專利名稱：清開靈注射液或注射粉針劑的制備方法及其質(zhì)量控制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種清開靈注射液或注射粉針劑的制備方法及清開靈粉針劑的質(zhì)量控制方法，具體來說，是一種清開靈注射液或注射粉針劑的改進制備方法和清開靈注射液或注射粉針劑的質(zhì)量控制方法以及鑒別方法。
盡管如此，我們可以看出上述清開靈粉針劑的制備方法是十分繁瑣的，非常不利于工業(yè)化大生產(chǎn)，并且清開靈粉針劑的質(zhì)量還有待進一步提高。其次，現(xiàn)有技術中沒有公開清開靈注射液或注射用粉針劑對膽酸、豬去氧膽酸、梔子甙和綠原酸的質(zhì)量控制。
同時，本發(fā)明也提供了清開靈注射液或注射粉針劑中黃芩甙、膽酸、豬去氧膽酸、梔子甙和綠原酸的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明還提供了清開靈注射液或注射用粉針劑的鑒別方法。
本發(fā)明方法主要在梔子、板藍根和金銀花的提取過程中使用了高速離心的技術，這樣有效去除了這三種中藥材的提取液中的雜質(zhì)，為以后的簡化步驟做好準備。具體來說是(1)梔子提取液的制備取梔子，用水煮醇沉法，濾液高速離心，制得梔子提取液，備用。
(2)板藍根提取液的制備取板藍根飲片，用水煮醇沉法，濾液高速離心，制得板藍根提取液，備用。
(3)金銀花提取液的制備取金銀花，用水煮醇沉法，濾液高速離心，制得金銀花提取液，備用。
在上述高速離心中離心速度為10000-20000轉/分鐘范圍內(nèi)，優(yōu)選離心速度為16000轉/分鐘。
另外，本發(fā)明的方法和在制備水牛角和珍珠母粉混合物液步驟中加入了超濾步驟。因為水牛角含有較多的蛋白質(zhì)和異性蛋白質(zhì)等成分，可刺激機體產(chǎn)生相應的抗體，引起過敏反應，臨床也有較多的報道。超濾技術的應用有效地除去了蛋白質(zhì)類、鞣質(zhì)等成分，有效的除去了致敏原。
具體來說，水牛角粉和珍珠母粉混合水解液的制備取珍珠母粉水解液，攪拌下加入水牛角粉水解液，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)PH值至4，靜置，濾取上清液檢查鋇離子呈陰性，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6～7，濾過，濾液濃縮至20℃測相對密度為1.05的清膏，放冷，加入乙醇，使含醇量達70％，冷藏，濾過，減壓回收乙醇至無醇味，放冷，加入乙醇，使含醇量達80％，冷藏，濾過，減壓回收乙醇，濾過，將濃縮液超濾，超濾液冷置，濾過，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液。
取珍珠母粉水解液，攪拌下加入水牛角粉水解液，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)PH值至4，靜置，濾取上清液用10％硫酸溶液檢查鋇離子，應呈陰性，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6～7，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05(20℃)的清膏，放冷，攪拌下加入95％乙醇，使含醇量達70％，冷藏24小時，濾過，減壓回收乙醇至無醇味，放冷，攪拌下加入乙醇，使含醇量達80％，冷藏24小時，濾過，減壓回收乙醇，濾過，將濃縮液超濾，超濾液冷置24小時，濾過，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液。
正因為采用了上述步驟，使得制備總混合液變得簡便，也就是，取豬去氧膽酸粉、黃芩甙粉、膽酸粉分別加以10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8的注射用水適量使溶解，混勻；加入上述藥材提取液中，攪勻，調(diào)節(jié)PH值至7，得混合液，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)PH值至7；將混合液超濾，濾液冷凍干燥，即得。
在本發(fā)明的方法中，超濾選用了0.2-0.8μm的無菌濾膜，優(yōu)選0.22μm的無菌濾膜。
本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射用粉針劑中黃芩甙的質(zhì)量控制方法包在黃芩甙中加甲醇溶解，過濾，得黃芩甙溶液，備用。高效液相色譜儀，以乙腈(或甲醇)--0.3～0.6％磷酸(或冰乙酸)(20～45∶80～55)為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑中黃芩甙應為標示量的90.0～110.0％。
