專利名稱：治療真皮損傷的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療和預(yù)防可能是創(chuàng)傷性、感染性，生理性或病理性原因?qū)е碌牟溉閯游锲つw損傷的方法和組合物。
背景技術(shù)：
皮膚的完全厚度(full thickness)的傷口可以是各種原因?qū)е碌?，其中最常見的是?chuàng)傷性或外科損害。部分厚度傷口通常是擦傷、燒傷、壓力損傷或其他小的創(chuàng)傷引起的。皮膚上皮的破壞也可以是癌癥化學(xué)治療或皮膚放射治療的結(jié)果。皮膚損害也可以是對局部或系統(tǒng)施用的治療劑的超敏感反應(yīng)的結(jié)果。除了那些可以引起直接損傷的藥物，一些藥物(包括許多抗生素)可以誘導(dǎo)皮膚光敏感，可能會因而導(dǎo)致上皮損傷?；蛘撸瑐诤蜐円部梢允茄軝C(jī)能不全，通常特征為血管疾病的慢性糖尿病，以及壓力壞死(pressure necrosis)和褥瘡導(dǎo)致的。
典型地，常規(guī)傷口護(hù)理是在降低感染，保證適當(dāng)?shù)膭用}供應(yīng)和靜脈流，在中度或嚴(yán)重的損傷中，通過機(jī)械方法(例如縫合或傷口鉗)保證上皮表面非常接近來進(jìn)行的。在這一點(diǎn)上，重要的是要考慮致病微生物的繼發(fā)感染，特別是考慮到皮膚的保護(hù)屏障功能。這些癥狀，當(dāng)嚴(yán)重時是慢性致弱局部感染和敗血癥的威脅因子，因?yàn)槲⑸锟梢岳脫p傷的上皮細(xì)胞作為進(jìn)入身體的人口。繼發(fā)感染可以在免疫損傷(immunocompromised)的患者中進(jìn)一步加劇，如在那些進(jìn)行癌癥治療(化學(xué)治療或放射治療)的患者中。
除了恢復(fù)皮膚屏障功能，傷口護(hù)理也與美容效果和減少疤痕組織相關(guān)。這樣，快速恢復(fù)正常的上皮層對降低疤痕的形成和傷口的繼發(fā)性并發(fā)癥(特別是感染)的量具有潛力。
發(fā)明概述本發(fā)明的特征是通過對皮膚的損傷部位，或要防止損傷的皮膚區(qū)域施用治療有效量的三葉肽(trefoil peptide)，或其生物活性片段，治療和預(yù)防哺乳動物的皮膚損傷。根據(jù)本發(fā)明，損傷的治療或預(yù)防可以加速愈合、降低疼痛、推遲或防止損傷的發(fā)生、抑制擴(kuò)張(expansion)、繼發(fā)感染或其他的損傷并發(fā)癥。優(yōu)選地，哺乳動物是人。在特別有用的實(shí)施方案中，三葉肽是解痙肽(SP)、pS2、腸三葉肽(ITF)、ITF15-73、ITF21-73、ITF1-72、ITF15-72或ITF21-72。并且存在于含有藥用載體的藥物組合物中。其他有用的三葉肽包括與SP、pS2、ITF、ITF15-73、ITF21-73、ITF15-72或ITF21-72基本相同的多肽。優(yōu)選地，三葉肽是ITF，或生物活性ITF片段，其可以作為單體、二體或其他多體形式施用。
本發(fā)明的方法和組合物對治療由炎癥或變應(yīng)性反應(yīng)如濕疹、牛皮癬或接觸性皮炎；壓力潰瘍、痤瘡引起的皮膚損傷，物理創(chuàng)傷或外科介入(例如局部的活檢或切開)引起的損傷，化學(xué)、熱或放射性燒傷引起的損傷，或抗腫瘤治療(例如化學(xué)治療或放射治療)引起的損傷是特別有用的。另外，微生物感染，不管是細(xì)菌、病毒(例如皰疹或乳頭瘤病毒)或真菌導(dǎo)致的皮膚的損傷也是可以治療的。更具體地，施用三葉肽也可用于治療損傷，或促進(jìn)上皮的生長，和表皮處于不成熟狀態(tài)的早產(chǎn)(preterm)嬰兒的成熟。
在這些方法和組合物中，可以包括第二治療劑?？捎玫牡诙委焺┌寡装Y劑(例如rofecoxib或celecoxib)、抗細(xì)菌劑(例如苯甲酰過氧化物(benzoyl peroxide)、聚維酮碘、壬二酸、類維生素A(retinoid)、克林霉素、紅霉素、青霉素、頭孢菌素、四環(huán)素和氨基糖苷)、抗真菌劑(例如制霉菌素、兩性霉素B、苯甲酸、十一碳烯烷醇酰胺、環(huán)吡酮胺、多烯、咪唑、烯丙胺和硫代氨基甲酸酯(thiocarbamate))、抗病毒劑(例如無環(huán)鳥苷)、局部止痛藥(例如利多卡因和苯唑卡因)、系統(tǒng)止痛藥(例如阿片、fentenyl和NSAIDS)、類固醇(例如曲安西龍、糖皮質(zhì)類固醇、布地耐德、氟輕松、倍他米松、二氟可龍、氟地卡松、莫美他松、潑尼松、甲基潑尼西龍、倍他米松、地塞米松、曲安西龍和氫化可地松)，和紫外阻擋劑。在與皮膚創(chuàng)傷相關(guān)的休克的嚴(yán)重的情況中，也可以系統(tǒng)地施用鎮(zhèn)靜劑，如苯并二氮雜卓(例如安定)。當(dāng)用于治療牛皮癬時，三葉肽可以包括局部藥劑(例如蒽林、類維生素A、維生素D類似物和糖皮質(zhì)激素)，或系統(tǒng)藥劑(例如氨甲喋呤和環(huán)孢菌素)。第二治療劑可以在(三葉肽施用之前或之后)14天、7天、1天、12小時、1小時內(nèi)，或與三葉肽同時施用。
第二治療劑可以存在于和三葉肽相同或不同的藥物組合物中。當(dāng)?shù)诙委焺┐嬖谟诓煌乃幬锝M合物中時，可以利用不同的施用途徑。例如，第二治療劑可以口服，或通過靜脈、肌肉內(nèi)或皮下注射施用。所以，第二治療劑不需要局部施用。
當(dāng)然，藥物組合物可以含有兩種、三種或更多的三葉肽，或生物活性片段?；蛘撸~肽的局部施用可以通過口服施用相同或不同的三葉肽來補(bǔ)充。
本發(fā)明的組合物也可以在治療或?qū)p傷真皮或表皮的癥狀之前用于預(yù)防。例如，為了減輕上皮完整性上的損失，在癌癥治療之前，可以在皮膚區(qū)域應(yīng)用組合物。含有三葉肽的組合物也可以在太陽暴露之前或在外科手術(shù)進(jìn)行之前在皮膚的一個區(qū)域應(yīng)用。
