專利名稱：穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種穿琥寧的用途，特別是穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的提供穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途。
所述皮膚病為病毒引起的皰疹，所述皮膚病為帶狀皰疹、生殖器皰疹。
還提供含有穿琥寧的治療皮膚病的藥物組合物，至少含有穿琥寧0.001％～75.60％，以重量百分比計(以下成份皆以重量百分比計算)。
更進(jìn)一步的，含有穿琥寧0.001-27.55％。
更進(jìn)一步的，含有穿琥寧0.5-16.5％。
上述的藥物組合物被制備成外用制劑，所述制劑是膏劑，具體的說，所述制劑是凝膠。
本發(fā)明的治療皮膚病的藥物組合物，還可以由以下成份組成以重量百分比，穿琥寧0.001-75.60％，基質(zhì)0.001-30.075％，保濕劑2.0-84.0％，金屬絡(luò)合劑0.01-24.9 ，抗氧劑0.01-39 ，防腐劑0.01-299 更進(jìn)一步的，所述藥物組合物的組成是穿琥寧0.001-27.55％，基質(zhì)0.001-25.46％，保濕劑9.9-75.9％，金屬絡(luò)合劑0.1-17.8 抗氧劑1.0-18.7 ，防腐劑5-164 更進(jìn)一步的，所述藥物組合物的組成是穿琥寧0.5-16.5％，基質(zhì)0.5-15.0％，保濕劑11.5-65.5％，金屬絡(luò)合劑0.5-10.9 抗氧劑5.00-14.50 ，防腐劑17-95 本發(fā)明的有益效果是，對皰疹尤其是帶狀皰疹、生殖器皰疹具有良好的治療效果，并且使用方便，能直接作用于患處。
阿昔洛韋(ACV)注射劑，250mg/瓶，批號970105，由湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究所科益制藥廠生產(chǎn)，以5％乳糖酸鈉溶液稀釋為1mg/ml作為應(yīng)用液。
阿昔洛韋軟膏10克0.3克，每支10克裝。國藥準(zhǔn)字XF19990947，湖北成都制藥有限公司，批號000701。二、病毒單純皰疹病毒I型(HSV-I)Sm44株，購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。HSV-I9608系臨床分離株。三、細(xì)胞Vero細(xì)胞，購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。四、試劑及儀器RPMI-1640 美國Gibco公司胎牛血清 英國進(jìn)口分裝公司細(xì)胞培養(yǎng)板美國Corning公司CO2培養(yǎng)箱 美國Shel-Lab試驗方法一.首先測定穿琥寧和ACV對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)；然后采用組織細(xì)胞病變觀察法(CPE)測定HSV-I的毒力。最后再用穿琥寧和ACV作用于感染了病毒的單層細(xì)胞，根據(jù)藥物對細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)的測定。
用RPMI-1640液把穿琥寧(0.4mg/ml)按比例稀釋在96孔培養(yǎng)板的Vero的單層細(xì)胞中，分別加入不同濃度穿琥寧和ACV藥液，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中96h，觀察細(xì)胞病變，測定其對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度。二、病毒的毒力測定采用96孔細(xì)胞培養(yǎng)Vero單層細(xì)胞，接種不同稀釋度的HSV-I病毒液(10-1～10-8)，每一稀釋度接種4孔，置37℃培養(yǎng)96h，觀察細(xì)胞病變，以出現(xiàn)2孔細(xì)胞病變的最高稀釋度定為該病毒半數(shù)細(xì)胞感染濃度(1個TCID50)。三、穿琥寧體外抗病毒實驗細(xì)胞病變(CPE)抑制法在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的Vero單層細(xì)胞內(nèi)，先加不同稀釋度的穿琥寧或ACV液，2h后傾去藥液，每孔內(nèi)再加入100TCID50HSV-I，37℃，5％CO2孵箱內(nèi)，96h后觀察細(xì)胞病變。實驗中設(shè)立病毒對照空白細(xì)胞孔。用Reed-Muench法計算得半數(shù)細(xì)胞病變抑制度藥物濃度(IC50)。試驗結(jié)果一、穿琥寧、ACV對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)結(jié)果見表1，穿琥寧對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度為1mg/ml，ACV對Vero細(xì)胞最大濃度為0.02mg/ml。
