專利名稱：用作腺苷a的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作腺苷A2a受體的配體的三唑基-咪唑并吡啶和三唑基嘌呤類的衍生物、其制備方法、其作為藥物的應(yīng)用，特別是作為用于治療得益于這種受體受到抑制的病理情況的藥物的應(yīng)用，并涉及包括這些化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
目前用于帕金森病的療法限于緩解癥狀，而尚未鑒定能夠?qū)古c依次導(dǎo)致這種病理情況的復(fù)雜癥狀出現(xiàn)的基底神經(jīng)節(jié)多巴胺水平不足相關(guān)的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性的建立和進展的活性劑。這種病理情況的特征在于強直、震顫、運動徐緩、運動不能、姿式改變；代表對患有帕金森病個體的健康的嚴重威脅的表現(xiàn)。
在目前用于改善這些受治療者生命質(zhì)量的治療策略中有目的在于重新補充缺失的神經(jīng)遞質(zhì)的治療手段。一個實例以通過使用左旋多巴與卡比多巴或芐絲肼(外周氨基酸脫羧酶抑制劑)相聯(lián)合為代表。這種療法是最有效的治療之一且目前用于對抗在多巴胺能系統(tǒng)生理功能受到嚴重損害時表現(xiàn)出的運動功能改變。
然而，這種治療手段在長期應(yīng)用中遇到了功效下降的問題。實際上，由于左旋多巴本身具有神經(jīng)毒性，所以用左旋多巴長期治療的患者除出現(xiàn)其它副作用外還通常顯示出所述表現(xiàn)的強化(emphasising)。
另一方面，雖然已經(jīng)引入了應(yīng)用多巴胺能受體興奮劑，但是它們不表現(xiàn)出與左旋多巴相同的功效；或應(yīng)用單胺氧化酶抑制劑和毒蕈堿性乙酰膽堿受體拮抗劑。后者的應(yīng)用因這些產(chǎn)品在全身水平與中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平上建立了受體相互作用而出現(xiàn)了嚴重的副作用和認知損傷。
近年來，隨著發(fā)現(xiàn)腺苷作為神經(jīng)遞質(zhì)的作用、其受體及其功能表征，使用腺苷A2a受體拮抗劑作為治療與帕金森病相關(guān)的運動障礙的治療劑的假設(shè)已經(jīng)獲得了信賴。(P.J.Richardson，H.Kase和P.G.Jenner《藥物科學(xué)趨勢》(Trends Pharm.Sci)1997，18338-345)。
近期實驗證據(jù)已經(jīng)使這種受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平上的分布、功能和生理學(xué)得到了理解，從而可以得出這樣的結(jié)論阻斷A2a受體可以調(diào)節(jié)膽堿能、γ-氨基丁酸能和谷氨酸能(glutamatergic)神經(jīng)傳遞以便在基底神經(jīng)節(jié)輸出神經(jīng)元水平上建立足以補償黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)中急性或慢性多巴胺缺乏的神經(jīng)化學(xué)指令。
此外，已經(jīng)觀察到A2a受體在功能上與多巴胺D2相關(guān)且刺激前者可以降低后者與多巴胺的結(jié)合能力。因此推定，阻斷A2a腺苷受體增加D2受體對多巴胺的相互作用能力，甚至在突觸間隙中低水平這種神經(jīng)遞質(zhì)的存在下有利于結(jié)合。(Ferre S.等(1991)《美國國家科學(xué)院學(xué)報》(Proc.Nat.Acc.Sci.U.S.A.)88，7237-7241)。由于存在這些原因，所以已經(jīng)提出將A2a受體選擇性拮抗劑作為治療運動障礙、特別是針對帕金森病的活性劑。
此外，已經(jīng)證實這些活性劑可以提供與用左旋多巴或用多巴胺興奮劑治療的協(xié)同作用且可以用于與多巴胺替代療法聯(lián)用。在這種情況中，受體A2a選擇性拮抗劑的應(yīng)用代表了進一步的治療優(yōu)勢，因為一般左旋多巴療法所需的劑量可以在數(shù)量上降低或給藥頻率下降而保持治療功效。
本發(fā)明涉及對腺苷A2a受體具有親和力的、有拮抗劑活性的、用于制備治療個體運動障礙的藥物的化合物，所述的運動障礙與基底神經(jīng)節(jié)功能改變相關(guān)而形成諸如帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病和威爾遜病這樣的疾病、因藥物(傳統(tǒng)安定藥的帕金森神經(jīng)功能障礙)、創(chuàng)傷、毒性劑(NOTP、錳，一氧化碳)帶來的癥狀的組成部分。
本發(fā)明還可以用于治療具有″開-關(guān)″現(xiàn)象的帕金森病和運動障礙占優(yōu)勢的帕金森病。
此外，已經(jīng)證實在中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血性損害后，腺苷A2a受體拮抗劑可以抑制這類現(xiàn)象后大量釋放的興奮性氨基酸誘發(fā)的毒性作用且腦缺血和與神經(jīng)變性過程相關(guān)的機制代表了A2a受體拮抗劑可以發(fā)揮其治療作用的其它″靶″。
腺苷A2a受體選擇性拮抗劑描述在Boehringer Ingelheim的CA1.242.368中，其形式為咪唑并-三唑-嘧啶衍生物，其中它們對A1受體的活性超過對A2受體的活性；在Vernalis Res Ltd的WO 01/02409中，將噻吩并-和呋喃并嘧啶的衍生物描述為用于治療運動障礙、例如帕金森病的化合物；Fusijawa Pharm Co Ltd的WO 00/24742中描述了對A1和A2受體具有雙重拮抗作用的吡唑并吡啶衍生物；Kyowa HakkoKKK的WO 00/17201和WO 98/42711中描述了1，2，4-三唑并-(1，5-c)嘧啶衍生物；Cerebrus Pharm Ltd的WO 00/13682、WO 00/13681和WO 99/26627中描述了4-喹啉甲醇衍生物；Cadus Pharm Corp的WO99/62518中描述了具有為A1、A2、A2a、A2b、A3受體拮抗劑的活性特征的N-6取代的7-去氮雜嘌呤；Kyowa Hakko KKK的WO 99/43678中描述了1，2，4-三唑并-(1，5-a)-嘧啶衍生物；Schering Plough SpA的WO 95/01356和WO 98/52568中描述了1，2，4-三唑并-(1，5-c)-嘧啶。
在處于進展測試期中的A2a受體拮抗劑中，我們可以提及EP 0 628311中所述的化合物KW-6002和KW-1783，其可表征為黃嘌呤衍生物。這些產(chǎn)品在8位上具有(3，4-二甲氧基苯基)烯基且通過烯鍵的光異構(gòu)化失去活性(Annals New York Academy of Sciences-Ongini E.；Adami M；Ferri C；和Bertorelli R.；《藥物科學(xué)趨勢》(Trends inPharm.Sci.)1996第17卷364-72)?；衔颣W6002目前正在進行臨床試驗(作為抗抑郁藥的II期和作為抗帕金森病藥的III期臨床試驗；Pharmaprojects Acc.No.23891)。另一種選擇性A2a受體拮抗劑是處于臨床前期試驗中的產(chǎn)品SCH 63390(Pharmaproject Acc.No29842)。來自Astra Zeneca的ZM 241385(EP 0 459 702)是有效的選擇性拮抗劑；由于這一原因而用于藥理研究(Ji X.D.，Jacobson K.A.，《藥物設(shè)計發(fā)現(xiàn))》(Drug Des.Discov.)1999，16217-226；Pharmaproject Acc.No22730)。盡管該產(chǎn)品具有高選擇性和親和性，但是已經(jīng)證實它在體內(nèi)的生物利用度極低(El Yacoubi M.等《歐洲藥物雜志》(Eur.J.Pharm.)401(2000)63-77)。
