專利名稱：取代苯烷基類－氧化氮合酶抑制劑、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的取代苯烷基類化合物、它們的制備方法、含有這些化合物的藥用組合物以及它們的醫(yī)療用途，特別是作為一氧化氮合酶抑制劑的用途。
近年來在研究NOS抑制劑方面取得了不少進(jìn)展，其中，含有異硫脲和胍結(jié)構(gòu)的化合物具有較好的NOS抑制活性(Southan GJ，Szabo C.Biochem Pharmacol.1996，51383-394)。1997年，Shearer BG等(Shearer BG，et al.J Med Chem.1997，40(12)1901-1905)報道S-乙基-N-取代苯基異硫脲具有較強(qiáng)的NOS抑制作用，且對nNOS具有選擇性。但它們在體內(nèi)消除迅速，影響了其應(yīng)用價值。
本發(fā)明設(shè)計并合成的一系列(取代)苯烷基異硫脲類和胍類化合物，通式如下 其中R1可以表示氫、3，4-亞甲二氧基或硝基；R2表示氫或C1-4的烷基；R3表示C1-4的烷硫基、氨基或C1-4的烷氨基；n＝1-5。優(yōu)選的化合物為R2表示氫或甲基，R3表示甲硫基或乙硫基或氨基。更為優(yōu)選的化合物為R1表示4-硝基，R2表示氫，R3表示氨基。
根據(jù)本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的鹽包括與下列酸形成的酸加成鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來酸、苯磺酸上述通式的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以是(1)S-甲基-N-(3，4-亞甲二氧基苯基)乙基異硫脲氫碘酸鹽(2)S-乙基-N-(3，4-亞甲二氧基苯基)乙基異硫脲氫碘酸鹽(3)S-甲基-N-苯乙基異硫脲氫碘酸鹽(4)S-乙基-N-苯乙基異硫脲氫碘酸鹽(5)S-甲基-N-芐基異硫脲氫碘酸鹽(6)S-乙基-N-芐基異硫脲氫碘酸鹽(7)S-甲基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基異硫脲氫碘酸鹽(8)S-乙基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基異硫脲氫碘酸鹽(9)S-甲基-1-甲基-3-苯乙基異硫脲鹽酸鹽(10)S-乙基-1-甲基-3-苯乙基異硫脲氫碘酸鹽(11)S-甲基-1-甲基-3-芐基異硫脲氫碘酸鹽(12)S-乙基-1-甲基-3-芐基異硫脲鹽酸鹽(13)S-甲基-1-甲基-3-(3，4-亞甲二氧基)苯乙基異硫脲鹽酸鹽(14)S-乙基-1-甲基-3-(3，4-亞甲二氧基)苯乙基異硫脲氫碘酸鹽(15)N-(3，4-亞甲二氧基苯基)乙基胍硫酸鹽(16)N-(4-硝基苯基)乙基胍硫酸鹽通式(I)化合物的制備方法如下當(dāng)R2為氫、R3為烷硫基或烷胺基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與異硫氰酸苯甲酰酯(PhCONCS)反應(yīng)，得中間體1-苯甲?；?3-(取代)苯烷基硫脲，在堿性水溶液中加熱水解，得中間體N-(取代)苯烷基硫脲，再與鹵代烷反應(yīng)得到R3為烷硫基的產(chǎn)物；該產(chǎn)物再與烷基胺反應(yīng)，得到R3為烷胺基的產(chǎn)物。 當(dāng)R2為烷基，R3為烷硫基、氨基或烷胺基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與異硫氰酸烴基酯在丙酮或C1-4醇或乙腈或N，N-二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑中反應(yīng)，得中間體1-烴基-3-(取代)苯烷基硫脲，再與鹵代烷反應(yīng)得到R3為烷硫基的產(chǎn)物；該產(chǎn)物再與氨或烷基胺反應(yīng)，得到R3為氨基或烷胺基的產(chǎn)物。
