專利名稱：中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤的中藥，尤其是冬凌草有效部位提取物及其將該提取物做成抗腫瘤中藥制劑的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
冬凌草，又名冰凌草，學(xué)名Tabdosia rubescens(hemsl.)，系唇形科香茶菜屬多年生草本或亞灌木植物，在我國河南、河北、山西、四川等地有廣范分布，收錄于《中國藥典》1977年版第一部和《衛(wèi)生部中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1992年版。
冬凌草味甘苦，性微寒，具有清熱解毒，消炎止痛，健胃活血等功效，文獻記載可以用于治療急慢性扁桃體炎、咽喉炎、口腔炎等疾病?，F(xiàn)已有市售冬凌草片、冬凌草糖漿等藥品，主要治療口腔炎癥。此外，冬凌草還具有對金黃葡萄球菌、肺炎雙球菌、乙型鏈球菌等有小劑量抑制，大劑量殺傷的作用等其它功效。
近年來發(fā)現(xiàn)冬凌草還具有抗腫瘤活性。冬凌草的醇提物對Hela細胞有明顯抑制作用；對艾氏腹水癌在10g/Kg濃度下注射，腫瘤抑制率可達到60％。臨床實驗表明，冬凌草對食管癌，賁門癌，肝癌等的治療也有一定療效，表現(xiàn)為食欲增加，疼痛減輕，瘤體縮小。
經(jīng)檢索，發(fā)現(xiàn)科技文獻公開了一些研究冬凌草提取工藝及冬凌草的藥理并將冬凌草應(yīng)用于臨床治療的文章，現(xiàn)摘錄如下1、冬凌草葉提取工藝研究《時珍國醫(yī)國藥》.2001，12(4).文摘目的探討以95％乙醇對冬凌草葉進行提取的最佳條件。方法正交試驗，以HPLC法測定提取中冬凌草中甲素的含量為指標(biāo)進行，提取時間4h(提取兩次)，加95％乙醇比10∶1，提取溫度70℃。結(jié)論該方法提取冬凌草葉效果較好。
2、中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素的新工藝《黑龍江醫(yī)藥》.2001，14(1).文摘采用中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素，具有洗脫速度快，分離效率高，溶劑無毒無污染，安全、價廉、易得等優(yōu)點。經(jīng)重結(jié)晶后用薄層掃描法測定含量達99.28％，是一種簡便易行的方法。
3、冬凌草甲素抗突變性研究《癌變.畸變.突變》文摘目的探討冬凌草甲素的抗突變作用。方法采用Ames試驗及小鼠骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗。結(jié)果冬凌草甲素在未加S9條件下，對TA98及TA100回復(fù)突變具有明顯的抑制作用，其最高抑制率分別達89.1及80.2％，對由環(huán)磷酰胺(CP)誘導(dǎo)的小鼠骨髓PCE微核發(fā)生率也有顯著的拮抗作用(P＜0.01)。結(jié)論冬凌草，甲素在本實驗條件下具有抗突變活性。
4、冬凌草素的抗癌分子病理與臨床應(yīng)用策略《廣東藥學(xué)》.2000，10(4).文摘冬凌草素是我國首先從民間草藥冬凌草(Raddosia rubescens)發(fā)現(xiàn)的新結(jié)構(gòu)化合物，是一個具有特效低毒的抗癌新藥，尤其對食管癌和賁門癌有效。本文綜述了近年來關(guān)于冬凌草素是研究的最新成果，從分子藥理學(xué)與腫瘤生物學(xué)角度探討了該藥物抗癌作用的分子機制，抗癌活性與化合物結(jié)構(gòu)的關(guān)系，以及冬凌草素與化療藥物如博來霉素的協(xié)同增效作用。
5、冬凌草甲素對活性氧自由基的清除作用《河南醫(yī)學(xué)研究》.1999，8(2).文摘研究冬凌草甲素對不同模型系統(tǒng)產(chǎn)生的活性氧自由基的清除作用。方法自由基檢測用電子處旋共振自由基旋捕集技術(shù)和化學(xué)光法。結(jié)果二種方法檢測均發(fā)現(xiàn)Orid明顯清除黃嘌呤/黃嘌呤氧酶系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧自由基以及Fenton反應(yīng)中的羥自由基(-OH)，Orid170mol/l對O-2和-OH的清除率分別為49.4％和75.2％。Orid對多形核白細胞(PMN)呼吸爆發(fā)明產(chǎn)生活性氧自由基同樣顯示明顯清除作用。