發(fā)明概述已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了下列通式的化合物及其藥物上可接受的鹽對A2a受體具有親和性 其中X是N、CH、C-R2；R1是C1-C6直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基；R2是氫、C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基、C6-C14芳基或C6-C14芳基(C1-C6)直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基，其中所述的芳基任選被一個或多個相同或不同的取代基取代，這些取代基選自鹵素、羥基、C1-C6直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷氧基、氨基、一-或二-C1-C6直鏈或支鏈烷基組成的組；R3是NH2、NHR4；R4是C1-C6烷基或C1-C6羥基烷基、C1-C3烷氧基烷基、氨基(C1-C6)烷基，其中所述的氨基任選被一個或兩個C1-C3烷基取代，所述的烷基是直鏈或支鏈、飽和或不飽和的；C6-C14芳基或C6-C14芳基(C1-C6)烷基，其中所述的芳基任選被一個或多個相同或不同的取代基修飾，這些取代基選自鹵素、羥基、C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷氧基、氨基，被C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基一-或二-取代。
因此，本發(fā)明的目的是上述定義的通式(I)化合物及其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一個目的是上述定義的通式(I)化合物的制備方法、其作為藥物特別在制備對A2a腺苷受體具有抑制活性也有選擇性的藥物中的應(yīng)用，這類藥物用于治療對抑制腺苷A2a受體有反應(yīng)的病理情況，諸如治療運動障礙、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、威爾遜病和帕金森病。本發(fā)明的化合物還用于制備用于治療腦缺血和/或與神經(jīng)變性過程相關(guān)的機制的藥物。
本發(fā)明的其它目的是含有至少一種通式(I)化合物作為活性組分的藥物組合物。
還通過附圖和實施例來更具體地解釋本發(fā)明的這一目的和其它目的，其中-附

圖1顯示對誘發(fā)小鼠僵住癥的能力的評價；-附圖2顯示本發(fā)明示例化合物對CGS 21680--誘發(fā)的僵住癥的作用。每一柱代表每組10只動物的僵住癥評分平均值±s.e.；-附圖3顯示本發(fā)明示例化合物對氟哌啶醇誘發(fā)的小鼠僵住癥的作用。每一柱代表每組10只動物的僵住癥評分平均值±s.e.；-附圖4顯示本發(fā)明示例化合物與閾下劑量的左旋多巴+芐絲肼(分別為12.5mg/kg和6.25mg/kg腹膜內(nèi)給藥)對氟哌啶醇-誘發(fā)的小鼠僵住癥的聯(lián)合作用；-附圖5顯示本發(fā)明示例化合物在小鼠強迫游泳試驗中的作用。在本試驗前60分鐘給小鼠注射載體或測試化合物或丙米嗪。在4分鐘測試期間記錄不動的持續(xù)時間。表示的數(shù)據(jù)為每組10只小鼠的平均值±s.e.。相對于對照組，ANOVA和Tukey檢驗**＝p＜0.01。
發(fā)明詳述在通式(I)的化合物中，C1-C6飽和或不飽和烷基的實例是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯、丙烯、丁烯。鏈烯基和鏈炔基可以含有高達最大可能的不飽和度，且烷基、鏈烯基和鏈炔基可以由所有理論上可能的異構(gòu)體表示。在通式(I)的化合物中，C6-C14芳基或C6-C14芳基(C1-C6)烷基其中芳基任選被取代的實例是苯基、萘基和蒽基，在不同鍵位置上(例如1-或2-萘基)、芐基、苯乙基、苯基丙基、苯基丁基、苯基戊基、苯基己基，含有萘基和蒽基的芳基烷基類似物，被上述基團取代的2-、3-或4-苯基，例如2-、3-或4-羥基苯基、2-、3-或4-烷氧基苯基，其中烷基殘基如上所述；2-、3-或4-鹵代苯基，其中鹵素是氟、氯、溴、碘；2-、3-或4-氨基苯基，其中氨基可以被如上所述的烷基單取代或二取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地表征對上述定義的通式(I)所預(yù)計的所有可能的化合物，作出對不同基團給出的定義的適宜取代。
通式(I)化合物的藥物上可接受的鹽是與能夠使存在的堿性中心成鹽且不具有任何毒性或其它不希望作用的有機或無機酸形成的所有鹽。
在通式(I)的化合物中，第一優(yōu)選的組包括那些X是氮且R2是2位上的丁基的化合物。
第二優(yōu)選的組由那些X是氮且R2是2位上的苯乙基的化合物組成。
第三優(yōu)選的組由那些X是氮且R2是2位上的戊基的化合物組成。
第四優(yōu)選的組由那些X是碳且R2是6或7位上的氫的化合物組成。
特別優(yōu)選下列化合物-6-氨基-2，9-二甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤(ST 1491)；-2-丁基-9-甲基-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺(ST 1535)；-9-甲基-2-(2-苯乙基)-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺(ST1537)；-9-甲基-2-戊基-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺(ST 2097)。
作為本發(fā)明的特定情況，化合物6-氨基-9-甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤(ST 1490)顯示出對A1腺苷受體的親和性，由此用于制備治療認知缺損、阿爾茨海默病、腦缺血、急性和慢性腎衰、因放射造影劑或順鉑誘發(fā)的腎衰的藥物。
可以按照以下流程圖中所述的合成手段制備通式(I)的化合物。
對可通過文獻中已知的方法得到的化合物a)進行2位上的溴-取代，然后使溴被三唑-2-基替代。
下面的流程圖1A、1Abis和2A僅通過實例顯示簡單命名為ST1491、ST 1536、ST 1535、ST 1537、ST 2097和ST 1680的化合物的制備過程。
反應(yīng)流程1A
反應(yīng)流程1°bis
反應(yīng)流程2
通過文獻中已知的合成步驟獲得由序號(2)-(7)(流程圖1A和1Abis)表示的化合物，化合物(1)可商購；化合物(8)、(9)和(10)描述在下列文獻中《雜環(huán)》(Heterocycles)1999，721-726；《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)32，11，1989，2474-2485；《雜環(huán)化學(xué)雜志》(J.Heter.Chem.)23，3，1986，669-672；《(化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Chem.Soc.)1955，2755-2758；《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)39，2，1996，487-493；《雜環(huán)化學(xué)雜志》(J.Heter.Chem.)27，3，1990，563-566；(11)和(12)描述在EP 0 082 369中，而本發(fā)明提供了新的制備方法。分子(13)-(14)是新的，由此特別要求保護它們作為本發(fā)明所述方法中的中間體。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)一般知識和文獻制備不同于上述流程圖中例示的這些化合物的其它通式(I)的化合物。
下列實施例進一步解釋本發(fā)明。
實施例1(反應(yīng)流程1A)2-氯-6-二芐氨基-9(H)嘌呤(2)向1g 2，6-二氯嘌呤(1)(97％，5.13mmol)溶于30ml無水乙醇所得到的溶液中加入二異丙基乙胺(1ml，5.13mmol)和蒸餾二芐胺(1.1ml，5.13mmol)。將該反應(yīng)混合物保持回流20小時(1小時后形成白色沉淀)。然后在低壓下除去溶劑并將殘余物溶于水。
冷卻并過濾后在真空中干燥固體殘余物(2)。
產(chǎn)率95％Rf＝0.25(環(huán)己烷/乙酸乙酯)7∶3M.p.250-252℃.
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ7.89(s，1H)，7.32(s，10H)，5.55(bs，2H)，5.49(bs，2H).
MS(m/z)91；258-260(BP，M-芐基)，349-351(＜5％，M).
2-氯-6-二芐氨基-9-甲基-嘌呤(3)向(2)溶于熱DMF所得到的溶液中加入828mg的K2CO3(6mmol)。然后將該溶液冷卻并用0.46ml的CH3I(7.2mmol)處理，同時攪拌約12小時。蒸發(fā)DMF，將產(chǎn)物溶于水并過濾且使得到的殘余物在乙醇中結(jié)晶而得到1.45g產(chǎn)物(3)。
產(chǎn)率78％.
