專利名稱：：治療狗的關(guān)節(jié)炎狀況的方法
背景技術(shù)：
：骨關(guān)節(jié)炎(OA)是特征在于疼痛、軟骨損失和關(guān)節(jié)強(qiáng)直的退化性關(guān)節(jié)疾病。它是影響所有年齡的狗的常見疾病，然在老年動物中最普遍。它可以是原發(fā)疾病，即一般的磨損和撕裂的結(jié)果，或者是繼發(fā)性疾病，即損傷、感染、不愈合的骨折或發(fā)育異常的結(jié)果。髖關(guān)節(jié)發(fā)育疾病是狗的發(fā)育疾病，其中股骨頭和髖臼之間的畸形產(chǎn)生了關(guān)節(jié)不穩(wěn)定性，使得股骨頭過度運(yùn)動。這是狗中的常見狀況，特別是在大的品種中。確切的原因還不知道，但有遺傳因素。盡管該疾病可能是遺傳的，但缺陷的表達(dá)很大程度收到諸如營養(yǎng)、生長速度、肥胖和運(yùn)動的因素的影響。最初，觀察到髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良表現(xiàn)為關(guān)節(jié)緊密程度喪失，使得股骨頭圍繞髖臼球的運(yùn)動過度。在肢體中，關(guān)節(jié)半脫臼。隨著時(shí)間，這些異常的關(guān)節(jié)相互作用產(chǎn)生了覆蓋相對骨末端的關(guān)節(jié)軟骨的損傷和侵蝕。存在關(guān)節(jié)的疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)間隙變窄、骨質(zhì)象牙化(骨上的骨關(guān)節(jié))和結(jié)構(gòu)改變，包括髖臼變淺、股骨頭重塑和骨贅發(fā)生?？梢酝ㄟ^使用非甾體類抗炎藥以不同的效力控制與該疾病相關(guān)的疼痛。用鎮(zhèn)痛劑可以獲得更強(qiáng)的疼痛緩解。但是，這些治療純粹是緩解性的，不能防止骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。最終，必須考慮手術(shù)去除股骨頭或完全的髖關(guān)節(jié)置換，作為有效緩解疼痛的唯一治療。交叉韌帶的斷裂或損害通常是由于運(yùn)動中后腿膝關(guān)節(jié)的突然旋轉(zhuǎn)或過度伸展而發(fā)生的。這通常涉及前交叉韌帶，并且可能是非常疼痛的，并且涉及對關(guān)節(jié)的其它損傷。如果韌帶斷裂，其導(dǎo)致的關(guān)節(jié)不穩(wěn)定通常導(dǎo)致退化性關(guān)節(jié)改變，包括關(guān)節(jié)增厚、半月板軟骨退化、關(guān)節(jié)間隙變窄和關(guān)節(jié)周圍骨贅形成。如果診斷出交叉韌帶斷裂，則需要進(jìn)行穩(wěn)定關(guān)節(jié)的手術(shù)。在不進(jìn)行手術(shù)或手術(shù)不成功的狗中，容易發(fā)生慢性關(guān)節(jié)不穩(wěn)定，導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。用于治療髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的鎮(zhèn)痛劑的選擇適用于患有累及后腿膝關(guān)節(jié)的骨關(guān)節(jié)炎的狗。鎮(zhèn)痛劑緩解不適，但不治療原發(fā)病癥。發(fā)明概述本發(fā)明涉及引發(fā)對犬科動物中的關(guān)節(jié)炎狀況的疾病緩解作用的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明也涉及引發(fā)對犬科動物髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或后腿膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定、與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良相關(guān)的疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、髖臼變淺、軟骨下骨硬化的疾病緩解作用、預(yù)防犬科動物中骨贅形成和預(yù)防關(guān)節(jié)破壞的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及引發(fā)對犬科動物中關(guān)節(jié)炎狀況的疾病緩解作用的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及治療犬科動物中與十字韌帶破壞相關(guān)的髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或后腿膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定導(dǎo)致的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及治療與犬科動物中髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或后腿膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定相關(guān)的疼痛的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及減少犬科動物中關(guān)節(jié)腫脹的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及預(yù)防犬科動物中髖臼變淺的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及預(yù)防犬科動物中骨贅形成的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及治療犬科動物中軟骨下骨硬化的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及預(yù)防犬科動物中關(guān)節(jié)惡化的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明涉及引發(fā)對犬科動物中關(guān)節(jié)炎狀況的疾病緩解作用的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸和治療有效量的非甾體類抗炎藥。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含雙膦酸和非甾體類抗炎藥的藥物組合物?！