專利名稱：一種新型高分子材料載藥納米粒及制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型藥用高分子材料載藥納米粒及制備方法和應(yīng)用。其載藥納米粒的制備方法為乳化-蒸發(fā)法。特別用高分子材料PELGE/PELGA為載體材料包裹治療基因如pORF IL-12質(zhì)?；蚧瘜W(xué)藥物如鹽酸米托蒽醌(DHAQ)或阿霉素(ADR)或多肽、蛋白類藥物如胸腺五肽，在機(jī)械攪拌或高壓乳勻機(jī)作用下制備出該P(yáng)ELGE/PELGA納米粒。
背景技術(shù)：
一般可生物降解的聚合物納米粒載體材料包括天然和合成兩類，較早應(yīng)用的血清蛋白、血紅蛋白、骨膠原、明膠、葡聚糖、白蛋白、甲殼素及其衍生物、卵磷脂、膽固醇等天然可生物降解的高分子材料生物相容性好，但制備困難，成本高，質(zhì)量無(wú)法控制，不能大規(guī)模生產(chǎn)，因而人們已將目光轉(zhuǎn)向了較易獲得的合成可生物降解聚合物。用于化學(xué)藥物、多肽和蛋白類藥物以及治療基因載體的合成可生物降解聚合物主要有聚乳酸(PLA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、聚丙烯酸酯類等。PLA和PLGA作為可降解的合成高分子材料，具有良好的生物相容性。但由于該納米粒表面具有一定的疏水性，其納米粒靜注后迅速與血漿蛋白等血液成分結(jié)合，易被巨噬細(xì)胞識(shí)別、包圍、吞噬，使該納米粒在血液循環(huán)系統(tǒng)中的循環(huán)時(shí)間減少，降低療效。目前還沒(méi)有一種合成聚合物納米粒載體材料可用于血管內(nèi)注射的臨床報(bào)道。其最根本原因之一是載體材料與血細(xì)胞長(zhǎng)期接觸的血液不相容性。
日本科學(xué)家今井庸二提出，具有血液相容性材料應(yīng)在0.1～0.2μm范圍內(nèi)具有物理或化學(xué)上的不均勻微觀結(jié)構(gòu)，從這個(gè)觀點(diǎn)出發(fā)，很多研究者采用多種方法研制開(kāi)發(fā)具有微觀相分離結(jié)構(gòu)的聚合物。不少實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)聚合物呈現(xiàn)某種特定的相分離結(jié)構(gòu)時(shí)，表現(xiàn)出良好的血液相容性。因此，在一個(gè)大分子鏈上同時(shí)含有親水和疏水鏈段的兩親(或兩性)嵌段及接枝共聚物是人們頗感興趣的研究對(duì)象。PLGA上接枝PEG更引起了人們的注意。由于PLGA和PEG沒(méi)有毒性，已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于人體內(nèi)(肌肉注射)。PLGA分子上無(wú)肽鏈，無(wú)免疫原性，并且可生物降解，其降解產(chǎn)物是動(dòng)物體內(nèi)的自然代謝產(chǎn)物，易于從體內(nèi)排出而不積蓄。將PEG接枝在PLGA材料上，這類含有不相容鏈段的共聚物具有微觀相分離的形態(tài)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與靜注PLGA納米粒相比，靜注PEG-PLGA-PEG(PELGE)納米粒后，納米粒中的藥物在血液循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)。
基因治療就是將具有一定功能的外源基因?qū)肴梭w細(xì)胞，以補(bǔ)充機(jī)體所缺失的基因或糾正機(jī)體異常表達(dá)的基因?；蛑委煵粌H是一個(gè)新的治療手段，同時(shí)，它也是一門新的藥物學(xué)。與傳統(tǒng)藥物學(xué)的不同之處在于，它是將一種特殊的活性物質(zhì)轉(zhuǎn)移入體內(nèi)，使其在特定空間、特定時(shí)間進(jìn)行表達(dá)，從而達(dá)到治療疾病的目的。
基因治療中一個(gè)重大問(wèn)題是如何選擇合適的基因載體，將目的基因輸送到靶組織，并進(jìn)入特定靶細(xì)胞，從而能在該細(xì)胞中得到高效表達(dá)。目前，應(yīng)用于基因治療的載體主要有病毒載體和非病毒載體兩種。其中病毒載體已被廣泛而有效地得到應(yīng)用，但病毒載體存在免疫原性高、毒性大、目的基因容量小、靶向特異性差、制備較復(fù)雜及費(fèi)用較高等不足。故人們?cè)絹?lái)越重視人工合成的非病毒載體的研究?，F(xiàn)階段研究得最多的非病毒載體是陽(yáng)離子脂質(zhì)體，其介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移有簡(jiǎn)便，安全，無(wú)免疫原性，可攜帶較大的DNA分子等優(yōu)點(diǎn)，但其在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中轉(zhuǎn)染率高，而體內(nèi)轉(zhuǎn)染率卻極低。