專利名稱：鼠尾草中醛糖還原酶抑制劑丹酚酸m和迷迭香酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物新疆鼠尾草中提取抑制醛糖還原酶有效成分的方法及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
高血糖引發(fā)的DCC諸如神經(jīng)、腎臟、視網(wǎng)膜病變和白內(nèi)障等，極大地增加了心臟病、中風(fēng)、失明、截肢和腎衰竭的危險(xiǎn)性?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明DCC與多元醇通路相關(guān)，該通路的關(guān)鍵限速酶——醛糖還原酶(aldose reductase，AR)在高血糖時(shí)被激活，催化葡萄糖大量轉(zhuǎn)化為不易透過(guò)細(xì)胞膜的山梨醇，引起細(xì)胞滲透性損傷，導(dǎo)致DCC發(fā)生。應(yīng)用醛糖還原酶抑制劑就成了延緩和防治DCC的關(guān)鍵因素。
新疆鼠尾草(Salvia deserta Schang)亦稱新疆丹參，為唇形科鼠尾草屬植物，在民間以全草入藥，有清熱解毒、止咳祛痰、消腫利尿等功效。它與藥典中收載的正品丹參(Salvia miltiorhiza Bunge)同屬，正品丹參作為活血化瘀藥，長(zhǎng)期用于心血管系統(tǒng)及婦科疾病等方面的預(yù)防和治療。最近研究表明正品丹參對(duì)腫瘤，糖尿病也有一定的抑制作用，尤其在預(yù)防和治療糖尿病慢性并發(fā)癥(diabetic chroniccomplications，DCC)中，具有醛糖還原酶(aldose reductase，AR)抑制活性，并尋找到有效部位以及有效成分丹參醇A和B(即DanshenolA和B)。探討與其有著相近親緣關(guān)系的同屬植物新疆鼠尾草是否存在AR抑制活性？引起我們的興趣，因此對(duì)新疆鼠尾草不同提取部位進(jìn)行了AR抑制活性的篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了與丹參醇A和B作用類似的丹酚酸M和迷迭香酸具有醛糖還原酶抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，所述的從新疆鼠尾草中提取抑制醛糖還原酶有效成分的方法及其醫(yī)藥用途。將新疆鼠尾草通過(guò)水溶劑提取、正丁醇萃取得到正丁醇部位。所得到的正丁醇部位含丹酚酸類；或者新疆鼠尾草通過(guò)甲醇提取，濃縮提取液經(jīng)乙酸乙酯后再經(jīng)過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂，Sephadex LH-20反復(fù)柱層析，乙腈:H2O洗脫得到丹酚酸M和迷迭香酸。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明正丁醇部位具有抑制醛糖還原酶的作用。說(shuō)明該正丁醇有效部位能有效治療糖尿病并發(fā)癥。
下面介紹有效成分提取分離方法和藥效學(xué)研究具體實(shí)施方式
，但不以此限定權(quán)利要求。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 丹酚酸M和迷迭香酸的制備1)干燥的新疆鼠尾草葉，粉碎，用水80℃提取3次，合并三次提取液，濃縮，冷凍干燥，得干燥浸膏，水混懸，用正丁醇(n-BuOH)反復(fù)萃取，減壓回收溶劑得n-BuOH浸膏，用水溶解后的浸膏，上AB-8大孔樹(shù)脂，將粗流份進(jìn)行Sephadex LH-20反復(fù)柱層析得水溶性化合物丹酚酸M。
2)干燥的新疆鼠尾草葉，粉碎，用水80℃提取3次，合并三次提取液，濃縮，冷凍干燥，得干燥浸膏，水混懸，用正丁醇(n-BuOH)反復(fù)萃取，減壓回收溶劑得n-BuOH浸膏，用水溶解后的浸膏，上進(jìn)行Sephadex G-75反復(fù)柱層析得水溶性化合物迷迭香酸。
實(shí)施例2 丹酚酸M和迷迭香酸的NMR光譜數(shù)據(jù)丹酚酸M 氫譜具體數(shù)據(jù)如下1H-NMR(D2O)δppm7.7(1H，s，H-7)， 6.97(1H，s，H-2)， 7.01(1H，d，J＝8.0Hz，H-6)，6.88(1H，d，J＝8.1Hz，H-6’)， 4.59(1H，s，H-10)， 6.83(1H，d，J＝8.1Hz，H-5)，6.76(1H，d，J＝8.31Hz，H-5’)， 6.79(1H，s，H-2’)，4.78(1H，s，H-11)，3.54(3H，s，OCH3)13C-NMR譜數(shù)據(jù)具體歸屬如下13C-NMR(D2O)，δppm177.71(COOH，C-9)， 178.84(COOH，C-12)， 143.173(C-7)，57.89(C-10)， 86.59(C-11)， 128.07(C-1)， 115.53(C-2)，150.02(C-3)， 149.439(C-4)，119.00(C-5)， 129.29(C-6)，50.77(-OCH3)， 135.21(C-1’)， 117.53(C-2’)，145.93(C-3’)，146.93(C-4’)，117.30(C-5’)， 121.40(C-6’)。
迷迭香酸 1H-NMR波譜數(shù)據(jù)歸屬如下1H-NMR(CD3OD)，δppm7.53(1H，d，J＝15.9Hz，H-7) 6.28(1H，d，J＝15.9Hz，H-8)7.02(1H，d，J＝2.1Hz，H-2) 6.93(1H，dd，J＝6.0Hz，J＝2.1Hz，H-6)6.76(1H，d，J＝5.7Hz，H-5) 6.65(1H，brs，H-2′)6.62(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)6.58(1H，d，J＝8.0Hz，H-6′)5.12(1H，d，J＝9.3Hz，H-8′)3.06(1H，d，J＝14.4Hz，H-7′)2.94(1H，dd，J＝14.4Hz，9.3Hz，H-7′)
