專利名稱：環(huán)杷明在治療牛皮癬和其它皮膚病中的用途的制作方法
背景技術(shù)：
細(xì)胞分化在產(chǎn)生多細(xì)胞生物體中起關(guān)鍵作用。在人體中，許多組織中的細(xì)胞不僅在發(fā)育過程中、而且在出生后的生命中進(jìn)行分化以產(chǎn)生生物體發(fā)揮正常功能所需的新細(xì)胞類型。從一種細(xì)胞類型分化成另一種細(xì)胞類型的信號可以來源于直接環(huán)境中的其它細(xì)胞和非細(xì)胞組織成分和/或來源于更遠(yuǎn)離的組織和器官(例如激素形式)。細(xì)胞對新信號的反應(yīng)的確定也是復(fù)雜的且取決于信號的性質(zhì)或信號組以及所述細(xì)胞更多的內(nèi)在特征(例如其分化狀態(tài)和染色質(zhì)結(jié)構(gòu))。在人每天的生活過程中，許多細(xì)胞通過不同機(jī)制損耗(由于急性和慢性損害和因其它原因?qū)е碌某绦蛐约?xì)胞死亡)。這些損耗的細(xì)胞一般被其前體、先祖細(xì)胞和干細(xì)胞受到調(diào)節(jié)的增殖和分化所取代。人皮膚對環(huán)境損害(例如物理性創(chuàng)傷)比對許多內(nèi)部組織具有相對更大的敏感性，但充分適應(yīng)于這些情況且表現(xiàn)出其最外層的恒定損耗和取代。從表皮最外層脫落的死亡細(xì)胞一般被表皮的基底層細(xì)胞增生所取代且通過這些細(xì)胞的分化產(chǎn)生上基層。因環(huán)境和/或遺傳原因?qū)е碌倪@種分化過程異常產(chǎn)生不同的疾病，其皮膚表現(xiàn)一般易于檢測到。涉及非表皮細(xì)胞分化障礙的皮膚病也是可變的。這些疾病主要原因中的差異導(dǎo)致其有不同的表現(xiàn)和臨床表現(xiàn)，而細(xì)胞分化異常是它們中的一致特征。已知表現(xiàn)出細(xì)胞分化異常的皮膚病的非限制性實(shí)例包括尋常鱗癬、片層狀魚鱗癬、掌跖角化病、毛發(fā)紅糠疹、毛囊角化病和幾種類型的皮膚腫瘤。這些皮膚病的原因一般難以理解。然而，細(xì)胞分化調(diào)節(jié)的復(fù)雜性和多種調(diào)節(jié)因素的存在意味著分化異常有時(shí)可能是主要影響其它過程的異常所繼發(fā)的。在不清楚地了解原因和機(jī)理的情況下，可用的這些疾病的治療策略一般難以有效(Braun-Falco O.等(2000)Dermatology，2nded.，Springer-Verlag，Berlin)。
環(huán)杷明是天然存在于藜蘆屬植物中的甾類生物堿。這些植物對食草妊娠動物的致畸性使得將環(huán)杷明鑒定為活性化合物(Keeler R.F.(1969)Phytochemistry 8223-225)。環(huán)杷明如何可以表現(xiàn)出致畸性通過它是hedgehog/平滑信號傳導(dǎo)的抑制劑這一發(fā)現(xiàn)而得到揭示(Incardona J.P.等(1998)Development 1253553-3562；Cooper M.K.等(1998)Science 2801603-1607)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)聲hedgehog蛋白誘導(dǎo)發(fā)育中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中腹細(xì)胞前體的分化(Goodrich L.V.等(1998)Neuron 211243-1257)。因此，用環(huán)杷明在發(fā)育中的小雞大腦中抑制hedgehog/平滑信號傳導(dǎo)途經(jīng)與防止腹細(xì)胞形成有關(guān)且由此與前腦無裂畸形有關(guān)(Incardona J.P.等(1998)Development 1253553-3562；Cooper M.K.等(1998)Science 2801603-1607)。已知前腦無裂畸形為以藜蘆屬為食的綿羊羊羔的常見畸形(Binns W.等(1963)Am J.Vet.Res.241164-1175)。據(jù)報(bào)導(dǎo)環(huán)杷明還抑制其它系統(tǒng)中的細(xì)胞分化，包括骨髓細(xì)胞分化成紅細(xì)胞(DetmerK.等(2000)Dev.Biol.222242)和尿殖竇分化成前列腺(Berman D.M.等(2000)J.Urol.163204)。