6、冬凌草甲素及其乙酰衍生物的電子結(jié)構(gòu)與抗癌活性《鄭州大學(xué)學(xué)報》自科版1998，30(1)文摘本文用MNDO方法在VAX8350計算機上對冬凌草甲素及其乙酰衍生物進行了量子化學(xué)計算研究，給出了軌道及其能級，電荷密度，并對其電子結(jié)構(gòu)與抗癌活性的關(guān)系進行了討論。
7、冬凌草的研究進展《中國藥學(xué)雜志》.1998，33(10).文摘目的對冬凌草近30年來在化學(xué)、藥理等方面的研究進展進行綜述。方法查閱1997年以前醫(yī)藥中文資料和美國CA資料的研究成果，綜述了冬凌草的主要化學(xué)成分、提取工藝、含量測定法、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用。結(jié)果主要成分為貝殼杉烯類二萜，不同產(chǎn)地的冬凌草含有有不同的二萜成分，冬凌草甲素具有多方面的生理活性。結(jié)論冬凌草一定的抗癌作用，且毒、副作用小，可望開發(fā)成新的抗癌藥，造福于人類。
8、冬凌草乙素的電子結(jié)構(gòu)與抗癌活性《河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》.1998，33(3).文摘采用MNDO方法，在VAX8350計算機上，對冬凌草乙素進行量子化學(xué)計算。給出了分子軌道及其能級，電荷密度，鍵級。結(jié)果表明抗癌活性區(qū)α-亞甲基環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)中的部分原子組成了易接受電子的πLUMO軌道，易在該區(qū)域發(fā)生親核加成反應(yīng)。
9、冬凌草不同提取工藝的研究《中草藥》.1997，28(7)文摘對冬凌草不同提取工藝進行了研究，并以冬凌草甲素為指標(biāo)分別對其進行了含量測定。結(jié)果表明，破碎提取法較其它提取法提取的冬凌草甲素含量為最高。
10、冬凌草治療食管癌，賁門癌54例臨床療效觀察《河南腫瘤學(xué)雜志》.1993，6(3).文摘用冬凌草治療食管腫瘤、賁門腫瘤，并觀察其療效。
11、冬凌草甲素的晶體結(jié)構(gòu)《結(jié)構(gòu)化學(xué)》.1992，11(6).文摘對冬凌草甲素的晶體結(jié)構(gòu)進行分析，及介紹其作為抗癌藥的應(yīng)用。
12、冬凌草的新藥源探討《河南科學(xué)》.1989，7(3).文摘從冬凌草提取得到的四環(huán)二萜，可以作為抑菌、抗腫瘤的藥源。
13、抗癌藥物冬凌草甲素的分子構(gòu)型研究《化學(xué)學(xué)報》.1992，50(5).文摘分析了冬凌草甲素的分子構(gòu)型，對其抗癌性能進行研究。
14、冬凌草甲素衍生物及其制備方法，中國專利，申請?zhí)枺?9101179，申請人，鄭州大學(xué)文摘本發(fā)明在不破壞冬凌草甲素活性中心的前提下，通過改變α-環(huán)外亞甲基環(huán)戊酮的張力和溶解度，提供了在通式1中R↑[1]為H或C1～C12的烷基或酰基，或為葡萄糖基、或半乳糖基、或木糖基，R↑[2]為H或葡萄糖基、或半乳糖基、或木糖基，或甘露糖基；在通式2中R↑[1]為H或C1～C12的烷基或?；?；R↑[2]，R↑[3]分別為C2～C18的烷基，或為異丙叉基、苯甲叉基。所示的冬凌草甲素衍生物這種冬凌草甲素衍生物具有更高的抗腫瘤細胞活性。同時，本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法。
從上述檢索結(jié)果了解到，醫(yī)療單位和中藥科研部門對冬凌草進行的研究是冬凌草甲素、冬凌草乙素、冬凌草甲素衍生物、貝殼杉烯類二萜的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗癌作用，文獻中給出冬凌草部分萜類化合物的結(jié)構(gòu)為冬凌草甲素和冬凌草乙素。