適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物至少包括一種三葉肽和一種藥用載體。利用含有本發(fā)明的組合物的三葉肽的治療通常是自我施用的。但是，三葉肽治療可以通過醫(yī)師或其他健康護(hù)理人員給予。例如，對外科或激光除去方法后立即除去惡性損傷引起的損傷可以應(yīng)用含有三葉肽的凝膠、乳液、溶液、懸浮液、油膏、噴劑，生物可降解(bioerodable)聚合物或水凝膠(非生物可降解多聚體)。在其他有用的實(shí)施方案中，有粘膜粘附劑(mucoadhesive)、等滲劑或粘性增強(qiáng)劑。或者，三葉肽可以配制成直接應(yīng)用于損傷部位的濃縮的藥膏、懸浮液、乳液或油膏的局部應(yīng)用?；蛘?，三葉肽可以配制成局部貼片(patch)，持續(xù)遞送該肽。貼片可以是粘性的或非粘性的，可以是封閉性(occlusive)的或非封閉性的。一種封閉性的貼片可以通過部分裸露的上皮增強(qiáng)三葉肽的滲透性。其他封閉性的賦形劑(例如疏水聚合物)和滲透增強(qiáng)劑(脂肪酸、醇、苯甲酸酯、甘油或吡咯烷酮)也可以用于增強(qiáng)三葉肽的滲透。另外，在縫合之前或在外科手術(shù)過程中，可以配制三葉肽沖洗傷口。所以，三葉肽可以配制在沖洗溶液如鹽或Ringer溶液中?；蛘撸~肽可以浸滲在縫合物質(zhì)中(例如腸線(gut)、絲、膠原、乙醇酸聚合物或尼龍)或傷口敷料(紗布墊、封閉敷料、半封閉敷料、藻酸、水合膠質(zhì)和粘附薄膜)。
哺乳動物三葉肽是在1982年發(fā)現(xiàn)的。一種哺乳動物三葉肽-人的腸三葉因子(ITF；TFF3)-已經(jīng)廣泛地得到了鑒定，并且在美國專利6,063,755，和6,221,840中有述，這些文獻(xiàn)被引入作為參考。其他兩個已知的人三葉肽是解痙多肽(SP；TFF2)和pS2(TFF1)。在文獻(xiàn)中(例如，Sand等，Annu.Rev.Physiol.58253-273，1996)廣泛敘述的三葉肽是在腸胃道中表達(dá)的，并且具有保守半胱氨酸殘基之間鏈內(nèi)二硫鍵形成的三環(huán)結(jié)構(gòu)。這些肽保護(hù)腸道不受損傷，并且可以用于治療腸道紊亂，如消化性潰瘍和炎癥大腸疾病。這些人的肽的同源物已經(jīng)在許多非人動物種類中發(fā)現(xiàn)。這一蛋白質(zhì)家族的所有成員，人或非人的，本文都稱為三葉肽。人ITF在本申請中提到最多；但是，人ITF的活性與每種哺乳動物的三葉肽是一樣的。
“三葉肽”如本文所用，包括人的解痙多肽(SP；也已知為TFF2)，人pS2(也已知為TFF1)和人的腸三葉因子(ITF；也已知為TFF3)和其生物活性片段的所有哺乳動物同源物。三葉肽的同源物優(yōu)選地與人序列具有70％的氨基酸同一性，更優(yōu)選地具有85％的同一性，最優(yōu)選地具有95％，甚至99％的序列同一性。比較序列的長度通常將至少約10個氨基酸殘基，通常至少約20個氨基酸殘基，更通常至少30個氨基酸殘基，典型地至少45個氨基酸殘基，優(yōu)選地60個氨基酸殘基以上。或者，三葉肽是以高嚴(yán)格性與SEQ ID NO4、5和6提供的人ITF、pS2或SP cDNA，或者SEQ ID NO7、8和9提供的人ITF、pS2或者SP基因雜交的多核苷酸編碼的多肽。
術(shù)語“片段”包括SP、pS2和ITF截短或缺失的多肽。優(yōu)選地，這些片段是生物活性的，與人多肽序列的對應(yīng)區(qū)具有70％的氨基酸同一性。更優(yōu)選地，這些片段與他們對應(yīng)的人多肽序列有85％的同一性，最優(yōu)選地有95％，甚至有99％的同一性。比較序列的長度通常將至少約10個氨基酸殘基，通常至少約20個氨基酸殘基，更通常至少約30個氨基酸殘基，典型地至少45個氨基酸殘基，優(yōu)選地60個氨基酸殘基。
優(yōu)選的片段在人的ITF(

圖1)的位置25、35、45、50、51、62或71，或人pS2(圖2)的位置31、41、51、56、57、68和82的半胱氨酸對應(yīng)的任何位置中含有四個半胱氨酸殘基。更優(yōu)選地，這些片段在這些位置含有5個半胱氨酸殘基。最優(yōu)選地，存在6個或者甚至所有7個半胱氨酸殘基。
SP的片段包括截短或缺失的片段，并且優(yōu)選地與對應(yīng)的人SP多肽序列具有70％的序列同一性(圖3)。更優(yōu)選地，這些片段與人多肽序列具有85％的同一性，最優(yōu)選地具有95％，或者甚至有99％的同一性。優(yōu)選地，這些活性片段至少含有四個半胱氨酸殘基，對應(yīng)于人SP多肽中的位置6、8、19、29、34、35、46、58、68、78、83、84、95和104。更優(yōu)選地，這些片段含有對應(yīng)于這些位置的6個半胱氨酸殘基。甚至更優(yōu)選地是含有8個半胱氨酸的片段。最優(yōu)選地，是在10個、12個、甚至所有14個位置都含有半胱氨酸的片段。
本領(lǐng)域已認(rèn)識到，已鑒定的半胱氨酸的一個功能是給予蛋白質(zhì)特征性的三環(huán)(三葉)結(jié)構(gòu)。因此，ITF和pS2的優(yōu)選片段至少具有一個環(huán)結(jié)構(gòu)，更優(yōu)選地，這些片段具有兩個環(huán)結(jié)構(gòu)，最優(yōu)選地，具有三個環(huán)結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域同樣認(rèn)識到的是，天然SP多肽具有6個環(huán)構(gòu)型。優(yōu)選的片段至少含有這些環(huán)結(jié)構(gòu)中的兩個，更優(yōu)選地，保留四個環(huán)結(jié)構(gòu)，最優(yōu)選地，存在5個、甚至所有6個環(huán)結(jié)構(gòu)。
“共配制的”是指含有兩個或多個治療性或生物活性藥劑的任意單一藥物組合物。
“藥物制劑”或“藥物組合物”是指至少含有一種治療性或生物活性藥劑的任意組合物，并且適于對患者施用。針對本發(fā)明的目的，適于遞遙治療劑到皮膚的藥物組合物包括，但不限于水溶液、乳液、凝膠、懸浮液、噴劑、生物可降解聚合物、水凝膠(非生物可降解凝膠聚合物)、貼片、沖洗溶液、藥膏、洗液、油膏、泡沫、傷口敷料和縫合線。這些制劑中的任意一種都可以通過已知的和已接受的方法來制備。參見，例如，Remingtion藥物科學(xué)和實(shí)踐，第19版，(AR Gennaro編輯)，Mack出版公司，Easton，PA，1995。
“局部施用”是指對皮膚的外部和/或暴露的表面應(yīng)用治療有效量的藥物組合物，達(dá)到真皮和/或表皮。
“治療有效量”是指足以提供醫(yī)學(xué)良好效果的量。當(dāng)根據(jù)本文所述的方法對人患者給予三葉肽時，有效量將隨著待治療的損傷區(qū)域的大小而改變；但是，治療有效量通常約是每次劑量1-2500mg三葉肽。優(yōu)選地，每次劑量患者至少接受10mg、100mg、500mg、750mg、1000mg、1500mg或2000mg的三葉肽。對于大的損傷如大的熱燒傷引起的可能需要更大的量。每天通常用1-5次劑量。