這主要是因?yàn)殛?yáng)離子脂質(zhì)體在體內(nèi)環(huán)境中不夠穩(wěn)定，且很容易與正常細(xì)胞膜如血細(xì)胞膜(均帶負(fù)電荷)發(fā)生非特異性結(jié)合。Mohato等系統(tǒng)地研究了大分子藥物的藥動(dòng)學(xué)特性及其分子量和電荷等理化性質(zhì)。研究表明，電荷對(duì)于分子量大于70000道爾頓的大分子處置是很重要的。陽(yáng)離子型大分子由于靜電相互作用很快被肝臟攝取，然而那些帶有較弱負(fù)電荷的大分子如牛血清白蛋白和羧甲基環(huán)糊精在血漿中的駐留時(shí)間較長(zhǎng)。藥動(dòng)學(xué)解析結(jié)果表明，所有DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物樣品均具有較低的藥時(shí)曲線下面積(AUC)和全身清除率，這些制劑的組織攝取指數(shù)都比較接近，脾臟的攝取指數(shù)最大，肝和肺居第二和第三。
以可生物降解的聚合物為骨架材料的納米粒，作為一種新型的藥物載體，其在基因治療方面的運(yùn)用已得到了普遍關(guān)注。由于常用的DNA為超螺旋結(jié)構(gòu)或開(kāi)環(huán)結(jié)構(gòu)，空間體積太大，并且不能有效主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞，因此必須進(jìn)行縮合及依賴其他技術(shù)的輔助。納米載體具有結(jié)合、濃縮DNA及將DNA高效導(dǎo)入各種細(xì)胞的能力，體外顯示無(wú)明顯細(xì)胞毒性。同時(shí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示，使用無(wú)免疫原性的納米載體可獲取有效基因轉(zhuǎn)移率。mPEG-PLGA-mPEG(PELGE)納米粒用作傳遞系統(tǒng)，除了具有脂質(zhì)體載體的一般優(yōu)點(diǎn)外，還可以克服脂質(zhì)體載體穩(wěn)定性差，靜注后迅速被肝脾攝取，不能有效到達(dá)靶組織的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種載基因或化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物的用聚乙二醇(PEG)修飾的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)嵌段接核共聚物(mPEG-PLGA-mPEG簡(jiǎn)稱PELGE或mPEG-PLGA簡(jiǎn)稱PELGA)兩親性、可生物降解的三嵌段共聚物制備的用于納米粒。這種嵌段共聚物能夠在水介質(zhì)中自組裝成膠束或納米粒，其中，相對(duì)疏水性的PLGA聚集成疏水性、可生物降解的核，聚乙二醇嵌段組裝成親水性的殼，具有穩(wěn)定膠束、有效躲避生物體內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)對(duì)藥物的捕捉和血漿蛋白質(zhì)對(duì)藥物的吸附作用，因此這類納米粒是一類優(yōu)良的藥物載體。這種納米粒粒徑在5-600nm可控，表面光滑，均勻度好，顆粒規(guī)則無(wú)粘連，再分散性好，且制備方法簡(jiǎn)單、工藝成熟、適宜大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)。同時(shí)，載基因或化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物的量和包封率高，可用于血管內(nèi)或肌肉注射或口服給藥。
本發(fā)明的技術(shù)方案為將一定量的PELGA或PELGE加到一定體積的二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷(DCM)/丙酮的混合有機(jī)溶劑中構(gòu)成有機(jī)相，取適量治療基因或化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物加入有機(jī)相中，將其勻化后形成初乳，將初乳加到一定量的乳化劑和一定體積的去離子水所構(gòu)成的水相中，再次乳化，繼而攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑2-8小時(shí)或高壓乳勻，使二氯甲烷和丙酮揮發(fā)完全，即得PELGA或PELGE納米粒的膠體溶液，加入1-10％的支架劑(亦可不加支架劑)，常規(guī)凍干保存。
