獲得健壯的鹽膚木試管苗。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，通過壓根繁殖健壯幼苗，克服了野外材料直接取材作為外植體所帶來的污染和褐化嚴(yán)重問題，便于實(shí)現(xiàn)再生、獲得組培苗。
【專利說明】一種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種高效快繁的方法，尤其是鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鹽膚木為漆樹科鹽膚木屬落葉小喬木，適應(yīng)性強(qiáng)，分布廣，其種子含有大量的不飽 和脂肪酸，油脂具有較高的食用價(jià)值，也是生物能源原料油脂的潛力樹種，可供榨油、觀賞 和做工業(yè)染料的原料等。鹽膚木具有較高的藥用價(jià)值，寄生在其葉片上的蚜蟲蟲癭所形成 的五倍子是重要的中藥材和工業(yè)原料，是我國重要林特產(chǎn)品。隨著鹽膚木相關(guān)產(chǎn)品需求量 的不斷增大，培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的鹽膚木品種及建立一種對(duì)現(xiàn)有的鹽膚木優(yōu)良品種進(jìn)行高效快 速繁殖的方法具有重要意義。
[0003] 鹽膚木常用的育苗方式有播種育苗和插根育苗，但育苗過程繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且育 苗時(shí)間易受季節(jié)限制。同時(shí)對(duì)于優(yōu)良株系的繁殖而言，以種子育苗的方式由于種子雜合性 高，實(shí)生苗后代變異大，往往不能保持優(yōu)良株系的特性；而插根繁殖需要大量的根，取材受 限，因而這種繁殖方法無法規(guī)?；?。隨著組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，研究人員嘗試以野外鹽膚木 優(yōu)良株系的不同組織為外植體，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)優(yōu)良株系進(jìn)行快繁，但由于野外直接 取材的組織中含有較高的次生代謝物，致使組培過程中褐化和污染現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致再生困 難。因此，針對(duì)上述問題，急需開發(fā)一種鹽膚木高效快繁的方法，以滿足鹽膚木優(yōu)良株系的 快速繁殖和品種改良的需要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。
[0006] -種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，步驟包括：
[0007] 取野外多年生優(yōu)良鹽膚木地表根進(jìn)行壓根繁殖，經(jīng)25-40d培養(yǎng)長(zhǎng)出完整植株；
[0008] 取完整植株的幼苗的葉片，經(jīng)表面消毒后，切取葉脈接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng) 28-35d光照培養(yǎng)后葉脈兩端長(zhǎng)出不定芽叢；
[0009] 再將不定芽叢接種在叢生芽增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的擴(kuò)繁和伸長(zhǎng)；
[0010] 待芽長(zhǎng)至2-3cm，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根，獲得健壯的鹽膚木試管苗。
[0011] 進(jìn)一步地，上述取完整植株的幼苗的葉片為壓根繁殖25-40d獲得的未木質(zhì)化的 小苗的葉片。
[0012] 進(jìn)一步地，上述表面消毒為：葉片經(jīng)流水沖洗1〇11^11后，用75(%酒精消毒25-3〇 8， 之后用〇. 1%的HgC12消毒55-80S,最后用無菌水沖洗3-5遍,消毒期間不停搖動(dòng)。
[0013] 進(jìn)一步地，上述切取葉脈為切?。?. 3-0. 5) X (0. 2-0. 5) cm2大小帶葉脈的葉片切 塊。
[0014] 進(jìn)一步地，上述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS、0. 5?4. Omg/L TDZ、30g/L蔗糖、7. 0g/ L瓊脂。
[0015] 進(jìn)一步地，上述叢生芽增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基包括：MS、0. 2?0· 5mg/LTDZ、0. 01? 0· 3mg/L IBA 或 NAA、30g/L 蔗糖、7. Og/L 瓊脂。
[0016] 進(jìn)一步地，上述生根培養(yǎng)基包括：1/2MS、0.2?2.0mg/L NAA或IBA、30g/L蔗糖、 7. Og/L 瓊脂。
[0017] 進(jìn)一步地，獲得的鹽膚木試管苗的莖段接種于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽 的誘導(dǎo)、增殖和伸長(zhǎng)。
[0018] 進(jìn)一步地，上述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括：MS、0. 25?3. 5mg/L TDZ、30g/L蔗糖、 7. Og/L 瓊脂。
[0019] 本發(fā)明的有益效果：
[0020] 1)通過壓根繁殖健壯幼苗，克服了野外材料直接取材作為外植體所帶來的污染和 褐化嚴(yán)重問題，便于實(shí)現(xiàn)再生、獲得組培苗；2)通過本發(fā)明的方法可以以少量的優(yōu)良株系 的根作為出發(fā)材料，實(shí)現(xiàn)批量和規(guī)?；瘍?yōu)良株系的繁殖；3)本發(fā)明克服了傳統(tǒng)種子育苗所 存在的發(fā)芽率低、后代變異率大、難以保持親本優(yōu)良性狀等問題；4)本發(fā)明解決了插根繁 殖所存在的費(fèi)時(shí)費(fèi)力，繁殖時(shí)間受限和繁殖系數(shù)低等問題。5)本發(fā)明所需出發(fā)實(shí)驗(yàn)材料少， 適合優(yōu)良單株的繁殖，繁殖系數(shù)高，可以保持原種的優(yōu)良性狀，有利于鹽膚木優(yōu)良株系快繁 的大規(guī)模應(yīng)用，同時(shí)也為后期的通過基因工程技術(shù)進(jìn)行品種改良研究奠定了基礎(chǔ)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1為鹽膚木地表根（a)及根埋獲得的幼苗（b)的示意圖；
[0022] 圖2為鹽膚木優(yōu)良株系根埋獲得的幼苗葉片再生過程示意圖；