從上述現(xiàn)有技術(shù)概括的教導(dǎo)中令人意外和相反的發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明起抑制細(xì)胞分化的作用(Incardona J.P.等(1998)Development 1253553-3562；Cooper M.K.等(1998)Science 2801603-1607；Detmer K.等(2000)Dev.Biol.222-242；Berman D.M.等(2000)J.Urol.163204)，我們發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明顯著誘導(dǎo)表現(xiàn)出細(xì)胞分化抑制的基底細(xì)胞癌細(xì)胞分化(TasS.等(2001)PCT/TR01/00027，WO02/078703).。類似地，環(huán)杷明能夠使牛皮癬損害表皮的表皮細(xì)胞恢復(fù)正常分化(Tas S.等(2002)PCT/TR02/00017，WO 02/078704)。此外，從上述報(bào)導(dǎo)中令人意外地發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明對轉(zhuǎn)化細(xì)胞的存活力沒有不良影響(Taipale J.等(2000)Nature 4061005-1009)，環(huán)杷明-誘導(dǎo)的基底細(xì)胞癌細(xì)胞分化伴隨有大量這些細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡(Tas S.等(2001)PCT/TR01/00027、WO 02/078703)。
發(fā)明概述環(huán)杷明可有效地引起腫瘤細(xì)胞分化和編程性細(xì)胞死亡，這種情況不僅發(fā)生在基底細(xì)胞癌中，而且發(fā)生在其它皮膚腫瘤中。在用環(huán)杷明治療時(shí)，來源于毛囊/表皮細(xì)胞系的腫瘤(例如毛發(fā)上皮瘤)和來源于黑素細(xì)胞的腫瘤(例如黑素細(xì)胞痣)迅速消失。環(huán)杷明-誘導(dǎo)的對來自患有牛皮癬的患者的皮膚的牛皮癬損害的清除也與使受損表皮細(xì)胞分化有關(guān)。我們公開了通過使用由環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成的治療組合物和/或通過用皮質(zhì)類固醇預(yù)治療損害進(jìn)一步顯著地提高了環(huán)杷明在治療牛皮癬中的有效性。
附圖簡述

圖1A表示1位29歲男性治療前肘前區(qū)牛皮癬損害(～7×8mm)的外觀。
圖1B表示用環(huán)杷明霜治療24小時(shí)后與圖1B相同的損害和不進(jìn)行治療44小時(shí)的隨訪(從治療開始第68小時(shí))。
圖1C表示1位29歲男性治療前三角肌區(qū)上的牛皮癬損害(～9×11mm)。
圖1D表示在用含有等體積環(huán)杷明和17-丙酸氯倍他索霜劑(0.5mg/g)的預(yù)混合霜治療第68小時(shí)時(shí)與圖1C相同的損害。
圖1E表示1位29歲男性在用17-丙酸氯倍他索霜劑(0.5mg/g)治療48小時(shí)后索下區(qū)上的牛皮癬損害(～11×12mm)。
圖1F表示在用環(huán)杷明霜取代17-丙酸氯倍他索(0.5mg/g)治療到第24小時(shí)時(shí)與圖1E相同的損害。
圖1G表示具有免疫組織化學(xué)方法檢測的EGFR的無損害皮膚組織。觀察到表皮中顯示出EGFR的細(xì)胞限于基底層。200X原始放大倍數(shù)。
圖1H表示具有免疫組織化學(xué)方法檢測的EGFR的未治療的牛皮癬損害皮膚組織。觀察到損害表皮中的上基細(xì)胞表現(xiàn)出顯著增加的EGFR表達(dá)。200X原始放大倍數(shù)。