當(dāng)R2為氫，R3為氨基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與S-烷基異硫脲反應(yīng)，反應(yīng)溶劑可以是C1-4的有機(jī)醇、乙腈、DMF以及它們與水組成的混合液。
藥理測試結(jié)果表明，通式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽對體外神經(jīng)細(xì)胞NOS均有不同程度的抑制作用，因此，式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于治療與NOS抑制劑有關(guān)的臨床病癥。這些病癥包括神經(jīng)退行性疾病、炎性疾病、休克狀態(tài)、免疫疾病及胃腸蠕動紊亂等。
神經(jīng)退行性疾病包括早老性癡呆癥、帕金森氏癥和舞蹈癥。
化合物的部分藥理活性測試方法如下取牛腦海馬，置于0.25％的胰蛋白酶消化液中，在37℃，5％CO2條件下，孵育20-30分鐘，用含小牛血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化。將消化好的組織移入離心管中，加入2-3mlDMEM培養(yǎng)液，用吸管吹打數(shù)次，靜置數(shù)分鐘，吸取上層細(xì)胞懸液，用同樣的培養(yǎng)液稀釋成1.5×106細(xì)胞/ml，接種于預(yù)先用多聚賴氨酸涂布過的培養(yǎng)板上，置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取培養(yǎng)好的神經(jīng)細(xì)胞，加入L-精氨酸和三個濃度的化合物溶液，同時設(shè)空白對照和陽性對照，培養(yǎng)兩小時后，向每份樣品中加入等量的Griess試劑(1％磺胺，0.1％鹽酸萘乙二胺，3％磷酸)，混勻，靜置3-5分鐘，在722光刪分光光度計上測定540nm處的吸收度。將測得的吸收度，在亞硝酸鈉濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線上變?yōu)橄鄳?yīng)的濃度，由統(tǒng)計學(xué)處理求出IC50值。以上藥理活性測試方法參照文獻(xiàn)報道的方法(Southan GJ，et al.Life Sci.1996，58(14)1139-1148；Wolff DJ，et al.JBiol Chem.1993，268(13)9425-9429)。
部分化合物藥理測試結(jié)果如下化合物 IC50 化合物 IC501 7.21×10-610 5.06×10-52 3.27×10-611 9.37×10-53 4.47×10-512 8.13×10-74 4.67×10-513 1.43×10-65 3.11×10-514 1.74×10-76 8.46×10-615 7.67×10-77 3.26×10-416 5.22×10-88 2.23×10-7陽性對照藥 9.50×10-79 7.64×10-5陽性對照藥選用已報道的nNOS選擇性抑制劑S-甲基N-對甲氧基苯基異硫脲(Shearer BG，et al.J Med Chem，1997，401901-1905)。
將(1b)1.5g(6.7mmol)溶于20ml甲醇中，加入CH3I 0.65ml(1.52g，10.7mmol)，回流4小時，濃縮得紅色油狀物。甲醇-乙醚重結(jié)晶，得淡粉紅色晶體(1)1.8g，收率76.4％，mp60-61℃。Anal(C11H15N2O2SI；C％H％N％)Req36.01，4.10，7.65；Found35.78，4.27，7.40.IR(cm-1)3300，1650，1600，1500.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ2.60(s，3H)，2.81(t，2H)，3.30(br，1H)，3.55(t，2H)，5.95(s，2H)，6.70-6.85(m，3H)，9.02(br，2H)，9.35(br，1H).MS(SCIm/z)239(M+1).
