專利名稱：一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及保健生物制劑，具體地說是一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑。
背景技術：
心血管疾病是目前中國人群死因之首，約占總死亡人口的34％-40％，心臟病患者超過3000萬人，其中全國每年死于冠心病人數(shù)多達110萬人，1988年至1997年的十年間城市居民因血管疾病死亡年上升達25％；而血清中膽固醇、血脂水平高是引起心肌梗塞的主要原因。中老年人尤為居多，近來青年人高膽固醇癥群也在日益增多；另則，中老年胃腸功能的減弱或手術后活動量減少或由于社會工作節(jié)奏的改變，人體的緊張和工作壓力增加，造成的便秘癥群增多。
國外已有用天然的卵葉車前子種子和殼的粉作為降低膽固醇、通便的產(chǎn)品(文獻1Park et al Cereal Chemistry 1997，74207-211；文獻2Aygustinand Dwyer Topics in Clinical Nutrations 1999，101-13；文獻3Jensen et al J.of the Am.Col of Nutrations 1993，12147-154；文獻4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文獻5Rezaeipoor et al J Ethnopharmacol.2000Sep；72(1-2)283-6.)；因為該產(chǎn)品富集大量天然多糖、寡聚糖、水溶性纖維素和多種氨基酸、微量活性植物蛋白質及微量元素，據(jù)美國FDA要求，通便、降膽固醇的功能食品中可加這一食用纖維素(成人攝入量10克/天，如果是聲明降膽固醇的功能食品)。但是市場上該產(chǎn)品的主要缺點是其高度親水性和膠化性，使得該品很難在常見食品和飲料的配方中使用；除高度吸水性和膠化性之外，產(chǎn)品口感極差，始終伴有污穢粘土的味道；加之服用時因攝水不足導致食道或胃腸道梗塞的例子，所以急需要求改進這一不良反應。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種口感好、應用范圍廣的用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為以卵葉車前子生物酶促反應產(chǎn)品為活性成份。
所述生物酶促反應是以卵葉車前子的籽或殼的干粉為原料，經(jīng)液相或固相酶促反應生產(chǎn)改良卵葉車前子的生物制劑；具體操作過程為車前子粉碎，烘干，在乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑(濃度為10～50mM，0.1～0.5ml/克)存在下進行生物酶促反應，淬滅酶失活，得產(chǎn)品；酶促反應中所用的酶是以紅曲霉與纖維素修飾酶單用或合用，可以加入其他的纖維素修飾的單酶或復合酶(降纖酶)，多聚半乳糖全酸內切酶、戊糖聚酶、或真菌戊糖聚酶果膠酶等；酶促反應條件PH為5.0；溫度23～50℃，反應2～7天，濕度50～80％；反應中較佳的酶用量為1～20活性單位/克干粉(約為0.05～0.5克/克干粉)；干粉與緩沖液重量比為1∶5～1∶10；酶促反應在液相條件下操作時卵葉車前子的重量百分含量為10～50％；固相酶促反應經(jīng)干燥、粉碎進一步得到干粉；液相酶促反應所得酶促反應的產(chǎn)品直接用于飲料的制備；所述的車前子最好為纖維素含量高的藏車前子或歐車前子；粉碎可采用粉碎機或納米粉碎機，粉碎的目數(shù)可以為40目；60目；80目；100目；200目及小于400納米的顆粒；所述淬滅酶失活是指高溫80～110℃，0.5～3小時滅活或用微波1～10分鐘取得；固相酶促反應還可采用75％～95％食品級/藥品級乙醇1-20ml/g使干粉終止酶促反應；本發(fā)明中的固相酶促反應可以是上述單酶或復合酶；其中紅曲霉與真菌降纖酶連用為佳；戊糖降纖酶和紅曲霉連用也可取得較好效果，但所得干粉的硬度仍然較大；干粉溶脹率均不小于50ml/g，給細目下的干粉可與1∶5～1∶10的檸檬酸鈉緩沖液溶解(脹)；加入酶20～50℃下，攪拌8～100h，酶的加入量以干粉中量計約為0.05～0.5g/g。
所述的生物制劑可以在藥品、功能食品、飲料、綠色食品、糕點中的應用。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.本發(fā)明通過生物技術手段修飾了車前子屬的天然植物產(chǎn)品的理化性質和口感，消除現(xiàn)有市售產(chǎn)品的缺點；改良后的卵葉車前子產(chǎn)品主要含有降解的天然多糖、寡聚糖、水溶性纖維素、食用色素；并且比原藥的硬度降低66％～69％，粘度降低69％，吸水性降低～50％(測定方法參見文獻13Paraskevopoulou et al J.of Food Science 1997，62208-211)。
2.作為食品添加劑或功能食品，成人每天攝入10克左右本發(fā)明的產(chǎn)品，無任何可觀察毒性，長期服用沒有副作用及不良反應，安全可靠。