本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射用粉針劑中膽酸和豬去氧膽酸的質(zhì)量控制方法，包括將膽酸加入乙腈-磷酸鹽緩沖液系統(tǒng)溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相用40～85∶60～15∶0.1～0.5比例的甲醇或乙腈-水-冰醋酸或磷酸測定，含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％。
本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射用粉針劑中梔子甙的質(zhì)量控制方法，包括在梔子甙中加甲醇-水溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，以15～40∶85～60比例的甲醇或乙腈-水為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑的產(chǎn)品含梔子甙不得少于1.52％。
本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射用粉針劑中綠原酸的質(zhì)量控制方法，包括在綠原酸中加甲醇溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，以8～20∶92～80比例的乙腈或甲醇--0.2～0.6％磷酸為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑的產(chǎn)品含綠原酸不得少于0.5％。
本發(fā)明方法所制備的清開靈注射液或注射用粉針劑使用上述測定方法測定的質(zhì)量標準是黃芩甙(C21H18011)應為標示量的90.0～110.0％；含氮(N)應為標示量的90.0～120.0％；含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％；含梔子甙不得少于1.52％，含綠原酸不得少于0.5％。
本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射用粉針劑的鑒別方法，包括取樣品加1-10ml新制的糖醛溶液，與1-10ml硫酸溶液混勻，水浴加熱，溶液呈灰紫色；同時取樣品，加甲醇溶解，濾過，濾液濃縮，得供試液；取梔子藥材，加甲醇溶解，濾過，濾液濃縮的殘留物加甲醇，得梔子藥材溶液；取梔子甙加甲醇溶解，得對照品溶液試液；照薄層色譜法，吸取三種溶液，點于GF254預制版上，以8-12∶1-3∶0.5-1.5的乙酸乙脂-無水乙醇-冰醋酸展開，噴以香夾蘭醛-濃硫酸溶液，供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上顯有相同顏色斑點。
使用本發(fā)明方法所制得的清開靈注射液或注射粉針劑，穩(wěn)定性好，有效期長，運輸貯存方便，各項技術指標符合《中華人民共和國藥典》要求。本發(fā)明所述的清開靈注射液或注射粉針劑的使用方法是肌肉注射一日2～4ml。重癥患者靜脈注射20～40ml，以10％葡萄糖注射液200ml或生理鹽水100ml稀釋后使用。
具體優(yōu)選的實施方式實施例1膽酸32.5g 豬去氧膽酸37.5g黃芩甙50g珍珠母粉500g水牛角粉250g 梔子250g 板藍根2000g 金銀花提取物50g制備粉針劑的詳細工藝步聚如下1、藥物的提取和水解處理①梔子提取液的制備按處方量稱取梔子，加6倍量水煮沸1小時，過濾，濾渣再加4倍量水，煮提半小時，過濾，濾液合并，加熱濃縮至原料重量相當?shù)捏w積，放冷后在攪拌下加入濃乙醇，使含醇量達60％，冷藏2～3小天，抽濾，取澄清濾液，沉淀用60％冷乙醇洗滌，合并洗液和濾液，減壓回收乙醇，超速離心10000轉/分鐘，冷藏24小時后，過濾得澄清梔子提取液，冷藏放置供配液用；②板藍根提取液的制備按處方量稱取板藍根飲片，加入6～7倍量水，煮沸1小時，過濾，濾渣再加入4～5倍量水，煮沸半小時，濾取提取液，棄去藥渣；合并濾液，加熱使藥液濃縮至原料重量相當?shù)捏w積時，放冷，在攪拌下加入濃乙醇，至含醇量達60％，冷藏2～3天，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮液冷藏放置24小時，過濾，得澄清濃縮液；取濃縮液在攪拌下滴加氨水，充分攪拌，使pH值調(diào)至8.5～9.0，冷藏放置24小時，勿讓氨氣揮散，以紙漿餅抽濾，濾液在水浴上加熱，在不斷攪拌下除氨至氨味消失，至pH到5.5～6.0時，冷藏放置，供配液用；③金銀花提取物的提取稱取金銀花置煮提鍋中，加入15倍水，微沸煮提1小時，過濾，藥渣加10倍量水，煮提半小時，過濾，棄去藥渣；合并兩次濾液，加熱濃縮至原體積的1/8～1/9時，取出用20％石灰乳調(diào)節(jié)pH為12，濾取沉淀物；取沉淀物于容器中，在攪拌下加入沉淀物2～3倍量95％乙醇，用50％硫酸調(diào)pH＝3～4，充分攪拌后，過濾，濾