本發(fā)明納米粒載體材料用下列不同分子量和不同LA∶GA比例以及不同PEG含量的PELGE或PELGA材料，其分子量為1.0×103-6.0×104；LA∶GA為100∶0-50∶50；PEG含量為5-50％；粒徑為5-600nm可控；其有機(jī)溶劑為二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的體積比為50-100/0-50。凍干的納米粒中有機(jī)溶劑殘余量低于限量1/10。
本發(fā)明外水相為聚乙烯醇(PVA)或普朗尼克F68或右旋糖苷，其濃度為0-10％。其勻化方式包括超聲乳化，高壓乳勻方式。超聲乳化1-6次，每次5-10秒，強(qiáng)度為10-600W；高壓乳勻1-8次，強(qiáng)度5000-25000Kpa。支架劑包括葡萄糖、乳糖或甘露糖等，其含量為1-10％。
本發(fā)明制備的納米粒，表面光滑圓整，無(wú)粘連，粒徑在5-600nm可控(圖1、圖2和圖3)。包封率在50-99.5％，緩釋時(shí)間8小時(shí)起至4周?？捎糜谘軆?nèi)注射、肌肉注射或口服藥物基因治療的質(zhì)粒、核酸疫苗、反義寡聚脫氧核苷酸、核酶或作為化學(xué)藥物如水不溶性、水難溶性、水溶性化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物。載基因或化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物納米粒的粒度用激光粒度儀和透射電鏡測(cè)量所得。載治療基因的納米粒的抗核酸酶的能力為用DNA酶I(0.32U/μgDNA)消化10小時(shí)后，質(zhì)粒DNA無(wú)降解；載有pORF LacZ質(zhì)粒的納米粒對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的轉(zhuǎn)染率在10-95％。
本發(fā)明也可通過(guò)改變LA/GA的比例或PEG的含量或PEG的分子量或嵌段聚合物的分子量或幾種材料的組合來(lái)調(diào)節(jié)納米粒的降解速率，從而調(diào)控所載基因或化學(xué)藥物的釋放速率。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與PLGA納米粒相比，PEG-PLGA-PEG(PELGE)納米粒靜脈注射后，納米粒在血液循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)。
納米粒中DNA的包封率的測(cè)定取DNA-PELGE-NP或DNA-PELGA-NP膠體溶液，在40000r/min(4□)條件下離心1.5h，精取上清液250μl，用Hoechst 33258染液(0.15μg/ml)定容到5ml，于熒光光度計(jì)上測(cè)定熒光強(qiáng)度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算上清液中DNA的濃度，按下式計(jì)算包封率包封率(％)＝[(X1-X2)/X1]×100％。
式中X1為未經(jīng)包封前DNA的總濃度，X2為上清液中DNA的濃度。
納米微粒體外降解實(shí)驗(yàn)采用動(dòng)態(tài)滲析法，稱取定量空白納米微粒，置于透析袋內(nèi)，加釋放介質(zhì)pH7.4磷酸鹽緩沖液2.5ml封口，置于裝有42.5ml釋放介質(zhì)的帶塞錐形瓶中，于(37±0.5)℃條件下恒溫?cái)嚢瑁D(zhuǎn)速約為70r/min，定時(shí)取樣品液2ml并補(bǔ)充相同體積釋放介質(zhì)。樣品液按乳酸含量測(cè)定方法測(cè)定吸收度，代入乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線公式求出樣品液中乳酸濃度，并計(jì)算累計(jì)降解百分率。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721，用含有10％的小牛血清和100μg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染前的24小時(shí)，在6孔板的每個(gè)孔中接種2×105的細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞約有70％的融合。將細(xì)胞用無(wú)抗生素的有血清培養(yǎng)基洗滌一遍后，在各孔中加入1ml該培養(yǎng)基和含有5-10μg DNA的納米粒膠體溶液，并輕微混合。在37℃，5％CO2孵箱中放置5小時(shí)后，吸出轉(zhuǎn)染介質(zhì)，用含有血清和抗生素的培養(yǎng)基洗滌兩遍，并在各孔中加入2ml該培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用PBS洗滌兩遍后，用2％甲醛和0.2％的戊二醛室溫固定10分鐘，20mg/ml X-gal 37℃染色10小時(shí)。染色后的細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察，任取5個(gè)視野，計(jì)算藍(lán)色細(xì)胞占總細(xì)胞的百分比。