咫p膦酸(bisphosphonate)″包括但不限于以下化學(xué)式的化合物其中n是0-7的整數(shù)，并且其中A和X獨(dú)立地選自H、0H、鹵素、NH2、SH、苯基、C1-C30烷基、C3-C30帶有支鏈的烷基或環(huán)烷基、含有兩個或三個N的雙環(huán)結(jié)構(gòu)、C1-C30取代的烷基、C1-C10烷基取代的NH2、C3-C10帶有支鏈的烷基或環(huán)烷基取代的NH2、C1-C10二烷基取代的NH2、C1-C10烷氧基、C1-C10烷硫基、苯硫基、鹵代苯硫基、C1-C10烷基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑并吡啶基和芐基，使得當(dāng)n是0時(shí)，A和X都不選自H或OH；或A和X與它們連接的碳原子一起形成C3-C10環(huán)。在前面的化學(xué)式中，烷基可以是直鏈的、帶有支鏈的或環(huán)狀的，前提是化學(xué)式選擇了足夠的原子。C1-C30取代的烷基可以包括多種取代基，非限定性的實(shí)例包括選自以下基團(tuán)的那些苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、NH2、C1-C10烷基或二烷基取代的NH2、OH、SH和C1-C10烷氧基。前述化學(xué)式也意欲包括復(fù)雜的碳環(huán)、芳族和雜原子結(jié)構(gòu)用于A和/或X取代基，其非限定性實(shí)例包括萘基、喹琳基、異喹琳基、金剛烷基和氯苯硫基。此處也可以使用雙膦酸的可藥用鹽和衍生物。鹽的非限定性實(shí)例包括選自下組的那些堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽和一、二、三或四C1-C30烷基取代的銨鹽。優(yōu)選的鹽是選自下組的那些鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和銨鹽。更優(yōu)選的是鈉鹽。衍生物的非限定性實(shí)例包括選自酯、水合物和酰胺的那些。應(yīng)當(dāng)指出的是，此處用到的涉及本發(fā)明的治療劑的術(shù)語“雙膦酸”也包括二膦酸鹽/酯、雙膦酸和二膦酸，以及這些物質(zhì)的鹽和衍生物。涉及雙膦酸的特定命名的使用不意欲限制本發(fā)明的范圍，除非特別指出。由于本領(lǐng)域技術(shù)人員目前使用的混合的命名系統(tǒng)，對本發(fā)明中雙膦酸化合物的特定重量或百分比是以酸活性重量為基礎(chǔ)，除非特別指出相反的意思。例如，“以阿侖膦酸(alendronicacid)活性重量為基礎(chǔ)，約5mg選自阿侖特羅(alendronate)、其可藥用鹽及其混合物的骨重吸收抑制性雙膦酸”表示選擇的雙膦酸化合物的選擇是基于5mg阿侖膦酸計(jì)算的。用于此處的雙膦酸的非限定性實(shí)例包括以下這些阿侖特羅，其也稱作阿侖膦酸、阿侖膦酸鈉或三水合阿侖膦酸一鈉、4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-雙膦酸和三水合4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-雙磷酸一鈉，其描述于1990年5月1日授權(quán)的Kieczykowski等的美國專利4,922,007，1991年5月28日授權(quán)的Kieczykowski等的5,019,651；1996年4月23日授權(quán)的Dauer等的5,510,517；1997年7月15日授權(quán)的Dauer等的5,648,491，在此全文引入作為參考。1990年11月13日授權(quán)的Isomura等的美國專利4,970,335中描述的環(huán)庚基氨基亞甲基-1，1-雙膦酸，即YM175，Yamanouchi(incadronate，以前稱作cimadronate)，在此全文引入該文獻(xiàn)作為參考。1，1-二氯亞甲基-1，1-雙膦酸(clodronicacid)和二鈉鹽(clodronate，ProcterandGamble)描述于比利時(shí)專利672,205(1966)和J.Org.Chem32，4111(1967)，在此全文引入這兩篇文獻(xiàn)作為參考。1-羥基-3-(1-吡咯烷基)-亞丙基-1，1-雙膦酸(EB-1053)。1-羥基乙烷-1，1-雙膦酸(etidronicacid)。1-羥基-3-(N-甲基-N-戊基氨基)亞丙基-1，1-雙膦酸，也稱作BM-210955，Boehringer-Mannheim(ibandronate)，描述于1990年5月22日授權(quán)的美國專利No.4,927,814，在此全文引入作為參考。1-羥基-2-咪唑并-(1，2-a)吡啶-3-基亞乙基(minodronate)。6-氨基-1-羥基亞己基-1，1-雙膦酸(neridronate)。3-(二甲基氨基)-1-羥基亞丙基-1，1-雙膦酸(olpadronate)。3-氨基-1-羥基亞丙基-1，1-雙膦酸(pamidronate)。-1，1-雙膦酸(piridronate)描述于美國專利4,761,406，在此全文引入作為參考。1-羥基-2-(3-吡啶基)-亞乙基-1，1-雙膦酸(risedronate)。描述于1989年10月24日授權(quán)的Breliere等的美國專利4,876,248中的(4-氯苯基)硫甲烷-1，1-雙膦酸(tiludronate)。1-羥基-2-(1H-咪唑-1-基)亞乙基-1，1-雙膦酸(zoledronate)。雙膦酸的非限定性實(shí)例包括阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate和zolendronate，及其可藥用鹽和酯。特別優(yōu)選的雙膦酸是阿侖特羅，特別是阿侖膦酸的鈉、鉀、鈣、鎂或銨鹽。示例的優(yōu)選的雙膦酸是阿侖膦酸的鈉鹽，特別是阿侖膦酸的水合鈉鹽?？梢杂谜麛?shù)摩爾的水或非整數(shù)摩爾的水對鹽進(jìn)行水合。優(yōu)選的雙膦酸的進(jìn)一步的示倒是阿侖膦酸的水合鈉鹽，特別是水合鹽是三水合阿侖膦酸一鈉。公知的是可以使用兩種或多種雙膦酸的混合物。定義“關(guān)節(jié)炎狀況”是指炎性病變限于關(guān)節(jié)的疾病，或指關(guān)節(jié)的任何炎性狀況?！瓣P(guān)節(jié)腫脹”是指關(guān)節(jié)外徑的擴(kuò)張，這是由于滲出到關(guān)節(jié)間隙或由于關(guān)節(jié)囊和周圍結(jié)構(gòu)的外部增厚?！绑y臼變淺”是指髖臼形狀的重塑，使得股骨頭正常情況下相對的杯的深度變淺，杯形狀變扁平。“關(guān)節(jié)間隙變窄”是指關(guān)節(jié)內(nèi)組成關(guān)節(jié)的相對骨之間的距離明顯減少。這是覆蓋骨的關(guān)節(jié)表面的軟骨厚度減少的的結(jié)果，該減少使得正常關(guān)節(jié)中骨彼此更接近。這里用到的“軟骨下骨硬化”是指軟骨下區(qū)域中骨密度和體積的增加。