例2S-乙基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基異硫脲氫碘酸鹽(8)的制備4-硝基苯乙胺(8a)將發(fā)煙硝酸90ml置于250ml三頸瓶中，冰鹽浴冷卻至0℃，快速攪拌下，滴加β-苯乙胺20g(165mmol)，滴畢，保溫0-5℃攪拌2小時。倒入碎冰200g中，用40％NaOH調(diào)pH7.5-8，乙醚萃取3次，水層再用10％NaOH調(diào)pH10，用二氯甲烷萃取3次(25ml×3)，萃取液用飽和食鹽水洗滌，活性炭脫色，無水硫酸鈉干燥，室溫減壓濃縮得黃色液體(8a)19.4g。異硫氰酸甲酯(8b)將氫氧化鈉36g(900mmol)溶于水80ml中，冰浴冷卻至10-15℃，加入二硫化碳54.4ml(68.5g，900mmol)，機(jī)械攪拌下，于30分鐘內(nèi)滴入25％甲胺水溶液112g(900mmol)，逐漸升溫至80℃，攪拌1.5小時，冷至35℃，滴加氯甲酸乙酯87.5ml(98g，900mmmol)，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，分取上層液體，無水硫酸鈉干燥，分餾，收集116-119℃餾份，得無色液體(8b)38.4g。1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基硫脲(8c)將(8a)1.2g(7.2mmol)溶于15ml無水乙醇中，加入(8b)0.75ml(0.8g，10.9mmol)，回流3小時，濃縮得橘紅色粘稠液體，放冷后固化，柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝5～2/1)得(8c)1.2g。
取(8c)0.5g(2.1mmol)溶于5ml乙腈中，加入C2H5I 1.05g(0.55ml，6.3mmol)，于50℃反應(yīng)5小時，濃縮得黃色油狀物，柱層析(氯仿/甲醇＝99/1)得白色固體(8)0.4g，收率50％，mp138-139℃。Anal(C12H18N3O2SI；C％，H％，N％)Req36.46，4.56，10.63；Found 36.55，4.60，10.43IR(cm-1)3300，1620，1600，1500，1300，800.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ1.31(t，3H)，2.85-3.30(m，7H)，3.78(t，2H)，7.56(d，2H)，8.15(d，2H)，9.0(br，2H).MS(SCI m/z)268(M+1)例3S-乙基-1-甲基-3-芐基異硫脲鹽酸鹽(12)的制備1-甲基-3-芐基硫脲(12a)將芐胺5g(46.6mmol)溶于無水乙醇30ml中，加入例2方法制備的(8b)5.1g(70mmol)，回流3小時，減壓濃縮后，加適量石油醚/乙酸乙酯，冷卻析晶，抽濾，得白色晶體(12a)6.4g，收率76.2％，mp76-78℃。
以(12a)為原料，類似(8)的方法，得黃色油狀物。將該黃色油狀物溶于水，用碳酸鉀水溶液調(diào)pH11，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物溶于丙酮，滴加飽和氯化氫無水乙醇溶液至pH2左右，再次減壓濃縮，殘留物以CHCl3/CH3OH為洗脫劑，快速柱層析，減壓濃縮得無色油狀物，冷后固化，得(12)，mp85-87℃Anal(C11H16N2S.HCl.H2O；C％，H％，N％)Req50.27，7.29，10.66；Found 50.11，7.55，10.97.IR(cm-1)3300，1620，1600，1500.1HNMR(90MHz，CDCl3)δ1.23(t，3H)，3.12(s，3H)，3.29(q，2H)，4.69(s，2H)，7.1-7.6(m，5H，ArH)，8.63(br，2H).MS(SCI m/z)209(M+1)例4S-乙基-1-甲基-3-(3，4-亞甲二氧基)苯乙基異硫脲氫碘酸鹽(14)的制備1-甲基-3-(3’，4’-亞甲二氧基)苯乙基硫脲(14a)以3，4-亞甲二氧基苯乙胺為原料，類似(12a)的方法，濃縮得橘紅色液體。以石油醚/乙酸乙酯為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，得黃色固體(14a)，mp88-90℃。
以(14a)為原料，類似例2制備(8)的方法，得黃色油狀物，放置后凝固為固體。以氯仿/乙酸乙酯/甲醇為洗脫劑，柱層析分離得(14)，mp166-167℃Anal(C13H18N2O2S.HI；C％，H％，N％)Req 39.60，4.86，7.11.Found 40.05，5.04，7.06.IR(cm-1)3200，1620，1600，1500，12501HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ1.29(t，3H)，2.85(t，2H)，2.98(d，3H)，3.19(q，2H)，3.55(t，2H)，5.96(s，2H)，6.6-6.9(m，3H)，8.80(br，1H)，9.10(br，1H).MS(SCI m/z)267(M+1)例5N-(3，4-亞甲二氧基)苯乙基胍硫酸鹽(15)的制備S-甲基異硫脲硫酸鹽(15a)將硫脲30g(394mmol)溶于水15ml中，慢慢滴入硫酸二甲酯6.8g(539mmol)，升溫至回流，反應(yīng)3小時，放置過夜，過濾，晶體用95％乙醇洗滌，得白色晶體(15a)41g，收率84.5％，mp234℃將(15a)1.2g(8.62mmol)溶于50％乙醇20ml中，加入3，4-亞甲二氧基苯乙胺1.2g(7.26mmol)，回流6小時，濃縮得白色固體，用乙醇-水重結(jié)晶，得白色晶體。