專利名稱：一種銀杏內(nèi)酯及其藥物制劑的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種銀杏內(nèi)酯及其藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，具體地說，是涉及從銀杏葉提取的二萜內(nèi)酯--銀杏內(nèi)酯A、B、C及倍半萜內(nèi)酯--白果內(nèi)酯的銀杏內(nèi)酯及其制劑的含量測定方法。
背景技術(shù)：
銀杏葉提取物及其制劑在發(fā)達(dá)國家已經(jīng)應(yīng)用了幾十年，在我國也于近年來得到廣泛應(yīng)用，已取得藥品生產(chǎn)批準(zhǔn)文號的藥廠有20余家。銀杏葉提取物制劑在歐洲作為藥用，在美國、日本作為保健品，在我國主要作藥用。
目前，國內(nèi)外對銀杏葉提取物及其制劑的研究非常廣泛。在我國，銀杏葉及其制劑廣泛用于治療心腦血管疾病，銀杏提取物中有效成分為銀杏萜內(nèi)酯和銀杏黃酮。而內(nèi)酯類含多種二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯，主要的二萜內(nèi)酯有銀杏內(nèi)酯A、B、C、M等，倍半萜內(nèi)酯有白果內(nèi)酯(Bilobalide)，主要用于治療冠心病、心絞痛、老年癡呆癥等疾病。本文所述的銀杏內(nèi)酯主要指二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯。實(shí)驗(yàn)證明銀杏內(nèi)酯有其獨(dú)特的藥理作用和臨床價值。
銀杏提取物中銀杏內(nèi)酯的含量測定文獻(xiàn)報道的有薄層色譜法，高效液相-示差折光檢測器法，氣相—質(zhì)譜法，液相—質(zhì)譜法，核磁共振法。而目前藥典收載的銀杏內(nèi)酯的含量測定方法為高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器法。但這些方法都各有其局限性。薄層色譜法重現(xiàn)性差，受環(huán)境和操作影響大，而氣相—質(zhì)譜法需衍生化，設(shè)備昂貴。差示折光檢測器，為通用型檢測器，但其對溫度等外界因素響應(yīng)過于靈敏，重現(xiàn)性和檢測靈敏度差。液相—質(zhì)譜和核磁共振法法則受條件限制。
蒸發(fā)光檢測器測定銀杏內(nèi)酯含量時，進(jìn)樣量和峰面積不成線性，所以采用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行銀杏內(nèi)酯含量計(jì)算。計(jì)算步驟繁多、復(fù)雜。用此法得到的數(shù)據(jù)不夠精確，圖譜基線噪音大，易漂移，峰形不好。并且蒸發(fā)光檢測器儀器的使用并不廣泛，價格昂貴。此種檢測方法僅適合銀杏葉粗提物或者提取物純度不高的情況使用。
由于以前從銀杏葉中提取的銀杏內(nèi)酯含量低等原因，使用高效液相-紫外檢測器法測定銀杏內(nèi)酯含量時受黃酮等其它提取物的干擾較強(qiáng)，使得采用此法受到一定的局限，因此一般都采用高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器測定其含量，并收載入藥典，是目前公認(rèn)最好的銀杏內(nèi)酯制劑的質(zhì)量檢測方法。
我們在研究過程中驚奇地發(fā)現(xiàn)，提取的銀杏內(nèi)酯其銀杏內(nèi)酯純度高達(dá)95％以上，采用高效液相-紫外光檢測器法非常合適。用紫外檢測器對銀杏內(nèi)酯含量進(jìn)行檢測時，幾乎無受黃酮干擾，并且大大簡化了計(jì)算方法，并且數(shù)據(jù)精確。采用本發(fā)明方法所得圖譜，柱效高，分離度好，峰形對稱性好并且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，操作簡便可行。紫外檢測器應(yīng)用廣泛，價格比蒸發(fā)光檢測器低廉。
本發(fā)明進(jìn)一步推動了銀杏內(nèi)酯分析方法研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善，并為工業(yè)化生產(chǎn)節(jié)約了成本和人力，是值得推廣的簡便易行的好方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是基于蒸發(fā)光檢測器測定銀杏內(nèi)酯含量(收載于《中華人民共和國藥典2005年版一部》)計(jì)算方法繁雜并且數(shù)據(jù)不夠精確而發(fā)明的，目的在于提供一種簡單易行，易于推廣的銀杏內(nèi)酯的含量測定方法。本發(fā)明利用紫外檢測器這一應(yīng)用廣泛的檢測器替代蒸發(fā)光檢測器，節(jié)約了成本和人力，而且利用該檢測手段，得到的數(shù)據(jù)精確，計(jì)算方法簡便可行，為銀杏內(nèi)酯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了一種優(yōu)選的方法。
實(shí)施本發(fā)明步驟如下1、色譜條件以C18柱為色譜柱；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動相；檢測波長為220nm；理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；峰分離度按銀杏內(nèi)酯C峰和白果內(nèi)酯峰計(jì)應(yīng)不小于1.5。
2、對照品溶液的制備精密稱取銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品、銀杏內(nèi)酯C對照品、白果內(nèi)酯對照品適量，加50％甲醇溶解并稀釋制成每1ml約含1.8mg、0.8mg、1.0mg、2.0mg的混合液，即得。
3、供試品溶液的制備取銀杏內(nèi)酯或者制劑，制成每1ml中約含5mg銀杏內(nèi)酯的溶液，作為供試品溶液；4、測定方法分別精密量取對照品溶液、供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算銀杏內(nèi)酯含量。
