專利名稱：一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物型殺菌制劑，具體的說(shuō)，是涉及一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自82年由澳大利亞學(xué)者Warren與Marshall從人胃黏膜中分離到幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)(Marshall BJ，Royce A，Annear DI，et al.Original isolation of Camylobacter pyloridis from human gastric mucos.Microbios Letters.1984，2583-84)后，已有大量研究資料表明，Hp是慢性活動(dòng)性胃炎的病原菌，是消化性潰瘍的重要致病因子，也是胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的重要致病因子，并有報(bào)道認(rèn)為Hp與胃癌、胃、十二指腸潰瘍等32種疾病關(guān)系密切。目前Hp已被WHO公布為新的傳染病。
在發(fā)達(dá)國(guó)家，Hp人群感染率約為50％，而發(fā)展中國(guó)家兒童感染率就高達(dá)50％，成人感染率可高達(dá)90％以上。Hp可從糞便、唾液排出，人是該病的傳染源，羊、猴、豬、貓、狗等也是Hp的宿主。已有流行病學(xué)調(diào)查資料表明，Hp的傳播主要有兩種方式(1)經(jīng)胃鏡的醫(yī)源性傳播；(2)人與人之間密切接觸，以口一口、胃-口或糞-口途徑傳播，明顯具有家庭聚集性。已有資料報(bào)道，Hp陽(yáng)性者配偶的感染率(78.9％)明顯高于Hp陰性者配偶的感染率(26.6％)；父母Hp雙陽(yáng)性的兒童感染率(89.74％)明顯高于父母Hp雙陰性的兒童感染率(16.68％)。Hp感染的危險(xiǎn)因素中，除遺傳外，環(huán)境與衛(wèi)生習(xí)慣如共用食品，咀嚼喂食，食品污染，不常換牙刷等，居住條件，經(jīng)濟(jì)與教育、營(yíng)養(yǎng)等都有重要作用。特別是口腔衛(wèi)生在Hp感染中的作用已引起關(guān)注，認(rèn)為牙菌斑是Hp的孳生地，口腔環(huán)境可能是Hp的一條傳播通道；并認(rèn)為口腔中的Hp可能是胃部Hp再感染的重要儲(chǔ)存庫(kù)，Hp的根治還應(yīng)包括對(duì)牙菌班中Hp的清除。上海市疾病控制中心2000年對(duì)全市200余戶家庭污染調(diào)查表明，家庭環(huán)境嚴(yán)重污染占22.8％，其中牙刷嚴(yán)重污染率為50.5％，Hp陽(yáng)性率為5.9％。
目前對(duì)幽門螺桿菌的治療多選用抗生素。但是長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生各種不良反應(yīng)，如胃腸道刺激反應(yīng)。而且長(zhǎng)期使用抗生素容易引起細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生耐藥性。試驗(yàn)表明，在體外，Hp對(duì)萬(wàn)古霉素(Vanoomycin)和TMP(三甲氧氨芐嘧啶)高度耐藥。而許多在體外對(duì)Hp高敏感性的抗菌藥物在體內(nèi)低效或無(wú)效，如紅霉素，螺旋霉素等。近年來(lái)由于臨床上廣泛應(yīng)用滅滴靈、克拉霉素等抗生素治療，因此，對(duì)這些藥物的耐藥菌株已較為常見(jiàn)。
文獻(xiàn)中報(bào)道了對(duì)甲硝唑和clarithromycin耐藥的菌株(Boron，et al.Helicobacter pylori binds to blood group antigens.Scientific Amer.Scienve &Med.128-37)。
中藥對(duì)機(jī)體的毒副作用比較小，也不易產(chǎn)生耐藥性，但中藥的殺菌能力不強(qiáng)，且需要長(zhǎng)時(shí)間使用才見(jiàn)效，給患者帶來(lái)不便。
因此，研制一種既能高效殺滅幽門螺桿菌，又對(duì)機(jī)體刺激性小，毒副作用小且幽門螺桿菌對(duì)其不易產(chǎn)生耐藥性的制劑，成為當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題在于研制開(kāi)發(fā)一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑及其制備方法和應(yīng)用，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的毒副作用大，對(duì)皮膚和粘膜刺激性強(qiáng)，易產(chǎn)生耐藥性的缺陷。
