專利名稱：一種替莫唑胺控釋給藥系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種控釋給藥系統(tǒng)，具體地說是一種含有替莫唑胺的控釋給藥系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
替莫唑胺是新穎的抗癌藥物，在鼠腫瘤研究中具有廣譜的抗癌活性，替莫唑胺已經(jīng)在臨床抗癌活性研究中被證明對惡性黑色素瘤、蕈樣霉菌病及高級神經(jīng)膠質(zhì)瘤有效。另外，替莫唑胺在皮下治療小鼠異種移植的腦瘤，肺腫瘤均有效。在體外試驗中，替莫唑胺抗腫瘤活性研究證明具有大量的抗腫瘤活性象腦瘤，卵巢瘤，黑色素瘤，還包括對常規(guī)藥物(dacarbazine，carmustine，cisplatin，doxorubicim，5-fluorouracil，etoposide，and vinblastine)的化療產(chǎn)生耐藥的一些腫瘤。
在小鼠中研究替莫唑胺的藥代動力學(xué)表明，替莫唑胺吸收非?？?，半衰期是1.13h(i.p.)與1.29h(p.o.)。在替莫唑胺I期臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)替莫唑胺吸收迅速，最大血漿濃度是在0.7h，半衰期為1.8h。替莫唑胺被證明具有很好的組織分布經(jīng)由腎，肺，肝，能通過血-腦屏障(Brindley et al.，1986；Newland et al，1997)。但替莫唑胺的血藥濃度衰減過快，需要不斷給藥才能保持有效的血藥濃度，這給患者帶來不便或痛苦。藥物植入片在一定的時間內(nèi)在體內(nèi)可以按照一定的速率釋放藥物。目前，植入片有非生物降解植入片和生物降解植入片，它們在一些藥物中均有所應(yīng)用。但是替莫唑胺的控釋植入片未見有研究成功的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中替莫唑胺反復(fù)給藥的不便，提供一個能保持持續(xù)的治療量的替莫唑胺控釋給藥系統(tǒng)。
本發(fā)明還提供了此替莫唑胺控釋植入片的制備方法。
本發(fā)明替莫唑胺控釋給藥系統(tǒng)包括了載體(高聚合酸酐)和替莫唑胺。其中，替莫唑胺含量為3％-10％％；與聚合酸酐混合并通過此酸酐成囊形成替莫唑胺給藥系統(tǒng)，這個就是替莫唑胺植入片。
本發(fā)明通過以下方案予以實施a.溶解高分子材料于溶劑中以形成高分子材料溶液；b.混合或分散替莫唑胺于高分子材料溶液中形成高分子材料-替莫唑胺混合物；c.高分子材料-替莫唑胺混合經(jīng)噴霧干燥形成微球；d.微球經(jīng)壓片形成植入片。
其中，步驟a中高分子材料選自下列材料聚乙烯、聚丙烯、聚對苯二甲酸乙二酯、塑化聚氯乙烯、交聯(lián)聚酯、聚碳酸酯、聚砜、聚苯乙烯、聚(2-戊烯)、聚(甲基丙烯甲酯)、聚(1.4-亞苯)、聚四氟乙烯和聚合酸酐，優(yōu)選聚酸酐，它是由3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)縮和而成的，CPP和SA的比例為20∶80、50∶50、80∶20、70∶30和30∶70，其中最優(yōu)條件為20∶80；用于聚合物溶解的溶劑是那些只能溶解聚合物而不溶解替莫唑胺或與替莫唑胺發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)，適合的聚合物溶劑包括極性有機(jī)溶劑等，包括二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和丙酮，最優(yōu)的溶劑為二氯甲烷；步驟c中，在噴霧干燥時，控釋物質(zhì)替莫唑胺能與其他的賦形劑或額外的穩(wěn)定劑如緩沖液等混合。載體最好是無毒的，無免疫的，不會引起排斥的物質(zhì)。合適的植入片的材料包括各種聚合酸酐。
本發(fā)明還可以通過下述方案予以實施a.將聚合物溶解在溶劑中形成聚合物溶液；b.在此聚合物溶液中加入替莫唑胺水溶液，超聲乳化形成初乳；c.將上述初乳倒入聚乙烯醇(PVA)中，溶劑揮發(fā)，微球硬化；d.水洗，除去PVA和殘留的溶劑，得到微球；e.微球壓片形成植入片。
其中，步驟a中高分子材料為聚乙烯、聚丙烯、聚對苯二甲酸乙二酯、塑化聚氯乙烯、交聯(lián)聚酯、聚碳酸酯、聚砜、聚苯乙烯、聚(2-戊烯)、聚(甲基丙烯甲酯)、聚(1.4-亞苯)、聚四氟乙烯和聚合酸酐，優(yōu)選聚酸酐，它是由3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)縮和而成的，CPP和SA的比例為20∶80、50∶50、80∶20、70∶30和30∶70，其中最優(yōu)條件為20∶80；用于聚合物溶解的溶劑是那些只能溶解聚合物而不溶解替莫唑胺或與替莫唑胺發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)，適合的聚合物溶劑包括極性有機(jī)溶劑等，包括二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和丙酮，最優(yōu)的溶劑為二氯甲烷；CPP與SA形成的高聚物在二氯甲烷中形成的濃度為1-5％，優(yōu)選濃度為2％；步驟b中替莫唑胺水溶液的體積與有機(jī)相溶劑的比例為1∶100-400，優(yōu)選比例為1∶100。