液用40％氫氧化鈉中和，調(diào)pH＝6.5～7，過濾，濾液回收乙醇，超速離心10000轉/分鐘，再濃縮至稠膏狀，置干燥箱中80℃烘干，得棕色提取物；放干燥器中保存?zhèn)溆茫虎馨刺幏搅糠Q取水牛角粉，置燒杯中，加入8倍量4N氫氧化鈉Ba(OH)2熱溶液，加熱至沸，不斷攪拌，進行水解6～8小時，待水牛角粉全部被水解成無褐色顆粒為止；放溫至40～50℃時，傾取上清液，過濾，濾渣用少量熱水洗1～2次，收取所有溶液，放置備用；⑤按處方量，稱取珍珠母粉，置燒瓶中，加入6～8倍量4N硫酸溶液，加熱至沸，水解6～8小時，待珍珠母粉末由灰色轉為黃色沉淀物(CaSO4↓)，停止加熱，放溫至40～50℃，過濾，濾渣用少量熱水洗滌3次，洗液與濾液合并，放冷后有白色針狀結晶析出，再過濾除掉，得淡黃色透明溶液；中和除去硫酸鋇(BaSO4)等雜質(zhì)取水牛角粉水解液，在攪拌下加入到珍珠母水解液中，全部水牛角水解液加完后，如混合液過酸，再補加適量Ba(OH)2固體，攪拌溶解調(diào)pH值為4；放置使沉淀下沉，超濾10000分子量，濾取混和水解液，其中用10％H2SO4液檢查Ba2+，應呈陰性，再用10％NaOH液調(diào)Ph＝6～7，抽濾，得淡黃色澄清液；混合水解液濃縮與醇處理將澄清的混合水解液置蒸發(fā)皿內(nèi)，加熱蒸發(fā)濃縮，至相當原料總量2～3倍量時，放冷；在攪拌下加入濃乙醇，使含醇量達60％，冷藏24小時，過濾，減壓回收乙醇至近無醇味止；放出冷藏供配液用；2、注射液的配制(1)提取藥液的混合取水牛角和珍珠母混合提取液，在攪拌下加入板藍根提取液；再加入梔子提取液；混合均勻，調(diào)節(jié)pH6～7，抽濾，得澄明的橙紅色溶液A；(2)牛膽酸和豬膽酸的溶解取用固體NaOH飽和的95％乙醇適量，攪拌下逐漸撒入牛膽酸細粉，調(diào)pH8.5～9.0，使其全部溶解；合并兩個膽酸鈉溶液，加入到A液中；(3)混合藥液的醇處理取水牛角等混合藥液，加入95％乙醇使含醇量達70％，調(diào)節(jié)pH6.5～7.0，冷藏24小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味；(4)黃芩素和金銀花提取物處理與溶解取適量注射用水，用10％NaOH調(diào)pH至8左右，在攪拌下撒入黃芩素細粉，使全部溶解后，調(diào)pH至7左右；取金銀花提取物，加入少量注射用水，用95％乙醇調(diào)含醇量達80％，冷藏24小時，抽濾，沉淀用80％乙醇洗滌，合并洗液與濾液，減壓回收乙醇至無醇味，繼續(xù)濃縮得金黃色稠膏；用含黃芩素的溶液溶解精制的金銀花提取液，并入混合藥液中，得總混合藥液；(5)總混合藥液的處理量取混合藥液，補加注射用水至2000ml，調(diào)節(jié)pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小時，放溫后過濾，濾液冷藏放置過夜，過濾，濾液用沸水浴加熱半小時，再冷藏過夜，用0.2μm濾膜超濾，得澄明的橘紅色藥液，pH值應為6.5～7.0；分裝成2000瓶，每瓶1ml，相當生藥1.6g，冷凍干燥即得。
中和除去硫酸鋇(BaSO4)等雜質(zhì)取水牛角粉水解液，在攪拌下加入到珍珠母水解液中，全部水牛角水解液加完后，如混合液過酸，再補加適量Ba(OH)2固體，攪拌溶解調(diào)pH值為4；放置使沉淀下沉，超濾10000分子量，濾取混和水解液，其中用10％H2SO4液檢查Ba2+，應呈陰性，再用10％NaOH液調(diào)Ph＝6～7，抽濾，得淡黃色澄清液；混合水解液濃縮與醇處理將澄清的混合水解液置蒸發(fā)皿內(nèi)，加熱蒸發(fā)濃縮，至相當原料總量2～3倍量時，放冷；在攪拌下加入濃乙醇，使含醇量達60％，冷藏24小時，過濾，減壓回收乙醇至近無醇味止；放出冷藏供配液用；2、注射液的配制(1)提取藥液的混合取水牛角和珍珠母混合提取液，在攪拌下加入板藍根提取液；再加入梔子提取液；混合均勻，調(diào)節(jié)pH6～7，抽濾，得澄明的橙紅色溶液A；(2)牛膽酸和豬膽酸的溶解取用固體NaOH飽和的95％乙醇適量，攪拌下逐漸撒入牛膽酸細粉，調(diào)pH8.5～9.0，使其全部溶解；合并兩個膽酸鈉溶液，加入到A液中；(3)混合藥液的醇處理取水牛角等混合藥液，加入95％乙醇使含醇量達70％，調(diào)節(jié)pH6.5～7.0，冷藏24小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味；(4)黃芩素和金銀花提取物處理與溶解取適量注射用水，用10％NaOH調(diào)pH至8左右，在攪拌下撒入黃芩素細粉，使全部溶解后，調(diào)pH至7左右；取金銀花提取物，加入少量注射用水，用95％乙醇調(diào)含醇量達80％，冷藏24小時，抽濾，沉淀用80％乙醇洗滌，合并洗液與濾液，減壓回收乙醇至無醇味，繼續(xù)濃縮得金黃色稠膏；用含黃芩素的溶液溶解精制的金銀花提取液，并入混合藥液中，得總混合藥液；(5)總混合藥液的處理量取混合藥液，補加注射用水至2000ml，調(diào)節(jié)pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小時，放溫后過濾，濾液冷藏放置過夜，過濾，濾液用沸水浴加熱半小時，再冷藏過夜，用0.5μm濾膜超濾，得澄明的橘紅色藥液，pH值應為6.5～7.0；分裝成2000瓶，每瓶1ml，相當生藥1.6g即得。
