專利名稱：一種綠原酸鎂藥物組合物及其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種綠原酸鎂藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
綠原酸是中藥金銀花的有效成分，含量較高，臨床上金銀花的制劑主要用于抗菌消炎。一般用于復方制劑中，單方使用的主要是口服，其藥效起效慢，生物利用度低，制備工藝也較復雜。由經(jīng)典藥材金銀花中進一步開發(fā)出新型制劑，探索由金銀花得到新型制劑的醫(yī)藥用途，對于綜合有效使用中藥寶庫和開發(fā)新型藥物有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種綠原酸鎂組合物，本發(fā)明的另一個目的是提供綠原酸鎂組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種綠原酸鎂藥物組合物，包含有綠原酸鎂、異綠原酸鎂、綠原酸，其中綠原酸鎂的含量在90％以上。
綠原酸含量優(yōu)選95％以上。
本發(fā)明所述的綠原酸鎂藥物組合物是通過以下步驟實現(xiàn)的1)金銀花打成粗粉，8-12倍量去離子水提取2次，提取液合并過濾后濃縮至3g生藥/ml，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75-80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h；2)取上清液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml，充分攪拌下加入5倍量去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10，置冷庫中靜置過夜；3)冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂(大孔吸附樹脂可以是AB-8、D101、HPD300或ADS-8樹脂)，用1倍量床體積的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液；4)萃取液回收乙酸乙酯剩余一半體積，加入等體積的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂溶液至pH值至10-12，分離出水相，再用氫氧化鎂水液萃取一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。
本發(fā)明還提供了一種綠原酸鎂藥物組合物的制劑，是由綠原酸鎂組合物和相應劑型的藥學上可接受的藥用輔料組成的，可以是注射液、凍干粉、片劑、膠囊或軟膠囊。優(yōu)選注射液或凍干粉。
通過實驗我們驗證了綠原酸鎂藥物組合物在制備抗病毒藥物方面的應用。
通過實驗我們還驗證了綠原酸鎂藥物組合物在制備治療心腦血管疾病藥物方面的應用。
通過本發(fā)明我們成功地開發(fā)出綠原酸鎂組合物，并找到了該組合物的制備方法，所得到的組合物工藝重現(xiàn)性好，質(zhì)量可控，安全穩(wěn)定。藥理實驗證明綠原酸鎂組合物具有更好的抗菌消炎作用，并且對于心腦血管疾病有治療作用，尤其可以用于心腦血管缺血性再灌注損傷的保護。
具體實施例實施例1綠原酸鎂藥物組合物的制備取6kg金銀花打成粗粉，加入54L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔15分鐘翻動一次，放出得第一次提取液；藥渣再加入54L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔半小時翻動一次，得第二次提取液。合并兩次提取液濃縮至3g生藥/ml(2000ml)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h。冷藏液過濾，續(xù)濾液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml(1500ml)，充分攪拌下加入7500ml去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10(實測值9.9)，置冷庫中靜置過夜。冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂(AB-8樹脂，天津市南開大學化工廠，床體積BV＝5000ml)，用1倍量床體積(5000ml)的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2(實測值1.2)，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液2000ml。萃取液回收乙酸乙酯至1000ml，加入1000ml的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂飽和溶液至pH值至10-12(實測值10.8)，靜置分層，分離出水相，重復上述氫氧化鎂萃取操作一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。樣品編號lysm-1。
實施例2綠原酸鎂組合物的制備取6kg金銀花打成粗粉，加入60L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔15分鐘翻動一次，放出得第一次提取液；藥渣再加入60L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔半小時翻動一次，得第二次提取液。合并兩次提取液濃縮至3g生藥/ml(2000ml)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h。冷藏液過濾，續(xù)濾液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml(1500ml)，充分攪拌下加入7500ml去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10(實測值9.2)，置冷庫中靜置過夜。冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂(D101樹脂，天津市農(nóng)藥廠生產(chǎn)，床體積BV＝5000ml)，用1倍量床體積(5000ml)的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2(實測值1.5)，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液2000ml。萃取液回收乙酸乙酯至1000ml，加入1000ml的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂飽和溶液至pH值至10-12(實測值11.2)，靜置分層，分離出水相，重復上述氫氧化鎂萃取操作一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。樣品編號lysm-2。
實施例3綠原酸鎂藥物組合物的制備取6kg金銀花打成粗粉，加入66L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔15分鐘翻動一次，放出得第一次提取液；藥渣再加入66L去離子水加熱至80℃，溫浸提取2h，每隔半小時翻動一次，得第二次提取液。合并兩次提取液濃縮至3g生藥/ml(2000ml)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h。冷藏液過濾，續(xù)濾液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml(1500ml)，充分攪拌下加入7500ml去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10(實測值9.5)，置冷庫中靜置過夜。冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂(HPD-300樹脂，滄州寶恩化工廠，床體積BV＝5000ml)，用1倍量床體積(5000ml)的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2(實測值1.9，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液2000ml。萃取液回收乙酸乙酯至1000ml，加入1000ml的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂飽和溶液至pH值至10-12(實測值11.8)，靜置分層，分離出水相，重復上述氫氧化鎂萃取操作一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。樣品編號lysm-3。
實施例4注射用綠原酸鎂凍干粉的制備取lysm-1樣品20g，充分溶解于500ml注射用水中，冷藏24小時過濾，濾液加入30g甘露醇，過0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至600ml，過濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用綠原酸鎂凍干粉。批號凍干粉lysmdg-1實施例5注射用綠原酸鎂凍干粉的制備取lysm-2樣品10g，充分溶解于500ml注射用水中，冷藏24小時過濾，濾液加入36g甘露醇，過0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至600ml，過濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用綠原酸鎂凍干粉。批號凍干粉lysmdg-2實施例6注射用綠原酸鎂凍干粉的制備取lysm-1樣品6g，充分溶解于500ml注射用水中，冷藏24小時過濾，濾液加入48g甘露醇，過0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至600ml，過濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用綠原酸鎂凍干粉。批號凍干粉lysmdg-3實施例7注射用綠原酸鎂凍干粉的制備取lysm-3樣品20g，充分溶解于500ml注射用水中，冷藏24小時過濾，濾液加入48g甘露醇，過0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至600ml，過濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用綠原酸鎂凍干粉。批號凍干粉lysmdg-4實施例8綠原酸鎂鹽對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用研究實驗藥物本發(fā)明注射液己酮可可堿注射液生理鹽水實驗動物Wistar II級大白鼠100只，雌雄各半，體重200g-250g試驗方法以線栓法制作大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷模型。把選好的尼龍線剪成5cm長，一端在酒精燈上緩慢加熱，使其頭端變成小而光滑的球體，距球端20mm處作標記，消毒后置后置于等滲鹽水中備用。用20％烏拉坦(750mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，側(cè)位固定于手術(shù)臺上，在左頸部耳前縱向切開皮膚約2.5cm逐層分離，游離左頸總動脈、頸內(nèi)動脈。熱凝切斷頸外動脈近心端分支，結(jié)扎頸外動脈遠端，于結(jié)扎處遠端熱凝切斷，然后向顱底方向分離頸內(nèi)動脈，細心分離翼腭動脈并結(jié)扎其根部，僅保留頸內(nèi)動脈入顱底主干。用小型動脈夾暫時夾閉頸內(nèi)動脈和頸總動脈，牽拉頸外動脈殘端，與頸內(nèi)動脈方向一致。在頸外動脈殘端下備線，然后用眼科剪在頸外動脈殘端剪一小口將尼龍線球端緩緩插入頸總動脈分叉處，然后進入頸內(nèi)動脈。當尼龍線進入頸內(nèi)動脈約17.5-18.5mm有阻力感時，尼龍線輕輕彎曲，表明其頭端已通過大腦中動脈的起始處，進入大腦前動脈，此時阻斷了大腦中動脈的血流。在頸外動脈的殘端備線處，結(jié)扎固定尼龍線，縫合分離的肌肉、皮膚，將尼龍線的尾端置于皮膚外。再灌注時，外拉尼龍線，使其頭端回至頸外動脈內(nèi)，即可恢復供血，并將外面的尼龍線剪斷，術(shù)中及術(shù)后注意保持大鼠體溫，室溫保持在20-24℃。
