專利名稱：內(nèi)皮素受體三肽拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素受體拮抗活性的肽類和非肽類衍生物，其制備方法，含它們的藥物組合物及它們在預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病的用途。
背景技術(shù)：
內(nèi)皮素(Endothelin，簡稱ET)是由血管內(nèi)皮分泌的，它們是一類迄今發(fā)現(xiàn)的收縮血管作用最強的生物因子之一。人類或其它哺乳動物基因組存在三種分別編碼內(nèi)皮素的基因，形成的大內(nèi)皮素在內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶的作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)镋T-1、ET-2、ET-3。它們均為二十一肽，含有兩個二硫橋鍵。ET-1不但表達(dá)于非血管細(xì)胞，而且是唯一存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮素。ET-2和ET-3主要在腦、腎和腎上腺及小腸中。ET與靶細(xì)胞中的特異受體結(jié)合，最終產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。迄今已發(fā)現(xiàn)三類ET受體，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主動脈，心房，胎盤，肺、腦血管及腎臟血管的平滑肌中；ETB存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，脈落叢上皮細(xì)胞，肺、胎血、腎小球內(nèi)皮，心室，腦中等，在血管平滑肌也有分布；ETC則主要分布于內(nèi)皮細(xì)胞中。三種受體對各型ET的親和力不同。內(nèi)皮素及受體在人體內(nèi)具有廣泛的生理病理學(xué)反應(yīng)。參與了如高血壓、充血性心衰、心肌缺血、腦窒息、休克、急性腎衰、肺源性高血壓、血管痙攣性疾病等過程。因此ET受體被認(rèn)為是治療心腦血管疾病的切實可行的新靶點，其受體拮抗劑有助于預(yù)防/治療心血管疾病。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是尋找新的內(nèi)皮素受體拮抗劑。
本發(fā)明人經(jīng)研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)式(I)肽類和非肽類衍生物
R-CO-AA1-AA2-AA3-OH (I)或其立體異構(gòu)體具有良好的內(nèi)皮素受體拮抗活性，因此式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體可作為藥物用于預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)的疾病。
本發(fā)明第一方面涉及式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO；AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，PrO，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA2為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體；AA3為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA3為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還涉及到含至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO。
AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA2為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體；AA3為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA3為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體；及藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及制備式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體的方法，其包括1)將化合物RCO-A-OH與B-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成RCO-A-B-OP，其中R，A，B，如權(quán)利要求1中定義，P為C1-4烷基。
2)將1)中所得產(chǎn)物在1M堿/醇溶液中皂化，然后用酸酸化，生成RCO-A-B-OH，3)將2)中產(chǎn)物RCO-A-B-OH與C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成RCO-A-B-C-OP，其中P為C1-4烷基，所得產(chǎn)物如2)中所述進(jìn)行皂化反應(yīng)，生成式(I)RCO-A-B-C-OH，4)將2)中產(chǎn)物RCO-A-B-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)5-10分鐘，再加入C-ONa，生成RCO-A-B-C-ONa，然后用酸酸化，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
本發(fā)明還涉及式(I)非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體衍生物的制備方法，按本領(lǐng)域已知方法和改良Szelke文獻(xiàn)方法制備，詳細(xì)步驟參見實施例3。
本發(fā)明還涉及式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體在預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病或癥狀的藥物中用途。
本發(fā)明所用術(shù)語“式(I)肽類和非肽類衍生物立體異構(gòu)體”是指其相應(yīng)的D-或L-立體構(gòu)型。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體可選自下面的化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH
5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH
34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002根據(jù)本發(fā)明，式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體可按本領(lǐng)域已知方法、文獻(xiàn)方法或下面所示的反應(yīng)路線1制備反應(yīng)路線1 在反應(yīng)路線1中式R-CO-AA1-OH化合物(其中R，AA1如上定義)與AA2-OP(其中AA2如上定義，P為C1-4烷基，其可選自甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，優(yōu)選甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-OP化合物(其中R，AA1，AA2，P如上定義)。將R-CO-AA1-AA2-OP化合物在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH化合物(其中R，AA1，AA2如上定義)。將式R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP(其中AA3，P如上定義)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成式R-CO-AA1-AA2-AA3-OP(其中R，AA1，AA2，AA3，P如上定義)化合物。然后將所得R-CO-AA1-AA2-AA3-OP在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH?；蛘邔⒒衔颮-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)，再與AA3-ONa生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH三肽衍生物或其立體異構(gòu)體。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類衍生物立體異構(gòu)體是指其相應(yīng)的D-或L-立體構(gòu)型。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類和非肽類衍生物及其立體異構(gòu)體在動物抗ET1受體模型中顯示出優(yōu)良效果，因此可作為心血管藥用于動物，優(yōu)選用于哺乳動物，特別是人。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成分的有效劑量的至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物和/或其立體異構(gòu)體以及常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-90％的式(I)肽類和非肽類和/或其立體異構(gòu)體。藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將式(I)肽類和非肽類衍生物和/或其立體異構(gòu)體與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br>
本發(fā)明式(I)肽類和非肽類衍生物及其立體異構(gòu)體或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質(zhì)體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等?？梢允瞧胀ㄖ苿?、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子，如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸鈣、氯化鈉、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中制成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。為了將給藥單元制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領(lǐng)域常用的所有稀釋劑，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發(fā)明式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應(yīng)，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、在、四個劑量形式給藥。
具體實施例方式
在本發(fā)明中使用的縮寫具有下面的含義Ala-丙氨酸，Gly-甘氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，Ile-異亮氨酸，Leu-亮氨酸，Mob-β-胡椒基丙氨酸Phe-苯丙氨酸，Phg-苯基甘氨酸，Pro-脯氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，Trp-色氨酸，Val-纈氨酸，MeVal-甲基纈氨酸HIM-六亞甲基亞胺，HMPA-六甲基膦酰胺NMM-N-甲基嗎啡啉，TEA-三乙胺，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲酰胺，DCC-二環(huán)己基碳二亞胺，HOBt-1-羥基苯并三唑，THF-四氫呋喃。
本發(fā)明中，所有氨基酸構(gòu)型除注明為D-型外，均為L-型。
實施例下面的實例及生物活性實驗用來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但這并不意味著對本發(fā)明的任何限制。
實施例化合物熔點由RY-1型熔點儀測定，溫度未經(jīng)校正；1H NMR圖譜由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁儀測定；FAB質(zhì)譜由Zabspect高分辨磁質(zhì)譜儀測定；元素分析由Carlo Erba1106型元素分析儀測定；紫外光譜由UV-260紫外可見分光光度計測定；紅外光譜由Magna IRTM550紅外儀測定。實施例制備所用反應(yīng)試劑均為商品化產(chǎn)品。
實施例1HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制備1.1胡椒醇(3，4-methylenedioxybenzyl alcohol)的制備15.0克(0.1mol)胡椒醛溶于20毫升甲醇中，加入12毫升37％的甲醛(0.12mol)，攪拌，混合物加熱至65℃，使其全部溶解。當(dāng)其完全溶解后，立即停止加熱，水浴冷卻，迅速加入12克氫氧化鈉/12毫升水(0.3mol)的溶液，溫度急劇升高，加熱，保持內(nèi)溫70℃攪拌反應(yīng)40分鐘，然后升溫回流20分鐘。冷卻，加入30毫升水，用苯提取(15毫升×4)，合并提取液，水洗兩次，苯層以無水硫酸鈉干燥。苯層濃縮，得油狀液體14.8克(97.4％)，Rf＝0.30(石油醚-乙酸乙酯＝1∶1)。
1.2胡椒基氯甲烷(3，4-methylenedioxybenzyl chloride)的制備將68.4克胡椒醇(0.45mol)與110毫升濃鹽酸(1.35mol)混合，激烈攪拌，固體溶解。待全部溶解后，用苯萃取，苯層以水、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥。濃縮苯層，得淡黃色油狀液體76.1克，油泵減壓蒸餾，收集100-120℃/5毫米汞柱的餾份，得66.2克(86.3％)。
1.3 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯的制備將鈉9.0(0.388mol)克在600毫升絕對無水乙醇中回流(98±3℃)，至鈉完全溶解。冷卻至室溫(為白色混濁液體)后，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯84.29克(0.388mol)，攪拌溶解。加入上述制備的胡椒基氯甲烷66.2克(0.388mol)，反應(yīng)液漸變渾濁，油浴回流(100℃±3)3小時。減壓蒸出乙醇，得淡黃色油狀物，慢慢固化，用苯溶解，苯層以10％的碳酸鈉、水各洗兩次后，用無水硫酸鈉干燥。濃縮，冷卻，得無色片狀結(jié)晶107.95克(79.3％)，m.p.109-110℃。TLC檢測石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)，Rf＝0.33。
1.4 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸單乙酯的制備N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯25.45克(0.0725mol)，用250毫升乙醇溶解，室溫滴加6N氫氧化鈉21.75毫升，TLC監(jiān)測至初始反應(yīng)物消失(2.5小時)。冰水浴條件下，滴加6N鹽酸(約21.75毫升)調(diào)至pH3左右，得白色混懸液。濃縮，加入180毫升水，抽濾，得白色粉狀固體，室溫干燥。稱重得22.3克(95.2％)。