用含黃芩素的溶液溶解精制的金銀花提取液，并入混合藥液中，得總混合藥液；(5)總混合藥液的處理量取混合藥液，補加注射用水至2000ml，調(diào)節(jié)pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小時，放溫后過濾，濾液冷藏放置過夜，過濾，濾液用沸水浴加熱半小時，再冷藏過夜，用0.8μm濾膜超濾，得澄明的橘紅色藥液，pH值應為6.5～7.0；分裝成2000瓶，每瓶1ml，相當生藥1.6g，冷凍干燥即得。
實施例4清開靈注射液或注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法鑒別a.取本品1瓶加5ml注射用水溶解，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混勻，在70℃水浴中加熱10分鐘，溶液顯灰紫色；b.取本品1瓶加5ml甲醇溶解，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液，稱取梔子藥材0.5g，加甲醇10ml浸提過夜，濾過，濾液濃縮后的殘留物加甲醇溶至2ml得梔子藥材溶液；再稱取梔子甙2mg加甲醇溶至1ml作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254預制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-無水乙醇-冰醋酸展開，晾干，噴以1％香夾蘭醛-濃硫酸溶液，105℃烘5分鐘，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯有相同顏色斑點；含量測定a.黃芩甙，取清開靈粉針劑樣品3mg左右，精密稱定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔徑為0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試溶液；另取黃芩甙對照品，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；照高效液相色譜法(《中國藥典》1995年版一部附錄VI D)測定；分別精密吸取黃芩甙對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，流動相用28∶72乙腈-0.025M磷酸，檢測波長為276nm，測定峰面積積分值，以外標法計算即得；本品含黃芩甙(C21H18011)應為標示量的90.0～110.0％；b.膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液制備，精密稱取膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度；精密稱取豬去氧膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度；供試液制備精密稱取清開靈粉針劑樣品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽pH3.0，流速1.0ml/min，檢測波長為205nm，測定膽酸、豬去氧膽酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％；c.梔子甙對照品溶液制備，精密稱取梔子甙標準品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供試液制備精密稱取清開靈粉針劑樣品5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取梔子甙對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用30∶70甲醇-水，流速1.0ml/min，檢測波長為237nm，測定梔子甙峰面積積分值，以外標法計算；本品含梔子甙不得少于1.52％；d.綠原酸對照品溶液制備，精密稱取綠原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供試液制備精密稱取樣品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取綠原酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用10∶90乙腈-0.025M磷酸鹽，流速1.0ml/min，檢測波長為326nm，測定綠原酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含綠原酸不得少于0.5％；e.