實驗分組(1)生化檢測組將50只大鼠分隨機分為5組每組10只。①假手術(shù)組僅切開皮膚，分離動脈，不阻塞大腦中動脈，腹腔注射等滲鹽水2ml。②模型組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射等滲鹽水2ml后，制作成缺血2h、再灌注3h大鼠模型。③低劑量組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射綠原酸鎂鹽(10mg/kg+2ml等滲鹽水)，制作成缺血2h、再灌注3h大鼠模型。④高劑量組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射綠原酸鎂鹽(30mg/kg+2ml等滲鹽水)，制成缺血2h、再灌注3h大鼠模型。⑤綠原酸鎂對照組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射己酮可可堿(30mg/kg+2ml等滲鹽水)，制成缺血2h、再灌注3h大鼠模型。
(2)行為學、病理學檢測組將50只大鼠隨機分為5組每組10只。①假手術(shù)組僅切開皮膚，分離動脈，不阻塞大腦中動脈，腹腔注射等滲鹽水2ml。②模型組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射等滲鹽水2ml后，制作成缺血3h、再灌注24h大鼠模型。③低劑量組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射綠原酸鎂鹽(10mg/kg+2ml等滲鹽水)，制作成缺血3h、再灌注2h大鼠模型。④高劑量組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射綠原酸鎂鹽(30mg/kg+2ml等滲鹽水)，制成缺血3h、再灌注24h大鼠模型。⑤綠原酸對照組阻塞大腦中動脈，立即腹腔注射綠原酸(30mg/kg+2ml等滲鹽水)，制成缺血3h、再灌注24h大鼠模型。
檢測指標及方法(1)腦組織中NO、NOS、SOD、MDA含量的檢測，將生化檢測組中的50只制造模型成功的大鼠處死，在冰盤上迅速取腦，將左側(cè)大腦制成10％的腦組織勻漿，4000r/min離心10min，取上清液。根據(jù)試劑盒說明測定NOS活性，應用硝酸還原酶法測定NO含量。應用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。應用改良的八木國夫法測定MDA含量。結(jié)果見表1。
(2)神經(jīng)行為學改變觀察行為學、病理學檢測組大鼠制造模型成功后，由不了解分組情況的觀察者，按Longa等的5級評分法，評估記錄神經(jīng)行為學評分。0級無神經(jīng)功能缺損，肢體話動正常；1級輕度局灶性損傷，不能仲展左前肢；2級中度局灶性損傷，向左側(cè)劃圈；3級重度局灶性損傷，向左側(cè)傾倒；4級極重度局灶性損傷無自主行走及意識障礙。大鼠深度麻醉后，迅速在冰盤內(nèi)取腦組織，自視交叉凹口將腦冠狀切開，在距視交叉凹口前2mm處作冠狀切面，將厚約2mm的左側(cè)腦組織切片置于2％TTC溶液中，37℃孵育30min，梗死區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗死區(qū)呈現(xiàn)紅色，數(shù)碼相機拍攝記錄，測定全腦片總體積和梗塞區(qū)體積，并計算梗塞區(qū)占腦總體積的百分比。結(jié)果見表2、3。
表1綠原酸對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織中NO、NOS、MDA、SOD的含量影響

注與假手術(shù)組比較*P＜0.05 **P＜0.01與模型組比較△P＜0.05 △△P＜0.01
表2綠原酸對大鼠腦缺血3h再灌注24h的神經(jīng)病學評分的影響

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01表3對大鼠腦缺血再灌注的腦梗塞體積的影響

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01實施例9綠原酸對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用研究實驗藥物本發(fā)明注射液生脈注射液生理鹽水實驗動物Wistar II級大白鼠50只，雌雄各半，體重200g-250g實驗方法以冠脈結(jié)扎法制造大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，大鼠腹腔注射3％戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg)，置于大鼠手術(shù)臺上固定仰臥位固定，縱形切開頸部皮膚，鈍性分離氣管周圍組織，暴露氣管，行氣管內(nèi)插管，并確認插入氣管中，后縫線固定插管于大鼠嘴旁。于大鼠腋下平行線，左側(cè)橫行切開皮膚約1.5cm，在第4或第5肋間鈍性分離肌層，打開胸腔，緊接上動物呼吸機，輔助大鼠呼吸。剪開心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟，在肺動脈圓錐右緣、平左心耳下緣1-2mm處，經(jīng)左冠狀動脈下淺層心肌穿5/0號線，連同一直徑2mm聚氯乙烯管結(jié)扎冠狀動脈左前降支，造成心肌缺血。結(jié)扎冠脈后1小時，用眼科剪剪開聚氯乙管同時剪斷絲線，使缺血心肌恢復血流灌注，再灌注3小時后結(jié)束實驗。整個實驗過程中用SUMP-PC型四道生物信號采集處理連續(xù)記錄標準肢體II導ST段抬高或降低為模型成功的標志。
