專(zhuān)利名稱(chēng)：動(dòng)物腦提取物和苦瓜提取物的組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的腦提取神經(jīng)活性物質(zhì)，具體地說(shuō)涉及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)節(jié)苷脂(Ganglioside)、和苦瓜提取物的復(fù)方藥物、保健品和食品。
背景技術(shù)：
神經(jīng)節(jié)苷脂是主要存在于哺乳動(dòng)物的腦灰質(zhì)，是神經(jīng)元膜的特征性成分。目前認(rèn)為細(xì)胞膜上的神經(jīng)節(jié)苷脂類(lèi)物質(zhì)的變化對(duì)調(diào)節(jié)神經(jīng)元和細(xì)胞內(nèi)外信息的傳遞有重要意義。研究表明，外原性神經(jīng)節(jié)苷脂于細(xì)胞膜結(jié)合后能增加神經(jīng)生長(zhǎng)因子的功能，促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)，加速神經(jīng)功能的恢復(fù)。增加感覺(jué)神經(jīng)、交感神經(jīng)和中樞膽堿能神經(jīng)元軸索生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，神經(jīng)節(jié)苷脂具有周?chē)窠?jīng)鎮(zhèn)痛作用。臨床實(shí)驗(yàn)表明，神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變有一定的療效。
在中樞神經(jīng)損傷修復(fù)中有重要的作用，自最早發(fā)現(xiàn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF以來(lái)，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，它們對(duì)特定的神經(jīng)元的發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育成熟后對(duì)維持神經(jīng)元的存活及功能起重要作用。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)對(duì)損傷的黑質(zhì)紋狀體的神經(jīng)元、視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞以及脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元有修復(fù)作用，為巴金森氏病、視網(wǎng)膜損傷、萎縮及肌萎縮側(cè)索硬化癥等疾病的治療提供了可能。
目前已有成熟的從動(dòng)物組織中提取、分離純化以神經(jīng)節(jié)苷脂主要成分的腦活性物質(zhì)的技術(shù)。其中，以神經(jīng)節(jié)苷脂為主要成分的保健品腦力鍵在1996年就已經(jīng)獲得了國(guó)家衛(wèi)生部的批準(zhǔn)。
苦瓜為葫蘆科植物苦瓜的果實(shí)，全國(guó)各地均有栽培，又名錦荔子，癩葡萄，癩瓜，是藥食兩用的食療佳品。明代醫(yī)學(xué)家李時(shí)珍在其巨著《本草綱目》中稱(chēng)贊“苦瓜味苦，性寒涼，無(wú)毒，具有除邪熱，解疲乏，清心明目，益氣壯陽(yáng)之功?！币虼?，苦瓜是炎夏人們健身、消暑、開(kāi)胃的藥食佳蔬。據(jù)測(cè)定，每500克苦瓜含維生素C420mg，比菜瓜、絲瓜高10-20倍，每日吃100克生苦瓜就能獲得全天所需要的維生素C；此外，還含有蛋白質(zhì)4.5g、糖15g、鈣90mg、磷145mg、鐵3mg。
苦瓜入藥療疾亦堪稱(chēng)上品，尤其對(duì)糖尿病的治療效果甚佳，被人們譽(yù)為“植物胰島素”。藥理分析表明，苦瓜含苦瓜多肽類(lèi)物質(zhì)(每百克苦瓜含多肽類(lèi)物質(zhì)25mg)、多種氨基酸及果膠等。印度的科研人員研究發(fā)現(xiàn)苦瓜多肽類(lèi)物質(zhì)有明顯的降低血糖的作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，類(lèi)胰島素物質(zhì)不僅可使嚴(yán)重糖尿病動(dòng)物的血糖下降，使它恢復(fù)正常，而且不論注射、口服療效都相同；我國(guó)北京大學(xué)醫(yī)學(xué)院的科研人員研究發(fā)現(xiàn)，苦瓜多肽類(lèi)物質(zhì)有快速降糖，調(diào)節(jié)胰島功能，修復(fù)B細(xì)胞，增加胰島素的敏感性，預(yù)防改善并發(fā)癥，調(diào)節(jié)血脂，提高免疫力的作用。