含氮量，精密稱取本品2mg，照氮測定法(《中國藥典》1995年版一部附錄IX L第二法)測定，即得，本品含氮(N)應為標示量的90.0～120.0％；實施例5本發(fā)明注射液或注射粉針劑的鑒別方法鑒別a.取清開靈粉針劑1瓶加5ml注射用水溶解或清開靈注射液5ml，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混勻，在70℃水浴中加熱10分鐘，溶液顯灰紫色；b.取清開靈粉針劑1瓶力5ml甲醇溶解，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液，稱取梔子藥材0.5g，加甲醇10ml浸提過夜，濾過，濾液濃縮后的殘留物加甲醇溶至2ml得梔子藥材溶液；再稱取梔子甙2mg加甲醇溶至1ml作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254預制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-無水乙醇-冰醋酸展開，晾干，噴以1％香夾蘭醛-濃硫酸溶液，105℃烘5分鐘，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯有相同顏色斑點；含量測定a.黃芩甙，取清開靈粉針劑3mg左右，精密稱定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔徑為0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試溶液；另取黃芩甙對照品，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；照高效液相色譜法(《中國藥典》1995年版一部附錄VI D)測定；分別精密吸取黃芩甙對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，流動相用30∶70乙腈-0.025M磷酸，檢測波長為276nm，測定峰面積積分值，以外標法計算即得；本品含黃芩甙(C21H18O11)應為標示量的90.0～110.0％；b.膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液制備，精密稱取膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度；精密稱取豬去氧膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH 3.0溶至刻度；供試液制備精密稱取本品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用38∶62乙腈-0.025 M磷酸鹽pH3.0，流速1.0ml/min，檢測波長為205nm，測定膽酸、豬去氧膽酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％；c.梔子甙對照品溶液制備，精密稱取梔子甙標準品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供試液制備精密稱取清開靈粉針劑5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取梔子甙對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用35∶65甲醇-水，流速1.0ml/min，檢測波長為237nm，測定梔子甙峰面積積分值，以外標法計算；本品含梔子甙不得少于1.52％；d.綠原酸對照品溶液制備，精密稱取綠原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供試液制備精密稱取清開靈粉針劑樣品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取綠原酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用15∶85乙腈-0.025 M磷酸鹽，流速1.0ml/min，檢測波長為326nm，測定綠原酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含綠原酸不得少于0.5％；e.含氮量，
