專利名稱：大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病素(hiv)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大黃素、大黃多糖的用途，尤其涉及大黃素和大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)中的新用途。
背景技術(shù)：
自人類1981年發(fā)現(xiàn)第一例艾滋病(AIDS)以來世界范圍內(nèi)AIDS的流行迅速漫延，以中國為例(截止2004年10止)全國HIV感染者84萬人AIDS病人8萬人，已死亡16萬人。因此一個以研究抗HIV和治療AIDS藥物的高潮在全世界鋪開。但是至今為止還是沒有找到一個既無毒無副作用，又有較好治療效果的藥問世。
目前治療AIDS的方法有三，一是抗AIDS；二是免疫；三是抗機會性感染。第一種是抗病源(HIV)治療；第二種是提高患者自身免疫的輔助治療；第三是切斷傳染途徑的治療?？笻IV的化學(xué)藥(如齊夫拉定)雖有較好效果，但副作用大，病人難以耐受和HIV出現(xiàn)抗藥性，停藥后病人馬上出現(xiàn)反彈等問題，目前無法解決。后兩者只是輔助治療和一種防疫措施對已發(fā)病患者是無能為力的。因此，寄希望于找到一種既無毒副作用又有效的抑制HIV是致關(guān)重要的。那么中藥就成了一個唯一的亮點。從我們目前所查找到公開資料看還沒有一種抗HIV和抗AIDS的中藥問世。但據(jù)文獻看有報導(dǎo)甘草甜素有抗HIV的作用和大黃有抗HIV作用。前者沒有深入研究，后者沒有找出抗HIV的具體物質(zhì)，所以該研究不徹底和只是發(fā)現(xiàn)苗頭而已。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供大黃素和大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)中的新用途，為治療AIDS提供更好的抗病毒制藥原料。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下提供大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)的應(yīng)用；用CO2超臨界萃取法從中藥大黃中提取大黃素、大黃多糖，然后用大黃素、大黃多糖分別或混合作抑制HIV病毒的試驗。
本發(fā)明的內(nèi)容是用大黃素和大黃多糖在體外(細胞內(nèi))去抑制HIV并證明上述二者有抗HIV的作用。其具體做法是1、先制備不同濃度的大黃素和大黃多糖溶液(大黃素濃度為70-98％，大黃多糖的濃度為80％-95％)。
2、取單層細胞100微升，在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，使細胞長成單層備用。
3、藥物對細胞的毒性試驗將大黃素提取物加到已長滿單層細胞的培養(yǎng)基上。在37℃、50％CO2環(huán)境中培養(yǎng)72小時后，觀察細胞活性。用不同濃度的大黃素和大黃素多糖，每種濃度重復(fù)四次，觀察藥物對細胞的影響，選擇對細胞生長沒有影響的大黃素、大黃多糖和二者混合液的濃度，作為下一步實驗的標(biāo)準(zhǔn)濃度，其中大黃素的濃度為70-98％，大黃多糖的濃度為80％-95％。
4、大黃素和大黃多糖抗HIV在已經(jīng)成功培養(yǎng)細胞并加了大黃素和大黃多糖的培養(yǎng)板上再加上一定濃度的HIV液。加過HIV后觀察細胞生長情況與對照組比較。
本發(fā)明具有如下特征試驗(1)對照組在無大黃素和多糖的培養(yǎng)板上加上HIV。
(2)試驗組A、在有大黃素和大黃多糖二者混合液的培養(yǎng)板上加HIV；B、在有大黃素細胞生長良好的培養(yǎng)板上加上HIV；C、在有大黃多糖的細胞生長良好的培養(yǎng)板上加上HIV。
(3)對照組A、在無大黃素和大黃多糖二者混合液的培養(yǎng)板上加HIV；B、在無大黃素細胞生長良好的培養(yǎng)板上加上HIV；C、在無大黃多糖的細胞生長良好的培養(yǎng)板上加上HIV。
結(jié)果對照組的細胞死亡，病毒量增加；試驗組的A組(大黃素和大黃多糖混合組)，細胞生長良好，病毒量下降。說明試驗組中的A組對HIV有明顯的抑制作用，試驗重復(fù)四次結(jié)果相同，可將上述從中藥大黃中提取的大黃素和大黃多糖作為有效成分用于制備治療AIDS的下列藥物膠囊、片劑、顆粒劑和注射劑。
具體實施例方式
1、材料細胞TC740，培養(yǎng)液RPMI-1640加上小牛血清(濃度10％)，100U/ML(青霉素)100μg/ML(鏈霉素)和常規(guī)細胞培養(yǎng)液。
病毒是經(jīng)TC740細胞活化增殖，細胞病變達75％以上的HIV，濃度為104-8CID50/0.1ML。大黃素和大黃多糖采用中藥大黃為原料，經(jīng)CO2超臨萃的方式取提得到大黃素和大黃多糖。
2、方法細胞制備，在細胞培養(yǎng)板上加2×103-5/ML濃度TC740細胞100μL，在37℃，50％CO2培養(yǎng)12-24小時。
3、細胞毒性試驗在細胞培養(yǎng)板上加大黃素和大黃多糖混合物，濃度在1600μg/ML-25μg/ML之間。在50％CO2環(huán)境下培養(yǎng)72小后觀察。
4、試驗(1)對照組在無大黃素和大黃多糖的培養(yǎng)板上加上HIV。
(2)試驗組在有大黃素和大黃多糖混合液的培養(yǎng)板上加HIV。
(3)結(jié)果對照組細胞死亡，病毒量增加；試驗組細胞無變化，病毒量明顯減少，試驗重復(fù)四次結(jié)果相同。
可將上述大黃素和大黃多糖作為有效成分用于制備治療AIDS的下列藥物膠囊、片劑、顆粒劑和注射劑。
上述大黃素和大黃多糖除了可以從中藥大黃中提取外，還可從其它含有大黃素和大黃多糖的中藥中提取，因此，凡是將大黃素和大黃多糖應(yīng)用在治療AIDS領(lǐng)域都是本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)中的應(yīng)用，其特征在于，將所述大黃素和大黃多糖作為有效成分用于制備膠囊、片劑、顆粒劑和注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)中的應(yīng)用；提供大黃素、大黃多糖在抗人類免疫缺陷病毒(HIV)的應(yīng)用；用CO
文檔編號A61K31/122GK1778310SQ20041005235
公開日2006年5月31日 申請日期2004年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月18日
發(fā)明者楊占秋, 孫慧, 肖紅 申請人:深圳市武大金球中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心