當(dāng)指三葉肽、片段或同源物時，“生物活性”的意思是指任意的多肽，其具有與相關(guān)的天然存在的家族成員相同的活性，并且這種活性在天然存在的三葉肽的家族中是相同。與三葉肽家族的生物活性相同的例子是再構(gòu)成腸胃粘膜的能力(Taupin等，美國國家科學(xué)院院刊，97(2)799-804)。
“分離的DNA”是指沒有某些基因的DNA，所述基因在天然存在的生物體(所述DNA來源于該生物體)基因組中，位于所述DNA的兩側(cè)。所以，術(shù)語“分離的DNA”包括例如cDNA、克隆的基因組DNA和合成DNA。
“治療”是指為了預(yù)防和/或治療目的給予藥物組合物。藥物組合物的活性成分可以治療初步的適應(yīng)癥(例如上皮損傷)，或繼發(fā)的癥狀(例如伴隨性感染、疼痛或炎癥)。
“燒傷”是指對暴露于熱、酸、腐蝕劑、化學(xué)劑、電或輻射(例如紫外輻射)導(dǎo)致的真皮、表皮或下面的組織的損傷，特征是皮膚的破壞和充血程度改變，經(jīng)常形成水皰，嚴(yán)重情況下，組織燒焦，可以根據(jù)損傷的范圍和程度來分類。有三個燒傷的級別。第一度的燒傷是表面的，只包括皮膚的上層(表皮)。第一度的燒傷的特征是干，皮膚紅，通常5-6天愈合，而不會留下永久的疤痕。第二度的燒傷是有些厚度的燒傷，包括表皮和真皮。這些燒傷將有水泡和滲出的液體，在不治療的情況下，通常需要3-4星期或更長時間的愈合?？赡艹霈F(xiàn)傷疤。最嚴(yán)重的是三度燒傷，破壞了所有的皮膚層，和一些下面的組織。休克和感染的并發(fā)癥使三度燒傷存在潛在的生命危險。
“傷口敷料”是指覆蓋一個損傷或損傷位點(diǎn)的任意的封閉的或半封閉的覆蓋面。除了將皮膚與三葉肽接觸，優(yōu)選地敷料應(yīng)該在損傷位點(diǎn)維持潮濕的環(huán)境，除去過量的滲出液，具有隔絕熱的特性，允許氣體通暢，并且對微生物是不透的，和/或允許自由除去創(chuàng)傷。敷料的選擇將例如受到臨床適應(yīng)癥如傷口類型、傷口位置、碎屑或感染的存在，滲出液的水平，患者的舒服度和價格的效果的影響。
“抗微生物劑”是指改變細(xì)菌或真菌細(xì)胞，或病毒的生長的任何化合物，從而生長被防止、穩(wěn)定、或抑制或殺死微生物。用另一句話說，抗微生物劑可以是殺微生物劑或制微生物劑。
“抗腫瘤治療”是指用于治療癌癥的任何治療方案(regimen)。典型的抗腫瘤治療包括化學(xué)治療和放射治療。
“紫外阻擋劑”是指用于阻止紫外輻射的任何治療方案。典型的紫外輻射阻擋劑配制成乳液或藥膏，可在暴露于太陽下之前應(yīng)用。
“基本相同”是指與參考的氨基酸或核酸序列至少具有75％，但優(yōu)選地85％，更優(yōu)選地90％，最優(yōu)選地95％，或99％的同一性的多肽或核酸。對于多肽，比較序列的長度通常將至少是20個氨基酸長度，優(yōu)選地至少30個氨基酸長度，更優(yōu)選地至少40個氨基酸長度，最優(yōu)選地至少50個氨基酸長度。對于核酸，比較序列的長度通常將至少60個核苷酸，優(yōu)選地至少90個核苷酸，更優(yōu)選地至少120個核苷酸。
“高度嚴(yán)格條件”是指在含有0.5M NaHPO4，pH7.2，7％SDS，1mM EDTA，和1％BSA(級分V)的緩沖液中，在65℃的溫度下，或含有48％甲酰胺，4.8X SSC，0.2 M Tris-Cl，pH7.6，1X Denhardt’s溶液，10％硫酸葡聚糖，和0.1％SDS，在42℃的溫度下，特征是高溫和低離子強(qiáng)度，并且允許與利用至少40個核苷酸長度的DNA探針產(chǎn)生的那些雜交可比較的任何系列的條件。其他高嚴(yán)格雜交條件，如對PCR、Northern、Southern、或原位雜交，DNA測序等等是分子生物學(xué)領(lǐng)域中的技術(shù)人員已知的。參見例如，F(xiàn).Ausubel等，<<現(xiàn)代分子生物學(xué)手冊>>，John Wiley & Sons，紐約，NY，1998，引入本文作為參考。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)可以從下面的詳細(xì)說明和權(quán)利要求中了解。
附圖簡述圖1是人腸三葉因子的氨基酸序列(ITF；登記號，BAA95531)。
圖2是人pS2蛋白質(zhì)的氨基酸序列(登記號，NP_003216)。
圖3是人解痙多肽的氨基酸序列(SP；登記號1909187A)。
圖4是編碼人腸三葉因子的cDNA序列。
圖5是編碼人pS2蛋白質(zhì)的cDNA序列。
圖6是編碼人解痙多肽的cDNA序列。
圖7是編碼人腸三葉因子的基因的核苷酸序列(座位(locus)1028053352117-55412)。
圖8是編碼人pS2蛋白質(zhì)的基因的核苷酸序列(座位1028053316511-21132)。
圖9是編碼人解痙多肽的基因的核苷酸序列(座位10280533957-5208)。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于治療大范圍真皮和表皮的損傷的方法和組合物。損傷可以發(fā)生在人的皮膚，包括頭皮、腹股溝和尿生殖器區(qū)域、臉、軀干、手臂、腿、足底或在腳趾之間的任何部分上。本發(fā)明的治療可修復(fù)的真皮和表皮的損傷可以用物理創(chuàng)傷(例如切、刮和外科介入)，化學(xué)和熱燒傷(例如太陽燒傷)，血管損傷(compromise)(例如糖尿病導(dǎo)致)、感染或炎癥過程(例如濕疹、牛皮癬、接觸性皮炎、皰疹和痤瘡)、微生物感染(例如病毒、細(xì)菌和真菌)，或抗瘤治療(例如放射性治療)來誘導(dǎo)。在燒傷患者的情況中，特別是那些遭受燒傷的皮膚損傷是嚴(yán)重的并且擴(kuò)展到大部分的身體上，因?yàn)闊岷退恼趄v，表皮的損失會快速變質(zhì)。雖然已經(jīng)可以利用機(jī)械系統(tǒng)如水凝膠緩解這一問題，快速恢復(fù)適當(dāng)?shù)钠琳蠈@樣的患者的康復(fù)是絕對必要的。
由于嬰兒中表皮狀態(tài)不成熟和角質(zhì)層相對缺乏，早產(chǎn)嬰兒的皮膚屏障功能也受到損傷。雖然，嚴(yán)重的程度大大地依賴于妊鉦的年齡，對皮膚屏障的損害最終可以引起明顯的并發(fā)癥。在這點(diǎn)上，皮膚對水的滲透性的增強(qiáng)導(dǎo)致了明顯的熱消散，同時提供了外來物質(zhì)的嵌入位點(diǎn)，包括例如變應(yīng)原，微生物和毒素。整體上來說，這些損傷是通過局部單獨(dú)利用三葉肽或結(jié)合其他治療劑來治療的。