圖1I表示切下前用環(huán)杷明霜治療24小時(shí)且然后通過免疫組織化學(xué)方法對EGFR染色的牛皮癬損害皮膚組織。觀察到表皮中顯示出EGFR的細(xì)胞限于基底層。200X原始放大倍數(shù)、圖2A表示1位82歲的男性在治療前面頰上的毛發(fā)上皮瘤和附近的痣。
圖2B表示用環(huán)杷明治療24小時(shí)后與圖2A中相同的皮膚區(qū)域。
圖2C表示來自圖2B中所示帶有殘留的腫瘤細(xì)胞的切下的皮膚區(qū)域的切片。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
圖2D表示來自與圖2C中相同的組織的另一個(gè)區(qū)域。除大量編程性細(xì)胞死亡的細(xì)胞和通過除去它們形成的胞囊結(jié)構(gòu)外，還觀察到腫瘤被單核細(xì)胞浸潤。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
圖3A表示1位59歲男性在治療前下眼瞼上色素沉著的BCC。
圖3B表示在用環(huán)杷明治療第3天時(shí)與圖3A中相同的BCC。
圖3C表示來自圖3B中所示BCC的治療區(qū)的切片。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
圖3D表示來自圖3B中所示BCC的治療區(qū)切片上殘留腫瘤細(xì)胞面積的封閉視野。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
圖3E表示從治療前圖3A中所示BCC得到的鉆取活組織檢查材料的切片。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
圖3F表示含有圖3A中箭頭標(biāo)記的BCC結(jié)節(jié)部分的切片。治療3天后切下組織且不治療的6天隨訪。H&E，400X原始放大倍數(shù)。
彩色印刷將與說明書附圖1-2頁(圖1A、圖1B、圖1C、圖1D、圖1E、圖1F、圖1G、圖1H、圖11、圖2A、圖2B、圖2C、圖2D、圖3A、圖3B、圖3C、圖3D、圖3E、圖3F)相同圖的彩色印刷以附圖1a-2a頁加入，因?yàn)榭梢詫⒁蛐再|(zhì)導(dǎo)致的免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)和發(fā)現(xiàn)以最佳彩色方式而非灰色等級傳送；我們需要慎重考慮專利管理機(jī)構(gòu)的這一實(shí)際要求并保持頁面作為本專利申請的組成部分。不過，如果專利管理機(jī)構(gòu)認(rèn)為必要，那么可以將該附圖1a-2a頁從本專利申請中除去。
發(fā)明詳述我們公開了環(huán)杷明可有效地誘導(dǎo)幾種細(xì)胞類型分化且可以在我們公開的條件下獲得在體內(nèi)具有充分選擇性的這種誘導(dǎo)的分化(沒有不適當(dāng)?shù)牟涣甲饔?，從而可獲得對許多具有與細(xì)胞分化抑制相關(guān)的一致特征的疾病的良好治療有效性。公開了在腫瘤(包括惡性腫瘤和良性腫瘤)中環(huán)杷明誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化通常與腫瘤細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡(程序性死亡)有關(guān)，由此增添了環(huán)杷明的抗腫瘤的治療有效性。通過使用由在適宜藥物載體中的環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成的治療組合物甚至可以進(jìn)一步增加環(huán)杷明在牛皮癬中尚無先例的治療有效性(公開在上述PCT/TR02/00017、WO 02/078704中)。