表1穿琥寧、AVC對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)濃度(mg/ml)藥物 孔號210.5 0.25 0.125 0.062 0.0310.015 細(xì)胞對照穿琥寧1 ++ -- - - - --2 ++ -- - - - --3 ++ -- - - - --4 ++ ++ - - - - --ACV 1 +-- - - - ++ -2 ++ -- - - - ++3 ++ -- - - - +-4 ++ -- - - - ++ -注“-”無細(xì)胞病變，“+”25％細(xì)胞病變，“++”50％細(xì)胞病變。二、病毒毒力測定結(jié)果細(xì)胞病變(CPE)抑制法測定HSV-1 Sm44株，HSV-I9608株的毒力，結(jié)果見表2。
表2 HSV病毒毒力測定結(jié)果病毒 CPE法(TCID500.1ml)HSV-I Sm44 10-7HSV-I 9608 10-5三、穿琥寧、ACV體外抗HSV試驗結(jié)果應(yīng)用CPE法，分別檢測了穿琥寧、ACV對不同毒力的HSV-1的體外抑制活性，結(jié)果見表3。1、HSV-I抑制活性通過兩個批次的試驗表明CPE法穿琥寧的半數(shù)細(xì)胞病變抑制濃度(IC50)為0.71±0.08mg/ml，ACV為0.09±0.03mg/ml，表明穿琥寧比ACV體外抗HSV-I的活性差。
見表3。
表3穿琥寧、AVC體外抗HSV-I活性(CPE法)穿琥寧 AVC病毒 批次 劑量(mg/ml)病變程度(％)IC50(mg/ml) 病變程度(％) IC50(mg/ml)1 1 43.75 00.556.25 00.25 75 0.71 0 0.090.125 81.25 18.750 93.75 100HSV-ISm442 1 43.75 00.556.25 0 0.090.25 75 0.71 00.125 81.25 12.500 81.25 100平均值 0.71±0.080.09±0.031 1 43.75 00.550 00.25 81.25 0.88 0 0.090.125 93.75 250 93.75 93.75HSV-+197052 1 43.75 00.556.23 0 0.090.25 81.25 0.71 00.125 93.75 25.000 93.75 100平均值 0.8±0.06 0.09±0.01實驗2穿琥寧體內(nèi)抗單純皰疹病毒實驗穿琥寧凝膠劑治療豚鼠皮膚感染HSV-I的實驗實驗材料1、藥物5％穿琥寧凝膠劑、8％穿琥寧凝膠劑和空白凝膠劑是由五糧液集團(tuán)宜賓制藥廠提供，批號001203，3％ACV軟膏由湖北省
2、病毒HSV-I Sm44株，購自衛(wèi)生部生物制品檢定所。
3、細(xì)胞、試劑及儀器同實驗1。
4、動物豚鼠，體重250-300g/只，購自衛(wèi)生部成都生物制品研究所實驗動物管理中心，動物合格證號(1995)醫(yī)管會24101106號。
試驗方法1、HSV-I Sm44感染豚鼠皮膚的毒力(ID50)測定豚鼠背部經(jīng)8％硫化鈉脫毛后，用梅花針在其背部四個小區(qū)刺傷表皮，然后用不同稀釋度的HSV-I Sm44病毒液10-4-10-7TCID50/0.1ml感染皮損，0.1ml/只。從感染HSV-I Sm44第二天起，逐日觀察并記錄皮膚發(fā)生炎癥和皰疹病變程度，共觀察7天，根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)計分紅1分；出小皰1-5個3分；出皰＞10個10分。累計分越高，表明皮損程度越重。每只豚鼠的最高累加分為10分，根據(jù)皮損程度，計算ID50。
2、穿琥寧凝膠劑抗HSV-ISm44病毒懸液0.1ml，滴在豚鼠背部脫毛皮損處，第二天(24h)內(nèi)開始用5％和8％穿琥寧凝膠劑和空白凝膠劑對各組試驗豚鼠進(jìn)行涂抹，每日涂抹一次，共3天。
實驗對照組采用3％ACV軟膏涂抹，方法同前。
逐日觀察并記錄豚鼠皮膚病損程度，從涂抹上藥開始，共觀察6天，計分并計算各組藥物對皮損的抑制率，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