實驗分組隨機將50只大鼠分為5組，每組10只。①假手術(shù)組僅切開胸腔，暴露心臟，穿線但不結(jié)扎冠狀動脈，腹腔注射等滲鹽水2ml。②模型組穿線結(jié)扎冠狀動脈，立即腹腔注射等滲鹽水2ml后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。③低劑量組穿線結(jié)扎冠狀動脈，立即腹腔注射綠原酸(10mg/kg+2ml等滲鹽水)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。④高劑量組穿線結(jié)扎冠狀動脈，立即腹腔注射綠原酸(30mg/kg+2ml等滲鹽水)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。⑤生脈注射液對照組穿線結(jié)扎冠狀動脈，立即腹腔注射生脈注射液(1ml/kg+2ml等滲鹽水)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。
檢測指標(1)大鼠血清CPK，LDH，SOD，M DA活性測定，再灌注結(jié)束后即刻從取血5ml分離血清，磷酸肌酸激酶(CPK)和乳酸脫氫酶(LDH)按試劑盒說明測定酶活性，SOD，丙二醛(MDA)根據(jù)試劑盒操作，用UV-754型紫外可見分光光度計檢測血清SOD活性和M DA含量。結(jié)果見表4。
(2)心肌組織中NO、NOS、SOD、MDA含量的檢測，再灌注結(jié)束后將制造模型成功的大鼠處死，迅速取心臟組織，用冰生理鹽水沖洗干凈心肌組織血跡，在4℃條件下制成10％的心肌勻漿后，4000r/min離心10min，取上清液。根據(jù)試劑盒說明測定心肌NO、NOS、SOD活性和MDA含量。結(jié)果見表5。
表4 綠原酸對大鼠心肌缺血再灌注損傷血清中CPK，LDH，SOD，MDA的影響

注與假手術(shù)組比較*P＜0.05 **P＜0.01與模型組比較△P＜0.05 △△P＜0.01表5 綠原酸對大鼠心肌缺血再灌注損傷心肌組織NO，NOS，SOD，MDA的影響

注與假手術(shù)組比較*P＜0.05 **P＜0.01與模型組比較△P＜0.05 △△P＜0.0權(quán)利要求
1.一種綠原酸鎂藥物組合物，包含有綠原酸鎂、異綠原酸鎂、綠原酸，其中綠原酸鎂的含量在90％以上。
2.如權(quán)力要求1所述的綠原酸鎂藥物組合物，其特征是綠原酸鎂的含量在95％以上。
3.一種綠原酸鎂藥物組合物，是通過以下步驟實現(xiàn)的1)金銀花打成粗粉，8-12倍量去離子水提取2次，提取液合并過濾后濃縮至3g生藥/ml，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75-80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h；2)取上清液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml，充分攪拌下加入5倍量去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10，置冷庫中靜置過夜；3)冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂，用1倍量床體積的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液；4)萃取液回收乙酸乙酯剩余一半體積，加入等體積的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂溶液至pH值至10-12，分離出水相，再用氫氧化鎂水液萃取一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。
4.一種綠原酸鎂藥物組合物的制備方法，其特征是按以下步驟完成的1)金銀花打成粗粉，8-12倍量去離子水提取2次，提取液合并過濾后濃縮至3g生藥/ml，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75-80％，加入20％的氨水調(diào)節(jié)pH值至8，充分攪拌，置冷庫中靜置24h；2)取上清液回收乙醇，并繼續(xù)減壓濃縮至4g生藥/ml，充分攪拌下加入5倍量去離子水，加入20％氨水調(diào)節(jié)pH值至9-10，置冷庫中靜置過夜；3)冷藏液離心，溶液上預處理好的大孔吸附樹脂，用1倍量床體積的去離子水洗脫，合并流出液和洗脫液，加入20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2，用乙酸乙酯逆流萃取，得萃取液；4)萃取液回收乙酸乙酯剩余一半體積，加入等體積的去離子水，充分攪拌的過程中不斷加入氫氧化鎂溶液至pH值至10-12，分離出水相，再用氫氧化鎂水液萃取一次，合并兩次萃取水液減壓濃縮至盡，低溫干燥得綠原酸鎂組合物。
5.如權(quán)力要求4所述的綠原酸鎂藥物組合物的制備方法，其特征是第一步調(diào)節(jié)乙醇濃度為80％。
6.如權(quán)力要求4所述的綠原酸鎂藥物組合物的制備方法，其特征是第三步所述的大孔吸附樹脂為AB-8、D101、HPD300或ADS-8樹脂。
7.一種綠原酸鎂藥物組合物的制劑，是由綠原酸鎂組合物和相應劑型的藥學上可接受的藥用輔料組成的，可以是注射液、凍干粉、片劑、膠囊或軟膠囊。
8.如權(quán)力要求6所述的綠原酸鎂藥物組合物的制劑，其特征是劑型為注射液或注射用凍干粉。
9.如權(quán)力要求3所述的綠原酸鎂藥物組合物在制備抗病毒藥物方面的應用。
10.如權(quán)力要求3所述的綠原酸鎂藥物組合物在制備治療心腦血管疾病藥物方面的應用。
全文摘要
一種綠原酸鎂藥物組合物，包含有綠原酸鎂、異綠原酸鎂、綠原酸，其中綠原酸鎂的含量在90％以上。發(fā)明中提供了綠原酸鎂藥物組合物的制備方法。通過本發(fā)明我們得到的綠原酸鎂藥物組合物工藝重現(xiàn)性好，質(zhì)量可控，安全穩(wěn)定。藥理實驗證明綠原酸鎂組合物具有更好的抗菌消炎藥理作用，并且對于心腦血管疾病有治療作用，尤其可以用于心腦血管缺血性再灌注損傷的保護。
文檔編號A61P9/00GK1813704SQ20051010142
公開日2006年8月9日 申請日期2005年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月23日
發(fā)明者王偉, 劉二偉 申請人:廣東大光藥業(yè)有限公司