很多專(zhuān)利公開(kāi)了以苦瓜提取物為主要原料或添加劑制成的中藥藥品、保健品和食品。如《一種苦瓜降糖膠囊及其制備工藝》申請(qǐng)?zhí)?8102198-0上述專(zhuān)利和文獻(xiàn)所披露的分別以神經(jīng)節(jié)苷脂為主要活性成分的腦提取活性物質(zhì)和苦瓜提取物為主要成分的藥物、保健品和食品均忽略了這兩種成分連用后，在各自用量減少的情況下，呈現(xiàn)的相互的協(xié)同作用，其功效未能充分發(fā)揮。因此，提供一種能夠發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)的以神經(jīng)節(jié)苷脂、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子為主要成分的腦提取活性物和苦瓜提取物的組合物是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是提供一種以神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)節(jié)苷脂為主要成分的腦提取活性物質(zhì)和苦瓜提取物配制的藥物、保健品和食品，以克服現(xiàn)有技術(shù)作用單一的缺陷，使其功效比其任何單一成分的制品，具有更顯著的增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶功能。
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題之二是公開(kāi)一種分離腦源性神經(jīng)因子的方法。
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題之三是公開(kāi)上述的藥物、保健品和食品在制備預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的制品中的應(yīng)用。
神經(jīng)系統(tǒng)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)。人體各體統(tǒng)及其功能均受神經(jīng)系統(tǒng)的影響和支配，因此神經(jīng)系統(tǒng)是人體最重要的系統(tǒng)。神經(jīng)系統(tǒng)的疾病給病人帶來(lái)極大的痛苦。糖尿病是一種內(nèi)分泌失調(diào)的代謝性疾病，表現(xiàn)為以血糖升高為主要指標(biāo)，伴有蛋白質(zhì)和脂肪代謝紊亂。隨著病程的延長(zhǎng)可以并發(fā)許多其他疾病，整體上可以分為神經(jīng)系統(tǒng)疾病和血管的病變，研究表明，患病3年的糖尿病人中，有70％的病人已經(jīng)出現(xiàn)早期的神經(jīng)病變。兩者中神經(jīng)病變是關(guān)鍵，因?yàn)樯窠?jīng)病變使神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，影響血管正常的收縮和舒張，同時(shí)通過(guò)影響NOS的活性，進(jìn)一步影響循環(huán)功能，從而并發(fā)一系列的疾病，如神經(jīng)性膀胱炎、糖尿病足、糖尿病性白內(nèi)障等，給病人造成極大的痛苦。隨著生活水平的提高，糖尿病的發(fā)病率越來(lái)越高，在臨床以及日常生活中，急需一種有防治功效，可以長(zhǎng)期應(yīng)用且毒副作用小的藥物、保健品和食品。本發(fā)明配方中的以神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)節(jié)苷脂為主要成分的腦活性提取物和苦瓜提取物具有協(xié)同多靶點(diǎn)立體作用的特點(diǎn)，一方面，苦瓜通過(guò)降低血糖水平，使非酶糖基化水平降低，阻斷多元醇代謝旁路的開(kāi)放。另一方面，神經(jīng)節(jié)苷脂、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等通過(guò)修復(fù)受損的神經(jīng)細(xì)胞，使神經(jīng)和循環(huán)系統(tǒng)的功能趨于正常，阻斷并發(fā)癥的發(fā)生。