這里用到的“骨贅“是指位于關(guān)節(jié)邊緣的新形成的骨性結(jié)構(gòu)，它們的出現(xiàn)與骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展的晚期強(qiáng)相關(guān)。目前的假設(shè)是骨贅由活化的骨膜產(chǎn)生，導(dǎo)致新的軟骨向外正常，最終通過軟骨內(nèi)骨形成的過程變成骨。這里用到的“關(guān)節(jié)破壞”是指關(guān)節(jié)軟骨的破壞。術(shù)語“疾病緩解作用”是指可以減緩、延遲或防止疾病進(jìn)展的藥劑。例如，在骨關(guān)節(jié)炎的情況下，疾病緩解作用可以包括減緩軟骨的損失和防止骨贅形成。“非甾體類抗炎藥(NSAID)”是指限制炎癥形成的非甾體類治療藥物。NSAIDS的非限定性實(shí)例包括但不限于卡洛芬、依托度酸、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、萘普生和選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑(COX-2抑制劑)。COX-2抑制劑的非限定性實(shí)例包括塞來昔布、deracoxib、etoricoxib、firocoxib、lumaricoxib、parecoxib、洛芬昔布和valdecoxib。此處用到的術(shù)語“組合物”意欲包括含有指定量的指定成分的產(chǎn)品，以及通過將指定量的指定成分進(jìn)行組合而直接或間接得到的任何產(chǎn)品。此處用到的術(shù)語“治療有效量”表示研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床人員采用的在組織、系統(tǒng)、動物或人類中引起生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的活性化合物或藥劑的量。此處用到的疾病的“治療”包括預(yù)防疾病，即，在可能暴露于疾病或傾向于疾病，但還沒有經(jīng)歷或表現(xiàn)出疾病癥狀的犬科動物中導(dǎo)致不發(fā)生疾病的臨床癥狀；抑制疾病，即，使疾病的發(fā)展或其臨床癥狀停滯或減少；或緩解疾病，即，使疾病或其臨床癥狀消退。此處用到的術(shù)語“可藥用鹽”包括作為形成的無機(jī)或有機(jī)酸的本發(fā)明的化合物的常規(guī)無毒鹽。例如，常規(guī)無毒鹽包括衍生自無機(jī)酸，如鹽酸、硼酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的鹽，和從有機(jī)酸，如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、唾液酸、對氨基苯磺酸、2-乙氧基-苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸、三氟乙酸等制備的鹽。上述可藥用鹽和其它典型可藥用鹽的制備更全面描述于Bergetal.，″PharmaceuticalSalts，″J.Pharm.Sci.，1977661-19，在此全文引入作為參考。可以通過常規(guī)化學(xué)方法，從含有堿性或酸性部分的本發(fā)明的化合物合成本發(fā)明的化合物的可藥用鹽。通常，堿性化合物的鹽是通過離子交換色譜或通過將游離堿與合適的溶劑或溶劑的多種組合中的化學(xué)當(dāng)量或過量的所需成鹽無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)而制備的。類似地，酸性化合物的鹽是通過與合適的無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)而形成的。用途本發(fā)明的組合物和方法可以用于引發(fā)對關(guān)節(jié)炎狀況的疾病緩解作用，特別是用于引發(fā)對犬科動物的骨關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的疾病緩解作用，包括治療與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良相關(guān)的疼痛、減少關(guān)節(jié)腫脹和防止髖臼變淺、軟骨下骨重吸收、骨贅形成和最終關(guān)節(jié)惡化/破壞。本發(fā)明的方法在犬科動物中關(guān)節(jié)狀況的治療中具有出乎意料的疾病緩解作用。本發(fā)明的組合物可以以諸如片劑、膠囊(均包括持續(xù)釋放或控釋制劑)、丸劑、粉末、顆粒、酏劑、糊劑、酊劑、無菌溶液或懸浮液、糖漿、調(diào)味的咀嚼片(treats)和乳狀液等口服劑型施用。同樣，它也可以以靜脈內(nèi)(單次濃注或輸注)、腹膜內(nèi)、局部(如滴眼液)、鼻內(nèi)、吸入、皮下、肌內(nèi)或經(jīng)皮(如貼劑)形式、計(jì)量的氣溶膠或液體噴霧、滴、管形瓶、自動注射器裝置或栓劑施用，均采用制藥領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員公知的形式?？梢圆捎糜行У珶o毒量的所需組合物。組合物用于口服施用、腸胃外施用、鼻內(nèi)施用、舌下施用或直腸施用，或用于通過吸入或吹入施用。本發(fā)明的組合物的制劑可以方便地由本領(lǐng)域公知的方法實(shí)施，例如，如Remington′sPharmaceuticalSciences，17thed.，1995中所述。根據(jù)多種因素選擇利用本發(fā)明的組合物的劑量方案，所述因素包括受試者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況；要治療的狀況的嚴(yán)重程度；施用的途徑；受試者的腎和肝功能；和使用的特定化合物及其鹽。本領(lǐng)域的熟練獸醫(yī)或臨床醫(yī)生可以容易地確定預(yù)防、抵消或停滯所述狀況進(jìn)展的有效量的藥物并開出處方。有利地，可以通過每季度、每月、每周或每日給藥一次施用本發(fā)明的化合物，或者可以以每日兩次、三次或四次的分開的劑量施用全部的每日劑量。此外，可以通過局部使用合適的鼻內(nèi)載體以鼻內(nèi)形式施用本發(fā)明的化合物，或通過經(jīng)皮途徑，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的經(jīng)皮皮膚貼劑的形式施用本發(fā)明的化合物。為了以經(jīng)皮送遞系統(tǒng)的形式施用，定量施用當(dāng)然應(yīng)該是連續(xù)的，而不是通過劑量方案進(jìn)行的間斷施用。施用可以是每日單次施用，或可以每日兩次、三次或四次分開施用全部的每日劑量。此外，基于選擇用于施用的各個化合物的特性，施用可以是較不頻繁的，如每周、每兩周或每月。