專利名稱：含多胺作為活性物質(zhì)的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含多胺作為活性物質(zhì)的藥物以及多胺用于生產(chǎn)免疫刺激藥物和/或作為治療和/或預(yù)防各種人和動(dòng)物疾病之藥物的用途。
在相當(dāng)長時(shí)間的獸醫(yī)實(shí)踐中，一直將誘導(dǎo)“旁特異性免疫”的產(chǎn)物-稱為免疫刺激劑或者旁免疫誘導(dǎo)劑用于治療、病后調(diào)養(yǎng)和預(yù)防。例如，免疫刺激劑可以由化學(xué)滅活的Parapoxvirus ovis，strain D1701(DE-A 3504940)組成。BAYPAMUN是以這種病毒為基礎(chǔ)制備的產(chǎn)品。
在動(dòng)物中，滅活的副痘病毒誘導(dǎo)針對(duì)各種病原體引起之感染的非特異性保護(hù)。因此認(rèn)為身體自身防御系統(tǒng)的各種機(jī)制是造成這種保護(hù)作用的原因。
這些機(jī)制包括干擾素的誘導(dǎo)，天然殺傷細(xì)胞的激活，“集落-刺激活性”(CSA)的誘導(dǎo)以及淋巴細(xì)胞增殖的刺激作用。早期對(duì)作用機(jī)制的研究表明白細(xì)胞介素2和α干擾素受到刺激(Steinmassl & Wolf，1990)。
另外，可以用免疫刺激劑例如未甲基化的含CpG的寡核苷酸(WO98/18810)激活非適應(yīng)性免疫系統(tǒng)并增強(qiáng)身體對(duì)疾病病原體的抵抗能力。已經(jīng)可以在不同小鼠模型中實(shí)驗(yàn)性地表明一次給藥可以激活初始免疫反應(yīng)并防止各種病原體感染，例如李斯特菌屬單細(xì)胞基因(Elkinset al.，1999；Krieg et al.，1998；Oxenius et al.，1999)，F(xiàn)rancisella tularensis(Elkins et al.，1999)，利什曼原蟲(Walker et al.，1999；Zimmermann et al.，1998)，炭疽，埃博拉(ebola)和瘧疾(Krieg，2000；Klinman et al.，1999)。
在作用機(jī)制的分析過程中，可以表明鼠B細(xì)胞、巨嗜細(xì)胞、樹突細(xì)胞和NK細(xì)胞都被含CpG的寡核苷酸所刺激。另外，誘導(dǎo)了細(xì)胞因子IL-18、IL-12和γ干擾素(Krieg，2000)。
本發(fā)明的目的是提供含新免疫刺激劑的藥物，所述免疫刺激劑盡管與Parapox ovis有相似的活性，但是可經(jīng)化學(xué)合成，因此可便宜地生產(chǎn)，并更容易與化學(xué)治療劑組合。
通過提供含多胺作為活性物質(zhì)的藥物可達(dá)到所述目的。
作為活性物質(zhì)的多胺含有至少10個(gè)單體單位或者至少10個(gè)氮原子，優(yōu)選至少45個(gè)單體單位或者至少45個(gè)氮原子。
所述多胺可以是線性或者分枝的。
所述多胺優(yōu)選可溶于水或者可分散在水中；取決于pH的部分質(zhì)子化作用發(fā)生在含水介質(zhì)中?？赏ㄟ^物理化學(xué)測量法例如ξ潛能測量法(potential measurements)測定質(zhì)子化程度。
此外，還優(yōu)選所述多胺具有疏水取代基。
所述疏水取代基可以在所述聚合物中作為側(cè)鏈或者末端。取代程度(在主聚合物鏈中功能化N原子的百分比)優(yōu)選為0.01-10％。
適宜的疏水取代基特別是烷基鏈、酰基鏈或類固醇樣取代基。?；?zhǔn)翘貏e適宜的疏水取代基。通過將主聚合物鏈的氮功能加成到異氰酸酯或者α，β-不飽和羰基化合物而引入的疏水取代基也是適宜的。
特別優(yōu)選的多胺是聚乙烯亞胺。
優(yōu)選可用于生產(chǎn)所述藥物的聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示有1-23個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選有12-23個(gè)碳原子的烷基，特別優(yōu)選有17個(gè)碳原子的烷基，而且其中R3和R4(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫和1-24個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選13-24個(gè)碳原子的烷基，特別優(yōu)選18個(gè)碳原子的烷基，或者具有取決于引發(fā)劑(initiator)的結(jié)構(gòu)，R5(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，例如羥基、NH2、NHR或NR2，而且其中的R可以對(duì)應(yīng)于末端基團(tuán)R3和R4，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.05，特別優(yōu)選a＝0.03。
就此而言，單位m和n不是嵌段結(jié)構(gòu)，而是隨機(jī)分布在聚合物中。
可優(yōu)選用于生產(chǎn)所述藥物的另一種聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示有1-22個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選有11-22個(gè)碳原子的烷基，特別優(yōu)選有16個(gè)碳原子的烷基，而且其中R3和R4(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫和1-24個(gè)碳原子的?；?，優(yōu)選13-24個(gè)碳原子的酰基，特別優(yōu)選18個(gè)碳原子的?；?，或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R6(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，例如羥基、NH2、NHR或NR2，而且其中的R可以對(duì)應(yīng)于末端基團(tuán)R3和R4，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.05，特別優(yōu)選a＝0.03。
就此而言，單位m和n不是嵌段結(jié)構(gòu)，而是隨機(jī)分布在聚合物中。
可優(yōu)選用于生產(chǎn)所述藥物的另一種聚乙烯亞胺具有下列通式
