專利名稱：野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
野木瓜(Stauntonia chinensis DC)又名假荔枝，繞繞藤，為木通科野木瓜屬植物。藥理實驗證明野木瓜全植物及其提取物都有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和解痙作用，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷，各種神經(jīng)性疼痛，可長期使用及連續(xù)用藥，劑量與效用成正相關(guān)關(guān)系，而鎮(zhèn)痛作用不影響人的意識和感覺，無耐藥性，不成癮，是一種有效的中藥鎮(zhèn)痛藥。公開號CN1562275A公開的中國發(fā)明專利申請就公開了一種野木瓜皂甙及其注射劑。該注射劑具有鎮(zhèn)痛作用。目前未見有野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明用MTT法證明野木瓜皂甙對腫瘤細胞有細胞毒效應(yīng)，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關(guān)。
具體實施例方式
下面通過實施例進一步闡述本發(fā)明。
一、準(zhǔn)備實驗藥物和試劑1、野木瓜皂甙(Stauntoniae Saponin，SS)的提取取野木瓜注射液(廣東和平制藥廠產(chǎn)品)于錐形瓶中，加入2倍體積的無水乙醇，搖勻，再加入5倍體積的丙酮與乙醚混合液(丙酮∶乙醚＝9∶1)。攪拌，在室溫下靜止20hrs.。經(jīng)抽濾，濾渣用丙酮洗三次，得皂甙固體。提取方法參照徐任生、陳仲良編著的《中草藥有效成分提取與分離》(第二版).上海上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1989，313。
2、實驗前用RPMI-1640培養(yǎng)液(美國GiBCo公司產(chǎn)品)配制野木瓜皂甙溶液。溶液于4℃冷藏。
3、新生小牛血清(FCS)華美生物工程公司產(chǎn)品，56℃，30分鐘滅活，分裝，-20℃冷凍保存。
4、四甲基偶氮唑藍(MTT)試劑(Sigma公司生產(chǎn))。
二、使用的儀器和設(shè)備1、超凈工作臺安泰技術(shù)有限公司產(chǎn)品，潔凈度＜3.5粒/L(＞0.5μm塵埃)。
2、CO2細胞培養(yǎng)箱Thermo公司Forma Scientific，Inc。
3、倒置光顯微鏡日本尼康公司(NIKON)型號810818型。
4、96孔平板美國Costar公司。
5、酶聯(lián)免疫檢測儀Bio-RAD Model 680，單波長為550nm。
三、藥物效果鑒定的方法1、細胞培養(yǎng)在K562懸浮細胞液中加入等容積的10％新生小牛血清的RPMI-1640營養(yǎng)液，吹打均勻，置飽和濕度，37℃，5％CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、藥效測定a、設(shè)置5個藥物實驗組和1個對照組。每個組中在含有105個處于對數(shù)生長期的K562細胞的懸浮細胞液中加入200μl的FCS、100μl的SS(濃度分別為0.0361mg/ml、0.1802mg/ml、0.9012mg/ml、4.506mg/ml、22.53mg/ml)，然后加入RPMI-1640培養(yǎng)液至總?cè)莘e1ml。對照組不加SS。各組的溶液被充分混勻后接種于96孔板。每個組接種8個小孔，每孔100μl。然后，置于37℃、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)。終止培養(yǎng)前4小時，每孔加入5mg/ml的MTT10μl，繼續(xù)培養(yǎng)。終止培養(yǎng)時，每孔加入10％SDS100μl，室溫靜止過夜。用酶聯(lián)免疫檢測儀(550nm單波長)測OD值。
b、相對抑制率(IR)的計算 c、統(tǒng)計學(xué)處理利用STATISTICA 6.0軟件進行方差分析和多重比較(LSD法)；以直線回歸法求藥物濃度與其對細胞增殖的抑制率的回歸方程，并通過相關(guān)系數(shù)分析回歸方程能否正確反映濃度與抑制率之間的關(guān)系。根據(jù)回歸方程推算出半數(shù)致死濃度LD50。
四、實驗結(jié)果1、SS影響K562細胞增殖的量效關(guān)系(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)，見下表。

五、方差分析和多重比較方差分析F＝224.7377 P＝0.000000多重比較(LSD法)結(jié)果(1)對照組-實驗組1×對照組-實驗組2×對照組-實驗組3√ 照組-實驗組4√ 對照組-實驗組5√(2)實驗組1-實驗組2√ 實驗組1-實驗組3×實驗組1-實驗組4√ 實驗組1-實驗組5√(3)實驗組2-實驗組3√ 實驗組2-實驗組4√ 實驗組2-實驗組5√(4)實驗組3-實驗組4√ 實驗組3-實驗組5√(5)實驗組4-實驗組5√(×P＞0.05，無顯著性差異；√P＜0.01，差異極顯著)六、SS影響K562細胞增殖的量效關(guān)系的線性回歸和相關(guān)系數(shù)分析將SS濃度為0.02253mg/ml、0.0912mg/ml、0.2253mg/ml、0.4506mg/ml、2.253mg/ml的抑制率進行一元線性回歸，得到的回歸直線y＝34.40715x+3.034355。通過測定相關(guān)系數(shù)r表明，抑制率與SS濃度成正相關(guān)(r＝0.972119，r＞r0.05)，回歸直線可以表示濃度(x)與抑制率(y)的關(guān)系。
七、半數(shù)抑制濃度LD50的計算根據(jù)回歸直線y＝34.40715x+3.034355得到LD50＝1.365mg/ml。
結(jié)論上述實驗結(jié)果和統(tǒng)計學(xué)分析表明，野木瓜皂甙對腫瘤細胞有毒效應(yīng)，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關(guān)。
權(quán)利要求
1.一種野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用，其特征在于其中所述的野木瓜皂甙在0.02253mg/ml低濃度情況下對腫瘤細胞有細胞毒效應(yīng)，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關(guān)。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。其公開了一種野木瓜皂甙在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。通過實驗表明野木瓜皂甙對腫瘤細胞有細胞毒效應(yīng)，抑制細胞的分裂，其抑制率與野木瓜皂甙濃度成正相關(guān)。
文檔編號A61P35/00GK1762371SQ20051002998
公開日2006年4月26日 申請日期2005年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月23日
發(fā)明者葉文博, 李興玉 申請人:上海師范大學(xué)