mp＞255℃Anal(C10H13N3O2.1/2H2SO4.H2O；C％，H％，N％)Req 43.79，5.88，15.32，F(xiàn)ound44.04，5.74，15.06IR(cm-1)3300，1660，1630，1600，1500，1250.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δppm 2.70(t，2H)，3.23(t，2H)，5.92(s，2H)，6.70-6.85(m，3H)，7.71(br，4H)，8.55(br，1H)MS(ES(+)70V，m/z)208[M+H]+；例6N-對硝基苯乙基胍硫酸鹽(16)的制備將用例5方法制備的(15a)7g(50mmol)溶于50％乙醇100ml中，加入對硝基苯乙胺(8a)7g(42mmol)，回流6小時，濃縮得淡黃色固體，用乙醇-水重結(jié)晶，得白色晶體(16)5.8g，收率53.5％，mp215-217℃。Anal(C9H12N4O2.1/2H2SO4；C％，H％，N％)Req42.02，5.09，21.78；Found 41.86，5.21，21.52IR(cm-1)3418，3131，1668，1640，1605，1515，1510，1346，1110，8531HNMR(90MHz，DMSO-d6)δ2.85(t，2H)，3.30(t，2H)，7.53(d，2H)，7.74(br，4H)，8.03(d，2H)，8.64(br，1H).MS(ES(+)70V，m/z)209[M+H]+；
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1表示氫、鹵素、3，4-亞甲二氧基或硝基；R2表示氫或C1-4的烷基；R3表示C1-4的烷硫基、氨基或C1-4的烷氨基；n＝1-5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R2表示氫或甲基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于R3表示甲硫基或乙硫基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于R1表示3，4-亞甲二氧基，R2表示氫，R3表示氨基。
5.通式(I)化合物的制備方法，其特征在于當(dāng)R2為氫、R3為烷硫基、烷胺基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與異硫氰酸苯甲酰酯反應(yīng)，得中間體1-苯甲?；?3-苯烷基硫脲，在堿性水溶液中加熱水解，得中間體N-苯烷基硫脲，再與鹵代烷反應(yīng)得到R3為烷硫基的產(chǎn)物該產(chǎn)物再與烷基胺反應(yīng)，得到R3為烷胺基的產(chǎn)物； 當(dāng)R2為烷基，R3為烷硫基、氨基或烷胺基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與異硫氰酸烴基酯在丙酮或C1-4醇或乙腈或N，N-二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑中反應(yīng)，得中間體1-烴基-3-苯烷基硫脲，再與鹵代烷反應(yīng)得到R3為烷硫基的產(chǎn)物；該產(chǎn)物再與氨或烷基胺反應(yīng)，得到R3為氨基或烷胺基的產(chǎn)物；當(dāng)R2為氫，R3為氨基時，制備方法包括以下步驟將通式(II)的化合物與S-烷基異硫脲反應(yīng)，反應(yīng)溶劑可以是C1-4的有機(jī)醇或乙腈或DMF或它們與水組成的混合液。
6.通式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防或治療與NO合酶抑制劑有關(guān)的臨床疾病的藥物中的用途。
7.按照權(quán)利要求6的方法，其中所述臨床疾病選自敗血性休克、腸炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、大腦缺血損傷、早老性癡呆。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的通式為(I)的化合物,其中R
文檔編號A61P9/10GK1388118SQ0211318
公開日2003年1月1日 申請日期2002年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月18日
發(fā)明者徐云根, 張敬新, 華維一, 朱東亞 申請人:中國藥科大學(xué)