載基因納米粒的抗核酸酶能力實(shí)驗(yàn)取納米粒膠體溶液四份，分別加入DNA酶I(0.32U/μgDNA)，充分混合后于37℃分別孵育5分鐘，1、4、10小時(shí)，并用0.5M EDTA終止酶反應(yīng)。將得到的各膠體溶液超速冷凍離心(40000r/min，1.5h)，沉淀用0.5ml氯仿溶解后，加入等量的TE緩沖液(pH8.0)。旋渦混合15分鐘，離心(15000r/min)15分鐘，上清液用二倍體積的冰冷的乙醇沉淀，并用70％的乙醇洗滌沉淀，最后用少量的TE緩沖液(pH8.0)溶解沉淀。將該液作凝膠電泳，并與裸DNA進(jìn)行比較。如圖10。


圖1.載基因PELGA納米粒粒徑分布圖。
圖2.載基因PELGA納米粒透射電鏡圖。
圖3.載基因PELGE納米粒透射電鏡圖。
圖4.載pORF LacZ質(zhì)粒的PELGA納米粒對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的轉(zhuǎn)染結(jié)果圖5.載pORF LacZ質(zhì)粒的PELGE納米粒對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的轉(zhuǎn)染結(jié)果圖6 LA/GA為80/20不同PEG含量的納米粒在小鼠血管中不同時(shí)間點(diǎn)DHAQ的含量圖。(PEG的含量為P0％，PE55％，PE1010％，PE2020％)圖7 PEG含量相同(5％)而LA/GA比例不同的納米粒在體外磷酸緩沖液中DHAQ累計(jì)釋放百分比曲線。(LA/GA比例為a1 70/30，b1 80/20，d150/50)圖8 LA/GA比例相同(70/30)而PEG含量不相同的納米粒在體外磷酸緩沖液中DHAQ累計(jì)釋放百分比曲線。(PEG的含量為a15％，a210％，a315％)圖9 PEG含量相同(10％)LA∶GA比例也相同(50/50)而PEG分子量不同的納米粒在體外磷酸緩沖液中DHAQ累計(jì)釋放量。(PEG的分子量d22KD，D25KD)圖10 DNA-PELGE-NP中的DNA電泳中1.未經(jīng)處理的pORF-mIL12裸質(zhì)粒2、3.從pORF-mIL12-PELGE-NP中提取出的質(zhì)粒4.DNA酶消化5分鐘后的pORF-mIL12裸質(zhì)粒5.DNA酶消化5分鐘后從pORF-mIL12-PELGE-NP提取出的質(zhì)粒6.DNA酶消化1小時(shí)后從pORF-mIL12-PELGE-NP提取出的質(zhì)粒7.DNA酶消化4小時(shí)后從pORF-mIL12-PELGE-NP提取出的質(zhì)粒8.DNA酶消化10小時(shí)后從pORF-mIL12-PELGE-NP提取出的質(zhì)粒具體實(shí)施方案下面再以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明加以進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1精確稱取PELGE10mg，加到丙酮中構(gòu)成有機(jī)相。將治療基因如pORF IL-12質(zhì)粒100μg溶于雙蒸水中形成水相。將質(zhì)粒溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取普朗尼克F68加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為3％，構(gòu)成外水相。內(nèi)水相與外水相的體積比為1∶6-1∶10。將初乳加到外水相中，高壓乳勻機(jī)乳化，將所得乳液用磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑4-5小時(shí)，使丙酮揮發(fā)完全，即得PELGE納米粒的膠體溶液。加入3％的甘露糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例2精確稱取PELGE10mg，加到二氯甲烷(DCM)和丙酮的混合有機(jī)溶劑中(DCM和AC的體積比為60-100/0-40)構(gòu)成有機(jī)相。將治療基因如pORF IL-12質(zhì)粒100μg溶于雙蒸水中形成內(nèi)水相。將質(zhì)粒溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取聚乙烯醇(PVA)加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為2％，構(gòu)成外水相。