其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1、R2和R3表示氫或羥基，而且其中R4和R5(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫或者類固醇母體物質(zhì)，例如膽汁酸，或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R6(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，例如羥基、NH2、NHR或NR2，而且其中的R可以對(duì)應(yīng)于末端基團(tuán)R4和R5，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.05，特別優(yōu)選a＝0.03。
就此而言，包括具有類固醇骨架鏈的所有類固醇異構(gòu)體。特別是，R1、R2和R3取代基可以為α構(gòu)象和β構(gòu)象。以同樣的方式，5位的取代基可以為α構(gòu)象和β構(gòu)象(根據(jù)Rmpp-Chemielexikon，9thedition，Georg Thieme Verlag，1992命名法)。
就此而言，單位m和n不是嵌段結(jié)構(gòu)，而是隨機(jī)分布在聚合物中。
可優(yōu)選用于生產(chǎn)所述藥物的另一種聚乙烯亞胺具有下列通式
其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示OR4或NR4R5，而且R4和R5(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫或者具有1-24個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選13-24個(gè)碳源中的烷基，特別優(yōu)選18個(gè)碳原子的烷基，而且其中R2和R3(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地相應(yīng)于主聚合物鏈氮原子的取代基或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R6(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，例如羥基、NH2、NHR或NR2，而且其中的R可以對(duì)應(yīng)于末端基團(tuán)R2和R3，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.05，特別優(yōu)選a＝0.03。
就此而言，單位m和n不是嵌段結(jié)構(gòu)，而是隨機(jī)分布在聚合物中。
可優(yōu)選用于生產(chǎn)所述藥物的另一種聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示有1-24個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選13-24個(gè)碳源中的烷基，特別優(yōu)選18個(gè)碳原子的烷基，
而且其中R2和R3(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地相應(yīng)于主聚合物鏈氮原子的取代基或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R4(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，例如羥基、NH2、NHR或NR2，而且其中的R可以對(duì)應(yīng)于末端基團(tuán)R2和R3，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.05，特別優(yōu)選a＝0.03。
就此而言，單位m和n不是嵌段結(jié)構(gòu)，而是隨機(jī)分布在聚合物中。
可優(yōu)選用于生產(chǎn)所述藥物的另一種聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R可以是氫或者下式的基團(tuán) 其中Rx可以是氫或再次又是類型R的基團(tuán)，且其中每個(gè)[CH2-CH2-N]單位和末端基團(tuán)可攜帶上述取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，優(yōu)選250至2250，特別優(yōu)選500至2050，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，優(yōu)選0.01＜a＜0.0 5，特別優(yōu)選a＝0.03。這些聚乙烯亞胺具有分枝或交聯(lián)結(jié)構(gòu)。
所述聚合物的平均分子量優(yōu)選低于220000g/mol，特別優(yōu)選分子量為2000至100000g/mol，極為優(yōu)選分子量為20000至100000g/mol。
在聚合物類似反應(yīng)，例如通過鹵代鏈烷的烷基化、碳酰氯的?；⒒钚怎サ孽；?、與α，β-不飽和羰基化合物(羧酸、羧酰胺、羧酸酯)的Michael加成反應(yīng)或者與異氰酸酯的加成反應(yīng)中引入疏水基。這些是可從文獻(xiàn)中獲知的反應(yīng)類型(March，1992)。
用陽離子引發(fā)劑，優(yōu)選按照B.L.Rivas和S.I.Ananias(1992)的方法，通過2-乙基噁唑啉的陽離子開環(huán)聚合反應(yīng)制備線性聚乙烯亞胺?？蓪⒂眠@種方法得到的聚(乙基噁唑啉)用濃鹽酸和水組成的混合物，優(yōu)選濃鹽酸和水的1∶1混合物處理除去丙酸定量轉(zhuǎn)變成線性聚乙烯亞胺。反應(yīng)溫度優(yōu)選為80-100℃，特別優(yōu)選100℃。反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為12-30小時(shí)，特別優(yōu)選24小時(shí)。優(yōu)選通過從乙醇中重結(jié)晶數(shù)次純化所述產(chǎn)物。
可用已描述的方法制備所需分子量為2000至220000g/mol的線性聚乙烯亞胺。
例如，在40-75℃，優(yōu)選60℃，通過將適宜線性聚乙烯亞胺的5％溶液與十八烷基氯在無水乙醇中反應(yīng)引入烷基，例如C18-烷基。將計(jì)量的烷基氯的數(shù)量精確調(diào)整到所需的取代程度(0.1-10％)。反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10-24小時(shí)，特別優(yōu)選17小時(shí)。