冬凌草甲素 冬凌草乙素但文獻中并未全部公開冬凌草其它有效成分，也未給出冬凌草其它有效成分在治療惡性腫瘤上的應(yīng)用。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明人經(jīng)過研究和試驗，對冬凌草用各種不同的方法進行提取，分析提取物的成分，特別是冬凌草提取物中的萜類化合物，除了得到冬凌草甲素、冬凌草乙素、冬凌草甲素衍生物以外，還得到了一些區(qū)別于公開文獻的化學(xué)物質(zhì)，將這些化學(xué)物質(zhì)用于治療惡性腫瘤，收到了更好的效果。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下具有抗腫瘤的冬凌草有效部位提取物包括冬凌草總萜，它包括冬凌草甲素(rubescensinA)及衍生物、冬凌草乙素(rubescensin B)、冬凌草丙素(rubescensin C)、冬凌草丁素(rubescensin D)、冬凌草戊素(rubescensin E)和冬凌草辛素(rubescensin F)等二萜類化合物和齊墩果酸和熊果酸等三萜類化合物。該提取物中冬凌草總萜含量在50％以上，最好不低于55％。具體含量可以通過化學(xué)方法或儀器分析確定。
本發(fā)明人通過結(jié)構(gòu)分析還發(fā)現(xiàn)，冬凌草素均系貝殼杉烯骨架四環(huán)二萜類化合物，其結(jié)構(gòu)中與環(huán)外亞甲基共軛的環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)是其生理活性中心，裂環(huán)或亞甲基飽和則會使其作用失效。其他一些基團起著增強活性的作用，如冬凌草甲素由于具有6-位羥基和15-位羰基形成的氫鍵而具有更高的活性，這些特性公開文獻未見報道。
本發(fā)明提供了上述冬凌草總萜的制備方法，這些制備方法比起現(xiàn)有的提取方法更能有效地得到全面的化合物。
本發(fā)明還提供了冬凌草總萜制成醫(yī)藥上習(xí)用的制劑，并作為治療惡性腫瘤的有效化合物的應(yīng)用，這些惡性腫瘤包括肝癌、食管癌、胃癌、腸癌、乳腺癌、肺癌和黑色素瘤等。
以上所述的醫(yī)藥上習(xí)用的制劑，包括針劑和口服劑，其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑、緩釋劑、口服液等；針劑包括各種水針劑和粉針劑。
以上所述的具有抗腫瘤的冬凌草有效部位提取物(冬凌草總萜)提取的方法包括以下步驟1、用乙醇溶液或復(fù)合溶劑回流提取粉碎后冬凌草3-4次，溶劑用量為原料的5-8倍，獲得冬凌草粗提物；2、合并粗提物，減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；3、將上述濃縮后的提取物用石油醚萃取，脫去脂和色素，殘留物用乙醚萃取3-4次；4、合并乙醚萃取物，回收乙醚，得冬凌草總萜粗提物；5、將冬凌草總萜粗提物用低碳醇溶解，過大孔吸附樹脂柱，以梯度10-80％乙醇溶液為流動相進行洗脫。用TLC方法監(jiān)測流出產(chǎn)物，收集含冬凌草總萜的流出產(chǎn)物；6、合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，冷凍或噴霧干燥至粉，得冬凌草總萜。如此時再加入熱丙酮溶液重結(jié)晶，可以得到較純的單體化合物。
上述提取步驟1中，冬凌草總萜的提取可以采取冷浸提取法、滲漉提取法、超聲破碎提取法、回流提取法等。所用提取溶劑有不同濃度的乙醇、乙醚、丙酮或它們的混合物等。本發(fā)明優(yōu)選回流提取法，采用溶劑為70-95％乙醇溶液。
上述提取步驟3中，冬凌草粗提物的脫色可以采用有機溶劑提取和活性炭吸附等方法，本發(fā)明小批量提取時優(yōu)選石油醚萃取法，大批量生產(chǎn)時，采取活性炭吸附脫色法。
上述提取步驟5中，柱層析分離純化，可以采取以中性和極性大孔吸附樹脂、硅膠、氧化鋁、離子交換樹脂為填充料進行吸附，本發(fā)明優(yōu)選大孔吸附樹脂。所用洗脫液可以是乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、石油醚或它們的混合液及水溶液。本發(fā)明優(yōu)選乙醇水溶液。當(dāng)乙醇濃度增加到50％后可以得到以冬凌草甲素為主的產(chǎn)品，且色素及其它雜質(zhì)很大程度上被吸附去除。
上述提取步驟6中，減壓濃縮優(yōu)選溫度為50-60℃，真空度為400-600Mpa。對于干燥條件，可以采用真空干燥、常壓蒸汽干燥、冷凍干燥和噴霧干燥。本發(fā)明優(yōu)選冷凍干燥和噴霧干燥。