藥物制劑油膏、糊劑、乳液、凝膠、沖洗液和組織粘附劑皮膚的上皮的損傷，如創(chuàng)傷或炎癥引起的那些是經(jīng)得起以油膏，藥膏或凝膠遞送的三葉肽治療的檢驗(yàn)的。這些類型的制劑的粘性的特性允許直接應(yīng)用于傷口位點(diǎn)?；蛘撸梢杂梅罅细采w傷口位點(diǎn)，保留含有三葉肽的組合物，保護(hù)損傷和/或吸收滲出液。如下面進(jìn)一步討論的，這些制劑可特別用于創(chuàng)傷外科過程(例如，皮膚活檢和切入)后恢復(fù)上皮的整合。這樣的粘性制劑也可以具有局部的屏障效果，從而降低刺激和疼痛。另外，三葉肽也可以存在外科中利用的任何已知的沖洗溶液(例如，0.9％的鹽或Ringer溶液)。
粘膜粘附劑在任何以上敘述的藥物組合物中可以加入粘膜粘附賦形劑。粘膜粘附劑包被損傷的區(qū)域，使三葉肽保留在損傷的位點(diǎn)，提供了保護(hù)，抑制了刺激，和加速了發(fā)炎的或損壞的組織的愈合。適于在這些藥物制劑中使用的粘膜粘附劑是本領(lǐng)域已知的(例如，美國專利5,458,879)。特別有用的粘膜粘附劑是約0.05-20％的水可溶的聚合物如聚環(huán)氧乙烷，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸，聚羥基乙基異丁烯酸，羥乙基乙基纖維素，羥基乙基纖維素，脫乙酰殼多糖，以及其混合物組成的水凝膠。這些聚合物的制劑也可以含有分散劑，如羧甲基纖維素鈉(0.5-5.0％)。
液體組成的其他優(yōu)選的粘膜粘附賦形劑是允許作為可流動的液體施用的組合物，但引起組合物在皮膚上成凝膠，從而提供了在一個很長的時期在損傷位點(diǎn)保持治療劑的生物粘附效果。陰離子多糖果膠和吉蘭糖是由于在粘性的液體中存在陽離子，當(dāng)配制成適當(dāng)?shù)慕M合物時將在皮膚上成凝膠的物質(zhì)的例子。含有果膠或吉蘭膠的液體組合物通常將由水或水緩沖系統(tǒng)中的0.01-20％w/v的果膠或吉蘭膠組成。
在真皮和表皮中提高粘附性和延長治療的時間的其他有用的組合物是含有2-50％的膠質(zhì)顆粒，如二氧化硅或二氧化鈦的膠質(zhì)分散劑。這樣的制劑的形式是可流動的低粘稠性的液體；但是，這些顆粒與糖蛋白相互作用，特別是粘蛋白，它將液體轉(zhuǎn)化成粘性的凝膠，提供了有效的粘附性(例如，美國專利5,993,846和6,319,513)。
生物粘附劑和生物可降解聚合物可用作傷口閉合的或選方法，或作為藥物遞送的載體。生物粘附劑對縫合，皮膚特別易破的老年人的傷口閉合是特別有用的。任何已知的生物粘附劑或聚合物都適用于本發(fā)明的三葉肽(例如，美國專利5,990,194、6,159,498和6,284,235)。通過適于在這些產(chǎn)物中摻入任何其他治療劑的任何方法，可以將三葉肽摻入粘附劑或聚合物。特別的方法將依據(jù)該產(chǎn)物的化學(xué)組合物和制造過程。
醫(yī)學(xué)材料縫合物質(zhì)，無菌傷口敷料(封閉和半封閉的，例如紗布墊)，局部用的貼片，粘性薄膜，和組織粘附劑可以用本發(fā)明的三葉肽來浸滲，在切入位點(diǎn)使用，促進(jìn)真皮和表皮的愈合。任何縫合物質(zhì)，傷口敷料，局部貼片，粘附薄膜和組織粘附劑也可以含有ITF組成的生物可降解聚合物和藻酸。
這些制劑可以根據(jù)已知的和常規(guī)的方法來生產(chǎn)，制備這樣的制劑。例如，在擠出之前，用三葉肽加載聚合物溶液可以浸滲單絲制成的縫合線?？p合物質(zhì)也可以利用含有三葉肽的溶液重復(fù)浸泡/干燥循環(huán)來浸滲。循環(huán)的次數(shù)依據(jù)浸泡溶液中三葉肽的濃度和縫合中含有的肽的最后的量。浸泡對編織的縫合物質(zhì)是特別有效的浸滲方法，因?yàn)槿~肽是通過表面輪廓保留的。
用三葉肽浸滲的傷口和燒傷的無菌敷料和紗布也可以用標(biāo)準(zhǔn)方法制備。通常，三葉肽存在于粘性的凝膠中(例如，水凝膠)，通過不粘附到傷口的可滲透的纖維，從真皮損傷中分離。
治療劑三葉肽治療性的三葉肽通常是哺乳動物三葉肽或其片段。優(yōu)選地，可以利用人三葉肽或片段；但是，來自其他物種，包括大鼠，小鼠，和非人靈長類的三葉肽也可以利用。通常，三葉肽是腸三葉因子(ITF)；但是，解痙多肽(SP)，或pS2也可以利用。
依據(jù)需要治療的損傷的特征和癥狀，預(yù)料的治療的頻度和時間長短，和用于遞送三葉肽的藥物組合物的類型的，三葉肽或片段的施用每次劑量是1-5000mg，優(yōu)選地每次是5-2500mg，更優(yōu)選地是每次是10-1500mg。三葉肽通常每天施用1-5次。
腸三葉因子(ITF)的治療性片段特別的ITF片段保留了生物活性，可以在利用ITF的任何方法或組合物中替代。例如，在美國專利6,063,755和6,221,840和2002年4月24日遞交的美國專利申請10/131,363，2001年9月6日遞交的60/317,657，2002年10月5日遞交的60/327,673，2001年11月28日遞交的60/333,836和2002年3月26日遞交的60/367,574(在此引入作為參考)中敘述了可以取代這些ITF片段的含有ITF的方法和組合物。
保留生物活性的特別有用的ITF片段包括對應(yīng)于SEQ ID NO1(ITF15- 73)的氨基酸15-73的多肽和SEQ ID NO1(ITF21-73)的氨基酸殘基21-73的多肽。其他有用的ITF片段是在裂解了C末端苯基丙氨酸殘基(即，ITF1 -72、ITF15-72和ITF21-72)后形成的。
本發(fā)明的生物活性ITF片段可以利用適當(dāng)?shù)姆椒▉砩a(chǎn)。例如，編碼需要的ITF片段的cDNA可以用本領(lǐng)域已知的任何方法來用于生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)。本文提供了可以作為例子的方法。當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基維持在pH約5.0時，用編碼長的ITF物種如全長的ITF(例如SEQ ID NO4)或ITF15-73的cDNA轉(zhuǎn)化的畢赤(Pichia)酵母表達(dá)系統(tǒng)可以生產(chǎn)ITF片段，特別是ITF21-73(參見例如，美國專利4,882,279和5,122,465)。