精密稱取清開靈粉針劑樣品2mg，照氮測定法(《中國藥典》1995年版一部附錄IX L第二法)測定，即得，本品含氮(N)應為標示量的90.0～120.0％；實施例6本發(fā)明注射液或注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法鑒別a.取清開靈粉針劑1瓶加5ml注射用水溶解或取清開靈注射液5ml，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混勻，在70℃水浴中加熱10分鐘，溶液顯灰紫色；b.取本品1瓶加5ml甲醇溶解，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液，稱取梔子藥材0.5g，加甲醇10ml浸提過夜，濾過，濾液濃縮后的殘留物加甲醇溶至2ml得梔子藥材溶液；再稱取梔子甙2mg加甲醇溶至1ml作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254預制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-無水乙醇-冰醋酸展開，晾干，噴以1％香夾蘭醛-濃硫酸溶液，105℃烘5分鐘，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯有相同顏色斑點；含量測定a黃芩甙，取清開靈粉針劑樣品3mg左右，精密稱定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔徑為0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試溶液；另取黃芩甙對照品，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；照高效液相色譜法(《中國藥典》1995年版一部附錄VI D)測定；分別精密吸取黃芩甙對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，流動相用40∶60乙腈-0.025M磷酸，檢測波長為276nm，測定峰面積積分值，以外標法計算即得；本品含黃芩甙(C21H18O11)應為標示量的90.0～110.0％；b.膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液制備，精密稱取膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度；精密稱取豬去氧膽酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度；供試液制備精密稱取本品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸鹽緩沖液pH3.0溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取膽酸、豬去氧膽酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用30∶70乙腈-0.025 M磷酸鹽pH3.0，流速1.0ml/min，檢測波長為205nm，測定膽酸、豬去氧膽酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％；c.梔子甙對照品溶液制備，精密稱取梔子甙標準品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供試液制備精密稱取清開靈粉針劑樣品5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取梔子甙對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用20∶80甲醇-水，流速1.0ml/min，檢測波長為237nm，測定梔子甙峰面積積分值，以外標法計算；本品含梔子甙不得少于1.52％；d.綠原酸對照品溶液制備，精密稱取綠原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供試液制備精密稱取樣品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔濾膜過濾，得供試液；照高效液相色譜法《中國藥典》一部附錄VI D測定；分別精密吸取綠原酸對照品溶液與供試液各10μl，注入高效液相色譜儀，色譜柱C18ODS柱，流動相用18∶82乙腈-0.025 M磷酸鹽，流速1.0ml/min，檢測波長為326nm，測定綠原酸峰面積積分值，以外標法計算；本品含綠原酸不得少于0.5％；e.含氮量，精密稱取清開靈粉針劑樣品2mg，照氮測定法(《中國藥典》1995年版一部附錄IX L第二法)測定，即得，本品含氮(N)應為標示量的90.0～120.0％。
權利要求