Rf＝0.38(環(huán)己烷/乙酸乙酯)7∶3。
M.p.144-146℃.
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ7.67(s，1H，H8-嘌呤)；7.31(s，10H，芳族)；5.5(br，2H，CH2-芐化)；4.93(br，2H，CH2-芐化)；3.81(s，3H，CH3).
MS(m/z)91(BP，芐基)；272-274(65％-20％，M-芐基)，363-365(＜5％，M).
2-烷基-6-二芐氨基-9-甲基-9(H)-嘌呤(4)、(4c)、(4e)、(5)(一般步驟)在充氮的燒瓶中放入700mg的2-氯-6-二芐氨基-9-甲基-9(H)-嘌呤(3)(1.93mmol)、4ml的NMP(N-甲基吡咯烷酮)、3.8mmol的烷基三丁基錫和140mg的Pd(PPh3)4。對于化合物4、4c和4e，將以上物質(zhì)在120℃下攪拌8小時，而對于化合物5則攪拌2小時。將它們冷卻并用水(50ml)和二氯甲烷(50ml)稀釋且最終用二氯甲烷(4×50ml)提取水相。用鹽水洗滌合并的有機相、用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)溶劑而得到深色液體。在硅膠柱上純化產(chǎn)物(洗脫劑EtOAc/環(huán)己烷1/1)而得到固體或黃色油狀物形式的(4)、(4c)、(4e)和(5)。(4)產(chǎn)率63％.
M.p.143℃MS(m/z)278(100％，M-芐基)；91(55％，芐基)。
(4c)產(chǎn)率90％。
M.p.不可測定-橡膠樣物質(zhì)。
MS(m/z)294(100％，M-芐基)；91(65％，芐基)。
1H-NMR200MHz，CDCl3；δ7.65(1H，s，嘌呤)；7.30(10H，m，芳族)；5.27(4H，br，-CH2-芐化)；3.82(3H，s，N-CH3)；2.88(2H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.80(2H，m，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.37(2H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3)；0.91(3H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3).
(4e)產(chǎn)率65％.
6-二芐氨基-9-甲基-2-戊基-9(H)-嘌呤M.p.不可測定-橡膠樣物質(zhì)。
MSm/z＝399，308，2201H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.71(s，1H)，7.30(m，10H)，5.30(bs，4H)，3.80(s，3H)，3.38(t，2H)，2.38(m，2H)，2.02(m，2H)，1.30(m，2H)，0.88(m，3H)(5)產(chǎn)率84％.
M.p.不可測定-橡膠樣物質(zhì)。
MS(m/z)340(100％，M-芐基)；91(70％，芐基)。
6-二芐氨基-2，9-二甲基-9(H)-嘌呤(4a)在惰性氣體環(huán)境(氮)中向冷卻的三頸圓底燒瓶內(nèi)放入1.07g溶于30ml無水THF中的(3)(2.94mmol)、6ml三甲基鋁的2M甲苯溶液(12mmol)、27mg的PdCl2(0.15mmol)和79mg的PPh3(0.3mmol)。通過回流48小時使它們進行反應(yīng)。終止該反應(yīng)，將該混合物傾入燒杯、在冰浴中冷卻并通過添加少量水和乙醇破壞過量的三烷基鋁。通過濾紙過濾氫氧化鋁沉淀并用二氯甲烷提取該混合物。在減壓條件下蒸發(fā)有機相后，通過急驟層析法純化殘余物(SiO2，環(huán)己烷/EtOAc 1∶1)。得到900mg結(jié)晶形式的(4a)(2.62mmol)。
產(chǎn)率89％。
M.p.117-118℃.
MS(m/z)91(80％，芐基)，252(BP M-芐基)，343(＜5％，M).
1H-NMR200MHz，CDCl3δ7.65(s，1H，H8-嘌呤)；7.30(s，10H，芳族)；5.30(br，4H，CH2-芐化)；3.81(s，3H，N-CH3)；2.62(s，3H，C-CH3).
2-異丙基-6-二芐氨基-9-甲基-9(H)-嘌呤(4b)和2-(2-苯乙基)-6-二芐氨基-9-甲基-9(H)-嘌呤(4d)
將100mg的(4)或(5)與5ml乙醇一起置于壓熱器中、加熱至完全溶解且然后加入50mg的鈀/石墨支持物。將該體系在4個大氣壓的氫氣下保持攪拌過夜。通過C鹽過濾催化劑并在減壓條件下蒸發(fā)溶劑而得到(4b)或(4d)、為白色固體。
(4b)定量產(chǎn)率。
M.p.82℃。
MS m/z280(100％，M-芐基)；91(50％，芐基)。
(4d)定量產(chǎn)率。
M.p.144℃。
MS m/z342(100％，M-芐基)；91(100％，芐基)。
(反應(yīng)流程1A bis)(5a、b、c、d、e)一般步驟在反應(yīng)燒瓶中將1.6mmol的(4a)、(4b)、(4c)、(4d)和(4e)溶于7mlMeOH、7ml THF和7ml pH＝4的乙酸鹽緩沖液(通過將4g乙酸鈉溶于100ml水并用冰醋酸調(diào)節(jié)至pH4獲得)的混合物。極緩慢地滴加0.7ml溴(13.6mmol)并在攪拌條件下將該混合物置于室溫直至原料產(chǎn)品消失為止(約12小時)。用偏亞硫酸氫鈉使過量的溴脫色并用飽和Na2CO3溶液將該反應(yīng)體系堿化至pH＝8。用二氯甲烷提取并在減壓條件下蒸發(fā)溶劑后得到1.2g黃色油狀物(5a)、(5b)、(5c)、(5d)、(5e)，隨后用制備型色譜柱進行純化。
(5a)定量產(chǎn)率。
MS m/z91(100％，芐基)；330-332(雙峰，70％，M-芐基)。
(5b)定量產(chǎn)率。
MS(m/z)91(100％，芐基)；358-360(雙峰，70％，M-芐基)。
(5c)定量產(chǎn)率。
MS m/z91(100％，芐基)；372-374(雙峰，70％，M-芐基)。
(5d)定量產(chǎn)率。
MS(m/z)91(100％，芐基)；420-422(雙峰，45％，M-芐基)。
(5e)9-溴-6-二芐氨基-9-甲基-2-戊基-9(H)-嘌呤M.p.97℃MSm/z＝479-477，388-3861H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.28(m，10H)，5.16(bs，4H)，3.75(s，3H)，2.79(t，2H)，1.79(m，2H)，1.29(m，4H)，0.86(m，3H)2-烷基-6-二芐氨基-9-甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤(6a、b、c、d、e)在惰性氣體環(huán)境中向反應(yīng)燒瓶中加入2ml無水DMF、92mg的NaH(80％的石蠟溶液，2.5mmol)并緩慢加入0.18ml的1，2，3-三唑(2.5mmol)且在攪拌條件下保持約1小時。緩慢滴加(5a)、(5b)、(5c)、(5d)或(5e)粗品(1.7mmol)溶于5ml無水DMF所得到的溶液并在100℃下保持攪拌12小時。蒸發(fā)DMF并通過急驟層析法純化殘余物(SiO2，環(huán)己烷/EtOAc 7∶3)而得到(6a)、(6b)、(6c)、(6d)或(6e)，為白色固體。
(6a)產(chǎn)率20％。
M.p.161-163℃.
MS(m/z)91(90％，芐基)，319(BP，M-芐基)；410(＜5％，M).
1H-NMR200MHz，CDCl3δ7.94(s，2H，H-三唑)；7.29(s，10H芳族)；5.45(br，2H，CH2-芐化)；5.04(br，2H，CH2-芐化)；3.96(s，3H，N-CH3)；2.62(s，3H，C-CH3).