通過上述兩種方法制備得到的替莫唑胺控釋可以有很多形狀，例如膠片、小球、柱狀、片狀等。
本發(fā)明的替莫唑胺植入片可以通過外科手術(shù)嵌入人或其他的動物身上，通過非全身給藥方式例如植入皮下，入肌肉內(nèi)，顱內(nèi)，陰道內(nèi)，皮膚內(nèi)等。提供需要的替莫唑胺劑量用于治療上述提到的各種疾病。植入片的劑量是根據(jù)上述討論的疾病的需要來決定的。此劑量還依照被治療的組織塊的大小來決定。
本發(fā)明的替莫唑胺釋放系統(tǒng)是能夠不斷的控制釋放出治療量的替莫唑胺。這就意味著在很長的一段時間內(nèi)(大約1小時至4個星期)通過植入片在體內(nèi)控制釋放達(dá)到替莫唑胺的治療效果。本發(fā)明通過控釋系統(tǒng)達(dá)到替莫唑胺的治療效果是非常有意義的，其充分的發(fā)揮了替莫唑胺的生物活性。
本發(fā)明的替莫唑胺植入片可以用不同的載體進(jìn)行制備。植入片中替莫唑胺的持續(xù)釋放由制備不同載體組成的植入片來實現(xiàn)，植入后大約30天后降解。高聚合酸酐材料植入后大約6-8周降解。
實驗例替莫唑胺植入片在動物體內(nèi)藥物釋放動力學(xué)特點本實驗測定了替莫唑胺植入片在動物體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及特點，為臨床藥物合理應(yīng)用提供參考。
實驗材料1.儀器及試劑Agilent1100高效液相色譜儀；ODS反相色譜柱(Supelcolc-C18 250mm×4.6mm，5um)；DAD檢測器；替莫唑胺標(biāo)準(zhǔn)品和替莫唑胺植入片由天津天士力集團(tuán)提供(制備方法同實施例
1)；甲醇，醋酸，醋酸乙酯等均為色譜純。
2.動物成年雄性Wister大鼠，體重200-250g，天津醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。
實驗方法1.替莫唑胺植入片在大鼠腦內(nèi)的溶蝕和釋放將70只大鼠隨機(jī)分為4組，前3組每組21只，組4共7只。每只大鼠術(shù)前實行麻醉，剃毛，乙醇及碘酊消毒。在中線行2cm切口，隨后在距離后部冠狀縫5-6mm和一側(cè)矢狀縫3mm處以牙鉆打孔，使用顯微外科刀在皮質(zhì)上造成一處約4mm深的缺口，前三組分別植入含替莫唑胺3，5，10％的植入片，第4組只植入空白聚合物片。完全止血后，以骨蠟封閉鉆孔，生理鹽水沖洗傷口，手術(shù)夾夾閉頭皮傷口。
植入手術(shù)后的第2，6，12h和第1，3，6，10天，每組分別處死3只動物(組4處死1只)，從腦內(nèi)重新取出植入片，使用干冰進(jìn)行冷凍干燥。使用高效液相色譜法測定植入片中替莫唑胺的含量。
2.替莫唑胺的提取三種不同含量的替莫唑胺植入片以及空白植入片在特定時間點被從大鼠腦內(nèi)回收，經(jīng)凍干處理后，殘留植入片置于2ml流動相中，超聲5min充分溶解，4000rpm 5min離心，取上清液10ul直接進(jìn)樣測定。
3.替莫唑胺含量測定Agilent1100高效液相色譜儀；色譜柱ODS反相柱(Supelcolc-C18 250mm×4.6mm，5um)；流動相甲醇-0.5％醋酸(10∶90)；DAD檢測器，測定波長330nm；流速1ml/min；最低檢出限為0.1mg/ml；替莫唑胺植入片使用乙酸乙酯提取。
4.替莫唑胺的體內(nèi)釋放量的表示 5.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取濃度為100ug/ml的TMZ標(biāo)準(zhǔn)溶液5，10，30，100，200，300，400uL，分別置于離心管中，氮氣流吹干，隨后加入空白植入片，依照TMZ提取方法處理，得到濃度分別為0.25，0.5，1.5，2.5，3.5，5.0，10.0，15.0，20.0ug/ml的系列TMz標(biāo)準(zhǔn)溶液，10ul上清液進(jìn)樣測定峰面積值。以濃度(C)對峰面積(A)作圖，計算線性回歸方程。
實驗結(jié)果1.替莫唑胺植入片在大鼠腦內(nèi)的溶蝕和釋放，見圖1。
表一替莫唑安植入片在大鼠腦內(nèi)累積平均釋藥百分率(x±S，n＝3)2h(％) 6h(％) 12h(％) 1d(％) 3d(％) 6d(％) 10d(％)3％植 9.27± 40.37± 55.54±68.13± 73.82±92.17±100±入片組 0.382.153.534.125.826.422.585％植 11.36±42.51± 57.29±70.14± 75.47±93.11±99.85±入片組 0.573.385.343.694.795.583.7210％植 10.73 44.18± 62.83±74.38±78.89±90.05±100±入片組 ±0.63 2.654.176.136.337.324.292.高效液相色譜測定結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.4-20ug/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