根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，其中藥劑型可以是注射針劑和口服劑，其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑、緩釋劑、口服液等；針劑包括各種水針劑和粉針劑。在制備口服制劑時，選用的輔料可以是淀粉、羧甲基纖維素、環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鎂、聚乙二醇、等常規(guī)填充劑，可采用藥劑學(xué)常規(guī)制備工藝；在制備注射制劑時，可以采用加入脂質(zhì)體、聚乙二醇、藥用酒精、去氧膽酸、膽固醇等常規(guī)填充劑，可采用藥劑學(xué)常規(guī)制備工藝，故在此不祥述。
本發(fā)明優(yōu)選的是注射針劑，特別是脂質(zhì)體水針劑和凍干粉針劑。
為保證藥物的質(zhì)量，在生產(chǎn)過程中需要對冬凌草主要有效成分進行監(jiān)控。本發(fā)明提出一套可行的質(zhì)量控制方法。
薄層層析(孔C)方法通過TLC，可以對提取液和柱層析洗脫液中主要活性成分進行控制。TLC條件展開劑為氯仿∶丙酮＝8∶1-2，用50％硫酸乙醇顯色。
高效液相色譜(HPLC)法通過HPLC，采用外標(biāo)法測定最終產(chǎn)品中單個有效成分含量。HPLC條件設(shè)備Waters 600，Waters 996泵，Photodiode Array Detector檢測器；色譜柱Dikma，Diamonsil C18，4.6mm*25cm；流動相甲醇∶水＝60∶40(V∶V)；檢測溫度室溫；檢測波長240nm；流速0.8ml/min。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步是1、用新的提取方法，能夠全部將冬凌草的總萜提取出來，得到了一些區(qū)別于公開文獻的化學(xué)物質(zhì)。
2、凌革總萜的化合物功能全面，可以發(fā)揮其抗各種癌細胞的作用，使藥物的治療有效性得以提高。
3、抗癌譜廣，高效低毒；藥材來源豐富，價格便宜；有效成分明確；產(chǎn)品質(zhì)量可控。
4、藥物的質(zhì)量更能保證。
5、生產(chǎn)工藝簡便，采用柱層析分離純化技術(shù)，更易于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為冬凌草甲素對照品HPLC圖。
圖2是冬凌草甲素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
從圖1可知，通過HPLC，采用外標(biāo)法可以測定最終產(chǎn)品中單個有效成分含量，如圖中冬凌草甲素對照品純度大于99％，無其他雜質(zhì)(Rt＝3.2為溶劑峰)。
圖2可知，測定冬凌草總萜含量可以采用紫外分光光度(UV)法通過UV法，測定最終產(chǎn)物中總萜含量。采用冬凌草甲素為標(biāo)準(zhǔn)品，配制不同濃度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程Y＝20.156X+0.0119。然后精密稱定供試品，溶解，紫外分光光度計測吸光度值，代入回歸方程，計算得含量。
具體實施例方式
制備實施例一取冬凌草(含莖和葉)藥材，粉碎，過篩，加入6倍體積的95％乙醇，回流提取3小時。重復(fù)提取兩次，合并提取液。減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10。將上述濃縮后的提取物用3倍體積的石油醚萃取兩次，脫去脂和色素。殘留物用乙醚萃取3-4次，合并乙醚萃取物，回收乙醚，殘留物用90％乙醇醇溶解，上清液過大孔吸附樹脂柱，以梯度10-80％乙醇溶液為流動相進行洗脫。用TLC方法監(jiān)測收集含冬凌草總萜的流出產(chǎn)物。合并洗脫液，減壓濃縮，干燥得冬凌草總萜。
制備實施例二取冬凌草(含莖和葉)藥材，粉碎，過篩，加入5倍體積的乙醚，回流提取3小時。重復(fù)提取兩次，合并提取液。減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10。將上述濃縮后的提取物用活性炭吸附，脫去脂和色素。殘留物用乙醚萃取3-4次，合并乙醚萃取物，回收乙醚，殘留物用90％乙醇醇溶解，上清液過大孔吸附樹脂柱，以梯度10-80％乙醇溶液為流動相進行洗脫。用TLC方法監(jiān)測收集含冬凌草總萜的流出產(chǎn)物。合并洗脫液，減壓濃縮，干燥得冬凌草總萜。