當(dāng)然，對于較不頻繁的施用，單位劑量當(dāng)然相應(yīng)地較大。雙膦酸的精確劑量將根據(jù)給藥方案、選擇的特定雙膦酸的口服效能、犬科動物的年齡、體型、性別和狀況、要治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，以及其它相關(guān)的醫(yī)學(xué)和物理因素而改變。對于犬科動物，雙膦酸的有效口服劑量通常是大約1.5-大約20,000μg/kg體重，優(yōu)選是大約10-大約10,000μg/kg體重。在替代的施用方案中，可以以除每日以外的間隔施用雙膦酸，例如，每周一次施用、每周兩次施用、兩周一次施用，和每月兩次施用。在每周一次的施用方案中，三水合阿侖膦酸一鈉的施用劑量是大約2.5mg/周-大約280mg/周。非限定性的劑量實(shí)例包括140mg/周和280mg/周。雙膦酸也可以每月施用、每6個月施用、每年施用，或更不頻繁地施用，參見WO01/97788(2001年12月27日公開)和WO01/89494(2001年11月29日公開)。根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，可能需要用雙膦酸和適于治療特定狀況的一種或多種其它藥理學(xué)活性劑的組合治療任何前述狀況。雙膦酸和其它藥理學(xué)活性劑可以是同時(shí)、序貫或組合施用于受試者。例如，本發(fā)明的化合物可以直接與其它活性劑組合使用，或它可以在施用其它活性劑之前、同時(shí)或之后施用。通常，用于所述組合的公知治療劑的目前可獲得的劑型是合適的。施用本發(fā)明的組合物并且實(shí)施本發(fā)明的方法，直到獲得需要的療效。能夠在本發(fā)明中有用的雙膦酸的鑒定可以由本領(lǐng)域公知的方法容易地確定，不需要過度的實(shí)驗(yàn)，如此處描述的測定。測定材料和方法骨關(guān)節(jié)炎模型和治療-所有的程序都是根據(jù)默克研究實(shí)驗(yàn)室中的實(shí)驗(yàn)動物護(hù)理和使用委員會指導(dǎo)進(jìn)行的。將95只20周齡的雄性Sprague-Dawley大鼠(Taconic，NJ)用于以下實(shí)驗(yàn)。在20周齡的雄性大鼠膝關(guān)節(jié)或7-10月齡的雄性NZ白兔中手術(shù)誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎(OA)模型。簡言之，用異氟烷麻醉動物。給右膝關(guān)節(jié)去毛，用碘酊消毒，通過內(nèi)側(cè)髕骨麻痹方法暴露。將髕骨外側(cè)脫位，將膝關(guān)節(jié)置于完全屈曲位。所有的手術(shù)程序都是用手術(shù)寸鏡進(jìn)行的。用微型剪刀切斷前交叉韌帶(ACL)。為了證實(shí)ACL的完全切斷，進(jìn)行Lachman檢測。手術(shù)后，用無菌鹽水溶液洗滌關(guān)節(jié)表面，用Vicryl4-0(Ethicon，Edinburgh，UK)，即一種可吸收的縫線和單絲4-0尼龍線(Ethicon，Edinburgh，UK)縫合關(guān)節(jié)囊和皮膚。在假手術(shù)中，在髕骨半脫位和鹽水洗滌后逐層關(guān)閉傷口。將鹽酸丁丙諾啡(0.1mg/kg)(Reckitt&ColmanProductsLtd.，Hull，England)作為鎮(zhèn)痛劑.在具有軟墊的塑料籠中使動物自由活動。通過皮下注射或口服給藥而施用測試化合物。在預(yù)防模式中，在手術(shù)前給藥于狗。在治療模式中，在手術(shù)后1或2周給藥。終點(diǎn)是組織學(xué)分析、組織形態(tài)測定和血清標(biāo)志物評估。在所有研究中，動物總是包括以下組ACL切斷和載體、ACLT和低和更高劑量的藥物、假手術(shù)和載體，以及假手術(shù)和高劑量的藥物。在手術(shù)后2周和10周用CO2處死動物。在兩個時(shí)間點(diǎn)，在尸體解剖前3天給大鼠注射10mg/kg鈣黃綠素。在一個獨(dú)立的研究中，相同組的動物接受假手術(shù)或ACLT手術(shù)，并且給予或不給予藥物治療，用于TGF-β測定。這些動物在手術(shù)后2周處死。大體形態(tài)學(xué)、組織制備和組織學(xué)-在右膝關(guān)節(jié)切斷術(shù)后，小心清潔股骨和脛骨，使其不帶有肌肉，在溶于磷酸緩沖液(PBS)的4％低聚甲醛(FisherScientific，NJ)中固定24小時(shí)。通過具有1∶4Nikkor透鏡(Nikon，Japan)的數(shù)碼相機(jī)(DIX，Nikon，Japan)攝下遠(yuǎn)端股骨的大體外觀，以便評估骨贅形成。然后用帶鋸(EXAKTTechnologies，Inc，Norderstedt，Germany)在關(guān)節(jié)表面的中心將脛骨切成額切面帶有內(nèi)側(cè)副韌帶的兩半。將前部重新浸入4％的低聚甲醛另外24小時(shí)，用于石蠟包埋。后部改為浸入70％的乙醇，然后用甲基丙烯酸甲酯包埋。按照以前的描述用Masson′strichrome染料對5μm厚的切片進(jìn)行染色，參見Gruber，H.E.，G.J.Marshall，L.M.Nolasco，M.E.Kirchen，andD.L.Rimoin，1988，″Alkalineandacidphosphatasedemonstrationinhumanboneandcartilageeffectsoffixationintervalandmethacrylateembedments，″StainTechnol.63299-306和Yamamoto，M.，J.E.Fisher，M.Gentile，J.G.Seedor，C.T.Leu，S.B.Rodan，andG.A.Rodan，1998，″Theintegrinligandechistatinpreventsbonelossinovariectomizedmiceandrats″Endocrinology.1391411-9。用隨機(jī)分配的標(biāo)示號標(biāo)記各個標(biāo)本，使研究者在后續(xù)的測量過程中不知道分組情況。為進(jìn)行石蠟包埋，在0.5M乙二次氮基-四乙酸溶液(pH7.6，F(xiàn)isherScientific，NJ)中對組織脫鈣7-10天，然后用分級的乙醇系列處理，隨后用二甲苯處理，然后按照以前的描述在石蠟(FisherScientific，NJ)中包埋，參見Nakase，T.，K.Takaoka，K.Hirakawa，S.Hirota，T.Takemura，H.Onoue，K.Takebayashi，Y.Kitamura，andS.Nomura，1994，″Alterationsintheexpressionofosteonectin，osteopontinandosteocalcinmRNAsduringthedevelopmentofskeletaltissuesinvivo，″BoneMiner.26109-22和Hayami，T.