(6b)產(chǎn)率20％。
M.p.140℃.
MS(m/z)347(100％，M-芐基)；91(75％，芐基).
(6c)產(chǎn)率20％。
M.p.114℃.
MS(m/z)361(100％，M-芐基)；91(70％，芐基).
1H-NMR200MHz，CDCl3；δ7.94(2H，s，三唑)；7.30(10H，m，芳族)；5.49-5.21(4H，d，br，-CH2-芐化)；4.12(3H，s，N-CH3)；2.84(2H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.80(2H，m，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.37(2H，m，-CH2-CH2-CH2-CH3)；0.92(3H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3).
(6d)產(chǎn)率20％。
M.p.173℃.
MS(m/z)409(65％，M-芐基)，91(100％，芐基).(6e)6-二芐氨基-9-甲基-2-戊基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤M.p.139℃MSm/z＝466，375，3481H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.94(s，2H)，7.29(m，10H)，5.47(bs，2H)，5.04(br，2H)，3.96(s，3H)，2.84(t，2H)，1.82(m，2H)，1.33(m，4H)，0.88(m，3H)2-烷基-6-氨基-9-甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤(7a、b、c、d、e)在氮氣環(huán)境中冷卻的反應(yīng)燒瓶中將0.33mmol的(6a)、(6b)、(6c)、(6d)或(6e)溶于3ml無水二氯甲烷。緩慢滴加0.37ml的CF3SO3H(3.3mmol)并將該混合物保持回流6小時。然后使該混合物上載到活性鋁土層析柱，首先用50ml二氯甲烷洗脫以除去強著色的芳族衍生物且然后用CH2Cl2/乙醇1∶1(40ml)洗脫，隨后用乙醇(40ml)且最終用飽和的氨水的乙醇溶液(5％，40ml)洗脫。合并含有所需產(chǎn)物的部分并蒸發(fā)而得到黃色固體，將其通過急驟層析法純化(SiO2，AcOEt/EtOH 95∶5)，從而得到純產(chǎn)物(7a、b、c、d、e)，為白色固體。在乙醇中結(jié)晶而得到高純度的極白的小結(jié)晶形式的產(chǎn)物。
(7c)(ST 1535)產(chǎn)率55％。
M.p.182℃.
MS(m/z)230(100％，M-42)；243(20％，M-29)；257(10％，M-15)；272(＜10％，M).
1H-NMR200MHz，CDCl3；δ8.00(2H，s，三唑)；5.74(2H，br，-NH2)；4.07(3H，s，N-CH3)；2.85(2H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.79(被水掩蓋，m，-CH2-CH2-CH2-CH3)；1.43(2H，m，-CH2-CH2-CH2-CH3)；0.97(3H，t，-CH2-CH2-CH2-CH3).
(7b)(ST 1536)產(chǎn)率55％。
M.p.177℃.
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ8.00(2H，s，三唑)；5.70(2H，br，-NH2)；4.07(3H，s，N-CH3)；3.10(1H，六重峰(J＝6.82Hz)，CH3-CH-CH3)；1.36(6H，d(J＝6.82Hz)，CH3-CH2-CH3).
MSm/z230(100％，M-28)；243(95％，M-15)；216(50％，M-44)；258(50％，M).
(7d)(ST 1537)產(chǎn)率55％。
M.p.164℃.
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ8.00(2H，s，三唑)；7.3-7.18(5H，m，芳族)；4.07(2H，s，CH2)；3.17(2H，s，CH2)；1.26(3H，s，CH3).
MS m/z91，216，243，303，320(100％，M).
(7a)(ST 1491)產(chǎn)率43％。
M.p.238℃.
MS(m/z)230(BP，M).
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ8.00(s，2H三唑)；5.63(br，2H，NH2)；4.06(3H，s，N-CH3)；2.64(3H，s，C-CH3).
(7e)(ST 2097)6-氨基-9-甲基-2-戊基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤M.p.154℃MSm/z＝286，271，257，243，230，1901H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.00(s，2H)，7.26(m，10H)，5.56(bs，2H)，4.06(s，3H)，2.83(t，2H)，1.84(m，2H)，1.40(m，4H)，0.91(m，3H).
實施例2
(反應(yīng)流程2)4-羥基-3-硝基吡啶(8)將16.7ml發(fā)煙硫酸(SO320％的H2SO4溶液)緩慢滴加到20ml冷卻至0℃的發(fā)煙硝酸中，在15分鐘期限內(nèi)加入7g的4-羥基吡啶。將該體系緩慢加熱至開始硝化(生成紅色蒸氣)。然后將該反應(yīng)體系冷卻至所述蒸氣消失為止，隨后回流1小時。
將該反應(yīng)混合物緩慢冷卻至室溫且然后傾在50g冰上。分少量加入60ml濃氨水(30％)，注意溫度不要超過20℃。再用氨水將pH調(diào)節(jié)至7.5且然后在4℃下保持過夜。過濾所產(chǎn)生的沉淀并在水中結(jié)晶而得到7.1g的(8)，為透明的黃色結(jié)晶。
產(chǎn)率＝70％。
M.p.275-277℃。
MS(m/z)94，140。
4-氯-3-硝基吡啶(9)在氮氣環(huán)境的反應(yīng)燒瓶中使51.5g的PCl5和75ml的POCl3在70℃下反應(yīng)。在相同溫度下謹慎加入34.6g的(8)。使溫度增加至140℃并將該反應(yīng)體系在氮氣環(huán)境中回流4小時。向冷卻的在真空中蒸發(fā)的混合物中加入100ml冰水。通過添加碳酸鈉顆粒將pH調(diào)節(jié)至7.5并加入60ml二氯甲烷且將該混合物劇烈攪拌至所有殘余物完全溶解。分離各相并再用二氯甲烷(5×30ml)提取含水部分。用無水硫酸鈉處理合并的有機相并蒸發(fā)得到29.9g的(9)、為黃色蠟狀固體。
產(chǎn)率＝76％。
MS(m/z)85，87，100，102，112，114，158，160(M).
4-甲氨基-3-硝基吡啶(10)將29.9g的(9)溶于200ml熱乙醇；向達到0℃的該溶液中緩慢滴加103ml的35％甲胺水溶液。將該體系保持攪拌30分鐘且然后蒸發(fā)乙醇。使殘余物在水中結(jié)晶而得到24g的(10)，為透明的黃色結(jié)晶形式。
產(chǎn)率＝83％。
MS(m/z)107，120，135，153(M).
2-氯-4-甲氨基-3-氨基吡啶(11)將10g的(10)溶于50ml的12N HCl和并使溫度達到90℃。在1分鐘過程中分5部分加入72.5g二SnCl2.2H2O。將該體系在90℃下保持攪拌1小時。在將該溶液冷卻至室溫后，加入100ml水并在減壓條件下蒸發(fā)。將殘余物溶于100ml水、冷卻至0℃并加入濃氨水至形成白色凝膠狀沉淀。將pH調(diào)節(jié)至8.5-9并離心所得的乳濁液。再次將剩余的固體殘余物溶于水并離心。將該操作重復(fù)三次。將合并的固體殘余物在50ml二氯甲烷中保持攪拌過夜。用二氯甲烷將離心的水相提取三次，然后合并所有的有機相，隨后用無水硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)而得到6.2g的粉紅色結(jié)晶形式的(11)。
產(chǎn)率＝60％。
M.p.166-168℃.
MS(m/z)76，122，142，157(M+).
4-氯-1-甲基-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶(12)將2.4g的(11)懸浮于97ml原甲酸乙酯并在攪拌下加入DMF，直到渾濁消失為止。然后向所得的澄清溶液中加入1.7ml的12N HCl。(加入該酸幾分鐘后該溶液變渾濁)且在氮氣環(huán)境中保持攪拌12小時。然后在真空中蒸發(fā)溶劑并通過急驟層析法純化棕色油狀殘余物(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯20∶80)而得到1.7g的(17)白色固體。
M.p.137-38℃產(chǎn)率＝68％。
MSm/z167-169(100％-30％M+)；132(55％M+-Cl)；105(35％).