1.5 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的制備N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸單乙酯22.3克(0.069mol)用210毫升二氧六環(huán)溶解，油浴回流(108℃±3)3.5小時。反應(yīng)液濃縮，殘余物用150毫升乙酸乙酯溶解，分別用飽和碳酸氫鈉、飽和氯化鈉洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥。濾除干燥劑，濾液濃縮至約15毫升，加入乙醚，放置，有白色結(jié)晶析出。濾集結(jié)晶，石油醚洗兩次，室溫干燥。稱重得14.6克(76.9％)，m.p.85-87℃。TLC檢測石油醚∶乙酸乙酯(1∶2)，Rf＝0.63。
1.6 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的拆分稱量N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯11.16克(40.0mmol)，于研缽中研成細(xì)粉，混懸于280毫升磷酸鹽緩沖溶液中，水浴(37℃±1)，溶液呈白色混懸狀。加入枯草桿菌蛋白酶A約2.0毫克，pH值迅速下降，用0.5N氫氧化鈉維持pH7.60左右。5.5小時后，pH值基本保持恒定，繼續(xù)攪拌1.0小時。反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取至紫外燈下(λ＝254nm)無吸收為止，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉洗兩次，無水硫酸鈉干燥。濾除干燥劑，濾液濃縮，得無色塊狀結(jié)晶5.45克(97.7％)(D-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯)；水層于冰水浴中用濃鹽酸調(diào)對pH2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉洗兩次，無水硫酸鈉干燥。濾除干燥劑，濾液濃縮，得無色塊狀結(jié)晶4.70克(93.6％)(L-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸)。
1.7水解對上述所得(L)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸、(D)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯用10％鹽酸回流水解，得到(L)-(2-胡椒基)丙氨酸鹽酸鹽，m.p.235-237℃(分解)，[α]D20＝-13.4°(C＝1.45，1M HCl)(D)-(2-胡椒基)丙氨酸鹽酸鹽，m.p.235-237℃，[α]D20＝+13.1°(C＝1.47，1M HCl)。
IR3080-3020，2560，2480，2040(NH3+)，1600(NH3+，COO-)，1040(-O-CH2-O)；1HNMR(D2O)δ3.1-3.3(2H，-CH2Ar)，4.25(1H，-CHCOOH)，5.90(s，2H，-O-CH2-O)，7.27-6.8-6.9(m，3H，Ar-H)；1.8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制備將D-色氨酸甲酯鹽酸鹽127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入六亞甲基胺甲酰亮氨酸128毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.5小時后，室溫反應(yīng)6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應(yīng)完全后，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得180毫克固體。將該固體溶于2毫升THF中，冰鹽浴冷卻，加入55微升NMM和68毫升氯甲酸異丁酯，反應(yīng)5分鐘后，加入預(yù)先配好的含122.75毫克D-胡椒基丙氨酸鹽酸鹽的10％的碳酸鈉溶液(1毫升)，冰鹽浴反應(yīng)30分鐘后，室溫反應(yīng)1.5小時，減壓濃縮，加入10毫升水，乙醚提取不溶物，水層用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，乙酸乙酯提取(3×15毫升)，合并提取液，以無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得到白色固體290毫克(91.6％)。MS[M+H]+＝634.2，[M+Na]+＝656.4。
TLC檢測氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.68。
實施例2ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH的制備將D-色氨酸甲酯鹽酸鹽127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入ABO-CO-Leu-OH 134毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.5小時后，室溫反應(yīng)6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應(yīng)完全后，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得226毫克固體(100％)。將該固體溶于2毫升DCM中，加入134毫克D-3-氯-4-氟苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.5小時后，室溫反應(yīng)6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應(yīng)完全后，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得310毫克固體(95.2％)。MS[M+H]+＝654.8。TLC檢測氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.52。
實施例3ENP002的制備 的制備將10.24克(0.04mol)HIM-CO-Leu-OH，溶于150毫升乙醚中，加入TEA5.55毫升(0.04mol)，使其溶解，通氮氣保護(hù)。冰鹽浴條件下加入5.71毫升氯甲酸異丁酯，反應(yīng)15分鐘。在該溫度下慢慢加入含3克重氮甲烷的乙醚溶液200毫升，反應(yīng)3小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得固體產(chǎn)物A 5.03克(90％)。MS[M+H]+＝281.4。TLC檢測Rf＝0.70(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.42-1.80(t，11H，HIM環(huán)上8H和亮氨酸側(cè)鏈上3H)，3.20(4H，HIM環(huán)上4H)，4.20(brq，1H，-CHN2)，4.95(brd，1H，α-H)，5.48(s，1H，-NH)。 的制備將4.2克(0.015mol)上述產(chǎn)物A溶于45毫升THF中，冰鹽浴冷卻，慢慢滴加含1.34克溴化氫的二氧六環(huán)溶液20毫升，反應(yīng)3小時。減壓濃縮，以50毫升乙酸乙酯溶解，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得白色固體產(chǎn)物B 4.6克(92.2％)。MS[M+H]+＝334.5。