供試品高效液相色譜圖見附圖


I表示銀杏內(nèi)酯CII表示白果內(nèi)酯III表示銀杏內(nèi)酯AIV表示銀杏內(nèi)酯B采用本發(fā)明方法所得圖譜，柱效高，分離度好，峰形對稱性好。
具體實(shí)施例以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不對本發(fā)明的范圍加以限制。
實(shí)例1銀杏內(nèi)酯提取物含量測定色譜條件以Kromasil的C18柱為色譜柱；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動相；檢測波長為220nm；理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；峰分離度按銀杏內(nèi)酯C峰和白果內(nèi)酯峰計(jì)應(yīng)不小于1.5。
供試品溶液得制備精密稱取銀杏內(nèi)酯適量，用流動相溶解并制成每1ml含5mg銀杏內(nèi)酯的溶液，作為供試品溶液；對照品溶液得制備精密稱取銀杏內(nèi)酯A18.12mg、銀杏內(nèi)酯B8.31mg、銀杏內(nèi)酯C10.48mg和白果內(nèi)酯19.46mg，置10ml量瓶中，加適量50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到每ml含銀杏內(nèi)酯A1.81mg、銀杏內(nèi)酯B0.83mg銀杏內(nèi)酯C1.05mg、白果內(nèi)酯1.95mg的對照品溶液；測定方法精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，用外標(biāo)法計(jì)算銀杏內(nèi)酯含量，即得。
實(shí)例2銀杏內(nèi)酯注射液含量測定色譜條件以Kromasil的C18柱為色譜柱；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動相；檢測波長為220nm；理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；峰分離度按銀杏內(nèi)酯C峰和白果內(nèi)酯峰計(jì)應(yīng)不小于1.5。
供試品溶液得制備銀杏內(nèi)酯注射液規(guī)格為10mg/2ml，精密量取該注射液1ml，作為供試品溶液；對照品溶液的制備精密稱取銀杏內(nèi)酯A8.80mg、銀杏內(nèi)酯B4.15mg、銀杏內(nèi)酯C4.90mg和白果內(nèi)酯10.05mg，置5ml量瓶中，加適量甲醇溶解并用流動相稀釋至刻度，搖勻，得到每ml含銀杏內(nèi)酯A1.76mg、銀杏內(nèi)酯B0.83mg銀杏內(nèi)酯C0.98mg、白果內(nèi)酯2.01mg的對照品溶液；測定方法精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，用外標(biāo)法計(jì)算銀杏內(nèi)酯含量，即得。
實(shí)例3注射用銀杏內(nèi)酯含量測定色譜條件以Kromasil的C18柱為色譜柱；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動相；檢測波長為220nm；理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；峰分離度按銀杏內(nèi)酯C峰和白果內(nèi)酯峰記應(yīng)不小于1.5。
供試品溶液的制備精密稱取注射用銀杏內(nèi)酯平均裝量下的內(nèi)容物適量，用流動相溶解并制成每1ml含5mg的銀杏內(nèi)酯溶液，作為供試品溶液；對照品溶液得制備精密稱取銀杏內(nèi)酯A18.37mg、銀杏內(nèi)酯B8.14mg、銀杏內(nèi)酯C10.32mg和白果內(nèi)酯20.48mg，置10ml量瓶中，加適量50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到每ml含銀杏內(nèi)酯A1.84mg、銀杏內(nèi)酯B0.81mg銀杏內(nèi)酯C1.03mg、白果內(nèi)酯2.05mg的對照品溶液；測定方法精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，用外標(biāo)法計(jì)算銀杏內(nèi)酯含量，即得。
權(quán)利要求
1.一種銀杏內(nèi)酯的含量測定方法，其特征在于用高效液相—紫外檢測器法測定銀杏內(nèi)酯的含量。
2.一種含銀杏內(nèi)酯的藥物制劑的含量測定方法，其特征在于，用高效液相—紫外檢測器法測定銀杏內(nèi)酯的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含銀杏內(nèi)酯的藥物制劑的含量測定方法，其特征在于，含銀杏內(nèi)酯制劑，包括非腸道給藥形式的注射液、外用制劑、鼻腔給藥、腸道給藥形式的膠囊劑、片劑、滴丸劑；其中非腸道給藥形式的注射液包括粉針、小針、大輸液，外用制劑包括軟膏、乳劑、栓劑、膜劑、透皮制劑，腸道給藥形式的膠囊劑包括軟膠囊、硬膠囊，片劑包括舌下含片、口崩片、分散片、泡騰片、緩釋片、控釋片。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用高效液相一紫外檢測器法測定銀杏內(nèi)酯及其藥物制劑含量的測定方法，該方法操作和計(jì)算簡單，使用本發(fā)明方法能節(jié)約人力從而節(jié)約成本，有助于完善銀杏內(nèi)酯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
文檔編號A61J1/00GK1804614SQ200510135340
公開日2006年7月19日 申請日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者孫毅 申請人:孫毅