1H-NMR (200MHz，CDCl3)δ3.91(s，3H，N-CH3)；7.33(d，J＝5.64Hz，1H，＝N-CH＝CH-)，7.98(s，1H，-N＝CH-N(CH3)-)，8.24(d，J＝5.64Hz，1H，＝N-CH＝CH-).
2-溴-4-氯-1-甲基-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶(13)在氮氣環(huán)境中將1.5g(9mmol)的(12)溶于25ml無水THF并將該混合物的溫度調(diào)節(jié)至-78℃。緩慢加入8ml的BuLi 2.5M(20mmol)己烷溶液。該溶液呈微紅色，證實在2位上形成芳香碳負離子。1小時后，在30分鐘期限內(nèi)謹慎滴加2ml溴(40mmol)且然后再保持攪拌2小時。使溫度緩慢至0℃且然后滴加飽和偏亞硫酸氫鈉溶液至完全破壞溴。用2N碳酸氫鈉水溶液將該溶液的pH調(diào)節(jié)至9。用二氯甲烷提取該溶液。用鹽水洗滌合并的有機相、用無水硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)。得到淺棕色固體，使其在水中結(jié)晶而得到1.4g白色結(jié)晶形式的(13)。
產(chǎn)率＝64％。
MSm/z245-247-249(80％-100％-25％M+)；210-212(80％-75％M+-Cl)；131(100％M+-Cl-Br)，105(50％).
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ3.84(s，3H，N-CH3)；7.25(d，J＝6.11Hz，1H，＝N-CH＝CH-)，8.23(d，J＝6.11Hz，1H，＝N-CH＝CH-).
4-氯-1-甲基-2-(三唑-2-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶(14)和4-氯-1-甲基-2-(三唑-1-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶(14a)將250mg的NaH(80％的石蠟溶液，8.6mmol)懸浮于5ml無水DMF中并加入0.5ml(8.6mmol)的1(H)-1，2，3-三唑。將該體系在室溫下保持攪拌1小時，然后將溫度調(diào)節(jié)至100℃。在30分鐘過程中向該熱溶液中滴加1.4g(5.7mmol)在15ml熱的無水DMF中乳化的(13)。將該體系在100℃下保持攪拌4小時且然后使溫度降至60℃并使反應(yīng)保持過夜。
在該反應(yīng)終止時蒸發(fā)DMF并使固體殘余物在水中結(jié)晶。
通過過濾收集結(jié)晶并用二氯甲烷提取母液，合并有機相并用硫酸鈉干燥、蒸發(fā)并再次在水中重結(jié)晶。得到614mg白色結(jié)晶形式的混合物(14和14a)。
總產(chǎn)率＝46％(14+14a)。
(14)MS(m/z)234-236(100％-30％M+)；207-209(20％-5％M+-HCN)；153-155(40％-10％).
1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ4.13(s，3H，N-CH3)；7.35(d，J＝5.62Hz，1H，＝N-CH＝CH-)，8.05(s，2H，三唑)，8.33(d，J＝5.62Hz，1H，＝N-CH＝CH-).
(14a)MS(m/z)234-236(10％-3％M+)；206-208(100％-35％M+-N2)；191-193(40％-15％).
1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ4.23(s，3H，N-CH3)；7.39(d，J＝5.80Hz，1H，＝N-CH＝CH-)，7.93(d，J＝1.19Hz，1H，三唑)，8.34(d，J＝5.80Hz，1H，＝N-CH＝CH-)，8.65(d，J＝1.19Hz，1H，三唑).
4-芐氨基-1-甲基-2-(三唑-2-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶(15)在平底長頸反應(yīng)燒瓶中將1.4g(5.5mmol)混合物(14，14a)懸浮于5ml芐胺中。將該反應(yīng)體系置于微波爐中(輻射頻率2,450MHz)并以460瓦輻射至芐胺沸騰。使該體系沸騰幾秒鐘且然后停止輻射并使該混合物冷卻。重復(fù)該操作直至通過TLC監(jiān)測原料產(chǎn)品消失為止。冷卻后得到黃色蠟狀塊，將其通過急驟層析法進一步純化(梯度環(huán)己烷/乙酸乙酯4∶6(100ml)，環(huán)己烷/乙酸乙酯2∶8(100ml)，乙酸乙酯)。得到390mg的(15)，為黃色固體。
產(chǎn)率＝29％。
M.p.＝180-184℃.
MS(m/z)305(BP，M+)；250；200，174，148.
1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ4.02(s，3H，N-CH3)；5.87(bs，2H)，7.29(d，J＝6.90Hz，1H)，7.40-7.50(m，5H)7.88(d，J＝6.90Hz，1H)，8.29(s，2H，三唑).
4-氨基-1-甲基-2-(三唑-2-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶并三氟甲磺酸鹽(16)(ST 1680)將183mg的(15)(0.6mmol)溶于5ml無水二氯甲烷并緩慢滴加0.7ml三氟甲磺酸(6mmol)。將該體系保持回流1.5小時。然后使該反應(yīng)混合物在氧化鋁柱上層析，首先用二氯甲烷(100ml)、然后用二氯甲烷/乙醇50/50(100ml)且最終用純乙醇洗脫。所需產(chǎn)物回收在乙醇部分中。蒸發(fā)溶劑后將殘余物與乙醚一起研磨且然后在乙醇中結(jié)晶而得到52mg的純ST 1680。
產(chǎn)率＝24％。
M.p.＞290(分解)℃MS(游離堿的)m/z215(100％M+)；160(40％-5％)；134(35％).
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ3.99(s，3H，N-CH3)；7.37(d，J＝6.84Hz，1H，＝NH+-CH＝CH-)，7.82(d，J＝6.84Hz，1H，＝NH+-CH＝CH-)，8.41(s，2H，三唑)，8.62(br，1H，NH2)，12.94(s，2H，＝NH+CH＝CH-).