例如，在40-60℃，優(yōu)選50℃，通過將適宜線性聚乙烯亞胺的5％溶液與十八烷酰氯在無水乙醇中反應(yīng)引入酰基，例如C18-?；⒂?jì)量的酰氯的數(shù)量精確調(diào)整到所需的取代程度(0.1-10％)。反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10-24小時(shí)，特別優(yōu)選20小時(shí)。
還用活性酯引入酰基，使用經(jīng)N-羥基琥珀酰亞胺活化的羧酸衍生物。當(dāng)膽汁酸功能化聚乙烯亞胺時(shí)，優(yōu)選使用此方法。為此，將膽汁酸衍生物鵝脫氧膽酸(3α，7α-二羥-5β-膽甾烷酸)，在下文用縮寫CDC代替，例如與以二甲氧基乙烷為溶劑的N-羥基琥珀酰亞胺并存在二環(huán)己基碳二亞胺的條件下反應(yīng)。所述反應(yīng)在室溫下完成，反應(yīng)時(shí)間為16小時(shí)。將用此方法制備的性性酯與5％的適宜線性聚乙烯亞胺在無水乙醇中的溶液反應(yīng)。將計(jì)量的性性酯的數(shù)量精確到所需的取代程度(0.1-10％)。反應(yīng)溫度為20-60℃，優(yōu)選50℃。反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10-24小時(shí)，特別優(yōu)選20小時(shí)。
文獻(xiàn)(Walker et al.，1998)中描述了用活性酯法例如將鵝脫氧膽酸引入寡胺例如精胺或者五亞乙基六胺中。本發(fā)明膽汁酸取代的聚合物具有疏水取代基，所以可用羥基數(shù)目控制疏水度，與S.Walker etal.所述“陽離子表面親水脂分子”(cationic facial amphiphiles)中的方法類似。
通過將多胺，特別使疏水聚乙烯亞胺在pH7溶解于水中，濃度為0.1-1mg/ml，優(yōu)選0.5mg/ml，然后通過Sephadex柱色譜純化，隨后凍干來制備高度純化的樣品。然后將所述聚合物再次溶解于水，優(yōu)選生理氯化鈉溶液中，同時(shí)進(jìn)行短暫聲處理，然后將pH調(diào)整到7。多胺或聚乙烯亞胺儲(chǔ)備液的濃度優(yōu)選為0.1-1mg/ml，尤其優(yōu)選0.5mg/ml。所述儲(chǔ)備液在室溫下貯存時(shí)穩(wěn)定；優(yōu)選貯存于4℃。
可以用標(biāo)準(zhǔn)方法，例如1H NMR光譜、FT-IR光譜或ξ潛能測量法表征所述陽離子聚合物。
還可將可用于生產(chǎn)所述藥物的多胺與細(xì)胞特異性的配體結(jié)合。所述細(xì)胞特異性配體例如可以是構(gòu)成性的，以致它們與靶細(xì)胞，優(yōu)選動(dòng)物或人靶細(xì)胞的外膜結(jié)合。所述靶細(xì)胞例如可以是內(nèi)皮細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、造血細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞，例如白血病細(xì)胞、病毒感染的細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞或肝細(xì)胞，例如肝的竇細(xì)胞。特異性與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如內(nèi)皮細(xì)胞的單克隆抗體或其片段、攜帶末端甘露糖的糖蛋白、糖脂或多糖、細(xì)胞因子、生長因子或者粘附分子，或者在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，選自有內(nèi)皮細(xì)胞趨性的病毒被膜的糖蛋白。與平滑肌細(xì)胞特異性結(jié)合的配體可選自例如肌動(dòng)蛋白特異性的單克隆抗體或其片段、細(xì)胞膜受體和生長因子，或者在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，選自具有平滑肌細(xì)胞趨性的病毒被膜衍生的糖蛋白。特異性與巨噬細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如巨噬細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞上膜抗原特異性的單克隆抗體、巨噬細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞上膜抗原特異性的多克隆或單克隆抗體的完整免疫球蛋白或Fc片段、細(xì)胞因子、生長因子、攜帶末端甘露糖的肽、蛋白質(zhì)、脂或多糖，或者在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，選自病毒被膜衍生的糖蛋白，特別是在核苷酸872位有突變的流感病毒C的HEF蛋白或者含催化三聯(lián)體絲氨酸71、組氨酸368或369和天冬氨酸261的C流感病毒HEF裂解產(chǎn)物。特異性與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合的抗體和抗體片段、粘附分子、攜帶末端甘露糖的肽、蛋白質(zhì)、脂或多糖、生長因子，或者在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，選自具有膽汁細(xì)胞趨性的病毒被膜衍生的糖蛋白。特異性與造血細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如干細(xì)胞因子受體特異性的抗體或抗體片段、IL-1(特別是I或II型受體)、IL-3(特別是α或β型受體)、IL-6或GM-CSF，以及具有上述特異性的完整免疫球蛋白或者Fc片段和與附屬的受體結(jié)合的生長因子例如SCF、IL-1、IL-3、IL-6或GM-CSF及其片段。特異性結(jié)合白血病細(xì)胞的配體可選自與白血病細(xì)胞上膜結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合的抗體、抗體片段、免疫球蛋白或Fc片段，例如CD13、CD14、CD15、CD33、CAMAL、sialosyl-Le、CD5、CD1e、CD23、M38、IL-2受體，T細(xì)胞受體、CALLA或者CD19，生長因子或其片段，或類維生素A。特異性與病毒感染的細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如病毒抗原特異性的抗體、抗體片段、完整免疫球蛋白或Fc片段，所述病毒抗原是在病毒感染后，在受感染細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)的。特異性與支氣管上皮細(xì)胞、肝竇細(xì)胞或肝細(xì)胞結(jié)合的配體可選自例如轉(zhuǎn)鐵蛋白、脫唾液酸糖蛋白，例如脫唾液酸血清類粘蛋白、新糖蛋白(neoglycoprotein)或者半乳糖、胰島素、攜帶末端甘露糖的肽、蛋白質(zhì)、脂或多糖、與靶細(xì)胞特異性結(jié)合的完整免疫球蛋白或Fc片段，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，可選自以特性結(jié)合靶細(xì)胞的病毒被膜衍生的糖蛋白。配體的其他詳細(xì)實(shí)施例公開于例如EP-A 0790312和EP-A 0846772中。