y＝79.4810+14182.0760x r＝0.9999實驗結(jié)論本研究結(jié)果表明，替莫唑胺可以從植入片中緩慢釋放。由藥物釋放量對時間平方根作圖可以看出，替莫唑胺植入片植入早期存在明顯的線性關(guān)系，說明替莫唑胺植入片在大鼠體內(nèi)的降解呈現(xiàn)誘導(dǎo)期和溶蝕期兩個明顯的時相。在植入后的1小時左右的時間里，即開始有游離替莫唑胺被釋放出來。植入片在大鼠腦內(nèi)可以持續(xù)釋放替莫唑胺的時間超過10天。


圖1a替莫唑胺植入片體內(nèi)釋藥曲線，其中“方塊”為含有3％的替莫唑胺，“圓圈”為5％，“三角”為10％。
圖1b以替莫唑胺植入片對時間的平方根作圖，其中“方塊”為含有3％的替莫唑胺，“圓圈”為5％，“三角”為10％具體實施方式
下述實施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明并沒有限制。
實施例1取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以20∶80比例合成生物可降解聚酸酐96g。加入替莫唑胺4g，在室溫狀態(tài)下，通過二氯甲烷混合并且噴霧制成含量為4％的替莫唑胺緩釋微球，殘余二氯甲烷用真空蒸干。
噴霧干燥條件為進(jìn)口溫度70℃；出口溫度65℃；霧化壓力15p.s.i。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000 p.s.i 5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例2取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以80∶20比例合成生物可降解聚酸酐99g。加入替莫唑胺1g，在室溫狀態(tài)下，通過氯仿混合并且噴霧制成含量為1％的替莫唑胺緩釋微球，殘余二氯甲烷用真空蒸干。
噴霧干燥條件為進(jìn)口溫度75℃；出口溫度70℃；霧化壓力15p.s.i。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000 p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例3取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以30∶70的比例合成生物可降解聚酸酐90g。加入替莫唑胺10g，在室溫狀態(tài)下，通過乙酸乙酯混合并且噴霧制成含量為10％的替莫唑胺緩釋微球，殘余二氯甲烷用真空蒸干。
噴霧干燥條件進(jìn)口溫度70℃；出口溫度65℃；霧化壓力15p.s.i。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例4取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以70∶30的比例合成生物可降解聚酸酐95g。加入替莫唑胺5g，在室溫狀態(tài)下，通過二氯甲烷混合并且噴霧制成含量為5％的替莫唑胺緩釋微球，殘余二氯甲烷用真空蒸干。
噴霧干燥條件進(jìn)口溫度75℃；出口溫度60℃；霧化壓力15p.s.i。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例5取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以50∶50的比例合成生物可降解聚酸酐95g。加入替莫唑胺5g，在室溫狀態(tài)下，通過二氯甲烷混合并且噴霧制成含量為5％的替莫唑胺緩釋微球，殘余二氯甲烷用真空蒸干。
噴霧干燥的條件進(jìn)口溫度65℃；出口溫度60℃；霧化壓力15p.s.i。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例6
取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以20∶80比例共聚物于室溫制成2％w/v二氯甲烷溶液，加入適量替莫唑胺水溶液，混合經(jīng)超聲乳化形成w/o初乳。初乳在2％PVA水溶液中經(jīng)高速混合形成乳劑，該乳劑被倒入0.1％聚乙烯醇(PVA)水溶液中于室溫下攪拌4小時。二氯甲烷于室溫蒸發(fā)，微球在PVA水溶液中硬化。用雙蒸餾水洗微球三遍，除去殘余二氯甲烷和PVA。經(jīng)冷凍干燥得到替莫唑胺含量為4％的微球。微球粒徑20微米左右，為流動性的粉末。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例7取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以80∶20比例共聚物于室溫制成1％w/v乙酸乙酯溶液，加入適量替莫唑胺水溶液，混合經(jīng)超聲乳化形成w/o初乳。初乳在2％PVA水溶液中經(jīng)高速混合形成乳劑，該乳劑被倒入0.1％聚乙烯醇(PVA)水溶液中于室溫下攪拌4小時。乙酸乙酯于室溫蒸發(fā)，微球在PVA水溶液中硬化。用雙蒸餾水洗微球三遍，除去殘余二氯甲烷和PVA。經(jīng)冷凍干燥得到替莫唑胺含量為6％的微球。微球粒徑20微米左右，為流動性的粉末。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