，N.Endo，K.Tokunaga，H.Yamagiwa，H.Hatano，M.Uchida，andH.E.Takahashi，2000，″Spatiotemporalchangeofratcollagenase(MMP-13)mRNAexpressioninthedevelopmentoftheratfemoralneck，″JBoneMinerMetab.18185-93。對石蠟包埋的標(biāo)本進(jìn)行切片，通過組織學(xué)分析和免疫組織化學(xué)進(jìn)行檢驗(yàn)。用甲苯胺藍(lán)-O(0.2％甲苯胺藍(lán)-O/0.1M乙酸鈉緩沖液，pH4.0)對石蠟切片進(jìn)行染色，檢測蛋白聚糖成分。有時(shí)也按照以前的描述用抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)染料對切片進(jìn)行染色，以對破骨細(xì)胞進(jìn)行定位，參見Nakamura，Y.，A.Yamaguchi，T.Ikeda，andS.Yoshiki，1991，″Acidphosphataseactivityisdetectedpreferentiallyintheosteoclasticlineagebypre-treatmentwithcyanuricchloride，″JHistochemCytochem.391415-20。組織病理學(xué)評分(改進(jìn)的Mankin評分)-根據(jù)改進(jìn)的Mankin評分系統(tǒng)進(jìn)行半定量的組織病理學(xué)分級，該系統(tǒng)是OA研究中確立的分級系統(tǒng)，進(jìn)行了一些修改，參見Cake，M.A.，R.A.Read，B.Guillou，andP.Ghosh，2000，″Modificationofarticularcartilageandsubchondralbonepathologyinanovinemeniscectomymodelofosteoarthritisbyavocadoandsoyaunsaponifiables(ASU)，″OsteoarthritisCartilage.8404-11；Little，C.，S.Smith，P.Ghosh，andC.Bellenger，1997，″Histomorphologicalandimmunohistochemicalevaluationofjointchangesinamodelofosteoarthritisinducedbylateralmeniscectomyinsheep，″JRheumatol.242199-209；Wenz，W.，S.J.Breusch，J.Graf，andU.Stratmann，2000，″Ultrastructuralfindingsafterintraarticularapplicationofhyaluronaninacaninemodelofarthropatby，″JOrthopRes.18604-12。Mankin評分通常由5個亞類組成，包括結(jié)構(gòu)、軟骨細(xì)胞數(shù)、軟骨細(xì)胞簇集、蛋白聚糖成分(甲苯胺藍(lán)-O的染色能力)和軟骨下板和/或包括軟骨中血管侵入的標(biāo)志性改變。由于血管在軟骨中的侵入是用Masson′strichrome染色獨(dú)立評估的，我們在Mankin評分中省略了該類。在每個樣品中測量了距離100μm的三個切片?？偟目赡艿脑u分是26，采用盲法，根據(jù)5分標(biāo)準(zhǔn)(Cakeetal.2000)由單個觀察者進(jìn)行評分。總分低與微小的退化性軟骨病變一致，而總分高表明更顯著的軟骨區(qū)。在甲苯胺藍(lán)-O染色能力方面，我們使用了以前描述的術(shù)語(Little，etal.1997)，當(dāng)甲苯胺藍(lán)-O染色減少，具有完整的關(guān)節(jié)表面時(shí)是“輕度”，當(dāng)甲苯胺藍(lán)-O染色減少，并且表面纖維化和裂縫延伸到但不到中區(qū)下時(shí)是“中度”，當(dāng)軟骨向下?lián)p失到鈣化軟骨的水平時(shí)是“重度”。骨組織形態(tài)測定法-為了定量組織學(xué)參數(shù)，我們采用了ImageProplus(第4版，MediaCybernetics，MD)圖像分析程序。用帶有×4物鏡的Olympus熒光顯微鏡(BX51，Japan)檢驗(yàn)關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的圖像，用CCD/RGB彩色攝像機(jī)(RTSliderSPOT，Diagnosticinstrument.Inc.，MI)記錄。在每個膝關(guān)節(jié)兩個距離100μm的獨(dú)立切片中確定內(nèi)側(cè)和外側(cè)脛骨坪的組織形態(tài)測定法測量值。由于報(bào)道軟骨下區(qū)在OA發(fā)展中受影響，我們開發(fā)了宏觀方法測量每個組織區(qū)域的軟骨下骨體積。測量來自內(nèi)側(cè)或外側(cè)脛骨坪的600μm深×800μm寬的兩個區(qū)域，其中根據(jù)脛骨表面的寬度半自動化確定脛骨坪的中心。為了一致地放置要測量的區(qū)域，矩形的頂端總是沿著關(guān)節(jié)軟骨的表面水平排列，其側(cè)面沿著脛骨中線垂直排列。合并來自內(nèi)側(cè)或外側(cè)脛骨坪的兩個區(qū)域的數(shù)據(jù)，在每組中對每組6個膝關(guān)節(jié)的測量值求平均值。通過組織形態(tài)測定法測量軟骨下區(qū)中的骨小粱體積(BV/TV骨內(nèi)膜骨和骨樣和礦化骨占據(jù)的骨髓腔的百分比)，該方法遵照命名法，并且根據(jù)ASBMR指南進(jìn)行計(jì)算，參見Parfitt，A.M.，M.K.Drezner，F(xiàn).H.Glorieux，J.A.Kanis，H.Malluche，P.J.Meunier，S.M.Ott，andR.R.Recker，1987，″Bonehistomorphometrystandardizationofnomenclature，symbols，andunits，″ReportoftheASBMRHistomorphometryNomenclatureCommittee.JBoneMinerRes.2595-610。為了檢測軟骨下區(qū)的活性骨重塑表面，我們也在尸體解剖前3天給大鼠注射鈣黃綠素(10mg/kg)。塑料切片中的標(biāo)記的礦化表面可以按照上文所述用相同的Olympus熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。鈣化軟骨中的血管侵入-按照以前的描述，對鈣化軟骨接觸軟骨下骨髓腔的次數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而對鈣化軟骨中的血管侵入進(jìn)行定量，參見O′Connor，K.M.