抑制率＝(病毒對照組-實驗組均值)/病毒對照組均值×100％實驗結(jié)果1.HSV-I Sm44感染豚鼠的毒力(ID50)測定結(jié)果見表4。10-6TCID50/0.1ml的病毒液，即表示1 ID50，則能使50％的豚鼠出現(xiàn)病變。本實驗中采用10 ID50感染豚鼠皮損處，則應(yīng)有的病毒液為10-5TCID50/0.1ml。
表4豚鼠皮損處感染HSV-Ism44的ID50HSV-I滴度 豚鼠數(shù)量 皮損累積累積累積百分比病變分/總分(TCID50/0.1ml) (只) 分?jǐn)?shù)/總分 正常分 病損分 (％)10-41098/100 8 496 496/504 98.410-51070/100 68 304 304/372 81.710-61052/100 164 164 164/328 50.010-71030/100 304 60 60/364 19.72、穿琥寧凝膠劑抗豚鼠皮膚感染10ID50HSV-I Sm44的藥效測定結(jié)果見表5，各治療組均能明顯減輕豚鼠皮膚感染的皮損程度，其中8％穿琥寧凝膠劑療效更好，皮損抑制率達(dá)80.7％，療效與3％ACV(皮損抑制率為82.5％)相似(P＞0.05)。5％穿琥寧凝膠劑的皮損抑制率為73.6％，療效比3％ACV差。
表5穿琥寧凝膠劑治療豚鼠皮膚感染10ID50HSV-ISm44結(jié)果豚鼠均值抑制率 P值每日豚鼠皮膚病損程度(X)組別 (只)12 3 4 5 6 (％)5％穿琥寧 10 12.44.52.20.90.41.8573.6＜0.058％穿琥寧 10 12 2.41.80.60.31.3580.7＜0.053％AVC10 11.82.61.30.50.21.2382.5病毒對照組10 15.16.89.210 10 7.01-空白 10 14.85.77.99.29.66.360.09注P值為5％或8％穿琥寧凝膠劑與3％ACV軟膏比較實驗結(jié)論1、穿琥寧體外抗HSV-I的活性較差，用CPE法測定的穿琥寧IC50值為0.71±0.08mg/ml，與ACV活性相差較大(P＜0.05)。
2、8％穿琥寧凝膠劑能有效治療HSV-I Sm44感染豚鼠皮膚所致的損傷，其病變抑制率為80.7％，與3％ACV軟膏(82.5％)療效相當(dāng)(P＞0.05)。
上述藥理試驗表明，穿琥寧在外用涂抹給藥時，對皰疹有良好的治療作用，為皰疹尤其是帶狀皰疹、生殖器皰疹的治療提供了一種新的方便安全的用藥途徑。
更具體的實施例如下

抗氧劑(B)B1抗壞血酸 B2谷胱甘肽 B3L-半胱氨酸鹽酸鹽B4L-半胱氨酸B5硫脲 B6硫代硫酸鈉金屬絡(luò)合劑(C)C1乙二胺四乙酸 C2乙二胺四乙酸二鈉鹽C3乙二胺四乙酸鈣二鈉鹽保濕劑(G)G1聚乙二醇4000 G2丙二醇 G3甘油G4丙二醇二乙酯基質(zhì)(H)H1卡波姆940 H2CMC-Na H3凡士林H4無水羊毛脂H5甘油明膠 H6卡波浦爾H7聚乙二醇400
權(quán)利要求
1.穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的穿琥寧用途，所述皮膚病為病毒引起的皰疹。
3.如權(quán)利要求1所述的穿琥寧用途，所述皮膚病為帶狀皰疹、生殖器皰疹。
4.含有穿琥寧的治療皮膚病的藥物組合物，至少含有穿琥寧0.001-75.60％，以重量百分比計。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征是，含有穿琥寧0.001-27.55％，以重量百分比計。
6.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征是，含有穿琥寧0.5-16.5％，以重量百分比計。
7.如權(quán)利要求4、5、6所述的藥物組合物，其特征是，所述的藥物組合物被制備成外用制劑。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征是，所述制劑是膏劑。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征是，所述制劑是凝膠。
全文摘要
穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途，涉及一種穿琥寧的用途，特別是穿琥寧在制備治療皮膚病的外用藥中的用途。所述皮膚病為病毒引起的皰疹，所述皮膚病為帶狀皰疹、生殖器皰疹。本發(fā)明對皰疹有良好的治療作用，為皰疹尤其時帶狀皰疹的治療提供了一種新的方便安全的用藥途徑。
文檔編號A61P31/00GK1433756SQ0311733
公開日2003年8月6日 申請日期2003年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者丁志勇, 蘇小斌, 石兆勇, 張華 , 張濤, 詹成武, 王正發(fā) 申請人:四川省宜賓五糧液集團(tuán)有限公司