本發(fā)明的化合物是腺苷A2a受體的配體，它們特別是選擇性拮抗劑且由此可用作藥物，特別是治療得益于對A2a受體的拮抗活性的病理情況。
在用本發(fā)明化合物治療的病理情況中有運動障礙。作為本發(fā)明治療的病理情況，我們引述了阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、威爾遜病和帕金森病。
本發(fā)明還應(yīng)用于與″開-關(guān)″現(xiàn)象、與運動障礙占優(yōu)勢相關(guān)的帕金森病。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，將所述的化合物與左旋多巴或與一種或多種多巴胺興奮劑聯(lián)用。在這種情況中，本發(fā)明用于多巴胺替代療法。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，上述化合物用作制備治療腦缺血和-或與神經(jīng)變性過程相關(guān)的機制的藥物的活性組分。
分子藥理學(xué)對腺苷A2a受體的親和性使用來自專門穩(wěn)定表達人A2a受體亞型的HEK 293細胞(人胚胎腎細胞)的膜評價每一產(chǎn)物與腺苷A2a受體的相互作用能力。
在25℃下將所述膜與30nM濃度的[3H]-CGS21680一起在緩沖液中溫育90′，所述的緩沖液由50mM Tris(pH7.4)、120mM NaCl、10mM MgCl2mM CaCl2、2U/ml腺苷脫氨酶組成。在有NECA(50μm)存在的情況下測定非特異性結(jié)合。
對腺苷A2b受體的親和性使用來自專門穩(wěn)定表達人A2b受體亞型的HEK 293細胞的膜評價每一產(chǎn)物與腺苷A2b受體的相互作用能力。
在25℃下將這些膜與100nM濃度的[3H]-DPCPX一起在緩沖液中保溫90′，所述的緩沖液由50mM Tris(pH7.4)、120mM NaCl、5mM KCl、10mM MgCl2、2mM CaCl2、2U/ml腺苷脫氨酶組成。在有NECA(50μm)存在的情況下測定非特異性結(jié)合。
對腺苷A1受體的親和性使用來自穩(wěn)定表達人A1亞型的CHO-K1細胞的膜評價每一產(chǎn)物與腺苷A1受體的相互作用能力。
在25℃下將這些膜與1.66nM濃度的[3H]-DPCPX一起在緩沖液中保溫90′，所述的緩沖液由50mM Tris(pH7.4)、120mM NaCl、5mM KCl、10mM MgCl2、2mM CaCl2、2U/ml腺苷脫氨酶組成。在有1μM濃度的DPCPX(8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤)存在的情況下測定非特異性結(jié)合。
對腺苷A3受體的親和性對化合物ST 1535和ST 2097測定其對腺苷A3受體的親和性。
為了進行本研究，按照Salvatore等在《美國國家科學(xué)院學(xué)報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，1999 9010365-10369中所述的方法使用來自穩(wěn)定表達人A3亞型的HEK-293細胞的膜。實驗條件需要使用0.1nM濃度的[125I]AB-MECA作為放射性配體、22℃下的保溫時間為90分鐘和IB-MECA(1μM)用于測定非特異性結(jié)合。
體外結(jié)果的分析和表示在每一化合物的結(jié)合研究中，評價8種不同濃度(10-5M-10-12M)以便獲得競爭曲線。通過對競爭曲線的非線性回歸分析確定表示每種產(chǎn)物結(jié)合親和性的IC50值。使用Cheng Prusoff等式(Ki＝IC50/1+(L/Kd))計算Ki值，通過其表示所研究的每種產(chǎn)品對所研究受體的親和性。
普通藥理學(xué)對小鼠自發(fā)運動活性的作用的評價為了進行本研究使用CD1型雄性小鼠(n＝8)。使用由周圍有一系列監(jiān)測內(nèi)置動物運動的連接采集信號且隨后加工的計算機系統(tǒng)的光電池的有機玻璃籠(40cm×40cm)組成的設(shè)備評價所研究產(chǎn)品和參比化合物的作用。
在腹膜內(nèi)給予所述產(chǎn)品后進行試驗。治療后15分鐘將治療動物(與對照組交替)置于籠內(nèi)以便在分為兩次觀察間隔(就治療后的時間而言分別為15′-45′和45′-60′)的45分鐘總期限內(nèi)記錄其自發(fā)運動。
為了檢驗所研究化合物對運動活性可能的作用，考慮下列參數(shù)水平活動；垂直活動；總距離。
除溶于0.9％NaCl的CGS 21680(參比化合物，描述在EP 0 277917中，Ciba-Geigy)外，將所研究的產(chǎn)品溶于DMSO且然后用Cremofor EL和0.9％NaCl稀釋(終濃度DMSO 15％，Cremofor EL15％，NaCl 0.9％)。
所述產(chǎn)品誘發(fā)小鼠僵住癥的能力的評價每組使用10只CD1雄性小鼠。就本試驗而言，將10cm長的鋼棒放置在距支持物表面上方4.5cm高處。使動物的前腿置于該棒上。通過測定動物保持所置姿勢的時間(按秒計)確定僵住癥的存在。隨后將該參數(shù)相對置于升高值的等級(0-5)，由此可成比例表示對照組動物與用試驗物質(zhì)治療的這些動物中確定的僵住癥程度。
在本試驗前30分鐘通過腹膜內(nèi)給予10ml/kg體積的參比產(chǎn)品和本研究中的這些產(chǎn)品。
除溶于0.9％NaCl的CGS 21680(參比化合物)外，將本研究中的產(chǎn)品和對照拮抗劑ZM 241385溶于DMSO且然后用Cremofor EL和0.9％NaCl稀釋(終濃度DMSO 15％，Cremofor EL 15％，NaCl 0.9％)。
所述產(chǎn)品拮抗CGS 21680誘發(fā)的僵住癥的能力的評價為了進行本研究，使用產(chǎn)品ST 1535。在測試僵住癥評分前30分鐘通過腦室內(nèi)給予CGS 21680(10μg/5μl/小鼠)在動物中誘發(fā)僵住癥。在用CGS 21680處理前30分鐘口服給予5mg/Kg和10mg/Kg劑量的測試化合物。
在下列時間后按照用OGS 21680處理后所述的方式衍生出僵住癥評分30′、60′、120′、180′。
所述產(chǎn)品拮抗氟哌啶醇誘發(fā)的僵住癥的能力的評價為了進行本研究，使用產(chǎn)品ST 1535。在測定動物中僵住癥前2小時通過腹膜內(nèi)給予4mg/Kg劑量的氟哌啶醇在動物中誘發(fā)僵住癥。按照前述方法測定僵住癥的存在。
在對氟哌啶醇誘發(fā)的僵住癥評分后，向動物口服給予等于10mg/kg和20mg/kg劑量的產(chǎn)品ST 1535進行治療。治療后60分鐘對動物進行進一步的僵住癥評分，該步驟在給予ST 1535后的下列時間進行120′、240′、300′。
給予相結(jié)合的左旋多巴和A2a拮抗劑對氟哌啶醇誘發(fā)的僵住癥的作用為了進行本研究，使用產(chǎn)品ST 1535。
使用分成不同實驗組(n＝10/組)的CD1小鼠。在按照上述方法進行的僵住癥試驗前2小時和30′對全部動物進行氟哌啶醇處理(4mg/kg，腹膜內(nèi))。
隨后根據(jù)動物的原始實驗組對動物進行不同類型的治療(參見圖表)。氟哌啶醇處理后2小時和30分鐘進行所有僵住癥評價。
氟哌啶醇+ST 1535ST 1535 2.5mg/kg，口服，測試前75′；氟哌啶醇+芐絲肼+左旋多巴芐絲肼3.12mg/kg腹膜內(nèi)，測試前90′；左旋多巴12.5mg/kg，測試前60′；氟哌啶醇+芐絲肼+左旋多巴+ST 1535芐絲肼3.12mg/kg腹膜內(nèi)，測試前90′；ST 1535 1.25mg/kg或2.5mg/kg，測試前75′；左旋多巴12.5mg/kg，測試前60′；A2a拮抗劑和抗抑郁活性。小鼠強迫游泳試驗將小鼠個別放入含有10cm水的維持在23℃下的玻璃圓筒(高25cm，內(nèi)徑10cm)中。在4分鐘試驗期間測定不動時間(秒)。當(dāng)小鼠保持浮在水中，僅作出為使頭保持在水上的必要運動時判斷小鼠不動。本試驗前60分鐘對小鼠口服給予測試化合物ST 1535。
體內(nèi)活性表1中報導(dǎo)了所研究的不同化合物對腺苷A2a受體親和性的平均值和標(biāo)準偏差，表示為Ki(nM)。
能夠觀察到分別命名為ST 1535、ST 1537和ST 2097的產(chǎn)品對腺苷A2a受體均表現(xiàn)出升高的相互作用能力。
這些化合物的親和值與這些化合物相對于其它具有腺嘌呤結(jié)構(gòu)的產(chǎn)品的比較顯示，用相對長的烷基鏈(參見ST 1535、ST 2097)或明顯的位阻(參見ST 1537)在2位上取代腺嘌呤有利于對A2a受體親和性的增加。
同一表中報導(dǎo)了所研究的每一化合物對腺苷受體亞型A2b和A1的親和值和受體親和性比值(KiA1/KiA2a)，通過這一比值可以確定每一產(chǎn)品的選擇性。
觀察到化合物ST 1535、ST 1537和ST 2097對A2a受體的相互作用能力相對于對A1和A2b亞型所展示的占優(yōu)勢，因此，本發(fā)明的化合物對A2a受體具有選擇親和性。
此外，就化合物ST 1535和ST 2097而言，對腺苷A3受體和對屬于其它神經(jīng)遞質(zhì)的36種受體的親和性已經(jīng)得到評價。在這些結(jié)合研究中，所關(guān)注的化合物最初的測試濃度為1μM。隨后，如果所述化合物替換了50％以上的特異性放射性配體，那么以8種不同產(chǎn)品濃度評價它以測定IC50值。