本發(fā)明的藥物、保健品和食品的組分和重量百分含量以腦活性提取物質(zhì)和苦瓜提取物的總量計(jì)為腦提取物 1-20％苦瓜提取物 80-99％優(yōu)選的含量為腦提取物 1％-7.5％苦瓜提取 92.5％-99％較優(yōu)選的含量為腦提取物 7.5％-15％苦瓜提取物 92.5％-95％較優(yōu)選的含量為腦提取物 15％-20％苦瓜提取物 80％-85％最優(yōu)選的含量為腦提取物 1％-8％苦瓜提取物 92％-99％上述配比中為不含添加劑，在實(shí)際使用中可添加藥品制劑或食品可以接受的任何載體，如淀粉、蒸餾水等，采用公知的方法制備成任何一種食品、保健品和藥劑學(xué)上的劑型，如口服液、膠囊和注射劑等。
上述腦提取物中的神經(jīng)節(jié)苷脂可采用專(zhuān)利《一種分離純化制備神經(jīng)節(jié)苷脂工藝》申請(qǐng)?zhí)?5102590，公開(kāi)的技術(shù)進(jìn)行制備?；虿捎檬惺鄣膶氈巧镏破饭镜纳窠?jīng)節(jié)苷脂提取物。
苦瓜提取物采用市售產(chǎn)品，如湖南金農(nóng)生物資源股份有限公司的苦瓜提取物。
為更好的闡明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，以下將用該配方配制的產(chǎn)品，進(jìn)行安全性實(shí)驗(yàn)、不同配比的功效實(shí)驗(yàn)，及其與單一成分的功效實(shí)驗(yàn)的比較來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容。
一.安全性毒理實(shí)驗(yàn)32只，22月齡，雄性Wistar大鼠，體重(450±28)g，平均分成4組，分別為80ml/kg劑量組(其中含腦活性提取物125mg，苦瓜提取物500mg)；40ml/kg劑量組(其中含腦活性提取物62.5mg，苦瓜提取物250mg)；20ml/kg劑量組(其中含腦活性提取物31.23mg，苦瓜提取物125mg)和生理鹽水對(duì)照組，連續(xù)喂養(yǎng)60天。
結(jié)果服用口服液組及對(duì)照組大鼠均無(wú)死亡，比較各組體重、生化指標(biāo)臟器重量以及組織學(xué)檢查均正常，服用本發(fā)明物組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。說(shuō)明本發(fā)明物制品無(wú)毒性，可以安全服用。
二功能實(shí)驗(yàn)(一).增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶能力動(dòng)物15月齡，初老年雄性Wistar大鼠48只，體重350±32g。隨機(jī)分成4組，每組12只，正常對(duì)照組(A)給予生理鹽水，其余三組分別給予(B)腦提取物8mg+苦瓜提取物100mg；(C)腦提取物20mg；(D)苦瓜提取物200mgMorris水迷宮及實(shí)驗(yàn)材料Morris水迷宮參照有關(guān)文獻(xiàn)制作。為一不銹鋼的圓形水池，直徑200cm，高50cm，水深30cm，水溫控制在(26±1)℃。池壁表明4個(gè)入水點(diǎn)，由此將水池等分為4個(gè)象限，任選其中1個(gè)象限，正中放置一個(gè)直徑11cm、高29cm的平臺(tái)。迷宮上方按有攝象機(jī)，并和錄象機(jī)及顯示器連接，自動(dòng)錄入大鼠游泳軌跡進(jìn)行分析。測(cè)試程序包括(1)定位航行實(shí)驗(yàn)，歷時(shí)5D，每天上下午個(gè)4次，將大鼠面向池壁從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄其在2min內(nèi)尋找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果大鼠在2分鐘內(nèi)未找到平臺(tái)，則由實(shí)驗(yàn)者用手牽引其至平臺(tái)上，讓大鼠停留10s，再放回籠中。(2)空間探索實(shí)驗(yàn)第6天撤除平臺(tái)，將大鼠任選1個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄其2min的游泳軌跡，分別計(jì)算其跨越個(gè)象限內(nèi)的游泳距離以及在原平臺(tái)象限游泳的時(shí)間和距離占正個(gè)游泳時(shí)間和距離的百分比。