實施例8取3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(cpp)與癸二酸(SA)以50∶50比例共聚物于室溫制成5％w/v氯仿溶液，加入適量替莫唑胺水溶液，混合經(jīng)超聲乳化形成w/o初乳。初乳在2％PVA水溶液中經(jīng)高速混合形成乳劑，該乳劑被倒入0.1％聚乙烯醇(PVA)水溶液中于室溫下攪拌4小時。氯仿于室溫蒸發(fā)，微球在PVA水溶液中硬化。用雙蒸餾水洗微球三遍，除去殘余二氯甲烷和PVA。經(jīng)冷凍干燥得到替莫唑胺含量為6％的微球。微球粒徑20微米左右，為流動性的粉末。
根據(jù)理想的植入劑粒徑和替莫唑胺用量，適量的微球在壓模中8000p.s.i5秒壓成包含替莫唑胺的植入片。直徑1.4cm，厚度1.0mm。在氮氣環(huán)境下封入鋁膜中并且以2.2*10Gy伽馬射線滅菌。
權(quán)利要求
1.一種替莫唑胺控釋植入片，其特征在于包括替莫唑胺和藥用載體兩部分，其中的載體為生物可降解高分子材料；替莫唑胺的含量為3％-10％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種替莫唑胺控釋植入片，其特征在于所述的生物可降解高分子材料為聚乙烯、聚丙烯、聚對苯二甲酸乙二酯、塑化聚氯乙烯、交聯(lián)聚酯、聚碳酸酯、聚砜、聚苯乙烯、聚(2-戊烯)、聚(甲基丙烯甲酯)、聚(1.4-亞苯)、聚四氟乙烯和聚合酸酐。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種替莫唑胺控釋植入片，其特征在于所述的生物可將解高分子材料為高聚酸酐。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種替莫唑胺控釋植入片，其特征在于所述的高聚酸酐是由3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)縮和而成的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種替莫唑胺控釋植入片，其特征在于所述的3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)的比例為20∶80。
6.一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.溶解高分子材料于溶劑中以形成高分子材料溶液；b.混合或分散替莫唑胺于高分子材料溶液中形成高分子材料-替莫唑胺混合物；a.高分子材料-替莫唑胺混合經(jīng)噴霧干燥形成微球；b.微球經(jīng)壓片形成植入片。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的高分子材料由3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)縮和而成。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)的比例為20∶80。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的溶劑為二氯甲烷。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的縮和后形成的生物可降解高分子材料為高聚酸酐。
11.一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.將聚合物溶解在溶劑中形成聚合物溶液；b.在此聚合物溶液中加入替莫唑胺，超聲乳化形成初乳；c.將上述初乳倒入聚乙烯醇(PVA)中，溶劑揮發(fā)，微球硬化；d.水洗，除去PVA和殘留的溶劑，得到微球；e.微球壓片形成植入片。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的高分子材料由3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)縮和而成。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于3，4-雙-對位羧苯氧丙烷(CPP)和癸二酸(SA)的比例為20∶80。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的溶劑為二氯甲烷。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種替莫唑胺控釋植入片的制備方法，其特征在于步驟a中所述的縮和后形成的生物可降解高分子材料為高聚酸酐。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有替莫唑胺的藥物控釋系統(tǒng)。它的釋放傳遞系統(tǒng)包括載體為生物可降解高分子材料和3％－10％的替莫唑胺包含于高分子材料內(nèi)。它能在皮下以脈沖的方式從載體中釋放治療量的替莫唑胺，釋放期為1個月到3個月。替莫唑胺控釋植入片可長時間維持有效的血藥濃度，免除了在長期治療腫瘤的過程中需要反復(fù)給藥的不便。
文檔編號A61K9/22GK1600307SQ0313485
公開日2005年3月30日 申請日期2003年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月29日
發(fā)明者王永峰, 費丹 申請人:天津市金士力藥物研究開發(fā)有限公司