3.本發(fā)明把生物工程技術運用于中(西)草藥的開發(fā)，通過固相(半固相)或液相的方法改造中草藥的理化性質，同時從中藥中生產(chǎn)具有天然降血脂、降膽固醇的洛伐他汀，含量可達3.5％；改良后的產(chǎn)品，具有優(yōu)良的通便、減肥、降膽固醇、降血脂作用；動物體內實驗證明，每次攝入20～100毫克/公斤含有本品的口服制劑，每日三次，一個療程降膽固醇作用達24～30％，降血脂作用達50％；大大改進天然產(chǎn)品。
4.本發(fā)明提供了一種由卵葉車前子的種子或殼，經(jīng)酶促反應(固或液相)的生產(chǎn)方法，其可以實現(xiàn)規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。


圖1為車錢子原料電鏡圖片。
圖2為紅曲霉改良后的產(chǎn)品電鏡圖片。
具體實施例方式
下面通過實例詳述本發(fā)明實施例1紅曲霉和降纖酶連用試驗卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)置于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，紅曲霉(100克)和真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入醋酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應5～7天。其后，用95％的食品級酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實施例2 真菌降纖酶單用試驗方法同實施例1同。唯獨不同條件是單獨使用真菌降纖酶(1升)。反應5～7天后，酶促反應在90℃加熱半小時滅活。熱空氣干燥直至衡重。粉碎過篩(80～200目)得所需干粉。
卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應5～7天。用95％的食品級酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實施例3紅曲霉與戊糖聚合酶連用試驗方法同實施例1。在紅曲霉之外再加戊糖聚合酶(500克)。
卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應5～7天。其后，用95％的食品級酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料后，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實施例4紅曲霉單用方法同實施例1。卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，紅曲霉(200克)，加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應5～7天。其后，用95％的食品級酒精(100升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進一步粉碎至100目、150目和200目不等。
應用例查爾斯河鼠(每組10只老鼠)，兩組分別在3～4周內喂50～100克/公斤的實例1中所得產(chǎn)品的糊劑，水份占50％，一組服用100克/公斤5％的纖維素，和100克麥麩，10％烘炒的麥麩，克分別測定相應組別中老鼠血液中的膽固醇和甘油三脂。
1.小鼠動物實驗，與空白試驗對照，結果表明每天服用該品的小鼠(50～100毫克/公斤)，總膽固醇下降為7.87％，LDL下降為12.6％，由此可見，該品可降低導致動脈硬化的功用。
2.動物試驗表明，該品對降低血清中的膽固醇和血脂均有良好的效果；三-四周內可以降低膽固醇24-30％，降血脂30-50％。
3.急毒試驗和長毒試驗均顯示該品無明顯副作用，安全性可靠；每天服用(100-200毫克/公斤)未見任何副作用，安全可靠。
4.本發(fā)明所得干粉與對照組藥物(洛法他汀，26％)相比，其具有保護腸內壁不受微生物的侵害，調節(jié)腸道蠕動活動，降低膽酸對營養(yǎng)成分的親和力的是葡萄糖(92％)；果膠(79％)，該品(53％)；這表明該品產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸的可能性最小，而且其中寡糖、多糖、單糖為非天然糖份，從而減少油脂和膽固醇的產(chǎn)生；由于對腸內壁有保護作用，具有抑制亞硝基化合物的形成和蓄積所至的腸道癌癥。
應用結論分析本發(fā)明所得產(chǎn)品具有降低膽固醇，通過調節(jié)膽酸池大小和組份及鈉粒子依賴性膽酸轉運，增加膽固醇7-羥基酶(CYPTA)的mRNA的水平(10-15％)，減少腸肝循環(huán)中的單酸疏水性，引起糞便膽酸水平增加從而消除過盛的膽固醇和甘油酸三脂的含量；此外，所形成的干粉還有增加胰島素的敏感性及骨骼肌中Glut-4蛋白質的表達，在30-60分鐘內起到降低血糖濃度。服用由該產(chǎn)品干粉所制成的沖劑，可以減少膽結石的作用(文獻4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文獻5Rezaeipoor et al JEthnopharmacol.2000 Sep；72(1-2)283-6.；文獻6Fernandez et al J PharmacolExp Ther.1998 Aug；286(2)870-4.；文獻7Anderson et al Am J Clin Nutr2000 Feb；71(2)472-9；文獻8Cohen etal J Natl Cancer Inst 1996 Jul3；88(13)899-907；文獻9Schwesinger et al Am J Surg 1999Apr；177(4)307-10；文獻10Daggy et al J Lipid Res 1997Mar；38(3)491-502)。