統(tǒng)計(jì)方法單因素方差分析，根據(jù)方差齊性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別采用Newman-Keulsf法或Scheffe法。多因素重復(fù)測(cè)量方差分析采用Huynh-feldt。顯著性水平取α＝0.05。
結(jié)果大鼠空間探索所反映記憶能力的變化各組大鼠撤除平臺(tái)后2min在各象限游泳的距離(R、P、L、O分別代表大鼠在原平臺(tái)右側(cè)象限，原平臺(tái)象限、原平臺(tái)左側(cè)象限，和原平臺(tái)對(duì)側(cè)象限)。經(jīng)單因素方差分析，服用本發(fā)明物組的大鼠在原平臺(tái)象限游泳的時(shí)間tp和距離lp在總游泳時(shí)間和距離中的比例增加，與正常組比較有極顯著的差異P＜0.01，與其余兩組比較，部分指標(biāo)有顯著性差異P＜0.05，說(shuō)明本發(fā)明物中的腦活性提取物與苦瓜提取物有相互協(xié)同的作用。具體見(jiàn)下表

*與對(duì)照組比較P＜0.05，**與對(duì)照組比較P＜0.01，#與C組比較P＜0.05，
與D組比較P＜0.05。
實(shí)施例實(shí)施例1神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的提取干凈的動(dòng)物腦3000g，用Hank液浸泡，攪碎，2000r/min離心20min。沉淀用Hank液洗2遍，用2.5mol/l的蔗糖PBS重懸，所得的混合物用1.0mol/l和2.5mol/l的蔗糖PBS抽提。1500r/min離心后，收集上層與中間層之間的物質(zhì)。用0.5mol/l的PBS(另加5％的膽酸)浸泡，勻漿后，在4℃下15000r/min離心45min，上清過(guò)GST柱，用2μg/ml谷光苷肽洗液洗脫，收集得到腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子600mg。所得的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子用環(huán)糊精包裹。
實(shí)施例2發(fā)明物的制備將腦提取物1份，苦瓜提取物12.5份，淀粉5份，充分混勻，分裝成膠囊。
實(shí)施例3本發(fā)明物對(duì)糖尿病人血糖、神經(jīng)功能和記憶功能的影響本實(shí)驗(yàn)從2002年11月到2003年3月進(jìn)行，測(cè)試對(duì)象為患糖尿病5年以上的患者，血糖不能控制在正常水平，有四肢針刺麻痛感，年齡40-65歲，均值58.2歲，男女各18人，共36人。隨機(jī)分成A、B、C、D 4組，其中A組服用不含提取物的安慰劑，B組服用本發(fā)明物，劑量為腦提取物8mg+苦瓜提取物100mg/D。C組服用腦提取物，劑量為20mg，D組服用苦瓜提取物200mg，在服用本實(shí)施例所說(shuō)的食品或安慰劑前，先對(duì)測(cè)試對(duì)象測(cè)定餐后2小時(shí)血糖、神經(jīng)反射功能和記憶商MQ(按中國(guó)科學(xué)院心理研究所編制的臨床記憶量表計(jì)算)。隨機(jī)把測(cè)試對(duì)象分為兩組，在實(shí)驗(yàn)期間，受試者的原用藥以及飲食控制均保持不變。口服1.5個(gè)月后，對(duì)受試者的餐后2小時(shí)血糖、神經(jīng)反射功能和記憶商MQ再進(jìn)行一次測(cè)試。
結(jié)果表明，服用本發(fā)明物的(B)組效果最佳，與A組比較，血糖、神經(jīng)反射功能得分、記憶商有極顯著性或顯著性差異，分別為6.85±2.8mmol/l，9.7±3.5mmol/l；2.9±0.5，1.8±0.4(P＜0.01)；103.5±10.5，97.8±11.6(P＜0.05)。B組與C、D組比較有顯著性差異。B組中有7例四肢針刺麻通感消失，2例好轉(zhuǎn)，明顯好于其它組，其中2例有神經(jīng)性膀胱炎的患者，也有明顯的改善。具體見(jiàn)下表

*與對(duì)照組比較P＜0.05，**與對(duì)照組比較P＜0.01，#與C組比較P＜0.05，與D組比較P＜0.05。