本發(fā)明提供了一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑，該制劑包括兩種或幾種具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽。
具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽是從植物、動(dòng)物或微生物種提取的，也可以是對(duì)提取的物質(zhì)的改造或加工產(chǎn)物，也可以是通過(guò)基因工程、蛋白工程或化學(xué)方式合成的。所述及的蛋白質(zhì)或多肽包括溶菌酶(Lysozyme)、溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)或乳鏈菌肽(Nisin)。
本發(fā)明的組分和含量包括(重量百分比)溶葡萄球菌酶0.0001～9％溶菌酶 0.0001～2％乳鏈菌肽0～2％水 余量。
所采用的水為蒸餾水或生理鹽水。
溶葡萄球菌酶由Sigma公司購(gòu)得。
溶菌酶是從動(dòng)物體、植物體或微生物中提取的天然溶菌酶，優(yōu)選的溶菌酶是從蛋清中提取的溶菌酶，分子量為14000-15000，能水解N-乙酰葡萄糖胺與N-乙酰胞壁酸之間的β-1，4糖苷鍵。本發(fā)明中所用的溶菌酶是從上海市滬南蛋品廠購(gòu)得。
乳鏈菌肽是具有抗微生物性質(zhì)的多肽，由自然界各種乳鏈球菌的菌株產(chǎn)生。
按照本發(fā)明，所說(shuō)的制劑還包括0.01～0.1％的維生素和0.6～60％的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑是聚乙二醇類物質(zhì)或殼聚糖等藥用高分子化合物，可以包裹蛋白質(zhì)或多肽，免受其他物質(zhì)的破壞，從而增強(qiáng)蛋白質(zhì)或多肽的穩(wěn)定性。
維生素是作為殺菌輔劑，同時(shí)有助于調(diào)節(jié)消化道環(huán)境；所述及的維生素包括維生素A、維生素E、維生素D、維生素C、維生素B族、β-胡蘿卜素中的一種或一種以上；所述及的聚乙二醇類物質(zhì)包括是聚乙二醇400、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的一種或一種以上。
該制劑可制成或添加于口腔含片、口腔液體噴霧劑、口腔顆粒噴霧劑、漱口水、牙膏、口香糖、口服制劑、皮下注射劑、靜脈注射劑、肌肉注射劑等。添加量為2-25wt％其基本特點(diǎn)為1.殺菌作用強(qiáng)。從實(shí)驗(yàn)室的幽門螺旋桿菌殺菌試驗(yàn)可看出，用此生物復(fù)合制劑對(duì)幾個(gè)不同濃度的幽門螺旋桿菌菌懸液進(jìn)行殺菌試驗(yàn)，其殺滅率在2-10分鐘內(nèi)都高于99.9％；臨床上研究也得出，本發(fā)明的生物復(fù)合制劑能阻斷幽門螺旋桿菌從口腔中的傳播并在短時(shí)間內(nèi)殺滅幽門螺旋桿菌。經(jīng)上海市華山醫(yī)院抗生素研究所、第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院檢驗(yàn)科、上海市第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、上海市第九人民醫(yī)院檢驗(yàn)科等單位曾將臨床收集到的30多株不同分型的幽門螺旋桿菌進(jìn)行了該制劑的抑殺菌試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明1％濃度的本發(fā)明的生物復(fù)合制劑溶液對(duì)臨床上常見(jiàn)的不同分型的幽門螺旋桿菌均有明顯的抑殺作用。
2.殺菌活性和穩(wěn)定性大大高于其中的各單一生物制劑活性。由于本發(fā)明的生物型殺菌劑是以溶葡萄球菌酶、溶菌酶、乳鏈菌肽為主要成分，配以上述穩(wěn)定劑等成分復(fù)合而成，比單純的一種蛋白或多肽具有更高的穩(wěn)定性，經(jīng)測(cè)試證明，該產(chǎn)品在常溫下可保存1年。
具有殺菌活性的蛋白質(zhì)或多肽在常溫下很不穩(wěn)定，而經(jīng)我們復(fù)配的此生物殺菌制劑中含有篩選的穩(wěn)定劑等成分，穩(wěn)定性大為增強(qiáng)，使之可適用于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。
以1％濃度的本發(fā)明的生物殺菌制劑溶液進(jìn)行對(duì)幽門螺旋桿菌的殺菌試驗(yàn)(作用5分鐘)，經(jīng)37℃保存3個(gè)月，其對(duì)幽門螺旋桿菌殺滅率的變化見(jiàn)表1。
表1％濃度的生物復(fù)合酶制劑溶液37℃3個(gè)月放置前后對(duì)幽門螺旋桿菌的殺滅率比較