應(yīng)用實施例一冬凌草總萜對人乳腺癌細胞MCF7的抑制作用人乳腺癌細胞MCF7，置于含10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)，第2天傳代一次。實驗時用培養(yǎng)基稀釋藥液，最終用藥濃度為50μg/ml。將生長到對數(shù)期的不同腫瘤細胞用消化液消化成細胞懸液，并以每孔103-104個細胞，200μl的量接種到96孔培養(yǎng)板。24小時后，移去培養(yǎng)板孔中的培養(yǎng)基，換之以新鮮的活性肽藥液，每孔200μl。加藥處理后分別培養(yǎng)3天，然后每孔加入20μl的MTT溶液，37℃繼續(xù)培育4小時。小心去除孔內(nèi)培養(yǎng)物的上清，然后每孔加入200μl的DMSO，水平搖床上震蕩20分鐘，保證結(jié)晶充分溶解。在490nm處檢測各孔的光吸收值，計算抑制率。結(jié)果表明，在藥物濃度大于40μg/ml時，冬凌草總萜對人乳腺癌細胞MCF7的抑制率均大于50％。當(dāng)藥物濃度為50μg/ml時，抑制率為92％。
應(yīng)用實施例二冬凌草總萜對對人肺癌細胞A549的抑制作用把冬凌草總萜用DMSO溶解，配成20mg/ml母液，-20℃保存?zhèn)溆?。實驗時用培養(yǎng)基稀釋，最終用藥濃度為100μg/ml。將生長到對數(shù)期的不同腫瘤細胞用消化液消化成細胞懸液，并以每孔103-104個細胞，200μl的量接種到96孔培養(yǎng)板。24小時后，移去培養(yǎng)板孔中的培養(yǎng)基，換之以新鮮的活性肽藥液，每孔200μl。加藥處理后分別培養(yǎng)3天，然后每孔加入20μl的MTT溶液，37℃繼續(xù)培育4小時。小心去除孔內(nèi)培養(yǎng)物的上清，然后每孔加入200μl的DMSO，水平搖床上震蕩20分鐘，保證結(jié)晶充分溶解。在490nm處檢測各孔的光吸收值，計算抑制率。結(jié)果表明，在藥物濃度為40μg/ml時對人肺癌細胞的抑制率為74％，并呈一定的量效關(guān)系。
應(yīng)用實施例三冬凌草總萜對其他腫瘤細胞的抑制作用采用同實施例二、三類似方法，進行冬凌草總萜對人食管癌細胞EC9706、人肝癌細胞HepG2和小鼠黑色素瘤細胞K1735M2的抑制作用實驗。結(jié)果表明，在藥物濃度為40μg/ml時對食管癌細胞EC9706、肝癌細胞HepG2和小鼠黑色素瘤細胞K1735M2的抑制率分別為61％、67和78％，并呈一定的量效關(guān)系。
應(yīng)用實施例四冬凌草總萜對艾氏腹水瘤小鼠的影響在無菌條件下從小鼠腹腔腹水中取瘤，稀釋，混勻后消毒接種小鼠腹腔，每支0.2ml，約含瘤細胞1×106個。24h后隨機分為對照組(生理鹽水)，環(huán)磷酰胺組和冬凌草總萜小劑量(10mg/kg)組、中劑量(20mg/kg)組、大劑量(40mg/kg)組。靜脈給藥，每天1次，共7天，觀察每組小鼠的平均生存時間，計算生命延長率。實驗結(jié)果表明，冬凌草總萜小劑量(10mg/kg)組、中劑量(20mg/kg)組、大劑量(40mg/kg)組均能明顯延長艾氏腹水瘤小鼠生存時間，生命延長率均大于50％。
應(yīng)用實施例五冬凌草總萜對小鼠實體瘤的抑制作用按照實施例五類似方法，采用小鼠右后肢皮下接種S180實體瘤細胞懸液，用上述冬凌草總萜按10mg/kg體重靜脈給藥，結(jié)果表明對S180實體瘤的抑制率為68.3％。
應(yīng)用實施例七片劑制備按照處方，將冬凌草總萜粉碎，過篩，稱取40g，加入淀粉、乳糖混合均勻，加入60％酒精制軟材，制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，包糖衣，干燥即得。每片含藥物組合物40mg。
應(yīng)用實施例八膠囊制備稱取40g粉碎，過篩處理的冬凌草總萜，加入淀粉和硬脂酸鎂，混合均勻，填充膠囊，每粒含組合物40mg。
應(yīng)用實施例九顆粒劑制備稱取粉碎，過篩處理的藥物組合物、蔗糖粉、糊精及適量乙醇，攪拌混勻，制粒，干燥，整粒，分裝，成品。每包重5g。