權(quán)利要求
1.一種動(dòng)物腦的提取物質(zhì)和苦瓜提取物組成的藥品、保健品和食品，其特征在于，該藥物、保健品和食品的組分和重量百分比以動(dòng)物腦中提取的神經(jīng)活性物質(zhì)和苦瓜提取物的總量計(jì)為腦提取物 1——20％苦瓜提取物80——99％其中的腦提取物主要為腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM)的一種或一種以上。
2.如權(quán)利要求1所述的藥品、保健品和食品，一種從動(dòng)物腦中提取神經(jīng)活性因子的方法，其特征在于，干凈的動(dòng)物腦，用Hank液浸泡，攪碎，2000r/min離心20min。沉淀用Hank液洗2遍，用2.5mol/l的蔗糖PBS重懸，所得的混合物用1.0mol/l和2.5mol/l的蔗糖PBS抽提。1500r/min離心后，收集上層與中間層之間的物質(zhì)。用0.5mol/l的PBS(另加5％的膽酸)浸泡，勻漿后，在4℃下15000r/min離心45min，上清過(guò)GST柱，用2μg/ml谷光苷肽洗液洗脫，收集得到腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。所得的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子用環(huán)糊精包裹。
3.權(quán)利要求1所述的藥品、保健品和食品，其特征在于，含量為腦提取物 1％——7.5％苦瓜提取物 92.5％——99％
4.如權(quán)利要求1所述的藥品、保健品和食品，其特征在于，含量為腦提取物 7.5％——15％苦瓜提取物 92.5％——95％
5.如權(quán)利要求1所述的藥品、保健品和食品，其特征在于，含量為腦提取物 15％——20％苦瓜提取物 80％——85％
6.如權(quán)利要求1所述的藥品、保健品和食品，其特征在于，含量為腦提取物 1％——8％苦瓜提取物 92％——99％
7.如權(quán)利要求1-5任一所述的藥物、保健品和食品在治療和預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求1-5任一所述的藥物、保健品和食品在改善記憶中的應(yīng)用
9.以如權(quán)利要求1-5任一所述的藥物、保健品和食品為主要成分，再添加其他一種或幾種物質(zhì)在制備改善記憶、糖尿病及其并發(fā)癥治療和保健制劑中的應(yīng)用。
10.一種用于預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物、保健品和食品，其特征在于，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1-5任一所述的藥物、保健品和食品以及醫(yī)學(xué)上可以接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種動(dòng)物腦中提取的神經(jīng)活性物質(zhì)和苦瓜提取物組成的藥物、保健品和食品及其在延緩衰老、改善記憶、治療和預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥的應(yīng)用。干凈的動(dòng)物腦，用Hank液浸泡，攪碎，離心后，沉淀用Hank液洗2遍，用蔗糖PBS重懸、抽提、離心，收集上層與中間層之間的物質(zhì)。將所得物用加5％的膽酸的PBS浸泡，勻漿后，在4℃下離心，上清過(guò)GST柱，用谷光苷肽洗液洗脫，收得以腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子為主要成分的神經(jīng)活性物質(zhì)，用環(huán)糊精包裹。將動(dòng)物腦提取物(主要成分為腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)節(jié)苷脂)和苦瓜提取物按比例組成組合物。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1522752SQ0315768
公開(kāi)日2004年8月25日 申請(qǐng)日期2003年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月5日
發(fā)明者邵園園, 陳良 申請(qǐng)人:邵園園