3.安全性。該制劑主要由蛋白質(zhì)或多肽組成，對(duì)機(jī)體無(wú)任何刺激性、毒副作用，并可參與機(jī)體代謝而徹底降解，沒(méi)有殘留，不會(huì)富集。長(zhǎng)期使用亦不會(huì)產(chǎn)生耐藥性。
本發(fā)明還提供了該制劑的制備方法在凈化室中，將上述組分混合，加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，輕輕攪拌，充分混勻后，然后灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫(kù)，室溫保存即可；如為液體制劑，需要先以0.22微米濾膜進(jìn)行微濾，才能灌裝。
該制劑可用于預(yù)防和治療口腔、咽喉部和胃部的幽門螺桿菌感染；預(yù)防和治療由幽門螺桿菌感染所致的疾病，如胃、十二指腸潰瘍、胃炎、胃癌、非潰瘍性消化不良、胃粘膜萎縮、胃息肉、胃淋巴瘤、糖尿病、肝炎、肝昏迷、肝性腦病、冠心病、心絞痛、缺血性心臟病、高血壓、糖尿病、癥狀性低血糖、生長(zhǎng)弛緩、血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、酒渣鼻、特發(fā)性缺鐵性貧血、蕁麻疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等；還可用于預(yù)防和治療口咽部其他細(xì)菌所致的疾病，如牙周炎、齲齒、咽喉炎、口腔潰瘍、口腔異味等。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1制備100克生物殺菌制劑配比溶葡葡球菌酶 0.01g溶菌酶 0.25g維生素C0.1g維生素B2 0.05g對(duì)羥基苯甲酸乙酯 0.2gZnCl20.1gPEG400 35g淀粉 余量該實(shí)施方案是在凈化室，將上述組分混合，攪拌，充分混勻，然后將所得混合物制成各種口腔固體氣霧劑、口腔含片、口香糖、口服制劑?？捎糜陬A(yù)防和治療口腔和胃部的幽門螺桿菌的感染。
實(shí)施例2制備100克生物殺菌制劑配比溶葡葡球菌酶 0.002g溶菌酶 0.20g乳鏈菌肽 0.001g維生素A0.3g維生素C0.15g氯化鋅 0.16g殼聚糖 30gPEG15008g注射用水 余量該實(shí)施方案是在凈化室中，將上述組分混合，攪拌，充分混勻，以小于0.22微米濾膜進(jìn)行微濾，即成各種漱口水、液體噴劑和口服制劑。漱口水于每天飯后一次，一次約20毫升；噴劑和口服制劑每天早晚各一次，每次20毫升，可預(yù)防和治療口咽部和胃部幽門螺旋桿菌的滋生。
實(shí)施例3制備1克生物殺菌制劑配比溶葡葡球菌酶0.0015g溶菌酶 0.025g山梨醇 0.025gZnCl20.01g維生素C 0.06gPEG6000 0.35g注射用水余量該實(shí)施方案是在凈化室中，將上述組分混合，攪拌，充分混勻，以小于0.22微米濾膜進(jìn)行微濾，然后將所得混合物與牙膏基質(zhì)以3∶97的比例配比，可添加于制造功能性牙膏，每天早晚刷牙時(shí)使用，可預(yù)防口腔幽門螺旋桿菌的感染，還可以預(yù)防和治療口咽部其他細(xì)菌感染所致的疾病，如牙周炎、齲齒、咽喉炎、口腔潰瘍、口腔異味等。
實(shí)施例4制備1克生物殺菌制劑配比溶葡葡球菌酶0.0004g溶菌酶 0.016g乳鏈菌肽0.0005山梨醇 0.05gZnCl20.11g殼聚糖 0.20gPEG6000 0.15g注射用水余量該實(shí)施方案是在凈化室中，將上述組分混合，攪拌，充分混勻，以小于0.22微米濾膜進(jìn)行微濾，可作為口服制劑、或注射制劑，口服制劑每天服用3次，每次10毫升；注射制劑每天一次，每次10毫升，可用于預(yù)防和治療口腔、咽喉部和胃部的幽門螺桿菌感染，還可以用來(lái)預(yù)防和治療由幽門螺桿菌感染所致的疾病，尤其是胃炎、胃十二指腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤、非潰瘍性消化不良、胃粘膜萎縮、胃息肉、胃淋巴瘤等。同時(shí)對(duì)于由幽門螺桿菌感染所致的糖尿病、肝炎、肝昏迷、肝性腦病、冠心病、心絞痛、缺血性心臟病、高血壓、糖尿病、癥狀性低血糖、生長(zhǎng)弛緩、血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、酒渣鼻、特發(fā)性缺鐵性貧血、蕁麻疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等也可以作為輔助性治療。
權(quán)利要求