13C-NMR(CD3OD)，δppm176.2(COOH，C-9′) 145.0(CH＝CH，C-7)115.3(CH＝CH，C-8) 168.8(羰基，C-9)其余碳?xì)w屬125.0(C-1)，115.1(C-2)，146.8(C-3)， 149.5(C-4)，116.4(C-5)，122.9(C-6)，129.7(C-1′)， 116.4(C-2′)，146.0(C-3′)， 145.9(C-4′)， 116.2(C-5′)， 121.7(C-6′)，38.5(C-7′)， 76.6(C-8′)實(shí)施例3 丹酚酸M和迷迭香酸的醛糖還原酶抑制作用實(shí)驗(yàn)根據(jù)本發(fā)明所述的方法制備的丹酚酸M和迷迭香酸直接用于抑制醛糖還原酶的應(yīng)用。
材料UV-2401PC紫外分光光度計(jì)(日本島津)；NADPH(sigma，純度＞98％)；DL-甘油醛(ICN Biomedicals)；人AR(日本和光純藥工菐株式會(huì)社，human muscle)；槲皮素(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。新疆鼠尾草標(biāo)本由新疆醫(yī)科大學(xué)生藥教研室鑒定并存放。
方法酶活性測(cè)定，反應(yīng)體系700μL pH6.2的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(buffer)，100μL 1.5mmol/L NADPH，100μL 100mmol/L DL-甘油醛，3μL 3×10-2U/L的人AR與97μL buffer。25℃混勻20s后反應(yīng)180s，340nm處吸光值(ΔA)的下降值表示人AR的活性。新疆鼠尾草各部位對(duì)人AR的抑制是指在上述反應(yīng)體系中加入3μL樣品后酶活性的降低程度?？瞻诇y(cè)定樣品用DMSO溶劑，人AR用buffer代替；對(duì)照測(cè)定樣品用DMSO溶劑；陽(yáng)性對(duì)照用1mg/mL的槲皮素，目前槲皮素被公認(rèn)為衡量其他醛糖還原酶抑制劑作用的陽(yáng)性對(duì)照藥物。人AR抑制率(％)＝[1-(ΔA樣品-ΔA空白)/(ΔA對(duì)照-ΔA空白)]×100％。
結(jié)果新疆鼠尾草中分離得到的化合物丹酚酸M和迷迭香酸，在不同濃度下對(duì)人醛糖還原酶的抑制作用見(jiàn)表1，其中槲皮素為陽(yáng)性對(duì)照品，從中可以看出丹酚酸M和迷迭香酸對(duì)人醛糖還原酶活性均有抑制作用。在1g/L濃度下，他們的抑制強(qiáng)度較大。隨著濃度的降低，抑制率也相應(yīng)減小。丹酚酸M的IC50為0.79μg/mL，迷迭香酸的IC50為1.13μg/mL。
表1兩種化合物在不同濃度下對(duì)人AR的抑制強(qiáng)度(n＝3)

討論國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者致力于尋找強(qiáng)有力的AR抑制劑，中藥民族藥在治療糖尿病慢性并發(fā)癥中有著千年的歷史，因此從中藥民族藥中尋找較強(qiáng)的AR抑制劑具有重要優(yōu)勢(shì)。本文研究了新疆鼠尾草中兩種化學(xué)成分丹酚酸M和迷迭香酸對(duì)AR抑制活性，本實(shí)驗(yàn)采用人醛糖還原酶作為藥物篩選的酶源，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，可信度高。
權(quán)利要求
1.從新疆鼠尾草中分離得到的具有抑制醛糖還原酶作用的一種提取物及其化合物丹酚酸M和迷迭香酸，其提取方法和醫(yī)藥用途特征在于。取新疆鼠尾草的全草，用水或稀甲醇、稀乙醇提取，過(guò)濾，濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，再用正丁醇萃取，減壓濃縮正丁醇層，濃縮物用大孔吸附樹(shù)脂分離得到含有丹酚酸M和迷迭香酸的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，再用Sephadex LH-20分離，得到單體丹酚酸M和迷迭香酸，其理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)符合文獻(xiàn)值。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述，新疆鼠尾草中含有丹酚酸M或迷迭香酸提取物或其中的單一化合物作為防治糖尿病并發(fā)癥的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述，新疆鼠尾草中含有丹酚酸M和迷迭香酸提取物或其中的單一化合物與其他中藥或西藥以任意比例混合作為抗老年性疾病的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述，新疆鼠尾草中含有丹酚酸M和迷迭香酸提取物提取物或其中的單一化合物用于制備保健食品的原料或添加劑應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從新疆鼠尾草全草中提取醛糖還原酶抑制劑的制備方法及藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果為丹酚酸M的IC
文檔編號(hào)A61P3/00GK1837197SQ20051005615
公開(kāi)日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2005年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月23日
發(fā)明者熱娜·卡斯木, 王曉梅, 堵年生, 楊建 , 王新玲 申請(qǐng)人:新疆醫(yī)科大學(xué)