專利名稱：穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及穿琥寧的用途，特別涉及穿琥寧在制備外用藥物中的用途。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用；所述外用藥物是治療病毒引起的皮膚病的外用藥物；所述皮膚病是皰疹；具體的說是生殖器皰疹、帶狀皰疹；并且，所述外用藥物是由穿琥寧加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的藥物組合物；所述藥物組合物含有重量比為0.001％～35.664％的穿琥寧；優(yōu)選的上述藥物組合物含有重量比為0.01％～10.94％的穿琥寧；更優(yōu)選的上述藥物組合物含有重量比為0.1％～5.5％的穿琥寧；所述藥物組合物被制備成外用的液體、半固體或固體制劑；優(yōu)選的制劑是外用的液體制劑；最優(yōu)選的是噴霧劑。
本發(fā)明的有益效果是制備工藝簡單，用藥方便安全，藥物直接作用于患處，見效快，進(jìn)一步拓展了穿琥寧的藥用領(lǐng)域。
本發(fā)明實施例中使用的穿琥寧是四川省宜賓五糧液集團(tuán)宜賓制藥廠生產(chǎn)的穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽，白色粉末，其他原料無特殊要求。對于本專業(yè)的普通技術(shù)人員來說，采用常規(guī)的方法，將本發(fā)明的藥物組合物，制備成其他外用劑型是容易的。藥理試驗1、穿琥寧體外抗單純皰疹病毒試驗1.1試驗材料一、藥物穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽，白色粉末，由四川省宜賓五糧液集團(tuán)宜賓制藥廠提供。以注射液批準(zhǔn)文號川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1985)第003181號，批號0007011，200mg/10ml支作為應(yīng)用液。二、病毒單純皰疹病毒II型(HSV-II)Sav株，購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。HSV-II9705株系臨床分離株。三、細(xì)胞Vero細(xì)胞，購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。四、試劑及儀器RPMI-1640美國Gibco公司胎牛血清 英國進(jìn)口分裝細(xì)胞培養(yǎng)板 美國Corning公司CO2培養(yǎng)箱 美國Shel-Lab公司1.2試驗方法首先測定穿琥寧對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)；然后采用組織細(xì)胞病變觀測法(CPE)測定HSV-II的毒力。最后再用穿琥寧作用于感染了病毒的單層細(xì)胞，根據(jù)抑制細(xì)胞病變的效果，來確定穿琥寧抗病毒的藥效。一、藥物對細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)的測定用RPMI-1640液把穿琥寧(0.4mg/ml)按比例稀釋在96孔培養(yǎng)板的Vero單層細(xì)胞中，分別加入不同濃度的穿琥寧藥液，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中96h，觀察細(xì)胞病變，測定其對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度。二、病毒的毒力測定采用96孔細(xì)胞培養(yǎng)Vero單層細(xì)胞，接種不同稀釋度的HSV-II病毒液(10-1～10-8)，每一稀釋度接種4孔，置37℃培養(yǎng)96h，觀察細(xì)胞病變，以出現(xiàn)2孔細(xì)胞病變的最高稀釋度定為該病毒半數(shù)細(xì)胞感染濃度(1個TCID50)。三、穿琥寧體外抗病毒試驗細(xì)胞病變(CPE)抑制法在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的Vero單層細(xì)胞內(nèi)，先加不同稀釋度的穿琥寧液2h后傾去藥液，每孔內(nèi)再加入100TCID50HSV-II，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中，96h后觀察細(xì)胞病變。試驗中設(shè)立病毒對照空白細(xì)胞孔。用Reed-Muench法計算得半數(shù)細(xì)胞病變抑制的藥物濃度(IC50)。1.3試驗結(jié)果一、穿琥寧對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)結(jié)果見表1，穿琥寧對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度為1mg/ml。