表2中報導(dǎo)了有關(guān)本結(jié)合研究的結(jié)果。
化合物ST 1535和ST 2097表現(xiàn)出對腺苷A3亞型相對低且可以忽略不計的親和性，并且對其它受體沒有相互作用能力(IC50＞1000nM)。
這些結(jié)果證實本發(fā)明的化合物是選擇性的，對腺苷A2a受體具有選擇親和性。
表1A2aA2bAiKiA1/KiA2aKi(nM)±sd Ki(nM)±sd Ki(nM)±sd化合物ST 168097±23 926±551563±252 16ST 149170±15 10±1.4 0.15ST 15352.29±0.58 627±45107±40 47ST 20970.12±0.033 153±1326.2±6.55217ST 15372.34±0.69 2330±588 80±1334ST 149046 0.43 0.009CGS 21680 51±13ZM 241385 0.11±0.03咯嗪3.8±2.1DPCPX 6.5±0.95
表2受體 ST 1535 ST 2097 參比化合物1μM Ki(nM) 1μM Ki(nM) IC50(nM)Ki(nM)A3(h) 1580 519 IB-MECA 1.2 0.84ADO轉(zhuǎn)運蛋白24 34 NBTI 0.30α1(非選擇性)-- 哌唑嗪 0.86α2(非選擇性)-- 育亨賓 95β1-- atenolol 1,770β2-- ICI1185512.3BZD(中樞) -- 地西泮 12D1 --SCH233900.66D2 -- (+)布他拉莫 8.9D3 -- (+)布他拉莫 5.1D4.4(h)-- 氯氮平 156D5(h) --SCH233900.61GABAa -- 蠅蕈醇 16GABAb -- 巴氯芬 50GABA轉(zhuǎn)運蛋白-- 3-哌啶甲酸 10,100AMPA --L-谷氨酸613紅藻氨酸 --紅藻氨酸77PCP-- MK-801 2.0P2X- α，β-MeATP 14P2Y--dATPαS 22NMDA -- CGS 19755967H1(中樞)--美吡拉敏1.3M1-- 哌侖西平(pirenzepina) 22M2--美索曲明34M3-- 4-DAMP 3.5M4-- 4-DAMP 1.9M5-- 4-DAMP 2.0膽堿轉(zhuǎn)運蛋白--宓膽堿-312阿片劑(非選擇性) --納洛酮 1.65-HT1A-- 8-OH-DPAT0.665-HT2A-- 酮色林 2.75-HT2C(h)--美舒麥角1.95-HT3(h) --MDL 72222 9.35-HT4--5-HT5A(h)--5-羥色胺795-HT6(h) --5-羥色胺421NE轉(zhuǎn)運蛋白--普羅替林1.1DA轉(zhuǎn)運蛋白--GBR129095.05-HT轉(zhuǎn)運蛋白 -13丙米嗪 4.4就測試化合物而言，將結(jié)果表示為對于對照特異性結(jié)合的抑制百分比(平均值；n＝2)。符號-表示抑制低于10％。
體內(nèi)活性為了確定所關(guān)注化合物具有的活性特征(興奮或拮抗)，檢驗它們對小鼠運動活性的作用。將這些結(jié)果與下列參比化合物CGS 21680(A2a受體的選擇性興奮劑，EP 0 277 917)和ZM 241385(A2a受體的選擇性拮抗劑)得到的結(jié)果進行比較。注意到興奮劑誘發(fā)運動活性抑制，而拮抗劑具有刺激作用(Nikodijevicc O.等《實驗藥物療法雜志》(J.Pharm.Exp.Ther)257，286-94，1991)。
在表3中例示了所關(guān)注化合物與參比化合物誘發(fā)的對描述小鼠自發(fā)運動活性的三種參數(shù)的作用結(jié)果。報導(dǎo)了觀察到的每一參數(shù)的平均值和標(biāo)準誤差。
表3水平活動 垂直活動 總距離從治療開始的觀察間隔15’-45 45’-60 15’-45 45’-60’15’-45’ 45’-60’治療組對照組5992±4843148±1004 356±62 117±401394±148469±125CGS 21680 1608±328471±254 27±11 10±1 504±106 121±73(0,5mg/kg)載體 5890±8562259±452330±96 119±341315±290412±121(10ml/kg)ZM 241385 8706±4734148±241680±64 362±782280±2421022±130(15mg/kg)ZM 241385 7035±7093505±375613±102282±371725±186783±165(30mg/kg)ZM 241385 7790±9804241±407570±129264±562250±4011131±158(60mg/kg)ST 1537 7494±5653133±250590±78 210±171676±204677±105(2,5mg/kg)ST 1537 7203±2642844±299498±77 363±911503±116532±95(5mg/kg)ST 1537 8242±8473874±295528±126276±572707±950843±149(10mg/kg)載體 5184±8321734±367123±60 49±25(10ml/kg)
ST 1535 5386±5051693±266282±79 68±21(2.5mg/kg)ST 1535 7549±5082353±199249±41 76±16(5mg/kg)ST 1535 7434±5262784±345219±64 71±32(10mg/kg)ST 1535 10524±670 3321±363486±84 148±36(20mg/kg)
就本發(fā)明的化合物而言，產(chǎn)品ST 1537特別誘發(fā)運動活性明顯增加。實際上，每一檢驗的參數(shù)相應(yīng)于對照值而言均顯著增加，不依賴于所給予的產(chǎn)品劑量。此外，觀察到化合物ST 1537比參比拮抗劑更具活性。實際上，最低劑量的ST 1537誘發(fā)與較大劑量(15mg/kg)的化合物ZM 241385相同的作用。此外，對化合物ST 1535而言，從5mg/Kg劑量開始觀察到小鼠自發(fā)運動活性顯著增加。因此，本發(fā)明的化合物對腺苷A2a受體具有拮抗活性。
在用所研究的產(chǎn)品治療后，對動物中最終存在的僵住癥的評價(圖1)與這些觀察結(jié)果共同證實了ST 1537和ST 1535的拮抗特征。實際上，它們中沒有一種使小鼠中出現(xiàn)僵住癥，這一結(jié)果與參比拮抗劑(ZM241385，60mg/kg)類似而與參比興奮劑(CGS 21680，2mg/kg)證實的結(jié)果相反。
就化合物ST 1535而言，還通過對其拮抗預(yù)先通過給予選擇性A2a受體興奮劑CGS21680誘發(fā)的僵住癥消失的能力的評價證實了該產(chǎn)品對A2a受體的拮抗活性特征(附圖2)。
選擇性A2a受體興奮劑誘導(dǎo)動物中僵住癥程度升高?？诜o予產(chǎn)品ST 1535在所有觀察時間均顯著拮抗僵住癥出現(xiàn)，特別是當(dāng)給予的劑量為10mg/kg時更是如此。這一結(jié)果證實并描述了優(yōu)選化合物ST1535針對腺苷A2a受體的拮抗活性特征。
還通過研究所述化合物對小鼠中氟哌啶醇僵住癥的作用證實了ST 1535作為對腺苷A2a受體的選擇性拮抗劑的特征。此外，通過這種評價，所述產(chǎn)品調(diào)節(jié)黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)中多巴胺能傳遞功能障礙的能力得到確定。在附圖3中，觀察到口服給藥后，ST 1535減少小鼠中出現(xiàn)僵住癥，它是急性給予氟哌啶醇后黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)中多巴胺能狀態(tài)下降促使的行為表現(xiàn)。ST 1535的抗僵住癥活性間接證實所關(guān)注的化合物能夠補償在用氟哌啶醇處理后黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)中發(fā)生的多巴胺神經(jīng)傳遞缺乏，按照藥理學(xué)特征屬于腺苷A2a受體的選擇性拮抗劑。
此外，就優(yōu)選的化合物ST 1535而言，已經(jīng)證實口服給予該產(chǎn)品強化了用無效劑量的左旋多巴和芐絲肼治療的抗僵住癥活性。這種評價結(jié)果報導(dǎo)在附圖4中。用ST 1535與無效劑量的左旋多巴和芐絲肼聯(lián)用以劑量依賴性方式減輕了氟哌啶醇-僵住癥。
這些結(jié)果提示可以將所關(guān)注的產(chǎn)品ST 1535與低劑量的左旋多巴聯(lián)合給藥用于治療帕金森病。
左旋多巴常用于治療帕金森病。然而左旋多巴的應(yīng)用因作為副作用的運動障礙的出現(xiàn)而受到限制(Shaw K.M.等″Q.J.Med″1980 49，283)。共同給予ST 1535可以減少所給予的左旋多巴的量，從而減少所述副作用的出現(xiàn)。
此外，對優(yōu)選的化合物ST 1535測定了抗抑郁活性。注意到A2a受體的選擇性拮抗劑正被定義為新的有潛力的抗抑郁藥(El Yacobui M.et al.《英國藥理學(xué)雜志》(British J.Pharmacol.)2001134，68-77)。附圖5表示ST 1535在抑郁癥動物模型中的作用。該化合物以劑量依賴性方式減少了動物不動的時間，這種方式與對抗抑郁藥丙米嗪所觀察到的方式類似。