一般來說，本發(fā)明的藥物每劑量含0.5-500mg多胺作為活性物質(zhì)，優(yōu)選每劑量20-100mg。
除作為活性物質(zhì)的多胺外，本發(fā)明藥物還含有其他藥物學(xué)活性化合物，例如Parapox ovis(例如BAYPAMUN形式)、Parapox ovis片段、含CpG-的寡核苷酸、抗生素和細(xì)胞生長抑制劑。
在將上述多胺純化或凍干后，可用于生產(chǎn)本發(fā)明藥物的多胺或者本發(fā)明藥物本身，優(yōu)選為固體形式，可在給藥即前，將其溶解于適宜的含水介質(zhì)，優(yōu)選生理氯化鈉溶液中，或者在分散在含水介質(zhì)，優(yōu)選生理氯化鈉溶液中后，任選地與添加劑混合后以適宜的制劑直接給藥。
適宜的其他制劑輔料是生物可相容性和生物可降解的聚合物例如聚交酯、聚交酯乙交酯共聚物、聚丙烯酸酯、聚原酸酯、聚酐、聚酰胺、聚氨基酸、纖維素衍生物、淀粉衍生物或者殼聚糖衍生物。
根據(jù)臨床問題，要么全身施用(例如經(jīng)口、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或者靜脈內(nèi))或者局部施用(例如至有關(guān)器官)所述基于多胺的藥物。
根據(jù)相應(yīng)臨床之問題的時(shí)間表，可以數(shù)次或長期治療。
由于其免疫刺激、抗炎和抗細(xì)胞程序死亡(antiapoptotic)效果(細(xì)胞因子誘導(dǎo)，抗炎與抗細(xì)胞程序死亡因子的過表達(dá))，可以用多胺治療下列疾病/損傷或者用于預(yù)防/病后調(diào)養(yǎng)下列疾病·病毒感染基于已知的Th1免疫反應(yīng)對(duì)潛伏期、慢性、持續(xù)病毒感染之影響(Lucin et al.，1994；Smith et al.，1994)與多胺之效果的聯(lián)系，多胺的效果可與免疫刺激劑Parapox ovis的效果相媲美，因此，多胺具有治療價(jià)值，可用多胺作為單治療劑或者與生物活性的例如抗病毒的低分子量化合物結(jié)合，用于人和動(dòng)物中針對(duì)乙型肝炎、丙型肝炎或致肝炎的病毒類的任何其他病原體的抗病毒治療，另外，還可用于內(nèi)部器官的其他病毒感染、包括伴隨其他疾病的由不同類型單純皰疹病毒(HSV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、人免疫缺陷型病毒(HIV)和人巨細(xì)胞病毒(HCMV)的其他感染，以及動(dòng)物中相應(yīng)病毒疾病的抗病毒治療。
·急性或慢性呼吸道和內(nèi)部器官的病毒感染·由于壓力或手術(shù)或牙病治療后引起的感染·細(xì)菌感染，特別是細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染·癌癥，腫瘤·器官纖維化，特別是病毒型肝炎或者乙醇誘發(fā)的肝疾病后引起的肝纖維化或者肝硬變，以及囊腫纖維化·可以治療伴隨有膠原蛋白沉積增加的疾病，所述沉積增加與內(nèi)部器官，例如肝，以及皮膚和其附件都有關(guān)·內(nèi)部器官、皮膚、血液或者中樞神經(jīng)系統(tǒng)及其附件，包括眼睛的炎癥、退化性和增殖性疾病·過敏性疾病，特別是用于預(yù)防全身性過敏的發(fā)作或者用于局部過敏或哮喘。
還可用所述多胺作為佐劑。
實(shí)施例實(shí)施例1合成線性聚乙烯亞胺(LPEI)通過2-乙基噁唑啉的陽離子開環(huán)聚合作用得到聚(乙基噁唑啉)(與Rivas & Ananias，1992的方法類似)，然后酸水解，除去丙酸，合成線性聚乙烯亞胺。還可從市場上購買特定的前體聚合物聚(乙基噁唑啉)(Sigma-Aldrich Chemie GmbH，Germany)。用凝膠滲透層析、1H-NMR和FT-IR表征前體聚合物。
100℃，在40ml水和40ml濃鹽酸組成的混合物中，通過反應(yīng)例如24.7g聚(乙基噁唑啉)(Mw 200000g/mol)進(jìn)行定量水解。24小時(shí)后，加入250ml水溶解已形成的大部分沉淀。冷卻到20℃后，通過加入20％NaOH將pH調(diào)整到11，然后沉淀。抽氣和洗滌(洗滌水，pH7)過濾掉沉淀后，在高度真空下，用五氧化二磷干燥。然后從乙醇中重結(jié)晶粗產(chǎn)物(產(chǎn)率9.5g/88％)。用Millipore水作為洗脫劑，使聚乙烯亞胺飽和水溶液(pH7)經(jīng)Sephadex G25(Pharmaciadisposable PD-10脫鹽柱)柱色譜，得到高純度產(chǎn)品(毫克量)，隨后凍干。
通過1H-NMR和FT-IR表征所述線性聚乙烯亞胺，由此可確定水解是定量的。
實(shí)施例2合成疏水功能化線性聚乙烯亞胺(H-LPEIs)，作為3mol％C18烷基引入分子量為87000g/mol LPEI的例子為此，60℃，在氬氣下，將0.5g LPEI溶解于10ml乙醇中，緩慢加入0.11g(0.13ml)十八烷基氯后，將混合物攪拌17小時(shí)。在20℃，通過加入20ml水沉淀反應(yīng)產(chǎn)物，然后濾掉沉淀，用水洗滌(洗滌水，pH7)，在高度真空下，用五氧化二磷干燥(產(chǎn)率0.48g/96％)。用Millipore水作為洗脫劑，使聚乙烯亞胺飽和水溶液(pH7)經(jīng)Sephadex G25(Pharmacia disposable PD-10脫鹽柱)柱色譜，得到高純度產(chǎn)品(毫克量)，隨后凍干。
通過1H-NMR和FT-IR表征所述烷基化的線性聚乙烯亞胺，由此可確定得到所需程度的烷基化。
實(shí)施例3合成疏水功能化線性聚乙烯亞胺(H-LPEIs)，作為3mol％C18?；敕肿恿繛?7000g/mol LPEI的例子