應(yīng)用實施例十軟膠囊制備稱取粉碎，過篩處理的藥物組合物、植物油，充分混合，膠體磨磨勻，置于全自動軟膠囊機充填，干燥，即得。每粒含藥物組合物40mg。
應(yīng)用實施例十一脂質(zhì)體注射液制備按照處方，稱取藥物組合物、大豆卵磷脂、膽固醇、去氧膽酸鈉，混合均勻，加入無水乙醚，薄膜蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成均勻薄膜。然后加入緩沖溶液，繼續(xù)水化2h，超聲，超濾。加注射用水，灌裝。
權(quán)利要求
1.一種中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物，其特征在于其有效部位提取物為冬凌草總萜，它包括冬凌草甲素(rubescensin A)及衍生物、冬凌草乙素(rubescensin B)、冬凌草丙素(rubescensin C)、冬凌草丁素(rubescensin D)、冬凌草戊素(rubescensin E)、冬凌草辛素(rubescensin F)等二萜類化合物和齊墩果酸和熊果酸等三萜類化合物，該提取物中冬凌草總萜含量在50％以上。
2.一種權(quán)利要求1所述的中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物的制備方法，其特征在于其工藝過程包括以下步驟①用乙醇溶液或復(fù)合溶劑回流提取粉碎后冬凌草3-4次，溶劑用量為原料的5-8倍，獲得冬凌草粗提物；②合并粗提物，減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；③將上述濃縮后的提取物用石油醚萃取，脫去脂和色素，殘留物用乙醚萃取3-4次；④合并乙醚萃取物，回收乙醚，干燥，得冬凌草總萜粗提物；⑤柱層析分離純化，先將冬凌草總萜粗提物用低碳醇溶解，過大孔吸附樹脂柱，以梯度混合溶劑溶液為流動相進行洗脫，再用TLC方法監(jiān)測流出產(chǎn)物，收集含冬凌草總萜的流出產(chǎn)物；⑥合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，冷凍或噴霧干燥至粉，得冬凌草總萜，或者再加入熱丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物的制備方法，其特征在于所述的冬凌草總萜的提取過程采取冷浸提取法、滲漉提取法、超聲破碎提取法、回流提取法，所采用的提取溶劑為乙醇、乙醚、丙酮或它們的混合物，所述的柱層析分離純化，采取以中性和極性大孔吸附樹脂、硅膠、氧化鋁、離子交換樹脂為填充料進行吸附，所用洗脫液可以是乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、石油醚或它們的混合液及水溶液，所述的減壓濃縮優(yōu)選溫度為50-60℃，真空度為400-600Mpa，干燥條件采用真空干燥、常壓蒸汽干燥、冷凍干燥和噴霧干燥。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物的制備方法，其特征在于將提取物加入藥劑學(xué)可接受的藥物輔料組分，做成針劑和口服劑，其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑、緩釋劑、口服液等；針劑包括各種水針劑和粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種中藥制劑，特別是中藥冬凌草有效部位組合物及其制備方法，它是將冬凌草原料粉碎后經(jīng)醇提，濃縮、萃取，得冬凌草總萜粗提物，再溶解、洗脫，冷凍或噴霧干燥成粉，得冬凌草總萜，然后按藥物生產(chǎn)制得針劑和口服劑。本發(fā)明藥物可用于治療包括肝癌、食管癌、胃癌、腸癌、乳腺癌、肺癌和黑色素瘤等惡性實體瘤，療效顯著，無毒，無副作用，產(chǎn)品質(zhì)量可控。
文檔編號A61K31/704GK1486712SQ03125250
公開日2004年4月7日 申請日期2003年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月9日
發(fā)明者張榮慶, 王洪鐘, 王世全, 陳書勤, 李千彪 申請人:北海國發(fā)海洋生物產(chǎn)業(yè)股份有限公司