，1997，″Unweightingacceleratestidemarkadvancementinarticularcartilageatthekneejointofrats，″JBoneMinerRes.12580-9。測量間隔100μm的兩個切片的結(jié)果。破骨細(xì)胞評分-在鈣化軟骨和骨贅區(qū)對TRAP陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。測量來自每個樣品的間隔100μm的兩個切片的TRAP陽性細(xì)胞數(shù)，然后取每組6個膝關(guān)節(jié)的平均數(shù)。骨贅評分和面積-骨贅定義為脛骨坪中關(guān)節(jié)邊緣發(fā)生的骨和軟骨的向外生長。為了評估骨贅形成的事件(骨贅評分)，評估了來自每個膝關(guān)節(jié)的間隔100μm的5個切片的總骨贅數(shù)，其中包括3個石蠟切片(脛骨的前部)和2個塑料切片(脛骨的后部)。用圖像分析人工確定Masson′strichrome染色的切片中每個骨贅的表面積。評估了間隔100μm的兩個切片。COMP、CTX-I和CTX-II的血清-和尿水平-在手術(shù)后2周和10周，從每次尸體解剖的心臟穿刺獲得血液。收集血清樣品，在-70℃以等分物冷凍。按照以前描述的改進(jìn)的酶聯(lián)免疫吸附測定，通過AnaMarMedicalAB(Uppsala，Sweden)確定血清軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)，參見Larsson，E.，A.Mussener，D.Heinegard，L.Klareskog，andT.Saxne，1997，″Increasedserumlevelsofcartilageoligomericmatrixproteinandbonesialoproteininratswithcollagenarthritis，″BrJRheumatol.361258-61和Saxne，T.，andD.Heinegard，1992，″Cartilageoligomericmatrixproteinanovelmarkerofcartilageturnoverdetectableinsynovialfluidandblood，″BrJRheumatol.31583-91。所有測定都進(jìn)行雙份。在手術(shù)后2周從各個動物的代謝籠中收集24小時(shí)尿樣。離心樣品，在-70℃以等分物冷凍。根據(jù)制造商的說明書，在我們的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行來自I型膠原的C末端端肽的骨相關(guān)降解產(chǎn)物的測定(CTX-I/Ratlaps，NordicBioscienceDiagnostics，Denmark).由NordicBioscienceDiagnostics，Denmark進(jìn)行II型膠原的軟骨相關(guān)C末端端肽的測定(CTX-II/CartiLaps)。測量每個樣品的尿肌酸酐作為正常尿排出的測試。在針對樣品中的肌酸濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后，報(bào)道CTX-I和CTX-II值。免疫組化-在二甲苯中對組織切片進(jìn)行脫石蠟，在分級乙醇中水合，然后用500U/ml睪丸透明質(zhì)酸酶(Sigma，MO)在37℃處理20分鐘。然后按照以前的描述用抗大鼠CD31mAb(Endogen，MA)或僅僅識別活性形式的TGF-β1、2和3的抗活化TGF-β(R&D)溫育組織切片，參見Fernandez，T.，S.Amoroso，S.Sharpe，G.M.Jones，V.Bliskovski，A.Kovalchuk，L.M.Wakefield，S.J.Kim，M.Potter，andJ.J.Letterio，2002，″Disruptionoftransforminggrowthfactorbetasignalingbyanovelligand-dependentmechanism，″JExpMed.1951247-55，按照以前的描述用抗MMP-13Ab、抗MMP-9Ab在4℃溫育過夜，參見Hayami，T.，H.Funaki，K.Yaoeda，K.Mitui，H.Yamagiwa，K.Tokunaga，H.Hatano，J.Kondo，Y.Hiraki，T.Yamamoto，L.T.Duong，andN.Endo，2003，″Expressionofthecartilage-derivedanti-angiogenicfactorChondromodulin-Idecreasesintheearlystageofexperimentalosteoarthritis，″J.Rheumatol.(出版中)。在CD31免疫染色中，在含有0.3％Tween20的PBS中漂洗后，用生物素偶聯(lián)的抗小鼠Ab(LSAB2試劑盒，Dako，CA)將其溫育10分鐘，然后用堿性磷酸酶偶聯(lián)的鏈親和素(Dako，CA)溫育10分鐘。用PBS漂洗這些切片，然后用fastred底物系統(tǒng)(Dako，CA)顯色5分鐘，用蘇木精復(fù)染。按照以前的描述用MMP-9/MMP-13和TGF-βAbs進(jìn)行雙標(biāo)記的免疫組化染色，參見Hayami，T.，H.Funaki，K.Yaoeda，K.Mitui，H.Yamagiwa，K.Tokunaga，H.Hatano，J.Kondo，Y.Hiraki，T.Yamamoto，L.T.Duong，andN.Endo，2003，″Expressionofthecartilage-derivedanti-angiogenicfactorChondromodulin-Idecreasesintheearlystageofexperimentalosteoarthritis，″J.Rheumatol.(出版中)。簡言之，用TGF-βmAb溫育組織切片，然后用AP偶聯(lián)的抗小鼠Ab溫育，用AP藍(lán)(VectorLaboratories，CAUSA)顯色為藍(lán)色。用含有0.3％Tween20的PBS將其清洗兩次，用抗MMP-9或MMP-13多克隆Ab溫育，然后用HRP-抗兔Ab(DAKO，CA)溫育，由0.5mg/ml四鹽酸3，3′-二氨基聯(lián)苯胺顯色為棕色。作為陰性對照，在沒有第一抗體的條件下，或使用小鼠mAbIgG代替第一抗體進(jìn)行相同的程序。來自脛骨坪/髕骨器官培養(yǎng)物的上清液中TGF-β的貂肺上皮生長抑制測定-從采用或不采用藥物治療的ACLT或假手術(shù)關(guān)節(jié)分離髕骨和脛骨坪。對髕骨進(jìn)行脫位和解剖后，小心除去脛骨的軟組織。