TLC檢測Rf＝0.65(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.32-1.80(t，11H，HIM環(huán)上8H和亮氨酸側(cè)鏈上3H)，3.15(4H，HIM環(huán)上4H)，4.07(s，2H，-CH2Br)，4.55(brd，1H，α-H)，5.08(s，1H，-NH)。 的制備將預(yù)處理過的氫化鈉0.29克(60％)懸浮于5.0毫升DMF中，加入7.2毫升HMPA，通氮氣保護(hù)，慢慢滴加含2.08克(7.2mmol)3-吲哚亞甲基取代丙二酸二乙酯的DMF溶液4毫升，室溫攪拌反應(yīng)40分鐘，形成一混合液。在另一三口瓶中，加入2.0克(6.0mmol)上述產(chǎn)物B，以6毫升DMF溶解，加入1毫升HMPA，慢慢滴加上述形成的混和液，室溫攪拌3小時，將反應(yīng)混和液倒入400毫升冰水中，以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯層用水洗三次，無水硫酸鎂干燥。濾除干燥劑，濃縮濾液，產(chǎn)物經(jīng)皂化、脫羧后，得粗品2.9克，經(jīng)柱分離，得純品C 0.85克(31.8％)。MS[M+H]+＝442.6。TLC檢測Rf＝0.59(氯仿∶甲醇＝6∶1)。
3.4 ENP002的制備將221毫克(0.5mmol)上述產(chǎn)物C溶于2毫升DCM中，加入117毫克(0.5mmol)D-4-氟苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴條件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.5小時后，室溫反應(yīng)6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應(yīng)完全后，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥5小時。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得280毫克固體(92.4％)。MS[M+H]+＝607.5。TLC檢測Rf＝0.80(氯仿∶甲醇∶冰醋酸＝16∶1∶0.5)。
按照實施例2和實施例3的方法合成了以下化合物序號 一級結(jié)構(gòu)分子量 純度(％)1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 598922 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH 612903 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 612964 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 619955 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 619956 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 619937 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH635.5 878 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH635.5 919 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH635.5 9810ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH6809011ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH 6469512ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH 6458213ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH 6458514ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH653.5 9215ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH6709416ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH 6709417ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Pbe(2-CH3-3-Cl)-OH 649.5 9718ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 6459019ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 6059220ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH 6199721ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH 6199522ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH 6199623ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH6809024ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH 6469725ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH653.5 8926ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318227ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318028ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH 649.5 97
29ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 645 9830ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 605 9731ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH 640 9532HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 633 9233HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 633 9334HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 593 9335HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 593 9836DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 651 9437DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH 685.59238DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 677 9539CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 649 8540CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH700 8741CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 675 8442ENP002 606 85其余化合物也可按照實施例2和實施例3的方法和途徑合成。