將初乳加到外水相中，超聲乳化30秒，將所得乳液放入燒杯中，磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑3小時(shí)，使二氯甲烷和丙酮揮發(fā)完全，即得PELGE納米粒的膠體溶液。加入3％的葡萄糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例3精確稱取PELGA20mg，加到二氯甲烷(DCM)中構(gòu)成有機(jī)相。將治療基因如pORF IL-12質(zhì)粒300μg溶于雙蒸水中形成內(nèi)水相。將質(zhì)粒溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取聚乙烯醇(PVA)加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為1％，構(gòu)成外水相。將初乳加到外水相中，高壓乳勻機(jī)乳化1min，將所得乳液磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑4-5小時(shí)，使二氯甲烷揮發(fā)完全，即得PELGA納米粒的膠體溶液。加入3％的乳糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例4精確稱取PELGE500mg，加到丙酮中構(gòu)成有機(jī)相。將抗癌藥物如米托蒽醌(DHAQ)25mg溶于雙蒸水中形成水相。將DHAQ溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取普朗尼克F68加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為3％，構(gòu)成外水相。內(nèi)水相與外水相的體積比為1∶4-1∶8。將初乳加到外水相中，高壓乳勻機(jī)乳化，將所得乳液用磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑4-5小時(shí)，使丙酮揮發(fā)完全，即得PELGE納米粒的膠體溶液。加入3％的甘露糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例5精確稱取PELGE50mg，加到二氯甲烷(DCM)和丙酮的混合有機(jī)溶劑中(DCM和AC的體積比為60-100/0-40)構(gòu)成有機(jī)相。將抗癌藥如米托蒽醌(DHAQ)2mg溶于雙蒸水中形成內(nèi)水相。
將DHAQ溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取右旋糖苷70加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為1％，構(gòu)成外水相。將初乳加到外水相中，超聲乳化30s，將所得乳液放入燒杯中，磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑3小時(shí)，使二氯甲烷和丙酮揮發(fā)完全，即得PELGE納米粒的膠體溶液。加入3％的甘露糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例6精確稱取PELGA100mg，加到丙酮中構(gòu)成有機(jī)相。將抗癌藥物如米托蒽醌(DHAQ)5mg溶于雙蒸水中形成內(nèi)水相。將DHAQ溶液加入有機(jī)相中其勻化后形成初乳。稱取右旋糖苷40加入雙蒸水中使其充分溶解，調(diào)節(jié)使其濃度為1％，構(gòu)成外水相。將初乳加到外水相中，高壓乳勻機(jī)乳化，將所得乳液磁力攪拌蒸發(fā)有機(jī)溶劑4-5小時(shí)，使丙酮揮發(fā)完全，即得PELGA納米粒的膠體溶液。加入3％的乳糖作為支架劑，常規(guī)凍干保存。
實(shí)施例7精確稱取PELGA/PELGE、PVA以及胸腺五肽，將PVA、胸腺五肽分別溶于水，配制成一定濃度備用。將PELGA/PELGE溶于二氯甲烷，量取胸腺五肽溶液，加入其中，在冰浴下，200-500W超聲3-30秒，間歇5-30秒，如此反復(fù)5-1次制成初乳。加入PVA溶液，再重復(fù)上述超聲操作。待形成了均勻的復(fù)乳后，恒溫?cái)嚢钃]去二氯甲烷。再在所得乳白色膠體溶液中加入3％的乳糖或3％的甘露糖作為支架劑，常規(guī)冷凍干燥即得。
權(quán)利要求
1.一種新型高分子材料載藥納米粒，其特征在于它用高分子材料PELGE或PELGA與所載藥物為基因治療所用的質(zhì)粒、核酸疫苗、反義寡聚脫氧核苷酸、核酶或水不溶性、水難溶性、水溶性化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物，在溶劑(水或有機(jī)溶劑)存在下，經(jīng)機(jī)械攪拌或高壓乳勻后，加入或不加入支架劑，凍干制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥納米粒，其特征在于載體材料用不同分子量和不同LA∶GA比例以及不同PEG含量的PELGE或PELGA材料，其分子量為1.0×103-6.0×104；LA/GA為100/0-50/50；PEG含量為5-50％，粒徑在5-600nm可控，其有機(jī)溶劑殘余量低于限量的1/10。