表1穿琥寧、ACV對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)濃度(mg/ml)藥物 孔號2 10.50.25 0.125 0.062 0.031 0.015細(xì)胞對照穿琥寧 1 ++-- - - - - --2 ++-- - - - - --3 ++-- - - - - --4 ++++ - - - - - --注“-”無細(xì)胞病變，“+”25％細(xì)胞病變，“++”50％細(xì)胞病變。二、病毒毒力測定結(jié)果細(xì)胞病變(CPE)抑制法測定HSV-IISav株和HSV-II9705株的毒力，結(jié)果見表2。
表2HSV病毒毒力測定結(jié)果病毒 CPE法(TCID500.ml)HSV-II Sav 10-6HSV-II 9705 10-5三、穿琥寧體外抗HSV-II試驗結(jié)果應(yīng)用CPE法，檢測穿琥寧對不同毒力的HSV-II的體外抑制活性。通過兩個批次的試驗表明CPE法測定穿琥寧的半數(shù)細(xì)胞病變抑制濃度(IC50)為0.14±0.02mg/ml，結(jié)果見表3。
表3穿琥寧體外抗HSV-II活性(CPE法)穿琥寧病毒批次 劑量(mg/ml) 病變程度(％) IC50(mg/ml)1 1 00.5 12.500.2531.25 0.150.125 56.250 100HSV-IISav2 1 00.5 12.500.2525.00 0.130.125 62.500 93.7平均值0.14±0.021 1 00.5 25.000.2531.25 0.280.125 56.250 100HSV-197052 1 00.5 18.750.2531.25 0.280.125 56.250 100平均值0.28±0.032、穿琥寧體內(nèi)抗單純皰疹病毒試驗2.1穿琥寧噴霧劑治療小鼠HSV-IISav株陰道炎的藥效試驗2.1.1試驗材料一、藥物重量比2％穿琥寧噴霧劑、重量比5％穿琥寧噴霧劑和空白噴霧劑由五糧液集團(tuán)宜賓制藥廠提供批號分別為010103和010104。二、病毒株HSV-IISav株與1.1項相同。三、細(xì)胞株、試劑及儀器同1.1項四、試驗動物BALB/C小鼠，雌性，體重18～20g/只，購自華西醫(yī)科大學(xué)實驗動物管理中心，動物合格證(1996)川實動質(zhì)管第75號。2.1.2試驗方法一、HSV-IISav感染小鼠陰道的毒力(ID50)測定采用10-3、10-4、10-5、10-6TCID50/0.1ml的HSV-IISav株病毒稀釋液0.05ml，分別滴入小鼠陰道內(nèi)，觀察并記錄小鼠陰道有無紅腫、陰道炎，連續(xù)追蹤七天，計算ID50。二、穿琥寧噴霧劑小鼠陰道炎的藥效試驗對BALB/C小鼠陰道內(nèi)滴入10ID50HSV-IISav株病毒液，第二天開始用重量比2％、5％穿琥寧噴霧劑局部治療，每日一次，連續(xù)用藥三天，對照組不用任何藥物治療。總共觀察六天，根據(jù)陰道炎的程度分為輕度、中度和重度，各計為3分、6分、和10分2.1.3試驗結(jié)果一、HSV-IISav株感染小鼠陰道后，毒力(ID50)測定結(jié)果見表4，在10-4與10-5兩個稀釋度之間的距離比為0.5，則10-4.5TCID500.1ml相當(dāng)于1ID50，該稀釋度的HSV-IISav病毒液，能引起半數(shù)的BALB/C小鼠發(fā)生陰道炎。
在隨后的試驗中，每只小鼠陰道內(nèi)均滴入10ID50病毒液，即采用10-3.5TCID50/0.1mlHSV-IISav病毒液0.01ml滴入小鼠陰道內(nèi)感染。
表4HSV-II sav滴入小鼠陰道內(nèi)測定ID50Hsv-II滴度 小鼠陰道炎病變 累積累積百分比陰道炎(TCID50/0.1ml) (只)(只)病變數(shù) 正常數(shù) (％)10-4 10 10 20 0 20/2010010-5 10 6 10 4 10/1471.410-6 10 4 4 10 4/10 28.510-7 10 0 0 20 0/20 0二、穿琥寧噴霧劑治療小鼠陰道炎的試驗結(jié)果見表5。各治療組明顯減輕了HSV-IISav所致的小鼠陰道炎病變程度，皮損處皰疹數(shù)量減少。其中以重量比5％穿琥寧噴霧劑療效最好，用藥五天后，小鼠陰道炎治愈，病變抑制率達(dá)到75.6％。