可以將環(huán)杷明溶于乙醇或另一種適宜的溶劑且可以將其與適宜的藥物載體混合，這取決于所需的施用方式。就局部施用而言，可以將環(huán)杷明溶于乙醇或另一種適宜的溶劑且可以將其與適宜的基質(zhì)霜、軟膏或凝膠混合。還可以將環(huán)杷明混入水凝膠或其它能夠控釋的藥物劑型中且可以使其吸附在皮膚貼劑上。使用通過將環(huán)杷明在乙醇中的溶液與基質(zhì)霜混合至得到所示環(huán)杷明終濃度得到的霜劑獲得了本文圖1A-圖1I和圖2A-圖2D以及圖3A-圖3F中所示的作用。所用的基質(zhì)霜主要由重石蠟油(10％w/w)、凡士林(10％w/w)、十八烷醇(8％w/w)、polyoxylsteareth-40(3％w/w)和水(68％w/w)制成，而還能夠配制另一種適宜的基質(zhì)霜。環(huán)杷明與皮質(zhì)類固醇(均為甾類分子)的脂與水溶解性和分子結(jié)構(gòu)的相似性有利于它們在相同的藥物載體中混合。環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇在藥物劑型中的最佳濃度和最佳給藥劑量和施用方案顯然可以受到如特定藥物劑型、特定皮質(zhì)類固醇和所治療損害的確定位置和特性這類因素的影響；不過，可以通過下列眾所周知的公開最優(yōu)化方法測定這些因素。獲得圖1C和圖1D中所示作用中所用的皮質(zhì)類固醇為在基質(zhì)霜終濃度～0.55mM的17-丙酸氯倍他索(環(huán)杷明在相同霜中的濃度為9mM)。用于預(yù)治療圖1E中所示損害的皮質(zhì)類固醇為在基質(zhì)霜中終濃度～1.1mM的17-丙酸氯倍他索。通過用～50mM氫化可的松取代該霜中的17-丙酸氯倍他索獲得相似的皮質(zhì)類固醇作用。注意到本領(lǐng)域中眾所周知的其它皮質(zhì)類固醇分子也是合適的且能夠以適宜的濃度取代上述皮質(zhì)類固醇分子(對指定的皮質(zhì)類固醇而言，適宜濃度也是本領(lǐng)域中公知的)。
圖1A表示1位29歲男性治療前肘前區(qū)牛皮癬斑片。每4小時(shí)將約20μl環(huán)杷明霜(在上述基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)施用在該損害上，持續(xù)24小時(shí)。然后停止治療并隨訪損害。在治療的第8小時(shí)損害顯示紅斑減少且然后在未治療的隨訪期中也持續(xù)消退至第3天時(shí)圖1B中所示的狀態(tài)并在第4天時(shí)變得無法檢測到。
圖1C表示同一患者治療前在三角肌區(qū)皮膚上的另一個(gè)牛皮癬斑片。在每4小時(shí)將約20μ1含有～9mM環(huán)杷明和～0.55mM17-丙酸氯倍他索(在基質(zhì)霜中)的霜劑施用在該損害上。該損害在第8小時(shí)也表現(xiàn)出紅斑減少且在第3天時(shí)變得無法檢測到(圖1D表示其在第68小時(shí)的外觀)。在同一患者中，用含有～1.1mM17-丙酸氯倍他索(但不含環(huán)杷明)的霜劑在每4小時(shí)或8小時(shí)覆蓋的其它牛皮癬損害在相同期限中沒有顯示出可檢測到的改變(即這些損害在第3天時(shí)仍然保持)。甚至在一半濃度下，我們使用同一患者的其它損害也觀察到了對環(huán)杷明的增強(qiáng)的治療反應(yīng)，促使我們對由環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成的治療組合物進(jìn)一步評價(jià)。我們還評價(jià)了使用局部用皮質(zhì)類固醇治療牛皮癬損害、隨后用環(huán)杷明霜(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)治療的方案。圖1E表示同一患者在施用環(huán)杷明前索下區(qū)上的牛皮癬斑片。單獨(dú)用皮質(zhì)類固醇霜將該損害治療48小時(shí)，然后停止施用皮質(zhì)類固醇并每4小時(shí)使用～20μl環(huán)杷明霜(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)治療。圖1F表示施用環(huán)杷明霜的第24小時(shí)的損害且到該時(shí)間時(shí)損害接近完全消失。