[0023] (a)消毒后接種于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的葉脈
[0024] (b)葉脈誘導(dǎo)的叢生芽
[0025] (c)叢生芽的增殖與伸長(zhǎng)
[0026] (d)鹽膚木芽生根
[0027] 圖3為鹽膚木無菌苗莖段叢生芽莖段再生過程示意圖。
[0028] (a)誘導(dǎo)前莖段
[0029] (b)莖段誘導(dǎo)叢生芽
[0030] 圖4為鹽膚木試管苗馴化示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0031] 下面根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0032] -種鹽膚木野外優(yōu)良株系高效快繁的方法，具體如下：
[0033] 1)取2-5cm長(zhǎng)的待繁育鹽膚木植株的根，埋入2-5cm厚的土中進(jìn)行育苗。
[0034] 2)取經(jīng)過壓根繁殖25-40d獲得的未木質(zhì)化小苗的葉片，進(jìn)行表面消毒（圖1);
[0035] 3)將葉片切成0. 5X0. 5cm2大小帶葉脈的切塊接種于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 (1^+0.5?4.〇11^/1102+3(^/1蔗糖+7.(^/1瓊脂），3?4周后獲得翠綠色不定芽叢 ； 后將叢生芽轉(zhuǎn)接于叢生芽增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基（MS+0. 2?0. 5mg/L TDZ+0. 01?0. 3mg/ L IBA或NAA+30g/L蔗糖+7. Og/L瓊脂）；待芽伸長(zhǎng)至2. 0?3. 0cm時(shí)轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基 91/2MS+0. 2?2. Omg/L NAA或IBA+30g/L蔗糖+7. Og/L瓊脂）中進(jìn)行生根培養(yǎng)（圖2)。
[0036] 4)切取健壯的組培苗莖段轉(zhuǎn)接于莖段叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基（MS+0. 25?3. 5mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7. Og/L瓊脂）中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)、增殖和伸長(zhǎng)（圖3);
[0037] 5)組培苗按上述方法生根后進(jìn)行煉苗馴化，獲得完整的再生植株（圖4)。
[0038] 上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的 人士能夠了解本
【發(fā)明內(nèi)容】
并加以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明 精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，步驟包括： 取野外多年生優(yōu)良鹽膚木地表根進(jìn)行壓根繁殖，經(jīng)25-40d培養(yǎng)長(zhǎng)出完整植株； 取完整植株的幼苗的葉片，經(jīng)表面消毒后，切取葉脈接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)28-35d 光照培養(yǎng)后葉脈兩端長(zhǎng)出不定芽叢； 再將不定芽叢接種在叢生芽增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的擴(kuò)繁和伸長(zhǎng)； 待芽長(zhǎng)至2-3cm，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根，獲得健壯的鹽膚木試管苗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述取完整 植株的幼苗的葉片為壓根繁殖25-40d獲得的未木質(zhì)化的小苗的葉片。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述表面 消毒為：葉片經(jīng)流水沖洗1〇111：[11后，用75%酒精消毒25-3〇8，之后用0.1%的!^(：12消毒 55-80s,最后用無菌水沖洗3-5遍，消毒期間不停搖動(dòng)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述切取葉 脈為切?。?. 3-0. 5) X (0. 2-0. 5) cm2大小帶葉脈的葉片切塊。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS、0. 5?4. Omg/L TDZ、30g/L蔗糖、7. Og/L瓊脂。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽 增殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)基包括：MS、0. 2?0· 5mg/L TDZ、0. 01?0· 3mg/L IBA或NAA、30g/L蔗糖、 7. Og/L 瓊脂。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述生根培 養(yǎng)基包括：1/2MS、0. 2 ?2. Omg/L NAA 或 IBA、30g/L 蔗糖、7. Og/L 瓊脂。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，獲得的鹽膚 木試管苗的莖段接種于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo)、增殖和伸長(zhǎng)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽膚木優(yōu)良株系高效快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括：MS、0. 25?3. 5mg/L TDZ、30g/L蔗糖、7. 0g/L瓊脂。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104082141SQ201410306866
【公開日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】吳麗芳, 侯金艷, 沈羊城, 劉文博, 楊鳴雷, 吳影, 毛穎基, 趙薇微, 李明浩 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院