為此，50℃，在氬氣下，將0.5g LPEI溶解于10ml乙醇中，緩慢加入0.11g(0.12ml)十八烷酰氯后，將混合物攪拌20小時(shí)。過濾后，真空下定量弄碎反應(yīng)混合物。將殘留物溶解于4ml熱乙醇中，然后在20℃，通過加入8ml水沉淀。濾掉沉淀，用水洗滌(洗滌水，pH7)，在高度真空下，用五氧化二磷干燥(產(chǎn)率0.38g/76％)。用Millipore水作為洗脫劑，使聚乙烯亞胺飽和水溶液(pH7)經(jīng)SephadexG25(Pharmacia disposable PD-10脫鹽柱)柱色譜，得到高純度產(chǎn)品(毫克量)，隨后凍干。
通過1H-NMR和FT-IR表征所述?；木€性聚乙烯亞胺，由此可確定得到所需程度的?；?br> 實(shí)施例4合成疏水功能化線性聚乙烯亞胺(H-LPEIs)，作為3mol％鵝脫氧膽酸(CDC)基團(tuán)(3α，7α-二羥-5β-膽甾烷酸)引入分子量為87000g/molLPEI的例子為此，用N-羥基琥珀酰亞胺將鵝脫氧膽酸(Sigma-Aldrich ChemieGmbH)轉(zhuǎn)變成活性酯化合物。將1g鵝脫氧膽酸和0.32g N-羥基琥珀酰亞胺溶解于5ml二甲氧基乙烷，然后在0-5℃與0.63g二環(huán)己基碳二亞胺反應(yīng)。將反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，然后過濾掉沉淀，將濾液真空下濃縮。高度真空下干燥所述活性酯(穩(wěn)定的泡沫)，然后用1H-NMR表征。無需任何進(jìn)一步純化，室溫和氬氣下，將179mg鵝脫氧膽酸活酯加入到0.5g LPEI在10ml乙醇中的溶液中。將反應(yīng)混合物在50℃攪拌20小時(shí)。將混合物冷卻到室溫后，加入25ml水沉淀產(chǎn)物。濾掉殘留物，用水洗滌(洗滌水，pH7)，在高度真空下，用五氧化二磷干燥(產(chǎn)率0.41g/82％)。用Millipore水作為洗脫劑，使聚乙烯亞胺飽和水溶液(pH7)經(jīng)Sephadex G25(Pharmacia disposable PD-10脫鹽柱)柱色譜，得到高純度產(chǎn)品(毫克量)，隨后凍干。
通過1H-NMR和FT-IR表征已用活性酯法?；δ芑乃鼍€性聚乙烯亞胺，由此可確定得到所需程度的?；?。
實(shí)施例5ξ潛能測量法在水溶液中，于生理pH下，完成潛能測量法以確定線性聚乙烯亞胺以及疏水功能化聚乙烯亞胺的電荷或者質(zhì)子化程度。發(fā)現(xiàn)獨(dú)立于平均分子量和獨(dú)立于聚合物類型，平均質(zhì)子化程度在pH7為50％，即在pH7水溶液中，約50％氮原子被質(zhì)子化。
實(shí)施例6用pH7的生理氯化鈉溶液制備所有聚乙烯亞胺(LPEIs，H-LPEIs)的儲(chǔ)備液，聚乙烯亞胺的濃度均為0.5mg/ml。為此，將25mg LPEI或H-LPEI溶解于30ml水或生理氯化鈉溶液，同時(shí)加熱并進(jìn)行簡短聲處理；然后用0.1N HCl將所得溶液的pH調(diào)至7，使終體積為50ml。通過過濾(0.2μm)將儲(chǔ)備液滅菌，然后于20℃長期儲(chǔ)存。
為了證實(shí)多胺、特別是聚乙烯亞胺作為免疫治療劑的適宜性，在體內(nèi)確定多胺的γ干擾素刺激作用，然后證實(shí)多胺的體內(nèi)效力。
1.在小鼠脾細(xì)胞檢測中誘導(dǎo)γ干擾素a)動(dòng)物管理在試驗(yàn)開始前8天，從Charles River公司(Sulzfeld，Germany)獲得NMRI小鼠(遠(yuǎn)系繁殖的，雌性，18-20克重)。動(dòng)物可自由接近食物和水，并飼養(yǎng)在人工的白天/黑夜節(jié)律下(07:00-19:00光照，19:00-07:00為黑夜)。
b)制備小鼠脾細(xì)胞通過頸脫臼殺死動(dòng)物，然后取出脾。從脾中除去連接的結(jié)締組織，然后按照下列方法整理將脾鋪在(平皿)金屬篩(篩網(wǎng)寬度約70μm)上，然后用剪刀弄碎。然后加入5ml PBS，用玻璃杵將組織碎片壓過篩網(wǎng)。隨后，用PBS將篩網(wǎng)漂洗數(shù)次，此后，將在共50ml PBS中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到Falcon試管中，以300xg離心10分鐘。棄去上清液，將細(xì)胞重懸在20毫升PBS中，再以300xg離心10分鐘。將細(xì)胞重懸在5-10毫升介質(zhì)中后，確定細(xì)胞計(jì)數(shù)，用介質(zhì)調(diào)整到2.5×106細(xì)胞/ml。
c)刺激小鼠脾細(xì)胞在37℃，5％二氧化碳下，在24孔平板的1毫升體積內(nèi)刺激72小時(shí)。在總體積為1毫升的溶液(0.8ml介質(zhì)RPMI，10％FCS，1％青霉素/鏈霉素)中刺激2×106個(gè)脾細(xì)胞。根據(jù)刺激劑的數(shù)量，每個(gè)檢測試驗(yàn)混合下列組分800微升含2.5×106細(xì)胞/ml的介質(zhì)100微升刺激劑(聚乙烯亞胺，0.5mg/ml)100微升PBS所有脾細(xì)胞刺激均以一式兩份完成。
刺激結(jié)束后，將上清液轉(zhuǎn)移到1.5ml反應(yīng)試管中，將剩余的細(xì)胞通過以300xg離心10分鐘分開。取出無細(xì)胞上清液，然后于-20℃儲(chǔ)存至用ELISA測量γ干擾素時(shí)。
d)測量γ干擾素濃度用小鼠γ干擾素OptEIA-ELISA套盒(Pharmingen，Heidelberg，Germany)，按照制造商的說明，確定刺激上清液中γ干擾素的濃度。
結(jié)果列于

圖1在小鼠脾細(xì)胞檢測中，檢測的聚乙烯亞胺表明有顯著的γ干擾素誘導(dǎo)作用。
2.體內(nèi)誘導(dǎo)γ干擾素a)小鼠管理20-22℃，將NMRI小鼠(HdsWinNMRI遠(yuǎn)系繁殖的，雌性，18-20克重，從Harlan/Winkelmann，Borchen，Germany獲得)保持在能經(jīng)受住壓熱器作用的木削線聚碳酸酯盒中，放在S2分離畜棚(空氣濕度為50-60％)，處于在人工的白天/黑夜節(jié)律下(06:30-18:30光照，18:30-06:30為黑夜)。動(dòng)物可以自由接近食物和水。
b)完成試驗(yàn)將動(dòng)物隨機(jī)分成各6只的兩組。在其到達(dá)后，將小鼠在籠中保持3天，無需任何進(jìn)一步處理。
將0.2ml待分析的物質(zhì)腹膜內(nèi)給藥。完成下列處理方案1組安慰劑PBS
2組聚乙烯亞胺，H-LPEI，分子量(Mw)87000，C18?；?，3mol％，按照實(shí)施例3(0.1mg/小鼠)。