抗炎癥劑利用三葉肽可以配制任何適當(dāng)?shù)目寡装Y劑，并且在本發(fā)明的方法中使用。適當(dāng)?shù)目寡装Y劑包括，但不限于非類固醇抗炎癥藥物(例如，布洛芬和tacrolimus)，環(huán)氧加氧酶-2-特異抑制劑如rofecoxib(Vioxx)和celecoxib(Celebrex)。在施用之后已知有效的抗炎癥濃度是可以使用的。例如，布洛芬可以存在于組合物中，其濃度足以每天以25-800mg遞送到損傷部位。
抗微生物劑以這些藥劑通常利用的濃度在本發(fā)明的組合物中可以利用許多已知的抗微生物劑任意一種?？刮⑸飫┌辜?xì)菌劑、抗真菌劑和抗病毒劑。
雖然用于皮膚的最廣泛使用的抗細(xì)菌劑是苯甲酰過氧化物、聚維酮碘、壬二酸、視黃醛、克林霉素和紅霉素，其他抗細(xì)菌劑(抗生素)的例子包括青霉素(例如青霉素G、氨芐青霉素、二甲氧基苯青霉素、苯唑西林和阿莫西林)、頭孢菌素(例如頭孢羥氨芐、頭孢雷特、頭孢噻肟、頭孢曲松)、四環(huán)素(例如多西環(huán)素、小環(huán)素和四環(huán)素)、氨基糖苷(例如丁胺卡那霉素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、鏈霉素和妥布霉素)、大環(huán)內(nèi)酯(例如azithromycin、clarithromycin和紅霉素)、氟洛喹喏龍(例如ciprofloxacin、lomefloxacin和norfloxacin)，和其他抗生素，包括氯霉素、克林霉素、環(huán)絲氨酸、異煙肼、利福平和萬古霉素。
抗病毒劑是能夠破壞或抑制病毒的復(fù)制的物質(zhì)?？共《緞┑睦影?，-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺、9->2-羥基-乙氧基甲基胍、金剛烷胺、5-碘-2’-脫氧尿苷、三氟胸腺嘧啶、干擾素、腺嘌呤、阿拉伯糖苷、蛋白質(zhì)抑制劑、胸腺嘧啶激酶抑制劑、蔗糖或糖蛋白質(zhì)合成抑制劑、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)合成抑制劑、附著和吸收抑制劑和核苷類似物如阿昔洛韋、陪西洛韋、法拉西洛韋和岡西洛韋。
抗真菌劑包括殺真菌劑和制真菌劑，如苯甲酸、十一碳烯烷醇酰胺、環(huán)吡酮胺、多烯、咪唑、烯丙胺、噻氨基甲酸酯、兩性霉素B、丁基對羥基苯甲酸、氯林肯霉素、益康唑(econaxole)、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黃霉素、制霉菌素、酮康唑。
已知局部施用有效的抗微生物濃度也可以使用。例如，在組合物中可以存在四環(huán)素，已知濃度是每天在局部應(yīng)用后，在損傷部位100-1000mg。
鎮(zhèn)痛劑和麻醉劑任何通常使用的局部鎮(zhèn)痛劑可以本發(fā)明的組合物中使用。鎮(zhèn)痛劑存在的量能提供皮膚損傷部位利多卡因的一半和5％濃度之間的濃度(例如，每個液體劑量的20-40ml中5-50mg/ml)。其他有用的麻醉劑的例子包括，普羅卡因、利多卡因、鹽酸卡因、辛可卡因、苯佐卡因、p-丁噻氨基苯甲酸2-(二乙基氨基)乙基酯HCl、甲哌卡因、哌羅卡因和達(dá)克羅寧。
其他鎮(zhèn)痛劑可以系統(tǒng)地施用，包括阿片樣物質(zhì)，如嗎啡、可待因、氫可酮和羥考酮。這些鎮(zhèn)痛劑的任意一種都可以與其他具有鎮(zhèn)痛或抗炎癥特性的化合物如對乙酰氨基酚、阿斯匹林和布洛芬共同配制。
類固醇類固醇可以用于治療皮膚的損傷，并且可以配制，在本發(fā)明的組合物中使用。通常利用的局部類固醇藥劑包括但不限于，氟輕松、曲安西龍、倍他米松、二氟可他龍、氟他卡松、氫化可地松、莫美他松、甲基潑尼松龍和氯倍他松。在極端的皮膚刺激的例子中，也可以施用系統(tǒng)類固醇藥劑，如潑尼松、潑尼松龍、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松、曲安西龍和羥基可地松。
劑量在本發(fā)明的局部組合物中利用所有治療劑，包括三葉肽成分，可以在目前已知的劑量范圍內(nèi)使用，并且對這些藥劑使用。下面是本發(fā)明的組合物的活性成分的劑量范圍的說明性例子。不同濃度的三葉肽或其他藥劑可以根據(jù)患者的臨床癥狀，治療的目的(治療或預(yù)防)，和預(yù)期的時間或藥劑給予的損傷的嚴(yán)重程度來使用。在劑量選擇中的其他考慮的問題包括疾病的病因、患者的年齡(兒童、成年人、老年)、健康情況和飲食。
三葉肽的生產(chǎn)通過本領(lǐng)域任何已知的方法都可以生產(chǎn)三葉肽和片段，表達(dá)重組蛋白質(zhì)。編碼三葉肽(例如人腸三葉因子(圖4和7)、人pS2(圖5和8)和人解痙多肽(圖6和9)或其片段)的核酸可以導(dǎo)入各種細(xì)胞類型，或無細(xì)胞系統(tǒng)來表達(dá)，從而允許大范圍的生產(chǎn)，純化和治療患者。
可以生產(chǎn)在質(zhì)粒或其他載體中導(dǎo)入三葉肽基因序列的真核生物和原核生物三葉肽表達(dá)系統(tǒng)，然后用于轉(zhuǎn)化活細(xì)胞。三葉肽cDNA含有以準(zhǔn)確方向在表達(dá)質(zhì)粒中插入完全開放讀碼框架的構(gòu)建體可以用于蛋白質(zhì)的表達(dá)。原核和真核表達(dá)系統(tǒng)允許恢復(fù)和表達(dá)其中三葉肽共價連接到末端分子的三葉肽融合蛋白質(zhì)，簡化鑒定和/或純化。在三葉肽和末端分子之間可以將酶或化學(xué)裂解位點(diǎn)工程化，可以在純化后除去末端。
典型的表達(dá)載體含有在含有質(zhì)粒的細(xì)胞中指導(dǎo)對應(yīng)于插人的三葉肽核酸的大量的mRNA的合成的啟動子。他們也可以包括允許在寄主有機(jī)體內(nèi)自我復(fù)制的復(fù)制序列的真核和原核生物的原點(diǎn)，編碼允許在毒性藥物的存在中選擇含有載體的細(xì)胞的遺傳實(shí)驗(yàn)的序列，和增強(qiáng)翻譯合成的mRNA的效率的序列。利用例如病毒的調(diào)節(jié)元素(例如來自Epstein Barr病毒基因組的OriP序列)，由于自由復(fù)制的本質(zhì)可以維持穩(wěn)定的長期的載體。也可以生產(chǎn)已經(jīng)將載體整合進(jìn)基因組DNA的細(xì)胞系，并且以這樣的方式可以連續(xù)地生產(chǎn)基因產(chǎn)物。