使用半定量標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)牛皮癬損害的嚴(yán)重程度通過下列方式進(jìn)行對損害的紅斑、突起和鱗片進(jìn)行分別評分且然后計(jì)算總評分而得到所謂的該損害的EES評分的評分(Bowman P.H.等(2002)J.Am.Acad.Dermatol.46907-913)。表I表示通過EES評分評價(jià)對不同治療形式的治療反應(yīng)的比較。觀察到在治療牛皮癬損害中使用由環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成的治療組合物比使用僅含環(huán)杷明作為活性組分的組合物顯著提高了治療有效性。用皮質(zhì)類固醇將損害預(yù)治療1天、隨后用環(huán)杷明霜(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)治療的方案類似地提高了治療有效性。表I表示用含有環(huán)杷明的組合物治療1天且然后在不進(jìn)行任何治療的情況下隨訪的牛皮癬損害也發(fā)生消退，但消退速度一般相對較緩慢。盡管后一種特性可能具有某些臨床實(shí)踐應(yīng)用的價(jià)值，但是預(yù)計(jì)大部分患者優(yōu)選更快速地清除其損害。
單獨(dú)的環(huán)杷明霜以遠(yuǎn)快于使用如上所述的常規(guī)治療方法(PCT/TR02/00017、WO 02/078704)和本文獲得的速度使牛皮癬損害消退和清除。然而，當(dāng)將環(huán)杷明與皮質(zhì)類固醇聯(lián)用或在用皮質(zhì)類固醇預(yù)治療后使用環(huán)杷明時(shí)，治療反應(yīng)能夠進(jìn)一步得到提高。這一特性增加了環(huán)杷明療法的臨床應(yīng)用且可能部分與皮質(zhì)類固醇的抗炎作用有關(guān)。已經(jīng)充分認(rèn)識到了炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子對牛皮癬損害發(fā)展的作用(Krueger J.G.等(1990)J.Invest.Dermatol.94135S-140S)。已知表皮生長因子受體(EGFR)及其一種或多種配體(例如轉(zhuǎn)化生長因子α)的表達(dá)在牛皮癬損害表皮中顯著增加。它們可以建立進(jìn)一步通過由炎癥使表皮EGFR增加而產(chǎn)生自分泌刺激環(huán)(Krueger J.G.等(1990)J.Invest.Dermatol.94135S-140S)。然而，對單獨(dú)的環(huán)杷明霜(而不是對單獨(dú)的皮質(zhì)類固醇)非常規(guī)的快速治療反應(yīng)和實(shí)際上停止施用環(huán)杷明后牛皮癬損害持續(xù)消退這一事實(shí)與環(huán)杷明(而非皮質(zhì)類固醇)對關(guān)鍵/接近的致病過程的有效干預(yù)一致。因?yàn)镋GFR在牛皮癬損害表皮上基層中的超表達(dá)可以建立自分泌刺激環(huán)且由于EGFR表達(dá)返回至表皮的基底層被視為有效治療各種形式牛皮癬的第一種跡象(King L.E.Jr等(1990)J.Invest.Dermatol.9510S-12S)，所以評價(jià)EGFR表達(dá)模式對環(huán)杷明治療的反應(yīng)。為了該目的，將抗人EGFR的小鼠單克隆抗體EGFR.113(Novocastra Labs.Ltd.，U.K.)用作初級抗體并如制造商推薦的進(jìn)行免疫組織化學(xué)測定。圖1I表示在牛皮癬損害上施用環(huán)杷明霜使EGFR表達(dá)模型迅速正常化且免疫組織化學(xué)檢測的EGFR在治療的第24小時(shí)再次大部分局限于表皮的基底層(圖1I)。環(huán)杷明治療損害后的EGFR表達(dá)模型(圖1I)與未損害皮膚中觀察到的無區(qū)別(圖1G)。另一方面，用安慰劑霜(即不含環(huán)杷明的基質(zhì)霜)治療的牛皮癬損害皮膚持續(xù)表現(xiàn)出顯著相反的病理模型和EGFR在表皮上基層中的超表達(dá)(圖1H)。因此，根據(jù)EGFR表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)可以判斷環(huán)杷明治療對牛皮癬損害還具有快速治療作用(King L.E.Jr等(1990)，J.Invest.Dermatol.9510S-12S)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明使基底細(xì)胞癌細(xì)胞分化與其編程性細(xì)胞死亡(程序性死亡)有關(guān)(PCT/TR02/00017、WO 02/078704)。