1.一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑，其特征在于該制劑包括一種或幾種具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的生物制劑，其特征在于具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽是溶菌酶、溶葡萄球菌酶、乳鏈菌肽。
3.如權(quán)利要求2所述的生物制劑，其特征在于組分和重量百分比含量包括溶葡萄球菌酶0.0001-9％、溶菌酶0.0001-2％、乳鏈菌肽0-20％、水余量。
4.如權(quán)利要求1或2所述的生物制劑，其特征在于所述的具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽是從植物、動(dòng)物或微生物中提取的，或?qū)μ崛〉奈镔|(zhì)的改造或加工產(chǎn)物，或是通過(guò)基因工程、蛋白工程或化學(xué)方式合成的。
5.如權(quán)利要求3所述的生物制劑，其特征在于包括維生素0.01-0.1％、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑0.6-60％。
6.如權(quán)利要求6所述的生物制劑，其特征在于維生素包括維生素A、維生素E、維生素D、維生素C、維生素B族、葉酸、β-胡蘿素中的一種或兩種。
7.如權(quán)利要求5所述的生物制劑，其特征在于所述的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑為聚乙二醇類物質(zhì)或者殼聚糖中的一種或兩種。
8.如權(quán)利要求7所述的生物制劑，其特征在于所述的聚乙二醇類物質(zhì)包括聚乙二醇400、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的一種或一種以上。
9.如權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的生物制劑的應(yīng)用，其特征在于該制劑可制成或添加于口腔含片、口腔液體噴霧劑、口腔顆粒噴霧劑、漱口水、牙膏、口香糖、口服制劑、皮下注射劑、靜脈注射劑或肌肉注射劑。
10.如權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的生物制劑在預(yù)防和治療口腔、咽喉部和胃部的幽門螺桿菌感染的消毒劑或藥物中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的生物制劑在預(yù)防和治療由幽門螺桿菌感染所致疾病的消毒劑或藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的生物制劑在預(yù)防和治療口咽部致病菌所致疾病的消毒劑或藥物中的應(yīng)用。
13.如權(quán)利11所述的生物制劑的應(yīng)用，其特征在于所述的疾病為胃、十二指腸潰瘍、胃炎、胃癌、非潰瘍性消化不良、胃粘膜萎縮、胃息肉、胃淋巴瘤、糖尿病、肝炎、肝昏迷、肝性腦病、冠心病、心絞痛、缺血性心臟病、高血壓、糖尿病、癥狀性低血糖、生長(zhǎng)弛緩、血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、酒渣鼻、特發(fā)性缺鐵性貧血、蕁麻疹或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
14.如權(quán)利要求12所述的生物制劑的應(yīng)用，其特征在于所述的疾病為牙周炎、齲齒、咽喉炎、口腔潰瘍或口腔異味。
15.一種如權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述制劑的制備方法，其特征在于包括在凈化室中，將上述組分混合，攪拌，充分混勻，即獲得本發(fā)明的制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于抑殺幽門螺桿菌的生物制劑，該制劑以具有殺菌功能的蛋白質(zhì)或多肽為活性成分，具有殺菌功能強(qiáng)、毒副作用小、穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，尤其是長(zhǎng)期使用不易產(chǎn)生耐藥性，可制成或添加于各種制劑，用于預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染及幽門螺桿菌感染引起的各種疾病。
文檔編號(hào)A61P11/04GK1481897SQ0213693
公開(kāi)日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2002年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月10日
發(fā)明者陸婉英, 黃青山 申請(qǐng)人:上海高科生物工程有限公司