在細(xì)菌中如大腸桿菌中外源序列的表達(dá)需要在細(xì)菌表達(dá)載體中插入三葉肽核酸序列。這樣的質(zhì)粒載體含有細(xì)菌中質(zhì)粒的繁殖和在質(zhì)粒中插入的DNA的表達(dá)需要的幾個元素。只含有質(zhì)粒的細(xì)菌的繁殖可以通過在質(zhì)粒中導(dǎo)入編碼可選擇標(biāo)記的序列來完成，允許含有質(zhì)粒的細(xì)菌在存在毒性藥物時生長。質(zhì)粒也含有能夠從克隆基因生產(chǎn)大量mRNA的轉(zhuǎn)錄啟動子。這樣的啟動子可以(但不必須)是可誘導(dǎo)啟動子，在誘導(dǎo)的基礎(chǔ)上啟動轉(zhuǎn)錄。質(zhì)粒優(yōu)選地也可以含有多接頭，在載體內(nèi)以準(zhǔn)確的方向簡化基因的插入。哺乳動物細(xì)胞也可以用于表達(dá)三葉肽。利用三葉肽表達(dá)載體可以生產(chǎn)穩(wěn)定的或暫時的細(xì)胞系克隆，生產(chǎn)可溶(截短和標(biāo)記)形式的三葉肽。適當(dāng)?shù)募?xì)胞系包括例如COS、HEK293T、CHO或NIH細(xì)胞系。
一旦構(gòu)建了適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，可以通過轉(zhuǎn)化技術(shù)如但不限于磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)柒、電穿孔、微注射、原生質(zhì)體融合或脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，將他們導(dǎo)入適當(dāng)?shù)募闹骷?xì)胞。用本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)染的寄主細(xì)胞可以包括(但不限于)大腸桿菌，或其他細(xì)菌、酵母、真菌、昆蟲細(xì)胞(利用例如，在SF9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的桿狀病毒載體)或起源于小鼠，人或其他動物的細(xì)胞。三葉肽的體外表達(dá)、融合或克隆的DNA編碼的多肽片段也可以利用。分子生物學(xué)領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將理解，各種表達(dá)系統(tǒng)和純化系統(tǒng)都可以用于生產(chǎn)重組三葉肽和其片段。這些系統(tǒng)中的一些如Ausubel等所述(現(xiàn)代分子生物學(xué)方案，John Wiley & Sons，紐約，NY 2000，引入本文作為參考)。
轉(zhuǎn)基因植物、植物細(xì)胞和藻類也特別可用于生產(chǎn)重組的三葉肽，用于本發(fā)明的方法和組合物。例如，利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以生產(chǎn)表達(dá)三葉肽的轉(zhuǎn)基因煙草植物或培養(yǎng)的轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞(參見，例如，美國專利5,202,422和6,140,075)。轉(zhuǎn)基因藻類表達(dá)系統(tǒng)也可以用于生產(chǎn)重組三葉肽(參見例如，Chen等，Curr.Genet.39365-370，2001)。
一旦重組蛋白質(zhì)得到表達(dá)，它可以利用蛋白質(zhì)純化技術(shù)如親和層析從細(xì)胞溶解物中分離。一旦分離，重組蛋白質(zhì)如果需要可以通過例如高效液相層析(HPLC；例如，參見Fisher，生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，Work and Burdon，Eds，Elsevier，1980)來進(jìn)一步純化。
利用例如，Merrifield固相合成、溶液固相合成，或兩者的結(jié)合(參見，例如，《固相肽合成》所述的方法，第二版，1984，Pierce化學(xué)公司，Rockford，IL)也可以生產(chǎn)本發(fā)明的多肽，特別是三葉肽的片段。或者，然后，用標(biāo)準(zhǔn)肽裝配化學(xué)濃縮肽片段。
下面的實(shí)施例解釋本發(fā)明的原理和三葉肽治療適應(yīng)的情況。下面的實(shí)施例不是限制性的。
實(shí)施例1在外科介入下的ITF治療為了加速外科切入的愈合和減少傷疤的形成，用各種感覺上的方式對外科患者給予含ITF的制劑。正是在外科手術(shù)之前，在即將發(fā)生切入的位點(diǎn)上的皮膚應(yīng)用含有ITF的凝膠。在外科手術(shù)后，用無菌鹽水或另外含有25mg/ml ITF的沖洗溶液沖洗切入口。用浸滲ITF縫合絲線封閉切入口，切入位點(diǎn)用含有5mg/ml ITF的藥膏或凝膠制劑來治療。在每個敷料改變的過程中再應(yīng)用含有ITF的藥膏或凝膠。優(yōu)選地，再應(yīng)用藥膏或凝膠至少三天，更優(yōu)選地至少5天，最優(yōu)選地7天，甚至10天。直到切入口完全愈合，從身體除去或吸收縫合線。
實(shí)施例2燒傷治療燒傷-傷口治療的最終目的是傷口的閉合和愈合。在這一方面，傷疤是第二和第三度燒傷的常見的結(jié)果。當(dāng)成纖維細(xì)胞的繁殖和遷移能力超過了上皮細(xì)胞時，就形成了傷疤，促進(jìn)上皮再構(gòu)成的治療將減弱傷疤的形成。另外，已知，局部或系統(tǒng)地施用抗微生物劑可以劇烈地降低燒傷傷口的細(xì)菌負(fù)荷，降低燒傷傷口感染的機(jī)會。
三種廣泛使用的局部抗微生物劑，銀磺胺嘧啶乳液，磺胺米隆乙酸乳液，和硝酸銀可以混合，單獨(dú)或結(jié)合ITF來治療燒傷傷口。所以，燒傷患者是用含有1％磺胺嘧啶銀，磺胺米隆乙酸乳液和/或硝酸銀和局部鎮(zhèn)痛劑，和10mg/ml ITF一起來治療的。為了長久治療，每12小時再應(yīng)用局部治療。除了局部應(yīng)用含有ITF的油膏，燒傷位點(diǎn)可以包裹在ITF浸滲的繃帶中。
通常，一旦出現(xiàn)滿意的毛細(xì)管發(fā)育和上皮化，鎮(zhèn)痛和抗生素治療將停止。為了使傷疤最小，繼續(xù)ITF治療直到形成上皮。在侵入性的傷口感染情況中，可以給予抗生素的系統(tǒng)治療和ITF治療的局部治療。