圖2A-圖2D表示環(huán)杷明的這類作用并非局限于基底細(xì)胞癌。毛發(fā)上皮瘤是與導(dǎo)致hedgehog-平滑信號傳導(dǎo)增加的遺傳改變有關(guān)的腫瘤(Vorechovsky I等(1997)Cancer Res.574677-4681；Nilsson M.等(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 973438-3443)。圖2A表示82歲男性在治療前面頰上的毛發(fā)上皮瘤且圖2B表示僅接觸環(huán)杷明霜24小時(shí)后的相同皮膚區(qū)域(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明；在每3小時(shí)將～25μl霜直接施用在腫瘤上)。由于快速消退，所以在第24小時(shí)停止治療并切下相當(dāng)于原始腫瘤的整個(gè)皮膚區(qū)域用于研究。圖2C和圖2D表示在第24小時(shí)含有殘留的腫瘤細(xì)胞的組織區(qū)且顯示在這些殘留的腫瘤細(xì)胞中顯著的編程性細(xì)胞死亡活性。觀察到因腫瘤細(xì)胞以編程性細(xì)胞死亡方式去除而產(chǎn)生的胞囊空間(圖2C、圖2D)和腫瘤的單核細(xì)胞浸潤(圖2D)。在本專利中另一個(gè)值得關(guān)注的發(fā)現(xiàn)為在治療的第24小時(shí)接近位于治療腫瘤的痣的尺寸減小且色素沉著(圖2B與圖2A)。當(dāng)環(huán)杷明能夠從施用的相鄰區(qū)域擴(kuò)散時(shí)，所述的痣(良性黑素瘤)看起來對相對低濃度的環(huán)杷明敏感。實(shí)際上，在另一位志愿者中使用環(huán)杷明霜(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)治療黑素痣也類似地產(chǎn)生快速除色素作用和痣消失(數(shù)據(jù)未顯示)。
圖3A表示1位59歲男性在治療前下眼瞼上的色素沉著的基底細(xì)胞癌(BCC)。將環(huán)杷明霜(在基質(zhì)霜中的18mM環(huán)杷明)施用在該患者的所有結(jié)節(jié)上，但不包括箭頭標(biāo)記的一個(gè)。僅接受從相鄰治療區(qū)擴(kuò)散的環(huán)杷明的這個(gè)結(jié)節(jié)可以接觸相對低濃度的環(huán)杷明。當(dāng)這一腫瘤色素沉著的性質(zhì)有利于臨床隨訪時(shí)，在第3天停止治療(在每4小時(shí)施用～20μl環(huán)杷明)，此時(shí)治療區(qū)上的腫瘤顯著消退，但仍然含有可見的部分(圖3B)。然后在不進(jìn)行治療的情況下探察腫瘤用于可能的后期作用研究。在不進(jìn)行治療的情況下沒有觀察到臨床明顯的進(jìn)一步消退且在隨訪的第6天(從治療開始的第9天)切下相當(dāng)于原始腫瘤的皮膚面積。從腫瘤腫瘤區(qū)得到的蘇木精-伊紅染色的切片顯示了缺乏腫瘤細(xì)胞的許多胞囊空間(圖3C)。被覆這些胞囊的上皮不存在(圖3C)與預(yù)先由腫瘤細(xì)胞占據(jù)的組織區(qū)域中的這些胞囊的表現(xiàn)一致。此時(shí)(未治療隨訪的第6天)，組織切片顯示相對少量的編程性細(xì)胞死亡的細(xì)胞(圖3C)與已知從活組織中快速清除的編程性細(xì)胞死亡細(xì)胞一致。另一方面，特別是接近胞囊邊緣的殘留腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出顯示棘狀的分化特征的細(xì)胞的非尋常高的頻率(例如該區(qū)域趨于圖3C的下左側(cè)；用更清晰的較高放大倍數(shù)觀察到來自圖3D中的另一個(gè)區(qū)域作為典型)。分化的相似區(qū)域或胞囊在獲自開始治療前相同腫瘤的鉆取活組織檢查材料中不存在(圖3E)。接受相對低濃度環(huán)杷明的腫瘤結(jié)節(jié)(圖3A中由箭頭標(biāo)記)在隨訪的第6天具有大胞囊中心(圖3F)。然而，該結(jié)節(jié)的殘余周邊持續(xù)使細(xì)胞具有典型的BCC形態(tài)，不過，細(xì)胞具有分化特征(例如具有擴(kuò)大和更具嗜酸性的細(xì)胞質(zhì))的頻率再次增加且在周圍存在較小的胞囊(圖3F)。因此，盡管腫瘤對最佳濃度環(huán)杷明的反應(yīng)相對迅速，但是接觸最適度以下濃度遺留了在隨訪期中持續(xù)生長的腫瘤細(xì)胞。