表5穿琥寧噴霧劑治療小鼠陰道炎的藥效試驗小鼠 每日小鼠陰道炎的病變程度(X) 均值抑制率組別(只) 1 2 3 4 5 6(％)2％穿琥寧 10 0 2.73.94.23.0 3.0 2.8 54.45％穿琥寧 10 0 2.42.12.11.5 0.9 1.5 75.6病毒對照10 0 3.05.48.99.6 10 6.15-空白噴霧劑 10 0 3.05.18.59.6 10 6.030.023試驗結(jié)論3.1穿琥寧有體外抗HSV-II活性，CPE法測定其IC50值為0.14±0.02mg/ml。3.2重量比5％穿琥寧噴霧劑對HSV-IISav株所致的小鼠陰道炎有較好療效，皮損病變抑制率達(dá)75.6％。
綜上試驗可知穿琥寧具有明顯的體外抗病毒活性，對病毒引起的皮膚病變，如皰疹、生殖器皰疹、單純皰疹病毒引起的陰道炎等具有較好療效。上述試驗也證明穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，是合適的，采用常規(guī)的方法，將穿琥寧制備成各種外用劑型，如涂敷劑、噴霧劑等，直接對病灶部位施藥，即可達(dá)到治療目的。特別是重量比5％的穿琥寧噴霧劑對陰道炎有較好療效，其皮膚病變抑制率達(dá)75.6％。藥物組合物實施例
防腐劑苯甲醇80ml 助溶劑水楊酸鈉20gPH調(diào)節(jié)劑磷酸氫二鈉15g 磷酸二氫鈉25g抗氧劑L-半胱氨酸鹽5g表面活性劑十二烷基硫酸鈉500g穩(wěn)定劑75％乙醇1700ml 金屬絡(luò)合劑乙二胺四乙酸10g制備成規(guī)格為15ml/支的噴霧劑1000支。
權(quán)利要求
1.穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述外用藥物是治療病毒引起的皮膚病的外用藥物。
3.如權(quán)利要求2所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述皮膚病是皰疹。
4.如權(quán)利要求2或3所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述皮膚病是生殖器皰疹。
5.如權(quán)利要求2或3所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述皮膚病是帶狀皰疹。
6.如權(quán)利要求1所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述外用藥物是由穿琥寧加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的藥物組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述藥物組合物含有重量比為0.001％～35.664％的穿琥寧。
8.如權(quán)利要求6所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述藥物組合物含有重量比為0.01％～10.94％的穿琥寧。
9.如權(quán)利要求6所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述藥物組合物含有重量比為0.1％～5.5％的穿琥寧。
10.如權(quán)利要求6所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述藥物組合物被制備成外用的液體、半固體或固體制劑。
11.如權(quán)利要求10所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述藥物組合物被制備成外用的液體制劑。
12.如權(quán)利要求11所述的穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，其特征是，所述液體制劑被制備成噴霧劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及穿琥寧的用途。本發(fā)明公開了穿琥寧在制備外用藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明的外用藥物為穿琥寧噴霧劑，它是由穿琥寧加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的。主要用于治療皰疹。本發(fā)明的有益效果是配制工藝簡單，用藥方便安全，藥物直接作用于患處，見效快，進(jìn)一步拓展了穿琥寧的藥用領(lǐng)域。
文檔編號A61P31/00GK1433758SQ0311733
公開日2003年8月6日 申請日期2003年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者丁志勇, 蘇小斌, 張華 , 石兆勇, 張濤, 詹成武, 王正發(fā) 申請人:四川省宜賓五糧液集團(tuán)有限公司