實(shí)施例3皰疹損傷的治療患有任何單純性皰疹病毒引起的損傷的患者可以用ITF的結(jié)合性或單獨(dú)治療。皰疹損傷通常在臉面上，或生殖器上，可以用抗病毒劑治療。直接接觸開放的傷口或與感染的主體繼發(fā)接觸會傳遞HSVI和HSVII。所以，促進(jìn)表皮愈合的藥劑將不僅修復(fù)損傷產(chǎn)生的化妝損傷，而且降低病毒傳遞的可能性。
目前，皰疹損傷是用標(biāo)準(zhǔn)的口服施用的抗病毒治療。根據(jù)本發(fā)明，可以將ITF與5mg/ml的局部制劑(例如，糊劑或凝膠)共同施用?；蛘?，將抗病毒劑與ITF一起配制局部施用。為了治療嚴(yán)重的損傷，ITF的量可以增加到25mg/ml，或者更多，并且可以再結(jié)合緩解繼發(fā)癥狀的藥劑。皮質(zhì)類固醇例如可以包括在局部的制劑中，緩解搔癢。通常，對損傷每12小時應(yīng)用一次藥劑直到出現(xiàn)消退，并且損傷解體。傷口可以用抗病毒和ITF浸滲繃帶或紗布來覆蓋作為或選的，更方便的藥物遞送方法。
實(shí)施例4手部皮炎的治療手的皮炎的治療與避開刺激劑，治療繼發(fā)感染，和減弱炎癥關(guān)系最密切。在手上的損傷可以用三葉肽浸滲的冷的敷料來治療，干燥和清除急性炎癥損傷，以及降低腫脹。應(yīng)用用5mg/ml ITF配制的中度到高度勢能的局部糖皮質(zhì)類固醇(例如，4％w/v羥基可地松)也可以對損傷部位施用。在每個敷料改變時，或如經(jīng)常需要可以再應(yīng)用含有局部類固醇的三葉肽。受影響的患者的手應(yīng)該用手套保護(hù)，保持敷料，糖皮質(zhì)類固醇和ITF在應(yīng)該在的地方。如果需要，也可以通過系統(tǒng)施用類固醇。也推薦用含有三葉肽的局部抗生素制劑治療來限制繼發(fā)感染。
序列表<110>綜合醫(yī)院公司<120>治療真皮損傷的方法和組合物<130>50206/004WO2<150>PCT/US02/31998<151>2002-10-07<150>US 60/327,673<151>2001-10-05<160>9<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>73<212>PRT<213>人<400>1Met Leu Gly Leu Val Leu Ala Leu Leu Ser Ser Ser Ser Ala Glu Glu1 5 10 15Tyr Val Gly Leu Ser Ala Asn Gln Cys Ala Val Pro Ala Lys Asp Arg20 25 30Val Asp Cys Gly Tyr Pro His Val Thr Pro Lys Glu Cys Asn Asn Arg35 40 45Gly Cys Cys Phe Asp Ser Arg Ile Pro Gly Val Pro Trp Cys Phe Lys50 55 60Pro Leu Gln Glu Ala Glu Cys Thr Phe65 70<210>2<211>84<212>PRT<213>人<400>2Met Ala Thr Met Glu Asn Lys Val Ile Cys Ala Leu Val Leu Val Ser
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1.治療或預(yù)防哺乳動物的皮膚損傷的方法，包括對損傷部位，或要防止損傷的皮膚區(qū)域施用治療有效量的三葉肽或其生物活性片段。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的三葉肽是解痙多肽、pS2或腸三葉因子(ITF)。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的生物活性片段是ITF15-73、ITF21-73、ITF1-72、ITF15-72或ITF21-72。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的哺乳動物是人。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的人是早產(chǎn)嬰兒。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的損傷是創(chuàng)傷損傷、外科損傷、燒傷或壓力潰瘍。
7.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的損傷是變應(yīng)性反應(yīng)、濕疹、接觸性皮炎、牛皮癬或痤瘡。
8.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的損傷是細(xì)菌、病毒或真菌感染引起的。
9.權(quán)利要求8所述的方法，其中損傷是皰疹病毒或乳頭瘤病毒引起的。
10.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的損傷是抗腫瘤治療引起的。
11.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的方法進(jìn)一步包括對所述的哺乳動物施用第二治療劑或治療方案。
12.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的第二治療劑是紫外阻擋劑。
13.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的第二治療劑是抗炎癥劑。
14.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的治療劑是類固醇。
15.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的類固醇是皮質(zhì)類固醇。
16.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的類固醇選自氟輕松、倍他米松、二氟可他龍、氟地卡松、莫美他松、甲基潑尼西龍、氯倍他索、糖皮質(zhì)激素、曲安西龍、氫化可地松、氟地卡松、布地耐德、潑尼松、潑尼西龍、甲基潑尼西龍、地塞米松和倍氯美松。
17.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的第二治療劑是抗細(xì)菌劑、抗真菌劑或抗病毒劑。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述的抗細(xì)菌劑是青霉素、頭孢菌素、四環(huán)素、氨基糖苷、苯甲酰過氧化物、聚維酮碘、壬二酸、類維生素A、克林霉素或紅霉素。