這些實(shí)施例進(jìn)一步解釋了所述治療方法在使腫瘤細(xì)胞分化和編程性細(xì)胞死亡以及在使表現(xiàn)出hedgehog-平滑信號傳導(dǎo)增加的腫瘤臨床迅速消退中的有效性。對具有不同基因型的不相關(guān)患者的幾種獨(dú)立的腫瘤的有效性與所述治療方法的一般應(yīng)用一致。根據(jù)我們在以前公開的組織學(xué)/免疫組織化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)(PCTITR01/00027、WO 02/078704)，在所述條件下用環(huán)杷明治療沒有顯示出對正常組織成分(包括公認(rèn)的干細(xì)胞)的過度的有害影響。此外，在撰寫本文時(shí)已經(jīng)隨訪2年以上的施用環(huán)杷明的以前皮膚部位持續(xù)表現(xiàn)出健康樣的皮膚和毛發(fā)，從而提示對干細(xì)胞具有功能性保護(hù)作用且長期使用安全。
本文和以前公開的環(huán)杷明的大部分生物和治療作用(WO02/078703、WO02/078704)具有一致的特征，即它們與細(xì)胞分化起因有關(guān)。由此特別關(guān)注其它分子可以由環(huán)杷明衍生或按照它們發(fā)揮與環(huán)杷明相似的受體結(jié)合特性和生物和治療作用的方式合成這些分子。這類分子在本文中稱作″環(huán)杷明衍生物″。將本文所用的術(shù)語″環(huán)杷明衍生物″定義如下含有涉及環(huán)杷明與其生物靶結(jié)合的環(huán)杷明分子部分且還含有環(huán)杷明母體分子修飾部分的分子，按照這類方式使得新衍生的分子能夠持續(xù)與相同的生物靶(即平滑蛋白)特異性結(jié)合以發(fā)揮本發(fā)明和WO 02/078703和WO02/078704中公開的環(huán)杷明的生物作用。環(huán)杷明的這類修飾可以包括一種或多種對環(huán)杷明分子允許的取代或缺失環(huán)杷明分子上的分子基團(tuán)或其它的分子基團(tuán)(特別是小分子基團(tuán)，諸如甲基)，條件是所得分子穩(wěn)定且具有特異性結(jié)合與發(fā)揮本發(fā)明和WO 02/078703和WO 02/078704中公開的環(huán)杷明生物作用的環(huán)杷明相同的生物靶的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于從環(huán)杷明衍生這類新分子且本領(lǐng)域技術(shù)人員也易于例如通過測試本申請以及WO 02/078703和WO 02/078704中公開的生物作用來確定在新衍生的分子中環(huán)杷明具有的生物作用繼續(xù)或消除。
表I.牛皮癬損害對不同類型治療的反應(yīng)的半定量評價(jià)
*紅斑、突起和鱗片評分的總和(每個(gè)按0-4的等級，具有0.5的增加，如Bowman P.H.等所述(2002)J.Am.Acad.Dermatol.46907-913)。在″僅1天″治療中，用環(huán)杷明持續(xù)治療僅1天。然后在不進(jìn)行治療的情況下隨訪損害并測定EES評分。顯示了在每一治療類型中評分的損害數(shù)量。在第4天前切下用于組織病理學(xué)/免疫組織化學(xué)分析的損害進(jìn)行的評分不包括在本評價(jià)和計(jì)算中。(環(huán)杷明+CS)霜治療指的是用含有～9mM環(huán)杷明和～0.55mM17-丙酸氯倍他索的霜劑治療或在用含有～1.1mM17-丙酸氯倍他索的霜劑預(yù)治療1天后用含有～18mM環(huán)杷明的霜劑治療。這兩種類型治療的結(jié)果相似且由此以單組計(jì)算。
權(quán)利要求