生物活性實驗材料Wistar大鼠 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心臺式自動平衡記錄儀 上海大華儀器廠ET-1American peptide company10％碳酸鉀自配改良Kreb’s-Ringer緩沖液自配實驗方法樣品溶液的配制定量稱取樣品(實施例1-35的化合物)2×10-6摩爾，加入120微升10％堿金屬碳酸鹽和80微升DMSO溶解，用改良Kreb，s-Ringer緩沖液定量稀釋為5.0毫升，作為貯備液冰箱中保存。用緩沖液稀釋為10-6、10-7、10-8和10-9摩爾四個濃度。
體外血管實驗將大鼠斷頭處死，迅速開胸，摘取主動脈，置于盛有血管營養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，清除血污，仔細(xì)分離血管周圍組織，剪成長約3毫米的動脈環(huán)，分別將兩根直徑為0.1毫米的不銹鋼鋼絲小心穿入，做成三角環(huán)狀。隨后置于盛有10毫升血管營養(yǎng)液的37℃恒溫浴槽中，下端固定，上端通遷張力換能器連于臺式自動平衡記錄儀，持續(xù)通入95％氧氣和5％二氧化碳混合氣。動脈環(huán)負(fù)荷0.5克，穩(wěn)定之后開始給藥。
拮抗實驗先用10nM量的ET-1誘發(fā)血管環(huán)收縮，約10分鐘左右，達(dá)到平臺后，給予10-9M樣品，觀察拮抗收縮效應(yīng)。當(dāng)?shù)蜐舛葲]效時，逐漸升高濃度至10-6M。
結(jié)果按照上述方法，活性測定結(jié)果見下表藥理活性結(jié)果序號 一級結(jié)構(gòu) 拮抗活性(M)10-810-94 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH++15ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH ++18ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++31ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH +32HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++36DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH++37DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH ++38DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++39CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH ++42ENP002++++拮抗活性很強 +拮抗活性中等 -不表現(xiàn)拮抗活性
權(quán)利要求
1.式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO；AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代，當(dāng)AA2為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體；AA3為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA3為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體。
2.權(quán)利要求1的肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，其選自下面化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-C O-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002
3.權(quán)利要求1的肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，其中所述非肽類化合物為ENP002代表的下式化合物
4.藥物組合物，其包括至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體及藥用載體或賦形劑R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO。m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO。AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA2為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體；AA3為非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當(dāng)AA3為非氨基酸，特別是連接氨基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體選自1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002。
6.權(quán)利要求1-3任一要求的肽類和非肽法生物或其立體異構(gòu)體在制備用于預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病的藥物中用途。
7.式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體衍生物的制備方法，其包括1)將化合物R-CO-AA1-OH與AA2-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-OP，其中R，AA1，AA2，如權(quán)利要求1中定義，P為C1-4烷基；2)將1)中所得產(chǎn)物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH；3)將2)中產(chǎn)物R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-OP，其中P為C1-4烷基。所得產(chǎn)物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH；4)將2)中產(chǎn)物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)5-10分鐘，再加入AA3-ONa，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。
8.式(I)非肽類衍生物或其立體異構(gòu)體衍生物的制備方法，按本領(lǐng)域已知方法和改良的Szelke文獻(xiàn)方法制備，詳細(xì)步驟參見實施例3。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素受體拮抗活性的肽類和非肽類衍生物，其制備方法，含它們的藥物組合物及它們在治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病的用途。
文檔編號A61P9/12GK1504480SQ03145929
公開日2004年6月16日 申請日期2003年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月28日
發(fā)明者劉克良, 耿波, 董俊軍, 梁遠(yuǎn)軍, 吳萍, 許笑宇, 李昕, 池木根 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所, 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