19.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的抗真菌劑是苯甲酸、十一碳烯烷醇酰胺、環(huán)吡酮胺、多烯、咪唑、烯丙胺、硫代氨基甲酸酯、克林霉素、益康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黃霉素、制霉菌素、克霉唑、兩性霉素B、酮康唑、恩康唑、伊曲康唑、布托康唑、噻康唑或咪康唑。
20.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的抗病毒劑是阿昔洛韋。
21.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的第二治療劑是鎮(zhèn)痛劑。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的鎮(zhèn)痛劑是利多卡因、苯唑卡因或阿片。
23.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的第二治療劑是蒽林、類維生素A、維生素D類似物、氨甲喋呤、苯并二氮雜或環(huán)孢菌素。
24.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的三葉肽和所述的第二治療劑是在相同的制劑中施用的。
25.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的三葉肽和所述的第二治療劑是在不同的制劑中施用的。
26.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的三葉肽和所述的第二治療劑通過不同的施用途徑施用。
27.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的三葉膚和所述的第二治療劑彼此在24小時內(nèi)施用。
28.適于對哺乳動物的皮膚局部施用的藥物組合物，其中所述的組合物包括三葉肽或其生物活性片段，和藥用載體。
29.權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述的三葉肽或其生物活性片段是解痙多肽、pS2或腸三葉因子。
30.權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述的生物活性片段是ITF15-73、ITF21-73、ITF1-72、ITF15-72或者ITF21-72。
31.權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述的組合物還包括粘膜粘附劑或等滲劑。
32.權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述的組合物還包括第二治療劑。
33.權(quán)利要求32所述的組合物，其中所述的第二治療劑是抗炎癥劑或鎮(zhèn)痛劑。
34.權(quán)利要求33所述的組合物，其中所述的鎮(zhèn)痛劑是利多卡因、苯唑卡因或阿片。
35.權(quán)利要求32所述的組合物，其中所述的第二治療劑是抗細(xì)菌劑、抗真菌劑或抗病毒劑。
36.權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述的抗細(xì)菌劑是青霉素、頭孢菌素、四環(huán)素、氨基糖苷、苯甲酰過氧化物、壬二酸、類維生素A、聚維酮碘、克林霉素或紅霉素。
37.權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述的抗真菌劑是苯甲酸、十一碳烯烷醇酰胺、環(huán)吡酮胺、多烯、咪唑、烯丙胺、硫代氨基甲酸酯、制霉菌素、克林霉素、益康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黃霉素、克霉唑、酮康唑、恩康唑、伊曲康唑、布托康唑、噻康唑、咪康唑或兩性霉素B。
38.權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述的抗病毒劑是阿昔洛韋。
39.權(quán)利要求32所述的組合物，其中所述的第二治療劑是類固醇。
40.權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述的類固醇是皮質(zhì)類固醇。
41.權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述的類固醇是氟輕松、倍他米松、二氟可他龍、氟地卡松、莫美他松、甲基潑尼西龍、糖皮質(zhì)激素、氯倍他索、曲安西龍、氫化可地松、氟地卡松、潑尼龍、潑尼西龍、甲基潑尼西龍、地塞米松、倍氯米松或布地耐德。
42.權(quán)利要求32所述的組合物，其中第二治療劑是蒽林、類維生素A、維生素D類似物、氨甲喋呤、苯并二氮雜或環(huán)孢菌素。
43.權(quán)利要求28所述的藥物組合物，其中所述的組合物是噴劑、油膏、糊劑、泡沫、洗液、凝膠、溶液或懸浮液。
44.醫(yī)學(xué)材料，包括三葉肽或其生物活性片段。
45.權(quán)利要求44所述的醫(yī)學(xué)材料，其中所述的三葉肽是解痙多肽、pS2或腸三葉因子。
46.權(quán)利要求44所述的醫(yī)學(xué)材料，其中所述的生物活性片段是ITF15-73、ITF21-73、ITF1-72、ITF15-72或ITF21-72。
47.權(quán)利要求44所述的醫(yī)學(xué)材料，其中所述的藥用物質(zhì)選自局部水凝膠敷料、貼片、封閉傷口敷料、半封閉傷口敷料、組織粘附劑、縫合線和粘附薄膜。
48.權(quán)利要求47所述的組合物，其中所述的縫合線包括選自腸線、絲、膠原、乙醇酸聚合物和尼龍的材料。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過局部施用三葉肽治療和預(yù)防表皮和真皮的損傷的方法。三葉肽可以單獨(dú)或與其他治療劑如抗微生物劑、抗炎癥劑或鎮(zhèn)痛藥結(jié)合來施用。
文檔編號A61P17/02GK1599619SQ02824440
公開日2005年3月23日 申請日期2002年10月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月5日
發(fā)明者D·K·波多爾斯基 申請人:綜合醫(yī)院公司