通過骨鋸(BuehlerIsomet，IL)在距離關(guān)節(jié)表面480μm厚度的位置切下關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨組織。將解剖的髕骨和脛骨坪轉(zhuǎn)移到24孔培養(yǎng)皿，用0.1％BSAα-MEM清洗3次，然后在相同的培養(yǎng)基中37℃下在5％CO2中溫育。收集溫育12小時(shí)后的上清液，在-70℃下冷凍。按照以前的描述，通過貂肺上皮細(xì)胞生物測定測量活性TGF-β，參見Docagne，F(xiàn).，N.Colloc′h，V.Bougueret，M.Page，J.Paput，M.Tripier，P.Dutartre，E.T.MacKenzie，A.Buisson，S.Komesli，andD.Vivien，2001，″Asolubletransforminggrowthfactor-beta(TGF-beta)typeIreceptormimicsTGF-betaresponses，″JBiolChem.27646243-50。簡言之，將貂肺細(xì)胞(Mv1Lu，ATCC，MD)以10,000細(xì)胞/孔鋪板于96孔CytoStar閃爍微量滴定板(Amersham，NJ)中的含有丙酮酸鈉和非必須氨基酸的E-MEM，10％FBS中。24小時(shí)后，在α-MEM(1∶4)中將TGF-β稀釋到終濃度，將50μl加入作為對照的雙份孔中，然后加入條件培養(yǎng)基(50μl/孔)。20小時(shí)后，將[14C甲基]-胸苷加入每個孔，達(dá)到0.5μCi/ml的最終稀釋度。4小時(shí)和24小時(shí)后對板進(jìn)行計(jì)數(shù)。報(bào)道的數(shù)據(jù)來自24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析-用Statview(SASInstituteInc.，NC)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。表1-3的所有數(shù)據(jù)表示為平均值±SD。結(jié)果表示為平均值±SEM。用單因素方差分析(ANOVA)評估組間差異的顯著性，以分析跨治療組的方差，用Fisber′s最小顯著性差異分析(Fisher′sPLSD)比較治療組平均值(除特別指明之處)。當(dāng)P值＜0.05時(shí)，認(rèn)為數(shù)值的差異是顯著的。實(shí)施例以下實(shí)施例進(jìn)一步描述和證明了本發(fā)明范圍內(nèi)的實(shí)施方案。實(shí)施例僅僅是為了說明目的而給出的，不解釋為限制本發(fā)明，因?yàn)榭梢詫ζ溥M(jìn)行許多變化，而不離開本發(fā)明的精神和范圍。藥片組合物按照1994年10月25日授權(quán)的Bechard等的美國專利No.5,358,941的描述，用標(biāo)準(zhǔn)混合和成形技術(shù)制備藥片，在此全文引入該文獻(xiàn)作為參考。用以下相對重量的成分制備以活性阿侖膦酸為基礎(chǔ)的含大約6.5mg三水合阿侖膦酸一鈉的藥片。得到的藥片可以用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的犬科動物中與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或交叉韌帶破壞相關(guān)的骨關(guān)節(jié)炎，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的藥片。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的藥片如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的藥片。非基于牛肉的咀嚼片(ChewableTreats)得到的咀嚼片用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的狗中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的咀嚼片。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的咀嚼片如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的咀嚼片。懸浮液得到的懸浮液用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的懸浮液。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的懸浮液如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的懸浮液。溶液得到的溶液用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的溶液。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的溶液如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的溶液。油膏得到的油膏用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的油膏。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的油膏如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的油膏。凝膠得到的凝膠用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的凝膠。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的凝膠如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的凝膠。糊劑得到的糊劑用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的糊劑。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的糊劑如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的糊劑。用于經(jīng)皮送遞的組合物得到的組合物用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的組合物。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的組合物如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的組合物。