本發(fā)明的產(chǎn)品含有有效成分在體內通過脫乙?；?文獻14Tomodaet al Chem Pharm Bull(Tokyo)1991 Aug；39(8)2068-71)使得網(wǎng)狀上皮組織和堿性磷酸酶的活性增加；但對胃腸道各種有益蛋白酶的活性不產(chǎn)生負面影響；抑制淋巴細胞對抗原的抵抗力從而不易被破壞。
電鏡研究表明未改良的車前子表面較粗造，改良后的表面光滑均勻。
該品的異質染色體缺乏交叉，與正常營養(yǎng)成分有本質的差別。本發(fā)明除可以用于新藥生產(chǎn)外(片劑和散劑)；還可以用于功能食品，諸如通便沖劑(文獻11Diaz；et al US Pat.5,891,441(1999)；文獻12Pellar US Pat.5,73,232(1998))，降脂沖劑，減肥沖劑，降膽固醇沖劑，也可制成餅干、桃酥、花生糊、芝麻糊、豆奶沖飲。
飲料瓶裝或聽裝；含本發(fā)明原料3～5克，每天兩瓶，可達到清除體內毒素和垃圾、控制體重、增進腸道蠕動、防止便秘的作用；同時可與人體常用的必須營養(yǎng)物質為伍，補充必須的維生素和礦物質；其按口味可以添加到蘋果、香蕉、大棗汁、草莓、櫻桃、桔汁等飲料中。
權利要求
1.一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑，其特征在于以卵葉車前子生物酶促反應產(chǎn)品為活性成份。
2.一種權利要求1所述的生物制劑的制備方法，其特征在于卵葉車前子粉碎，烘干，在乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑存在下進行生物酶促反應，淬滅酶失活，得產(chǎn)品。
3.按照權利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶是指紅曲霉和/或纖維素修飾酶。
4.按照權利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶是指紅曲霉與真菌降纖酶或戊糖降纖酶與紅曲霉。
5.按照權利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶促反應條件為，PH為5.0，溫度23～50℃，反應2～7天，濕度50～80％。
6.按照權利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述反應中酶的加入量為1～20活性單位/克干粉；干粉與緩沖液重量比為1∶5～1∶10；酶促反應在液相條件下操作時卵葉車前子的重量百分含量為10～50％。
7.按照權利要求6所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述緩沖液為乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑，其濃度為10～50mM。
8.按照權利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述的車前子為纖維素含量高的藏車前子或歐車前子。
9.按照權利要求1所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述淬滅酶失活是指高溫80～110℃，0.5～3小時滅活或用微波1～10分鐘取得；固相酶促反應還可采用75％～95％食品級/藥品級乙醇1～20ml/g干粉終止酶促反應。
10.按照權利要求1所述的生物制劑在藥品、功能食品、飲料、綠色食品、糕點中的應用。
全文摘要
一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑，該生物制劑以卵葉車前子生物酶促反應產(chǎn)品為活性成分；由卵葉車前子的種子或殼為原料，以紅曲霉、多聚半乳糖全酸內切酶、果膠酶、或其復合物固(液)相酶解修飾，產(chǎn)生可供食用的草藥原料。該法在半固相中進行酶促反應，通過原料干燥、粉粹、配制的降解酶在pH緩沖溶液下反應；調節(jié)反應溫度和時間，經(jīng)加熱終止酶促反應、反應濕基烘干、再經(jīng)超細粉碎等步驟所獲得的改良草藥。該發(fā)明的生物制劑可用于降膽固醇、降血脂、通便、減肥，具有優(yōu)于天然未改造的植物藥的作用，降低膠化60％，吸水性降低50％，改造后原料容易作為多種藥物制劑，食品添加劑，制備飲料，沖劑，散劑。
文檔編號A61P3/00GK1517111SQ03110848
公開日2004年8月4日 申請日期2003年1月13日 優(yōu)先權日2003年1月13日
發(fā)明者梅曉丹 申請人:大連百奧科技發(fā)展有限公司