本發(fā)明的另一個目的是藥物組合物，它包含作為活性成分的至少一種通式(I)化合物，單獨或與一種或多種其它通式(I)的化合物組合，或所述通式(I)化合物與其它用于治療本文指定的病理情況的活性組分聯(lián)用，例如其它對腺苷A2a受體具有活性的產(chǎn)品；甚至是單獨的劑型或適合于聯(lián)合療法的劑型。本發(fā)明中的活性組分是與常用于制藥技術(shù)的合適的載體和/或賦形劑相混合，所述的載體和/或賦形劑例如描述在最新版《Remington氏藥物科學(xué)手冊》(″Remington′s PharmaceuticalSciences Handbook″′)中。本發(fā)明的組合物含有治療有效量的所述活性組分。其劑量由本領(lǐng)域技術(shù)人員例如臨床醫(yī)師和醫(yī)生根據(jù)所治療的病理情況的類型和患者條件或同時給予的其它活性組分來決定。
藥物組合物的實例是允許口服或非腸道、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、經(jīng)皮給藥的那些藥物組合物。適合于該目的的藥物組合物有丸劑、硬膠囊或軟膠囊、粉劑、溶液、混懸劑、糖漿劑、臨時配成液體的固體形式。用于非腸道給藥的組合物例如是可肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下注射的所有劑型，為溶液、混懸劑、乳劑形式。我們還提及了脂質(zhì)體制劑。還包括口服給藥用的所述活性組分的控釋劑型；覆蓋有合適包衣層的丸劑；微囊化粉末；含環(huán)糊精的復(fù)合物；延效型制劑，例如皮下用的長效制劑，諸如可注射的沉積物或植入物。
權(quán)利要求
1.具有下列通式的化合物及其藥物上可接受的鹽 其中X是N、CH、C-R2；R1是C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基；R2是氫、C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基、C6-C14芳基或C6-C14芳基(C1-C6)直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基，其中所述的芳基任選被一個或多個相同或不同的取代基取代，這些取代基選自鹵素、羥基、C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷氧基、氨基、一-或二-C1-C6直鏈或支鏈烷基組成的組；R3是NH2、NHR4；R4是C1-C6烷基或C1-C6羥基烷基、C1-C3烷氧基烷基、氨基(C1-C6)烷基，其中所述的氨基任選被一個或兩個C1-C3烷基取代，所述的烷基是直鏈或支鏈飽和或不飽和的，C6-C14芳基或C6-C14芳基(C1-C6)烷基，其中所述的芳基任選被一個或多個相同或不同的取代基取代，這些取代基選自鹵素、羥基、C1-C6直鏈或支鏈飽和或不飽和烷氧基、氨基，被直鏈或支鏈飽和或不飽和C1-C6烷基一-或二-取代。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中X是氮且R2是2位上的正丁基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中X是氮且R2是2位上的苯乙基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中X是氮且R2是2位上的正戊基。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中X是碳且R2是6或7位上的氫。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，選自下列化合物組成的組-6-氨基-2，9-二甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤；-2-丁基-9-甲基-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺；-9-甲基-2-(2-苯乙基)-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6基胺；-9-甲基-2-戊基-8-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-9H-嘌呤-6-基胺。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，它是6-氨基-9-甲基-8-(三唑-2-基)-9(H)-嘌呤。
8.權(quán)利要求1-7所述化合物的制備方法，該方法包括下列反應(yīng)流程的步驟 a)在化合物a)的2位上進行溴取代；b)用三唑-2-基替代化合物b)2位上的溴而得到化合物c)。
9.藥物組合物，包含至少一種權(quán)利要求1-7的化合物并混有藥物上可接受的賦形劑和/或載體。
10.權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物作為藥物的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求1-6中任意一項所述的化合物在制備對腺苷A2a受體具有抑制活性的藥物中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中所述的抑制活性是對腺苷A2a受體選擇性的。
13.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療運動障礙的藥物中的應(yīng)用。
14.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療阿爾茨海默病的藥物中的應(yīng)用。
15.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療亨廷頓舞蹈病的藥物中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療威爾遜病的藥物中的應(yīng)用。
17.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療帕金森病的藥物中的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述的帕金森病具有″開-關(guān)″現(xiàn)象或其中所述的帕金森病是運動障礙占優(yōu)勢。
19.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中將所述的化合物與左旋多巴或與一種或多種多巴胺興奮劑聯(lián)用。
20.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述的藥物用于多巴胺替代療法。
21.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述的障礙是因藥物、創(chuàng)傷、毒性劑所引起。
22.權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物在制備用于治療腦缺血和/或與神經(jīng)變性過程相關(guān)的機制的藥物中的應(yīng)用。
23.權(quán)利要求1-6的化合物與左旋多巴或與多巴胺興奮劑的組合。
24.權(quán)利要求23所述的組合在制備用于多巴胺替代療法的藥物中的應(yīng)用。
25.權(quán)利要求7所述的化合物在制備對腺苷A1受體具有親和性的藥物中的應(yīng)用。
26.權(quán)利要求25的應(yīng)用，其中所述的藥物用于治療認知缺損、阿爾茨海默病、腦缺血、急性和慢性腎衰、因放射造影劑或順鉑誘發(fā)的腎衰。
27.2-溴-4-氯-1-甲基-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶。
28.4-氯-1-甲基-2-(三唑-2-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶。
29.4-氯-1-甲基-2-(三唑-1-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶。
30.4-芐氨基-1-甲基-2-(三唑-2-基)-1(H)-咪唑并[4，5-c]吡啶。
31.權(quán)利要求27-30的化合物作為權(quán)利要求8方法中的中間體的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了通式(I)的化合物，其中的基團如本說明書中所定義，所述的化合物是腺苷A
文檔編號A61P43/00GK1525974SQ02813848
公開日2004年9月1日 申請日期2002年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月31日
發(fā)明者G·塔齊亞, G·皮埃爾桑蒂, P·米內(nèi)蒂, M·A·狄瑟塞爾, G·加洛, F·喬吉, L·喬吉, ６ ５, G 塔齊亞, 狄瑟塞爾, 詰 申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司