1.一種清開靈注射液或注射用粉針劑的制備方法，它是將膽酸16.25g、豬去氧膽酸18.75g、黃芩甙25g、珍珠母粉250g、水牛角粉125g、梔子125g板藍根1000g、金銀花100g為主要原料，將梔子、板藍根和金銀花分別進行提取制得提取液，然后將水牛角制得水解液，將珍珠母粉制得水解液，其特征在于在分別制備梔子、板藍根和金銀花提取液中將提取液都進行了高速離心，然后取珍珠母粉水解液，攪拌下加入水牛角粉水解液，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)PH值至4，靜置，濾取上清液檢查鋇離子呈陰性，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6～7，濾過，濾液濃縮至20℃測相對密度為1.05的清膏，放冷，加入乙醇，使含醇量達70％，冷藏，濾過，減壓回收乙醇至無醇味，放冷，加入乙醇，使含醇量達80％，冷藏，濾過，減壓回收乙醇，濾過，將濃縮液超濾，超濾液冷置，濾過，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液，備用；取豬去氧膽酸粉、黃芩甙粉、膽酸粉分別加以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8的注射用水使溶解，混勻；加入上述藥材提取液中，攪勻，調(diào)節(jié)PH值至7，得混合液，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)PH值至7；將混合液超濾，濾液就得注射液，或者冷凍干燥或噴霧干燥，即得注射用粉針劑。
2.按照權利要求1所述的方法，其中高速離心的速度為10000-20000轉/分鐘范圍內(nèi)。
3.照權利要求2所述的方法，其中高速離心的速度為16000轉/分鐘。
4.按照權利要求1-3中任何一項所述的方法，其中超濾用0.2-0.8μm的無菌濾膜。
5.按照權利要求4所述的方法，其中超濾用0.22μm的無菌濾膜。
6.清開靈注射液或注射用粉針劑中黃芩甙的質(zhì)量控制方法，它包括將黃芩甙加甲醇溶解，過濾，得黃芩甙溶液，備用；用高效液相色譜儀，以20～45∶80～55比例的乙腈或甲醇-0.3～0.6％磷酸或冰乙酸為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑，其中含黃芩甙應為標示量的90.0～110.0％。
7.清開靈注射液或注射用粉針劑中膽酸和豬去氧膽酸的質(zhì)量控制方法，它包括將膽酸加入乙腈-磷酸鹽緩沖液系統(tǒng)溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相用40～85∶60～15∶0.1～0.5比例的甲醇或乙腈-水-冰醋酸或磷酸測定清開靈注射液或注射用粉針劑，含膽酸、豬去氧膽酸應為標示量的90.0％～110.0％。
8.清開靈注射液或注射用粉針劑中梔子甙的質(zhì)量控制方法，它包括在梔子甙中加甲醇-水溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，以15～40∶85～60比例的甲醇或乙腈-水為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑的產(chǎn)品，含梔子甙不得少于1.52％。
9.清開靈注射液或注射用粉針劑中綠原酸的質(zhì)量控制方法，它包括在綠原酸中加甲醇溶解，過濾，得供試液，備用；用高效液相色譜儀，以8～20∶92～80比例的乙腈或甲醇-0.2～0.6％磷酸為流動相，測定清開靈注射液或注射用粉針劑的產(chǎn)品，含綠原酸不得少于0.5％。
10.清開靈注射液或注射用粉針劑的鑒別方法，它包括取清開靈注射液或注射用粉針劑樣品加1-10ml新制的糖醛溶液，與1-10ml硫酸溶液混勻，水浴加熱，溶液呈灰紫色；同時取清開靈注射液或注射用粉針劑樣濾過，濾液濃縮的殘留物加甲醇，得梔子藥材溶液；取梔子甙加甲醇溶解，得對照品溶液試液；照薄層色譜法，吸取三種溶液，點于GF254預制版上，以8-12∶1-3∶0.5-1.5的乙酸乙脂-無水乙醇-冰醋酸展開噴以香夾蘭醛-濃硫酸溶液，供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上顯有相同顏色斑點。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種清開靈注射液或注射用粉針劑的制備方法，該方法是在原有清開靈注射液或注射粉針劑的制備工藝基礎上進一步加以改進，在梔子、板藍根、金銀花的各提取液制備過程中使用了高速離心的技術，然后在合并提取液后使用了超濾技術制備而成。本發(fā)明方法制備的清開靈注射液或注射用粉針劑產(chǎn)品穩(wěn)定性更好，有效期更長。本發(fā)明還公開了清開靈注射液或注射用粉針劑中黃芩甙、膽酸和豬去氧膽酸、梔子甙、綠原酸的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明也公開了清開靈注射液或注射用粉針劑的鑒別方法。
文檔編號A61K9/08GK1440773SQ0310942
公開日2003年9月10日 申請日期2003年4月10日 優(yōu)先權日2003年4月10日
發(fā)明者蔡劍前 申請人:于文勇