用于經(jīng)皮送遞的組合物(皮膚貼劑)得到的組合物用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的組合物。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的組合物如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的組合物。注射液(IV/IM，SC/IP)得到的注射液用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的注射液。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的注射液如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的注射液。得到的組合物用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的組合物。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的組合物如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的組合物。持續(xù)釋放藥片得到的藥片用于根據(jù)本發(fā)明的方法施用，用于抑制有需要的哺乳動物中的骨關(guān)節(jié)炎病變，即，對其進(jìn)行治療或降低其風(fēng)險(xiǎn)。類似地，制備了包含阿侖膦酸活性重量基礎(chǔ)上的其它相對重量的阿侖特羅的藥片。也類似地制備了包含合適活性水平的其它雙膦酸的藥片如cimadronate、ibandronate、neridronate、olpandronate、risedronate、piridronate、pamidronate、zolendronate及其可藥用鹽。此外，類似地制備了包含雙膦酸的組合的藥片。除了上文舉例說明的成分，在必要時(shí)，制劑也可以包含其它合適的緩沖劑、色素、分散劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。權(quán)利要求1.治療狗中由犬科動物中髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或交叉韌帶破壞相關(guān)的關(guān)節(jié)不穩(wěn)定導(dǎo)致的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽。4.治療犬科動物中與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的方法，所述骨關(guān)節(jié)炎與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或交叉韌帶破壞相關(guān)，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、ciodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽。7.減少犬科動物中關(guān)節(jié)腫脹的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽。10.預(yù)防犬科動物的髖關(guān)節(jié)中髖臼變淺的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽。13.防止犬科動物的髖關(guān)節(jié)或后腿膝關(guān)節(jié)中骨贅形成的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽。16.治療犬科動物中與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或交叉韌帶破壞相關(guān)的骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給哺乳動物施用治療有效量的雙膦酸和非甾體類抗炎劑。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅、cimadronate、clodronate、etidronate、ibandronate、incadronate、minodronate、neridronate、olpadronate、pamidronate、piridronate、risedronate、tiludronate、zolendronate或其組合；并且所述非甾體類抗炎劑是卡洛芬、依托度酸、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、萘普生、塞來昔布、deracoxib、etoricoxib、firocoxib、lumaricoxib、parecoxib、洛芬昔布或valdecoxib。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽，并且所述非甾體類抗炎劑是洛芬昔布。19.權(quán)利要求17的方法，其中所述雙膦酸是阿侖特羅或其可藥用鹽，并且所述非甾體類抗炎劑是firocoxib。全文摘要本發(fā)明涉及引發(fā)對犬科動物的髖關(guān)節(jié)或后腿膝關(guān)節(jié)中的關(guān)節(jié)炎狀況的疾病緩解作用的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。本發(fā)明也涉及引發(fā)對犬科動物中髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或后腿膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定、與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良或后腿膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定相關(guān)的疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、髖臼變淺、關(guān)節(jié)間隙變窄、軟骨下骨硬化的疾病緩解作用、預(yù)防犬科動物中骨贅形成和預(yù)防關(guān)節(jié)破壞的方法，該方法包括給犬科動物施用治療有效量的雙膦酸。文檔編號A61K31/185GK1964715SQ200580014490公開日2007年5月16日申請日期2005年5月3日優(yōu)先權(quán)日2004年5月6日發(fā)明者D·湯森,P·漢森申請人:默克公司,默里爾有限公司