3.一種新型高分子材料的載藥納米粒的制備方法，其特征在于包括以下步驟a)將PELGE或PELGA材料溶于有機(jī)溶劑中制成有機(jī)相；b)取適量治療基因如pORF IL-12質(zhì)?；蚧瘜W(xué)藥物如鹽酸米托蒽醌(DHAQ)或阿霉素(ADR)或多肽、蛋白類藥物如胸腺五肽加入上述有機(jī)相中，將其勻化后形成初乳；c)將此初乳滴加入外水相的溶液中，充分勻化，室溫下磁力攪拌2-8小時(shí)，或高壓乳勻，即得納米粒膠體溶液；d)納米粒膠體溶液中加入適量的支架劑(或不加支架劑)，常規(guī)凍干保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載藥納米粒的制備方法，其特征在于有機(jī)溶劑為二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的體積比為50-100/0-50。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載藥納米粒的制備方法，其特征在于外水相為聚乙烯醇(PVA)或普朗尼克F68或右旋糖苷，其濃度為0-5％。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載藥納米粒的制備方法，其特征在于乳化方式有超聲乳化，高壓乳勻方式。超聲乳化1-6次，每次5-10秒，強(qiáng)度為10-600W；高壓乳勻1-8次，強(qiáng)度5000-25000Kpa。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載藥納米粒的制備方法，其特征在于加入的支架劑有葡萄糖、乳糖或甘露糖等，其含量為1-10％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的載藥納米粒，其特征在于表面光滑圓整，無(wú)粘連，粒徑在5-600nm可控，包封率50-99.5％。緩釋期8小時(shí)起至4周。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的載藥納米粒的制備方法，其特征在于抗核酸酶的能力為用DNA酶I(0.32U/μgDNA)消化10小時(shí)后，質(zhì)粒DNA無(wú)降解；載有pORF LacZ質(zhì)粒的納米粒對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的轉(zhuǎn)染率在10-95％。
10.一種新型藥用高分子材料載藥納米粒的用途，其特征在于可用于基因治療的質(zhì)粒、核酸疫苗、反義寡聚脫氧核苷酸、核酶的納米粒制劑或作為化學(xué)藥物如水不溶性、水難溶性、水溶性化學(xué)藥物的納米粒制劑或多肽、蛋白類藥物的納米粒制劑的血管內(nèi)注射、肌肉注射或口服給藥劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種藥用高分子材料(PELGE/PELGA)載基因或化學(xué)藥物或多肽、蛋白類藥物納米粒及其制備方法和用途。載體材料用不同分子量和不同LA∶GA比例以及不同PEG含量的PELGE材料，載基因或化學(xué)藥物或蛋白類藥物的納米粒的制法為乳化——蒸發(fā)法，在機(jī)械攪拌或高壓乳勻機(jī)作用下制備出PELGE或PELGA納米粒。這類共聚物在水中自組裝成納米?；蚰z束，其中相對(duì)疏水性的PLGA段聚集成核，親水性的聚乙二醇形成親水性的殼。本發(fā)明制法簡(jiǎn)單，工藝成熟，性能穩(wěn)定，納米粒表面光滑，均勻，無(wú)粘連，載藥量和包封率高，適于大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)。其應(yīng)用包括作為基因治療的質(zhì)粒、核酸疫苗、反義寡聚脫氧核苷酸或核酶的納米粒制劑或作為化學(xué)藥物如水不溶性、水難溶性、水溶性化學(xué)藥物的納米粒制劑或多肽、蛋白類藥物的納米粒制劑的血管內(nèi)注射、肌肉注射或口服給藥劑型。
文檔編號(hào)A61K48/00GK1608675SQ20031011076
公開(kāi)日2005年4月27日 申請(qǐng)日期2003年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月22日
發(fā)明者張志榮, 孫遜, 段友容 申請(qǐng)人:四川大學(xué), 成都康弘科技實(shí)業(yè)(集團(tuán))有限公司