處理9小時(shí)后，殺死小鼠，用5毫升冰冷的PBS漂洗腹，得到腹膜細(xì)胞。
離心(16000xg，30秒，室溫)濃縮細(xì)胞，此后，倒出上清液，用NucleoSpin RNA II試劑盒(Machery-Nagel，Düren，Germany)提取細(xì)胞中的總RNA。
為此，將細(xì)胞顆粒重懸在400微升RA1緩沖液(得自NucleoSpinRNA II試劑盒)中，然后冷凍于-80℃。在37℃融化后，為了降低其粘度，將混合物負(fù)載到NucleoSpin過濾器上，離心1分鐘(16000xg，室溫)。將300微升乙醇加入到濾液中，然后將混合物負(fù)載到NucleoSpin RNA柱上。離心(8000xg，30秒)后，取出上清液，使柱離心干燥(16000xg，1分鐘)，用DNase I裂解DNA。為此，將90微升DNase反應(yīng)緩沖液與10微升DNase I(均得自NucleoSpin RNA II試劑盒)混合，將95微升此溶液加到干燥濾紙上。保溫15分鐘(室溫)后，將濾紙先用500微升RA2洗滌，然后用600微升RA3，隨后用250微升RA3(得自NucleoSpin RNA II試劑盒)洗滌。為了完成洗滌，使用洗滌緩沖液，每次將柱以8000xg離心30秒，最后的洗滌步驟后，以16000xg離心2分鐘。此后，用60微升無RNase蒸餾水洗脫RNA(16000xg，1分鐘)。
用分光法測量RNA的量。
用隨機(jī)六聚體(Random Hexamers)作為聚合酶反應(yīng)的引物，通過反轉(zhuǎn)錄RNA合成cDNA。就此而言，使用TaqMan反轉(zhuǎn)錄試劑(AppliedBiosystems，Weiterstadt，Germany)。用100微升完成合成。
合成混合物的組成如下·1300-1500微克RNA·10微升RT緩沖液(10x)·22微升MgCl2(25mM)·5微升隨機(jī)六聚體·2.5微升MultiScribe RT·2微升RNase抑制劑·20微升dNTP
·無RNase水(使總體積為100微升)將混合物在GeneAmp 2400 Thermocycler(Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)中保溫，開始在25℃10分鐘，然后48℃30分鐘；然后冷卻到4℃。將用此方法合成的cDNA于-20℃儲(chǔ)存。
用ABI PRISM5700(Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)完成定量PCR。將鼠γ干擾素(Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)PDAR試劑盒(預(yù)發(fā)展的TaqMan檢測試劑)用于此目的。
借助管家(housekeeping)基因(18S RNA)，“內(nèi)源控制核糖體RNA對(duì)照(18S RNA)”用PDAR試劑盒使cDNA的量標(biāo)準(zhǔn)化。
用校對(duì)的cDNA標(biāo)準(zhǔn)化并計(jì)算誘導(dǎo)作用。該cDNA由來自11個(gè)不同小鼠的cDNA混合物組成，按照組1處理。
在每種情況下，均用50微升完成擴(kuò)增，其組成如下內(nèi)源18 S RNA對(duì)照·1ng cDNA·25微升2x TaqMan Universal PCR Master Mix·2.5微升18S RNA·無RNase水(使總體積為100微升)γ干擾素的檢測·10ng cDNA·25微升2x TaqMan Universal PCR Master Mix·2.5微升γ干擾素引物·無RNase水(使總體積為100微升)50℃保溫2分鐘后，隨后開始變性(95℃，10分鐘)，然后進(jìn)行45個(gè)循環(huán)的變性(94℃，15秒)，退火/延伸(60℃，1分鐘)。用GeneAmp5700 Sequence Detection System software(v.13)分析產(chǎn)物。
得到下列結(jié)果用聚乙烯亞胺H-LPEI，分子量(Mw)87000，C18?；?，3mol％處理9小時(shí)后，體內(nèi)誘導(dǎo)了γ干擾素的表達(dá)(參見圖2)。根據(jù)動(dòng)物的不同，這種誘導(dǎo)作用比標(biāo)準(zhǔn)高16-120倍。另一方面，未處理的動(dòng)物，或者用PBS處理的動(dòng)物，表達(dá)的γ干擾素是標(biāo)準(zhǔn)的0.9-7倍。
3.在Aujeszky小鼠模型中檢測免疫刺激作用Aujeszky小鼠模型是用于檢測不同免疫刺激劑(例如BAYPAMUN和CpG-寡核苷酸)之作用的體內(nèi)壓力模型。
a)小鼠管理20-22℃，將NMRI小鼠(HdsWinNMRI遠(yuǎn)系繁殖的，雌性，18-20克重，從Harlan/Winkelmann，Borchen，Germany獲得)保持在能經(jīng)受住壓熱器作用的木削線聚碳酸酯盒中，放在S2分離畜棚(空氣濕度為50-60％)，處于在人工的白天/黑夜節(jié)律下(06:30-18:30光照，18:30-06:30為黑夜)。動(dòng)物可以自由接近食物和水。
b)壓力模型為了研究，每組含10只小鼠。任何一組的動(dòng)物都接受相同的檢測物質(zhì)。
在動(dòng)物到達(dá)后，將小鼠在籠中保持2-3天。隨后，用生理氯化鈉溶液(pH7.6)以1∶10和1∶100稀釋聚乙烯亞胺(起始濃度為0.5mg/ml)。將這些溶液以0.2ml/小鼠的比例腹膜內(nèi)給藥。
處理24小時(shí)后，通過腹膜內(nèi)施用假狂犬病病毒Hannover H2病毒株對(duì)小鼠產(chǎn)生壓力。為此，用PBS稀釋病毒，使壓力滴度為103.8-104.1TCID50/ml，然后施用0.2ml此懸浮液。
作為陰性對(duì)照，一組小鼠用生理氯化鈉溶液處理，然后給予壓力。
在給予壓力后3-8天，該組小鼠死亡。大部分聚乙烯亞胺處理小鼠，用假狂犬病病毒感染后存活。給予壓力后10天終止試驗(yàn)。
通過比較在氯化鈉對(duì)照組已死亡的小鼠與檢測組的小組來確定誘導(dǎo)的免疫刺激強(qiáng)度，然后通過效力指數(shù)定量。用免于Aujeszky病毒致死作用的小鼠百分比數(shù)作為用待測物質(zhì)免疫刺激的結(jié)果加以說明。用下列公式計(jì)算EI＝(b-a)/b×100在該公式中，b代表對(duì)照組中死亡的小鼠百分比，a代表檢測組中死亡的小鼠百分比。
結(jié)果(參見圖3)
用Aujeszky小鼠模型檢測不同濃度聚乙烯亞胺令人驚奇地發(fā)現(xiàn)·在用0.1或0.01mg H-LPEI，分子量87000，C18?；?mol％或者H-LPEI，分子量87000，CDC?；?mol％處理小鼠后，在所表明的每種情況，都有顯著免疫刺激作用，效力指數(shù)≥60％。
