專利名稱：獸用血促性素生產(chǎn)工藝及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種獸用血促性素生產(chǎn)工藝及其產(chǎn)品，涉及獸用血促性素生產(chǎn)工藝的改進(jìn)，屬于獸用生物制劑生產(chǎn)方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
獸用血促性素為從孕馬血清中提取的一種具有促進(jìn)動(dòng)物性功能作用的物質(zhì)，該物質(zhì)最早由Cole和Hart于1930年發(fā)現(xiàn)于孕馬血清中，因其具有促進(jìn)性腺發(fā)育功能，故此命名為Pregnant Mare SerumGonadotrophin PMSG漢譯名為孕馬血清促性腺激素。獸用血促性素為中國(guó)獸藥典對(duì)此物質(zhì)的命名，其化學(xué)本質(zhì)為糖蛋白，由非共價(jià)鍵相連的α亞基和β亞基組成，共有255個(gè)氨基酸，其中α亞基含有96個(gè)氨基酸，β亞基含有149個(gè)氨基酸。PMSG的α亞基與馬LH、FSH和TSH的α亞基序列是完全相同的，但與其它哺乳動(dòng)物L(fēng)H、FSH和TSH的α亞基序列不同。PMSG的β亞基具有專屬特異性。PMSG在所有哺乳動(dòng)物的糖蛋白激素中是含糖量最高的，其含糖量占整個(gè)分子量的41.7％，主要為半乳糖、N-乙?；咸前泛屯僖核帷MSG的等電點(diǎn)為2.60-2.65，分子量為64,030道爾頓。血促性素制品是通過(guò)對(duì)孕馬血液的分離、純化、冷凍真空干燥等工序制取的，我國(guó)農(nóng)業(yè)部部頒標(biāo)準(zhǔn)為獸用制品純度達(dá)到100IU/mg即可。
目前，生產(chǎn)血促性素的主要工藝是偏磷酸-乙醇分步沉淀法。該法的主要不足為，在實(shí)驗(yàn)室中小樣本提取可獲較高收率，但放大到1萬(wàn)ml血清/批時(shí)，收率明顯降低，常常不到30％，分析原因，可能是偏磷酸沉淀一步因樣本量較大，偏磷酸與樣品的反應(yīng)不均勻，而使活性物質(zhì)大量丟失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)一種獸用血促性素生產(chǎn)工藝，解決現(xiàn)有獸用血促性素生產(chǎn)工藝存在著的收率較低等問(wèn)題。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括以下步驟取孕馬血清(平均效價(jià)100IU/ml以上)，用等量蒸餾水稀釋，邊攪拌邊加固體硫酸銨至終濃度32～36％，用濃氨水調(diào)PH至6.0～7.0，充分?jǐn)嚢韬?，濾布過(guò)濾，清液邊攪拌邊緩慢滴加0.5～1N偏磷酸調(diào)PH至3.8～4.6，充分?jǐn)嚢韬?，濾布過(guò)濾。清液經(jīng)中空纖維超濾器濃縮(截留分子量20KU)，使體積濃縮至原體積的40～50％左右，此濃縮液稱量體積后，緩慢加入預(yù)冷酒精，使40％乙醇沉淀，用濃氨水調(diào)PH至6.2～6.8，靜止分層后，虹吸上清，稱量體積。加預(yù)冷醫(yī)用酒精至終濃度80％，用冰醋酸調(diào)PH至3.6～4.4，靜止分層后，虹吸法吸棄上清，剩余的部分混濁液離心取沉淀。將此沉淀用適量生理鹽水溶起，裝入透析袋中透析24小時(shí)，80％酒精沉淀，沉淀物置干燥器中負(fù)壓抽氣至干燥，稱重，取少許進(jìn)行生物活性檢測(cè)，計(jì)算收率和純度。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下積極效果提高了獸用血促性素收率?，F(xiàn)有的偏磷酸-乙醇分步沉淀法，適于實(shí)驗(yàn)室小批量提取，當(dāng)放大到生產(chǎn)規(guī)模時(shí)(10000ml以上)，則收率一般只有30％左右。本生產(chǎn)工藝的收率約為70％，高于現(xiàn)在技術(shù)2倍以上。保持純度在獸藥標(biāo)準(zhǔn)之上。本工藝獲得的產(chǎn)品，純度為100~300IU/mg，可滿足獸藥生產(chǎn)需要。節(jié)約酒精。本工藝采用中空纖維超濾技術(shù)濃縮中間品，使酒精用量比未使用濃縮技術(shù)前減少了60％，酒精是本工藝中最為貴重的試劑，因此大幅降低了成本。減少離心機(jī)的使用。本工藝充分利用自然沉降或?yàn)V布過(guò)濾法分離清液與沉淀物，最大程度減少了離心機(jī)的使用量。離心機(jī)是本工藝中最昂貴的儀器設(shè)備，因此采用本工藝可節(jié)約成本。
具體實(shí)施例方式通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1051010批提取過(guò)程和結(jié)果取孕馬血清10000ml加蒸餾水10000ml邊攪拌邊添加固體硫酸銨(分析純)600克，用濃氨水調(diào)PH至6.0后，濾布過(guò)濾，濾液中加入新鮮配制的1N偏磷酸，調(diào)PH至4.2；濾布過(guò)濾，收集濾液，中空纖維超濾器(截留分子量20KU)超濾濃縮至體積5000ml，加入預(yù)冷酒精至終濃度40％，濃氨水調(diào)PH至6.2，虹吸法吸出上清，加入預(yù)冷酒精至終濃度80％，冰醋酸調(diào)PH至4.0，虹吸法吸棄上清，將沉淀用生理鹽水溶起，透析，加入預(yù)冷酒精至終濃度80％，靜止分層后，虹吸法吸棄上清，將沉淀轉(zhuǎn)移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低溫室中抽真空干燥，稱重，取10mg測(cè)生物學(xué)活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