1.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有與細(xì)胞分化受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
2.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有與皮膚細(xì)胞分化受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
3.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有牛皮癬的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
4.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有與程序性細(xì)胞死亡受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
5.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有與皮膚細(xì)胞或來源于它們的腫瘤細(xì)胞程序性死亡受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
6.用于對患有牛皮癬的患者進(jìn)行治療施用的藥物組合物，由在藥物上可接受的載體中的環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成。
7.權(quán)利要求6的藥物組合物，其特征在于環(huán)杷明的濃度為10mM-20mM且皮質(zhì)類固醇是濃度為0.5mg/g-1.0mg/g的17-丙酸氯倍他索或濃度為10mM-50mM的氫化可的松。
8.環(huán)杷明或如本說明書中所述的環(huán)杷明衍生物在制備用于對患有與細(xì)胞分化受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
9.環(huán)杷明或如本說明書中所述的環(huán)杷明衍生物在制備用于對患有與皮膚細(xì)胞分化受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療施用的藥物中的用途。
10.環(huán)杷明或如本說明書中所述的環(huán)杷明衍生物在制備用于對患有牛皮癬的患者進(jìn)行治療的藥物中的用途。
11.環(huán)杷明或如本說明書中所述的環(huán)杷明衍生物在制備用于對患有與程序性細(xì)胞死亡受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療施用的藥物中的用途。
12.環(huán)杷明或如本說明書中所述的環(huán)杷明衍生物在制備用于對患有與皮膚細(xì)胞或來源于它們的腫瘤細(xì)胞程序性死亡受損相關(guān)的疾病的患者進(jìn)行治療施用的藥物中的用途。
13.環(huán)杷明或環(huán)杷明的藥物上可接受的鹽在制備用于對患有與色素沉著增加相關(guān)的痣或皮膚病的患者進(jìn)行治療施用的藥物中的用途。
全文摘要
含有環(huán)杷明的藥物組合物能夠使表現(xiàn)出細(xì)胞分化抑制的皮膚細(xì)胞克服這種抑制。這類組合物有效地治療與細(xì)胞分化受損相關(guān)的疾病。在腫瘤中，環(huán)杷明誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化通常伴隨有腫瘤細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡，由此增添了治療有效性。通過使用由環(huán)杷明和皮質(zhì)類固醇組成的組合物可以顯著提高環(huán)杷明在治療牛皮癬中的有效性，而牛皮癬為一種與細(xì)胞分化受損相關(guān)的常見疾病。
文檔編號A61P17/06GK1835748SQ03808784
公開日2006年9月20日 申請日期2003年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月19日
發(fā)明者辛南·塔斯, 奧克泰·阿夫西 申請人:辛南·塔斯