·在用兩種不同濃度聚乙烯亞胺H-LPEI，分子量87000，C18?；?，3mol％或者H-LPEI，分子量87000，CDC酰基時(shí)，在每種情況都表明了劑量/效用關(guān)系。
4.用PIQORTMcDNA排列系統(tǒng)分析H-LPEI，分子量87000，C18?；?，3mol％或者H-LPEI，分子量87000，CDC?；鶎?duì)鼠腹膜細(xì)胞(體內(nèi))基因表達(dá)的影響a)動(dòng)物管理在試驗(yàn)開始前8天，從Charles River公司(Sulzfeld，Germany)獲得NMRI小鼠(遠(yuǎn)系繁殖的，雌性，18-20克重)。動(dòng)物可自由接近食物和水，并飼養(yǎng)在人工的白天/黑夜節(jié)律下(07:00-19:00光照，19:00-07:00為黑夜)。
b)試驗(yàn)過程將動(dòng)物隨機(jī)分成3組，每組4只動(dòng)物。將0.2ml待分析物質(zhì)經(jīng)腹膜內(nèi)施用。所用的處理方案如下1組安慰劑生理氯化鈉溶液2組聚乙烯亞胺，H-LPEI，分子量87000，C18酰基，3mol％(0.1mg/小鼠)3組聚乙烯亞胺，H-LPEI，分子量87000，CDC?；?，3mol％(0.1mg/小鼠)處理6小時(shí)后殺死小鼠，通過用10毫升介質(zhì)(DMEM，5％FCS)灌洗腹來分離腹膜細(xì)胞。
隨后，離心(300xg，10分鐘，室溫)濃縮細(xì)胞，然后要么立即提取RNA，要么首先進(jìn)行紅細(xì)胞溶胞。
紅細(xì)胞溶胞為了進(jìn)行紅細(xì)胞溶胞，將沉淀的腹膜細(xì)胞重懸在1毫升PBS中，此后，加入10毫升溶胞緩沖液(10ml 0.17M Tris，pH7.2+90ml0.16M NH4Cl，pH7.2)，然后將混合物在室溫保溫10分鐘。然后以300xg離心10分鐘。棄去上清液，用10ml PBS洗滌細(xì)胞，然后再離心一次(300xg，10分鐘)。
制備總RNA用RNeasy小試劑盒(QIAGEN，Hilden，Germany)，按照制造商的說明，從腹膜細(xì)胞制備總RNA。就此而言，將每種情況下的兩批產(chǎn)物混合整理。
來自每種情況4只動(dòng)物腹膜細(xì)胞的總RNA產(chǎn)率為10至20微克RNA。
RNA的中間擴(kuò)增用基于Eberwine等人(1992)的方法完成RNA的中間擴(kuò)增。這包括從總RNA制品擴(kuò)增mRNA。
cDNA排列用來自Memorec Stoffel GmbH(Cologne，Germany)的PIQORTMcDNA排列系統(tǒng)分析誘導(dǎo)和表達(dá)的基因。就此而言，將來自免疫相關(guān)基因(白細(xì)胞介素、分化簇(CDs)、轉(zhuǎn)錄因子、受體等)的cDNA負(fù)載到芯片上。
用擴(kuò)增的RNA進(jìn)行雜交。在每種情況下，在一個(gè)RT反應(yīng)中將2微克擴(kuò)增的RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，同時(shí)摻入熒光標(biāo)記的核苷酸。對(duì)照用Cy3標(biāo)記，同時(shí)用Cy5標(biāo)記樣品。
按照制造商說明的方法(PIQORTMcDNA排列系統(tǒng)，2.6版，2000年2月)完成下列雜交，并評(píng)估
在評(píng)估雜交信號(hào)時(shí)，只分析在被比較的每種情況中，至少一個(gè)樣品(分別為Cy3和Cy5信號(hào))信號(hào)高于兩個(gè)陰性對(duì)照(鹽和herringsperm DNA)平均值至少2倍的那些信號(hào)。只對(duì)差異表達(dá)高于2倍的基因信號(hào)確定基因表達(dá)。
結(jié)果下列表格總結(jié)了cDNA分析。在(A)中，大于2.0的值表示相應(yīng)mRNA的表達(dá)特異性增加，而在(B)中，小于-2.0的值表示抑制。用聚乙烯亞胺刺激后，特別過表達(dá)了抗炎癥或抗細(xì)胞程序死亡因子(antiapoptotic factors)。白細(xì)胞介素-1受體2型的表達(dá)增加極高，對(duì)此，文獻(xiàn)歸結(jié)為強(qiáng)抗炎作用(Brown et al.，1996；Bossu et al.，1995)。FERHA(鐵蛋白重鏈mRNA)的表達(dá)被描述為是抗炎或抗細(xì)胞程序死亡的(Weiss et al.，1997；Oberle & Schroder，1997)。MCL-1增加到2.88還表明所述聚合物有抗細(xì)胞程序死亡作用(Fujise et al.，2000)。在鼠腹膜細(xì)胞(體內(nèi))中，用PIQORTMcDNA排列系統(tǒng)分析聚乙烯亞胺H-LPEI，分子量87000，C18?；?mol％和H-LPEI，分子量87000，CDC?；?mol％對(duì)基因表達(dá)的作用A)誘導(dǎo)的基因
B)抑制的基因
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權(quán)利要求
1.含多胺作為活性物質(zhì)的藥物。
2.權(quán)利要求1的藥物，其特征在于所述多胺具有疏水取代基。
3.權(quán)利要求2的藥物，其特征在于所述取代基作為側(cè)連或者末端排列。
4.權(quán)利要求2或3的藥物，其特征在于所述取代基是烷基鏈、?；溁蛘哳惞檀紭尤〈€可以是疏水取代基，所述疏水取代基可通過將多胺主鏈的氮功能加到異氰酸酯或者α，β-不飽和羰基化合物上而引入。
5.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的藥物，其特征在于所述聚合物是聚乙烯亞胺。
6.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示有1-23個(gè)碳原子的烷基，而且其中R3和R4(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫和具有1-24個(gè)碳原子的烷基，或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R5(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，單位m和n隨機(jī)分布在聚合物中。