結(jié)果本批活性收率為71.6％，純度為268IU/mg。
實(shí)施例2051208批提取過(guò)程和結(jié)果取孕馬血清20000ml加蒸餾水20000ml，邊攪拌邊添加固體硫酸銨(分析純)1200克，添加時(shí)注意將大的顆粒碾碎，用小湯匙逐匙緩慢添加，用濃氨水調(diào)PH至7.0，濾布過(guò)濾，加入1N偏磷酸，用酸度計(jì)監(jiān)測(cè)PH至4.6，濾布過(guò)濾，中空纖維超濾器(截留分子量20KU)超濾濃縮至體積13000ml，加入預(yù)冷酒精至終濃度40％，濃氨水調(diào)PH至6.8，虹吸法吸出上清，加入預(yù)冷酒精至終濃度80％，冰醋酸調(diào)PH至4.4，虹吸法吸棄上清(作為廢酒精回收)，沉淀用生理鹽水溶起，透析，加入預(yù)冷酒精至終濃度80％，虹吸法吸棄上清(作為廢酒精回收)，將沉淀轉(zhuǎn)移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低溫室中抽真空干燥，稱重，取10mg測(cè)生物學(xué)活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
結(jié)果本批活性收率為69.4％，純度為215IU/mg。
實(shí)施例3051220批提取過(guò)程和結(jié)果取孕馬血清20000ml加蒸餾水20000ml，邊攪拌邊添加固體硫酸銨(分析純)1200克，用濃氨水調(diào)PH至6.4，濾布過(guò)濾，加入1N偏磷酸(分析純)，用酸度計(jì)監(jiān)測(cè)PH至4.0，濾布過(guò)濾，收集濾液，中空纖維超濾器(截留分子量20KU)超濾濃縮至體積13000ml，加入預(yù)冷酒精至終濃度40％，濃氨水調(diào)PH至6.2，虹吸法吸出上清，加入預(yù)冷酒精，冰醋酸調(diào)PH至3.6，虹吸法吸棄上清(作為廢酒精回收)，沉淀用生理鹽水溶起，透析，邊加入預(yù)冷酒精至終濃度80％，虹吸法吸棄上清(作為廢酒精回收)，沉淀轉(zhuǎn)移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低溫室中抽真空干燥，稱重，取10mg測(cè)生物學(xué)活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
結(jié)果本批活性收率為69.8％，純度為220IU/mg。
權(quán)利要求
1.一種獸用血促性素生產(chǎn)工藝，包括以下步驟取孕馬血清用等量蒸餾水稀釋，邊攪拌邊加固體硫酸銨至終濃度32～36％，用濃氨水調(diào)PH至6.0～7.0，充分?jǐn)嚢韬?，濾布過(guò)濾，清液邊攪拌邊緩慢滴加0.5～1N偏磷酸調(diào)PH至3.8～4.6，充分?jǐn)嚢韬?，濾布過(guò)濾；清液經(jīng)中空纖維超濾器濃縮，截留分子量為20KU，使體積濃縮至原體積的40～50％左右，此濃縮液稱量體積后，緩慢加入預(yù)冷酒精，使40％乙醇沉淀，用濃氨水調(diào)PH至6.2～6.8，靜止分層后，虹吸上清，稱量體積；加預(yù)冷醫(yī)用酒精至終濃度80％，用冰醋酸調(diào)PH至3.6～4.4，靜止分層后，虹吸法吸棄上清，剩余的部分混濁液離心取沉淀；將此沉淀用適量生理鹽水溶起，裝入透析袋中透析24小時(shí)，80％酒精沉淀，沉淀物置干燥器中負(fù)壓抽氣至干燥的本發(fā)明產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種獸用血促性素生產(chǎn)工藝，取孕馬血清用等量蒸餾水稀釋，邊攪拌邊加固體硫酸銨，用濃氨水調(diào)pH，充分?jǐn)嚢韬螅瑸V布過(guò)濾，清液滴加偏磷酸調(diào)pH，濾布過(guò)濾。清液經(jīng)中空纖維超濾器濃縮，使體積濃縮至原體積的40～50％左右，緩慢加入預(yù)冷酒精，使40％乙醇沉淀，用濃氨水調(diào)pH，靜止分層后，虹吸上清，加預(yù)冷醫(yī)用酒精，用冰醋酸調(diào)pH，靜止分層后，虹吸法吸棄上清，剩余的部分混濁液離心取沉淀。將此沉淀用生理鹽水溶起，透析，酒精沉淀，沉淀物置干燥器中負(fù)壓抽氣至干燥。本發(fā)明解決了現(xiàn)有獸用血促性素生產(chǎn)工藝存在的缺點(diǎn)，提高了獸用血促性素收率，保持純度在獸藥標(biāo)準(zhǔn)之上，并大幅降低了獸用血促性素生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1872088SQ20061001678
公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2006年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月21日
發(fā)明者譚建華, 萬(wàn)忠海, 崔青山 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所