7.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示有1-22個(gè)碳原子的烷基，而且其中R3和R4(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫和具有1-24個(gè)碳原子的烷基，或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R5(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，單位m和n是隨機(jī)分布在聚合物中。
8.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1、R2和R3表示氫或羥基，而且其中R4和R5(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地表示氫或者類固醇母體物質(zhì)，特別是膽汁酸，或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R6(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，單位m和n是隨機(jī)分布在聚合物中。
9.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示OR4或NR4R5，而且R4和R5彼此獨(dú)立地表示氫或者具有1-24個(gè)碳原子的烷基，而且其中R2和R3(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地相應(yīng)于聚合物主鏈氮原子的取代基或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R6(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，且n＝a×P，其中0.0001＜a＜0.1，單位m和n是隨機(jī)分布在聚合物中。
10.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R1表示有1-24個(gè)碳原子的烷基，而且其中R2和R3(末端基團(tuán))彼此獨(dú)立地相應(yīng)于聚合物主鏈氮原子的取代基或者具有取決于引發(fā)劑的結(jié)構(gòu)，R4(末端基團(tuán))是取決于終止反應(yīng)的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250，且n＝a×P，其中0.001＜a＜0.1，單位m和n是隨機(jī)分布在聚合物中。
11.權(quán)利要求5的藥物，其特征在于所述聚乙烯亞胺具有下列通式 其中，在每個(gè)[CH2-CH2-N]單位中，R可以是氫或者具有下式基團(tuán) 其中Rx可以是氫或同樣也是R型基團(tuán)，且其中每個(gè)[CH2-CH2-N]單位和末端基團(tuán)可攜帶權(quán)利要求8-13中提及的取代基，平均聚合度P＝(m+n)為45至5250。
12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的藥物，其特征在于所述多胺的分子量低于220000g/mol。
13.權(quán)利要求12的藥物，其特征在于所述多胺的分子量為2000至100000g/mol。
14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的藥物，其特征在于所述多胺與細(xì)胞特異性配體結(jié)合。
15.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的藥物，其特征在于所述藥物還含有制劑輔料。
16.用作藥物權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)中的多胺。
17.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)免疫刺激藥物的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療病毒感染或者用于預(yù)防病毒感染的藥物的應(yīng)用。
19.權(quán)利要求18的應(yīng)用，其特征在于所述感染是乳頭瘤病毒、皰疹類病毒、肝炎病毒或HIV感染。
20.權(quán)利要求18中的應(yīng)用，其特征在于所述感染是呼吸道或內(nèi)部器官感染。
21.權(quán)利要求18中的應(yīng)用，其特征在于所述預(yù)防是預(yù)防因壓力或者手術(shù)后或牙治療后的感染。
22.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療細(xì)菌感染的藥物的應(yīng)用。
23.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療癌癥或腫瘤的藥物的應(yīng)用。
24.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療器官纖維化或者預(yù)防器官纖維化的藥物的應(yīng)用。
25.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療伴隨有膠原蛋白沉積增加的疾病之藥物的應(yīng)用。
26.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療炎癥，內(nèi)部器官、皮膚、血液或中樞神經(jīng)系統(tǒng)或其附件包括眼睛的退化或增殖性疾病的藥物的應(yīng)用。
27.權(quán)利要求1-14的多胺用于生產(chǎn)治療過敏性疾病，特別是治療哮喘的藥物的應(yīng)用。
28.權(quán)利要求1-14的多胺作為佐劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及含多胺作為活性物質(zhì)的藥物，以及多胺生產(chǎn)免疫刺激藥物的用途或者多胺作為治療和/或預(yù)防各種人或動(dòng)物疾病之藥物的用途。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1507349SQ01822939
公開日2004年6月23日 申請(qǐng)日期2001年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月29日
發(fā)明者T·施拉普, S·M·弗里德里希斯, M·沃爾默, , T 施拉普, 弗里德里希斯 申請(qǐng)人:拜爾公司